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Estudo sobre a reproduo de mamferos marinhos em cativeiro.

As caractersticas endocrinolgicas reprodutivas de beluga, orca, foca manchada e golfinho de nariz de


garrafa foram avaliadas e utilizadas em conjunto com pesquisa reprodutiva aplicada para melhorar os
programas de reproduo em cativeiro. Os resultados de 8 y de determinao de progesterona no soro
quinzenal em uma bluga femea indicaram que a maturidade sexual ocorreu aproximadamente aos 13
anos, dois a sete ciclos de estro, com durao de 37 +/- 3,9 dias, por ano, comeou em abril a maio de
cada ano. A temperatura retal foi positivamente correlacionada com os nveis sricos de progesterona e
negativamente associada ao estro comportamental. Em cinco casos de gravidez de duas fmeas orcas, foi
encontrada relao positiva entre a concentrao srica de progesterona e a temperatura durante o
primeiro perodo de 18 meses de gestao. N as partos normais (n = 4), a temperatura retal diminuiu 0,8 C
abaixo da temperatura retal mdia durante a gravidez. A maturidade sexual das orcas ocorreu aos nove
anos. A anticoncepo anual nas focas manchadas de cativeiro em monoestral (n = 10) utilizando uma
dose nica do progestagnico (proligestone (TM), 5 ou 10 mg / kg sc) foi alcanada em 94% (33/35) foi
alcanada em 94% (33/35) das tentativas em 5 anos quando o hormnio foi administrado dois meses antes
da poca de reproduo. Os ensaios de inseminao artificial (n = 4) foram realizados em golfinhos nariz-
de-garrafa (n = 3) usando smen fresco e congelado. A sincronizao do estro usando regumate (27 dias)
resultou em ovulao ocorrendo 19 a 24 dias aps a retirada. A concepo foi confirmada em 75% das
tentativas, com duas fmeas parindo com sucesso.

Os golfinhos domesticados em aqurios japoneses comearam pela primeira vez na dcada de 1950, e
apenas recentemente a rea de promoo da criao em cativeiro chegou. Pesquisas tradicionais com
mamferos marinhos no Japo vieram da anlise post mortem de animais coletados durante operaes de
caa baleia. No entanto, muitas perguntas sobre biologia e fisiologia desses animais no podem ser
aprendidas usando esses mtodos. Como resultado, dada maior nfase ao uso de animais cativos para
programas de pesquisa no-invasivos. A utilizao de colnias cativas de espcies marinhas tem sido
possvel determinar taxas de crescimento,maturidade sexuais, perodo de reproduo, comportamento
copulatrio, perodo de gestao, trabalho, parentalidade e desmame. A estao de reproduo e o ciclo
estral de golfinhos-do-nariz-de garrafa femeas foram descritos com estudos endcrinos de animais
cativos, e verificou-se que alguns golfinhos so ovuladores espontneos porque ocorreu ovulao sem
machos. Analisando as concentraes sricas de progesterona, diagnstico precoce da gravidez. Para o
golfinho macho, a sazonalidade da espermatognese e as caractersticas do esperma foram descritas
atravs da anlise de mudanas anuais na produo de espermatozides e excreo de testosterona.
Para focdeos, foi demonstrado que eles tm um perodo de implantao retardada, que so regulados pelo
foto perodo e podem ser afetados por variaes nutricionais. Alm disso, logo aps o parto, a foca
manchada retorna rapidamente ao estro, e assim d origem mesma poca todos os anos. As tentativas
de inseminao artificial com golfinhos nariz de garrafa no aqurio foram primeiro tentadas em conjunto
com protocolos de induo de ovulao usando PMSG e hCG. Apesar dessas tentativas iniciais, os
primeiros partos bem sucedidos aps ocorrem at 25 anos depois, quando um golfinho indo-pacfico em
Hong Kong e uma orca nos EUA nasceu em 2001. Os objetivos deste estudo foram avaliar a
endocrinologia reprodutiva de quatro espcimes de mamferos marinhos em cativeiro no Kamogawa Sea
World (Kamogawa, Chiba): beluga, orca, golfinho em cetceos e foca manchada em focdeos e avaliou a
aplicao de ferramentas de gesto reprodutiva , inseminao artificial e contracepo, para o
desenvolvimento de programas de melhoramento.

