RESULTADOS

Cavidad
alantoidea

Cavidad
amnitica

Saco vitelino

Figura 2. Inoculacin con azul de metileno

Figura 1. Estructura del embrin de pollo
en la cavidad amnitica.
de 3 4 das de incubacin.

Figura 4. Cascarn del huevo con azul de

Figura 3. Inoculacin con azul de metileno metileno indicando la inoculacin en
en la membrana corioalantoidea. membrana corioalantoidea.

Figura 6. Inoculacin con azul de metileno

Figura 5. Inoculacin con azul de metileno en el saco vitelino del embrin.
en la cavidad alantoidea.
ANLISIS DE RESULTADOS

Los virus son parsitos intracelulares obligados, es decir, requieren de una clula hospedera viva para
replicarse. Debido a esta necesidad, se han desarrollado diversas tcnicas de cultivo de virus, la principal es en
embrin de pollo de cinco a once das de incubacin; ste mtodo tambin es empleado para la caracterizacin
y el diagnstico viral, as como para la produccin de vacunas. Lo anterior es posible gracias a las caractersticas
propias del embrin y sus tejidos, pues stos proporcionan un medio favorable para dicha replicacin.

Los huevos empleados para el aislamiento de los virus deben cumplir con ciertos requerimientos, entre ellos
estar libres de patgenos especficos (SPF specific pathogenic free); lo anterior se refiere a que estn libres de
enfermedades y que esto haya sido validado mediante pruebas de laboratorio y mtodos clnicos puesto que el
huevo es una va por la cual se pueden adquirir diversos agentes patgenos.

Los embriones de pollo son el medio de cultivo de virus por eleccin debido a que presentan muchas ventajas,
entre ellas que estn relativamente exentos de infecciones y contaminaciones (certificacin SPF), son sensibles
a la infeccin por muchos agentes virales, no forman anticuerpos contra los virus inoculados, adems son
baratos, se adquieren con facilidad y su tamao hace ms fcil su manipulacin.

Se deben tomar en cuenta tambin algunas condiciones que influyen sobre el crecimiento de los virus en los
embriones como la va de inoculacin, dilucin y cantidad de inculo, la edad del embrin, temperatura y tiempo
de incubacin tras la inoculacin.

Para identificar la correcta proliferacin viral es necesario la observacin macroscpica y microscpica, en la

primera se deben visualizar lesiones tales como hemorragias, congestin, enrollamiento, enanismo, presencia
de pstulas, engrosamiento, fibrosis y edema de la membrana amnitica y la corioalantoidea, disminucin del
lquido amnitico, desarrollo anormal de las plumas y depsito de uratos en el estroma renal; en el anlisis
microscpico se deben identificar los efectos citopticos como cuerpos de inclusin, pues debido a la propiedad
hemoaglutinante del lquido amnitico y alantoideo, dichas afecciones ayudan a la diferenciacin de cepas
virales.

Las estructuras que se observaron en el huevo y posteriormente en el embrin fueron una cmara de aire, sta
permite el intercambio gaseoso y se distribuye dentro del huevo por la membrana corioalantoidea la cual est
altamente vascularizada y nos ayuda a la diferenciacin de embriones vivos y muertos, sirve tambin como
medio de respiracin y se encuentra adyacente al cascarn. Con el desarrollo de esta membrana se da lugar a
la cavidad alantoidea que, como su nombre lo dice, contiene el lquido alantoideo (cuyo volumen oscila entre 5
y 10 mL). Rodeando al embrin se encuentra la membrana amnitica formando la cavidad amnitica, el embrin
est ligado al saco vitelino el cual se localiza cntrico en el huevo y proporciona los nutrientes necesarios para
el correcto desarrollo. En la figura 1 se pueden observar el saco vitelino, cavidad alantoidea y cavidad amnitica.

