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FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

PROYECTO DE INVESTIGACIN

EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO


DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON PLOMO

CURSO DE BIOQUIMICA Y TOXICOLOGA

Docente: GELDRES VIGIL, Mara Elena

Autores:

CARRANZA VILLA, Kenia


ESTELA MONTEZA, Thala
JAUREGUI GARCA, Jeanpier
SANCHEZ SANCHEZ, Jordy
VALVERDE RAVELO, Karen

TRUJILLO PER
2017

INDICE
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Contenido
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Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

I. Introduccin:
1.1. Realidad Problemtica:
El plomo es un metal txico presente de forma natural en la corteza
terrestre. Su uso generalizado ha dado lugar en muchas partes del mundo a
una importante contaminacin del medio ambiente, un nivel considerable de
exposicin humana y graves problemas de salud pblica[ CITATION Org16 \l
10250 ].

Los alimentos y las bebidas pueden contener plomo, si el polvo que


contiene plomo llega a las cosechas durante su crecimiento, sobre todo
cuando se utilizan fertilizantes que contienen fangos cloacales. Las plantas
pueden recoger el plomo del suelo, como el que podra encontrarse en un
sitio de desechos peligrosos o cerca de reas con un elevado trnsito
automotriz.

La fabricacin casera o reciclaje de bateras, la imprenta, alfarera con la


produccin de cermica vidriada, para cocinar y almacenar alimentos son
fuentes altamente contaminantes de plomo. ()Las fuentes principales del
plomo liberadas al agua son las tuberas y accesorios de plomo, y la
soldadura en las casas, escuelas y edificios pblicos, el polvo y suelo que
contienen plomo transportados al agua por las lluvias y los vientos, y el agua
residual de las industrias que utilizan el plomo. El plomo puede entrar al
cuerpo al respirar el aire con polvo que contiene plomo o partculas de
plomo. Casi todo el plomo de los pulmones entra a la sangre y se mueve a
otras partes del cuerpo[ CITATION Mar10 \l 10250 ].

Una vez que el plomo logra ingresar al cuerpo de un organismo, se


distribuye por el este hasta alcanzar el cerebro, el hgado, los riones y los
huesos y se deposita en dientes y huesos, donde se va acumulando con el
paso del tiempo. () Los nios de corta edad son especialmente
vulnerables a los efectos txicos del plomo, que puede tener consecuencias
graves y permanentes en su salud, afectando en particular al desarrollo del
cerebro y del sistema nervioso. El plomo tambin causa daos duraderos en
los adultos, por ejemplo aumentando el riesgo de hipertensin arterial y de

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lesiones renales. En las embarazadas, la exposicin a concentraciones


elevadas de plomo puede ser causa de aborto natural, muerte fetal, parto
prematuro y bajo peso al nacer, y provocar malformaciones leves en el feto.
()El plomo tiene graves consecuencias en la salud de los nios. Si el
grado de exposicin es elevado, ataca al cerebro y al sistema nervioso
central, pudiendo provocar coma, convulsiones e incluso la muerte. Los
nios que sobreviven a una intoxicacin grave pueden padecer diversas
secuelas, como retraso mental o trastornos del comportamiento. Se ha
comprobado adems que en niveles de exposicin ms dbiles sin sntomas
evidentes, antes considerados exentos de riesgo, el plomo puede provocar
alteraciones muy diversas en varios sistemas del organismo humano. En los
nios afecta, en particular, al desarrollo del cerebro, lo que a su vez entraa
una reduccin del cociente intelectual, cambios de comportamiento por
ejemplo, disminucin de la capacidad de concentracin y aumento de las
conductas antisociales y un menor rendimiento escolar. La exposicin al
plomo tambin puede causar anemia, hipertensin, disfuncin renal,
inmunotoxicidad y toxicidad reproductiva. Se cree que los efectos
neurolgicos y conductuales asociados al plomo son irreversibles[ CITATION
Org16 \l 10250 ].

En La Oroya, la gente est condenada a muerte antes de los 40 aos de


edad puesto que se estableci valores superiores a los 2000 mg/kg de
plomo en algunas casas, siendo el valor estndar nacional de 140 mg/kg, es
decir 10 veces ms el valor considerable permisible. ()Investigaciones
independientes realizadas en el lugar revelaron que el 97% de los nios y
nias de entre 6 meses y 6 aos, y el 98% de los infantes que tienen de 7 a
12 aos, presentan niveles elevados de plomo en la sangre. Es ms, existe
un estudio realizado por pediatras de un centro de salud que demostr que
hasta los recin nacidos llegaban al mundo con preocupantes niveles de
plomo en la sangre. Tambin es causante de la prdida de memoria,
problemas de crecimiento, mal aprendizaje. Todo esto provoca que la
esperanza de vida sea de tan solo 40 aos[ CITATION Dia15 \l 10250 ].

