Sei sulla pagina 1di 11

CROMATOGRAFIA DE GASES

Generalidades:

La cromatografa de gases es, esencialmente un proceso fsico de separacion de


los componentes de una mezcla, el cual se basa en la diferencia de velocidades
de migracin de cada componente, lograndose una distribucion diferencial entre
do sfases: un lecho o fase estacionaria y una fase movil o gas inerte. El metodo
fue desarrollado fundamentalmente por los cientificos ingleses A.T. james y A:J.P.
Martin hacia 1941 y desde 1950 hsata la fecha ha tenido un gran desarrollo.

Existen dos modalidades de cromatografa de gases: la cromatografa gas solido


(CGS), en la cual la fase estacionaria es un solido y el proceso de separacion
supone equilibrios de adsorcion gaseosa. En la cromatografa gas liquido (CGL),
la fase estacionaria e sun liquido que recubre un soporte solido inerte y en este
caso ocurriran equilibrios gas liquido. Esta ultima modalidad es la mas empleada.

El equilibrio durante la distribucin diferencial entre las dos fases, se puede


describir en forma cuantitativa por medio de una constante dependiente de la
temperatura: el coeficiente de particin.

K = Cs / Cm donde

Cs = concentracin total del soluto en la fase estacionaria y


Cm = Concentracin del soluto en la fase mvil

En el caso ideal, esa razn es constante para una amplia gama de


concentraciones, es decir que Cs es proporcional a Cm, pero en algunos casos la
relacin no es lineal.

El proceso esencialmente consiste en transportar una muestra en fase de vapor,


con un gas inerte o fase mvil, a una determinada presin y temperatura, desde el
sitio de inyeccin, hasta la fase estacionaria (columna). All tiene lugar la
separacin y luego los componentes separados (eludos) llegan la detector, sitio
en el que se origina una seal electrica, la cual es registrada como un
cromatograma, o llega a un integrador que digitaliza la seal, grafica el
cromatograma, detecta e integra las seales y entrega un informe (Figura 1.)
.

Figura 1. Componentes Basicos de un Cromatografo de Gases

3. Fase Movil o Gas Portador:

Los gases mas frecuentes empleados como fase movil son: helio, hidrogeno,
nitrogeno, argon, y una mezcla importante, argon/metano. Para su eleccion,
fundamentalmente debe tenerse en cuenta la columna y la naturaleza del detector
que se va a utilizar. Por ejemplo, para una columna capilar, se escogera por lo
general helio y para un detector de conductividad termica se eligira helio o
hidrogeno; frente al nitrogeno, este detector muestra baja sensibilidad. Un
detector de captura de electrones, requiere de una mezcla de argon-metano. El
gas debe ser INERTE, SECO y PURO.

La humedad interactua con los materiales de la columna, produciendo falsos


picos, lo cual se evidencia mejor cuando se usa un programa de temperatura;
ademas reduce la vida de la columna.

Las impurezas causan problemas semejantes a la humedad, las mas frecuentes


son oxigeno, hidrogeno, nitrogeno e hidrocarburos. Se han establecido limites
para estas impurezas, y los gases utilizados deben ser cromatograficamente
puros, del 99.999% de pureza; deben ser regulados de manera de obtener un flujo
y una presion constantes.

4. Sitio o punto de inyeccion:

Permite introducir la muestra sobre el flujo del gas portador, para ser transportada
a la columna. Esta parte de la columna esta construida en acero inoxidable, lo
cual puede producir degradacin de la muestra. En algunos diseos, se usan
pequeas tuberas de vidrio (glass-line), con lo cual se garantiza la estabilidad de
la muestra.