Amostragem de Sangue, Anlise Endcrina e Medio de Temperatura Retal


Essa amostra de sangue da bluga, orcaa, golfinho nariz-de-garrafa foi coletada voluntariamente da cauda
entre 0830 e 0900h a cada 2 a 4 semanas. A medio da progesterona foi solicitada a SANRITSU,
(CHIBA). A concentrao srica de progesterona foi determinada pelo sistema de radioimunoensaio
(RIA) com radioligandos marcados com l. As focas manchadas foram colocados em uma gaiola de aperto
para restrio em um tempo no especificado e as amostras de sangue foram coletadas da rede vascular do
membro traseiro. As amostras das foca manchadas foram determinadas por EIA na Nippon Veterinary
and Life Sciences University [21]. A temperatura retal para beluga e orca foi medida voluntariamente
com um termmetro eletrnico (Terumo Finer CTM-303, Terumo, Tquio) inserindo uma sonda (PK-
K04, faixa de temperatura: 0-50C)

Ciclo Estral e Mudana de Temperatura Corporal em Beluga Femea


Uma fmea beluga de okhotsk (nome: Marsha, brouught em 24 de outubro de 1990, comprimento de 280
cm, pesando 418 kg, estimado nascimento em 1987 [22]) foi utilizado para examinar as alteraes nas
concentraes de progesterona srica e temperatura corporal durante os ciclos estrais dos anos de 1996 a
2003. Neste perodo de tempo, Marsha foi mantida com dois machos de Hudson Bay of Canada e
Okhotsk mar. As concentraes sricas de progesterona permaneceram baixas (0,1-1,3 ng / ml) de janeiro
de 1996 a maro de 2000 e aumentaram em 2000 a 6,4 ng / ml, quando se considerou que tinha atingido a
maturidade sexual aos 13 anos ( comprimento 382 cm, peso 635 kg). Fig. 1. A mudana cclica nas
concentraes sricas de progesterona (intervalo de 0,1 a 15,7 ng / ml) ocorreu uma vez em maio de 2000,
quatro vezes de abril a julho de 2001, sete vezes de abril a novembro de 2002 e duas vezes de Abril a
junho de 2003. Estes dados sugerem que a bluga pode ser sazonalmente poliestrus. Uma correlao
positiva foi observada durante 7 estrus entre temperatura e nveis de progesterona em 2002 (fig. 2). A
temperatura corporal mudou de 34,9 - 35,9 C. Todos comportamentos de acasalamento ocorreram durante
a fase de baixa temperatura, com a temperatura corporal aumentando 11,0 + - 1,5 dias aps os
comportamentos de acasalamento. Uma diferena significativa foi encontrada entre a temperatura do dia
em que os comportamentos de acasalamento foram observados e a temperatura mais alta medida (FIG 3).
O ciclo estral, conforme definido pelo nmero de dias entre os comportamentos de acasalamento foi de
36,7 + -3,9 dias (n = 6). Estes resultados sugerem que, semelhante aos seres humanos [23], a progesterona
pode afetar a temperatura do corpo e, portanto, o ciclo do ovrio de beluga pode ser determinado medindo
a temperatura corporal. Esses resultados demonstram uma maneira simples, rpida e barata de mapear a
atividade do estro de beluga e pode ser uma ferramenta prtica para o manejo da criao de beluga femea
em cativeiro

Perodo de gravidez,Temperatura corporal pre parto e concentrao de soro de pregesterona da


orca
Os perfis individuais para as duas baleias-assassinas (nome: Maggie, Stella) foram mostrados na Tabela
1. Durante o perodo de amostragem, foram monitoradas cinco gravidezes de duas fmeas de 1997 a
2003. Alteraes na temperatura corporal e nos nveis sricos de pregesterona durante a gravidez foram
mostradas nos figos 4 e 5. Os nveis sricos de progesterona durante a gravidez, na diminuiu lentamente
(fase decrescente) at o parto. A correlao positiva entre os nveis sricos de progesterona e a
temperatura corporal s foi observada durante a fase crescente da gravidez oral (fig. 6). A gestao durou
545 + - 3,7 dias (n = 4) e com a temperatura retal 5 dias antes do parto, tornando-se 0,3 C inferior
temperatura retal mdia durante a gravidez. Alm disso, a temperatura no dia anterior ao parto diminuiu
0,8 C em comparao com a temperatura mdia durante a gravidez. Para Maggie e Stella, as primeiras
concentraes sricas significativas de progesterona indicadoras de maturidade sexual ocorreram aos 9
anos. Christensen (1984) relatou que as orcas do Atlntico norte selvagem estavam grvidas a partir dos
seis e oito anos [25]. Alm disso, Robeck ET al. (1993) descobriram que o primeiro ciclo estral de seis
orcas de cativeiro do Atlntico Norte tinha 8-9 anos [26]. Nossas fmeas mostraram idades semelhantes
para a maturidade sexual conforme descrito nestas baleias silvestres e cativas. A fmea Stella fez trs
partos normais que duraram de 22 a 25 meses durante o perodo de amostragem. Aps o primeiro e
segundo parto, para a 2 e 3 gravidez, durante o primeiro ciclo de estro aps 10-20 meses de anestro.
Este perodo de anestro ocorreu durante o perodo de enfermagem e foi considerado um estrognio
induzido pela lactao (amamentao). O anestro de lactao pensado para ser devido supresso da
funo hipotlamo-hipfise-ovrio [27,28]. O fenmeno aqui descrito, onde a temperatura do corpo
diminui antes do parto, indica que as medidas da temperatura corporal podem ser teis para a predio do
parto, semelhante a outras espcies domsticas [29-34]. de notar que esta diminuio da temperatura
corporal da me antes do parto pode ser um mecanismo importante no processo de parto normal nesta
espcie. O presente estudo foi o primeiro relatrio a detalhar as mudanas na temperatura corporal de
orcas grvidas durante a gravidez e o parto.

