CELULA EUCARIOTA Y PROCARIOTA

CLULAS PROCARIOTAS

Las clulas procariotas carecen de orgnulos membranosos y de ncleo.

El material gentico se encuentra en el citoplasma.

Presentan una pared celular rgida.

Son microorganismos de organizacin unicelular con forma diversa.

Cocos, bacilos, espirilos o vibrios.

Los cuales pueden agruparse de diversas maneras.

En racimos de cocos (estafilococos), Cadenas de cocos o Bacilos (estreptococos o estreptobacilos), diplococos, sarcinas
(agrupados en tetradas u 8 cocos en forma de cubo).

Divididos en dos grupos: Arquebacterias y Eubacterias.

Arquebacterias: Viven en condiciones extremas, ejemplo:

Termoacidofilos, viven en pozos de calientes de sulfuro con temp. De hasta 80C y pH de 2.

Eubacterias: Incluyen las formas comunes presentes en nuestros das.

La mayora tiene forma esfrica, de bastn, espiral.

Dimetro entre 1-10 micras.

DNA vara de 0.6-5 millones de pares de bases.

ESTRUCTURAS DE LAS CLULAS PROCARIOTAS

Pared celular:

Es una capa rgida presente en todas las bacterias, con excepcin de los micoplasmas.

La pared celular de la mayora de las bacterias tiene un componente comn, el peptidoglicano.

Este est formado por cadenas de dos azcares, la N-acetilglucosamina y el N-acetilmurmico, unidos a cortas cadenas
de aminocidos.

Las cadenas adyacentes, a su vez, se unen por enlaces interpeptdicos.

Las arqueas tienen paredes celulares carentes de peptidoglicano.

La pared celular mantiene la forma de la clula y evita su lisis osmtica.

Regula el intercambio con el exterior.

Proporciona carga negativa a la superficie celular y tiene propiedades antignicas

Exteriormente a la pared, muchas bacterias presentan cpsulas o capas mucosas.

Las cuales estn constitudas por polisacridos o protenas.

La funcin de cpsulas y capas mucosas es fundamentalmente protectora y de adhesin.

Tambin evitan la desecacin de la clula.

 Citoplasma:

Est formado por una matriz gelatinosa, el protoplasma.

En el que se encuentran los ribosomas (70 S).

Y las inclusiones celulares (de reserva carbonada, polifosfato, azufre o con funciones especficas).

Nucleoide:

Es una regin de aspecto fibrilar, situada en el centro del citoplasma.

Que contiene el cromosoma principal de la bacteria, circular y superenrollado.

En las bacterias tambin existe material gentico en forma de uno o varios plsmidos

Pequeas molculas de ADN circular extracromosmico que se replican de forma independiente al cromosoma
principal.

Apndices externos:

Las clulas procariotas pueden presentar apndices externos, como flagelos, pelos y fimbrias.

Flagelos:

Son apndices implicados en el movimiento.

Las bacterias pueden presentar uno o varios flagelos situados en los extremos (flagelacin polar) o alrededor de toda
la superficie (flagelacin peritrica).

Los flagelos estn constituidos por un filamento rgido y curvado que se une a la estructura basal, anclada a la clula, a
travs de un gancho.

La estructura basal est formada por una serie de anillos, uno de los cuales, el anillo M, tiene capacidad de rotacin (lo
cual permite el movimiento de todo el flagelo).

Fimbrias y pelos:

Son apndices inmviles implicados en la adhesin (fimbrias) o en la conjugacin bacteriana (pelos).

CLULAS EUCARIOTAS

Rodeadas por membranas plasmticas.

Sus orgnulos estn delimitados por membranas dentro del citoplasma.

Membrana Celular: Rodea la clula, la protege y permite el paso de ciertas sustancias del exterior al interior de la
clula.

Pared Celular: Rigidez a la clula vegetal.

Citoplasma: Compuesto fundamentalmente por agua, estn flotando los orgnulos.

Ncleo: Contiene la informacin gentica de la clula, organizado de forma lineal, replicacin del DNA y sntesis de
RNA.

Mitocondria: Son los centros del metabolismo oxidativo, responsables de generar la mayora del ATP.

Cloroplastos: Centros donde se lleva a cabo la fotosntesis, se encuentran solo clulas de plantas y algas verdes.

Lisosomas y Peroxisomas: Especializados para la digestin de macromolculas y varias reacciones oxidativas.