Cabe mencionar que el tiempo de gestacin del embrin es fundamental para el desarrollo vrico, se recomienda
que se empleen huevos que tengan entre cinco y once das de fecundacin, pues si son de menos das es poco
posible identificar las estructuras que lo conforman y por ende se dificulta la inoculacin; y si es mayor a estos
das el embrin posee un tamao mayor y disminuye el volumen de los lquidos extraembrionarios.

En la prctica se emplearon embriones de tres o cuatro das, se identificaron como tales por la ausencia de una
cavidad alantoidea bien formada; por lo cual la inoculacin en esta va fue insatisfactoria, si bien se pudo
alcanzar la parte desarrollada de esta cavidad, la mayora del colorante inyectado se esparci en la yema (figura
5). Esta va de inoculacin es la ms utilizada e importante debido a que el lquido alantoideo es una fuente
antignica de posible aplicacin en las reacciones inmunolgicas de diagnstico.

As mismo se hizo la simulacin de inoculacin del saco vitelino (figura 6), en esta va, debido a la inexperiencia
en el manejo del ovoscopio la inoculacin no fue de todo acertada, tericamente los embriones de siete das
son los ms adecuados para emplearse; esta inoculacin se utiliza principalmente para el aislamiento de
bacterias del gnero Rickettsia sp. la observacin de los embriones se debe hacer cinco das despus de la
inoculacin y se deben incubar a 35C; estas bacterias son Gram negativas, pequeas y pleomrficas, pueden
ser aisladas en este tipo de medio debido a que no pueden sobrevivir fuera de su vector o reservorio durante
periodos prolongados de tiempo.

La inoculacin en la membrana corioalantoidea se muestra en la figura 3 como una coloracin en una fraccin
del embrin, que es la pelcula que recubre el contenido del huevo. En la figura 4 se observa a detalle que la
membrana adyacente al cascarn es color azul (por el colorante), por lo cual esta tcnica fue satisfactoria. Los
embriones que preferentemente se emplean para ser inoculados por esa va son de nueve a doce das, son
tiles para el aislamiento de virus vesiculares como la viruela y el virus del herpes, debido a que despus de su
replicacin hay presencia de pstulas visibles. La incubacin debe ser de 72 horas despus de depositado el
inculo a una temperatura de 35C. Para determinar que el virus se ha desarrollado, se deben identificar
lesiones pequeas redondeadas en forma de rosario para el agente causal de la viruela o lesiones ovaladas
como perla en el caso del herpes virus.

En la figura 2 se observa la coloracin de la cavidad amnitica, que es el saco que contiene al embrin y al
lquido amnitico. La inoculacin por esta va es muy simple, pues con la ayuda del ovoscopio se distingue
fcilmente dnde se encuentra el embrin y por ende la cavidad. Se utiliza principalmente para el aislamiento
del virus de la influenza y paperas, los embriones deben ser de ocho a diez das de incubados y se examina
despus de 72 horas de depositado el inculo, se van a observar hemoaglutinaciones en el lquido amnitico
(principalmente).

El empleo de los embriones de pollo, adems de servir para el diagnstico de enfermedades virales, es utilizado
para el desarrollo de vacunas, pues con la inoculacin sucesiva de los virus stos comienzan a atenuarse y con
ello se facilita su manejo.

La inoculacin de un virus debe hacerse con sumo cuidado y el desarrollo se debe ovoscopiar a las 24 horas
despus de la infeccin debido a que si se presenta la muerte del embrin dentro de las primeras horas (antes
de 24 h) se considerar deceso por traumatismo y las muertes ocurridas despus de este periodo sern
atribuidas al patgeno.

CONCLUSIONES

De acuerdo a los requerimientos fisiolgico de los virus de conocieron las diferentes tcnicas para el aislamiento
de stos, enfocndose en las diversas vas de inoculacin del embrin de pollo; para ello fue necesario conocer
las caractersticas fsicas del embrin a diferentes das de incubacin. Al utilizarse un huevo de tres o cuatro
das de desarrollo no fue posible llevar a cabo satisfactoriamente la inoculacin de la cavidad alantoidea ni del
saco vitelino.

REFERENCIAS

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