INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DO

RIO GRANDE DO NORTE

WENDY DE OLIVEIRA NUNES

EXTRAO E CARACTERIZAO QUMICA DE BIOPOLMEROS DA

MACROALGA Gracilaria caudata COLETADA EM MACAU/RN

MACAU-RN

Junho/2017
 WENDY DE OLIVEIRA NUNES

EXTRAO E CARACTERIZAO QUMICA DE BIOPOLMEROS DA

MACROALGA Gracilaria caudata COLETADA EM MACAU/RN

Relatrio tcnico cientfico apresentado

ao curso Tcnico de Qumica do
Instituto Federal de Educao, Cincia e
Tecnologia do Rio Grande do Norte, em
cumprimento s exigncias legais como
requisito parcial obteno do ttulo de
Tcnica em Qumica.

Orientadora: Ma Sara Lima Cordeiro

MACAU-RN

Junho/2017
 WENDY DE OLIVEIRA NUNES

Relatrio de Pesquisa intitulado EXTRAO E CARACTERIZAO

QUMICA DE BIOPOLMEROS DA MACROALGA Gracilaria caudata
COLETADA EM MACAU/RN e submetido Coordenao do Curso como
requisito parcial para obteno do ttulo de Tcnico em Qumica, do Instituto
Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio Grande do Norte Campus
Macau.

Aprovado em 19 de Junho de 2017.

Ma. Sara Lima Cordeiro

Orientadora
Matrcula SIAPE 193567-3

TCC 144
 AGRADECIMENTOS

A Deus, por todo cuidado, amor e consentimento para a realizao deste

trabalho.
Aos meus familiares, pelo amor compartilhado ao longo da vida e durante
os quatro anos do curso tcnico. Em especial, minha me, Jadna, pelos
conselhos, carinho, ateno, pelo exemplo de mulher guerreira e por seu amor
incondicional; minha av materna, Eliene, pelos conselhos e incentivo; minha
irm, Wellen, por me fazer ser mais madura e dar boas risadas; meu irmo,
Jardel, por seu amor (apesar das brigas, rs); minha av paterna, Dilma, por seu
cuidado e ateno; meu av paterno, Jos Nunes, por seu cuidado e por ser
exemplo e incentivo; meu tio paterno, Rumenigge, pelas boas histrias e
cuidado; minha tia paterna, Jackeline, pelo exemplo a ser seguido, incentivo e
carinho; minha prima, Rafaella, pelos conselhos e apoio; minha tia-av, Edna,
pelas oraes e cuidado; e minha madrinha, Rosrio, pelo carinho, cuidado e
apoio. Vocs so pessoas fundamentais em minha vida e estarei com vocs em
todas as situaes, sejam elas boas ou ruins. Muito amor por todos.
As pessoas que me ajudaram a construir este sonho e torcem pelo meu
crescimento. Robson Carlos, por todo amor, amadurecimento, carinho,
compreenso, companheirismo e risadas (muitas) compartilhadas; Anderson,
pelas boas conversas e risadas; Manuelle, pelo exemplo de pessoa que gosta
do que faz e pela amizade que no se acabou apesar da distncia (salsicha com
biscoito); Lineide, por ser amiga e me incentivar. Tudo recproco, amo muito
vocs.
Aos amigos feitos no IFRN Campus Macau. A Turma Samuel Pedro, foi
a base para que, durante os quatro anos de curso, eu me sentisse em casa
enquanto passava quase o dia todo fora dela. Essa turma nica, a nossa unio
e o nosso carinho uns pelos outros indescritvel, mesmo com todos os
estresses e dores de cabea que alguns tiveram mais que outros, no fim das
contas, o amor entre ns o que prevalece. Em especial, agradeo minhas
amigas e amigos mais prximos, Luana, do primeiro dia de aula para o resto da
vida (acredito que no foi coincidncia); Weslla, o corao da TSP; Arthur, o
crebro da TSP e Phelipe, o homem de negcios da TSP. Turma Samuel Pedro,
cada um de seus componentes estar sempre presente em meu corao, amo
vocs.
 A minha orientadora (a melhor de todas), Tcnica de Laboratrio, Sara.
Nossa interao vai alm dos muros do IFRN, alm de minha orientadora, voc
se tornou minha amiga e tem todo o meu carinho. Obrigada pelos ensinamentos
(voc sabe de tudo), pacincia, incentivo e suporte.
A todos os professores do Instituto Federal de Educao, Cincia e
Tecnologia do Rio Grande do Norte (IFRN) que colaboraram para o meu
desenvolvimento, aprendizagem e crescimento profissional. Em especial,
Samuel Pedro e Juliane Lira, respectivamente, padrinho e paraninfa da TSP,
tenho por vocs admirao e muito carinho.
A equipe da Coordenao de Laboratrios. Allena, Dbora, Sara,
Wellington, e os que se encontram em outro campus, Telma e Leandro. Sou
grata pelos ensinamentos e pelo apoio. Ser bolsista desse setor e conviver com
vocs me fez crescer profissionalmente e humanamente.

