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GENOMA
INTRODUCCIN
Desde que el hombre se ha dedicado al cultivo o ha criado animales, resulta obvio que cada
semilla o cada vulo fecundado ha de contener un plan o diseo para el desarrollo del organismo.
En la poca moderna, la ciencia de la gentica se desarroll alrededor de la premisa de que
existen unos elementos invisibles portadores de informacin, denominados genes, que son
distribuidos a las clulas hijas cuando la clula madre se divide. Por consiguiente, antes de
dividirse una clula debe de hacer una copia de sus genes para poder ceder a sus clulas hijas
una coleccin completa de ellos. Los genes de los espermatozoides y de los vulos transmiten la
informacin gentica de una generacin a la siguiente.
Hacia finales del siglo XIX, los bilogos haban reconocido ya que los transportadores de la
informacin hereditaria eran los cromosomas que resultan visibles en el ncleo cuando una
clula comienza a dividirse. Pero la evidencia de que es el ADN de estos cromosomas la
sustancia de la que estn formados los genes, se obtuvo mucho ms tarde a partir de estudios
sobre microorganismos. Hasta entonces se haba credo que slo las protenas presentaban una
complejidad conformacional suficiente como para ser portadoras de la informacin gentica. El
modelo del ADN propuesto por Watson y Crick en 1953 brind una explicacin satisfactoria de
la forma en que pueden operar los procesos relacionados con una molcula depositaria de la
informacin gentica: el almacenamiento de informacin, su replicacin, su expresin, la
mutacin y la recombinacin.
El presente captulo tratar acerca de la naturaleza de los genes y su expresin en dos pasos: la
transcripcin y la traduccin; asimismo nos ocuparemos de los mecanismos de regulacin que
controlan la expresin gentica.
EL CONCEPTO DE GEN
Existen diversos tipos de ARN: el ARNm (mensajero), el ARNr (ribosmico), el ARNt (de
transferencia) y los ARN pequeos. De todos ellos, tan slo el ARNm es portador de
informacin acerca de la secuencia aminoacdica de una protena; sin embargo todos ellos son
transcriptos de ADN. Por lo tanto, resulta necesario revisar la segunda definicin del gen.
Hoy se acepta que un gen es una secuencia de ADN transcripta que genera un producto con
funcin celular especfica.
Con la excepcin de ciertos virus, que contienen un genoma de ARN, el resto de los genomas
utiliza el ADN como depositario de la informacin gentica.
Sin embargo, debemos sealar algunas diferencias significativas en cuanto a la organizacin del
genoma en procariontes y eucariontes.
En primer lugar, el ADN procarionte se presenta como una nica molcula circular, en tanto
el ADN eucarionte es de estructura lineal. Adems las clulas eucariotas poseen usualmente
ms de una molcula de ADN en sus ncleos. Cada molcula corresponde a un cromosoma, cuyo
nmero es constante para todas las clulas de una misma especie (con excepcin de las
gametas).
El ADN eucarionte, por otro lado, se halla asociado ntimamente a diferentes protenas,
entre las cuales las histonas juegan el papel ms importante en lo que respecta al
empaquetamiento del ADN. Esta asociacin a histonas no se verifica en el ADN procarionte, por
lo cual se lo ha denominado ADN desnudo.
En las clulas eucariotas los cromosomas estn confinados en el compartimiento nuclear, donde
tiene lugar la transcripcin, mientras que la traduccin se localiza en el citoplasma; por lo tanto,
ambos procesos se encuentran separados espacial y temporalmente. Esto permite que los
transcriptos de ARN experimenten en el ncleo un proceso de maduracin previo a la
traduccin. En las clulas procariotas, donde no existe la envoltura nuclear, el ADN est en
contacto directo con el citosol, y los procesos de transcripcin y traduccin no se hallan
separados en espacio ni en tiempo. Los ARNs no son sometidos a modificaciones
postranscripcionales.
Los eucariontes tienen genomas mucho ms grandes que los procariontes. Aunque el valor C
(cantidad haploide de ADN de una especie) es muy variable entre los mismos eucariontes (ver
tabla 1), es siempre notablemente mayor que el de los procariontes. No necesariamente un
mayor valor C refleja una mayor complejidad gentica (vase en tabla 11.1 valores de
Salamandra y Homo sapiens).
En los procariontes se da una mxima economa de informacin: en casi todos los casos cada
cromosoma contiene una sola copia de cualquier gen particular, y, con excepcin de las
secuencias reguladoras y sealadoras, prcticamente se expresa todo el ADN. En cambio, en
toda clula eucariota parecera haber un gran exceso de ADN, o por lo menos de ADN cuyas
funciones se desconocen por completo. Por ejemplo, la estimacin del ADN innecesario en los
seres humanos llega a ser tan elevada como el 95% del genoma.