Contracepo de foca manchada com agente sinttico de progesterona


As focas geralmente se reproduzem facilmente em cativeiro, portanto, para fins de gerenciamento
espacial e gentico, o programa de criao em Kamogawa Sea World exigiu o desenvolvimento de um
plano contraceptivo. Foram utilizados dez focas manchados femeas e cruzamentos de focas e focas de
porto (tabela 2) e proligestone (PRG) [35,36] utilizado neste experimento foi um agente de preveno de
estro comercial para ces (Kobinan, Sankyo, Tquio). Foram realizados 35 ensaios em 10 animais ao
longo de cinco anos. Destes ensaios, 32 animais usaram 5 mg / kg PRG e os outros 3 animais usaram 10
mg / kg. O PRG foi administrado em um ms antes do tempo estimado de incio da poca de reproduo,
em 1994, 1995 e 1996. Para o estro em 1997 e 1999, o PRG foi administrado em dezembro do ano
anterior, 1996 e 1998, respectivamente, que foi de dois meses antes do tempo estimado de incio da poca
de reproduo.
As concentraes sricas de progesterona nos animais grvidas e no gravidas no tratadas foram
mostradas na Fig. 8. As concentraes sricas de progesterona em grupos grvidas foram 1,5-3,5 ng / ml
em abril, e aumentaram depois e o nvel mdio foi de 8,9 +/- 1,1 ng / ml em junho, e apresentou um alto
nvel de 7.1-18.2 ng / ml entre outubro e imediatamente antes do parto. O horrio do nvel srico de
progesterona em animais no grvidos foi semelhante ao de gravidez entre abril e julho, mas o nvel aps
outubro foi de 0,1-2,6 ng / ml com um nvel mdio de 0,8 +/- 0,5 ng / ml . Antes da administrao do
PRG, as concentraes de sangue foram de menos de 1,0 ng / ml, confirmando que nenhuma estava
grvida [14, 15]. A determinao do efeito contraceptivo foi feita pela entrega dos animais testados. Os
efeitos contraceptivos foram mostrados na Tabela 3. Entre os 23 ensaios tratados com 5 mg / kg PRG
entre 1994 e 1996, 2 ensaios estavam grvidos e os outros 21 tiveram sucesso na contracepo (91,3%).
Alm disso, a contracepo foi bem sucedida em todos os 12 ensaios (100%) tratados com 5 mg / kg PRG
em dezembro. A taxa de sucesso geral de contracepo foi de 94,3%. De 2 animais, em que a
contracepo falhou, um pariu um neonato normal, mas o outro abortou aos seis meses de gestao.
Foi estimado que a razo era o momento da administrao do PRG, mas no a falta de dose. Os efeitos
colaterais no foram observados com o tratamento PRG. As determinaes da supresso da ovulao
foram mostradas na Tabela 4, na qual a ovulao foi determinada a ser suprimida em indivduos cujas
concentraes de progesterona foram inferiores a 1,0 ng / ml entre abril e setembro. Foi relatado que a
taxa de concepo em focas selvagens era quase 100% [37]. Portanto, os resultados deste estudo
demonstram efeitos contraceptivos adequados. Nenhum efeito adverso na fertilidade foi observado
quando uma fmea (N 7) foi capaz de entregar um filhote normal quando a administrao PRG foi
descontinuada.