Aos tcnicos do IFRN Campus Macau, que colaboraram para a

manuteno do Instituto, dessa maneira, me deixando o chamar de casa. Em
especial, as assistentes sociais, Aline e Lvia, com quem tive o prazer de partilhar
a experincia de ser bolsista, pelas multitarefas realizadas em prol de todos os
estudantes e pelo suporte (muito carinho por vocs).
 RESUMO

A Gracilaria caudata uma espcie de macroalga do filo Rodophyta

encontrada em abundncia no litoral da costa branca. Apesar de suas diversas
utilidades nas reas medicinal, farmacutica e cosmtica, na culinria onde
tem seu destaque, disponibilizando seus nutrientes em benefcio da espcie
humana. O presente estudo teve como objetivo a obteno de extratos totais
aquoso e etanlicos da Gracilaria caudata e a caracterizao das biomolculas
que compem estes extratos. Os extratos etanlicos em concentraes de 60%,
80% e 100% de EtOH foram obtidos aps 2 g de p seco da alga ser submetido
a macerao por 24 horas a 4 C em repouso em lcool, em seguida para as
anlises foram feitas diluies de 1:2 e 1:16. O extrato aquoso foi obtido da
macerao em soluo tampo fosfato pH 7,0 de 2 g do p seco da alga por 12
horas sob agitao a temperatura ambiente. A caracterizao das biomolculas
foi feita a partir das dosagens de protenas, carboidratos e lipdeos. O percentual
de protenas foi medido atravs de leitura diferencial em U.V, 260 nm e 280 nm,
e obteve-se 29,8%, 24,6% e 24,8%, para diluio 1:2, alm de 15,7%, 8,1% e
1,6%, da diluio 1:16, das concentraes 60%, 80% e 100% dos extratos
etanlicos, respectivamente; j da extrao aquosa obteve-se 1,6% de protenas
torais em soluo a 1 mg/mL da amostra. A determinao de acares totais foi
realizada atravs do mtodo fenol/cido sulfrico e os teores variaram de 0,2%,
no extrato aquoso a 1mg/mL, a 2,2%, no extrato etanlico a 60%. O percentual
lipdico nas amostras foi determinado pelo mtodo de composio centesimal e,
com a mdia a partir de trs unicatas do extrato, obteve-se o percentual de
0,50% de lipdeos. Esse estudo teve maior rendimento na extrao de protenas
e menor rendimento nas extraes de acares totais e lipdeos em relao aos
outros trabalhos. Dessa forma, as concentraes dos biopolmeros provenientes
da macroalga Gracilaria caudata podem variar de acordo com a metodologia
utilizada para a sua extrao, o que no encobre o grande valor de estudos feitos
visando uma maior aplicao desses organismos nas indstrias alimentcia,
cosmtica e farmacutica.

Palavras-chave: Macroalga vermelha, extrato bruto, acares totais, lipdeos,

protenas.
 LISTA DE ILUSTRAES

Figura 1 Representao grfica da macroalga Gracilaria caudata coletada na

praia de Camapum, Macau/RN 12
Figura 2 Representao esquemtica da metodologia de extrao etanlica
adotada 18
Figura 3 Representao esquemtica da metodologia de extrao aquosa
adotada 19
Figura 4 Representao grfica da curva de glicose padro para acares
totais no mtodo fenol 80%/cido sulfrico. 21
Figura 5 . Determinao do teor de protenas solveis nos extratos etanlicos e
aquoso da alga Gracilaria caudata
24
Figura 6 Teor de aucares totais presentes nos extratos etanlicos e aquoso
da alga Gracilaria caudata
25
Figura 7 Teor de lipdeos totais da matria seca da alga Gracilaria caudata 26
 LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Comparao do teor de protenas obtido aps diferentes tipos de

extrao 28
Tabela 2 Comparao do teor de acares totais obtido aps diferentes tipos
de extrao 29
Tabela 2 Comparao do teor de lipdeos obtido aps diferentes tipos de
extrao 30
 SUMRIO

