20/08/13

Princpios de Anlise
Instrumental

(Mdulo 1)

Prof. Dr. Marcos Lanza

Mtodos Instrumentais de Anlise:

Mtodos Clssicos x Mtodos Instrumentais

Procedimentos + elaborados;

Custo (R$ ou US$) Y Y : justifica-se pelo elevado nmero

de amostras ou pelos teores muito baixos (traos).

Necessidade de calibrao/aferio com amostra de

referncia;

Necessidade de preparao cuidadosa das amostras e das

solues-padro

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Fatores que afetam a escolha do mtodo:

a) Tipo de anlise: elementar ou molecular, de rotina ou eventual.

b) Natureza do material: substncias corrosivas, gua, frmacos...
c) Interferncia de outros constituintes da matriz.
d) Faixa de concentrao a ser utilizada.
e) Disponibilidade de amostra.
f) Acurcia necessria.
g) Disponibilidade de instrumentos.
h) Tempo para completar a anlise: acurcia x tempo.
i) Nmero de amostras: (Instrumental) ou (Clssica)
j) Anlise destrutiva?
k) Custos de investimento, operao e manuteno
(compensa??).

Interferncias:

A presena de interferentes afeta a seletividade do mtodo

de anlise, o que pode ser minimizado pelo tratamento prvio da
amostra.
Abordagens:
1) Precipitao Seletiva.
2) Mascaramento (complexos).
3) Oxidao ou reduo seletivas.
4) Extrao com solvente.
5) Troca Inica.
6) Cromatografia.

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Principais Mtodos Instrumentais:

1)Espectrometria Atmica (Absoro e Emisso);

2)Espectrometria Molecular (UV/Visvel e IV);
3) Espectrometria de Massas;
4) Cromatografia e Eletroforese;
5) Mtodos Eletroanalticos (VC, Polarografia, CA);
6) Mtodos Termogravimtricos (TG, DTA e DSC);
7) RMN (H e C);
8) Fluorescncia de Raios X;
9) Outros.

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Etapas de uma Anlise:

1) Amostragem: tamanho e natureza fsica da amostra.

2) Preparao da amostra analtica: homogeneizao, secagem, ...
3) Dissoluo da amostra: dissoluo/diluio.
4) Remoo de interferentes: (vide slide anterior).
5) Medidas e controle de fatores instrumentais: calibrao,
padronizao, otimizao e medida de sinal (luz, corrente
eltrica, ...).
6) Resultados: clculos e anlise estatstica.
7) Apresentao dos resultados: relatrio.

Espectroscopia

Os mtodos espectroscpicos de anlise so baseados na

medida da quantidade de radiao produzida ou absorvida pelas
molculas ou espcies atmicas de interesse.
O resultado grfico de uma tcnica espectroscpica
qualquer chamado espectro. Sua impresso grfica pode ser
chamada espectrograma ou, por comodidade, simplesmente
espectro.

Radiao Eletromagntica:
Forma de energia transmitida atravs do espao a grandes
velocidades.
Descrita como onda (comprimento de onda, freqncia,
velocidade e amplitude).
Quanta ou Ftons: pacotes discretos de energia ou partculas
(dualidade partcula-onda).

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Espectro Eletromagntico

E Campo eltrico
M Campo magntico

1= Elementos de uma onda

2= Distncia
3= Deslocamento
= Comprimento de onda
= Amplitude

Espectro Eletromagntico

Comprimento de onda ()
Perodo (p) = tempo necessrio para completar um ciclo
Freqncia (f) = ciclos/s ou Hertz

f= c/

c = velocidade da luz no vcuo 3.1010 cm/s

Energia (E): E = h.f => E = h.c/

h= constante de Planck

* Menor comprimento de onda, maior energia!!!

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Espectro Eletromagntico

Espectro Eletromagntico

Espectroscopia Molecular
Espectroscopia Atmica

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Espectro Eletromagntico

Espectro Infra-Vermelho:

IR-Prximo (700nm a 1.400nm),

IR (1.400nm a 3.000nm),
IR-Distante (3.000nm a 1 mm): mm

Espectro Visvel:

Visvel (700 a 400 nm).

