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PORTAFOLIO EVIDENCIAS
2016
PORTAFOLIO EVIDENCIAS
MANUAL
MICROBIOLOGA APLICADA AL
LABORATORIO
TM Carolina Seplveda B.
TM Valeska Troncoso O.
Revisado por TM Benjamn Riveros C.
Coordinador Nacional TNS LABI
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Direccin Nacional rea Salud
Carrera Tcnico en Laboratorio Clnico, Banco de Sangre e Imagenologa
Asignatura: Microbiologa Aplicada al Laboratorio TLC 119 Plan 3
Indice
Pgina
Introduccin 5
Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa 6
Mtodos de Desinfeccin y Esterilizacin 16
Niveles de Accin de los Desinfectantes 21
Esterilizacin 30
Trabajo Personal del Estudiante
Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa 35
Microbiologa 48
Trabajo Personal del Estudiante
Microbiologa: Morfologa Bacteriana 55
Medios de Cultivo 65
Mantencin y Preparacin de los Medios de Cultivo 68
Esterilizacin de los Medios de Cultivo 70
Medios Usados en la Identificacin Bioqumica de Enterobacterias 76
Pruebas Especiales para la Identificacin Bacteriana 79
Clasificacin de las Bacterias 81
Trabajo Personal del Estudiante
Microbiologa: Medios de Cultivo 84
Conceptos Generales de Salud 92
Muestras Microbiolgicas 96
Siembras de Muestras 97
Siembra Muestras de Orina Asptica 98
Siembra Muestra de Herida 99
Siembra Muestras Respiratorias 99
Muestra para Estudio de Koch 101
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Pgina
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Pgina
Oxiuriasis 144
Teniasis 145
Cisticercosis 147
Difilobotriasis 148
Himenolepiasis 149
Dipilidiasis 151
Hidatidosis 152
Triquinosis 153
Fasciolasis 154
Trabajo Personal del Estudiante
Microbiologa: Diagnstico Parasitolgico Procedimental 155
Bibliografa 172
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INTRODUCCIN
No debemos olvidar el cuidado que hay que tener al manejar las muestras
clnicas, ya que un mal manejo de stas puede generar un resultado errneo para
el paciente y ver afectada nuestra salud.
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Cada laboratorio se clasifica segn los riesgos a los cuales est expuesto, de
acuerdo al tipo de microorganismos que ah se trabaje. Segn la OMS1, la
clasificacin es la siguiente:
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Organizacin Mundial de la Salud.
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Nivel de Tipo de
Grupo Practica de Laboratorio Equipo de Seguridad
Bioseguridad Laboratorio
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Cabe destacar que existen conceptos que se deben manejar al momento de hablar de
bioseguridad y stos son los siguientes:
rea Limpia: Espacio fsico libre de muestras clnicas y material relacionado con ellas
(implementos para el procesamiento de ellas, desechos biolgicos, etc.).
rea Sucia: rea de trabajo del laboratorio donde se depositen muestras clnicas.
Riesgo Fsico: Posibilidad de sufrir algn dao debido a fuego, radiaciones, ruidos,
vibraciones, etc.
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Ley 16.744
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Riesgo Qumico: Posibilidad de sufrir algn dao debido a agentes qumicos como
cidos, lcalis, etc.
Es por este motivo que se debe tener puertas de acceso y escape del laboratorio con
apertura interna y debidamente sealizadas como acceso restringido a personal
autorizado.
Las reas de trabajo deben estar separadas por murallas o paneles con las puertas
sealizadas con el tipo de estudio que se realiza ah. Las superficies deben ser lavables,
iluminacin adecuada, sala para descontaminar material y para lavado de material. Baos
y duchas de emergencia
Toda muestra debe considerarse como potencialmente infecciosa por lo que se deben
utilizar las precauciones estndar mnimas al manejar cualquier tipo de estas.
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Lavado de Manos:
Debe realizarse siempre antes y despus de colacin y eliminacin de guantes. Examinar
o realizar procedimiento en un paciente. Ej.: punciones, manipular fluidos corporales.
Instrucciones:
- Subir las mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas.
- Adoptar posicin cmoda frente al lavamanos.
- Abrir la llave del agua y djela corriendo.
- Mojar las manos y muecas antes de aplicar jabn de glicerina
- Depositar gotas de jabn en la palma de la mano
- Jabonar las manos y muecas friccionando 15 segundos las manos para
obtener espuma especialmente entre los dedos.
- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia
las muecas.
- Secar con toalla de papel desechable.
- Cerrar la llave con la toalla de papel y elimnela.
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Instrucciones:
- Subir mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas.
- Adoptar una posicin cmoda frente al lavamanos.
- Abrir la llave del agua.
- Mojar las manos y muecas antes de aplicar jabn antisptico
- Dispensar jabn desde el dispensador
- Jabonar sus manos y muecas, friccionando 30 segundos para obtener
espuma especialmente entre los dedos.
- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia
la mueca.
- Secar las manos con 1 a 2 hojas de toalla de papel desechable.
- Cerrar llave de agua con la toalla de papel y elimnela.
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o Rociar 2 a 3 veces ms con alcohol 70, secar con papel y eliminar en basura
comn.
Pipeteo: Est prohibido pipetear con la boca, debido a los riesgos que involucra el uso
de pipetas porque existe la posibilidad de succin bucal. Solo se deben ocupar con
propipetas.
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En 1862, Luis Pasteur publicara la hiptesis microbiana, planteando que las infeccin
estn producidas por agentes causales. Y Joseph Lister en 1865, extendera la
prctica quirrgica higinica al resto de especialidades mdicas destacando la
importancia de las medidas aspticas. Introdujo los trminos de asepsia y antisepsia,
utilizando el fenol como primer antisptico.
3
Ignc Semmelweis 1918-1865.
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En la actualidad cada recinto de salud se debe regir bajo las normas establecidas por la
Norma General Tcnica Sobre Esterilizacin y Desinfeccin de Elementos
Clnicos del Ministerio de Salud4. Estas normas tienen por objetivo uniformar los
procesos de esterilizacin y desinfeccin en el pas, asegurar la calidad del material de
uso clnico y recomendar sistemas para una mayor eficiencia de estas actividades.
En la atencin directa se utilizan numerosos artculos y equipos que tienen contacto con el
paciente por distintas vas. El mtodo de eliminacin de microorganismos requerido por
cada artculo, est directamente relacionado con el riesgo potencial que tiene ese artculo
en particular de producir infeccin en el paciente. En 1968, Spaulding clasific los
artculos en tres categoras de acuerdo al riesgo antes mencionado:
Artculos No Crticos: Estos artculos toman slo contacto con piel sana o no se ponen
en contacto con pacientes por lo que el riesgo de producir infecciones es mnimo o
inexistente. En general slo requieren limpieza y secado.
Para entender los aspectos relacionados con la higiene del medio sanitario es importante
que se tengan claro el significado de diversos trminos:
4
http://juridico1.minsal.cl/RESOLUCION_1665_01.doc
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Infeccin
Se denomina infeccin a la penetracin en un husped de un microorganismo o agente
infeccioso. Los agentes infecciosos son los microorganismos y pueden encontrarse en
cualquier parte del medio ambiente pudiendo ser bacterias, hongos, virus y protozoos.
La infeccin no siempre produce una enfermedad ya que el organismo dispone de
mecanismos de defensa producidos por el sistema inmunolgico capaces de actuar sobre
el agente agresor. Cuando el sistema inmunolgico es sobrepasado por los agentes
infecciosos aparecen los diversos signos y sntomas de las distintas enfermedades.
Asepsia
La asepsia es un conjunto de medidas y tcnicas que tiene como finalidad impedir la
proliferacin de microorganismos, as impidiendo la contaminacin del material, personas
y ambiente hospitalario. Se logra una ausencia total de microorganismos patgenos que
causan enfermedades.
Antisepsia
Utilizacin de agentes qumicos sobre la piel o sobre tejidos vivos para inhibir o eliminar
los microorganismos (no implica una accin esporicida).
Limpieza
Procedimiento fsico por arrastre del material orgnico contenido en los utensilios.
Antispticos y Desinfectantes:
Los antispticos y los desinfectantes son usados ampliamente en los hospitales y otros
centros del cuidado de la salud. Son parte esencial de las prcticas de control de la
infeccin y ayudan en la prevencin de las infecciones nosocomiales. Los agentes
antispticos rpidamente desinfectan superficies por disminucin de la cantidad de
bacterias sobre la piel intacta.
Cuando se usan pre-quirrgicamente, los antispticos sirven como profilcticos para la
prevencin de la infeccin.
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Este mtodo puede utilizarse para la desinfeccin de artculos que resistan la temperatura
requerida y al poder utilizar material empaquetado permite su posterior almacenaje. Para
obtener una desinfeccin de alto nivel se debe procesar en la autoclave por un tiempo de
12 a 15 minutos.