1 INTRODUO 10

1.1 GRACILARIAS 11

2 OBJETIVOS 14

2.1 OBJETIVO GERAL 14

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS 14

3 MATERIAIS E MTODOS 15

3.1 MATERIAIS 15

3.1.1 Material Biolgico 15

3.1.2 Reagentes 16

3.1.3 Vidrarias e equipamentos 16

3.2 MTODOS 17

3.2.1 Obteno de extratos da alga Gracilaria caudata 17

3.2.1.1 Extrao Etanlica 17

3.2.1.2 Extrao Aquosa 18

3.2.4 Determinao proteica por leitura diferencial em U.V. 20

3.2.5 Determinao de aucares totais 20

3.2.6 Determinao de lipdios por composio centesimal 21

4 RESULTADOS 23

4.1 Protenas 23

4.2 Acares Totais 24

4.3 Lipdeos 25

5 DISCUSSO 27

6 CONCLUSO 31

REFERNCIAS 32
 10

1 INTRODUO

As algas so consideradas responsveis por grande parte do oxignio

disponvel na atmosfera. Elas produzem mais do que o necessrio para realizar suas
funes biolgicas e o excesso de O2 liberado para o meio ambiente (GUEDES,
2015). As algas so seres majoritariamente marinhos, mas, alm de oceanos e rios
de gua doce, elas tambm podem ser encontradas nos solos, rochas e rvores, so
organismos fotossintetizantes e avasculares (no possuem folhas ou razes) (SILVA,
2009).

A diferenciao das macroalgas baseada, principalmente, na sua

pigmentao, podendo ser verdes, marrons ou vermelhas. Esses organismos
eucariontes possuem diversas subclassificaes baseadas na diferena de
pigmentao, as mais importantes so os filos Phaeophyta, Chlorophyta e
Rhodophyta (SILVA, 2009).

As algas marrons tm pelo menos 1500 espcies descobertas e pertencem ao

filo Phaeophyta, os espcimes podem ser encontrados nas guas temperadas,
boreais e polares dentre estes se encontram as algas bentnicas. As algas verdes, do
filo Chlorophyta, so capazes de guardar amido em seus cloroplastos. Dentre as 1700
espcies descobertas, algumas algas esto localizadas em troncos de rvore, solo e
em associaes simbiticas com fungos, protozorios de gua doce, esponjas e
celenterados. As algas vermelhas, do filo Rhodophyta, so organismos
completamente marinhos, encontrados, predominantemente, nas guas quentes e
tropicais e, tambm, em regies frias. Apenas 100 das 4000 a 6000 espcies
estimadas esto em guas doces (SILVA, 2009).

A partir do ano de 2005, a Sociedade Internacional de Protistologistas sugeriu

um novo modelo de categorizao dos seres vivos. Os reinos clssicos (Animalia,
Plantae, Fungi, e Protista) foram reorganizados e substitudos por novos
(Opisthokonta, Amoebozoa, Plantae, Chromalveolata, Rhizaria e Excavata) (ADL et
al., 2015; SIMPSON; ROGER, 2004). De acordo com essas novas categorias, as
algas verdes e vermelhas se encontram no reino Plantae, e as algas marrons no reino
Chromalveolata (CMARA, 2010).
 11

As algas marinhas, em geral, possuem diversas utilidades e benefcios para o

ser humano. Podem estar presentes na alimentao, mostrando-se at dez vezes
mais ricas em minerais (principalmente ferro e clcio) do que os vegetais cultivados
em terra (SA, 2002). Nas algas tambm se encontram protenas que podem ser
igualadas s presentes no ovo; vitaminas, como a B 12, em abundncia na sua
composio; e fibras em maior quantidade do que as que esto nas folhas de alface
e couve (SA, 2002). Devido pouca presena de gorduras e calorias, as algas
marinhas so alimentos apropriados para dietas de emagrecimento (PEREIRA, 2008).

Alm da alimentao, a utilizao das macroalgas pode ser ampliada s reas

medicinal, farmacutica, cosmtica, industrial, de higiene pessoal e domstica. Dentre
as funcionalidades das algas esto o tratamento de doenas, como a anemia e astenia
(fraqueza do organismo) e, tambm, de pessoas em estado ps-operatrio (SA,
2002). Esses organismos detm potencial amplamente pesquisado como
propriedades aceleradoras da atividade cerebral, antirreumticas, anti-inflamatrias,
como tambm so boas para o funcionamento do intestino, viso e nutrio da pele e
mucosas. Na agricultura, estas algas marinhas servem como fertilizantes (PEREIRA,
2008). As algas marinhas tambm so utilizadas na produo de sabonetes e
shampoo, como aditivos especiais para dar caracterizao aos produtos (MOTTA,
2007), filtros solares, cremes dentais (VIDOTTI e ROLLEMBERG, 2004).

1.1 GRACILARIAS

O gnero Gracilaria classificado dentre as algas vermelhas e possui diversas

espcies distribudas por todo o mundo, totalizando cerca de 340 espcies. Estas
macroalgas so bastante utilizadas na alimentao como salada, nas Ilhas do Caribe
elas so comercializadas como musgo marinho, sendo conhecidas por possuir
caractersticas afrodisacas (CALADO et.al, 2014). O gnero Gracilaria tambm
usado para a exportao e extrao ficocolides, como o gar. Solvel em gua, esse
glicano de cadeia longa capaz de modificar alguns aspectos dos alimentos quando
adicionado a eles, como: tempo de prateleira, homogeneidade, suspensividade de
partculas, solidificao de alguns fragmentos e eliminao de fluidos (o soro do
 12

iogurte, por exemplo) (FLORNCIO et.al, 2012). Tambm se obtm dessas

macroalgas outros tipos de ficocolides como as carragenanas. Esses
polissacardeos possuem utilidade s indstrias qumicas, farmacuticas e
alimentcias devido as suas propriedades congelantes, espessantes, estabilizantes,
emulsificante, clarificadoras e de ligamento (PINTO, 2009).

