CROMATOGRAFIA GASOSA-CG

CONCEITO

A cromatografia pode ser denominada, como um mtodo fsico-qumico de separao,na qual os componentes de uma amostra a serem separados,so
particionados em duas fases:uma estacionria (que fica impregnado na coluna e pode ser um slido ou um lquido),e a outra uma fase mvel(um gs de
arraste inerte),que flui atravs da primeira.

APLICAES DA TCNICA

As aplicaes da cromatografia gasosa so inmeras.Talvez a sua maior seja na anlise de produtos derivados do petrleo- HIDROCARBONETOS- gases
e lquidos.
A aplicao desta tcnica est limitada componentes que possuem pesos moleculares abaixo de 2000 pois, necessrio que estes vaporizem-se
totalmente no injetor , para que a eluio e separao seja eficiente ao passar na coluna, e que seja detectado , sem condensar no detector.

TERMOS TCNICOS MAIS USADOS

Para se trabalhar com cromatografia ou outra tcnica de anlise instrumental, necessrio que conheamos,pelo menos , os termos tcnicos mais
empregados,pois nos ajudar na hora em que precisarmos da opinio de outro profissional,quando tivermos uma dvida ou problema.Veja abaixo uma
tabela que poder ajud-lo.
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TERMOS TCNICOS e SIGNIFICADO

TEMPO DE RETENO- Tempo no qual o componente permanece na coluna desde o momento da eluio at, a sua eluio .

QMD- Quantidade mnima detectvel do componente num detector.

SANGRAMENTO DA COLUNA- Perda de fase estacionria da coluna devido, normalmente, altas temperaturas de operao.

SEPTO- Pea usada na cabea do injetor, geralmente feita de silicone ou de teflon. Ele substitudo , normalmente quando a rea de uma amostra , no
cromatograma , diminui. Se houver uma frequncia muito grande de injees, dever ter uma troca programada.

GS DE ARRASTE- a denominao dada ao gs responsvel por levar a amostra , j vaporizada , atravs da coluna, at o detector ou detectores.

GS DE QUEIMA- o gs responsvel pela queima da substncia. Exemplo: hidrognio e o ar sinttico.

PICO FANTASMA- Pico indesejvel que aparece no cromatograma de uma amostra.Pode ser oriundo da amostra ,da coluna ou um problema de
deteco.

MICROLITRO- Unidade de volume que se trabalha na cromatografia que corresponde a 1/1000 litros.

MICROSERINGA- Seringa graduada em microlitros utilizada para injetar as amostras lquidas ou gasosas.

FASE MVEL- o gs de arraste que conduz a amostra para a coluna.

FASE ESTACIONRIA- Um material slido ou lquido , que preenche as colunas , responsveis pela separao ou no de um componente, o qual
depender de sua natureza qumica.

SUPORTE DA FASE- Fase estacionria slida inerte, que tem a finalidade de conter uma fase estacionria lquida e que no participa quimicamente da
separao de nenhum componente da amostra.

LINHA DE BASE- a linha gerada no grfico , quando da passagem apenas do gs de arraste no detector. O ideal que seja uma linha reta.

CROMATOGRAMA- Grfico gerado pelo integrador ou computador, que normalmente apresenta os picos dos componentes, suas reas, as suas
concentraes e o tempo de reteno de cada um.

RUDOS- So sinais observados na linha de base de uma amostra no seu cromatograma

COMPOSTO NI- Componente de uma amostra que ainda no foi identificado.

PPM- Concentrao de um componente em partes por milho.Um porcento equivale a 10000 ppm. Ela expressa pequenas quantidades de impurezas de
uma amostra.

CLCULO EM REA PORCENTO- o clculo da concentrao de todos componentes de uma amostra , relativo ao somatrio da rea total destes.

FATOR DE RESPOSTA- o resultado da diviso da rea integrada de um componente dividida por sua respectiva concentrao.Este clculo usado na
Padronizao Externa.

ELUIO DO PICO- a sada,o aparecimento do pico, aps a passagem por uma coluna, de um dado componente de uma amostra.

VAZO DOS GASES - a razo do volume de um gs, que passa atravs de um sistema cromatogrfico ,por unidade de tempo ,expressa geralmente
em mililitros por minuto ( ml / min ).

RAZO DO SPLIT- a razo do volume de injeo de uma amostra pelo volume de diluio ,que acontece dentro de um injetor.Ex: 1/100 ,ou seja,1ul
da amostra diludos em 100ul de gs.

COLUNA EMPACOTADA- o tipo mais comum , quando no se precisa determinar pequenas quantidades de impurezas (ex: ppm)de um componente de
uma amostra. feita, geralmente,de ao inox , com o dimetro interno de 1/8 de polegadas e um comprimento a partir de 3m.Pode ser confeccionada
em laboratrio.