El calentamiento de este sitio, a una temperatura adecuada, permite la


vaporizacin de la muestra, la cual es transportada a la columna en el caso de
columnas empacadas, o subdividida antes de llegar a la columna, en el caso de
columnas capilares. La muestra puede colocarse con una microjeringa o
colocarse directamente la forma slida o gaseosa. La microjeringa, permite
colocar la muestra a travs del tapn de caucho o septum. El volumen de muestra
es de 1 a 5 L para columnas empacadas, y aproximadamente 0.005 l para
columnas capilares.

5. Columna:

La columna es una de las partes importantes del cromatgrafo; existen dos clases
de columnas, las empacadas y las capilares. Consisten de un espacio geomtrico,
generalmente un tubo de metal o vidrio, el cual contiene un soporte inerte
recubierto con la fase liquida estacionaria (GLC). All tiene lugar la separacin de
la muestra en sus diferentes componentes.

Se debe tener un amplio conocimiento sobre los materiales, tamano, fases


estacionarias y sobre la eficiencia, Los materiales usados para las columnas
deben ser inertes, resistentes a la temperatura de trabajo, impermeable y flexibles.

Los materiales pueden ser: acero inoxidable, aluminio, cobre, vidrio o teflon; los
mas usados osn vidrio y acero inoxidable, considerandose el vidrio como el mejor,
por ser inerte, impermeable, y resistir la temperatura de trabajo; tiene la
desventaja de ser muy fragil. Es el material de eleccion para el analisis de
pesticidas y de esteroides. La forma y las dimensiones de la columna son muy
variadas. Las columnas empacadas tienen un diametro interno de 1/4 a 1/8 de
pulgada y una longitud de 6 a 20 pies. Las capilares tienen un diametro de 0.01 a
0.02 pulgadas y una longitud hasta de 30 metros.

5.1. Columnas Empacadas

a. Cromatografia Gas-Liquido:

Fase Estacionaria:

En la cromatografa gas-liquido, la fase estacionaria esta constituida por una


pelcula delgada de un liquido viscoso o fase liquida, de naturaleza qumica
definida, similar a la del compuesto en estudio, la cual recubre partculas slidas
inertes de forma y tamao caractersticos, denominadas soporte slido. Tanto el
soporte slido como la fase liquida deben tener propiedades y condiciones para
ser empleadas como tales.
Soporte Slido: La finalidad del soporte slido en el empaque de una columna, es
proporcionar una gran rea superficial sobre la cual se fija la fase liquida. Debe
reunir las siguientes propiedades:

Gran rea superficial por unidad de volumen, facilidad de manejo para el llenado
de la columna, tamao y forma de partcula uniformes, preferentemente esfrico,
inerte por naturaleza o por desactivacin y buena resistencia mecnica.

El tamao de partcula, generalmente, se define de acuerdo al dimetro de la


columna, por ejemplo:

Dimetro de la columna Tamao de partcula

1/8 de pulgada 80 -100 m


1/4 de pulgada 60 80 m

En general, entre mas pequea sea la partcula, mayor ser la eficiencia de la


columna, sin embargo para un tamao por encima de 120 (partculas muy
pequeas), aumenta excesivamente la presin para el flujo de la fase mvil.

Los soportes solidos mas ampliamente usados son: la tierra de diatomceas, las
esferas de vidrio y el tefln.

La tierra de diatomaceas, se conoce con varios nombres registrados como


Kieselgur, Celite o Chromosorb. Tal ves el nombre mas empleado es el de
Chromosorb, el cual va acompaado de varias letras como W, P, G y otras, las
cuales indican diferencia en su forma de obtencin, diferencias que inciden en sus
caractersticas fsicas y qumicas. Estos soportes, pueden ser tratados con el
objeto de eliminar grupos polares y obtener as un soporte inerte, para evitar
perdidas del compuesto en estudio o las colas o asimetra en el pico
cromatogrfico.

Las iniciales AW, significan que el Chromosorb ha sido sometido a un tratamiento


o lavado acido; NAW: no lavado con acido; HMDS: soporte tratado con
hexametildisilazano para bloquear los grupos hidroxilo y obtener los silil teres;
AW DMCS: Chromosorb W, P, G lavado con acido y luego tratado con
dimetilclorosilano. El resultado es un soporte muy inerte HP de alta eficiencia.