Essas algas vermelhas podem ser encontradas em diferentes regies da costa

brasileira, e a sua grande diversidade observada pela ocorrncia de espcies como
as Gracilarias birdiae, G. caudata, G. domingensis e G. cuneata (OSTROCK, 2014;
QUEIROZ, 2011). No Brasil, elas so comercializadas para obteno do gar e
carragenana. A Gracilaria caudata, objeto de estudo deste trabalho, representada na
figura 1, encontrada de forma abundante na costa brasileira. No Rio Grande do
Norte, a G. caudata foi citada como fonte de biopolmeros, por exemplo, protenas,
carboidratos, lipdeos entre outros, em diversos estudos (REBOUAS, 2013; COSTA,
2008).

Figura 1 Representao grfica da macroalga Gracilaria caudata coletada

na praia de Camapum, Macau/RN.

Fonte: MOODY, 2007.

O presente estudo objetiva quantificar os biopolmeros protenas, carboidratos

e lipdeos obtidos em extratos da Gracilaria caudata coletada na praia de Camapum
 13

no municpio de Macau/RN, demonstrando seu perfil qumico e potencial de utilizao

tendo como base a comparao com outros estudos que determinam e caracterizam
essas biomolculas.
 14

2 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

Caracterizao qumica dos extratos aquoso e etanlico obtidos da macroalga

vermelha Gracilaria caudata coletada na praia de Camapum localizada em Macau/RN.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Obter extratos etanlicos da alga G. caudada, utilizando metodologia

comum na literatura especfica;
Obter extrato aquoso da alga G. caudada, utilizando metodologia
estabelecida por grupos que trabalham com macroalgas;
Dosar os teores de protenas totais dos extratos etanlicos e aquoso
obtido da alga G. caudata.
Quantificar acares totais dos extratos obtidos macroalga G. caudata
Determinar o teor lipdeo total extrado da matria seca da alga G.
caudata.
Comparar as metodologias de extrao aplicadas no presente estudo
com outras utilizadas na literatura para extrao de biomolculas de
macroalgas.
 15

3 MATERIAIS E MTODOS

3.1 MATERIAIS

3.1.1 Material Biolgico

A macroalga marinha vermelha Gracilaria caudata foi coletada no litoral da

Costa Branca do Rio Grande do Norte, na Praia de Camapum, localizada no municpio
de Macau levando em considerao a abundncia dessa espcie no local e a
facilidade do seu alcance. A coleta foi realizada manualmente entre os meses de
agosto e novembro de 2015, durante a mar baixa. Aps a coleta, o material foi
transportado at o Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio Grande
do Norte Campus Macau em devido recipiente e estocado no laboratrio de
Botnica, Ecologia e Zoologia.

A alga foi identificada como:

Filo: Rodhophyta

Classe: Florideophyceae

Ordem: Gracilariaceae

Gnero: Gracilaria

Espcie: Gracilaria caudata

A macroalga foi limpa, retirando-se sedimentos e outros elementos que, por

acaso, estavam junto ao material coletado, para evitar a contaminao e interveno
durante os procedimentos e nos resultados finais.

Posteriormente, a macroalga foi secada em estufa 50C e triturada em

liquidificador. Aps sua pesagem, o material foi armazenado em local apropriado no
laboratrio de Botnica, Ecologia e Zoologia e etiquetado com nome, local de coleta
e data.
 16

3.1.2 Reagentes

lcool Etlico (VETEC)

Fosfato de Sdio Monobsico (VETEC)
Fosfato de Sdio bibsico (VETEC)
Acetona P.A. (VETEC)
Glicose (Dextrose) (C6H12O6) P.A (VETEC)
Fenol (C6H5OH) 80% (Manipulado)
cido Sulfrico (H2SO4) P.A (DINAMICA)
gua Destilada (H2O)
Clorofrmio (CHCl3) P.A. (QUIMIS)
lcool Metlico (Metanol) (CH3OH) P.A. (VETEC)
Sulfato de Sdio Anidro (Na2SO4) P.A. (VETEC)
Extrato aquoso da Gracilaria caudata
Extratos etanoicos da Gracilaria caudata

3.1.3 Vidrarias e equipamentos

Esptula
Erlenmeyer
Filme de Laboratrio
Pisseta
Pipeta Volumtrica
Pipeta (1000 l)
Pipeta de 10 ml e 20 ml
Tubo de Ensaio
Capela
Banho-Maria
Funil
Papel de Filtro
 17