EL CDIGO GENTICO
Hemos visto que los genes son segmentos de ADN situados en los cromosomas, que se
comportan como unidades de transcripcin. Hemos sealado tambin que muchos de los ARN
transcriptos son productos celulares finales con funcin propia (al margen de las modificaciones
postranscripcionales que requieran para completar su maduracin), es decir que, en alguna
medida, la transcripcin es un paso terminal de la expresin de ciertos genes. Sin embargo,
sabemos que muchos otros genes contienen la informacin necesaria para especificar la
secuencia de aminocidos de las tantas protenas que una clula es capaz de sintetizar. En estos
casos, la transcripcin es tan slo el primer paso de la expresin gentica. Los ARN obtenidos,
ARN mensajeros, son, como su nombre lo indica, meros transportadores de informacin que an
debe ser decodificada, informacin que debe traducirse en la sntesis de una protena. La
traduccin es el segundo paso de la expresin gentica.
Muchas de las caractersticas del cdigo gentico fueron anticipadas en forma terica a partir
del descubrimiento del ARNm. Pero en el ao 1961, Nirenberg y Matthaei desarrollaron una
tcnica que abri el camino para que en los siguientes cuatro aos el cdigo gentico fuera
enteramente descifrado.
Podemos pensar al cdigo gentico como un idioma. Los idiomas utilizan una cierta cantidad de
letras, stas se combinan para formar palabras, y cada palabra tiene un significado, designa a
un objeto particular. En el cdigo gentico estn presentes todos estos elementos: las letras
son las 4 bases que forman las cadenas de ARN (A, U, C, G); las palabras son siempre
agrupaciones de 3 letras o tripletes de bases, llamadas codones en la molcula del ARNm, y los
objetos designados por dichas palabras son cada uno de los 20 aminocidos que componen las
protenas.
Por qu las palabras-codones se forman con 3 bases? Si cada palabra constara de 1 base,
habra 4 palabras, y si se formara con 2, las palabras posibles seran 16. En ninguno de los casos
alcanzaran para designar a todos los aminocidos. Pero se pueden obtener 64 combinaciones
diferentes si las bases se combinan de a 3; 64 codones son ms que suficientes para nombrar a
los 20 aminocidos.
Cul es la funcin de los 44 codones restantes? As como en cada idioma existen palabras
distintas con un mismo significado, el cdigo gentico emplea codones diferentes para nombrar
a un mismo aminocido. La mayora de los aminocidos estn codificados por ms de 1 codn:
existen codones sinnimos.
Esta flexibilidad del cdigo no debe confundirse con ambigedad: el cdigo no es ambiguo, en
tanto cada codn especifica a uno y slo a un aminocido. As no da lugar a error en el momento
de ser traducido.
Los codones que codifican aminocidos suman en total 61. Los 3 codones que no especifican
ningn aminocido, UGA, UAG y UAA, actan como seales de terminacin en la traduccin o
sntesis de protenas. Son llamados codones de terminacin o stop.
La tabla del cdigo que se halla a continuacin es vlida para los seres vivos ms diversos: el
hombre, las bacterias, las levaduras, las plantas. El cdigo gentico es universal, lo cual da
prueba de que todos los organismos comparten un mismo origen. Una de las contadas
excepciones a la universalidad del cdigo es el ADN mitocondrial, en el cual algunos codones son
ledos de manera diferente.
EL MARCO DE LECTURA
5-----GUUCCCAUA----3
Si comenzamos la lectura en la G situada hacia el extremo 5, este mensaje podra ser traducido
como una secuencia de tres aminocidos (las palabras del cdigo se leen de corrido, sin ningn
signo de puntuacin entre ellas):
Cul sera la traduccin del mensaje si en cambio la lectura se iniciara en la primera U desde el
extremo 5?
fenilalanina - prolina
Con este simple ejemplo resulta evidente que el sitio de inicio de la traduccin es de
importancia capital para la correcta traduccin del mensaje.
Los ARNm portan un codn, el AUG (codifica metionina), que es interpretado por los ribosomas
como codn de iniciacin. Este codn da el marco o cuadro de lectura que ser empleado de all
en ms. En adelante, el ribosoma se desplazar a lo largo del ARNm en bloques consecutivos de
tres bases, garantizando la lectura de los codones apropiados.
Las mutaciones que implican ganancia o prdida de un nucletido resultan ms destructivas que
las sustituciones, pues al modificar el marco de lectura, alteran por completo el mensaje.
Por ltimo hemos de sealar que el cdigo es ledo sin solapamiento. Esto significa que cada
nucletido del mensaje es utilizado como componente de un solo codn (aunque nuevamente
existen excepciones).
Fig. 11.2 - Solapamiento del cdigo
Es universal, debido a que sus mensajes son interpretados de la misma forma por todos
los organismos.
EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIN
El primer paso de la transcripcin es la unin de la enzima ARN polimerasa a una regin del gen
llamada promotor. El promotor es una secuencia especfica de bases con alta afinidad por la
enzima, por lo que proporciona a la misma su sitio de unin al ADN. Es asimismo una seal que
indica cul cadena se ha de transcribir. La transcripcin es asimtrica, pues usualmente slo se
transcribe una de las dos cadenas que forman cada gen. La cadena que acta como plantilla es la
cadena molde, negativa o no codificante; la hebra no transcripta, complementaria de la anterior,
se denomina antimolde, positiva o codificante. La ARN polimerasa se desplaza sobre la cadena
molde, recorrindola en direccin 3 => 5 o ro abajo y transcribindola a partir del nucletido
que el promotor seala como punto de inicio de la transcripcin . Este nucletido se nombra +1
y los siguientes, ro abajo, siguen la numeracin correlativa (+2, +3, etc.). Partiendo desde el
punto de inicio en la direccin contraria, es decir ro o corriente arriba, los nucletidos se
numeran 1, -2, etc.