COLUNA CAPILAR- a coluna mais eficiente para se trabalhar. Com ela possvel analisar mais de 100 componentes de uma amostras se a fase usada
for adequada. feita de slica fundida e bastante frgil.Trabalha-se com pequenos volumes de amostra - menores que 1ul. Seu dimetro interno da
ordem de micras(Ex:coluna de FFAP DE 50m de comprimento e o,22um de dimetro.

COLUNA MEGABORE- Colunas com caractersticas fsicas intermedirias entre as empacotadas e as capilares.

COLUNA DE SACRIFCIO- Coluna muito utilizada para conter partculas ou produtos que no vaporizem, conectadas no incio das colunas empacotadas ,
sada do injetor.So fabricadas com uma fase estacionria inerte.

COLUNAS

A coluna cromatogrfica , um tubo com um dimetro interno , que varia de 1/4 1/8 de polegadas ,para colunas empacotadas e de 0.25mm
0.53mm para colunas capilares.A coluna o local onde ocorre a separao dos componentes de uma amostra. A escolha do tipo de coluna a ser usada ,
vai depender do que se deseja identificar ou quantificar.

As colunas so responsveis pela separao dos componentes de uma amostra. dependendo da quantidade do componente que se deseja quantificar
ou identificar, existem dois tipos mais comuns de colunas: a coluna empacotada e a capilar.
A coluna empacotada usada para a separao de componentes com grandes concentraes e suporta a injeo de um volume maior da amostra que
a capilar devido ao seu dimetro e quantidade de fase estacionria.

As colunas capilares separam um maior nmero de componentes que a empacotada, por possuir um comprimento que pode chegar a mais de 50m,
enquanto a empacotada , por possuir um dimetro maior,geralmente no operada com um comprimento maior que 15m.O volume de amostra
injetado na coluna capilar dever ser o menor possvel , para evitar a saturao da mesma.

DETECTORES

Os detectores so os responsveis pela deteco dos componentes de uma amostra. Eles medem e indicam a variao da composio do gs de arraste
ao sair da coluna cromatogrfica atravs de um sinal eltrico.

Os detectores mais usados so os seguintes:

DCT (detector de condutividade trmica)
DIC( detector de ionizao de chama)
DCE ( detector de captura de eltrons).

Podem ser destrutivos -ex: DIC ( detector de ionizao de chama ) , ou no destrutivos ex: DCT ( detector de condutividade trmica ).

DCT capaz de detectar gua numa amostra.

DIC responde pela massa do componente.

A escolha do detetor importante e depende do material a ser analisado.

As principais caractersticas ,que devem ser consideradas so as seguintes:

seletividade
sensibilidade
resposta
rudo/quantidade mnima detectvel
linearidade
INJETORES

O injetor um bloco metlico com aquecimento controlado, cuja finalidade vaporizar a amostra e de suma importncia na realizao de uma anlise
cromatogrfica.

Os injetores so muito importantes para realizar uma anlise cromatogrfica.A temperatura de operao deste, deve ser suficiente para que a mostra
seja vaporizada , antes de entrar na coluna. Normalmente programa-se este ,com uma temperatura 50oC maior , considerando-se o componente da
amostra com o maior ponto de ebulio ou seja , a menos voltil.
Na parte superior do injetor, encontra-se o septo , que um pequeno disco de borracha siliconizada, cuja finalidade isolar o sistema cromatogrfico do
meio ambiente.

Existem diversos tipos de injetores que so utilizados sendo que, a sua escolha dever ser em funo do tipo de coluna ser utilizada : colunas
empacotadas , capilares ou megabore,conforme os componentes dos cromatgrafos.

Existem os seguintes tipos ,mais comuns: On column , Flash e Megabore(com adaptadores).

Para colunas capilares podem ser usados : Split/Splitless , Spi , On column frio e Low mass .Um exemplo, para uso em colunas capilares , o injetor
"SPLIT",que trabalham com vlvulas acionadas por "RELS". Injetamos um microlito de amostra porm, este diludo conforme a razo do "SPLIT".

ON COLUMN

SPLIT
O CROMATGRAFO

a denominao dada ao aparelho que realiza as anlises cromatogrficas.Um cromatgrafo ,basicamente,consiste nas seguintes partes e suas
respectivas finalidades:

Cilindro de gs de arraste: Armazenar os gases altas presses. A unidade de presso nos cilindros KgF/cm.

Vlvulas de gases:Controlar a presso de sada dos gases no cilindro.

Manmetros: Indicar a presso interna e presso de sada dos gases do cilindro.

Injetor: Vaporizar a amostra antes de entrar na coluna.

Coluna: o corao do cromatgrafo. nela onde ocorre a separao dos componentes de uma amostra.

Detector: o olho do cromatgrafo. o responsvel pela deteco dos componentes de uma amostra.