Amplio espectro
Rpida accin
No se afecta por factores del medio ambiente
Sin toxicidad
Compatibles con las superficies
Dentro de los desinfectantes usados con mayor frecuencia en los recintos
hospitalarios podemos encontrar cido Peractico, alcoholes, amonios
cuaternarios, cloro y compuestos clorados, fenoles, formaldehdo, Glutaraldehido,
orthophtalaldehido y perxido de hidrgeno estabilizado
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Alto Nivel
El procedimiento de desinfeccin de alto nivel es complejo porque se aplica en numerosas
oportunidades a equipos que son difciles de manipular como son los endoscopios. En
general dado que el proceso de desinfeccin de alto nivel es engorroso, difcil de evaluar
y sujeto a falla humana, dentro de lo posible deben preferirse los mtodos vigentes de
esterilizacin para los artculos de uso mdico. Los artculos no crticos y las superficies
inanimadas (Ej. muebles, suelo y muros) en general no han sido involucradas en la
transmisin de infecciones y se pueden tratar con limpieza y en situaciones excepcionales
con desinfectantes de nivel bajo o intermedio.
Los agentes desinfectantes apropiados para desinfeccin de alto nivel deben cumplir
varias caractersticas:
Amplio espectro
Estabilidad frente a materia orgnica
Compatibilidad con el material de los equipos
Posibilidad de medir su actividad o concentracin por medio de indicadores
qumicos
Idealmente estos desinfectantes deben tener rapidez en su accin, baja toxicidad, vida
media prolongada, degradabilidad en el medio ambiente y ausencia de olor.
El personal a cargo del procesamiento de estos equipos, debe estar capacitado y ser
evaluado en forma constante. Para obtener buenos resultados, se deben lavar todas las
superficies (internas y externas) usando detergentes enzimticos o neutros que aseguren
la eliminacin de materia orgnica sin daar los equipos
Si se procesan por inmersin, se debe asegurar que tanto superficies internas como
externas se pongan en contacto con el agente desinfectante. Para el enjuague se debe
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utilizar agua estril y en el caso de no contar con este suministro, se debe usar agua
potable y posteriormente aspirar alcohol por los canales.
El secado debe ser realizado con aire filtrado para evitar su re contaminacin, se
recomienda procesar los equipos inmediatamente antes de su uso para evitar
contaminacin de los mismos. No obstante si no se utilizan inmediatamente de
procesados, el almacenamiento debe ser en un sitio libre de polvo y las superficies
externas protegidas con cubiertas estriles
Glutaraldehido
Corresponde a un di aldehdo saturado que se utiliza como desinfectante de alto nivel.
Las formulaciones convencionales de Glutaraldehido tienen una duracin aproximada de
14 das. Existen formulaciones nuevas en las que se han agregado agentes estabilizantes
para prolongar la vida til a alrededor de 28 das. El mecanismo de accin de
Glutaraldehido se debe a la alquilacin de los grupos amino, sulfidrilo, hidroxilo y
carboxilo, los cuales alteran el ARN, el ADN y la sntesis proteica en los microorganismos.
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Mezcla de cido Peractico al 0.08% y Perxido de Hidrgeno al 1%. No requiere
activacin, su duracin es de 14 das. Buena compatibilidad con el material. Experiencia
limitada en endoscopios.
Formaldehdo
Este agente inactiva los microorganismos por alquilacin de los grupos aminos y sulfidrilo
de las protenas y el anillo del tomo de nitrgeno de las bases purnicas. El formaldehdo
con alcohol es un desinfectante de alto nivel y fue usado en el pasado para la
desinfeccin de equipos. En la actualidad su uso est discontinuado debido a su alta
toxicidad y el olor penetrante que aparece an a muy bajas concentraciones.
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El material debe estar totalmente libre de materia orgnica, porque sta interfiere
en el proceso de desinfeccin.
Se recomienda la utilizacin de detergentes de tipo enzimtico y sumergir el
endoscopio inmediatamente despus de ser utilizado.
Enjuagar y secar prolijamente para evitar dilucin del desinfectante y alterar su
concentracin.
El tiempo de desinfeccin de alto nivel debe ser establecido de acuerdo a las
caractersticas propias de cada desinfectante.
No es recomendable enjuagar los artculos desinfectado con agua corriente debido
a la posibilidad de contacto con superficies contaminadas.
En caso de no contar con agua estril para este fin debe usarse alcohol etlico o
isoproplico para el ltimo enjuague.
Nivel Intermedio:
Se utiliza para la limpieza de superficies o de instrumentos en los que es poco probable la
contaminacin por esporas bacterianas o por microorganismos con alto grado de
resistencia.
Alcoholes
Destruyen rpidamente formas vegetativas de bacterias, hongos, virus y M. tuberculosis.
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El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se usa en la desinfeccin
de superficies y artculos no crticos. Se utiliza en la desinfeccin de termmetros orales y
rectales, laringoscopios y pequeas superficies como las tapas de goma de algunos
frascos de medicamentos y para el enjuague de canales de endoscopios.
Fenoles
Estos productos fueron de los primeros usados en desinfeccin hospitalaria. En
concentraciones altas, el fenol acta como un gran txico del protoplasma penetrando y
destruyendo la pared celular y precipitando las protenas celulares. Se usa para limpieza
de superficies hospitalarias y elementos no crticos.
Compuestos Yodados
Similares a los alcoholes, pero ligeramente ms txicos, Tambin se desactivan con las
sustancias orgnicas.
Bajo Nivel
Se utilizan para tratar instrumentos no crticos, no traspasan las mucosas ni los tejidos
estriles de los pacientes.
Antispticos
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Los antispticos son biosidas o sustancias qumicas que se aplican sobre los tejidos
vivos, con la finalidad de destruir o inhibir el crecimiento de microorganismos patgenos.
No tienen actividad selectiva ya que eliminan todo tipo de grmenes.
Un antisptico ideal debera cumplir con los siguientes atributos para su eleccin:
Amplio espectro
Bajo costo
Inocuo para tejidos vivos
No debe ser toxico
Rapidez y eficacia en materia orgnica
Efecto acumulativo y residual
Baja capacidad de generar resistencia
No irritante, ni sensibilizante
Jabn Corriente
Por remocin mecnica (arrastre) tiene la capacidad de eliminar a los microorganismos
presentes en la microbiota transitoria.
Jabn Antisptico
A diferencia del jabn corriente, el jabn antisptico tiene la capacidad de eliminar los
microorganismos presentes en la microbiota residente. Este debe ser utilizado en los
siguientes momentos:
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Alcoholes
El mecanismo de accin de los alcoholes es la desnaturalizacin de las protenas de los
microorganismos. La desnaturalizacin proteica slo es posible en presencia de agua; por
este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las
mezclas de alcoholes con agua. Podra tener cierta accin bacteriosttica al inhibir la
produccin de metabolitos esenciales para la divisin celular rpida. Tiene accin
bactericida pero poco efecto residual. Los alcoholes tienen excelente actividad frente a
todos los microorganismos, exceptuando las esporas, se inactiva por sustancias
orgnicas por lo que se debe limpiar la piel antes de ser usados y no son txicos. Dentro
de los efectos adversos que se pueden destacar por el uso de alcoholes podemos
destacar que al ser aplicado brevemente a la piel no causa dao, pero irrita si se deja
mucho tiempo. En superficies lesionadas empeora el dao y causa un cogulo bajo el
cual pueden crecer bacterias, por lo que no se utiliza como antisptico para heridas
abiertas. Su utilizacin puede provocar irritacin y sequedad de la piel. Al volatilizarse
puede causar irritacin de la mucosa nasal y lagrimal.
Alcohol Gel
Reemplaza lavado de manos clnico (solo 3 veces el lavado clnico) tiene gran aceptacin
por los usuarios y mejora la adherencia.
Compuestos Yodados
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El yodo y sus compuestos han sido usados ampliamente para la prevencin de las
infecciones y el tratamiento de heridas. Los compuestos yodados son agentes oxidantes,
precipitan las protenas bacterianas y cidos nucleicos.
El yodo tiene una poderosa actividad germicida, ataca bacterias gram positivas y gram
negativas, Micobacterias, esporas, hongos, virus, quistes y protozoos. Hay varios tipos de
preparaciones de yodo, segn la zona que haya que desinfectar. La actividad antisptica
de todas las preparaciones depende del yodo en forma libre. Se emplea en: la
desinfeccin de la piel sana, el tratamiento de afecciones de la piel causadas por
bacterias y hongos, la limpieza de las heridas en solucin acuosa, etc.
Clorhexidina
Constituye uno de los tres antispticos quirrgicos ms importantes y es el
antisptico bucal que ms se usa actualmente. La clorhexidina posee amplio espectro
de accin. Es bactericida sobre bacterias gram positivas y gram negativas.
Las ventajas que justifican el empleo de la clorhexidina son la accin germicida rpida y
su duracin prolongada, gracias a que sta sustancia tiene gran adhesividad a la piel y
buen ndice teraputico.
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Dentro de las limitaciones se encuentran su poco efecto frente a Micobacterias, efecto
lento (3 minutos en adherirse al estrato corneo), produce ototoxicidad e irritacin de
crnea.
Triclosn
Es un derivado fenlico, poco soluble en agua su mecanismo de accin es disrupcin de
la membrana bacteriana a travs del bloqueo de la sntesis de lpidos. El Triclosn ha
demostrado actividad contra bacterias gram positivas y gram negativas, bacterias
multiresistentes donde se destaca su accin frente al Staphylococcus aureus
meticilinorresistente.
Entre sus propiedades, el Triclosn tiene rpida accin y son tiles frente a la microbiota
residente y transitoria. Su eficacia es inhibida mnimamente por la presencia de materia
orgnica, y tiene gran afinidad con la piel, no produciendo irritacin ni efectos txicos.