 Vacuolas: Digestin de macromolculas y almacenaje de productos de desecho y nutrientes.

Retculo Endoplasmtico: Procesamiento y transporte de protenas, sntesis de lpidos.

Aparato de Golgi: Continua el procesamiento de protenas, son clasificadas para su transporte hacia su destino final.
Adems sntesis de lpidos y algunos polisacridos que componen la pared celular.

Citoesqueleto: Proporciona el marco estructural de la clula, determina la forma de la clula y la organizacin general
del citoplasma

TINCION DE GRAM

TINCIN DE GRAM

TINCIN:

Proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a una superficie.

El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de los microorganismos y poder realizar la observacin en
microscopio ptico.

TINCIN SIMPLE:

El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfologa celular.

Se caracteriza por

Necesita fijacin previa.

Se utiliza un solo colorante y este debe ser bsico (azul de metileno o fucsina).

Permite la visualizacin de la concentracin, morfologa y el modo de agrupacin bacteriana

TINCIN NEGATIVA:

Es un tipo de tincin simple pero con ciertas diferencias ya que nos permite observar caractersticas estructurales de la
bacteria.

Se caracteriza por:

No necesita fijacin previa.

Se utiliza un solo colorante.

Nos permiten visualizar sobre un fondo oscuro la forma de la bacteria y alguna otra estructura como es la presencia de
capsula.

TINCIN DIFERENCIAL:

Las tinciones diferenciales presenta las siguientes caractersticas:

Se necesita de fijacin previa generalmente por calor.

Se utilizan dos colorantes siendo el ltimo colorante el de contraste.

Nos permite visualizar su morfologa otras caractersticas como puede ser la composicin de la pared bacteriana.

TINCIN DE GRAM:

Es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiolgicas.
 Es definida como una tincin diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos:

Bacterias Gram negativas.

Bacterias Gram positivas.

Fue desarrollada por el cientfico dans Hans Christian Gram en 1884.

Hoy en da, sigue siendo una de las tinciones ms utilizadas universalmente debidas a lo econmico, sencillas y eficaz
que resulta.

En microbiologa clnica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras clnicas directas provenientes de sitios
estriles.

Se puede saber de manera rpida las caractersticas de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales
microorganismos causantes de una infeccin.

Los principios de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la pared celular de las bacterias, la cual le
confiere propiedades determinantes a cada microorganismo.

CARACTERSTICAS DE LAS BACTERIAS GRAM POSITIVAS:

Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano (Murena).

Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicacin y supervivencia de la

bacteria.

No tiene membrana externa.

No tiene espacio periplasmtico.

La red de murena est muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas.

La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formacin de enlaces peptdicos entre las diferentes cadenas
del peptidoglucano.

No contiene Lipopolisacridos.

Retienen la tincin azul y conservan el complejo yodo-colorante.

Poseen otros componentes: cidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos complejos.

CARACTERSTICAS DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular ms compleja:

Pared celular interna.

Pared de peptidoglucano.

Bicapa lipdica externa.

Membrana externa: forma un saco rgido alrededor de la bacteria.

Mantiene estructura y es barrera impermeable a macromolculas.

Ofrece proteccin en condiciones adversas.

Espacio periplasmtico: espacio entre la superficie externa e interna de la membrana citoplasmtica.

La red de murena presenta una sola capa.

 La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacridos situada en la parte externa de la
pared celular.

Contiene Lipopolisacridos: estimulador de respuestas inmunes.

Activa clulas B, liberacin de IL, FNT, IL 6 por macrfagos.

Se tien de color rosa/rojo y pierden el complejo yodo-colorante.

Poseen protenas con concentraciones elevadas.

FUNDAMENTO DE LA TINCIN GRAM

La tincin de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta.

El cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana.

Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta.

Formando un complejo cristal violeta/yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana.

En seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la
misma.

Tambin destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que sta es soluble a la accin de
solventes

orgnicos, como la mezcla de alcohol/acetona.

Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este
complejo.

Mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano.

Por ltimo, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de contra tincin.

Sirve para teir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.

No todas las bacterias se pueden teir por esta tcnica, ya que carecen de pared celular (micoplasma).

O su pared celular tiene una composicin qumica diferente (micobacterias, que cuentan con una gran cantidad de
cidos miclicos).

Tincin de Ziehl- Neelsen

HISTORIA

1882- Robert Koch anuncio el descubrimiento del bacilo de la tuberculosis.