Bquer
Dessecador
Barra magntica
Banho Ultrassom SCHUSTER
Agitador Magntico VELP
Centrifuga CENTRIBIO
Tubos Falcon
Balana de Preciso MARTE
Espectrofotmetro SPECTRO-VISION
Capela PERMUTION
Banho-maria QUMIS
Rotaevaporador LUCADEMA

3.2 MTODOS

3.2.1 Obteno de extratos da alga Gracilaria caudata.

As metodologias para extrao total de biomolculas da alga G. caudata foram

realizadas no laboratrio de Qumica das guas e Qumica Analtica, na coordenao
de laboratrios do Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio Grande
do Norte. Os extratos foram caracterizados quimicamente quantificando os teores de
protenas solveis, aucares totais e lipdeos. Os mtodos utilizados na determinao
dos extratos e anlises qumicas esto relacionados abaixo:

3.2.1.1 Extrao Etanlica

Os solventes foram preparados variando-se a concentrao do solvente

extrator, que foi preparado a solues de etanol a 60%, 80% e 100%.
 18

Da alga triturada foram separados 2 g de p seco, em seguida foram

homogeneizados com 20 mL de cada soluo etanlica. O tempo de extrao adotado
foi de 48 horas, sendo os frascos erlenmeyers vedados com filme de laboratrio e
deixados em repouso em caixa trmica de isopor. O sobrenadante foi separado por
filtrao com papel filtro e concentrado em rota evaporador por 15 dias. Os extratos
concentrados foram armazenados em frasco mbar, devidamente etiquetados, e em
seguida, armazenados a 8 C, at o momento das anlises (FIGURA 2) (PERES,
2012).

Figura 3 Representao esquemtica da metodologia de extrao etanlica

adotada.

Fonte: Autoria Prpria

3.2.1.2 Extrao aquosa

O p seco da alga G. caudata para extrao, foi utilizado na proporo de 1 g

para 5 mL de tampo fosfato pH 7,0. Pesou-se 2g da alga em erlenmeyer e adicionou-
 19

se 10mL da soluo Tampo Fosfato pH 7,0 . O erlenmeyer foi vedado utilizando papel
filme de laboratrio e colocado em banho ultrassom durante 1 hora 20C. Aps sair
do ultrassom, o erlenmeyer contendo o extrato submetido agitao magntica por
um perodo de 12 horas, passado esse tempo, o material mido da macroalga foi
transferido para tubos Falcon e centrifugado 9200 rpm na temperatura de 4 C
durante 30 minutos (CABRAL, 2012).

Ao sobrenadante foram adicionados 4 V de acetona P.A. para precipitao do

extrato bruto, a mistura foi deixada em repouso por 24 horas a 4 C em isopor, em
seguida a mistura foi centrifugada a 9200 rpm por 15 min. O precipitado foi seco a
presso reduzida (FIGURA 4).

Figura 4 Representao esquemtica da metodologia de extrao aquosa

adotada.

Fonte: Autoria Prpria

 20

3.2.2 Determinao proteica por leitura diferencial em U.V.

Mtodo rpido para determinar a presena de protenas em solues

desconhecidas, atravs de analises de absorbncia por leitura diferencial entre
protenas e cidos nucleicos. Utilizando um espectrmetro UV visvel que a 280 nm
detecta-se forte interferncia de protenas como tambm de cidos nucleicos e a 260
nm de cidos nucleicos, assim a presena de cidos nucleicos pode ser corrigida pela
formula e a quantificao realizada atravs do seguinte clculo:

(/) = (1,5 280 m ) (0,75 260 m )

Os extratos brutos etanlicos foram diludos a 1:2 para analises no

espectrofotmetro utilizando cubeta de quartzo, ainda fez-se necessria uma diluio
da amostra a 1:16, pois a absorbncia no espectrofotmetro ultrapassou 1,000.

3.2.3 Determinao de aucares totais

A quantidade de aucares totais dos extratos brutos foram determinadas pelo

mtodo do fenol/cido sulfrico (DUBOIS et al., 1956), empregando-se como padro
D-glicose, sendo as leituras realizadas a 490 nm. Para o estabelecimento de uma
curva padro para comparativo foi preparado solues de D-glicose a 10mg/ml em
gua e etanol a 60%, 80% e 100%. As absorbncias das solues 10, 20, 30, 40, 50,
60, 70 e 80 mg de glicose foram medidas (FIGURA 4).
 21

Figura 4 Representao grfica da curva de glicose padro para acares

totais no mtodo fenol 80%/cido sulfrico.