Espectro UV:

UV prximo (380 a 200 nm),

UV distante (200 a 10 nm),
UV extremo (1 a 31 nm).

UVA (400 320 nm, tambm chamada de "luz negra" ou onda longa),
UVB (320 280 nm, tambm chamada de onda mdia), e
UVC (280 - 100 nm, tambm chamada de UV curta ou "germicida").

RADIAO ELETROMAGNTICA

Cores do espectro visvel

Cor Comprimento de onda Freqncia
vermelho ~ 625-740 nm ~ 480-405 THz
laranja ~ 590-625 nm ~ 510-480 THz
amarelo ~ 565-590 nm ~ 530-510 THz
verde ~ 500-565 nm ~ 600-530 THz
ciano ~ 485-500 nm ~ 620-600 THz
azul ~ 440-485 nm ~ 680-620 THz
violeta ~ 380-440 nm ~ 790-680 THz

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Interao da radiao com a matria

O que faz com que alguns raios interajam e outros passem atravs
das coisas?

Dois requerimentos devem ser observados para que uma

determinada radiao possa ser absorvida por uma molcula:

1 - A radiao incidente deve ser de freqncia equivalente

aquela rotacional ou vibracional, eletrnica ou nuclear da
molcula,

2 - A molcula deve ter um dipolo permanente ou um dipolo

induzido, ou seja, deve haver algum trabalho que a energia
absorvida possa fazer.

Diagramas de Energia Atmica

Excitao Emisso

E2 (4p)
590 nm

330 nm

E1 (3p)
Energia

E
E

E0 (3s)
1 2

E g energia luminosa, eltrica ou trmica

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Diagramas de Energia Molecular

Excitao Emisso

E2 (4p)

E1 (3p)
Energia

E0 (3s)
1 2
(Banda 1) (Banda 2)

E g energia luminosa, eltrica ou trmica

Princpios dos Mtodos

Energia Freqncia
IV Visvel UV Raios X Raios
Radiante de Rdio
Tcnicas
RMN Absoro Absoro Absoro Absoro
Radiomtricas
Microondas Emisso Emisso Difrao

Vibrao e Deslocamento
Interao com Rotao Excitao Excitao Desintegrao
Rotao de eltrons
a Matria Molecular Eletrnica Eletrnica Nuclear
Molecular internos

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ASPECTOS QUANTITATIVOS DAS MEDIDAS ESPECTROQUMICAS

Classificao dos mtodos espectroqumicos: tabela

Potncia radiante (P): a energia de um feixe de radiao que
incide em uma determinada rea por segundo.
Deteco: converso da energia radiante em um sinal eltrico
(S), podendo ser voltagem ou corrente.
O sinal eltrico proporcional intensidade da potencia
radiante:
S= kP
Nos mtodos de Emisso, Luminescncia e Espalhamento, a
Potncia Radiante emitida por um analito aps a excitao
proporcional concentrao c do mesmo (P=kc).
Combinando-se equaes, tem-se: S= kc [ cxS
A concentrao (c) do analito diretamente proporcional ao
sinal eltrico (S) em uma faixa de concentraes [ uso de
padres (curva de calibrao).

Mtodos Espectroqumicos

Potncia de Relaes de
Classe Tipos de Mtodos
Radiao medida Concentrao

Emisso Emitida (Pe) Pe= kc Emisso Atmica

Fluorescncia Atmica e
Luminescncia Luminescncia (Pt) Pt= kc
Molecular

Espalhamento Raman,
Espalhamento Espalhada (Psc) Psc= kc Turbidimetria e
Nefelometria

Incidente (Po) e Absoro Atmica e

Absoro -log(P/Po)= kc
Transmitida (P) Molecular

*Skoog

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Espectro visvel da luz de uma lmpada difratada por um prisma:

(a) esquema e (b) fotografia.