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Ante tal problemtica, es imprescindible para la humanidad buscar


alternativas de solucin, es por ello que en el presente trabajo se propone
utilizar el carragenato, para fortalecer el sistema inmunolgico frente al
efecto txico del Plomo.

1.2. Formulacin del problema


Cul es el efecto inmunopotenciador del carragenato del mococho en
ratones cepa balb/c intoxicados con plomo?

1.3. Justificacin:

La contaminacin por plomo se ha convertido en uno de los problemas


de mayor impacto en el medio ambiente. La polucin de las partculas
plomadas deteriora la calidad del aire, el suelo y el agua daando los
ecosistemas. La exposicin a este metal origina problemas que atentan
directamente contra la salud de las personas, la cual es condicin
necesaria para el desarrollo humano y se convierte en el medio esencial
para conseguir el bienestar individual y colectivo.

Los costos por restablecer la salud humana de miles de personas son


elevados, ms aun cuando en nuestro pas, de los medicamentos usados
para el tratamiento por contaminacin de plomo solo uno es accesible con
el fin de plantear una alternativa frente a este problema que aqueja a la
sociedad, se propone el uso del carragenato como inmunopotenciador, el
cual contribuir al restablecer la salud de las personas contaminadas con
plomo.

1.4. Limitaciones:
No encontrar los reactivos en el laboratorio de la universidad, como el
turk.
1.5. Objetivos:
1.2.1. Objetivo General

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Determinar el efecto inmunopotenciador del carragenato


extrado del mococho en ratones cepa balb/c intoxicados con
plomo.

1.2.2. Objetivos especficos


Implementar una metodologa de extraccin del carragenato a
partir del mococho.
Evaluar mediante recuento de leucocitos el efecto del
carragenato antes y despus de administrar plomo.
Identificar la dosis ptima del carragenato.

II. Marco terico.


2.1. Antecedentes:

En el estudio realizado por Vitalone y col. (2000), en la investigacin


denominada Efecto de la carragenina e indometacina sobre el crecimiento
de un fibrosarcoma murino en la cual tiene como objetivo demostrar que la
Carragenina y la Indometacina inhiben el crecimiento de fibrosarcoma.
Teniendo en cuenta que los tumores slidos para crecer ms de 2 mm,
necesitan desarrollar nuevos vasos sanguneos. Las clulas neoplsicas
secretan factores de crecimiento que estimulan la angiognesis y el
crecimiento tumoral. La Carragenina bloquea in vitro la unin de los
factores de crecimiento a sus receptores. Ensayamos in vivo su accin con
el objeto de analizar si inhibe el desarrollo de un fibrosarcoma murino. Para
neutralizar la accin inflamatoria de la Carragenina usamos la
Indometacina, que es un antiinflamatorio no esteroide. El tumor usado fue
un fibrosarcoma inducido con metilcolantreno en ratones Balb/c y
mantenido por pasaje seriado de clulas tumorales, en ratones de la
misma cepa. El volumen de los tumores fue evaluado midiendo dos
dimensiones y aplicando la frmula V = 0.4 x d2 x D. Los ratones con
tumores fueron separados en grupos, uno de los cuales se us como
testigo y los otros tratados en forma separada con Indometacina,
Carragenina y Carragenina-Indometacina. Se compar el volumen de los
tumores de los ratones tratados con respecto al testigo y el de los tratados

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entre s, utilizando el Test t de Student. Se demostr que la Carragenina y


la Indometacina, inhiben el desarrollo del fibrosarcoma. La accin
inhibitoria de la Carragenina sobre el crecimiento tumoral es
significativamente mayor que el efecto antitumoral de la Indometacina y el
de la Carragenina-Indometacina.

En el estudio realizado por Calcine y Paredes (2016) denominado


Efecto del carragenato del mococho en el crecimiento del rabanito
contaminado con cobre, la investigacin se realiz con la finalidad de
reconocer los efectos del carragenato obtenido del alga mococho en el
crecimiento de rabanito contaminados con cobre (Cu). Se extrajo el
carragenato del mococho obtenido, posteriormente se infect los rbanos
(3 semillas) con el cobre, para que luego se sembraran en 3 recipientes y
se agrega 2kg de tierra. De esta manera se concluye que los rabanitos
infectados por la bioacumulacin del Cu, donde tambin fue agregado el
carragenato, dando como resultado el efecto positivo sobre este cultivo
permitiendo estar por debajo del LMP de cobre para el rabanito.