El Triclosn est disponible en un amplio rango de productos, incluyendo jabones para la
preparacin pre quirrgica de la piel, lavado de manos y antispticos se utiliza adems
como desinfectantes de superficies y lavado de manos en la industria de la alimentacin.
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No rellenar ni trasvasijar antispticos ni desinfectantes
No deben hacerse mezclas (altera su accin, inactivndolos)
Deben usarse respetando las instrucciones del fabricante respecto a la duracin
del producto, conservacin, dilucin y tiempo de contacto
Previo a su uso, limpiar la superficie
Esterilizacin
La esterilizacin del material de uso mdico es un componente clave en la prevencin y
control de infecciones. Histricamente han sido utilizados mtodos fsicos para la
destruccin de microorganismos que actan por medio de altas temperaturas como son la
autoclave a vapor y las estufas por calor seco (Pupinel).
En los ltimos aos ha habido un aumento progresivo de artculos crticos que no pueden
ser sometidos a calor. Por lo anterior, se han desarrollado nuevas tecnologas de
esterilizacin a bajas temperaturas.
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que debe ser la primera opcin en la seleccin de mtodos de esterilizacin; el equipo
ms utilizado es el autoclave a vapor.
Existe una gran variedad de modelos de autoclaves. Estos tienen diferencias en cuanto a
operacin, tiempos de esterilizacin y forma de accin.
3. En relacin al Funcionamiento:
Desplazamiento por gravedad
Con vaco previo
De sistema pulsante
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suciedad en el artculo. El calor seco penetra lentamente en los materiales por lo que se
requieren largos perodos de exposicin. El uso del calor seco debe limitarse a materiales
que no pueden ser esterilizados en autoclave.
Los materiales que pueden esterilizarse en Pupinel y no pueden esterilizarse en autoclave
son slo aceites, vaselina, petrolatos y polvos.
Existen dos tipos de equipos que obtienen el calor a travs de la energa elctrica:
Conveccin gravitatoria
Conveccin mecnica
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cido Peractico Rpido. Efectivo en la esterilizacin Slo puede ser utilizado para material
lquido de endoscopios y laparoscopios sumergible
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Equipo automtico estandarizado Esteriliza un solo contenedor por ciclo por lo
No contamina al medio ambiente que no puede ser utilizado para cantidades
Mayores de material.
No elimina priones
Debe ser utilizado en forma inmediata
Formaldehdo Baja temperatura. Incompatibilidad con algunos materiales.
Ciclos de corta duracin. Mtodo no aprobado para su utilizacin en
Certificable USA
No elimina priones
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Esterilizacin:
Desinfeccin:
Asepsia:
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Antisepsia:
Limpieza:
Descontaminacin:
Empaque:
Lquidos :
Plsticos :
Vidrios :
Goma :
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3.- Describa las caractersticas del Mtodo de Esterilizacin por Calor Hmedo:
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Introduccin
El xido de etileno desde los aos 50 ha sido el agente esterilizante por excelencia y desde que
comenz a utilizarse ha demostrado ser uno de los mtodos ms sencillos, seguros y
econmicos para esterilizar a baja temperatura toda una gama de dispositivos mdicos, en
fbricas como as tambin e todas las instituciones hospitalarias tanto privadas como estatales.
Este mtodo de esterilizacin an no ha podido ser superado por otras tecnologas, lo que lo
hace imprescindible para la esterilizacin de elementos termo sensibles.
El desarrollo de nuevos materiales y por lo tanto de nuevos productos, para uso mdico
principalmente, ha hecho que esta tcnica de esterilizacin se adapte y actualice
permanentemente para poder satisfacer las necesidades que demanda el mercado.
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Mecanismo de Accin
En la clula bacteriana existen tres sitios principales susceptibles de ser atacados por los agentes
qumicos: las capas superficiales, las enzimas, y el material nuclear. El funcionamiento correcto
de cada uno de estos sectores es esencial para la vida del microorganismo. Las protenas
enzimticas contienen cierto nmero de grupos reactivos esenciales para su actividad. Entre
stos estn los grupos cidos y bsicos de las nucleoprotenas, grupos carboxilos, hidroxilos y
aminos, sulfidrilo, amino y otros.
El xido de etileno acta qumicamente como un agente alquilante reemplazando tomos lbiles,
de hidrgeno de los grupos antes mencionados, por radicales hidroxietilos.
Las caractersticas fisicoqumicas del gas lo hacen muy activo principalmente por su alta
capacidad de penetracin que permite la mortalidad de los microorganismos en lugares de muy
difcil acceso.
Adems podemos decir que penetra en sustancias porosas como as tambin permitiendo la
esterilizacin de superficies que no se puede lograr por otros mtodos.
Fsicos
Qumicos
Biolgicos
Los fsicos, son los instrumentos con que el fabricante disea el esterilizador, que monitorizan y
adems deben registrar, es decir, imprimir y/o graficar curvas del proceso de esterilizacin donde
provee informacin sobre las condiciones internas de la cmara de esterilizacin.
Los indicadores qumicos para xido de etileno deben definir los parmetros crticos siguientes:
El cambio que se debe observar en el indicador despus de la exposicin al proceso debe ser
perfectamente definido para poder realizar una lectura segura.
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Con los indicadores biolgicos se intenta demostrar si las condiciones del proceso fueron las
adecuadas para alcanzar la esterilizacin.
Un indicador biolgico negativo no prueba que todos los items del ciclo son estriles, solo que
ellos fueron expuestos a condiciones adecuadas de esterilizacin.
Utilizacin
Equipamiento adecuado
Demostrar que se opera dentro de los parmetros establecidos
Demostrar que la probabilidad de supervivencia microbiana no es mayor que los limites
establecidos
Controlar diariamente y protocolizar los resultados
Es por lo anteriormente expuesto, que los indicadores biolgicos cumplen como un nico sistema
integrador de todas las variables que concurren en un ciclo de esterilizacin, y sin dudarlo es el
indicador ms vlido para un proceso con xido de etileno.
Generalmente el soporte utilizado para transportar las esporas microbianas son tiras de papel de
filtro que despus de inoculadas son colocadas en sobres, y una vez terminada la esterilizacin
son llevadas al laboratorio y preferiblemente en cabina de flujo laminar son transferidas a un
medio de cultivo lquido.
Posteriormente son incubadas a 37 C durante 5 o 7 das para recin ser ledos, observando la
turbidez producida por el crecimiento de microorganismos.
La desventaja de ste mtodo es el largo perodo de incubacin, puesto que se necesita observar
turbidez, es decir que el desarrollo microbiano deba ser abundante, por lo tanto su perodo de
incubacin, largo.
En una segunda etapa se introdujeron mejoras a ste mtodo, evitando la transferencia de la tira
de papel porque se envasa en una unidad plstica la tira y el medio de cultivo lquido contenido
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en una ampolla de vidrio, que despus del ciclo se rompe logrando as impregnar la tira y luego
incubar.
Con este mtodo tambin se ve facilitada la lectura, porque al medio de cultivo lquido se le
adiciona o incluye un indicador de pH, prpura de bromocresol que cambia de color cuando
existe desarrollo microbiano, puesto que el medio de cultivo se acidifica.
Existen algunas ventajas con este mtodo porque el cambio permite una mejor y segura lectura
del resultado, la reduccin del tiempo de incubacin de 24 a 48 hs, la no transferencia de la tira
de papel inoculada del sobre al medio de cultivo, lo que podra ser motivo de introducir
contaminacin, teniendo por resultado posibles falsos positivos.
Esta lectura se realiza en la misma incubadora mediante un sistema de luces que de acuerdo a
color indica si la esterilizacin ha sido satisfactoria, es decir, si existen indicios de desarrollo
microbiano o no. Este mtodo todava no ha sido suficientemente aceptado.
Existen diferentes tipos de indicadores biolgicos y su eleccin depende para el uso que se lo
destine:
Desarrollo de ciclo
Validacin de ciclo
Monitoreo de rutina
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Generalmente el indicador biolgico seleccionado para monitorear rutinariamente ciclos de
esterilizacin debera ser el mismo que se utiliz en el programa de desarrollo del ciclo,
establecindose as una ntima relacin y conocimiento de la resistencia del indicador.
Por ltimo este escrito informativo de indicadores biolgicos para la esterilizacin con xido de
etileno, intenta proporcionar una descripcin general de conceptos y principios a tener en cuenta
en el momento de elegir un indicador para la rutina en la esterilizacin y su importancia en la
informacin que nos proporciona.
Luis Barlassina
VISION. Vol.4 N 14 - Octubre 99
Referencias
MICROBIOLOGA
Estos seres no se pueden visualizar a ojo desnudo, por tanto van a ser visibles solo a
travs del Microscopio.
En 1674 el bilogo holands Antn van Leeuwenhoek examin una gota de agua y
descubri un mundo formado por millones de diminutos animculos
(microorganismos).
Cien aos despus el bilogo dans Otto Mller ampli los estudios de van
Leeuwenhoek y, siguiendo los mtodos de clasificacin de Carlos Linneo, organiz
a las bacterias en gneros y especies.
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En 1840, el alemn Friedrich Henle propuso unos criterios y demostr que los
microorganismos eran responsables de la aparicin de enfermedades en el ser
humano.
En los aos setenta y ochenta del mismo siglo, Robert Koch y Louis Pasteur
confirmaron esta teora demostrando que los microorganismos eran responsables
de la aparicin del carbunco, la rabia, la peste, el clera y la tuberculosis.
Qu es un Microorganismo?
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Eucariotas: (clulas con ncleo) como los protozoos, una parte de las algas y los
hongos. Entidades biolgicas de tamao ultramicroscpico, como los virus.
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Parsitos
Virus
Los virus son las partculas infecciosas de menor tamao, con un dimetro que oscila
entre los 18 a 300 nm5 (el tamao de la mayor parte de los virus es inferior a 200 nm y
no pueden visualizarse mediante el microscopio ptico).
Se han descrito ms de 25 familias vricas que contienen ms de 1.550 especies de
virus, muchas de las cuales se asocian a enfermedad en el ser humano.
Los virus estn formados por cido desoxirribonucleico (ADN) o cido ribonucleico
(ARN) (no por ambos a la vez) as como por las protenas, necesarias para su
replicacin y patogenia.
Estos microorganismos son verdaderos parsitos cuya replicacin exige la existencia
de unas clulas anfitrionas.
Bacterias
Son microorganismos procariotas, es decir unos microorganismos unicelulares
sencillos, sin membrana nuclear, mitocondrias, aparato de Golgi ni retculo
endoplsmico
Se reproducen por divisin asexual.
Poseen una pared celular que las rodea, la cual es compleja.
Los microorganismos procariticos poseen una cubierta celular muy diferente de la de
los eucariotas.
Las paredes celulares de muchos de los procariotas poseen un componente qumico
comn, el peptidoglucano (murena), que es el responsable de la forma y
consistencia de la pared.
El peptidoglucano es un extenso polmero que se halla integrado por subunidades
alternas de N-acetil glucosamina (que es tambin el constituyente de la quitina en los
eucariotas) y el cido N-acetilmurmico.
Existen 2 formas bsicas:
5
Nanmetros.
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Pared celular Gram positiva con una gruesa capa de peptidoglucano
Pared celular Gram negativo con una delgada capa de peptidoglucano, la cual posee
una membrana externa.
Tinciones
Tinciones utilizadas en microbiologa para observar bacterias y hongos en el microscopio
ptico.
Lo primero que debemos tener en cuenta es el nivel de toxicidad de los colorantes a
utilizar, en este caso los que se ocupan para realizar Tincin de Gram y de Ziehl-Neelsen
son reactivos txicos que deben ser eliminados en recipientes adecuados para esto
(contenedores de color rojo), nunca al desage.
Se deben utilizar con guantes de procedimientos y pechera desechable, durante su
manipulacin.
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Esta se seca con calor de la llama del mechero, a una distancia en la cual no nos
quememos las manos, y el vidrio resista, ya que si lo exponemos a mucho calor directo
podemos destruir la pared bacteriana, lo que impedira la lectura correcta de la Tincin de
Gram.
Otro modo es dejarlo secar al ambiente al lado del mechero Bunsen. Es muy importante
que no quede muy grueso, ya que al haber muchas bacterias, estas estaran mal
distribuidas y sera dificultoso observar sus caractersticas morfolgicas y no quedara bien
teido.
4.- Tincin:
Esto tiene por objetivo demostrar microscpicamente la morfologa, agrupacin y afinidad
tintorial de las bacterias a travs de la fijacin de los colorantes a las bacterias y as de
esta forma, resistan cuando se realiza el lavado durante la tincin.
Una de las principales tinciones que utilizamos en microbiologa es la Tincin de Gram.
Tincin de Gram
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El procedimiento para la Tincin de Gram se inicia con la aplicacin de un colorante
bsico, el Cristal Violeta.
Luego se aplica una Solucin de Iodo; en este momento todas las bacterias se tien de
azul. A continuacin se agrega Alcohol Acetona, se lava y finalmente se agrega un contra
colorante, como es la Safranina (colorante rojo).
Esta tincin se basa en la capacidad que presenta la pared bacteriana de las bacterias
para retener el colorante al cual se expone, ya sean gram positivas o gram negativas.
En el caso de las bacterias gram positivas, la pared contiene una gruesa capa de
peptidoglicano que ayuda a retener el colorante Cristal Violeta, lo que a su vez impide la
decoloracin, cuando agregamos Alcohol Acetona durante la realizacin de la tincin. Es
por esto que al ser observadas al microscopios las bacterias se ven de color morado
(Gram +).
Las bacterias Gram Negativas a diferencia de las Gram Positivas, tienen una delgada
capa de peptidoglicano, que no retiene el colorante Cristal Violeta y al ser decoloradas
con el Alcohol Acetona, se destie y se vuelva a teir cuando se agrega el contra
colorante Safranina, tindose de color rojo. (Gram -).
Tincin de Gram
Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algn otro
modo
Se tien con Cristal violeta para teir morado. (aplicar por 1minuto)
LAVAR
Se aade una solucin yodada que acta como mordiente. (1 minuto)
LAVAR
Agregar decolorante (alcohol/acetona) con el fin de eliminar el colorante
no fijado. (10 segundos)
LAVAR
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Posteriormente se cubre con un colorante de contraste, Safranina, para
teir de rojo las clulas que no hayan retenido el Cristal Violeta. (30
segundos)
Importante destacar que a pesar de no ser bacterias se tien Gram Positivos las
Levaduras.
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Flujograma Procedimental Tincin de Gram
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Preparacin del Extendido y Tincin de Gram
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Identifique los riesgos asociados a esta etapa del proceso y mencione las medidas de
prevencin que deber tener presente en todo momento:
IV tem: Tincin:
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1.- Identifique con claridad cules son los componentes de la Tincin de Gram,
diferenciando sus colorantes, fijador y decolorante respectivamente.
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3.- Observe con detencin el siguiente esquema y fundamente las diferencias que se
observan y como se manifiestan estas en la actividad prctica procedimental que Ud.
realiza y en la observacin microscpica:
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Observe la preparacin dispuesta en el Microscopio y esquematice en el recuadro
lo observado, destacando su afinidad tintorial coloreando segn lo observado.
Asocie a especie de importancia mdica lo observado
Describa morfologa, agrupacin y afinidad tintorial.
Cocaceas gram (-) cocaceas gram + Bacilos gram (-) bacilos gram +
Morfologa Morfologa
Bacteriana Bacteriana
Agrupacin Agrupacin
Afinidad Afinidad
Tintorial Tintorial
Especies Especies
Asociadas Asociadas
MEDIOS DE CULTIVOS
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Para el aislamiento estudio y clasificacin de los microorganismos es necesario
mantenerlos en un medio en el que dispongan de las sustancias orgnicas e inorgnicas
necesarias e indispensables para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos
medios adems de su desarrollo, los microorganismos pueden manifestar sus
caractersticas de crecimiento y sus propiedades bioqumicas, aspectos bien importantes
para su clasificacin.
Los medios de cultivos son soluciones en estado de gel, que poseen todas las sustancias
que se requieren para el desarrollo de los microorganismos.
Estos medios son imprescindibles paran el laboratorio de microbiologa, por lo que su
buena preparacin, mantencin y control nos entregan confiabilidad en los resultados.
Para que las bacterias se puedan desarrollar de forma adecuada en los medios, estos
deben cumplir ciertas condiciones, es decir temperatura adecuada, Ph y deben ser
estriles (libres de cualquier microorganismo).
Los medios de cultivos, segn sus componentes pueden clasificarse en cuatro tipos:
medios de enriquecimiento,
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medios nutrientes o de soporte,
medios selectivos y
medios diferenciales
Medios de Enriquecimiento
Favorecen el sobrecreciendo de un determinado microrganismo a partir de una muestra
que lo tiene en escasa cantidad, con predominio de la microbiota habitual.
Medios Selectivos
Contiene uno o ms agentes inhibitorios (antibitico-colorantes) que inhiben a los
microorganismos excepto al que se desea recuperar (Fenil-Etil-Alcohol).
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Medios Diferenciales
Emplean metabolitos que permiten a los microorganismos expresar caractersticas
metablicas o de cultivo que hacen posible distinguirlos de otros con caractersticas
diferentes (Ej: el agar sangre cordero permite el crecimiento y diferenciacin segn tipo de
hemlisis y/o produccin de pigmento)
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Mantencin de los Medios de Cultivos
Los medios de cultivos deshidratados deben mantenerse en un lugar seco y oscuro, a una
temperatura aproximadamente de 15C a 25C, en frascos bien cerrados para evitar la
entrada de humedad, ya que la absorcin de agua lleva a una alteracin del Ph y
eventualmente a formacin de precipitados.
Bajo condiciones ideales, los medios de cultivos deshidratados, en sus frascos originales
sellados, pueden ser mantenidos al menos hasta 5 aos sin deteriorarse.
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El medio de cultivo se debe pesar segn los ml a preparar y segn indicacin del
fabricante. A este ya pesado se le aade aproximadamente la mitad del agua necesaria
para su reconstitucin y se mezcla hasta conseguir una suspensin homognea.
Despus se incorpora la cantidad restante del agua.