La ARN polimerasa slo puede desplazarse y transcribir si previamente la doble hlice sufre un
desenrollamiento y fusin (separacin de las cadenas complementarias por ruptura de los
puentes de hidrgeno entre las bases). La misma enzima cataliza ambos procesos, generando
hacia el extremo 3 una burbuja de transcripcin, un tramo de aproximadamente 12
nucletidos de longitud, en el cual las cadenas permanecen desapareadas. La burbuja de
transcripcin aparenta avanzar ro abajo junto con la enzima, pues a medida que progresa la
fusin por delante de ella, la doble hlice se recompone por detrs.
Este procedimiento se repite tantas veces como nucletidos contenga el molde, de tal manera
que el ARN va creciendo en forma antiparalela a aqul, es decir, desde su extremo 5 (el que
qued libre en el primer nucletido) hasta su extremo 3 (que quedar libre en el ltimo
nucletido aadido). La direccin de la sntesis del ARN es 5 => 3.
Siempre los nucletidos recin incorporados al ARN forman una hlice corta ARN-ADN con su
plantilla. Esta hlice hbrida es transitoria, pues conforme el polmero se alarga por su extremo
3, el extremo 5 se separa del molde, el cual vuelve a emparejarse con su hebra de ADN
complementaria.
La transcripcin concluye cuando la ARN polimerasa alcanza una seal (una secuencia especfica
de bases del ADN) que acta como seal de terminacin.
Cabe aclarar que al describir la transcripcin en forma general, hemos omitido la mencin de
regiones reguladoras de los genes, bajo cuyo control se encuentran los acontecimientos
analizados. Este aspecto del tema ser desarrollado ms adelante en el mismo captulo.
-abre la hlice,
Una pirofosfatasa.
Una topoisomerasa I.
Fig. 11.7 - El proceso de transcripcin
EUCARIOTAS PROCARIOTAS
1- La transcripcin es llevada a cabo por tres 1- La transcripcin es llevada a cabo por un solo
tipos de enzima ARN polimerasa, cada una tipo de ARN polimerasa que sintetiza las
especializada en la sntesis de los distintos tipos diversas clases de ARN.
de ARN:
La ARN pol. bacteriana es un complejo proteico
La ARN polimerasa I transcribe genes del ADN oligomrico constituido por cinco subunidades.
nucleolar que codifican para los ARNr 45S Excepto la subunidad sigma (), el resto
conforma un ncleo enzimtico. Todo el
La ARN polimerasa II transcribe genes del complejo constituye una holoenzima capacitada
ADN no nucleolar que codifican para todos los para leer las secuencias promotoras.
ARNm y para la mayora de los ARNpn.
CAAT--GGGCCGGG--GGGCCGGG-TATA--inico
Promotor eucariota
Existe una sola ARN polimerasa procariota y tres ARN polimerasas eucariotas.
LA MAQUINARIA TRADUCCIONAL
ARNm (MENSAJERO)
Los ARNm son molculas lineales de cadena simple en donde residen las instrucciones para la
elaboracin de un producto proteico.
Los ARNm eucariotas y procariotas son esencialmente iguales en el sentido que presentan, una
vez listos para la traduccin, una secuencia continua de codones que se extienden desde el
principio al fin del mensaje gentico dictando con exactitud la secuencia lineal de aminocidos
de una cadena polipeptdica en particular. Esta secuencia se lee en la direccin 5' 3'. El
principio de la secuencia presenta un codn iniciador (casi siempre AUG), y el final de la
secuencia o regin codificadora es un codn de terminacin o stop (UGA, UAA, UAG).
Adems de la regin codificadora presenta sectores extra en los extremos 5' y 3' del
mensajero denominados secuencias directora y seguidora respectivamente. Estas regiones no
se traducen en protena aun cuando forman parte del ARNm transcripto del gen.
Fig. 11.8 - Correspondencia entre las regiones del gen eucariota, su transcripto maduro y la cadena
polipeptdica
ARNm EUCARIOTA
Algunos cambios consisten en el agregado de molculas en los extremos 5' y 3' llamados
capping y poliadenilacin.
Capping: sta es la denominacin del proceso por el cual se adiciona en el extremo 5' del ARNm
una molcula de 7 metil-guanosina (un nucletido metilado) a la que se conoce como cap (del
ingls, capuchn). sta molcula se agrega al ARNm naciente cuando ste alcanza,
aproximadamente, los 30 nucletidos de longitud. Por ser esta modificacin simultnea a la
transcripcin se la considera co-transcripcional. La cap impide la degradacin del ARNm
inmaduro por nucleasas y fosfatasas nucleares. Tambin participa en la remocin de intrones y
en el inicio de la traduccin.
o cola poli A , en el extremo 3' del ARNm. El ARNm presenta una secuencia de
nucletidos especfica AAUAAA conocida como seal de poliadenilacin. Una nucleasa corta
Las funciones de la cola poli A son: proteger el extremo 3' de la degradacin y ayudar a los
ARNm a salir del ncleo.