En el estudio realizado por Lpez, M. (2010), En la investigacin


Estudio de la respuesta inmunolgica celular obtenida al exponer clulas
de ratones Balb/c a extractos del alga parda Macrocystis pyrifera nos
menciona que algunos los polisacridos extrados de plantas, como las
algas marinas, tienen propiedades teraputicas que ofrecen una alternativa
como tratamiento profilctico. Los inmunomoduladores actan en
diferentes niveles del sistema inmune, por esto la necesidad de desarrollar
agentes que puedan inhibir o intensificar selectivamente clulas para la
respuesta inmunolgica producir mediadores como las citocinas.
Macrocystis pyrifera es una alga parda gigante que habita en la costa
oeste de Norteamrica. Su disponibilidad en la regin la distingue como
una buena opcin de investigacin y un buen recurso para su estudio y
explotacin. Se determin si las fracciones de M. pyrifera (MpA, MpB y

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MpAC) tienen funciones de inmunoestimulante inmunolgico al inyectarlos


con rESAT-6 en ratones Balb/c y si inducen la produccin de algunos
factores inmunolgicos (TNF-, IL-6, ON, proliferacin) en la lnea celular
RAW 264.7. Se determin que MpA, MpB y MpAC tienen efecto
inmunoestimulante. La disminucin en la densidad celular en el ensayo in
vivo-in vitro, puede deberse a que rESAT-6 promueve la apoptosis de
macrfagos por la activacin de las caspasas. Sin embargo, el efecto de
MpB al disminuir la densidad celular, puede indicar que sta fraccin
reprime la produccin de citocinas proinflamatorias, sugiriendo pueden
modular la induccin de citocinas durante la sepsis. MpA, MpB y MpAC
indujeron la produccin de TNF-, IL-6 y de xido ntrico por RAW 264.7.
Las tres fracciones presentaron citotoxicidad.

Segn Rodrguez Espejo, M (2010) en el proyecto titulado


Bioacumulacin de metales pesados trazas: cadmio, cobre y plomo en
chondracanthus chamissoi procedente del litoral del departamento la
libertad se determin la bioacumulacin de los metales pesados trazas:
Cd, Cu y Pb en Chondracanthus chamissoi. (C. AGARDH) KTZING, 1843
cochayuyo RHODOPHYTA GIGARTINACEAE, procedente de
Salaverry, Malabrigo y Pacasmayo, provincias de Trujillo, Ascope y
Pacasmayo respectivamente, del litoral del Departamento La Libertad.
Peru; (8 13 42 S, 78 59 30 W; 7 42 S y 79 27 W y 7, 23 30 S, 79,
2 W). Las muestras de la especie, as como del agua de mar superficial
fueron recolectadas aleatoriamente en la zona intermareal entre los meses
de agosto del 2006 a mayo del 2007. Se determin temperatura, pH y
salinidad. En su proyecto concluyeron que la temperatura influye
significativamente sobre la bioacumulacin de Pb, en las tres zonas de
muestreo excepto para Cd y Cu en Salaverry y Malabrigo. As mismo la
salinidad y el pH tienen una relacin inversa significativa sobre los tres
elementos. Y existe una relacin directa significativa, entre la
concentracin de los elementos traza (Cd, Cu y Pb) presentes en agua de
mar con los presentes en los tejidos de Ch. Chamissoi.

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2.2. Bases Tericas:


2.2.1. Plomo
El plomo es un metal pesado, de baja temperatura de fusin,
de color gris-azulado que ocurre naturalmente en la corteza
terrestre. Sin embargo, raramente se encuentra en la naturaleza
en la forma de metal. Generalmente se encuentra combinado
con otros dos o ms elementos formando compuestos de plomo.
()Los compuestos de plomo se usan como pigmentos en
pinturas, en barnices para cermicas y en materiales de relleno.
La cantidad de plomo que se usa en estos productos se ha
reducido en aos recin pasados para minimizar los efectos
nocivos del plomo sobre seres humanos y animales[ CITATION
Age16 \l 10250 ].
2.2.2. Intoxicacin por plomo
El Pb ingresa al organismo principalmente por va
respiratoria y gastrointestinal. Una vez en el torrente sanguneo,
se acumula dentro de los glbulos rojos, donde interfiere en la
sntesis del grupo hemo, ocasionando anemia. Luego de
aproximadamente un mes, se redistribuye a diferentes rganos y
tejidos, generando alteraciones en el sistema nervioso,
hematopoytico, cardiovascular, reproductivo y renal.
Finalmente, se deposita en tejidos duros como huesos, uas y
dientes, donde puede permanecer acumulado durante toda la
vida. Cabe destacar que el Pb es teratgeno, porque atraviesa
con facilidad la barrera placentaria, encontrndose
concentraciones comparables del metal en la sangre de la madre
y del recin nacido[CITATION Fon13 \l 10250 ].
La [ CITATION Bib06 \l 3082 ] indica los niveles de toxicidad
del plomo mediante el siguiente cuadro:

TABLA 01: NIVELES DE TOXICIDAD DEL PLOMO EN EL HOMBRE Y SU


BALANCE

CONCENTRACIN INGESTA DIARIA EFECTO

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EN SANGRE PARA OBTENER


ug/100 ml DICHO NIVEL EN
SANGRE (mg)
20 0.3 Normal. Sin efectos evidentes
>40 1.0 Aumento del -amino
levulnico en orina y en
sangre.
>80 3.0 Disminuye la cuenta de
eritrocitos, clicos
abdominales, anemia, retraso
mental progresivo en nios.
>120 10.0 Dao agudo al cerebro y el
sistema nervioso central.