Sincronizao de Estros e Inseminao Artificial de Golfinho nariz-de-garrafa


Para esta pesquisa, 3 golfinhos nariz de garrafa femeas (tabela 5) foram utilizados em ensaios de
inseminao artificial em 2002 (teste de AI 1) e 2003 (teste de AI 2). Esses golfinhos do sexo feminino
foram mantidas separados dos machos maduros de 4 meses a um ano antes do teste de inseminao
artificial. O agente de progestina sinttico, altenogest (Regu - Mate, Intervet, DE, EUA, 1 ml, contendo
2,2 mg de altenogest) foi administrado por via oral para controle artificial do ciclo estral [38,39].
A prostaglandina F2 alfa (puronarugon F, Upjohn, Tquio, 1 ml contendo 5 mg de Dinoprost) foi
administrada (0,08 mg / kg) a uma femea de Golfinho de nariz de garrafa (nome: Helen, comprimento
301 cm, peso 315 kg, 22 anos) como um experimento preliminar para determinar a dose necessria para
causar lutelise durante o ciclo estral. O efeito luteoltico da prostaglandina F2alfa foi confirmado quando
a concentrao de progesterona no sangue de Helen de 12,9 ng / ml diminuiu acentuadamente para 1,3 ng
/ ml s 8h, depois para 0,6 ng / ml s 24h aps a administrao. No teste de AI 1, os golfinhos de nariz de
garganta foram administrados por via oral com altenogest, 2,2 mg / 50 kg (5-6 ml / indivduo), uma vez
por dia durante 27 dias. O ltimo dia de tratamento com altenogest, cada indivduo foi injetado no
msculo traseiro e uma dose de 25 mg de prostaglandina F2alfa para determinar o perodo de ovulao
assegurado pela funo de lutelise. No teste de AI 2, a fmea foi administrada ao mximo, 2,2 mg / 50
kg (5-6 ml / indivduo), uma vez por dia durante 27 dias sem Prostaglandina F2alfa. O desenvolvimento
folicular ovariano foi monitorado por ultra-sonografia transabdominal (SSD-900, Hispra convexa
eletrnica UST-979-3.5, Aloka, Tquio).
O ultra-som mostrou-se uma ferramenta afetiva para monitorar a atividade folicular nos ovrios [40, 41]
(figura 9). Uma vez que o folculo ovariano crescente foi observado, sua taxa de crescimento poderia ser
determinada e a ovulao confirmada pelo desaparecimento do folculo pr-ovulatrio. O smen fresco ou
congelado foi artificialmente inseminado a cada 12h at a ocorrncia da ovulao (at o folculo pr-
ovulatrio desaparecer). Para o julgamento Slim AI 1, seu folculo pr-ovulatrio apresentou 2,1 cm de
dimetro no dia 23 e a ovulao foi confirmada em 5 de julho de 2002, 24 dias aps a retirada do
regumate. Para os IAs, o smen foi depositado no tero, injetando por um cateter de 6,3 FR, 4 m que
havia sido submetido ao canal de bipsia do endoscpio (figura 10).
A concentrao srica de progesterona aumentou e atingiu 41,8 ng / ml, e um feto de 16 cm de
comprimento foi confirmado pela imagem ultra-sonogrfica durante trs meses de gravidez (Figura 11).
A concentrao srica de progesterona manteve o alto nvel, mesmo depois disso, e um filhote nasceu em
17 de julho de 2003. O perodo de gestao foi de 377 dias.
Norma de AI trail 2, seu folculo pr-ovulatrio apresentou 1,9 cm de dimetro no dia 18 e a ovulao foi
confirmada 19 dias aps a retirada do regumate. Ela foi inseminada artificialmente duas vezes com smen
congelado 10h aps a ovulao em 12 de setembro de 2003.

Um macho nasceu naturalmente em 21 de setembro de 2004. O perodo de gestao foi de 375 dias.
Observou-se que a capacidade fertilizante do vulo diminui de 6 a 12h aps a ovulao, e na maioria das
espcies est ausente depois das 20h [42]. Portanto, importante identificar o momento da ovulao e
injetar espermatozides intrauterinos para garantir a fertilizao. Nesse estudo, o dimetro do folculo foi
medido ao longo do tempo usando o dispositivo de imagem ultra-sonogrfica, e o tempo adequado de
inseminao artificial foi determinado pela identificao de ovulaes. Perda de folculo pr-ovulatrio.
A inseminao artificial uma tcnica importante para preservar a diversidade gentica dos cetceos na
criao em cativeiro. Se os cetceos cativos em todo o mundo so considerados uma populao, ento o
gerenciamento gentico atravs da cooperao internacional s pode ser realizado com essa ferramenta de
criao.