Carecen de cola poli A los ARNm de histonas, dado que como ya se mencion, no presentan la
seal de poliadenilacin. Otra excepcin la ejemplifican algunos genes que presentan ms de una
seal de poliadenilacin. Cuando as ocurre, el mismo gen puede ser transcripto en dos
productos diferentes, dependiendo de cul sea la seal reconocida.
Para que se lleve a cabo este tipo de maduracin del pre-ARNm se necesita una batera de
ribonucleoprotenas nucleares: las RNPpn ( snRNP, del ingls, small nuclear ribonucleoprotein).
Estas partculas ricas en uridinas y diversas protenas se denominan U 1, U2, U4, U5, U6 y se
combinan de a una por vez en los extremos de cada intrn (lindantes a sendos exones). El
complejo resultante del ensamblado de las distintas RPNpn se denomina espliceosoma. La
actividad enzimtica residira en los ARNpn del espliceosoma. stos seran los responsables de
reconocer las secuencias sealizadoras de corte, escindir a los intrones y empalmar a los
exones entre ellos, produciendo una molcula de ARNm maduro.
El corte de intrones y el empalme de exones deben ser muy exacto, pues de lo contrario un error pequeo,
causara un corrimiento del marco de lectura del ARNm. Los intrones son clivados del transcripto primario
por las RNPpn que reconocen cortas secuencias conservadas dentro del intrn y en los lmites con los
exones. Estas secuencias, muy similares en todos los intrones estudiados, son:
Secuencias conocida como sitio de ramificacin que se localiza en el interior del intrn
Estas secuencias participan en las reacciones de clivado y empalme que ocurren en dos etapas:
En la primer etapa, una RNPpn reconoce al sitio dador y otra se enlaza al sitio de ramificacin. El extremo
5' es clivado y ligado a un nucletido(A) del sitio de ramificacin.
En la segunda etapa, se da el reconocimiento del extremo 3 por parte de otra RNPpn y se produce el
corte en el extremo 3' del intrn, seguido por el empalme de los dos exones. As se libera el ARNm
maduro del espliceosoma. El intrn queda eliminado en forma de lazo y ser degradado posteriormente en
el ncleo.
Fig. 11.12 - Accin del espliceosoma
Como citramos anteriormente, la presencia del capuchn en el extremo 5' es requerida para
que las RNPpn trabajen, no as la cola poli A.
3- Los ARNm maduros son monocistrnicos, es decir el sector codificador dicta la secuencia
para una sola cadena polipeptdica.
1-Los ARNm procariotas presentan las secuencias codificadoras continuas, pues carecen de
intrones.
3-Muchos ARNm procariotas son policistrnicos, es decir que una sola molcula de ARNm
contiene informacin para varias protenas. Este ARNm contiene codones para la terminacin y
para la iniciacin de la traduccin entre las secciones codificadoras de protenas, de modo que
se traduce como varias molculas de protena distintas.
ARNt (TRANSFERENCIA)
Los ARNt son molculas "adaptadoras" ya que interactan por un lado con la cadena
polinucleotdica (ARNm) y por el otro con los aminocidos que formarn parte de la cadena
polipeptdica, as alinean a los aminocidos siguiendo el orden de los codones del ARNm.
Cada ARN t es una molcula de 70 a 93 ribonuclotidos. Enlaces puente hidrgeno entre sus
bases repliegan la molcula dando origen a una disposicin espacial en forma de trbol
(Fig.11.15). Cada brazo presenta una zona de doble cadena y un asa o bucle de cadena simple sin
apareamiento de bases. Interacciones posteriores doblan la estructura de trbol formando una
"ele".
Existen 64 combinaciones posibles en que las 4 bases pueden ordenarse en tripletes o codones. De ellos, 3
son codones stop. Los 61 tipos restantes codifican para los 20 aminocidos, existiendo para varios de ellos
codones sinnimos (ver tabla 11.2).
Los anticodones de los ARNt reconocen a los codones del ARNm, sin embargo no hay 61 tipos distintos de
ARNt porque no se requiere la complementaridad exacta entre los 3 nucletidos del codn y el anticodn.
En muchos casos, mientras coincidan las 2 primeras bases del codn, hay suficiente "balanceo"en la
tercera posicin para permitir el acoplamiento con ms de un tipo de nucletido en el anticodn, de manera
que existen aproximadamente 31 tipos de ARNt.
Por ejemplo el aminocido fenilalanina es codificado por dos codones sinnimo: UUU / UUC. Sin
embargo un solo anticodn AAG puede complementarse indistintamente con UUU y UUC,
realizando el trabajo de llevar a la fenilalanina al ribosoma para ser incorporada a la cadena
polipeptdica en formacin .
Todos los ARNt presentan un porcentaje significativo de bases poco frecuentes que surgen por
modificacin post-transcripcional de los cuatro ribonucletidos estndar A, G, C y U (Fig. 11.16).
Por lo hasta aqu expuesto, podemos concluir que el ARNt debe poseer varias propiedades
especficas:
Debe ser reconocido por una aminoacil ARNt sintetasa que lo una al aminocido correcto.
Debe tener una regin que acte como sitio de unin para el aminocido.
Debe tener una secuencia complementaria (anticodn) especfica para el codn del ARNm
correcto.
Las modificaciones que sufren los pre-ARNt son semejantes en procariotas y en eucariotas en
cuanto en ambos se producen escisiones y modificaciones qumicas, por ejemplo se elimina un
dinucletido 3' del precursor y se agrega el triplete CCA a los ARNt que no poseen todava esta
secuencia terminal. Tambin aparecen bases raras (Fig.11.16) por modificacin enzimtica de
nucletidos estndar del ARNt precursor.
Algunos genes para ARNt presentan un intrn que interrumpe la secuencia codificadora, l cual
es removido post-transcripcin. (Fig.11.17)
ARNr (RIBOSMICO)
Los ARNr, junto a protenas, son los componentes de los RIBOSOMAS. Los ribosomas y los
ARNt intervienen en la traduccin de la informacin codificada en el ARNm por lo cual los
primeros son considerados fbricas de protenas.
Cada ribosoma consta de dos subunidades: la subunidad MAYOR y la subunidad MENOR (Fig.
11.18)
Fig. 11.18 - Modelo tridimensional del ribosoma bacteriano visto desde distintos ngulos
La subunidad mayor contiene una depresin en una de sus superficies, en la cual se ajusta la
subunidad menor. El ARNm se inserta en el surco formado entre las superficies de contacto de
las subunidades. (Fig. 11.19).
En eucariotas los ARNr 18S; 5,8S y 28S son transcriptos de un mismo gen que codifica para un
pre-ARNr 45S. La sntesis del este transcripto primario se realiza en la zona fibrilar del
nuclolo a partir de la ARN pol I. Una vez obtenido el largo transcripto primario, se eliminan las
secuencias espaciadoras(tramos de ARN intiles para integrar la estructura ribosmica), las
que sern degradadas por enzimas. Las secuencias resultantes utilizables de ARNr (28S, 18S y
5,8S) son metiladas y junto con ARNr 5S extranucleolar, se ensamblan a protenas importadas
del citoplasma para conformar la subunidades ribosmicas (Fig. 11.22).
Fig. 11.22 - Procesamiento de los ARN 45S
Finalmente, las subunidades ribosmicas por separado y antes de completar sus respectivos
ensambles, son exportadas al citoplasma a travs del complejo del poro, concluyendo el
procesamiento de cada subunidad en el citosol.
Respecto del ARNr 5S no transcripto en el nuclolo, una vez sintetizado se incorpora al resto
de los componentes para conformar la subunidad mayor del ribosoma (Fig.11.23).
Fig. 11.23 - Ensamblaje de subunidades ribosmicas
Los ARN pequeos forman complejos con protenas especficas dando lugar a la formacin de
partculas ribonucleoproteicas (RNP).
a- En la primera fase se utiliza la energa de la hidrlisis del ATP para unir cada aminocido a un
AMP, con un enlace de alta energa. Esta reaccin da origen a un complejo intermediario
denominado aminoacil- AMP:
de aminocidos ;
2. TRADUCCIN
El mecanismo por el cual se traduce el mensaje del ARNm puede describirse en tres etapas:
Iniciacin
Elongacin
Terminacin
INICIACIN DE LA TRADUCCIN
En esta etapa se renen los componentes que constituyen el complejo de iniciacin, disparador
de la sntesis proteica. El complejo est compuesto por una molcula de ARNm, una subunidad
mayor, una subunidad menor, el ARNt iniciador (cargado con metionina en eucariotas y con N-
formilmetionina en procariotas) y factores proteicos de iniciacin (IF) .
2. El ARNm se acopla a la subunidad menor , para lo cual debe ser previamente reconocida la
cap y los nucletidos contiguos en el extremo 5' del mensaje.
3. La subunidad menor se desliza sobre el ARNm hasta localizar al codn de iniciacin AUG.
Este modelo de seleccin propuesto para eucariotas difiere del modelo de emparejamiento
descripto para procariotas, por el cual el acoplamiento de bases codn-anticodn iniciador se
producira por un emparejamiento de bases que preceden a AUG del ARNm con el extremo
3'del ARNr de la subunidad menor.
4. Una vez localizado y acoplado el anticodn al codn AUG del mensaje se establece la pauta
de lectura correcta para el resto de los codones que contenga la regin codificadora del ARNm.
Cabe destacar que en eucariotas, en cuanto se han reconocido la cap y los nucletidos aledaos
que preceden a AUG en el extremo 5' del mensaje, ningn otro codn AUG del ARNm ser
utilizado como lugar de iniciacin, por lo tanto de cada molcula de ARNm se sintetiza una sola
cadena proteica. Los ARNm eucariotas son monocistrnicos. (Fig. 11.13 ). En procariotas, dado
que la secuencia de iniciacin puede aparecer varias veces a lo largo del mensaje, pueden
originarse varias cadenas polipeptdicas a partir de un ARNm. La mayora de los ARNm
procariotas son policistrnicos. (Fig. 11.14 ).