Elaboracin: PAHO (Pan American Health Organization)


Fuente: http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/eco/018891/018891-04.pdf

2.2.3. Bioacumulacin del plomo


La bioacumulacin est definida como la acumulacin de
una determinada sustancia en alguno de los tejidos de un
organismo vivo. Lo que implica que en presencia de la sustancia
en cuestin en el entorno, un organismo que habite en l
adquirir cierta cantidad de dicha sustancia -ya sea al respirar, al
alimentarse, por contacto directo a travs de la piel o por otras
vas- parte de la cual quedar almacenada en sus tejidos. Y si la
presencia de esa sustancia en el medio es constante, con el
paso del tiempo la cantidad almacenada ser cada vez ms
importante[ CITATION Bar08 \l 10250 ].
2.2.4. Mococho
El mococho es un alga que se encuentra distribuido en
todos los ocanos. Los nombres comunes de chondracanthus
chamissoi varan de acuerdo a cada zona, as tenemos que en el
Per en la zona norte es llamada cochayuyo, mococho. Uno
de sus principales componentes son las protenas de fcil
asimilacin que contienen gran nmero de aminocidos
esenciales, es decir, aquellos que nuestro organismo no puede
sintetizar sino que debe asimilar a travs de la alimentacin.
Estos aminocidos resultan fciles de digerir debido a la
particular composicin de las algas, ricas en sales minerales u

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en algunas enzimas. Ello hace que alcancen un coeficiente de


digestibilidad de hasta 95% y que se digieran cuatro o cinco
veces ms rpido que las protenas animales[ CITATION Car05 \l
3082 ].
2.2.5. Carragenina:
La carragenina es un ficocoloide que se extrae de algas
pertenecientes al orden Gigartinales (entre las que destaca
Gigartina chamissoi), del musgo Chondrus crispus y de
Eucheuma spp. La carragenina es un polmero de galactosa,
fuertemente sulfatados y con numerosos grupos hemisteres,
que hacen de estos polmeros fuertemente aninicas. Todas las
carrageninas reaccionan con las protenas y bajo ciertas
condiciones puede tener lugar una interaccin directa polianin-
policatin. En otros casos los iones calcio participan en la
formacin del complejo. Los carragenatos son solubles en agua
caliente, sus soluciones tienden a aumentar el volumen, estos
polmeros; as como otros polisacaridos de las algas marinas
carecen de toxicidad a mediano y a largo plazo[ CITATION Pre06
\l 3082 ].

Porto (2003), refiere que es un hidrocoloide extrado de


algas marinas rojas de las especies Gigartina, Hypnea,
Eucheuma, Chondrus y Iridaea. Es utilizada en diversas
aplicaciones en la industria alimentaria como espesante,
gelificante, agente de suspensin y estabilizante, tanto en
sistemas acuosos y lcticos.

2.2.6. Estructura de la carragenina:


La carragenina est ubicada en la pared de las clulas y en
la matriz intercelular del tejido de las algas. Es un polisacrido de
alto peso molecular con contenido de ster sulfato de 15% a
40% formado por unidades alternadas de D-galactosa y 3,6-
anhidro-galactosa (3,6-AG) unidas por ligaduras -1,3 y -1,4-
glucosdica. La posicin y el nmero de grupos de ster sulfato

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as como el contenido de 3,6-AG determinan las diferencias


primarias entre los tipos de carragenina kappa, iota y lambda.
Los mayores niveles de ster sulfato implican en una menor
fuerza de gelificacin y baja temperatura de solubilizacin. La
carragenina tipo kappa contiene de 25% a 30% de ster sulfato y
de 28% a 35% de 3,6-AG. La carragenina tipo iota contiene de
28% a 35% de ster sulfato y de 25% a 30% de 3,6-AG. La
carragenina tipo lambda contiene de 32% a 39% de ster sulfato
y no contiene 3,6-AG, segn Porto (2003). (Ver anexo: Fig. 01)

2.2.7. Leucograma:
El leucograma es la fraccin del hemograma que se refiere
al conteo total de los leucocitos (glbulos blancos) y de las
diferentes clases de leucocitos. En s est compuesto por dos
anlisis segn Laboratorios Echandi (2017):

A. Conteo total de leucocitos: los leucocitos son las clulas


encargadas de proteger al organismo contra las
infecciones. Si un virus, bacteria u otro microbio penetra
dentro del organismo, los leucocitos se organizan para
atacarlo y destruirlo. La presencia de una infeccin
normalmente altera el nmero total de leucocitos. Otras
condiciones que pueden alterar el conteo de leucocitos son
inflamaciones dentro del cuerpo, trauma (golpes, cadas,
fracturas, etc) y el estrs excesivo.

