UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO

VILLARREAL
Ao de la Consolidacin del Mar de Grau

FACULTAD DE OCEANOGRAFA PESQUERA

CIENCIAS ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA ALIMENTARIA

MICROBIOLOGA GENERAL Y DE LOS ALIMENTOS

METODOS DE CONTAJE DE MICROORGANISMOS

DOCENTE:
Dr. Mara Teresa Flores Crdova
INTEGRANTES:
Crdenas Quijaite, Yessenia
Castillo Macavilca, Martin Stefano
Castillo Rodrguez, Joseph Yair
Monge Echevarra, Brenda

AO Y SECCIN:
3 ao A
I. OBJETIVOS
Aprender a desarrollar los diferentes mtodos para el contaje de
microorganismo, para poder determinar la calidad de los alimentos.

Aprende a realizar un homogenizado de un alimento que ser analizado, donde

liberar microorganismo a medio de fluido y desconcentrarlos en diluciones
sucesivas hasta tener un numero tal que haga factible la determinacin por
mtodos de cultivo.
II. MARCO TEORICO
El anlisis de los alimentos y piensos para determinar la existencia, tipo y nmero de
microorganismos es bsico para la microbiologa de alimentos. Sin embargo ninguno de
los mtodos utilizados habitualmente permite determinar el nmero exacto de
microorganismos que existe en un determinado alimento. Son cuatro los mtodos
bsicos utilizados para investigar el nmero total de microorganismos:
1.-Recuento en placa (SPC) para la determinacin del nmero de clulas viables
2.-Mtodo del nmero ms probable (MPN) de grmenes como clculo estadstico del
nmero de clulas viables
3.-Tcnicas de reduccin de colorantes para el clculo del nmero de clulas viables
con capacidad reductora
4.-Recuento microscpico directo (DMC) tanto para clulas viables como para las no
viables
El recuento en placa es el mtodo ms utilizado para la determinacin del nmero de
clulas viables o unidades formadoras de colonias (u.f.c.) en un alimento.
Los recuentos totales deben hacerse en funcin de uno de los siguientes factores:
mtodo de muestreo utilizado
distribucin de los microorganismos en la muestra
naturaleza de la microflora del alimento
naturaleza del alimento
antecedentes del alimento
adecuacin nutricional del medio de cultivo
temperatura y medio de incubacin
pH, Aw, potencial de oxidacin reduccin del medio
tipo de diluyente utilizado
nmero relativo de microorganismos en la muestra

Los recuentos de microorganismos viables se basan en el nmero de colonias que se

desarrollan en placas previamente inoculadas con una cantidad conocida de alimento e
incubadas en unas condiciones ambientales determinadas. Estos recuentos no pueden
considerarse como recuentos totales ya que solo son susceptibles del contaje aquellos
microorganismos capaces de crecer en las condiciones establecidas. Se puede conseguir
una amplia gama de condiciones variando la temperatura, la atmsfera, la composicin
del medio y el tiempo de incubacin.
El intervalo de temperaturas en el que crecen los microorganismos es muy amplio: de
34 C a > 90 C. En funcin de esto se encuadra a los microorganismos en tres grupos:
a) los que crecen bien a 7 C o por debajo de esta temperatura cuya temperatura:
psicrtofos
b) los que crecen entre 20 30 C, con una temperatura ptima de crecimiento est
entre 30 40 C: mesfilos
c) los que crecen por encima de los 45 C: termfilos

MTODO
El conteo de poblaciones microbianas por dilucin en placa es un mtodo simple y
rpido para la cuenta viable de clulas microbianas en el suelo. Sin embargo, la cuenta
obtenida es generalmente 10 a 100 veces menos que aquella determinada por cuenta
directa por microscopia. Las razones para esta discrepancia incluyen la exclusin de la
cuenta no viable directamente en el suelo y la inhabilidad para proveer apropiados
nutrimentos en el medio de crecimiento, para obtener la cuenta total en placa.
El mtodo de dilucin en placa se fundamenta en que cualquier clula viable inoculada
en un medio de cultivo se multiplica y produce datos de fcil identificacin, como la
formacin de colonias en placas de Agar. Este mtodo consiste en la preparacin de una
serie de diluciones de una muestra de suelo en un diluyente apropiado, esparciendo una
alcuota de una dilucin sobre la superficie de un medio de cultivo slido e incubando la
placa de Agar bajo condiciones ambientales apropiadas. La dilucin debe permitir
generar colonias separadas, cada colonia puede proceder de una sola clula o de una
agrupacin (unidad viable), la cual se contar como una bacteria. Bajo este fundamento,
estas placas pueden ser usadas no slo para el conteo de poblaciones microbianas, sino
tambin para el aislamiento de organismos. Un medio selectivo o no selectivo puede ser
usado dependiendo de la naturaleza del microorganismo que se desea contar o aislar
(Ramrez et al., 1992).