Eucariotas Procariotas
Modelo de seleccin: Modelo de emparejamiento:
7. El aminocido iniciador se desacopla del ARNt del sitio P, liberando energa que se
utiliza en la formacin del enlace peptdico entre los dos aminocidos alineados (reaccionan el
carboxilo del primer aminocido con el grupo amino del segundo aminocido). Esta reaccin es
catalizada por una peptidil transferasa integrante de la subunidad mayor. Como consecuencia de
esta reaccin el ARNt iniciador del sitio P queda sin aminocido y el dipptido resultante queda
enganchado al ARNt del sitio A (peptidil ARNt).
La sntesis proteica requiere ms energa que cualquier otro proceso anablico. Para formar
cada enlace peptdico se consumen tres enlaces de alta energa:
POLIRRIBOSOMAS
En eucariotas la envoltura nuclear y la maduracin que sufren los ARNm impiden su traduccin
inmediata. El ARNm es "ledo" despus de que haya abandonado el ncleo a travs de los poros
nucleares. La traduccin es por lo tanto post-transcripcional.
LA FIDELIDAD DE LA TRADUCCIN
Las clulas procariotas pueden regular de varias formas la cantidad de protenas que van a ser
sintetizadas. No obstante se considera que la expresin gnica est regulada principalmente a
nivel de la transcripcin .
La mayora de los procariotas, tales como Esclerichia coli, estn expuestos a una gran variedad
de condiciones en su medio y exhiben una notable capacidad para adaptarse a las mismas, esto
es consecuencia de una gran habilidad para regular la expresin de genes especficos que
codifican aquellas molculas que responden a los estmulos de su entorno. As, esta capacidad de
un organismo para regular la expresin de sus genes incrementa su aptitud para crecer y dejar
progenie en cualquier tipo de condiciones ambientales.
Cules son los mecanismos por los cuales estos organismos regulan la expresin de genes en
respuesta a cambios en el ambiente?
En bacterias, los genes que codifican para la sntesis de enzimas que participan en una va
metablica, se agrupan en el cromosoma en un complejo denominado OPERN. Todos los genes
del opern actan como unidades coordinadas mediante un mecanismo de control descripto por
primera vez por Jacob y Monod en 1961.
Genes estructurales :son los genes que codifican para las enzimas de la va metablica.
Tienen la particularidad de situarse prximos entre s, de manera tal que son transcriptos en
una sola molcula de ARNm policistrnico. Cuando ste se traduce se obtienen las diferentes
enzimas de la va metablica.
Operador : es una secuencia de nucletidos que se interpone entre el promotor y los genes
estructurales, en donde se inserta una protena reguladora denominada protena represora.
La protena represora es codificada por el gen regulador, localizado en una regin distinta del
cromosoma bacteriano, aguas arriba del sitio operador.
Uno de los ejemplos de opern ms conocido es el opern lac. Este es un conjunto de genes que
intervienen en la utilizacin de la lactosa, por parte de la bacteria, como fuente de energa. Las
tres enzimas que intervienen en la va de degradacin de la lactosa son: la enzima permeasa , la
beta galactosidadsa y la transacetilasa.
El opern lac est formado por tres genes estructurales dispuestos en serie(z, y, a). La
trasncripcin de estos genes da origen a una molcula de ARNm que codifica para la tres
enzimas que participan de la misma va metablica.
El represor ejerce su influencia mediante control negativo, puesto su interaccin con el ADN
inhibe la expresin del opern.
El opern lac es un ejemplo de opern inducible, es decir aquel en el cual la presencia de una
sustancia especfica (en este caso la lactosa) induce la transcripcin de los genes estructurales.
El opern lac tambin se encuentra bajo control positivo. Este efecto se da cuando en el medio
hay glucosa, as la bacteria metaboliza este monosacrido ignorando cualquier otra fuente de
carbono disponible. Cuanto menor es la concentracin de glucosa en el medio, mayor es la
concentracin de AMPc , el cual tiene influencia en el "encendido" del opern lac.
El AMPc acta unindose a una protena fijadora de AMPc denominada CAP (protena activadora
de catabolitos). Cuando la concentracin de este complejo es alta (pues el medio contiene poca
glucosa), el CAP-AMPc se fija a un sitio especfico del promotor lac, aumentando la afinidad de
la regin promotora para la ARN polimerasa, lo que estimula la transcripcin del opern (Fig.
11.35).
Fig. 11.35 - Control positivo CAP-AMPc
Para que se exprese el opern lac deben darse dos condiciones en el medio: que est
presente la lactosa y que la concentracin intracelular de glucosa sea baja.
Existen otros tipos de operones en bacterias, como por ejemplo el opern triptofano, el que se
caracteriza por ser un opern reprimible.
El opern triptofano consiste en cinco genes estructurales que codifican para las enzimas
involucradas en la biosntesis del aminocido triptofano. Dichos genes se agrupan en una unidad
de transcripcin con un solo promotor y un operador. Un gen regulador se localiza fuera del
opern y codifica para la sntesis de una protena represora. Esta protena difiere del represor
lac en que se sintetiza en forma inactiva siendo incapaz de unirse al operador.