B. Conteo de leucocitos diferencial: apodado simplemente


"diferencial", determina la proporcin o porcentaje de las
principales clases de leucocitos dentro del conteo total de
leucocitos. Estos tipos principales de leucocitos son los
neutrfilos, eosinfilos, basfilos, linfocitos y monocitos.
Cada clase tiene un papel diferente en la defensa del
organismo. La cantidad de cada clase de leucocito da
informacin muy valiosa acerca del estado del sistema

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inmune. Demasiados o muy pocos leucocitos de una clase


puede contribuir a encontrar la causa de una infeccin,
definir la presencia de una reaccin alrgica y evaluar la
presencia de enfermedades tales como leucemias.

2.2.8. Conteo celular y valores estndares de leucocitos:


Segn vila y col. (2017), para el clculo de leucocitos se
emple la siguiente frmula (ver tabla 01):

WBC = Recuento de leucocitos (nmero de leucocitos por


mm3 de sangre)
L = Leucocitos contados en 4 cuadrantes grandes
D = Factor de dilucin (20)

2.3. Definicin de trminos bsicos


A. Intoxicacin: es la entrada de un txico en el cuerpo en cantidad
suficiente como para producir un dao[ CITATION Rev16 \l 10250 ].
B. Mococho: alga parda abundante en las costas, con el aspecto de
una planta de grandes hojas y tallos tubulares, puede alcanzar hasta
quince metros de largo; habita en zonas de fuerte oleaje y se
adhiere a las rocas mediante un disco basal[ CITATION Lis17 \l
10250 ].
C. Inmunopotenciador: es un qumico, droga, estresor o accin que
potencie la respuesta inmune innata por interaccin directa con las
clulas que componen el sistema inmune innato[ CITATION Per13 \l
10250 ].
D. Carragenato: es un hidrocoloide procedente de algas rojas,
producto natural similar al Agar Agar[ CITATION Coc17 \l 10250 ].

III. HIPOTESIS:
3.1. Formulacin de la hiptesis

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H0= El carragenato del mococho no tiene efecto inmunopotenciador sobre


los ratones cepa Balb/c intoxicados con plomo.
H1= El carragenato del mococho tiene efecto inmunopotenciador positivo
sobre los ratones cepa Balb/c intoxicados con plomo.

3.2. Operacionalizacin de las variables


Conteo de leucocitos de los ratones
VARIABLE DEPENDIENTE
intoxicados con plomo.
Dosis aplicada de carragenato de
VARIABLE INDEPENDIENTE
mococho.

IV. MATERIALES Y METODOS


4.1. Materiales, insumos e instrumentos:
Plomo a 200 ppm
Cmara de Neubauer marca Marienfeld
Microscopio cientfico marca Primo star
Reactivo Turck
Bistur
Micropipetas
3kg Mococho
Centrifuga
Algodn
Etanol
Jeringas tuberculinas
Tubos de ensayo
Colador
Hidrxido de sodio
Guantes
Mascarillas

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Gradilla
Agua destilada

4.2. Tipo de diseo de investigacin


La investigacin a efectuarse es de tipo experimental, ya que se va a
probar la efectividad del carragenato como inmunopotenciador sobre los
ratones cepa/balb C intoxicados con plomo.

4.3. Material de estudio


4.3.1. Poblacin
Los ratones cepa/Balb c.
4.3.2. Muestra
2 grupos de 4 ratones cepa/Balb c. cada uno donde:

TABLA 02: CARCTERISTICAS DEL PRIMER GRUPO DE CEPA BALB/C

Ratn (G1) Peso (gr) Sexo Edad


Rc1 88.08 F 2 meses
1P 86.04 M 2 meses
1PC1 109.41 M 2 meses
1PC2 123.09 F 3 meses

Leyenda:
Rc1 Ratn control del primer grupo.
1P Ratn intoxicado con plomo del primer grupo.
1PC1 Ratn intoxicado con plomo y con 0.1 ml de carragenato del primer grupo.
1PC2 Ratn intoxicado con plomo y con dosis de 0.5 ml carragenato del primer
grupo.

TABLA 03: CARCTERISTICAS DEL PRIMER GRUPO DE CEPA BALB/C

RATN (G2) PESO (GR) SEXO EDAD


RC2 67.03 M 2 meses
2P 86.79 M 2 meses
2PC1 94.82 F 2 meses
2PC2 72.31 F 2 meses

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Leyenda:
Rc2 Ratn control del segundo grupo.
2P Ratn intoxicado con plomo del segundo grupo.
2PC1 Ratn intoxicado con plomo y con 0.1 ml de carragenato del segundo
grupo.
2PC2 Ratn intoxicado con plomo y con 0.5 ml carragenato del segundo grupo.

