UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTADE DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUIMICA
LABORATORIO TCNICAS BSICAS EN QUMICA

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA (Hb) EN UNA MUESTRA SANGUINEA

La hemoglobina (Hb) es una protena coloreada que absorbe luz en la regin visible del espectro electromagntico. De forma
cuantitativa la intensidad de luz transmitida es medida en los espectrofotmetros. Esa propiedad permite determinar la
concentracin del compuesto coloreado en solucin, ya que la luz absorbida es directamente proporcional a la intensidad de
color, en un cierto rango de concentraciones que debe ser determinado experimentalmente. Esta metodologa es utilizada a
nivel industrial, en investigacin y tambin diariamente en el laboratorio clnico.

1. ACTIVIDADES PRELABORATORIO: CONSULTA PARA EL ANALISIS COLORIMETRICO

1.1 Consultar los conceptos relacionados con radiacin electromagntica, transmitancia de luz y absorbancia.
Partes y mecanismo del espectrofotmetro. Qu es luz monocromtica?
1.2 Que es la ley de Beer-Lambert y cules son los lmites en su uso. Como se relaciona la transmitancia con la
absorbancia? Cul relacin es logartmica y cual es lineal?
1.3 Que es una curva de espectral y que informacin brinda en la metodologa espectrofotomtrica de
colorimetra.
1.4 Consultar que es una curva de calibracin y cul es el objetivo de generarla cuando se utiliza la tcnica
colorimtrica.
1.5 Que es un blanco de reactivos y cul es su utilidad en la tcnica colorimtrica?
1.6 Explique el concepto de dilucin seriada
1.7 Consultar y pegar en el cuaderno el espectro de absorcin de la hemoglobina (no olvidar la fuente de donde lo
obtuvo)
1.8 Consultar como se cuantifica la hemoglobina en el laboratorio clnico. Cul es el valor de esta protena
considerado como referencia o fisiolgico?

2. DESARROLLO EXPERIMENTAL

2.1 Construir la curva espectral de una muestra diluida de sangre. Indicar el procedimiento experimental para generarla.

Tabla N. 1 Datos para la curva espectral (no incluir en el preinforme inicialmente)

Grupo Longitud de onda Absorbancia
(nm) (0,001)
1 350
2 400
3 450
4 500
5 520
6 540
7 560
8 580
9 600
10 620
11 650
12 700
2.2 Qu caractersticas debe tener la muestra con la cual se realiza la medida de absorbancia para construir esa
grfica?
Opcional: Repita las mediciones con una muestra de otra concentracin. Analice, qu resultados espera obtener?
2.3. Construir la curva de calibracin para la hemoglobina partiendo de una solucin patrn de concentracin
indicado el da de la prctica. Para ello debe indicar como preparar 10 ml de diluciones 1:2 a partir de ese
patrn. Realice dos grficas de Absorbancia vs Concentracin: (a) Con todo el rango de concentraciones (para
diferenciar la zona de desviacin y la zona de lineal); (b) Cuando haya determinado la zona de
comportamiento lineal, graficar nicamente ese rango)

Tabla N. 2 Datos para la curva de calibracin (no incluir en el preinforme inicialmente)

Nmero Patrn de Hb Protocolo:para 10mLde las Absorbancia

mg/dL diluciones1:2 emplear ____mLdel patrn
N.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Blanco 0,0
Muestras Medida 1
de Medida 2
Anlisis Medida 3

2.4 Escribir los materiales necesarios para la construccin de la curva espectral, curva de calibracin y
determinacin de concentracin desconocida de Hb en un paciente presumiblemente con anemia, escribir el
propsito de cada material, capacidad e incertidumbre. No olvidar traer los vasitos LISOS Y TRANSPARENTES
pequeos para recibir las disoluciones preparadas.

3. RESULTADOS A REPORTAR

3.1 Representar las curvas de calibracin en concentracin para la Hb. (1) Con todas las concentraciones. (2) Solamente con
la tendencia lineal y obtener la ecuacin matemtica.
3.2 Determinar la concentracin de la muestra problema (Hb de concentracin desconocida), la cual present la
absorbancia mostrada en la tabla.
3.3 Calcule la absortividad molar dela Hb y compare estadsticamente el resultado con el reportado en la bibliografa.

REFERENCIAS

1. Trujillo, C.A., Snchez, J.E. (2007). Tcnicas y medidas bsicas en el laboratorio de Qumica. Universidad Nacional de
Colombia, Sede Bogot, Departamento de Qumica. Bogot.
2. Mendham, J. (2006). Vogels textbook of quantitative chemical analysis. Pearson Education. India.
3. Thomas, O., & Burgess, C. (Eds.). (2007). UV-visible spectrophotometry of water and wastewater (Vol. 27). Elsevier.
4. Brown, T. L., LeMay H. E., Bursten B. E., Murphy C. J. (2009). Qumica la Ciencia Central. 11a edicin.Pearson Prentice Hall,
Mexico.