Integrador ou computador: o responsvel pela integrao dos picos,que geraro um grfico denominado cromatograma.

CONSTRUO DA CURVA DE CALIBRAO

MTODO DA REGRESSO LINEAR COM O PROGRAMA EXCEL

Exemplo de uma Seqncia da construo:

1) digitar em duas colunas paralelas os valores das reas e das respectivas concentraes dos padres.Veja a tabela abaixo.
2) com a utilizao do mouse, selecionar todos as colunas da tabela elaborada.

3) clicar no cone de construo de grficos no EXCEL.

4) selecionar o tipo disperso , o primeiro subtipo que compara pares de valores e clic com o mouse em avanar duas vezes.

5) digitar em ttulo do grfico : CURVA DE CALIBRAO DO METANOL

6) digitar em eixo dos valores(x): REA

7) digitar em eixo dos valores (y): CONCENTRAO%, e em seguida clic em avanar ,em seguida clic com o mouse em concluir.

8) expandir a rea do grfico ,para uma melhor visualizao, atravs do arraste do mouse.

9) com a ajuda do mouse, clic num dos pontos da curva no grfico.Todos os pontos da curva ficaro amarelos.

10) clic em grfico na barra superior e na janela que abre, clic em adicionar linhas de tendncia. Na tela que abre , selecionar a opo linear.

11) clic na tela adicionar linhas de tendncia, em opes. Marque os campos: definir interseo =0 , exibir equao no grfico e exibir valor de R-
quadrado no grfico. Clic em OK. Para um melhor destaque dos valores de Y e R2, marque a rea destes e clic em cor do preenchimento (selecione a
sua cor) na barra superior do EXCEL.
12) Calcular a concentrao do Metanol na amostra.

CLCULO DA CONCENTRAO DO METANOL

Clculo-1

Abaixo encontramos o clculo para determinar a concentrao de metanol de uma amostra desconhecida , a partir da equao da reta obtida no grfico
acima.Veja abaixo a frmula de clculo da concentrao de metanol.

A concentrao do metanol da amostra com relao a uma rea obtida no cromatograma de 167000.

%metanol = rea*0,0000073573

%metanol = 167000 *0,0000073504= 1,2275%

OBS: O valor idntico ao encontrado no mtodo da absortividade.

Clculo-2

Atravs do clculo do fator de reposta do padro em cada concentrao e utilizando a mdia entre eles, obtemos a seguinte concentrao de metanol na
amostra:

FATOR DE RESPOSTA .= REA OBTIDA NO CROMATOGRAMA

>>>>>>>>>>>>>>>>>CONCENTRAO DE CADA PADRO

MDIA DOS FATORES 135127,5

%metanol = 167000 /135127,5= 1,2357%

CONCLUSO

Os valores obtidos nos dois modos de clculos, so muito prximos. A razo entre o valor do clculo-1 e o clculo-2 :

Razo do % Clculo-1 / % Clculo-2 = 1,2275 / 1,2357

Razo= 0,9934

CALIBRAO POR PADRONIZAO EXTERNA

o mtodo mais usado na cromatografia gasosa. O maior problema encontrado a reprodutibilidade das injees pois, o valor da rea de um
componente do padro, de uma sequncia de injees,no dever variar mais que 5% entre elas.

A calibrao por padronizao externa consiste em:

1- Elaborar um padro cromatogrfico

2- Injetar pelo menos 5 vezes este padro , com um volume fixo.

3- Obter a mdia das reas de cada componente do padro.

4- Dividir as mdias das reas de cada componente pelas suas respectivas concentraes. Desta forma, obtm-se o Fator de Resposta de cada um.

CLCULO DO FATOR DE RESPOSTA DE UM COMPONENTE

Abaixo encontramos o clculo do fator de resposta de um dado componente resultante da razo da rea integrada pelo integrador/computador , pela
concentrao do componente no padro.As purezas de cada componente do padro,neste exemplo, foram consideradas iguais 100%. Veja abaixo a
frmula de clculo do fator de resposta de um componente.

FATOR DE RESPOSTA = REA OBTIDA NO CROMATOGRAMA /CONCENTRAO DO COMPONENTE

TABELA-4 : Concentrao dos componentes e fatores de respostas dos componentes no padro.

CLCULO DA CONCENTRAO DOS COMPONENTES DE UMA AMOSTRA DESCONHECIDA

Abaixo encontramos o clculo para determinar a concentrao de cada componente de uma amostra desconhecida que o resultado das reas
individuais de cada componente , divididas pelos seus respectivos fatores de respostas .

Veja abaixo a frmula de clculo da concentrao de um componente.