4.4. Tcnicas, procedimientos e instrumentos


Se separa a los ratones cepa/Balb c de tal manera que se tenga
un grupo control (blanco), un ratn intoxicado con plomo y dos
ratones intoxicados con plomo respaldados con dosis distintas de
carragenato, tal como se muestra en el siguiente esquema.

Encasillado 1 Encasillado 1
Encasillado 1

xPC1

Rcx xP
xPC2

Blanco Plomo Plomo y carragenato

Se toma lectura del peso de todos los ratones y se realiza un


primer reconteo de leucocitos de cada ratn antes de intoxicarlos

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con plomo para saber en qu estado se encuentran antes de la


experimentacin.
Despus de esto, se administra va oral 15 ml de plomo a 200
ppm (3 mg de Plomo) a los ratones xP, xPC1 y xPC2 de cada
grupo diariamente por una semana.
Despus de una semana se administra 0.5 ml y 1 ml de
carragenato a los ratones xPC3 y xPC4 respectivamente.
Se realiza un reconteo de leucocitos despus de este proceso
para compararlos con los resultados antes de la experimentacin.
Se realiza el mismo procedimiento para el segundo grupo de
ratones.
3.1. METODO PARA RECONTEO DE LEUCOCITOS.
Se tom 20 microlitros de sangre y se coloca en un vial.
Se agreg 380 microlitros de reactivo de Turck al vial.
Se dej reposar la mezcla entre 20 a 30 minutos.
Se retir una parte de la mezcla con ayuda de una micropipeta y
se coloca en la cmara de neubauer.
Se dej reposar durante 2 3 minutos y luego se lleva al
microscopio.
Se cuentan los leucocitos en los 4 cuadrantes y se aplica la
frmula para calcular el nmero de leucocitos por mm 3 de sangre.

WBC = Recuento de leucocitos (nmero de leucocitos por mm3 de


sangre)
L = Leucocitos contados en 4 cuadrantes grandes
D = Factor de dilucin (20)

3.2. EXTRACCIN DEL CARRAGENATO


Se hirvi 1 Kg de mococho durante 2 horas y a un volumen de 10
litros de agua (utilizando hidrxido de sodio o potasio al 0.02%)

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Se dej enfriar y luego se tamizo hasta que pase toda la parte del
gel.
Se hirvi el queque restante en 2 litros de agua y se dej enfriar y
tamizo hasta que pase toda la parte del gel.
Seguidamente se uni las dos extracciones realizadas anteriormente
y se someti a un procedimiento de congelacin (hasta llegar a hielo)
y descongelacin (T ambiente).
Se procedi a centrifugarlo a 3000 rpm por 10 minutos.
Se separ por decantacin, eliminando el sobrenadante y al sedimento se
le someti a precipitacin con etanol al 96% (permite precipitar el gel).
Se centrifug por segunda vez y se purifico 4 veces; disolviendo el
centrifugado en agua destilada y precipitndolo con etanol al 96%.

V. RESULTADOS
TABLA 04: RESULTADOS DEL PRIMER GRUPO DE EXPERIMENTACIN

Leucocitos/mm3
Ratn Peso Pre Dosis de con con dosis Post
(g) experimentacin carragenato plomo carragenato experimentacin
diaria
Rc1 88.08 9800 0 9850 9900 9900
1P 86.04 9500 0 4000 3700 3600
1PC1 109.41 12100 0.1 ml 5000 8000 8000
1PC2 123.09 12300 0.5 ml 5600 6900 6950

Fuente: Resultados de leucograma del primer grupo experimental de cepa balb/c


Elaboracin: Propia

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

GRFICO 01: COMPARACIN ENTRE EL LEUCOGRAMA INICIAL Y DURANTE LA ADMINISTRACIN DE PLOMO DEL GRUPO 1
14000
12100 12300
12000

9800 9850 9500


10000

8000
Leucocitos/mm3

6000 5600
5000
4000
4000

2000

0
Rc1 1P 1PC1 1PC2

Pre experimentacin con plomo

Fuente: Tabla 04 de resultados del primer grupo experimental.


Elaboracin: Propia
Interpretacin: Se puede ver una disminucin notable de leucocitos, esto se debe
al carcter txico del plomo en el organismo de los ratones y es por eso que

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

pg. 19
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

cuando fueron intoxicados sus niveles de leucocitos disminuyeron


significativamente.

GRFICO 02: COMPARACIN ENTRE EL LEUCOGRAMA CON ADMINISTRACION DE PLOMO Y DURANTE LA ADMINISTRACIN DE CARRAGENATO DEL GRUPO 1
12000
98509900
10000
8000
8000 6900
6000 5600
5000
m
/m3

40003700
s
ito

4000
e
Luo
cc

2000

0
Rc1 1P 1PC1 1PC2
con plomo con carragenato

Fuente: Tabla 04 de resultados del segundo grupo experimental.