CLCULOS

1) Contar slo aquellas cajas (diluciones) que contengan de 30 a 300 colonias.

2) Con la siguiente ecuacin calcular las UFC/g s.s.

UFC/g s.s. = (NC * 1/FD * 1/ V) / (P * FH).

Dnde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC = nmero de colonias en una caja.
FD = factor de dilucin que corresponde a la dilucin de donde se tom la muestra con
la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
+P = peso de la muestra hmeda = 1 g.
FH = factor de correccin de humedad (1-(%humedad/100)).
III. PARTE EXPERIMENTAL

4.1 Materiales y equipos

Placas Petri
Balones
Tijeras
Cuchillas
Solucin Salina Peptonada (SSP)
Estufas
Tubos de prueba
Pinzas
Vasos de licuadora
Contador de colonias
Agar nutritivo
Producto a analizar : tomate

4.2 Procedimiento

Proceder a armar la licuadora con sus partes previamente esterilizadas, con

ayuda de las pinzas colocar el anillo de silicona junto al aro portacuchillas.

Imagen 2. Armado de la licuadora

Imagen 1. Anillos de silicona
 Preparacin de la dilucin 10-1

pesar 50 g de muestra (tomate) en el vaso de licuadora para luego aadir 450 ml

de Solucin Salina Peptona (SSP).Trabajar a 30 cm de la llama para evitar
contaminacin

Imagen 3. Muestra Imagen 4. Aadido de SSP

de tomate a los 50 g de muestra

Homogenizar la muestra triturndolo por 2 minutos, comenzando con la

velocidad ms baja de la licuadora y aumentando gradualmente la velocidad
hasta alcanzar la mxima velocidad de la licuadora.

Imagen 5. Homogenizacin de la Imagen 6. Velocidades que posee

muestra mediante la licuadora la licuadora
 Dejar reposar por 5 minutos hasta que se separe la espuma y se formen tres fases
definidas (separacin de fases).

SOBRENADANTE

Imagen 7. Reposado por 5 Imagen 8. Separacin de fases

minutos.

Preparacin de la dilucin 10-2

Tomar 1 ml del sobrenadante y depositarlo en un tubo que contiene 9 ml de SSP.

Agitar el tubo para mezclar la dilucin.

Imagen 9. Extraccin de 1 ml de Imagen 10. Realizacin de la

sobrenadante de la dilucin 10-1 dilucin 10-2
 Preparacin de la dilucin 10-3

Medir nuevamente 1 ml de la dilucin anterior (10-2) y llevarlo a un tubo con 9

ml de SSP, para as obtener la dilucin 10-3

Preparacin de la dilucin 10-4

Medir nuevamente 1 ml de la dilucin anterior (10-3) y llevarlo a un tubo con 9

ml de SSP, para as obtener la dilucin 10-4
El nmero de diluciones depender del tipo de alimento que se va a analizar.

Mtodo de siembra: siembra en profundidad.

Colocar en placas Petri 1 ml de todas las diluciones preparadas y rotularlas
adecuadamente. Sembrar con pipeta limpia en cada una.

Imagen 11. Llevado de las diluciones

al centro de las placas Petri

Agregar a cada placa 15 ml de agar estndar, fundido y temperado a 45 C, para

el recuento en placas.

Imagen 12. Agregado del agar a

cada una de las placas.
 Homogenizar con movimientos rotatorios en forma de infinito. Para mezclar la
alcuota liquida y el medio de cultivo.

Imagen 13. Homogenizacin de las

placas

Dejar solidificar todas las placas manteniendo un momento en la superficie de la

mesa.

Imagen 14. Solidificacin de la

muestra.

Incubar a 37 C por 48 horas.

Contar el nmero de colonias que son visibles con la ayuda del equipo de
laboratorio: Cuenta Colonias.

