BIOQUMICA APLICADA IQ U.N.S.A TRABAJO DE CINTICA ENZIMTICA.

RESOLUCIN DE PROBLEMAS PLANTEADOS. 26-08-2107

1.-Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reaccin catalizada
por una enzima hipottica son:

[S] (moles/l) V (moles/min)

5x10-2 0.25

5x10-3 0.25

5x10-4 0.25

5x10-5 0.20

5x10-6 0.071

5x10-7 0.0096

a) Cul es la velocidad mxima para esta reaccin?

b) Por qu la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10-4 M

c) Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10-4 M?

d) Cul es la Km de la enzima?

e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6 y [S]=1x10-1

f) Calcular la concentracin de producto formado en los cinco primeros minutos de reaccin

utilizando 10 ml de una disolucin de sustrato 2x10-3 M.

2.-A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de qu manera
est actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad mxima.

[S] mM g producto/h g producto/h

(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)

2 139 88

3 179 121

4 213 149

10 313 257

15 370 313
3.-Habindose conseguido aislar de Salmonella typhimurium una enzima (E) que cataliza la
reaccin AP, se decidi hacer un estudio estructural y cintico de dicha enzima:

[A] mM 1,00 0,55 0,25 0,20

V(mmol P/ min) 1,00 0,71 0,50 0,41

V (nmol P/min) con J 0,66 0,41 0,25 0,20

donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM.

a) Calcular la Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformacin A--P en

presencia de E.

b) Que tipo de inhibidor es J?

c) Cul sera el efecto sobre la Vmax de la enzima, un aumento de la concentracin de J?

4.-La cintica de una enzima viene determinada como funcin de la concentracin de

sustrato en presencia y ausencia del inhibidor I.

[S], Mx10-5 0.3 0.5 1.0 3.0 9.0

V(mol/min) sin inhibidor 10.4 14.5 22.5 33.8 40.5

V(mol/min) con inhibidor 10-4 M 2.1 2.9 4.5 6.8 8.1

a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor

b) Que tipo de inhibidor es?

5.-La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres diferentes concentraciones de

enzima y a diferentes concentraciones de sustrato fu la siguiente:

[Enz] (mg de protena) 0.1 0.2 0.5

[AcetilCoA] (mM) Vel (mmol / min)
0.05 0.275 0.546 1.373
0.14 0.482 1.001 2.502
0.23 0.580 1.185 2.891
0.32 0.642 1.385 3.463
0.50 0.755 1.494 3.656
0.59 0.766 1.497 3.810

a) Calcular para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmax.

b) Son los valores de Km y Vmax iguales o diferentes?

c) Explique si lo que observ es lo que esperaba obtener

d) Sabiendo que la enzima pesa 220 000 grs/mol, haga una grfica de Vmax vs mmol de
enzima.

e) Qu representa la pendiente de esta grfica?

f) En qu se parece el valor anterior a la Actividad especfica = Vmax/mg de protena en mmol

min-1 mg de enzima-1?

g) Qu pasa con la medida de actividad especfica cuando la enzima no est pura?

6.-La enzima Aspartato transaminasa, que cataliza la reaccin:

Aspartato + Oxoglutarato----------Glutamato + Oxaloacetato

Se realizaron los siguientes tres experimentos el siguiente experimento:

[Asp] = 1 mM [OxG] = 0.02 mM [OxG] = 0.5 mM
[OxG] Vel [Asp] Vel [Asp] Vel
(mM) (mmol/min) (mM) (mmol/min) (mM) (mmol/min)
0.002 0.444 0.007 0.411 0.007 0.468
0.018 2.031 0.048 1.268 0.048 2.017
0.037 2.781 0.171 1.722 0.171 3.317
0.063 3.336 0.335 1.850 0.335 3.866
0.094 3.756 0.547 1.983 0.547 4.123
0.493 4.324 1.016 2.031 1.016 4.324

a) Calcule Km y Vmax para cada sustrato.

b) Cambian las Vmax? Explique su respuesta

c) Explique que pas en el segundo experimento, con respecto al tercero.

d) Cuntos y cules valores de Km debo considerar para describir la afinidad de la enzima por
sus substratos?

e) Qu conclusin se podra sacar de esos datos?

7.-Una enzima se ensay para distintas concentraciones de su substrato especfico, en
ausencia y presencia de un inhibidor ([I]=1mM), obtenindose los siguientes resultados:

[S] mM V (mol/min)+ Inhibidor V(mol/min)- Inhibidor

0,02 6,25 8,33

0,05 10 16,67

0,10 12,50 25

0,5 15,62 41,67

0,8 16 44,44

Calcular la KM y la Vmx en ambos casos y la KI para el inhibidor. Qu clase de inhibicin se

produce?.

8.-A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de qu manera
est actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad mxima.

[S] mM g producto/h g producto/h

(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)

2 139 88

3 179 121

4 213 149

10 313 257

15 370 313