CONCENTRAO DO COMPONENTE = REA DO COMPONENTE NO CROMATOGRAMA /FATOR DE RESPOSTA

TABELA-2 : Concentrao dos componentes de uma amostra desconhecida:

A PREPARAO DE UM PADRO CROMATOGRFICO

Para se trabalhar com cromatografia necessrio ( existem excees ) que faamos uma calibrao com um padro de concentraes de componentes
prximas as da amostra que iremos analisar.A preparao de um padro cromatogrfico no tarefa difcil de se realizar porm, necessrio que antes
da preparao, conheamos algumas propriedades dos componentes que faro parte deste bem como , para definir a sua composio ,a origem da
amostra que ser analisada.A volatilidade dos componentes deve ser levada em considerao pois, o componente mais voltil dever ser o ltimo a ser
adicionado no padro , para evitar ao mximo a perda deste, durante o seu manuseio e insero no recipiente que ser usado para armazen-lo.

O GRFICO GERADO - O CROMATOGRAMA

Abaixo ns encontramos um grfico gerado aps a separao dos componentes do BUTADIENO 1.3 , numa coluna capilar de Al2O3 com 50m de
comprimento.
GASES: MEDIDA DA VAZO e TIPOS

Os gasesso responsveis por conduzir a amostra, j vaporizada , atravs da coluna , at o detetor.O gs deve ser inerte, para evitar interaes com a
amostra ou solvente , ser puro , de baixo custo e efetuar a separao desejada no menor tempode anlise possvel. A pureza destes muito importante
na cromatografia gasosa. A quantidade de gua afeta a deteco dos componentes.Devero ser instalados filtros para gases na entrada dos
cromatgrafos como: peneira molecular para absorver indesejveis no hidrognio e por exemplo , alumina para absorver gua do ar sinttico quando
este for oriundo de outras fontes (ex: compressor de ar ) sem pureza informada.Os cilindros dos gases ,so facilmente identificados pela cor usada na
sua pintura.

veja a seguir alguns gases usados e suas respectivas cores , entre parnteses.

OS GASES MAIS UTILIZADOS E SUAS RESPECTIVAS FUNES SO:

Hidrognio(AMARELO): o gs combustvel do cromatgrafo gasoso, usado nos detectores que destroem a amostra(ex IC- detector de
ionizao de chama) e tambm utilizado como gs de arraste nos detectores de condutividade trmica.

Nitrognio(CINZA): utilizado como gs de arraste no detectores"DIC" e "DCT"

Ar sinttico(CREME): usado como gs de queima nos detectores destrutivos ( DIC ).Sua composio de aproximadamente 21% de O2 , 78% de
N2 e 1% de outros gases. com pureza cromatogrfica a sua umidade da ordem de 5 ppm de gua.

Argnio(MARRON):Tem a mesma finalidade que o Hlio, como citado acima, porm, este mais barato

Hlio(LARANJA): o gs mais caro que se encontra no Brasil. usado como gs de arraste quando necessitamos analisar por exemplo, H2 em gases
hidrocarbonetos utilizando-se um detector de condutividade trmica( DCT ), ao invs do H2 comumente usado( mais barato ).

MEDIO DA VAZO DOS GASES

Para que ocorra a separao dos componentes de uma amostra, necessrio que as vazes dos gases sejam ajustadas.Este ajuste feito com o auxlio
de um aparelho chamado de BOLHMETRO.

Estes bolhmetros podem ser de dois tipos.Os mais usados so o digital e o de coluna.

Exemplo de clculo num bolhmetro de coluna: para a medio da vazo de 20ml/min , num volume escolhido de 10ml , o tempo de escoamento do
gs ser de 30s. Confira o resultado,utilizando a frmula abaixo.
DIGITAL

COLUNA

Para se preparar de um padro cromatogrfico necessitamos realizar os seguintes passos:

1) selecionar os reagentes que faro parte do padro com suas respectivas purezas conhecidas.

2) selecionar os materiais e equipamentos que sero usados: seringas,balana analtica,papel absorvente,e o recipiente onde ser preparado o padro
(frasco ou cilindro,se for o caso).Todo o material utilizado dever estar limpo com detergentes ou com soluo sulfocrmica , para que todo material
orgnico seja eliminado e,aps a lavagem,secar em estufa 100oC POR 1 hora.

3) Com base na possvel concentrao dos componentes da amostra, calcular as massas que devero ser pesadas.

4) Adicionar os padres seguindo a ordem crescente de suas volatilidades pesando os reagentes na seguinte ordem: 1-etanol (nesse caso o solvente
do padro), 2)isopropanol, 3)metanol e 4)o aldedo actico.

5) Guardar o padro em um lugar refrigerado ,de preferncia na freezer,para evitar que este seja alterado por perda do(s) componente(s) mais voltil.

TABELA-1 : Concentrao terica dos componentes e massas a adicionar no padro

TABELA-2 : Concentrao terica dos componentes e massas adicionadas no padro

TABELA-3 : Concentrao real dos componentes considerando as suas purezas: