2QV2 Equipo 3

IPN
Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas
Unidad Profesional Lzaro Crdenas, Prolongacin de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas C.P.
11340 Delegacin Miguel Hidalgo Mxico, D.F.

Prctica No. 6 Hidrlisis de una protena y ensayos para protenas y aminocidos

Aguirre Morales Roberto, Ruz Valdez Sal.
Profesores: Rodrguez E. de los Monteros, Reyes Vargas Agustn, Morales Castellanos Jess.
Introduccin hidrlisis se pueden realizar hidrlisis parciales, en las cuales se
obtienen fragmentos peptdicos, as como aminocidos aislados; o
Los aminocidos son compuestos orgnicos que contienen las hidrlisis totales, donde se obtienen mezclas de aminocidos.
funciones cido carboxlico y amino, son las unidades estructurales de
protenas. Dos aminocidos se pueden unir en condiciones adecuadas, Objetivos
a travs de un enlace tipo amida tambin llamado enlace peptdico,
formando un dipptido. El dipptido puede incorporar un tercer Conocer la estructura general de las protenas y aminocidos.
aminocido, formando un tripptido, etc. Cadenas con ms de 50 Conocer las propiedades fisicoqumicas de los aminocidos.
aminocidos se denominan protenas. Realizar pruebas cualitativas para identificar aminocidos y
protenas por medio de sus propiedades fisicoqumicas.
Los aminocidos existen en disolucin acuosa principalmente en la
forma de un ion dipolar, o zwitterion. Materiales
4 vasos de precipitados de 150 ml 1 vaso de precipitados de
Los aminocidos son anfteros, ya que pueden reaccionar como cidos 600ml
o como bases, En disolucin cida acuosa, un zwitterion de aminocido 1 Embudo de vidrio Tapn de hule
es una base que acepta un protn para producir un catin; en disolucin Pinzas para tubo de ensayo Varilla de vidrio
bsica acuosa, el zwitterion es un cido que pierde un protn para Papel pH Manta de cielo
formar un anin. 10 tubos de ensayo Refrigerante
1 anillo de fierro Soporte universal
Las protenas son biopolmeros de los -aminocido, llamados as 1 rejilla de asbesto 1 mechero bunsen
debido a que el grupo amino esta enlazado al tomo de carbono 1 Bao Mara Papel filtro
adyacente al grupo carbonilo. Las propiedades fsicas y qumicas de
una protena estn determinadas por los aminocidos que la Reactivos
constituyen. Las subunidades individuales de los aminocidos se unen Rojo Congo al 0.1% Acetato de plomo al Valina
por medio de enlaces de amida llamados enlaces peptdicos. 10% 3mL
Nitrito de sodio al 5% HCl conc. 19mL Glicina
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles Ninhidrina al 3% HCl 0.1N 1mL Alanina
estructurales denominados: estructura primaria, estructura secundaria, Fenolftalena al 10% cido ntrico conc. Fenilalanina
estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de estas 10mL
estructuras informa de la disposicin de la anterior en el espacio. NaOH 0.1N 2mL NaOH al 10% 22mL Alcohol terbutilico
Sulfato de cobre al 2% grenetina Clara de huevo
La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena.
Nos indica qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el
orden en que dichos aminocidos se encuentran. Desarrollo Experimental

La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de Ya se tenan preparadas la solucin de hidrolizado de grenetina y la

aminocidos en el espacio. Los aminocidos, a medida que van siendo
enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la capacidad de
giro de sus enlaces y a interacciones intermoleculares, adquieren una
disposicin espacial estable, llamada alfa hlice y la hoja beta plegada.
La estructura terciaria es la forma en que las cadenas enrolladas se
doblan por diversas interacciones por puentes de hidrgeno, puentes
de disulfuro, fuerzas electrostticas, etc. dando tambin determinadas
conformaciones a las protenas.
La estructura cuaternaria es el resultado de la agrupacin de dos o ms
unidades plegadas.
Las protenas se pueden hidrolizar con soluciones diluidas de cidos
minerales a ebullicin suave; dependiendo de las condiciones de
solucin de hidrolizado de grenetina a pH neutro, sol. A y B
respectivamente.
En un vaso de 100 ml se coloc 50g de grenetina, se agreg 20 ml de
agua destilada y se agito para solubilizar y se etiqueto como sol. C.
Se puso clara de huevo en un vaso de pp y se agito por 10 segundos y
se agreg 100 ml de agua y se filtr con un trozo de manta de cielo, se
etiqueto como sol. D.
En 1 tubos de ensayo se coloc 2ml de sol. A y 2ml de sol. D en otro
se agreg 5ml de cido ntrico conc. Y se calent a bao Mara, se dej
enfriar y se agreg gota a gota NaOH al 10% hasta pH bsico.
En un tubo de ensayo se coloc 1ml de sol. A, 1ml en otro tubo de sol. Cromatografa
D; y 2ml de agua destilada en un tercer tubo, se agreg 2.5ml de NaOH Solucin Rf Sol. B
al 10% y 0.5ml de acetato de plomo al 10% y se calent por ebullicin. Alanina al 1% 0.2 Presente en la sol. B