Exemplo de difrao de luz produzida

na natureza.

RADIAO ELETROMAGNTICA
Comprimento de onda ()
Perodo (p) = tempo f= c/
necessrio para completar
um ciclo c = velocidade da luz no vcuo
3.1010 cm/s
Freqncia (f) = ciclos/s
ou Hertz

Unidades Energia (E)

nm = 10-9 m E = h.f => E = h.c/
A= 10 -10 m h= constante de Planck

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Princpios

energia frequncia de infra- visvel ultra- raios-X raios-

radiante rdio vermelho violeta
_______________________________________________________________________________________
Tcnica NMR Absoro Absoro Absroo Absoro Tcnicas radio-
Analtica Microondas Fluorescncia Difrao mtricas
Fosforescncia
Fotometria de
chama
Espectroscopia de
emisso
_______________________________________________________________________________________

Interao desintegrao vibrao e excitao eletrnica dos eltrons desintegrao

com a do
Rotao rotao das tomos de uma molculs internos so do ncleo
matria ncleo molculas deslocados
_______________________________________________________________________________________

Espectroscopia
Molecular

Teoria do Orbital Molecular: ao absorver

radiao, os eltrons dos orbitais moleculares
ligantes ficam excitados e saltam para os
orbitais no ligantes.

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1 2*
with a E (cm-1)
change in
30000
internuclear
distance (333 nm) 3
2
1
25000
S2* v= 0
(400 nm)
3
symmetry forbidden 2
1 1* 20000 1
(500 nm) S1* v= 0

max
15000 excited singlet
(667 nm) states
long wavelength 0-0
absorption band transition
10000
(1 m)

infrared 5000
(2 m) ground state
absorption

v=1
0 cm-1 S0 v = 0
( nm)

Cromforo: grupo insaturado covalente, responsvel pela

absoro eletrnica (por exemplo, C=C, C=O ou NO2)

Auxocromo: grupo insaturado que quando ligado ao

cromforo, altera tanto o comprimento de onda como a
intensidade de absoro (por exemplo, OH, NH2, Cl)

Deslocamento batocrmico: deslocamento da absoro

para comprimento de onda maior devido efeitos de
substituio do solvente (deslocamento para o vermelho)

Deslocamento hipsocrmico: deslocamento da

absoro para comprimento de onda menor devido efeitos
de substituio do solvente (deslocamento para o azul)

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Leis de absoro

Io I1

Io = 100 I1 = 50

Io = 100 I1 = 50 I2 = 25

Transmitncia = It/ Io T% = It/Io x 100

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Pierre Bouguer (1729) e de Johann Heindrich Lambert (1760)

duas leis fundamentais:
- A intensidade de luz (monocromtica) transmitida por um corpo
homogneo proporcional intensidade de luz incidente.
- A intensidade de luz (monocromtica) transmitida decresce
exponencialmente com o aumento da espessura da camada do corpo
homogneo

It/Io = 10 cba onde c= concentrao;

ba= constante
T = 10-cba
log T = log 10 -cba
log T = -cba log 10
log T = -cba -log T = cba
log 1/T = cba log Io/It = cba
log Io/It = Absorbncia

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Lei de Lambert- Beer

Io
A = log = log T = cb
It
A = absorbncia ou absorvncia

A = b c qdo a concentrao expressa em moles/L

ou
A=abc qdo a concentrao expressa em outra unidade

a / = absortividade/absortividade molar
b= caminho ptico
c= concentrao

Absortiviade (a) ou absortividade molar ()

Caracterstica de uma substncia para um determinado comprimento de

onda e um determinado solvente

Cu +2 Cu (NH3)4 +2 Cu-DEDC
max 800 600 436
20 80 10.000

A = abc

Absortividade: capacidade da molcula em absorver energia

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Representao grfica da Lei de

Beer, para solues de KMnO4 em l
= 545 nm e um caminho ptico de 1
cm.

a) Em %Transmitncia %T versus c

b) Em Absorbncia A versus c

Equao da reta: y = a.x + b

A = a. C(mg.L-1) + b

Desvios da Lei de Lambert- Beer

Presena de mais de uma substncia absorvente

Mudana da natureza do solvente ou meio (solues

concentradas)

Quando incide na amostra luz com mais de um

comprimento de onda em virtude de uma larga faixa de
luz.