1.4000
y = 0.0192x + 0.011
1.2000
R = 0.9979
1.0000
Absorbncia

0.8000
0.6000
0.4000
0.2000
0.0000
0 20 40 60 80
Glicose (mg)

Fonte: autoria prpria

Para analise foram pipetados at 1 mL de amostra (extratos e padres) e gua

destilada em tubos de ensaio, adicionou-se 25 L de fenol 80% e 2,5 mL de cido
sulfrico em cada tubo em capela de exausto pois a reao exotrmica e exige
maior cuidado no manuseio, agita-se os tubos, e aps repouso sob capela por 10
minutos os tubos so transferidos para banho-maria praquecido 37C e deixados
em repouso por 30 minutos. Por fim a absorbncia de cada soluo medida em
espectrmetro UV visvel.

3.2.4 Determinao de lipdios por composio centesimal

Para determinao da composio de lipdios totais, pesou-se 1,0 g da alga

pulverizada em erlenmeyer, nele se adicionou 10 ml de clorofrmio, 20 ml de metanol
e 8 ml de gua destilada. Acrescenta-se barra magntica e mistura em agitador
magntico por 30 minutos, 145 rpm. Aps a agitao acrescenta-se 10 ml de
clorofrmio e 10 ml de sulfato de sdio anidro 1,5%. Tampa-se e agita-se
manualmente por 2 minutos at formao de duas fases. Aps agitao e repouso
retira-se de 15 ml da camada inferior formada durante o repouso para um tubo de
 22

ensaio (camada hidrofbica). Adiciona-se 1g de sulfato de sdio anidro para remoo

de traos de gua no tubo de ensaio. Filtra-se a soluo para outro tubo de ensaio.
Transfere-se 5ml do filtrado para bquer 25ml previamente limpo, aquecido e pesado.
Coloca-se o bquer na estufa previamente aquecida a 100C at evaporao do
solvente. Resfria-se o bquer em um dessecador e pesa-se (BLIGH; DYER, 1959).
Para efeito de clculo a formula utilizada para determinar a porcentagem de lipdios
foi:

5 4 100
% =
 23

4 RESULTADOS

Aps a extrao com etanol e tampo fosfato obteve-se quatro extratos da alga G.
caudata, sendo os etanlicos denominados de EtOH 60%, EtOH 80% e EtOH 100%
e a extrao aquosa denominada de aquoso. Devido aos erros de anlise,
interferncias externas e absorbncia no espectrofotmetro acima de 1,00, alguns
resultados foram dispensados em determinados grficos e considerados em outros.
Por esse motivo, sero apresentados aqui apenas os resultados das amostras e
diluies satisfatrias para cada polissacardeo. Fez-se necessria a diluio do
extrato bruto para diluies de 1:2 e 1:16 em casos que a interferncia ficava muito
alta.

4.1 Protenas

O teor de protenas encontradas na macroalga Gracilaria caudata est acima

do que encontrado na literatura. Foram considerados os resultados de todas as
fraes feitas a partir dos extratos etanlicos brutos (60%, 80% e 100%), que foram
diludos com gua destilada a 1:2 e 1:16 e tambm o extrato aquoso a 1mg/mL. O
maior ndice de protenas obtido foi do extrato etanlico a 60% diluio 1:2, com teor
igual a 29,8%, e os menores ndices dos extratos aquoso a 1mg/mL e etanlico a
100% diluio 1:16, cujas porcentagens foram 1,6% para ambos.

As porcentagens nos extratos etanlicos variam bastante dos diludos a 1:2

para os diludos a 1:16. Enquanto a diluio 1:2 mostra resultados acima de 24% em
todas as fraes, 24,8% para EtOH 100%, 24,6% para EtOH 80% e 29,8% para EtOH
60%, o teor mximo de protenas extradas das fraes diludas a 1:16 chega a 15,7%
no EtOH 60%, em 80 e 100% os teores so 8,1 e 1,6%, respectivamente.

A Figura 5 a seguir representa os teores de protenas obtidos:

 24

Figura 5 Representao grfica do teor de protenas obtidos em extratos

Etanlicos e Aquosos da alga Gracilaria caudata

35.0
29.8
30.0
24.8 24.6
25.0
Protenas (%)

20.0
15.7
15.0

10.0 8.1

5.0
1.6 1.6
0.0
EtOH 100% EtOH 80% EtOH 60% EtOH 100% EtOH 80% EtOH 60% Aquoso
1:2 1:2 1:2 1:16 1:16 1:16 1mg/ml

Fonte: autoria prpria

4.2 Acares Totais

Os resultados aqui apresentados foram obtidos a partir da anlise dos extratos

considerando a leitura dentro da curva padro, foram eles os etanlicos brutos a 60%,
80% e 100% e o extrato aquoso a 1mg/mL. Aps utilizao da metodologia,
previamente estabelecida, apropriada para determinao de acares totais, os
resultados foram relativamente baixos e o uso da Gracilaria caudata, neste caso,
passa a depender de sua finalidade, sendo uma boa opo para dietas que precisam
ser pobres em carboidratos, por exemplo.