Tio el bacilo con solucin alcohlica concentrada de azul de metileno alcalino.

Decoloro y diferencio con Vesuvina (pardo de Bismarck).

Bacilo de tuberculosis y lepra tomaban coloracin azul intenso.

El tejido y otras bacterias aparecan de color pardo.

Paul Erlich, basndose en los hallazgos de Koch inform mes y medio despus su mtodo para teir el bacilo.

Introdujo como colorante una solucin alcohlica saturada de Fucsina.

Utilizo como mordiente aceite de anilina.

 Y contino decolorando con el pardo de Bismark o con cido ntrico.

Franz Ziehl cambio el mordiente de Erlich, por otra substancia semejante pero de composicin ms precisa.

Us cido Carblico, dio un paso prctico y reproducible, que continua usndose en nuestros das.

Friedrich Neelsen informo que obtena excelentes resultados con la Fucsina en cido carblico al 5%.

Determino la concentracin ptima del mordiente.

Adems demostr que la decoloracin con cido sulfrico al 25% le daba excelentes resultados.

GENERALIDADES DE LA FAMILIA MYCOBACTERIACEAE

Son bacterias conocidas tambin como cido-alcohol resistentes.

Presentan alto contenido lipidico en su pared celular.

Que llega a representar hasta el 40% de su peso.

Una vez teidos, los bacilos presentan resistencia a la decoloracin con sustancias cidas.

Son microorganismos muy ubicuos y en la familia se incluyen desde:

Saprofitos del suelo, agua, hasta grmenes capases de producir lesiones en el ser humano.

Las infecciones microbianas son intracelulares y provocan por lo general lesiones granulomatosas de
crecimiento lento.

Las cuales son las responsables de una importante destruccin tisular.

Las paredes celulares de las micobacterias son atpicas.

Estn formadas por aproximadamente un 60% de lpidos.

Incluida una clase nica de cidos grasos hidroxilados (cidos miclicos).

Son de cadena extremadamente larga (75-90 carbonos).

Estos lpidos forman un complejo con diversos polisacridos y pptidos.

Crenado as una superficie celular cerosa.

La cual le confiere a las micobacterias una elevada hidrofobia y produce sus caractersticas de tincin
acido-resistencia.
 Esquema de la composicin de la pared celular de las micobacterias.

FUNDAMENTO

TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN: Tcnica de tincin diferencial rpida para la identificacin de microorganismos

patgenos.

M. tuberculosis. M. marinum y parasitos coccdeos como Cryptosporidium.

Algunas bacterias tienen la propiedad de resistir la decoloracin con cidos fuertes despus de ser
teidos con fucsina caliente.

Esta propiedad permite clasificarlos como: cido-resistentes o cido-alcohol resistentes.

cido-alcohol resistencia: Capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos despus de someterlos a la

accin de cidos y alcohol.

Determinada por la presencia en la pared celular de cidos miclicos.

Los cidos miclicos junto con lpidos libres proveen a la clula una barrera hidrofbica.

Otros cidos grasos importantes son: ceras, fosfolpidos y cidos micosricos.

La tincin se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparacin ligeramente para solubilizar las ceras,
lpidos y otros cidos grasos, para permitir el paso libre del colorante.

Tiene una alta afinidad por los cido miclicos.

Al enfriar, los componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la accin abrasiva del alcohol-
cido.

El azul de metileno se utiliza como contratincin.

La tcnica fuerza la penetracin de la fucsina en la pared celular mediante la accin del fenol y el calor.

Aumentando la fluidez de la capa de cidos miclicos.

El calor derrite el componente ceroso.

El fenol acta a modo de disolvente.

Permitiendo el paso del colorante bsico que se une a los cidos miclicos de carga negativa.
El calor aumenta la energa cintica de las molculas del colorante, facilitando su entrada a las bacterias.

Cuando cesa la aplicacin de calor y se elimina el exceso de fenol mediante lavado con agua, la pared
recupera su consistencia cerosa.

Las molculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor.

TCNICA

Realizar extendido de la muestra y dejar secar.

Fijar la muestra con calor, haciendo pasar el portaobjeto 3 veces sobre la flama del mechero.

Colocar el colorante primario (carbofucsina) y flamear la muestra por debajo del portaobjeto hasta el
desprendimiento de vapores blancos, durante 5 minutos.

Retirar el exceso de colorante con agua corriente.