Espectrofotmetros de boa qualidade do menor desvio

porque fornecem faixas de luz estreitas e um mnimo de luz
dispersa.

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Mtodos Espectrofotomtricos no UV/Vis

Aplicao: Identificao e/ou quantificao de
medicamentos, alimentos, cosmticos, insumos,
produtos qumicos, efluentes, anlises clnicas e
toxicolgicas

Identificao e/ou Quantificao

Caractersticas dos Mtodos UV/Vis

1. Aplicabilidade na determinao de compostos orgnicos e
inorgnicos;

2. Sensibilidade entre 10-4 e 10-7 M

3. Seletividade moderada

4. Boa acurcia (incerteza entre 1 e 3%)

5. Anlise rpida e de fcil execuo

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Vantagens:
Mtodo rpido, simples e econmico;
Permite determinao de pK e coeficiente de partio de
compostos orgnicos;
Pode ser utilizado para monitorar a cintica de reaes.

Desvantagens
Pouco seletivo no sendo recomendado para anlise de
misturas complexas.

Fenmenos envolvidos quando um feixe (monocromtico) de radiao

incide sobre uma cubeta contendo uma soluo que absorve no
comprimento de onda incidente.

Io = Ir + Ie + Ia + It Io = Ia + It
Io = Intensidade do feixe incidente,
Ir = Intensidade do feixe refletido, resultado das diferenas do ndice de refrao
entre o absorvedor e o ambiente,
Ie = Intensidade do feixe espalhado, resultado de um meio no homogneo
(suspenso) e/ou de flutuaes trmicas,
Ia = Intensidade do feixe absorvido pelo meio
It = Intensidade do feixe transmitido.

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Espectro de absoro do permanganato de potssio

A amostra (1) tem 66mg/L de concentrao. As demais (2),(3),(4) e (5)

foram diludas para (0.8), (0.6), (0.4) e (0.2) da concentrao da primeira
amostra, respectivamente.

Amostra 1
Soluo aquosa de KMnO4 Amostra 2
Amostra 3
0,60

0,55

0,50

0,45

0,40

0,35

0,30
ABS

0,25

0,20

0,15

0,10

0,05

0,00
200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800

/ nm

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Se vrias substncias absorverem a a radiao,h um efeito aditivo:

Abs = a1b1C1 + a2b2C2 + . . .

Corante vermelho Corante azul

Mx. de absoro a 525 nm Mx. de absoro a 625 nm

A= 0,233 A = 0.318 -> a = 0,106/ppm.cm
a=

A 510 nm= 0,183

Mistura corante azul + vermelho
a = 0,061/ppm.cm
Mistura:
A 510 nm= 0,317
A625nm = 0,477

1,5

A
B

1,0
Absorvncia

0,5

0,0
200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800
/ nm

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Figura 1 - a. conjunto dos comprimentos de onda correspondentes ao

espectro de emisso de uma lmpada de tungstnio-halognio (luz branca);
b. regio espectral transmitida por uma soluo de azul de bromotimol e o
respectivo espectro de absoro; c. regio espectral transmitida por uma
soluo de soluo amarela de fluorescena e o respectivo espectro de
absoro.

a- Espectro de uma b- Espectro de uma c - Espectro de uma

lmpada de luz soluo aquosa de soluo etanlica de
branca azul de bromotimol fluorescena 10-5 mol L-1
10-5 mol L-1 (laranja) (amarela)

Plax Plax
3,5 3,5

(= 235 nm; Abs= 2,6574)