REGULACIN EN EUCARIOTAS
Las clulas eucariotas presentan estrategias ms complejas que las bacterias para regular la
actividad de sus genes. Los organismos eucariotas pluricelulares poseen el mismo genoma en
todas sus clulas, sin embargo los distintos tipos celulares se diferencian entre s porque
fabrican y acumulan distintos ARNm y por lo tanto distintas protenas . Por qu si el gen para
la hemoglobina est presente en el genoma de una clula epitelial, no se encuentra esta protena
ni su ARNm en el citoplasma de este tipo celular?. Cmo logran las clulas epiteliales mantener
"apagado" el gen para la hemoglobina? .
Para responder a estas preguntas debemos tener en cuenta no solo que el genoma eucariota es
ms complejo que el procariota, sino que existen ms niveles en dnde ejercer el control de la
expresin gnica. Cada etapa en el flujo de informacin propuesto por el dogma de la biologa
molecular:
Si bien los mecanismos ms importantes de control son los que actan a nivel
transcripcional, es importante destacar que pueden producirse regulaciones durante el
procesamiento o maduracin del ARNm o bien controlando: su pasaje a citoplasma o su
supervivencia en el citosol. En algunos casos los controles actan a nivel traduccional o
regulando la actividad de la protena.
CONTROL TRANSCRIPCIONAL
Silenciadoras (del ingls silencers) : secuencias que inhiben la transcripcin. Tambin pueden
hallarse muy distantes del promotor.
Estas protenas reguladoras interactan con regiones especficas del surco mayor del ADN
que corresponden a las zonas reguladoras del gen. La geometra de la molcula, y los
diseos caractersticos de los factores de transcripcin (Fig. 11.39), posibilitan dichas
interacciones las que se producen por uniones no covalentes del tipo puente hidrgeno,
uniones inicas e hidrofbicas.
Para comprender el mecanismo por el cual los factores de transcripcin regulan la expresin de
un gen eucariota, consideremos una analoga propuesta por Robert Tjian3 : " si el promotor
fuese el encendido de un coche, los intensificadores seran el acelerador y los silenciadores los
frenos, as las protenas activadoras pisaran el acelerador y las represoras pisaran el freno".
Entonces, la transcripcin de un gen depende de la actividad conjunta de los factores de
transcripcin unidos a las secuencias reguladoras.
Cada gen tiene una combinacin particular de intensificadores y silenciadores. Dos genes
distintos pueden compartir idnticas secuencias intensificadoras y silenciadoras, pero no
existen dos genes que posean la misma combinacin de estas secuencias reguladoras.
Las diferencias entre los distintos tipos celulares que comparten el mismo genoma se
deben a que cada clula transcribe y expresa distintas protenas. Esto es consecuencia de
que cada tipo celular contiene conjuntos de protenas reguladoras de la expresin de
diferentes genes.
Cmo logran los activadores y silenciadores regular la transcripcin si se encuentran a mucha
distancia del promotor del gen ?
La unin de los factores al sitio promotor provoca un cambio conformacional que pliega al ADN
entre las secuencias reguladoras y promotora, formando un asa. Este plegamiento permite
contactar a los factores especficos ,unidos a las regiones reguladoras con una o ms protenas
"blanco" asociadas al complejo de transcripcin basal. Cuando esto ocurre, se estimula la
transcripcin por parte de la ARN polimerasa la que se desplaza copiando la regin codificadora
del gen.
En cada tipo celular solo se expresan determinados conjuntos de genes mientras el resto del
genoma se mantiene "silencioso". Se supone que el grado de compactacin de la cromatina
desempea un importante papel en la expresin gnica.
Por ejemplo, en las clulas de mujeres, el cromosoma X condensado (el corpsculo de Barr)
presenta alto grado de metilacin en los CG de los promotores de los genes que porta,
inactivando as esta parte del genoma.
Se han descubierto formas de regulacin que implican el procesamiento del ARNm. En algunos
casos un mismo gen produce una protena en un tejido y un tipo distinto de producto proteico en
otro tejido.
El mecanismo por el cual puede obtenerse de un mismo gen dos protenas relacionadas se
denomina empalme alternativo. Este proceso consiste en unir covalentemente diferentes
combinaciones de exones del pre-ARNm obtenindose dos ARNm maduros con distinta
informacin y por lo tanto dos productos proteicos que difieren en uno o ms tramos de su
secuencia aminoacdica.
La traduccin del ARNm para la ferritina es regulada por una protena represora, la aconitasa,
cuya actividad depende de la concentracin de hierro libre en el citosol.
La vida media de las protenas puede ser considerada una forma indirecta de la expresin
gentica.
Dos factores son determinantes de la vida media de una protena citoslica: su correcto
plegamiento y la secuencia aminoacdica de su extremo aminoterminal.
Desde el momento que una protena emerge del ribosoma citoslico, chaperonas moleculares de
diversos tipos se unen a la cadena en sntesis, ayudndola a adquirir la conformacin nativa.
Esta unin transitoria evita que las protenas recin sintetizadas alcancen espontneamente un
estado de agregacin irreversible.
La va de la ubiquitina consta de varios pasos mediados por enzimas, que implican gasto de
energa (ATP).
Otra va compite con la ubiquitinizacin. Las protenas desnaturalizadas son conducidas por
chaperonas moleculares hasta una chaperona oligomrica o chaperonina. stas pueden
recuperar el plegamiento nativo de la protena, en tanto se unan a ella en una etapa previa o
temprana de la ubiquitinizacin. En caso contrario, la protena ubiquitinizada, ser captada por
un complejo enzimtico denominado proteasoma.