Las esferas de vidrio se usan para compuestos muy polares y se recubren con
pelculas muy delgadas de fase liquida.

El tefln, es uno de los polmeros usados como soporte slido, es difcil de recubrir
y no debe usarse mas del 10% de fase liquida para su recubrimiento.
Fase Liquida:

Las propiedades de una buena fase liquida son las siguientes:

- Baja Volatilidad.
- Punto de ebullicion por lo menos de 100C por encima del punto maximo de
operacion de la columna.
- Buena estabilidad termica.
- Quimicamente inerte
- Presentar propiedad solvente frente a los compuestos que se van a separar.

Existen por lo menos 200 fases liquidas conocidas y la eleccion adecuada es dificil
de lograr. En terminos generales, debe escogerse una fase liquida cuyas
caracteristicas fisicoquimicas sean semejantes a la de la muestra que se va a
analizar y debe ser compatible con el soporte solido.

Como ejemplos de fases liquidas corrientemente empleadas, de las cuales se


encuentra informacion en la literatura, se tienen las siguientes:

Hidrocarburos: - Escualeno
- Apiezon L

Polietilenoglicoles: - Carbowax 400, 600, 1500

Siliconas: - OV 1, OV 17, OV 101, etc. (metilfenilsiliconas)


- SE 30 (metilsiliconas)

Varios: - Dimetilsulfonato (DMS) y otros.

El porcentaje de fase liquida usada para el recubrimeinto del soporte solido, varia
entre el 3 y el 10% para columnas analiticas y puede llegar hasta el 25% para
columnas preparativas. El porcentaje esta dado en peso, respecto a la proporcion
del soporte solido.

Se estan usando bastante los copolimeros porosos del divinilbenceno y del


estireno, con otrosn monomeros incluidos en su macromolecula. Comercialmente
se conocen como Poropak o Chromosorb de la serie 100. Estos actuan a la vez
como soporte solido y como fase liquida.

Para lograr columnas eficientes, es neceario que esten bien empacadas con un
soporte solido uniforme recubierto con una pelicula delgada y uniforme de fase
liquida. Peliculas gruesas, disminuyen la eficiencia y las peliculas delgadas la
aumentan, cuando aumenta el flujo de la fase movil.

b. Cromatografia Gas-Solido (CGS)


En esta clase de cormatografia se usan columnas empacadas con materiales
solidos adsorbentes como fase estacionaria. Los mas comunes son charcoal
(carbon activado), silica gel, zeolitas sinteticas, tamices moleculares y los
polimeros porosos recientemente desarrollados. Esta clase de cromatografia se
usa especilamente para compuuestos muy volatiles.

5.2. Columnas Capilares:

El desarrollo de estas columnas, se conoce desde 1956 y estan constituidas por


tubos aproximadamente de 30 m. de longitud y de un diametro de 0,01 a 0,02
pulgadas, dobladas en forma apropiada de acuerdo al diseno del cromatografo. El
material puede ser metalico o de vidrio tratado. Como ejemplos de las columnas
capilares se conocen las columnas de Golay, las de Scott y otras.

La de Golay van recubiertas en su interior con una pelicula delgada de fase liquida
y las de Scott llevan una capa fina de soporte solido recubierta de fase liquida. En
estas columnas la fase movil puede fluir libremente, lograndose una caida de
presion notoria. Se usan para el analisis de trazas.

5.3. Cuidados y Precauciones con las columnas:

Las columnas nuevas, deben ser acondicionadas por lo menos durante 48 horas,
para lo cual se asegura la columna a la salida del inyector, pero no se asegura la
detector. Se hace circular la fase movil a un flujo aproximado de 17 ml/min. Y se
calienta la columna a una temperatura 50 grados por debajo del valor maximo
indicado para cada columna. Como norma de seguridad, debe hacerse circular la
fase movil antes de empezar el calentamiento de la columna. Nunca debe
suspenderse el paso de la fase movil, antes de enfriar la columna.