3,0 3,0

2,5 2,5

2,0 2,0
Abs
Abs

1,5 1,5

1,0 1,0

0,5 0,5
Leitura a cada 1 nm
0,0 0,0
220 225 230 235 240 245 250 220 240 260 280 300 320 340
/ nm / nm

Plax Plax
3,5 3,5

3,0 3,0

2,5 2,5

2,0 2,0
Abs

Abs

1,5 1,5

1,0 1,0

0,5 0,5

0,0 0,0
300 400 500 600 700 800 300 400 500 600 700 800
/ nm / nm

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INSTRUMENTAO

Esquema Bsico de um Instrumento para Medir a Absoro

Sistema de Feixe Simples

Sistema de Feixe Duplo

Sistema de Feixe Simples

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Sistema de Feixe Duplo

Fontes de radiao UV-VIS

Lmpada de Tungstnio e Tungstnio-Halognio: O filamento da

lmpada de tungstnio vaporiza-se e esses vapores fixam-se na
face interna do bulbo da lmpada.

Lmpada de Deutrio: Normalmente usa-se a lmpada de

deutrio para comprimentos de onda entre 180 a 370nm.

Monocromadores
Filtros, Filtros de interferncia, Prismas , Grades de difrao

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lculos Quantitativos

Em anlises de rotina, empregam-se 3 formas

diferentes de se calcular a concentrao da espcie de
interesse:

Clculo absoluto

Determinao atravs da curva analtica

Adio de padro

Clculo absoluto

A absortividade (a) ou absortividade molar () da

amostra pode ser calculada a partir da absorbncia
obtida na anlise de um padro de concentrao
conhecida.

A
c=
ab

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Determinao atravs da curva analtica

Padres de
concentrao conhecida
utilizados na construo
da curva analtica

Amostra cuja
concentrao pode ser
obtida atravs da curva
analtica

Clculo pela adio de padro

Mtodo utilizado quando certos compostos
presentes na matriz, podem interferir na
determinao quantitativa do analito presente na
amostra.
Adiciona-se quantiadade conhecida do padro e
determina-se a quantidade recuperada.

A1 = absorbncia da amostra
A2 = absorbncia da amostra adicionada de padro

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Exerccios

1. Calcular a concentrao (% e g/mL) de uma soluo de

furosemida sabendo que a (1%, 1cm) = 580 a 271 nm e
cuja absorbncia da amostra foi de 0,596.

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Exerccios

1. Calcular a concentrao (% e g/mL) de uma soluo de

furosemida sabendo que a (1%, 1cm) = 580 a 271 nm e
cuja absorbncia da amostra foi de 0,596.

Clculo: A = A(1%, 1cm) xbxc 0,596 = 580x1xc

C = 0,001027 %

0,001027g ......... 100 mL

1,027 mg ......... 100 mL

1027 g ......... 100 mL 10,27 g ......... 1 mL

Exerccios

1. Calcular a concentrao (% e g/mL) de uma soluo de

furosemida sabendo que a (1%, 1cm) = 580 a 271 nm e
cuja absorbncia da amostra foi de 0,596.

Curva Calibrao Furosemida

0,800

0,700

0,600

0,500
Absrobncia

0,400
10,27 g/ mL
0,300

0,200

0,100

0,000
0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 14,0
Concentrao ug/mL

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Exerccios
2. Um composto desconhecido (MM= 292,16 g/mol) foi
dissolvido em um balo volumtrico de 5,00 mL. Foi retirada
uma alquota de 1,00 mL, colocada em um balo volumtrico
de 10,00 mL e diluda at a marca, A absorbncia a 240 nm foi
de 0,427 em uma cubeta de 1,000 cm. A absortividade molar
para esse composto em 340 nm e= 6.130 M-1.cm-1.

a) Calcule a concentrao do composto na cubeta.

b) Qual era a concentrao no balo de 5,00 mL?
c) Qual a massa da substncia foi utilizada para preparar a soluo
inicial?

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