A macroalga estudada apresentou baixos teores de acares totais. Seu maior

ndice foi obtido a partir do extrato etanlico bruto a 60%, com porcentagem igual a
2,2, e o menor valor porcentual foi 0,2 no extrato aquoso a 1mg/mL. Os resultados
dos outros dois extratos etanlicos a 100 e 80% foram, respectivamente, 0,3 e 1,0%.
 25

As porcentagens de acares totais esto expostas no grfico a seguir (Figura

6):

Figura 6 Representao grfica de aucares totais obtidos em extratos

Etanlicos e Aquosos da alga Gracilaria caudata.

2.5
2.2
2.0
Aucares totais (%)

1.5
1.0
1.0

0.5 0.2 0.3

0.0
Aquoso EtOH Bruto 100% EtOH Bruto 80% EtOH Bruto 60%
0,1mg/ml

Fonte: autoria prpria

4.3 Lipdeos

A macroalga Gracilaria caudata apresentou baixas porcentagens de lipdeos

em sua composio. A literatura acerca deste assunto diz que as algas marinhas em
geral possuem quantidades muito pequenas de lipdeos. A partir de trs unicatas de
uma amostra foi feita uma mdia para o teor lipdico que foi igual a 0,50%, as unicatas
1, 2 e 3 apresentaram porcentagens iguais a 0,44, 0,50, e 0,56, respectivamente.

A macroalga Gracilaria caudata apresentou as seguintes porcentagens de

lipdeos (Figura 7):
 26

Figura 7 Representao grfica de lipdeos totais da matria seca da alga

Gracilaria caudata.

0.60% 0.56%
0.50% 0.50%
0.50%
0.44%

0.40%
Lipdeos (%)

0.30%

0.20%

0.10%

0.00%
Unicata 1 Unicata 2 Unicata 3 Mdia

Fonte: autoria prpria

 27

5 DISCUSSO

Para a dosagem dos biopolmeros presentes na macroalga Gracilaria caudata

(protenas, acares e lipdeos), utilizou-se mtodos para que os extratos fossem
obtidos nas formas aquosa e etanoica. A extrao com etanol exige, depois, a
separao do solvente para que possa ser obtido o extrato mais concentrado ou seco,
no presente estudo optou-se pela forma lquida concentrada. O mesmo deve ser feito
com o extrato aquoso, evitando ao mximo o rastro de solventes no extrato final. Com
base na metodologia, j estabelecida, utilizada para a realizao do presente estudo
e em seus resultados, fez-se uma comparao deste com outro trabalho referente
extrao de biopolmeros da Gracilaria caudata, aferindo as metodologias utilizadas
para as dosagens e as porcentagens apenas de protenas e acares totais em ambos
os estudos. Posteriormente, o mesmo foi feito, com um trabalho distinto, para
Lipdeos.

Os trabalhos utilizados para as comparaes foram Extrao e caracterizao

qumica de biopolmeros da macroalga Gracilaria caudata coletada em
macau/rn (trabalho vigente), Atividades biolgicas de polissacardeos
sulfatados extrados da alga vermelha Gracilaria caudata (para as comparaes
de protenas e acares totais) e Estudo do teor de lipdios e avaliao dos
resduos das algas marinhas: Gracilaria caudata, Gracilaria birdiae, Gracilaria
domingensis para preparao de biodiesel e biofertilizante (para as
comparaes de lipdeos) e esses sero chamados de trabalhos 1, 2 e 3,
respectivamente (COSTA, 2008; REBOUAS, 2013).

O estudo de Costa (2008) tem como objetivos pertinentes para este trabalho
extrair polissacardeos sulfatados da macroalga Gracilaria caudata e determinar a
composio qumica deles. Segundo sua metodologia, a Gracilaria caudata, aps
coleta e lavagem, passou por processos de delipidao e despigmentao at a
extrao de polissacardeos sulfatados, depois a amostra foi fracionada com
concentraes crescentes de acetona (1,5, 2,0 e 3,0 volumes). Para a determinao
de acares totais foi aplicado o mtodo fenol/cido sulfrico, tendo como padro a
galactose e leituras realizadas a 490 nm no espectrofotmetro. J a dosagem de
protenas foi feita com o reagente de comassie blue R 250 e as leituras foram
 28

realizadas a 595 nm. A porcentagem de acares e protenas adquirida foi

apresentada de acordo com as trs fraes de diferentes concentraes de acetona.