Calcular el nmero total de microorganismos, de acuerdo al contaje

representativo de la dilucin correspondiente, y expresar los resultados en
unidades formadoras de colonias por gramo o mililitro (UFC / g o ml).
IV. RESULTADOS
Preparacin de la Dilucin 10-1

Mtodo Recuento en Placa

Incubacin 37C 48h

Resultado:
Se observ en la placa
la Aparicin de muchas
colonias, de diferentes
tamaos y colores, por
ser ms de 30 lo
llevamos a un cuenta
colonias, para
determinar la cantidad
de colonias

Se dividi en dos la DE ACUERDO A LA NORMA SANITARIA QUE ESTABLECE

placa Petri y se cont
en el cuenta colonias,
dndonos como
resultado 103 colonias.
Mtodo para conteo:
*Contaje x 2:
103 x 2= 206
1031.03x 102x10
*Resultado:
1x103= 1000 UFC/g
2.06 x 102x10= 2060
LOS CRITERIOS MICROBIOLOGICOS DE CALIDAD
SANITARIA E INOCUIDAD PARA LOS ALIMENTOS Y
BEBIDAS DE CONSUMO HUMANO SE ACEPTA UNA
CANTIDAD DE MICROORGANISMOS AEROBIOS VIABLES DE
102 A 103, ENTONCES LAS MUESTRAS DE TOMATE
ANALIZADAS NO ESTAN APTAS PARA EL CONSUMO
DEBIDO A QUE NO CUMPLES CON LOS ESTNDARES DE LA
NORMA.

Otro mtodo para 10-1:

1g ---- 10 ml
0.1g--- 1 ml

0.1g --- 206

1g --- x
X = 2060
 Preparacin de la Dilucin 10-2

Mtodo Recuento en Placa

Incubacin 37C 48h

Resultado:
Se observ en la placa
la Aparicin de pocas
colonias, de diferentes
tamaos y colores, por
ser menor de 30 no
ser necesario usar el
cuenta colonias.

Preparacin de la Dilucin 10-3

Mtodo Recuento en Placa

Incubacin 37C 48h

Resultado:
Se observ en la placa
que no hubo presencia
de colonias, en esta
dilucin no se
desarrollaron
microorganismos.
 Preparacin de la Dilucin 10-4

Mtodo Recuento en Placa

Incubacin 37C 48h

Resultado:
Se observ en la
placa que no hubo
presencia de
colonias, en esta
dilucin no se
desarrollaron
microorganismos
presentes en la
muestra.
VI. CONCLUSIONES

Se concluye que en la prctica realizada, el mtodo de dilucin 10-1

donde la solucin es ms concentrada, se observ muchas colonias de
diferentes tamaos y colores en la muestra de tomate analizada, dando un
alto valor de colonias concluyendo una mala calidad del alimento
analizado.

En el mtodo de dilucin 10-2 se observo pocas cantidades de colonias,

por lo tanto en las otras dos mtodos no se observo presencia de
colonias, indicando negatividad en el desarrollo de microorganismo en el
producto.

VI. DISCUSIONES

- Segn Camacho, A. (2009)

En las Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos Se consideran
representativaslas muestras que tienen un nmero de colonias dentro del rango de
sensibilidad del mtodo, en este caso, entre 25 y 250 UFC por lo cual damos contra lo
que dice el autor ya que en la prctica se tom un rango mayor de UFC (30 y 300
colonias) debido a los mrgenes de errores que pueden existir en el procedimiento de la
prctica

- Segn DIGESA:
Segn DIGESA, de acuerdo a la Norma Sanitaria que establece los criterios
microbiolgicos de calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y bebidas de
consumo humano se acepta una cantidad de microorganismos aerobios viables para el
tomate de 102 a 103,en la prctica la muestra de tomate analizada dio resultados
superiores a los aceptados que fue de 2060, esto determina que el producto no est
dentro de los estndares adecuados segn la norma.
BIBLIOGRAFA
- Camacho, A. (2009) Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. Mxico.

- Ramrez G. R. M., Luna M. B., Meja Ch. A., Velzquez M. O., Tsuzuki R. G., Vierna G.
L., Mggenburg I. 1992. Manual de prcticas de microbiologa general. Laboratorio
de microbiologa experimental. Facultad de Qumica, UNAM.

- DIGESA- RM N 615-2003 SA/DM: Norma Sanitaria que establece los criterios

microbiolgicos de calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y bebidas de
consumo humano