PRUEBA DE AUSENCIA/PRESENCIA DE Salmonella spp.

PNT-LA-05 Basado en el manual del INVIMA,1998 y Norma NF V 08-052 (1993)

1. Definición

Salmonella spp. Es uno de los microorganismos que sufre injuria bacteria, por lo que la
búsqueda de este es dispendiosa. Es causante de salmonelosis, la primera causa de
enfermedad bacteriana transmitida por alimentos en Colombia. Para su búsqueda en
alimentos se pueden utilizar métodos tradicionales o rápidos (tipo ELISA), en la legislación
colombiana el método a utilizar es el método horizontal que incluye cinco pasos que son:
 Preenriquecimiento no selectivo
 Enriquecimiento selectivo
 Aislamiento en medios específicos
 Identificación bioquímica
 Pruebas antigénicas
La búsqueda de este microorganismo en alimentos como el pollo y sus derivados es
primordial para garantizar la inocuidad de estos productos, pues son su principal vehículo
de transmisión

2. Materiales
1 pipeta de 1 mL estéril o una pipeta automática (100-1000 μl)
Láminas porta-objetos
Marcador de vidrio
Asa redonda

3. Medios de cultivo
3 cajas de Petri estériles con agar Hecktoen, XLT 4, Sulfito Bismuto (también se pueden
utilizar verde brillante, Endo y XLD)
225 ml de caldo BHI a media concentración
1 tubo de 16 por 150 mm tapa rosca con 10 mL de caldo Rappaport-Vassiliadis modificado
1 tubo de 16 x 150 mm tapa rosca con 10 mL de caldo tetrationato o caldo selenito
Agar TSI
Caldo Urea
Agar LIA
SIM
Agar nutritivo

4. Reactivos
Solución salina 0.85%

5. Suero:
Antisuero “O”

6. Equipos
Incubadora a 35oC
Balanza
Pipeteador

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 PRUEBA DE AUSENCIA/PRESENCIA DE Salmonella spp.

PNT-LA-05 Basado en el manual del INVIMA,1998 y Norma NF V 08-052 (1993)

7. Procedimiento
* Pesar 25 g o mL del alimento a evaluar, adicionar al caldo BHI e incubar durante 6-8
horas.(Si el alimento requiere homogenización utilizar licuadora) a 35 oC, en algunos casos
cuando se sospecha que el alimento ha sido sometido a procesos muy drásticos se puede
dejar incubando durante 16 horas.
* Terminada la incubación, transferir un mililitro del caldo y colocarlo en el tubo con el
caldo rapapport, repetir el procedimiento utilizando otro caldo (tetrationato o selenito),
incubar a 35 oC durante 18 horas
* Terminado el tiempo de incubación, aislar en los medios selectivos e incubar a 35 oC por
24-48 horas, el agar sulfito bismuto se debe incubar 72 horas antes de descartarlo. Se deben
utilizar tres medios de cultivo para aumentar la probabilidad de recuperación del
microorganismo, se recomienda utilizar un medio de alta, uno de mediana y otro baja
selectividad.
* Seleccionar las colonias típicas de Salmonella en cada medio y realice la bioquímica corta
(TSI, LIA, SIM y urea), incube a 35 oC durante 18 horas.
* Cepas que den resultados características de Salmonella en las bioquímicas: TSI:
AlK/Acido con o sin producción de H2S, urea: negativa y LIA: Alk/Alk con o sin
producción de H2S, se hace prueba de antígenos.

8. Pruebas serológicas
8.1. Eliminación de las cepas auto-aglutinantes
* Depositar una gota de solución salina sobre un portaobjetos
* Hacer una emulsión del cultivo sospechoso
* Mezclar durante 30-60 segundos
Interpretación: La cepa es auto-aglutinable si forma agrupamientos irregulares, de manera
que no puede realizar la identificación serológica
8.2. Estudio del antígeno “O”
* Hacer una emulsión del cultivo puro en una gota de antisuero “O” sobre un portaobtejos
* Remover durante 30-60 seg
Interpretación: la reacción se considera positiva si hay aglutinación

9. Confirmación definitiva:
Las cepas consideradas como Salmonella o como posible Salmonella deben ser enviadas a
un centro especializado para la identificación de este microorganismo y la determinación
definitiva del serotipo.

10. Expresión de resultados

Indicar la presencia/ausencia de Salmonella en 25 mL o 25 g del producto

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