O estudo de Rebouas (2013) tem como objetivo importante para a realizao

desta discusso extrair, caracterizar e quantificar o teor de cidos Graxos (lipdeos ou
gorduras) presentes nas algas Gracilaria caudata, Gracilaria birdiae e Gracilaria
domingensis, sendo que apenas os dados da macroalga Gracilaria caudata sero
utilizados. Rebouas (2013) fez uso de mtodos a quente e a frio para a extrao de
lipdeos, os escolhidos para a comparao com o presente trabalho foram por
ultrassom aplicando o mtodo Bligh Dyer modificado, a frio, e por ultrassom usando
hexano, a quente. Na extrao por ultrassom com mtodo Bligh and Dyer, preparou-
se 10 mg da macroalga Gracilaria caudata seca e adicionou-se 4 mL de solvente
metanol, 4 mL de clorofrmio e 3,6 mL de gua destilada. A amostra foi levada ao
banho ultrassnico por uma hora, depois, a frao mais densa do sistema trifsico
(clorofrmio + leo + amostra) foi retirada com o auxlio de uma pipeta e colocada em
um balo volumtrico previamente pesado e o solvente foi removido em
rotaevaporador a 60 C. Na extrao por ultrassom usando hexano, se colocou 1 g da
macroalga Gracilaria caudata em p, embebida de 50 mL de hexano.

As porcentagens para a dosagem de protenas esto descritas na tabela a

seguir (Tabela 1):

Tabela 1 Comparao do teor de protenas obtido aps diferentes tipos de

extrao

Mtodos % (percentagem) Estudos

EtOH 60% 1:2 29,8 Presente estudo
EtOH 60% 1:16 15,7 Presente estudo
Aquoso 1 mg/mL 1,6 Presente estudo
Extrao
enzimtica 2,00 COSTA (2008)
F 3,0
Fonte: autoria prpria
 29

Os resultados do trabalho 1 mostram uma maior eficincia da metodologia

utilizada para a dosagem de protenas, conseguindo extrair uma maior quantidade
desse polmero. Neste caso, os menores nmeros so os dos extratos aquoso a
1mg/mL e EtOH 100% 1:16, cujas porcentagens foram 1,6 para os dois. J o trabalho
2 teve maior porcentagem na frao 3,0, com 2% de protenas.

As porcentagens de acares totais sero apresentadas na seguinte tabela

(Tabela 2):

Tabela 2 Comparao do teor de acares totais obtido aps diferentes

tipos de extrao

Mtodos % (percentagem) Estudos

Etanlico 100%
2,2 Presente estudo
1:2
Aquoso 1 mg/mL 0,2 Presente estudo
Extrao
enzimtica 32,80 COSTA (2008)
Frao 1,5
Fonte: autoria prpria

Os resultados do trabalho 2 demonstram uma grande quantidade de acares

presentes na macroalga estudada, mesmo levando em considerao a presena de
outros componentes como sulfato e protenas. O trabalho 1, apresentou teores muito
baixos de acares totais. As menores porcentagens desses polissacardeos foram
0,2%, no extrato aquoso do trabalho 1 e 16,70%, na frao 2,0v do trabalho 2. Deve-
se principalmente porque o trabalho 2 traz amostras concentradas e mais puras
quando se compara como extrato total do presente trabalho, alm do que COSTA
(2008) utilizou metodologia mais eficiente na extrao de polissacardeos sulfatados.

As porcentagens para a lipdeos totais esto descritas na tabela a seguir:

 30

Tabela 3 Comparao do teor de lipdeos obtido aps diferentes tipos de

extrao

Mtodos % (percentagem) Estudos

Presente estudo
Extrao a frio: Bligh -
0,50 baseado em Bligh
Dyer
Dyer (1959)
Rebouas (2013)
Extrao a frio: Bligh -
0,35 baseado em Bligh
Dyer
Dyer (1959)
Extrao a quente:
0,20 Rebouas (2013)
hexano
Fonte: autoria prpria

Os estudos 1 e 3 no tiveram enorme diferena no que se diz respeito s

porcentagens lipdicas. O trabalho 1, teve 0,44% como menor teor lipdico, a amostra
com esse resultado foi a unicata 1. O trabalho 3, obteve como menor porcentagem
0,20%, resultado da extrao a quente com hexano.

Resumidamente, o trabalho 1 apresentou maiores porcentagens de protenas

e menores porcentagens de acares totais extrados da Gracilaria caudata, enquanto
o trabalho 2 obteve maiores porcentagens de acares totais e menores porcentagens
de protenas. Levando em considerao a pouca presena de gorduras nas
macroalgas marinhas, os trabalhos 1 e 3 apresentaram, tambm, baixas porcentagens
lipdicas na Gracilaria caudata.
 31

6 CONCLUSO

Atravs dos extratos etanlicos a 60%, 80% e 100% e aquoso a 1mg/mL da

macroalga Gracilaria caudata, foram obtidos os biopolmeros desejados para este
estudo: protenas, acares totais e lipdeos;

As extraes etanlicas mostraram melhores eficincia e rendimento;

As protenas foram os biopolmeros mais abundantes na macroalga Gracilaria

caudata;

Os teores de acares totais e lipdeos foram baixos;

As concentraes dos biopolmeros podem variar de acordo com a metodologia

utilizada para a extrao;

A Gracilaria caudata uma grande fonte de polissacardeos;

As macroalgas, em geral, devem ser mais estudadas e introduzidas no mercado.

 32

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