Decolorar con alcohol-cido durante 30 segundos y lavar con agua corriente.

Aadir el colorante de contraste (azul de metileno) durante 1 - 2 minutos y lavar con agua corriente.

Dejar secar en forma vertical.

TIPO DE MUESTRAS

Lquido Cefalorraquideo.

Lquido Pleural.

Lquido Sinovial.

Lquido Pericrdico.

Biopsias para Cultivo.

Lavado Broquioalveolar.

Abcesos.
 Aspirados.

Colonias Aisladas de medios de Cultivo.

Expectoracin.

Aspirado Endotraqueal.

REPORTE DE LAMINILLAS TEIDAS CON ZIEHL-NEELSEN.

TUBERCULOSIS

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Fue descrito por Robert Koch en el ao de 1882.

Se describen como bacilos inmviles, delgados, rectos o ligeramente curvos.

No presentan capsula ni esporas.

Es cido-Alcohol resistente con la tincin de Ziehl-Neelsen.

Son bacterias aerobias estrictas.

Crecen lentamente en medios de cultivo selectivos slidos.

Tiempo medio de generacin: 12 a 24 horas.

Son resistentes a cidos, lcalis y a la mayora de los desinfectantes.

Resisten a la desecacin y son sensibles a la luz solar.

Su envoltura celular es poco usual.

Partiendo del interior hacia el exterior:

Presenta una membrana citoplsmica cubierta por una capa extensa de peptidoglicanos unidos a
polisacridos.

Los cuales se encuentran esterificados con los cidos miclicos, formados por lpidos libres, glucolpidos
y peptidoglucolpidos.

Tal estructura, que le brinda una apariencia cerosa, le confiere una alta hidrofobicidad.

Resistencia a detergentes, a un buen nmero de antibiticos, a las tinciones habituales.

 Por otra parte, las cadenas de pptidos son antgenos responsables, de manera importante, de la
estimulacin de la respuesta inmune celular del hospedero.

Los cidos miclicos forman complejos con apariencia acordonada cuando se unen a carbohidratos.

Los sulfolpidos presentes inhiben la fusin fago-lisosomal y a menudo se consideran indicadores de cepas
virulentas.

TUBERCULOSIS

Enfermedad sistmica, crnica, que afecta principalmente al sistema respiratorio; es causada por el complejo
de Mycobacterium tuberculosis y se adquiere principalmente por va area.

Aunque se trata principalmente de una enfermedad pulmonar (85%), afecta tambin a otros rganos y tejidos.

Puede ser mortal si el paciente no recibe el tratamiento adecuado.

Actualmente, se considera un severo problema de salud pblica la presencia de cepas frmacorresistentes.

EPIDEMIOLOGA

La tuberculosis se mantiene como una de las enfermedades infecciosas de mayor mortalidad en el mundo.

De acuerdo a estimaciones, 9 millones de personas desarrollaron la enfermedad y 1.5 millones fallecieron.

(OMS 2014).

El principal agente causal de la tuberculosis en el humano es M. tuberculosis. En el ganado bovino, el agente

causal es M. bovis, y en menor proporcin, M caprae.

La transmisin zoontica de estos patgenos ocurre principalmente por el contacto estrecho con el ganado y el
consumo de productos de estos animales, tales como leche no pasteurizada.

De acuerdo con informacin del Sistema nico para la Vigilancia Epidemiolgica, Mxico registra cada ao unos
15 mil casos nuevos de tuberculosis pulmonar y alrededor de 2 mil defunciones.

PATOGENIA

La infeccin primaria ocurre habitualmente por inhalacin del microorganismo en aerosoles de una persona infectada.

Las micobacterias son opsonizadas con:

Molculas de complemento (C3b), inmunoglobulinas (IgG).

Protena de unin a manosas (MBP), y el factor surfactante A (SPA).

Esto permite a la bacteria ingresar al macrfago de manera eficiente.

La replicacin ocurre inicialmente en vas areas terminales dentro de clulas fagocticas.

Bronquiolos pequeos, alveolos (lesin primaria o tubrculo).

Los macrfagos los distribuyen a otras reas pulmonares y a ganglios linfticos regionales.

En los pulmones, las clulas T activadas producen citocinas, tales como IFN-g y factor de necrosis tumoral alfa (TNFa).

