PRCTICA 5:

NUMERACIN DE
BACTERIAS
COLIFORMES,
COLIFORMES
FECALES Y E. Coli

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe
III. MATERIALES
Muestra (Agua)
Placas Petri
Tubos de ensayo 16x150
Tubos de ensayo 13x100
Pipetas de 10 y 1mL.
Campanas de Durham de 10x75
Gradilla
Mechero Bunsen
Caldo lactosa bilis verde brillante (BRILLA)
Caldo triptonado o peptonado.
Estufa regulada a 35-37C
Bao mara regulado a 44C
Reactivo KOVACS

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Paulino Ninaquispe
IV. PROCEDIMIENTO
A) Determinacin de Coliformes Totales

B) D Figura 1. Determinacin de Coliformes totales.

e
terminacin de Coliformes Fecales y E. Coli

Figura 2. Determinacin de Coliformes Fecales y E. Coli.

V. RESULTADOS

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Segn la tabla NMP.

Numero de tubos positivos en cada nivel de

Lmites de confianza
dilucin NMP por g.
Dilucin 10-1 Dilucin 10-2 Dilucin 10-3 99% 95%
0 1 0 3 <1 23 <1 17
1 0 0 4 <1 28 1 21
1 0 1 7 1 35 2 27
1 1 0 7 1 36 2 28
1 2 0 11 2 44 4 35
2 0 0 9 1 50 2 38
2 0 1 14 3 62 5 48
2 1 0 15 3 65 5 50
2 1 1 20 5 77 8 61
2 2 0 21 5 80 8 63
3 0 0 23 4 177 7 129
3 0 1 40 10 230 10 180
3 1 0 40 10 290 20 210
3 1 1 70 20 370 20 280
3 2 0 90 20 520 30 390
3 2 1 150 30 660 50 510
3 2 2 210 50 820 80 640
3 3 0 200 100 1900 100 1400
3 3 1 500 100 3200 200 2400
3 3 2 1100 200 6400 300 4800

CUADRO DE RESULTADOS PARA MUESTRA A Y B

CARAC. N DE TUBOS
ANALISIS MICROORGANISMO DILUCIN
OPTICAS POSITIVOS

10-1 3
Turbidez y
ANALISIS DE
presencia de
COLIFORMES
COLIFORMES TOTALES O2 en las 10-2 3
NMERO MS
campanas de
PROBABLE
Durham.
10-3 3

Cuadro n1

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 Segn el cuadro n1, nuestros resultados (3-3-3) para la muestra A y B no
se encuentran definidos en la tabla de NMP. Esto hace imposible calcular el
NMP por g, ya que en la tabla no hay tal resultado.

VI. DISCUSIN
Segn Secretaria de Comercio y Fomento industrial (1987)
Para la prueba confirmatoria para coliformes totales, coliformes fecales y E.coli
Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar
el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer el clculo del NMP.

Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez: Se
consideran NEGATIVOS, establecindose el Cdigo 0,0,0para efecto del clculo del NMP.

Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de dilucin
analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de dilucin menores
(mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de muestra),
respectivamente.

En la prctica realizada la mayora de los tubos de la dilucin 10-1 se obtuvieron como

resultado un efecto positivo, siendo as considerada un defecto para el producto y el
consumidor.

Segn CETESB (1978)

La determinacin del NMP de bacterias coliformes en una muestra se hace a partir de la
tcnica de tubos mltiples, en la cual volmenes decrecientes de la muestra son involucradas
en un medio de cultivo adecuado. El mtodo consta de tres etapas: presuntiva, confirmativa y
prueba complementaria. La prueba presuntiva consiste en colocar volmenes determinados
de muestra en una serie de tubos contenidos de caldo triptonadoy son incubados a 35-38C,
durante 24.48horas. En esta prueba presuntiva, se presenta la formacin de gas. La prueba
confirmativa consiste en transferir todos los tubos positivos de la prueba presuntiva a tubos
conteniendo caldo verde brillante y son incubados durante 24-48h. a 35-28C. Esta prueba
reduce la posibilidad de resultados falsos gas-positivo. Si hay presencia de gas en la prueba
confirmativa significa que hay presencia de coliformes. La prueba complementaria consiste en
transferir la inoculacin en estras. Se consideran positivas las colonias tpicas que son
nucleadas con o sin brillo metlico y las colonias atpicas que son opacas, anucleadas y color
rosado.

En la prctica realizada se evaluaron las 3 pruebas, obteniendo as como resultado que si hay
presencia de coliformes totales, fecales y E.coli.

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 VII. CONCLUSIONES
Se aprendi a utilizar el mtodo de recuento, especialmente el nmero ms probable
(NMP).
En la prctica realizada se logr identificar las bacterias coliformes totales, fecales y E.
Coli en un alimento, el cual en la prctica se utiliz el jugo de papaya de dos diferentes
jugueras.
En la prctica realizada no se pudo hacer el conteo de nmero ms probable (NMP),
porque los resultados obtenidos que son 3-3-3, no se pueden hacer lectura en la tabla
gua brindada.
La presencia de coliformes totales es un indicador de prcticas higinicas inadecuadas
y que el consumidor podra estar expuesto a patgenos entricos cuando ingiere el
alimento.

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRFICA

Secretaria de Comercio y Fomento industrial. 1987. NNX-AA-42-1987. Calidad del agua
determinacin del nmero ms probable (NMP) de coliformes totales, coliformes fecales
(termotolerantes) y Escherichia Coli presuntiva. 21 p.

CETESB. Anlisis microbiolgico de Aguas. Normalizado tcnica saneamento ambiental, NT-08.

Sau Paulo, 1978

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 IX. ANEXO

Cuadro 2. Nmero ms probable (NMP) de bacterias, sembrando tres tubos por cada dilucin.
Fuente: Gavidia, Blanca C., Manual de prcticas de Microbiologa de Alimentos, 1997, Bogot
Colombia, Carrera de Bacteriologa PUJ.

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