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1. OBJETIVO
2. ALCANCE
3. DEFINICIONES
Escherichia coli (E. coli): Bacteria cuyo hbitat natural son los intestinos de la mayor
parte de los mamferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del
sistema digestivo. El aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado de certeza
de contaminacin de origen fecal, alrededor del 99%.
NMP: El mtodo del Nmero ms probable (NMP) (Most probable number - MPN - en
ingls), tambin conocido como el mtodo de los ceros de Poisson, es una forma de
obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos
de incidencia positiva/negativa.
Ausencia / Presencia: Forma de obtener datos cualitativos en caso que bacteria sea
positiva o negativa en el anlisis.
4. RESPONSABLES
5. GENERALIDADES
Grupo Coliforme Total: Toda bacteria que posea la enzima D Galactosidasa; la cual
tiene la propiedad de abrir el sustrato cromognico, resultando en la liberacin del
cromgeno. Escherichea coli es definida como toda bacteria que da respuesta positiva al
grupo Coliforme Total y adems posee la enzima Glucoronidasa, la cual tiene la propiedad
de abrir el sustrato fluorognico, resultando en la liberacin del fluorgeno.
6. DESARROLLO
6.1. Fundamento
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6.2. Materiales
6.2.1. Equipos
6.2.2. Reactivos
Agua estril
Reactivo Colilert
Bolsas Quanti tray 2000.
6.2.3. Otros
6.3. Procedimiento
6.3.1. Controles y/o curvas de calibracin
Llene tres recipientes estriles con 100 ml de agua estril, libre de
oxidantes, no tamponada, e inocule con un asa estril los siguientes
controles microbiolgicos:
Nota: Para los controles los frascos sern esterilizados junto con el agua.
6.3.2. Acondicionamiento y manejo de equipos
LECTURA:
PRODUCTO RESULTADO
Incoloro o Amarillo igual al control Negativo Negativo para Coliformes Totales y E. coli
Amarillo mayor al control Negativo Positivo para Coliformes
Amarillo y Fluorescencia Positivo para E. coli
Marcar los frascos estriles y las Bolsas Quanti tray 2000 con los 4 ltimos nmeros del
consecutivo asignado en el momento de la recepcin de la muestra. De la siguiente
manera:
Transferir del contenido del frasco (agua a analizar + reactivo) a una Bolsa Quati Tray
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Tomar la bolsa Quanty tray colocarla en el porta bandeja del sellador Quanti tray y
pasarla a traves del sellador con los pozos hacia abajo con la bandeja de soporte de
abajo hacia arriba
Coliformes Totales :
Positivo
Escherichia coli:
Los resultados son definidos de 24-48 horas. Adems Para Coliformes y E.coli
observado antes de las 24 horas y Negativos observados despus de 28 horas.
Positivo
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Para cada cepa bacteriana (Empleada como control), tome una colonia con una asa
de siembra estril e inoculo en 100 ml de agua estril y sea procesada como una
muestra (actividad 7.5)
Incubar 100ml de agua destilada con de Cepa Klebsiella pneumoniae o variicola ATCC
31488 ms el Reactivo Colilert servido en Frasco tapa rosca auto lavables o bolsa
Quanty-Tray/2000 y rotular Control Positivo Coliformes Totales.
NOTA: Este control es tambin Valido como Control Negativo para E coli
Control Positivo Escherichia coli: Incubar 100ml de agua destilada con la Cepa E
Coli ATCC 25922 ms el Reactivo Colilert servido en Frasco tapa rosca auto lavables
o bolsa Quanty-Tray/2000 y rotulada Control Positivo E. coli
Control Negativo Coliformes: Incubar 100ml de agua destilada con la cepa
Pseudomona aeuriginosa ATCC 10145 o 27853 ms el Reactivo Colilert servido
Frasco tapa rosca auto lavables o en bolsa Quanty-Tray/2000 y rotulada Control
Negativo Coliformes.
No Coliformes
Pseudomona ATCC 10145 o Incoloro
aeuriginosa ATCC 27853 Sin Fluorescencia
ACCION PARA
CRITERIO LECTURA RANGO DE ACEPTACION INCUMPLIMIENTO
DE CRITERIOS
Coliforfes Totales =
No debe presentar 0 microorganismos en 100
cambio de color ni ml Repetir Anlisis
Control Negativo
Fluorescencia en ningn Escherichia coli = Verificar.
