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Tema 4
Enzimas
Catalizadores Biológicos
complementarias
– Interacción a través de Ribonucleasa
enlaces débiles
El Estado de Transición
Explicación termodinámica
• La reacción transcurre
a través de un estado S S* P
de transición (S*)
– Intermedio entre S y P Estado de
Energía libre
– Reduce la energía de De
activación reacción
• Acelera la reacción
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
• La llave y la cerradura
(Fisher, 1890) Sustrato
complementariedad Complejo ES
• Reconocimiento molecular
dinámico Enzima
Tipos de Enzimas
• Oxidoreductasas • Liasas
– Catalizan reacciones de – Catalizan la eliminación de
oxidoreducción grupos para formar un doble
• Deshidrogenasas, oxidasas, enlace
oxigenasas, reductasas, • Descarboxilasas,
peroxidasas deshidratasas, desaminasas
• Transferasas • Isomerasas
– Catalizan transferencias de – Catalizan reordenamientos
grupos químicos moleculares
• Transcarboxilasas, • Epimerasas, mutasas
transaminasas,
transmetilasas
• Ligasas
– Catalizan formaciones de
• Hidrolasas
enlace entre dos sustratos,
– Catalizan la rotura de con energía aportada por la
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Transferencia de grupos
Ácido pantoténico Coenzima A Hipertensión
acilo
Anemia, defectos en
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Consecuencias de la
Vitamina Función en la que interviene
deficiencia
Visión, crecimiento,
reproducción Ceguera nocturna, lesión en la
A Precursora del retinal (pigmento de córnea y en aparatos digestivo
la visión) y del ácido retinoico y respiratorio
(activador de la transcripción)
Coagulación sanguínea
K Participa en la carboxilación de Hemorragias subdérmicas
residuos de glutamato
Nociones de Cinética Química
• Velocidad de reacción • En condiciones de
equilibrio
k1
A B
k -1
Consumo Formación
de A de B
En el equilibrio v = 0
Velocidad
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Constante de
velocidad
Nociones de Cinética Química
• Reacciones sucesivas
– La velocidad depende del paso más lento
k1 k2
A B C B = Intermediario
k
Si k2 << k1, entonces B 2
C es el paso limitante de la reacción,
y la velocidad depende sólo de k2
Es el paso limitante
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Constante de
disociación del
complejo ES Constante
catalítica (kcat)
Modelo Cinético de Michaelis-Menten
2. K2 << k-1
– Se alcanza el estado estacionario
– [ES] se considera constante
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Concentración
Equilibrio
Estado Tiempo
Pre-estacionario
Ecuación de Michaelis-Menten
k1 k2
E+S k -1
ES E+P
1 Velocidad Inicial:
2 En el estado estacionario:
Constante
de Michaelis
Ecuación de Michaelis
(curva hiperbólica):
Representación de la Ecuación de Michaelis
• Se representan valores de velocidad inicial , V0 , para distintos valores de
concentración inicial de sustrato [S]1, [S]2, etc
• V0 aumenta al aumentar [S], hasta llegar a la saturación ([ES] ≈ [E]total, se
alcanza Vmax)
• KM representa la [S] para la cual se alcanza la mitad de la Vmax
• Vmax es un valor asintótico (se alcanza para [S] = ∞ ). No se puede obtener de
la representación hiperbólica
Equilibrio
[S]4
Velocidad de reacción
[S]3
Producto
[S]2
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
[S]1
Tiempo
Concentración de sustrato [S]
Linealización de la Ecuación de Michaelis
• Para determinar Vmax y KM con precisión la ecuación de Michaelis se
transforma en una función lineal
• Representación de Lineweaber-Burk (o de dobles inversos)
Inverso
Pendiente:
1/ V0
KM / Vmax
1/ Vmax
Recta
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Ordenada en
Pendiente 1/ [S]
el origen
-1/ KM
Significado de la KM
• Dos significados
– KM es la [S] para cual V0 = ½Vmax
• Nos dice cuál es la [S] necesaria para que ocurra una catálisis
significativa
– Cuando k2 << k-1, KM ≈ KS (constante de disociación del
complejo ES)
≈
• Nos informa de la afinidad de la enzima por el sustrato (si KM
es grande, KS es grande y la afinidad es pequeña, y viceversa)
• KM Tiene unidades de concentración (M)
• Para una enzima determinada
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
1 / kcat es el tiempo
necesario para la
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
enzima
• Sirve para comparar la preferencia de una
enzima por diferentes sustratos
• Unidades: M-1s-1
Inhibición Enzimática
la enzima libre
– Compite con el
sustrato
• Puede ser superada a
[S] elevada. No afecta
a la Vmax (ni a la kcat)
• Afecta a la KM
– Aumenta la KM, que Sin inhibidor
Velocidad de reacción
llamamos aparente
(KM aparente > KM)
– Suelen ser moléculas
similares al sustrato
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
o análogos del
estado de transición
[S]
Inhibición Reversible No Competitiva
Sustrato
Inhibidor
no competitivo
• El inhibidor se une tanto
al E y como al complejo
ES
– Se une en un sitio distinto
del sitio activo
• No se supera con [S] Sin inhibidor
elevada
Velocidad de reacción
• Vmax disminuye
– Vmax aparente < Vmax
• No afecta a La KM
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
[S]
Análisis Gráfico de la Inhibición
+ Inhibidor + Inhibidor
competitivo no competitivo
Sin Sin
1/Vmax inhibidor -1/Vmaxap inhibidor
-1/KM
1/Vmax
-1/KMap
-1/KM
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
Mecanismos Moleculares de Regulación Enzimática
• Modificación covalente
– Reversible
– Irreversible
Isoenzimas
• Alosterismo homotrópico
– Entre centros equivalentes Estado R
• Cooperatividad
– Curvas sigmoides
V
– No siguen la cinética de
Michaelis-Menten Estado T
• Alosterismo heterotrópico
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
A B C D N
Retroinhibición
Modificación Covalente
• Irreversible • Reversible
– Activación por rotura – Unión covalente de
proteolítica de un grupo químico
precursores inactivos que altera las
(zimógenos) propiedades
• Enzimas de la catalíticas de la
digestión enzima
• Cascada de • Fosforilación-
coagulación desfosforilación
• Activación de caspasas • Oxidación-reducción
en la apoptosis • Acetilación-
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
desacetilación
J. Salgado (UVEG – 2005-06) Cascada de la Coagulación
Regulación por Fosforilación Reversible
• Fosforilación
– Transferencia de grupo fosforilo desde el ATP a
grupos –OH de Ser Thr o Tyr
– Es cataliza por proteínas quinasa
– A menudo desencadena efectos amplificados
• Una sola quinasa activa centenares de otras enzimas
que. A su vez cada una de ellas activará centenares de
otras enzimas, ...etc.
• Desfosforilación
– Eliminación de grupo fosforilo de proteína
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
fosforilada
– Catalizada por proteína fosfatasa