Fig. 11.43 - Accin de los proteasomas y chaperonas sobre las protenas citoslicas
Los proteasomas estn formados por ms de una docena de proteasas, que se organizan en
cuatro anillos apilados que delimitan un cmara central. En ambos extremos de este canal, se
localizan sendos complejos regulatorios, formados por diferentes ATPasas, y varios sitios de
reconocimiento de la ubiquitina.
C- Grado de metilacin
Control procesamiento del ARNm Empalme alternativo
Control transporte del ARNm Mecanismos que determinan si el ARNm maduro sale o no a
citosol
Control traduccional Mecanismos que determinan si el ARNm presente en el
citosol es o no traducido
Control de la degradacin delMecanismos que determinan la supervivencia del ARNm en el
ARNm citosol
Control de la actividad proteica Mecanismos que determinan la activacin o desactivacin de
una protena, como as tambin el tiempo de supervivencia
de la misma.
AUTOEVALUACIN
transcripcin, codn stop, anticodn, ARNt, codn, aminocido, codn iniciacin, ARNm, unin
peptdica, ARN polimerasa, ribosoma, traduccin, gen.
b)la secuencia de aminocidos de la cadena polipeptdica resultante. (Utilice la tabla del cdigo
gentico)
3) Qu sucedera en el funcionamiento del opern triptofano si se produjera:
a)una mutacin en el gen regulador y la protena represora perdiera afinidad por el triptofano.
a- una ARNpol
b- ribonuclesidos trifosfato
c- un ADN molde
b- codificador
c- operador
d- promotor
b- ADN molde
c- ARN pol II
a- peptidasa seal
c- peptidil transferasa
d- ARN polimerasa
d- simultnea a la transcripcin
a- ARNt y aminocido
10) La energa necesaria para que se produzca la unin peptdica proviene de:
GLOSARIO
Aminocido: molcula orgnica que contiene nitrgeno como NH2 y un grupo carboxilo
COOH, unidos al mismo tomo de carbono. Son las unidades estructurales de las protenas.
ARN monocistrnico: molcula de ARNm que codifica para una sola cadena polipeptdica.
ARN polimerasa: enzimas que catalizan la sntesis de ARN a lo largo de ADN durante la
transcripcin.
ARNr: tipo de ARN componente de los ribosomas. Se transcribe a partir del ADN del nuclolo.
Codn de iniciacin: codn AUG del ARNm que marca el punto de inicio de la traduccin.
Codn de terminacin: codones UAA,UAG y UGA que indican el final de la traduccin del
mensaje gentico que especifica para una producto polipeptdico.
cola Poli A: una secuencia de Adenosinas que se le une al ARNm en su extremo 3' durante el
procesamiento del ARN, lo que le permite inhibir la degradacin e intensificar la traduccin.
Cromatina: complejo de ADN, histonas y protenas no histnicas que se halla en el ncleo de las
clulas eucariotas. Material del que estn formados los cromosomas.
Dogma: punto capital de un sistema, ciencia, doctrina o religin, proclamado como cierto e
innegable. El dogma de la Biologa Molecular postulaba el flujo unidireccional de la informacin
gentica: ADN-ARN-protenas. Este postulado (mal llamado dogma, pues la Biologa es una
ciencia abierta) sufri algunas modificaciones.
Enlace peptdico: enlace covalente formado cuando el grupo amino de un aminocido se une al
grupo carboxilo de otro aminocido adyacente en una reaccin de deshidratacin.
Gen: secuencia de ADN transcripta que codifica un producto con funcin celular especfica.
Operador: corta regin del ADN de un cromosoma bacteriano que controla la transcripcin de
genes adyantes.
Opern: en un cromosoma bacteriano, grupos de genes contiguos que se transcriben en una sola
molcula de ARNm.
Peptidil transferasa: enzima ribosmica que cataliza la formacin del enlace peptdico.
Promotor: sitio del ADN en que se inserta la polimerasa de ARN para iniciar la transcripcin.
Represor: protena que se une especficamente a una regin del ADN impidiendo la
transcripcin de un gen adyacente.
Ribosoma: estructura compleja formada por una subunidad mayor y una pequea, cada una
compuesta por ARNr y protenas. Es el sitio de la traduccin en citoplasma, mitocondrias y
cloroplastos.
Ribozima: molcula de ARN con actividad cataltica.
Sitio aminoacdico: sitio del ribosoma al que ingresan el complejo aminoacil-ARNt cuyo
aminocido est a punto de ser agregado a la cadena polipeptdica en crecimiento.
Sitio peptidlico: sitio del ribosoma que contiene al ARNt cuyo aminocido acaba de unirse a la
cadena polipeptdica.
Topoisomerasa II ( ADN girasa): Enzima que cataliza el superenrrollamiento negativo del ADN
(desenrollado de la horquilla) utilizando ATP como cofactor como tambin relajar el
superenrollamiento positivo.
Traduccin: proceso por el cual los aminocidos se unen en una cadena polipeptdica en el
ribosoma, de acuerdo con la secuencia de nucletidos del ARNm transcripto del gen.
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