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Cromatografia

Baseia-se na interaco da amostra a


analisar (soluto) com uma fase mvel
e uma fase estacionria

1. a fase mvel (gs ou lquido) arrasta a amostra


(soluto) atravs da fase estacionria (slida ou lquida)

fase
mvel

soluto
fase estacionria

2. os componentes da amostra dividem-se entre as duas


fases, conforme a afinidade.

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Interaco com a fase estacionria

1. Adsoro

fsica (interaces
dipolo-dipolo)

reteno
superfcie de qumica (lig. qumica
um slido s molculas do adsorvente)

por troca inica (o slido cede


ies ao fluido e recebe outros
em troca)

2. Absoro

transferncia para o
interior da fase
estacionria

2
adsoro

absoro

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Tcnicas cromatogrficas

- cromatografia em camada fina (TLC)


- cromatografia em coluna (vrios tipos)
-cromatografia em papel
-cromatografia gasosa
-cromatografia de alta presso (HPLC)
- etc, etc!!!!!!!

de partio
2 tipos fundamentais:
de adsoro

cromatografias de partio:

fase estacionria lquida


fase mvel lquida ou gasosa

- os componentes distribuem-se (particionam-se)


entre as duas fases, de modo diferencial, de acordo
com a sua solubilidade numa e noutra

ex: cromatografia em papel, gs-lquido, HPLC

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cromatografias de adsoro:
fase estacionria slida
fase mvel (eluente) lquida ou gasosa

ex: cromatografia em camada fina, alguns tipos


de cromatografia em coluna

(adsorventes mais comuns: gel de slica, alumina)

placa de TLC (Thin Layer Chromatography)

origem

eluente

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y
x1
x2

mobilidade relativa (rf):

rf=x/y rf1rf2 posso distinguir os 2 compostos

Tina de cromatografia

tampa

papel de filtro

placa de
TLC

eluente

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Exemplo: TLC de lpidos
Identificao do grupo

Escrever
a lpis

Amostra a separar
(extracto lipdico)

padres

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Cromatografia em coluna:
Solvente (fase
mvel) sempre
adicionado, de
modo a nunca
Mistura a secar a coluna
separar

quanto > a
afinidade
para a fase
estacionria,
mais tempo
demoram a
ser arrastadas
pelo eluente

Enchimento da
coluna (fase
estacionria)

recolha de diferentes
Tempo fraces para tubos de
ensaio diferentes

MTODOS CROMATOGRFICOS DE SEPARAO DE PROTENAS

Diferentes tipos:
- excluso molecular
- troca inica
- afinidade

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CROMATOGRAFIA DE EXCLUSO MOLECULAR volume/forma

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CROMATOGRAFIA DE TROCA I
INICA carga

Trocadores aninicos (+)


e catinicos (-)

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Hemoglobina glicosilada
A glucose liga-se hemoglobina de forma no enzimtica:

Glucose Glucose em
sangunea excesso

a % de hemoglobina glicosilada (HBA1c)depende da concentrao mdia de


glucose durante o tempo de vida mdio dos eritrcitos

 Hba1c mais aninica (carga menos + que as outras


hemoglobinas)

 Resina Bio-Rex, com grupos carboxlicos (trocador


catinico) hemoglobina liga-se aos grupos COO-

 Eluio feita com tampes de fosfato de sdio de


fora inica crescente

 Hba1c menos positiva, portanto a sua eluio


mais rpida (i.e., a primeira a sair)

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CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE selectividade de liga
ligao

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