Luego de esto se llevan al autoclave para su posterior esterilizacin (se debe tener en
cuenta que hay medios de cultivos que no se esterilizan)
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Esterilizacin de los Medios de Cultivos:
Esta puede realizarse en un autoclave o por filtracin. Volmenes de hasta 500ml de la
mayora de los medios son autoclavados a 121C por 15 minutos. Volmenes ms
grandes pueden necesitar de 20-30 minutos o ms. Deberan usarse temperaturas de
116-118 C para medios conteniendo carbohidratos termoestables. Los carbohidratos
termolbiles, deberan ser esterilizados por filtracin y agregarse al medio ya autoclavado
y enfriado, en forma asptica.
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Tubos de Agar Inclinado:
Los tubos llenos con medio de cultivo esterilizado, todava lquido, se colocan en una
posicin inclinada, de tal manera que quede una parte cilndrica de aproximadamente 3
cm y otra parte en pico de flauta de igual dimensin.
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Conservacin de Medios de Cultivos Preparados, listos para su uso
Los medios de cultivos preparados tienen un tiempo limitado de conservacin; cuando no
se indica otra cosa y bajo condiciones adecuadas, ste es de varios meses.
Los medios que no contienen suplementos ni enriquecimientos son estables hasta por un
ao si se conservan en tubos con tapa rosca. Estos mismos medios en placa pueden
mantenerse hasta por 6 meses. Los medios como Agar Sangre, Agar Chocolate y Thayer
Martin se consideran estables hasta por 3 meses. Se recomienda su almacenamiento a 4-
12C, cuando van a mantenerse por periodos de tiempos prolongados. No deben
guardarse a temperatura por debajo a 0C.
Es posible su conservacin durante 1 semana a temperatura ambiente y siempre que
estn protegidos de la luz.
Las placas pueden ser refrigeradas durante una semana sin deteriorarse, pero deberan
envolverse en bolsas de plsticos o papel para minimizar la perdida de agua.
Por otro lado, luego de utilizar estos medios con cultivos bacterianos, se deber efectuar
la esterilizacin en autoclave (73 C por 12-15 minutos), antes de ser eliminados.
Agar Sangre
El agar sangre de cordero al 5% es el medio de cultivo ms comnmente usado para el
aislamiento primario de la mayora de las bacterias aerbicas no fastidiosas.
Por su contenido en nutrientes, permite el buen desarrollo de las bacterias. Por otra parte,
es posible realizar una identificacin primaria de las bacterias por las caractersticas
morfolgicas de las colonias en el agar sangre.
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Agar Chocolate
Es un medio de cultivo usado para el aislamiento primario de la mayora de las bacterias
aerbicas incluyendo adems a algunos fastidiosos (Haemophilus, Gardnerella,
Neisseria).
El agar chocolate es preparado agregando sangre de cordero a un medio de agar base
enriquecido, el que est a una alta temperatura (aprox. 80 C) para lisar los glbulos rojos
y liberar los factores X y V, lo que lleva a mejorar el desarrollo de las bacterias y permite
adems el aislamiento de Haemophilus.
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Agar Salmonella-Shigella (SS)
Es uh medio selectivo usado para el aislamiento de Salmonella y Shigella, inhibiendo el
desarrollo de bacterias coliformes.
Agar TCBS
Medio selectivo para recuperar cepas de Vibrio a partir de muestras clnicas.
Las altas concentraciones de tiosulfato y citrato frrico, junto con la fuerte alcalinidad del
medio inhiben el crecimiento de las Enterobacterias, haciendo de este un medio selectivo
para el desarrollo de Vibrio.
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Caldo Selenito
Es recomendable para el aislamiento de Salmonella, de muestras tales como:
deposiciones, orina o aguas sucias que tiene altas concentraciones de bacterias mixtas.
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Medios Usados en la Identificacin Bioqumica de Enterobacterias (bacilos
gram negativos). Bateras bioqumicas.
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LIA (Lysine Iron Agar)
Medio diferencial usado para ver la habilidad de las Enterobacterias para producir H2S,
descarboxilar y deaminar la lisina.
Disolver el medio en agua destilada, repartir en tubos, esterilizar, poner los tubos
semitendidos.
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Urea (Urea de Stuart (Caldo) y Urea de Christensen (Agar)
Medio utilizado para ver que microorganismos poseen la enzima ureasa y actan
hidrolizando la urea presente en el medio, liberando amoniaco
Citrato de Simmons
Medio utilizado para ver la capacidad de ciertas bacterias de utilizar el citrato como nica
fuente de carbono.
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PRUEBAS ESPECIALES QUE PODEMOS REALIZAR PARA LA
IDENTIFICACIN BACTERIANA
Prueba Coagulasa:
Permite separar S. aureus que es capaz de producir la enzima coagulasa, de las otras
especies de Staphylococcus.
El S. aureus posee dos tipos de coagulasa, la que realizamos es la exo coagulasa o
coagulasa libre que acta mediante la activacin de un factor, formndose un complejo
coagulasa, el cual reacciona con el fibringeno producindose un coagulo de fibrina (esta
prueba se realiza en tubo con plasma de conejo idealmente).
Test en Tubo
Se emulsionan varias colonias en un tubo con 0.5 ml de plama citratado de conejo.
Se incuba a 35 C y se examina la formacin del coagulo a las 4 horas.
Si es negativo se re incuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18-24 horas. La
lectura a las 4 horas es fundamental porque en alguna oportunidad puede suceder que las
fibrinolisinas de S. aureus lisen el coagulo luego de 18 horas de incubacin y de esta
maneras se produzcan un test falso negativo.
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Prueba de la Catalasa
Se agrega una gota de agua oxigenada y una colonia de la bacteria a estudiar, todo esto
una lmina limpia de vidrio.
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Clasificacin de las Bacterias
Para realizar una clasificacin preliminar de las bacterias se utiliza la tincin de gram:
Tamao
Forma (esferas, bastoncillos, espirales)
Disposicin espacial (clulas aisladas, en cadenas y formando acmulos)
Afinidad tintorial (gram positiva o negativa)
Anaerobios:
Se desarrollan en ausencia de oxgeno.
Bacilos Gram Negativos: Bacteroides fragilis, Prevotella melaninogenica,
Fusobacterium
Bacilos Gram Positivos: Actinomyces, Lactobacillus, Propionibacterium, Clostridium.
Cocaceas Gram Negativas: Veillonella
Cocaceas Gram Positivas: Peptostreptococcus
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Necesidades Metablicas de las Bacterias
El crecimiento bacteriano requiere una fuente de energa y la materia prima necesaria
para fabricar las protenas, las estructuras y las membranas que conforman la maquinaria
estructural y bioqumica de la clula.
Las bacterias deben obtener o sintetizar:
Aminocidos
Hidratos de carbono
Lpidos utilizados
Las necesidades mnimas para el crecimiento son una fuente de carbono y nitrgeno, otra
fuente de energa son el agua y diversos iones.
El oxgeno es esencial para el ser humano. Constituye una sustancia txica para muchas
bacterias.
Algunos microorganismos (p. ej., Clostridium perfringens, causante de gangrena gaseosa)
no pueden crecer en presencia de oxgeno.
Este tipo de bacterias son conocidas como Anaerobias Estrictas
Hay otras que requieren la presencia de oxgeno molecular para su crecimiento y en
consecuencia, se denominan Aerobias Estrictas.
Sin embargo, la mayor parte de las bacterias puede crecer tanto en presencia como en
ausencia de oxgeno, en cuyo caso reciben el nombre de Anaerobias Facultativas.
Hongos
La estructura celular de los hongos es ms compleja.
Son microorganismos eucariotas que poseen un ncleo bien definido, mitocondrias,
aparato de Golgi y retculo endoplsmico.
Los hongos pueden existir en una forma unicelular (levadura) capaz de replicarse de
manera asexual, o en una forma filamentosa (moho). (Reproduccin tanto sexual como
asexual).
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HONGOS FILAMENTOSOS
HONGOS LEVADURIFORMES
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Taller Terico Prctico N 1
Reconocimiento y Uso Procedimental de Medios de Cultivo
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Disposicin Nombre del Clasificacin
(Placa / Tubo) Medio de Estado Composicin Objetivo de su Uso
(Dibuje y Coloree) Cultivo Fsico
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MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES Y CROMOGNICOS
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III tem: RECUADRO TEMTICO
Realice la lectura del siguiente recuadro con detencin y luego responda lo solicitado.
Defecto Causal
Apelmazamiento del medio de cultivo Conservacin en atmsfera
excesivamente hmeda
Envase ha permanecido abierto
demasiado tiempo
El envase no qued suficientemente
cerrado despus de su uso
El medio de cultivo deshidratado est
muy pasado de la fecha de vencimiento
Desviacin del pH Agua no neutra
Envase insuficientemente bien cerrado
Medio de cultivo deshidratado muy
pasado de la fecha de vencimiento
Turbidez, Precipitacin Defecto de preparacin
Agua insuficientemente desionizada
Sobrecalentamiento del medio durante su
preparacin
Envases de preparacin
insuficientemente limpios
pH incorrecto o desajustado
Punto de Solidificacin Demasiado Excesiva proporcin de medio de cultivo
Elevado deshidratado
Agar-agar no adecuado
Escasa estabilidad del Gel Proporcin demasiado pequea de
medio de cultivo deshidratado
Medio de cultivo deshidratado no disuelto
completamente
Medio de cultivo deshidratado
sobrecalentado durante su preparacin
El medio de cultivo no se mezcl o fue
insuficiente cuando fue vertido a las
placa de Petri
En el caso que el medio de cultivo es
preparado por el usuario, muy poca
cantidad de Agar-agar
Medios de cultivo cidos
Desviacin del Color Error en la medicin o ajuste de pH
Sobrecalentamiento del medio de cultivo
o envase de preparacin sucio
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Posibles Defectos en la Preparacin y Manipulacin de los Medios de Cultivo
Defecto Causal
Medios de Cultivo Contaminados Esterilizacin insuficiente
Contaminacin accidental posterior a la
esterilizacin. Por ej.: en el vertido de
placa, placas de Petri no estril
Crecimiento Demasiado Pobre en Residuos de sustancias inhibidoras del
Bacterias crecimiento (Ej.: detergentes)
pH incorrecto
medio de cultivo sobrecalentado durante
su preparacin
Crecimiento Demasiado Intenso de Medio de cultivo sobrecalentado durante
Bacterias su preparacin
Medio de cultivo sembrado con excesiva
cantidad de muestra
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CONCEPTOS GENERALES DE SALUD
Enfermedad
Alteracin o desviacin del estado fisiolgico en una o varias partes del cuerpo, por
causas en general conocidas, manifestada por sntomas y signos caractersticos, y cuya
evolucin es ms o menos previsible.
Agente Infeccioso
Microorganismo causante de la infeccin: Bacterias, virus, hongos, parsitos.
Reservorio
Hbitat natural del agente infeccioso. El lugar donde pueden sobrevivir (crece y se
reproduce).
Puerta de salida del agente.
Desde el reservorio (lquido, gotas) hacia el exterior por va area, digestiva y piel.
Mecanismos de Transmisin
Va de Transmisin Contacto Directo.
Va de Transmisin Indirecta.
A travs del aire.
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Va de Transmisin Indirecta
El Reservorio no es la Fuente de Infeccin. Los agentes llegan a travs de elementos
contaminados o vectores.
Animales Enfermos: contaminan con sus heces alimentos y agua que se convierten
en la fuente de infeccin o elemento directamente infectante Ej: Hidatidosis,
Triquinosis, salmonelosis.
Vehculos de Transmisin: objetos o materiales contaminados como juguetes, ropa
de cama, agua, tierra, utensilios: bacterias
Vectores Vivos: Este tipo de transmisin incluye un husped intermediario. Ej: un
insecto, un animal o planta.
A travs del Aire: diseminacin de aerosoles microbianos, son suspensiones areas
de partculas constituidas total o parcialmente por microorganismos: gotillas o polvo (>
de 5 micras) Ej: Tuberculosis.
Pueden difundirse por:
Tos
Estornudo
Conversacin
Mecanismo de Infeccin
INFECCION DIRECTA
Contacto de piel a piel, desde un paciente a otro o de un trabajador de salud. (Ej.: el
saludo con las manos, el bao de pacientes, control de signos vitales).
INFECCION INDIRECTA (VECTORIAL)
Tocar objetos o artculos que estuvieron en contacto directo con el paciente contaminado
(Ej: termmetro, chatas, patos, esfigmomanmetro, utensilios de alimentacin).
INFECCION CRUZADA
Trasmisin de agentes infecciosos entre pacientes y el personal que les proporcionan
atencin en un entorno clnico.
Ello puede ser resultado del contacto directo, persona a persona, o indirecto, mediante
objetos contaminados llamados fmites.
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Otros mecanismos de infeccin:
TRANSFUSIONAL
LACTANCIA
TRANSPLACENTARIO O VERTICAL
- Adherencia.
- Produccin de toxinas.
- Produccin de enzimas.
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MUESTRAS MICROBIOLGICAS
Para trabajar las muestras microbiolgicas deben haber portaobjetos para realizar la
tincin de gram y para poder realizar los exmenes al directo (es decir cuando se carga
la muestra de forma directa en el portaobjeto y se cubre con una laminilla).
Para poder trabajar las muestras se deben utilizar medios de transporte estriles. Esto
es porque el medio debe estar libre de cualquier tipo de microorganismo, es decir;
asegurarnos de que si encontramos algn microorganismo en las muestras, este s est
causando infeccin y no es algo que ha estado en el recolector en el cual se obtuvo.
Las muestras de orina, tejido, lquidos, catter, muestras respiratorias se deben tomar
en:
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Las muestras de raspado de piel:
Placas de Petri estril o contenedor estril.
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Medio de Transporte Cary-Blair: medio usado para mantener muestras de deposicin.
Es un medio no nutritivo, semislido que impide el sobre crecimiento de los
microorganismos, permitiendo a su vez recuperar cepas de: Salmonella, Shigella, Yersinia
y Vibrio.
Siembra de Muestras
Para sembrar las muestras, se requiere de material estril tambin y de un mechero para
poder sembrar alrededor de l.
Estufas de cultivo.
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Siembra: Muestras de Orina Asptica (Urocultivo)
Sembrar en:
Esta debe ser sembrada con asas estriles de 1 ul, ya que el estudio que se hace es
cuantitativo.
Factores a considerar:
El urocultivo es una muestra de orina, la cual se solicita para ver si existe infeccin
urinaria o no.
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Siembra: Muestras de Herida
Sembrar en:
Agar MacConkey
Caldo Thioglicolato
Factores a considerar:
Sembrar en:
Agar MacConkey
Agar Chocolate
Factores a considerar:
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- Con una pipeta estril agregar 10 l de muestra en cada uno de los siguientes
medios: Placa Agar Sangre (Ambiente CO2), Placa chocolate (Ambiente CO2), Placa
Agar Mac Conkey y realizar siembra.
Realizar tincin de gram de las diferentes muestras:
- Se realiza tomando un asa de 10 ul, se introduce en la muestra y se pone en un
portaobjeto.
- Se deja secar para luego teir.
- Incubar a 35 C en estufa de cultivo.
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- En las placas B sembrar 0.01 ml de la muestra. Asa de color Azul calibrada para
10 ml (Dilucin final de las placas: 1: 20000)
- Incubar las placas de Agar Sangre de Cordero en CO2 y las placas de Agar Mac
Conkey en atmsfera aerbica a 35 C.
- Incubar por un mximo de 72 horas.
Cultivo de Koch:
Descontaminacin de la Muestra
Poner las muestras a estudiar y los respectivos tubos cnicos de plstico de 50 ml
previamente identificados con el nmero de la muestra al GBS, en dos gradillas
independientes.
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Etapas en comn para las muestras naturalmente contaminadas:
Agregar al tubo cnico previamente enumerado con el nmero de la muestra
un volumen de solucin de Hidrxido de Sodio 3,5% con Rojo Fenol como
indicador, igual al volumen de muestra recolectada.
Tapar el tubo cnico con su respectiva tapa.
Trasladar los tubos cnicos que contienen la muestra con la solucin de lcalis
a la cmara de incubacin de la seccin.
Agitar los tubos cnicos en el agitador mecnico durante 20 minutos a 37C.
Trasladar los tubos cnicos de regreso al GBS.
Neutralizar el pH de la muestra de inmediato. Para ello deber agregar gota a
gota una solucin de cido Sulfrico 7%, hasta observar una leve tonalidad
amarilla en la mezcla de la muestra.
Ajustar el pH de la solucin con Hidrxido de Sodio 2%, gota a gota hasta
cuando esta obtenga un leve tono rosado que corresponde a un pH 6.6 a 7.2.
Comprobar el pH con papel indicador.
Esperar 5 a 10 minutos y tomar pH al azar a 2 3 muestras de la serie para
ver si se estabilizo el pH, si no es as se vuelve a neutralizar.
Siembra de la Muestra
Se realiza la siembra de las muestras a continuacin de la neutralizacin y
descontaminacin de la muestra segn se requiera, dentro del GBS.
Identificar los tubos de Medio de Lowenstein-Jensen a utilizar durante la siembra de
las muestras respectivas.
Trasvasijar 0,3 a 0,5 ml de la muestra en tubo cnico, en cada tubo de medio de
cultivo Lowenstein-Jensen
Sembrar la muestra en cuatro tubos (a excepcin de las muestras de expectoracin
que se siembran en tres tubos y las muestras de orina que se siembran en 6 tubos).
Incubar los tubos de medio de cultivo Lowenstein-Jensen en posicin horizontal
inclinada, (cajas con inclinacin de 10) de manera que la muestra bae la superficie
del medio.
Muestras de Deposicin
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Coprocultivo
Agar MacConkey
Agar TCBS
Agar Salmonella-Shigella
Caldo selenito
Este examen se solicita cuando hay sospecha de infecciones por las siguientes
bacterias:
Se toma la muestra con medio de transporte Cary-Blair, se pasa la trula por la regin
perianal y se guarda en el medio hasta ser sembrada en el Laboratorio Clnico lo antes
posible.
Leucocitos Fecales:
Muestra Secreciones
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Muestra: Secrecin tica-Ocular
Sembrar en:
Agar Sangre de Cordero
Agar MacConkey
Agar Chocolate
Agar Thayer Martin (solo las oculares)
Caldo Tioglicolato
Realizar Tincin de Gram
Factores a considerar:
La muestra debe mantenerse a temperatura ambiente hasta su siembra.
Estas muestras se toman en medio de transporte Stuart.
Sembrar en:
Agar MacConkey
Agar Chocolate
Secrecin Uretral
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Se debe sembrar en:
Agar Chocolate
Muestras de Lquidos
Agar Chocolate
Agar MacConkey
Agar Thioglicolato
Estudio de Anaerobios
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La muestra debe venir en jeringa tapada sin aire y ser procesada de forma rpida.
Utilizar guantes de procedimientos para su realizacin.
Etiquetar muestra a trabajar y todo el material seleccionado para siembra y
microscopa.
Realizar siembra de anaerobios en:
Tioglicolato-hemina,
PAS-anaerobio,
PAS-Kanamicina (+hemina).
Incubar por 5 das a 35C en estufa de cultivo para secreciones en anaerobiosis en
Jarra GAS-PACK
Realizar Tincin de Gram.
Adems sembrar en:
Agar sangre y Agar Mc Conkey que queda en aerobiosis.
Incubar 72 horas a 35C en estufa de cultivo para secreciones.
Realizar todo esto antes de 30 minutos, una vez llegada la muestra.
Leer Tincin de Gram
Luego de 5 das de incubacin, se deben retirar las placas de la estufa de cultivo
para la lectura de las placas.
Identificar agente aislado
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Lo primero que debo hacer es:
Prender mechero regulando llama azul.
Flamear portaobjeto.
Dejar enfriar portaobjeto.
Enumerar la lmina con lpiz dermatogrfico.
[Esterilizar asa metlica (si se decide utilizar sta) hasta rojo vivo, dejar enfriar].
Usar asa plstica estril utilizada en siembra de la misma muestra.
Expandir muestra sobre la superficie del portaobjetos (esta puede ser directa o del
cultivo).
Fijar muestra al calor, flameando repetidas veces portaobjeto por la llama. Tambin se
puede secar a temperatura ambiente.
Proceder a hacer tincin (ver paso de tinciones)
Los materiales a utilizar son: portaobjetos de 76 x 26 mm, asa estril o asa metlica,
agua destilada, lpiz dermatogrfico o marcador de vidrio, mechero Bunsen.
centrfuga, agua destilada.
Tipos de Frotis
Frotis de Colonias
Enumerar lmina con nmero de la muestra.
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Colocar una gota de agua destilada estril por cada colonia a la que se le realice frotis
Flamear un asa o utilizar un asa estril y tomar la colonia en estudio.
Emulsionar la colonia.
Fijar lmina al calor de la llama (mechero).
Teir con Tincin de Gram,
Extendido de Hemocultivo
Numerar una lmina de 76 x 26 mm con el nmero de peticin en estudio.
Homogeneizar el contenido de la botella, limpiar tapa con torunda con alcohol al
70%.
Extraer una muestra de sangre desde la botella, pinchando con una jeringa
desechable.
Eliminar la primera gota de sangre en solucin de Hipoclorito de Sodio 0,5% para
evitar que la muestra salpique en la lmina.
Depositar una gota de la muestra en la lmina enumerada.
Eliminar el exceso de sangre en Hipoclorito de Sodio 0,5%.
Eliminar la jeringa completa con aguja en caja para cortopunzantes.
Con un cubreobjeto en ngulo de 45 extender una capa de sangre sobre la
lmina.
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Tcnica a realizar:
Utilizar guantes desechables para realizar el procedimiento.
Enumerar todo el material seleccionado para el procedimiento.
Crear un campo de trabajo estril encendiendo el mechero.
El Tcnico debe tomar 2-4 colonias de la cepa aislada para realizar el inculo en un
tubo con Tripticase, el cual se debe ajustar a 0.5 Mcfarland (medir con turbidmetro)
Con una trula estril, tomar inculo y pasarlo a una placa de agar Mller Hinton
(sembrando toda la placa).
Agregar los sensidiscos segn el microorganismo a estudiar con pinzas estriles o
con el dispensador (los sensidiscos se guardan refrigerados a 4C).
Incubar placas sembradas por 18-24 horas a 35 C en estufa para Antibiograma.
El Tecnlogo Mdico es el encargado de leer e interpretar los antibiogramas, pasada
24 horas.
Mtodos Automatizados
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En este momento existen varios sistemas que ofrecen diferentes niveles de
automatizacin para el estudio de susceptibilidad.
Utilizan una medicin turbidimtrica o fluoromtrica para detectar crecimiento bacteriano
en un medio lquido.
La mayora de ellos emplea el mtodo de micro dilucin y perodos de incubacin
menores que los habituales.
Estos mtodos son bastante confiables para el estudio de Enterobacterias y otros
grmenes de crecimiento rpido.
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1 2
3 4
Observe con detencin los esquemas, identifique la actividad, ordnelos segn secuencia
procedimental e identifique posibles errores y/o etapas faltantes
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Observe con detencin e identifique la actividad, destacando las etapas y pasos faltantes
para una correcta tcnica asptica.
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Observe con detencin ambos esquemas e indique las diferencias de ambas tcnicas:
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PARASITOLOGA
El hombre puede enfermar tanto por causas internas y externas. Dentro de las causas
externas estn los agentes biolgicos que reciben el nombre de Parsitos y el ser vivo
que los alberga se denomina Husped.
Un parsito se puede definir como una de las partes de dos especies que interaccionan
teniendo integrados sus genomas hasta tal punto que el parsito depende, como mnimo,
de uno de los genes de la otra especie para sobrevivir.
Hay varios tipos de interacciones biolgicas en las cuales dos organismos se asocian
para vivir. Las ms importantes son:
Parasitismo:
Este tipo de asociacin sucede cuando un ser vivo (parsito) se aloja en otro de diferente
especie (husped u hospedero) del cual se alimenta. El parasitismo abarca desde los
virus hasta los artrpodos, pero por costumbre se ha restringido el trmino parsito para
aquellos organismos que pertenecen al reino animal.
Comensalismo:
Se presenta cuando dos especies diferentes se asocian en tal forma que solamente una
de las dos obtiene beneficio, pero ninguna sufre dao.
Inquilinismo:
Ocurre cuando un ser se aloja en otro sin producirle dao y sin derivar alimento de l.
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Simbiosis:
Sucede cuando dos especies diferentes se asocian para obtener beneficio mutuo, sin el
cual no pueden subsistir.
Terminologa
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Ciclo de Transmisin: Etapas por las cuales pasa un parasito desde la fuente de
infeccin hasta el susceptible.
Forma Infectante: Fase del parasito capaz de infectar al husped.
Clasificacin
Ciclo de Vida
Es el proceso que desarrolla el parasito para llegar al husped, desarrollarse en l y
producir formas infectantes que perpetan la especie.
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Los protozoos intestinales desarrollan el ciclo de vida ms simple, es aqul que permite a
los parsitos dividirse en el interior del husped, para aumentar su nmero y a su vez
producir formas que salen al exterior para infectar nuevos huspedes.
En los helmintos, se presentan otros tipos de ciclo que requieren la salida al exterior de
huevos o larvas, que en circunstancias propicias de temperatura y humedad, llegan a ser
infectantes.
Ciclo de Trasmisin
Son etapas que deben trascurrir en un parasito para pasar del husped infectado (fuente
de infeccin) al husped susceptible. Adems pueden ser congnitos, connatales y
adquiridos.
Mecanismos Adquiridos:
a) Directo:
Cutneo
Ciclo ano-mano-boca
b) Indirecto
Vehculo: Alimento-agua; Tierra-cosas; Fmites-ropa; Utensilios
Aire: Gotitas de flugge; polvo
c) Vectores
Mecnico
Biolgico
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Mecanismo de Accin
Los parsitos afectan al organismo humano de maneras muy diversas, dependiendo del
tamao, nmero, localizacin, etc.; los principales mecanismos por los cuales los
parsitos causan dao a sus huspedes son:
Mecnicos:
Los efectos mecnicos son producidos por obstruccin, ocupacin de espacio y
compresin; el primero sucede con parsitos que se alojan en conductos del
organismo, y el segundo ocurre con aquellos que ocupan espacio en vsceras.
Traumticos:
Los parsitos pueden causar traumatismo en los rganos donde se localizan.
Bioqumicos.:
Algunos parsitos producen sustancias txicas o metablicas que tienen la
capacidad de destruir tejidos.
Inmunolgicos:
Los parsitos y sus productos de excrecin derivados del metabolismo, producen
reaccin de hipersensibilidad inmediata o tarda.
Expoliativos:
Es el mecanismo por el cual el parasito consume elementos propios del husped
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Protozoos
El reino Protista y el subreino Protozoa, agrupan los organismos unicelulares que se
denominan Protozoos o Protozoarios. Se pueden encontrar de diferentes formas, de vida
libre y otros siendo parsitos de animales y plantas. Son microscpicos y se localizan en
diferentes tejidos. Los protozoos constituyen uno de los reinos animales ms primitivos de
la historia de la Tierra. En los protozoos se distinguen los Trofozoitos (forma vegetativa) y
Quistes (forma de resistencia).
Morfologa
Los Trofozoitos constan de membrana, citoplasma y ncleo. La membrana vara de
espesor segn las especies y sus principales funciones son: limitar el parsito, servir
como elemento protector y permitir el intercambio de sustancias alimenticias y de
excrecin.