Elaboracin: Propia

Interpretacin: Es notable el incremento en los niveles leucocitarios de los ratones


que fueron tratados con carragenato. Asimismo se puede observar que los
leucocitos del ratn 1PC1 se elevaron mucho ms que los del ratn 1PC2, esto se

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

pg. 20
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

debe a que al ratn 1PC1 se le administr 1 ml de carragenato, mientras que al


ratn 1PC2 slo se le administr 0.5 ml.

GRFICO 03: COMPARACION ENTRE LA DOSIS DE 0.1ML Y 0.5ML POR SU EFICIENCIA DEL GRUPO 1
120
99.28 100.00
100
80.58 100 100
80
Porcentajedeeficacia

60
62.5
40

20

0
con plomo con carragenato Post experimentacin
con 0.1 ml de dosis diaria de carragenato
con 0.5 ml de dosis diaria de carragenato

Fuente: Tabla 04 de resultados del primer grupo experimental.


Elaboracin: Propia

Interpretacin: Se observa que los leucocitos del ratn control no variaron,


mientras que los de los dems ratones disminuyeron significativamente. Por otro
lado, la disminucin de leucocitos del ratn intoxicado con Plomo es mucho mayor
a la de los ratones a los que se les suministr carragenato.

GRAFICO 04: VARIACION DE LEUCOCITOS DE LOS RATONES DURANTE EL PERIODO DE EXPERIMENTACIN


14000

12000

10000

8000
Leucocitos/mm3

6000

4000

2000

0
P re ex pe ri m ent ac i n c o n p l om o c o n c ar r age nat o P os t ex p er i m en t ac i n

Rc1 1P 1PC1 1PC2

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Fuente: Tabla 04 de resultados del primer grupo experimental.


Elaboracin: Propia
Interpretacin: El ratn control present escasa variacin de niveles leucocitarios,
el ratn que fue intoxicado con plomo 1P tuvo disminucin de niveles leucocitarios
a lo largo del tiempo, mientras que los ratones a los que se les suministr
carragenato decayeron en sus niveles leucocitarios, pero gracias al carragenato
tuvieron tendencia de ascenso en sus niveles leucocitarios.

TABLA 05: RESULTADOS DEL SEGUNDO GRUPO DE EXPERIMENTACIN

Leucocitos/mm3
Ratn Peso Pre Dosis de con con dosis Post
(g) experimentacin carragenato plomo carragenato experimentacin
diaria
Rc2 67.03 8800 0 8850 8600 8600
P2 86.79 9700 0 3900 3600 3400
2PC1 94.82 10200 0.1 ml 5100 7800 7900
2PC2 72.31 9200 0.5 ml 3600 4800 4800

Fuente: Resultados de leucograma del segundo grupo experimental de cepa


balb/c
Elaboracin: Propia

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DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

GRFICO 05: COMPARACIN ENTRE EL LEUCOGRAMA INICIAL Y DURANTE LA ADMINISTRACIN DE PLOMO DEL GRUPO 1
12000
10200
9700
10000 9200
88008850
8000

6000 5100
m
s/m3

3900 3600
cito

4000
e
Luco

2000

0
Rc2 P2 2PC1 2PC2
Pre experimentacin con plomo

Fuente: Tabla 05 de resultados del segundo grupo experimental.


Elaboracin: Propia

GRFICO 06: COMPARACIN ENTRE EL LEUCOGRAMA CON ADMINISTRACION DE PLOMO Y DURANTE LA ADMINISTRACIN CARRAGENATO DEL GRUPO 1
10000
88508600
9000
7800
8000
7000
6000 5100 4800
5000
39003600
m3

4000 3600
s
ito/m

3000
e
Luo
cc

2000
1000
0
Rc2 P2 2PC1 2PC2
con plomo con dosis carragenato

Fuente: Tabla 05 de resultados del segundo grupo experimental.


Elaboracin: Propia

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

GRFICO 07: COMPARACION ENTRE LA DOSIS DE 0.1ML Y 0.5ML POR SU EFICIENCIA DEL GRUPO 1
120.00
100.00 100.00
100.00
98.73 100.00
75.00
80.00
Porcentaje de eficacia

60.00
64.56

40.00

20.00

0.00
con plomo con carragenato Post experimentacin
con 0.1 ml de dosis diaria de carragenato
con 0.5 ml de dosis diaria de carragenato

Fuente: Tabla 05 de resultados del segundo grupo experimental.


Elaboracin: Propia

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

GRAFICO 08: VARIACION DE LEUCOCITOS DE LOS RATONES DURANTE EL PERIODO DE EXPERIMENTACIN


12000

10000

8000

Leucocitos/mm3
6000

4000

2000

0
Pre ex perim ent ac in c on plom o c on dos is c arragenat o Pos t ex peri m ent ac i n

Rc2 P2 2PC1 2PC2

Fuente: Tabla 05 de resultados del segundo grupo experimental.