pozo 0 microorganismso en 100
ml
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Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el Coliforfes Totales =
Coliformes totales cambio de color en los >2419 microorganismos en Repetir siembra
Cepa ATCC 31438 pozos pasando de 100 ml de cepas ATCC y
Klebsiella incoloro a amarillo y SIN Escherichia coli = repetir el Anlisis
0 microorganismos en 100
pneumoniae presentar fluorescencia ml
al exponerse a la luz UV
Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el
E coli cambio de color en los
pozos pasando de Escherichia coli = Repetir siembra
incoloro a amarillo y > 2419 microorganismos en de cepas ATCC y
Cepa ATCC
repetir el Anlisis
Escherichia coli CON presencia de 100 ml
ATCC 25922 fluorescencia al
exponerse a la luz UV
Control Negativo
Coliformes Coliforfes Totales =
No debe presentar 0 microorganismso en 100
Repetir siembra
Cepa ATCC cambio de color ni ml
de cepas ATCC y
Pseudomona Fluorescencia en ningn Escherichia coli =
repetir el Anlisis
aeruginosa pozo 0 microorganismso en 100
ATCC 10145 ml
ATCC 27853
Descartar
Reactivos y
Vigencia del reactivo Reactivo Vigente a la fecha adquirir y
Reactivos vigentes
dentro de la fecha de utilizacin procesar con
reactivos en
fechas vigentes
Ajustar control de
Temperatura y
tomar
Temperaturas de Temperatura ajusta a Temperatura
nuevamente
Incubadoras 36C +/- 2 36C +/- 2
hasta obtener
temperatura
deseada.
Solicitar y ejecutar
los
mantenimientos o
Mantenimiento de Calibracin, verificacin y Calibracin, verificacin y verificaciones
equipos mantenimiento vigente mantenimiento vigente pendientes para
realizar anlisis
con equipos
idneos
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Descartar el
Verificar la fecha de Material y realizar
Control de esterilizacin de Material, Fecha de esterilizacin de el proceso con
Esterilizacin de verificar el cumplimiento Material. Controles de material que
Material de los controles de esterilizacin. cumpla con los
esterilizacin. controles de
esterilizacin.
2. ANEXOS
NMP
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10.2 ANEXO 2
RESPONS
N. ACTIVIDAD FLUJOGRAMA REGISTRO
ABLE
INICIO
1 INICIO
Mezclar la muestra de
agua por 15 a 20 Servir en el frasco Schott
5 ANALISTA
segundos con 100 ml de la muestra
.
movimientos rotacin
RESPONS
N. ACTIVIDAD FLUJOGRAMA REGISTRO
ABLE
Mezclar por 15 a 20 segundos,
dejar en reposo, mezclar
8 ANALISTA nuevamente y verificar la
completa disolucin del
reactivo
RESPONS
N. ACTIVIDAD FLUJOGRAMA REGISTRO
ABLE
estos que indica el
numero de
micoorganismos en
100ml
reportar:
Pseudomona =
X microorganismso en
100 ml
FIN
13
FIN
13. HISTORIAL
1. Historial
Color Amarillo
E. coli ATCC 25922 Escherichia coli
Fluorescencia
Color Amarillo
Klebsiella pneumoniae ATCC 31438 Coliformes Totales
sin Fluorescencia
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ATCC 10145
Pseudomona Incoloro
o No Coliformes
aeuriginosa Sin Fluorescencia
ATCC 27853
ACCION PARA
CRITERIO LECTURA RANGO DE ACEPTACION INCUMPLIMIENTO
DE CRITERIOS
Coliforfes Totales =
No debe presentar 0 microorganismos en 100
cambio de color ni ml Repetir Anlisis
Control Negativo
Fluorescencia en ningn Escherichia coli = Verificar.
pozo 0 microorganismso en 100
ml
Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el Coliforfes Totales =
Coliformes totales cambio de color en los >2419 microorganismos en Repetir siembra
Cepa ATCC 31438 pozos pasando de 100 ml de cepas ATCC y
Klebsiella incoloro a amarillo y SIN Escherichia coli = repetir el Anlisis
0 microorganismos en 100
pneumoniae presentar fluorescencia ml
al exponerse a la luz UV
Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el
E coli cambio de color en los
pozos pasando de Escherichia coli = Repetir siembra
incoloro a amarillo y > 2419 microorganismos en de cepas ATCC y
Cepa ATCC
repetir el Anlisis
Escherichia coli CON presencia de 100 ml
ATCC 25922 fluorescencia al
exponerse a la luz UV
Control Negativo
Coliforfes Totales =
Coliformes
No debe presentar 0 microorganismso en 100
Repetir siembra
cambio de color ni ml
Cepa ATCC de cepas ATCC y
Fluorescencia en ningn Escherichia coli =
Pseudomona repetir el Anlisis
pozo 0 microorganismso en 100
aeruginosa
ml
ATCC 10145
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Reactivos y
Vigencia del reactivo Reactivo Vigente a la fecha adquirir y
Reactivos vigentes
dentro de la fecha de utilizacin procesar con
reactivos en
fechas vigentes
Ajustar control de
Temperatura y
tomar
Temperaturas de Temperatura ajusta a Temperatura
nuevamente
Incubadoras 36C +/- 2 36C +/- 2
hasta obtener
temperatura
deseada.
Solicitar y ejecutar
los
mantenimientos o
Mantenimiento de Calibracin, verificacin y Calibracin, verificacin y verificaciones
equipos mantenimiento vigente mantenimiento vigente pendientes para
realizar anlisis
con equipos
idneos
Descartar el
Verificar la fecha de Material y realizar
Control de esterilizacin de Material, Fecha de esterilizacin de el proceso con
Esterilizacin de verificar el cumplimiento Material. Controles de material que
Material de los controles de esterilizacin. cumpla con los
esterilizacin. controles de
esterilizacin.
2. Registros
3. ANEXOS
ANEXO 1
TABLA NMP
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4. Historial