6. Detectores:

Un detector usado para un cromatografo de gases no es mas que un dispositivo a


traves del cual circula la fase movil, a lo cual responde el detector generando una
senal leectrica cuando ocurre un cambio en la composicion de la fase movil. Su
disenos e fundamenta en la medida de las propiedades fisicoquimicas de los
compuestos con estructura quimica definida.

Los detectores mas conocidos son: de conductivida termica, de ionizacion (de


llama de hidrogeno FID, de nitrogeno y fosforo NPD, de captura de electrones),
de fotometria de llama, el termoionico (llama alcalina) y el espectrometro de
masas.

El detector debe reuinir unas caracteristicas especiales, las cuales se pueden


clasificar en primarias y secundarias. Las primarias son: respuesta, sensibilidad,
selectividad y linealidad; las secundarias son: simplicidad, costo, disponibilidad y
durabilidad.
Respuesta: es la senal producida por la muestra y teoricamente depende de la
concentracion, aunque tambien de la naturaleza de la muestra.

Sensibilidad: corresponde a la pendiente de la recta cuando se grafica la


respuesta vs. La concentracion. Generalmente se expresa en milicoulombios
por gramo para detectores de ionizacion, o milivoltios-mililitro por gramo para
detectores de conductividad termica.

Sensibilidad y ruido: todo circuito electrico genera un ruido, es decir, una


respuesta debida a cualquire variacion en el sistema, diferente a la presencia de
una muestra. Si el nivel de ruido es muy alto con relacion a la cantidad de
muestra presente, no se puede diferenciar la respuesta.

Cuando la relacion senal-ruido (S/N) e igual a 1 e simposible detectar la respuesta


de la muestra. La minima cantidad detectable sera la que corresponda a una
relacion senal-ruido igual a 2.

Linealidad: es la region de la respuesta, en la cual la senal del detector es


directamnete proporcional a la concentracion de la muestra. Es muy importante
encontrar para cada detector, la zona de linealidad de la respuesta.

Selectividad: es la propiedad que tiene el detector para responder a


determinados tipos de compuestos; por ejemplo, el detector de ionizacion NPD
solamente responde a compuestos que contienen N o P, en cambio el detector de
conductividad termica es universal.

6.1. Clases de Detectores:

Detector de Conductividad Termica: es uno de los primeros detectores empleados


en cromatografia de gases, de facil uso, durable, de aceptable sensibilidad, de tipo
universal, no destructivo, especialmente empleado para detectar agua, monoxido
de carbono, anhidrido carbonico, nitrogeno y otros gases. Se conoce con
diferentes nombres como: detector de filamento caliente, catatometro y otros.
Existen varios disenos de este detector.

Consiste en un filamento metalico, colocado dentro de un cilindro metalico. Al


calentar el filamento, este alcanza una temperatura determinada, la cual puede
variar al pasar la fase movil, debido al choque de las moleculas de la fase movil
con el filamento. La perdida de calor es constante, si se mantiene constante el
flujo de la fase movil y la temperatura del detector.

Entre mas liviano sea el gas portador, es mejor conductor de calor (helio,
hidrogeno). Una vez estabilizada la senal llega al detector la fase movil mas las
moleculas del compuesto separado por la columna, ocasionando un desequilibrio
en la senal electrica, por aumento de la temperatura, debido a que las moleculas
del compuesto separado son mas pesadas que las del gas portador, dificultandose
su interaccion con el filamento. La senal generada (aumento de la resistencia) es
proporcional a la concentracion de la muestra.

El detector de conductividad termica es el menos sensible de todos, no es


selectivo y muestra una linealidad adecuada. Para que sea eficiente, deben
seleccionarse convenientemente las condiciones de funcionamiento como:
seleccion del gas portador, la velocidad de flujo, la temperatura y la corriente,

Conductividad termica relativa de algunos gases respecto al hexano:

GAS CONDUCTIVIDAD TERMICA


RELATIVA
Tetracloruro de 0.44
Carbono
Benceno 0.88
Hexano 1.00
Argon 1.04
Nitrogeno 1.50
Helio 8.32
Hidrogeno 10.68

Los detectores de conductivida termica, requieren un flujo minimo de gas portador


entre 10 y 30 ml/min. Para su buen funcionamiento.

La temperatura de trabajo debe estar entre 25 y 50C por encima de la temperatura


de la columna. Un sobrecalentamiento disminuye la vida del detector y puede
causar descomposicion de la muestra. Siempre se debe abrir el paso de gas
portador antes de calentar el detector, y no se debe suspender el flujo hsta que se
halle a la temperatura ambiente.

Detector de Ionizacion de Llama: El detector de ionizacion de llama de hidrogeno


(FID), es uno de los mas empleados por sus sensibilidad a la gran mayoria de
compuestos organicos y el amplio intervalo de respuesta.

Consiste en una pequena llama de hidrogeno-aire, rodeada de un campo


electrostaico. Esta llama alcanza una temperatura determinada y al pasar la fase
movil, el gas ioniza, originando una corriente electrica. Cuando la fse movil
transporta el compuesto separado por la columna, si este tiene atomos de carbono
facilmente oxidables, ioniza originandose un flujo de electrones, lo cual es funcion
de la concentracion.

El cambio en la corriente elctrica generada por la presencia de iones, es


amplificado, originandose una respuesta. El detector no es sensible a la presenia
de gases como monoxido de carbono, anhidrido carbonico, nitrogeno ni al agua.
Requiere un volumen pequeno de muestra, lo cual es una ventaja cuando se
trabaja con columnas capilares (0.01 a 0.02 L).
Con este detector se usan fases moviles como helio, argon, nitrogeno; presenta
buena sesibilidad y linealidad. Debido a su buena sensibilidad, debe tenerse
cuidado con la concentracion de la muestra, con la pureza de la fase movil y con el
estado de las columnas para evitar su contaminacion. Es un detector de tipo
destructivo.

Detector de Ionizacion para fosforo y nitrogeno (NPD): Es un detector de


ionizacion de llama, muy especifico para compuestos organicos que tengan
nitrogeno o fosforo. Se iferencia del anterior, en que en su diseno incorpora una
esfera de rubidio, la cual aumenta la poblacion de iones, haciendolo mas sensible.
Su manejo requiere mucho cuidado.

Detector de Captura de Electrones (ECD): este detector de ionizacion, lleva en su


diseno una pequena lamina recubierta de material radioactivo, generalmente, Ni 67,
el cual emite particulas B. Estas particulas ionizan la fase movil que esta fluyendo,
originando una masa de electrones de mediana energia, presentandose una
diferencia de potencial. La fase movil empleada con este detector, es una mezcla
de argon-metano de alta pureza:

Ar + B Ar+ + e-
CH4 + B CH4+ + e-

Cuando la fase movil transporta el compuesto separado por la columna y este


tiene afinidad por los electrones, los captura disminuyendo la senal electrica. Se
origina una respuesta negativa, la cual es convertida internamnete para dar lugar
al pico cromatografico conocido.

Espectrometro de Masas: Puede considerarse como el detector mas universal.


Permite obtener el espectro de masas de cada uno de los compuestos separados
por la columna, con lo cual la identificacion se facilita.

7. Aplicaciones:

La senal obtenida despues de realizar el proceso de separacion en las


condiciones optimas (columna apropiada, tamano de muestra, flujo de la fase
movil, temperatura constante o programada, y el detector adecuado), puede
emplearse para fines cualitativos o cuantitativos.