El IFN-g es esencial para la activacin de los macrfagos.

que producen entonces xido ntrico (NO), que contribuye fundamentalmente en el control de la
infeccin.
 Una vez que se monta una respuesta inmune celular, las bacterias disminuyen y se desarrollan
granulomas.

La caseificacin consiste en la licuefaccin de un tubrculo maduro, con la formacin de una cavidad en la que los
bacilos se multiplican.

Varios componentes de la pared celular de las micobacterias tienen actividad inmunomoduladora, entre ellos:

Un glicolpido fenlico, mansidos de fosfatidil-inositol.

La lipo-arabinomanana y lipoprotenas.

Estas molculas son reconocidas por los receptores Toll-like (TLRs).

Y otros receptores innatos en macrfagos y clulas dendrticas.

Que activan tanto la respuesta inmune protectora como la respuesta patognica.

CUADRO CLNICO

Alrededor del 10% de los individuos infectados desarrollan la enfermedad activa.

a mayor parte en el transcurso de los dos primeros aos posteriores a la adquisicin de la infeccin.

TUBERCULOSIS PRIMARIA:

Es la enfermedad de los sujetos que se infectan por primera vez

En general es leve y frecuentemente asintomtica.

Se ubica generalmente en el aparato respiratorio inferior.

Sus caractersticas principales son tos productiva crnica, fiebre en picos.

Sudoracin nocturna, decaimiento, anorexia y prdida de peso.

El tubrculo puede sufrir fibrosis y calcificacin, aunque algunas bacterias no proliferativas pueden persistir.

De manera alternativa, una lesin caseosa (en licuefaccin) puede abrirse y descargar su contenido.

Creando una cavidad que puede facilitar la dispersin, a travs de las vas linftica y hematgena a
tejidos diversos:

hgado, bazo, riones, hueso o meninges. Los signos y sntomas dependen del rgano o tejido afectado.

REACTIVACIN DE LA TUBERCULOSIS:

Ocasionada habitualmente por la reactivacin de micobacterias latentes en una lesin primaria (con
mayor frecuencia, de origen pulmonar).

TUBERCULOSIS MILIAR:

Ocurre cuando la bacteria se disemina a travs de la sangre, invadiendo muchos rganos a la vez.

Suele aparecer en pacientes muy inmuno-comprometidos, o con casi inexistente sistema inmune

DIAGNSTICO

BACILOSCOPA:

Examen microscpico para la deteccin de bacilos cido alcohol resistentes mediante la tincin de
ZiehlNeelsen.
 Presenta baja sensibilidad, ya que se requieren a l menos 5 000 bacilos/ml de esputo para que la
microscopa resulte positiva.

La sensibilidad es an menor en casos de tuberculosis extra-pulmonar, cuando existe co-infeccin con HIV y cuando la
infeccin es debida a micobacterias no tuberculosas.

La microscopa de fluorescenca ofrece un 10% ms de sensibilidad y ms costosa.

HALLAZGOS EN RADIOGRAFA DE TORAX:

Cavernas en lbulos superiores, condensaciones pulmonares.

Derrame pleural, imagen miliar.

Ensanchamiento mediastinal y cavernas en lbulos inferiores (frecuentes en inmunosuprimidos).

CULTIVO SLIDO O LQUIDO.

Aumenta la posibilidad de diagnstico en un 30 - 50% en relacin a las tcnicas de microscopa.

En pacientes que presentan 2 de tres series negativas, sujetos con VIH/SIDA.

PRUEBA CUTANEA DE TUBERCULINA (PPD).

Conocida como mtodo de Mantoux, s un mtodo estndar para determinar si una persona est
infectada por el microbio Mycobacterium tuberculosis.

La administracin y lectura confiable de esta prueba requiere de procedimientos, capacitacin,

supervisin y prcticas estandarizadas.

La prueba cutnea de la tuberculina se realiza inyectando 0.1 ml de derivado proteico purificado de la tuberculina en la
cara anterior del antebrazo.

La prueba de la tuberculina es una inyeccin intradrmica.

Cuando se aplica correctamente, la inyeccin debe producir una elevacin leve de la piel (una roncha)
de 6 a 10 mm de dimetro.

La reaccin a la prueba cutnea debe revisarse entre 48 y 72 horas despus de administrada.

La reaccin debe medirse en milmetros de induracin (rea palpable, elevada, endurecida o con
hinchazn).

No debe medirse el eritema (enrojecimiento).

NEGATIVO: Menor a 10mm

POSITIVO: Mayor a 10mm