En 6 tubos de ensayo se coloc en cada uno 0.5ml de agua , 0.5ml de Fenilalanina al 1% 0.5 Presente en la sol. B
sol. C, 0.5ml de sol. D, 0.5ml de sol. A, 0.5ml de sol. Albmina todos Glicina al 1% 0.1 Presente en la sol. B
Valina al 1% 0.425 Presente en la sol. B
mas 0.5ml de NaOH al 10% y un tubo con 0.5ml de sol. A, a cada uno
Tabla 7
se agreg 2ml de CuSO4 al 2% y se agit.

Se coloc en tubos diferentes 0.5ml de agua, sol. B, sol. C, sol. D, y

sol. Al 1% de valina y a cada uno 0.5ml de sol. De ninhidrina al 3% y Discusin
se calent a bao Maria 5 minutos.
En la tabla 1 se puede observar que la prueba fue positiva para ambas
En 4 tubos de ensayo se coloc 1.5ml de HCl conc. Y a cada uno se soluciones, sin embargo para la sol. A se present mayor coloracin
agreg 1ml de Sol. A, 1ml de Sol. C, 1ml de sol. D y uno sin protena, debido a la disponibilidad de los anillos aromticos que en la sol. D
a cada uno se agreg 1ml de sol. De nitrito de sodio al 5%. donde estaban impedidos debido a la estructura de la protena de
albmina.
En 1 tubo de ensaye se coloc 1ml de sol. B y en otro 1 tubo 1ml de
agua, se agreg 3 gotas de rojo Congo a cada uno y se adicion gota a En la tabla 3 podemos observar que la sol. A (hidrolizado de grenetina)
gota HCl 0.1N hasta el vire, se repiti usando fenolftalena y NaOH dio negativo para la reaccin de Biuret, lo que nos indica que la
0.1N. hidrolisis fue total y no haba presencia de enlaces peptdicos.
Se realiz una cromatografa en placa fina de sol. B, sol., de valina, En la cromatografa se pud encontrar que los aminocidos patrn
glicina, fenilalanina y alanina al 1%, con alcohol terbutilico-agua 3:1 alanina, fenilalanina, glicina y valina efectivamente se encontraban
como fase mvil. como unos de los componentes aminoacidos de la grenetina.
Resultados Conclusin
Reaccin Xantoproteca Se conocieron reacciones que nos permitieron identificar a
Sol. A Positiva aminocidos y protenas por sus caractersticas estructurales como la
Sol. D positiva presencia de grupos funcionales.
Tabla 1

Reaccin de precipitacin
Hidrolizado de grenetina Positiva Referencias
Sol. D Positiva
Tabla 2 Lehninger, A.L.; et. al. 2009. Principios de bioqumica. 5
Edicin. Editorial Omega, S.A. Espaa. pp. 71-84, 92-95,
Reaccin de Biuret 113-120, 123.
Sol. A Negativo
Sol. C Positiva Carey A.F.; Guiliano.RM. 2014. Qumica Orgnica. 9
Sol. D Positiva Edicin. Editorial McGraw-Hill/interamericana Editores,
Tabla 3 S.A. de C.V. Mxico. pp. 1031-1038.

Reaccin con Ninhidrina Graham Solomons, T.W. 2000. Qumica Orgnica. 2

Sol. B Positiva Edicion. Editorial Limusa S.A. de C.V. Mxico. pp. 1301-
Sol. C Negativa 1306, 1318-1321.
Sol. D Negativa Shriner, R.L.; Curtin, D.Y.; Fuson, R.C. 1999.
Sol. Valina al 1% Positiva Identificacin Sistemtica de compuestos Orgnicos.
Tabla 4
Editorial Limusa S.A de C.V. Mxico. pp. 158
Reaccin con cido nitroso http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/
Sol. A Positiva Chp05a.pdf
Sol. C Negativa
Sol. D Negativa
Tabla 5

Accin reguladora de aminocidos

Sol. indicador Color (i) HCl 0.1N Color
(f)
Agua Rojo Congo Rojo 1gota Azul
Sol. B Rojo Congo rojo 2 gotas Azul
NaOH 0.1N
Agua Fenolftalena Translucido 1 gota Fucsi
a
Sol. B fenolftalena translucido 2 gotas fucsia
Tabla 6