7.1. Analisis cualitativo:

a. El tiempo de retencion se puede usar como una ayuda para identificar un


compuesto, siempre que se trabaje en las mismas condiciones con patrones
conocidos. Usualmente, la muestra problema y los patrones se trabajan
cambiando condiciones, como la temperatura y las columnas. Si los tiempos
de retencion coinciden pueden tratarse de los mismos compuestos.

b. Identificacion usando grafiacas de series homologas. Estas se obtienen


graficando el logaritmo del tiempo de retencion, contra el numero de carbonos
de los compuetos de la serie, el numero de grupos metilenos, el punto de
ebullicion, etc.

c. Indice de retencion. Los compuestos pueden ser identificados por el indice de


retencion de Wehrli y Kovats. Por definicion, el indice de retencion para una
parafina normal, es igual a 100 veces el numero de atomos de carbono de la
muestra independientemente de la naturaleza de la columna y de las
condiciones del analisis. Un indice de retencion de 550, significa que para
unas condiciones dadas la sustancia aparecera entre el n-pentano y el n-
hexano.

El indice de retencion para una parafina X es igual a:

Ind. Ret. = falta ecuacion

X: compuesto en estudio.
n: parafina con n atomos de carbono.
n + 1: parafina con n + 1 atomos de carbono.

7.2. Analisis Cuantitativo:

El area y la altura del pico cromatografico, son proporcionales a la concentracion.

Existen diferentes modaliddes para calcular el area del pico; si se hace


matematicamente, la medicion mas exacta se logra empleando la expresion:

A = h max x W b / 2

Sin embargo, usualmente se calcula mediante la expresion:

A=h x Wh

Los porcentajes de exactitud, encontrados de acuerdo a la expresion empleada


son los siguientes:

hxWh ---------- 93.9 %


hxWb/2 ---------- 79.9 %
h max x W b / 2 ---------- 96.9 %
Si el instrumento dispone de un integrador digital, este recoge toda la informacion
a medida que va llegando la muestra la detector, en funcion del tiempo,
obteniendose asi mayor exactitud en el valor del area.

Con el objeto de eliminar los errores en al inyeccion de la muestra, no se usan las


areas ni las alturas absolutas. Se usan medidas relativas, para lo cual se adiciona
a la muestra o al patron, un volumen constante de unc ompuesto conocido como
patron interno. Se relaciona el area de la muestra, o de la sustancia patron, con el
area del patron interno y este valor es el que se usa para la cuantificacion.

a. Curva de Calibracion

Se debe disponer de una serie de concentraciones crecientes de la sustancia


patron, a las cuales se les adiciona un volumen constante del patron interno, y se
relacionan las areas o las alturas. Se grafica la relacion de areas (A patron / A
patron interno) o de alturas (h patron/ h patron interno) versus la concentracion.

A la muestra problema se le adiciona el mismo volumen del patron interno y se


obtiene el valor de la relacion de areas o de alturas, el cual se interpola en la curva
de calibracion.

NOTA: Como patron interno se usa un compuesto conocido, el cual debe


responder a las mismas condicione de trabajo de la sustancia patron. El tiempo
de retencion del patron interno, no debe estar muy distante del tiempo de
retencion del compuesto en estudio.

b. La cuantificacion tambien se puede hacer por normalizacion de areas, para lo


cual se tiene en cuenta la suma de las areas de todos los picos
correspondientes a los compuestos presentes en la muestra. Esta suma se
hace igual a 100, y luego se calcula el procentaje correspondiente a cada area
asi:

% A = Area de A / Area total x 100

El metodo es valido si todos los componentes de la muestra responden de la


misma manera, en las condiciones a las cuales se trabaja la muestra.

Existen otras modalidades para la cuantificacion, pero talves las mas usadas son
las senaladas anteriormente.