Elaboracin: Propia

VI. DISCUSIN
Los resultados muestran que la ingesta de plomo por ratones cepa Balb/c
causa algunos cambios en las funciones del sistema inmune; la concentracin de
plomo administrada a los ratones tuvo como efecto la disminucin de leucocitos de
estos, pues en el conteo inicial de leucocitos se obtuvo valores mayores a 9000
leucocitos/mm3 y con la administracin de plomo estos valores disminuyeron
aproximadamente en un 50%; esto se ve explicado por (Rodrguez Daz & col,
2002) al sealar que el plomo acta como inmunomodulador y adems puede
deprimir o estimular a los linfocitos T y B encargados de la respuesta inmune
humoral y celular, lo cual justifica dicha disminucin en los niveles leucocitarios de
los ratones cepa Balb/c. Asimismo, esto tambin lo explica [ CITATION Gon02 \l

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

10250 ] que seala que la exposicin a metales puede desrregular la respuesta


inmunolgica, generando hipersensibilidad o autoinmunidad, siendo capaces
adicionalmente de suprimir los mecanismos de defensa inmune.

La carragenina y los lipopolisacridos actan como estimulantes de la


respuesta del sistema inmunitario[CITATION Gar97 \p 176 \l 10250 ], por esta
razn la administracin de carragenina a los ratones fortaleci su sistema inmune y
por ende aument los niveles leucocitarios de estos despus de haber sido
intoxicados con plomo, esto se evidencia en las grficas 02 y 06. Las algas
marinas como el mococho son ricas en polisacridos que poseen diversos efectos
beneficiosos como actividad inmunoestimulante y prebitica, que los convierten en
compuestos funcionales prometedores y en una buena alternativa a la utilizacin
de antibiticos. () Los efectos fisiolgicos demostrados hasta el momento para el
carragenato son: reparacin de daos intestinales, estimulacin del sistema
inmune de peces. (Peso Echarri & col , 2012). Entonces, de acuerdo con lo
descrito por los autores antes mencionados se puede decir que, al ser un
polisacrido, la carragenina induce la formacin de anticuerpos (macrfagos) que
potencian la respuesta inmunitaria de los ratones.
La Carragenina, por otra parte, es una sustancia inflamatoria (Vitalone & col,
2000), pues en diversos trabajos de investigacin se utiliza este compuesto como
un inductor a la inflamacin, proceso que tambin requiere la intervencin del
sistema inmune. Autores como [ CITATION Zaa12 \l 10250 ] utilizaron 0.5 ml como
dosis de inflamacin en ratones, por lo que la dosis de 0.1 ml tuvo mayor eficiencia
que la de 0.5 ml como se muestra en las grficas 3 y 7, pues la dosis de 0.1 ml
alcanz una eficiencia mxima de 37.5%; mientras que, la dosis de 0.5 ml alcanz
una eficiencia mxima de 25%.
La carragenina es un betaglucano, el cual la produccin de macrfagos,
neutrfilos, monocitos y clulas dentrticas (clulas especializadas caractersticas
del sistema inmunitario de los mamferos) modulando la respuesta inmune y
potenciando adems la fagocitosis[ CITATION Rev17 \l 10250 ].

VII. CONCLUSIONES
Se extrajo el carragenato a partir de mococho, para ser utilizado como
inmunopotenciador frente al efecto inmunomodulador negativo del plomo.

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Se realiz recuento de leucocitos, antes y despus de la administracin de


plomo y despus de la administracin de carragenato y se pudo observar
que el plomo redujo significativamente el nmero de leucocitos/mm 3, pero el
efecto inmunopotenciador de carragenato estimul el incremento de estos.
Se observ que la dosis ms eficiente de carragenato fue de 0.1 ml, ya que
logr alcanzar mayor eficiencia que la dosis de 0.5 ml.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

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IX. ANEXOS

Ilustracin 1: Ratones Cepa/Balb. c

Ilustracin 2: Pesado de los ratones Cepa/Balb.c

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


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DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 3: Rotulacin para la diferenciacin y separacin de los grupos a estudiar.

Ilustracin 4: Extraccin de sangre de los ratones Cepa/Balb.c

Ilustracin 5: Preparado de la cmara de N Neubauer

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
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Ilustracin 7: Recuento de Leucocitos.

Ilustracin 8: Lavado del Mococho.para la extraccin de la carragenina

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 9: Seleccin del mococho

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Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 10: Colocar hervir el mococho

Ilustracin 11: Agregar Hidrxido de sodio antes de hervir

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 12: Colar el mococho para su posterior conservacin

Ilustracin 13: Refrigeracin del mococho

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

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EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 13: Extraccin de la carragenina

Ilustracin 14: Obtencin de la carragenina

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

pg. 36
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 15: Preparacin para inyectar los 0.1ml y 0.5ml de carragenina

Ilustracin 16: Inyeccin de la carragenina al ratn

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

pg. 37
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO
DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON Pb.

Ilustracin 17: Recuento de leucocitos post-experimentacin

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui Garca, J.;


Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.

pg. 38

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