Reproduccin
Los protozoarios se multiplican por reproduccin asexual y slo algunos tienen
reproduccin sexual. La asexual tiene dos modalidades divisin binaria y divisin mltiple.
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Locomocin
Los protozoos presentan mecanismos diversos de locomocin, funcin que se tiene en
cuenta como uno de los parmetros para su clasificacin. Segn el modo que tienen para
desplazarse se habla de:
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Helmintos
Morfologa y Fisiologa
Los Nematelmintos o Nemtodos y los Platelmintos difieren morfolgicamente, los
primeros son gusanos cilndricos, habitualmente de sexos separados y con dimorfismo
sexual. Al corte transversal presenta una envoltura externa, la cutcula, que impide que el
gusano sea destruido por las enzimas del husped, a su vez la capa muscular es la que
proporciona movilidad al parasito.
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Artrpodos
Son en su mayora animales invertebrados, caracterizados por poseer patas articuladas,
pueden ser parsitos de forma permanente o temporales del hombre; actan como
husped intermediario.
Se pueden distinguir segn la cantidad de patas que poseen:
Insectos hexpodos con 6 patas,
Arcnidos u octgodos con 8 patas y
Crustceos o decpodos con 10 patas
Insectos Hexpodos:
Los insectos adultos tienen el cuerpo dividido en tres regiones: a) cabeza que posee un
aparato bucal y un par de antenas; b) trax, dividido en tres segmentos: protrax,
mesotrax y metatrax, de cada uno de los cuales sale un par de patas; en los insectos
que tienen alas se encuentran un par en el mesotrax y otro en el metatrax; c) abdomen;
dividido en segmentos.
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Arcnidos u Octgodos:
Comprende las araas, garrapatas, caros y escorpiones. El cuerpo de los adultos est
dividido en dos regiones, cefalotrax y abdomen.
Crustceos o Decpodos:
Hay pocos crustceos de importancia mdica. Sirven como husped intermediario de
algunos parsitos humanos.
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Por su parte la Metamorfosis Completa consta de cuatro etapas: huevo, larva o ninfa,
pupa y adulto. Dentro de los artrpodos que desarrollan metamorfosis completa podemos
encontrar: Moscas, mosquitos y pulgas
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Amebiasis
Es la infeccin del intestino grueso del hombre por el protozoo Entamoeba histolytica.
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Balantidiosis
Zoonosis producida por Balantidium coli, protozoo ciliado, comensal del intestino grueso
del cerdo (hombres infectados), que afecta al hombre originando a veces un sndrome
disentrico o diarreico.
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Giardiasis
Infeccin del intestino delgado del hombre, producida por el protozoo Giardia lamblia
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Isosporiasis
Infeccin del intestino delgado del hombre, por Isospora belli, protozoo, coccidio que
produce un cuadro clnico caracterizado por fiebre, diarrea subaguda y Eosinofilia.
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Criptosporidiasis
Infeccin del aparato digestivo por protozoos del gnero Cryptosporidium sp., de los
cuales Cryptococcus muris y Cryptococcus parvum afectan a mamferos, siendo
Cryptococcus parvum el que parasita al hombre.
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Tricomoniasis
Infeccin del hombre provocada por protozoos flagelados del gnero Trichomonas,
localizadas en la cavidad bucal, digestiva y urogenital. En el ser humano se han
demostrado 3 especies: Trichomonas tenax (comensal de la boca), Trichomonas hominis
(comensal del intestino grueso) y Trichomonas vaginalis, parasito de la vagina en la mujer
y uretra, vesculas seminales y prstata en el hombre.
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Blastocistosis
Infeccin del intestino del hombre producida por el protozoo Blastocystis hominis, no
presenta forma qustica. Es causante de diarrea y su patogenicidad depende del nmero
de parsitos.
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Enfermedad de Chagas
Es la infeccin del hombre, de mamferos y triatominos (vinchuca) producida por un
protozoo flagelado, Tripanosoma cruzi. En el hombre la infeccin puede ser congnita o
adquirida. En Chile se han identificado solo dos vectores capaces de trasmitir este
protozoo, el Triatoma infestans (hbitat domiciliario nocturno) y Triatoma spinolai (rural y
silvestre), artrpodos hematofogos conocidos popularmente como vinchuca.
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Toxoplasmosis
Infeccin parasitaria del hombre y de diversas especies de mamferos y de aves,
producida por un protozoo coccidio llamado Toxoplasma gondii.
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Ascariasis
Helminto- Nematodo que afecta el intestino delgado del hombre, por Ascaris lumbricoides,
Es un geo helminto ya que sus huevos maduran en la tierra, es por esto que parasita
preferentemente a los nios.
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Tricocefalosis
Helminto -Nematodo que afecta el intestino grueso del hombre por Trichuris trichiura, a
diferencia de Ascaris lumbricoides, no efecta migraciones (sin Ciclo de Loos)
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Oxiuriasis
Infeccin del tipo familiar producida por el Helminto- Nematodo Enterobius vermicularis
conocido popularmente como pidulle. Habita en el ciego del hombre y las hembras
migran a la regin perianal para depositar sus huevos.
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Teniasis
Infeccin humana producida por los Helmintos- Cestodos por los ejemplares adultos de
Taenia solium y Taenia saginata.
Taenia solium
El husped intermediario de este parasito es el cerdo, en el que se desarrolla el estado
larval denominado Cysticercus cellulosae. El hombre al comer carne de cerdo crudo y/o
mal cocida adquiere la Taenia (husped definitivo), infectando el intestino delgado del
hombre.
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Taenia saginata
El husped intermediario de este parasito es el Vacuno, en el que se desarrolla el estado
larval denominado Cysticercus bovis. El hombre al comer carne de vacuno crudo y/o mal
cocida adquiere la Taenia (husped definitivo), infectando el intestino delgado del hombre.
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Cisticercosis
Es la localizacin en los tejido del hombre del Cysticercus cellulosae, forma larval de
Taenia solium que habitualmente infecta al cerdo
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Difilobotriasis
Infeccin del intestino delgado que afecta a hombres y animales ictifagos del Helminto-
Cestodo Dyphyllobothrium latum.
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Infeccin accidental del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Hymenolepis diminuta propia de ratas y ratones
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Dipilidiasis
Infeccin accidental del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Dipylidium caninum, propia perros, gatos, otros caninos y felinos silvestres.
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Hidatidosis
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Triquinosis
Es la presencia en la carne de cerdo de quistes tisulares del Helminto nematodo
Trichinella spiralis que vive en el intestino delgado de animales infectados.
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Fasciolasis
Es la presencia en los canalculos biliares del hombre y animales herbvoros del helminto
trematodo Fasciola heptica.
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Procedimiento
1. Durante el procesamiento de las muestras, al igual que para los otros mtodos
aplicados a fluidos corporales, se deben guardar las precauciones contenidas en
los manuales de bioseguridad.
2. Numerar los tres frascos del paciente con el mismo nmero.
3. Numerar 2 portaobjetos diferenciando la Fase T (Trofozoitica) de la Fase Q
(qustica), 2 vasos y 1 tubo de centrfuga con el mismo nmero de los frascos.
4. Homogenizar el contenido de los frascos mediante ayuda de una paleta de
madera.
5. Vaciar todo el contenido de cada frasco en un vaso y agregar suero fisiolgico
0,85% con la precaucin de efectuar una buena dilucin y homogenizacin.
6. Tamizar la emulsin a travs de la malla colocada en un vaso limpio.
7. Observar el material retenido en la malla en busca de parsitos macroscpicos.
8. Colocar aproximadamente 12 ml de tamizado en el tubo de centrfuga.
9. Centrifugar por 3 minutos a 1.800 r.p.m.
10. Eliminar el sobrenadante invirtiendo el tubo. Si el sedimento es menor de 0,5 ml
agregar del tamizado hasta lograr un sedimento de 0,5 a 0,6 ml.
11. Resuspender con suero fisiolgico 0,85 % y centrifugar nuevamente.
12. Resuspender el sedimento hasta 2 ml con suero fisiolgico 0,85 % y agitar para
soltar el sedimento.
13. Completar a 12 ml con suero fisiolgico 0,85% y centrifugar por 3 minutos a 1.800
r.p.m. aprox.
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14. Repetir los pasos 11 y 12 entre dos y cuatro veces hasta obtener un sobrenadante
limpio o transparente.
15. Colocar una gota de tincin, en el portaobjeto marcado con la letra T (fase
trofosoitica).
16. Colocar una gota del sedimento, una junto a cada gota de tincin.
17. Con un ngulo del cubreobjetos mezclar el sedimento y la tincin; luego cubrir.
18. Guardar en cmara hmeda.
19. Resuspender el contenido del tubo de sedimento con suero fisiolgico 0,85% hasta
10 ml.
20. Agregar 2 ml de acetato de etilo.
21. Tapar el tubo y agitar enrgicamente por 30 segundos. Destapar lentamente.
22. Centrifugar por 3 minutos a 2.000 r.p.m.
23. Vaciar todo el sobrenadante de una sola vez, en forma rpida, invirtiendo el tubo.
24. Resuspender el sedimento en 1 ml de suero fisiolgico 0,85 % y homogenizar.
25. Proceder como en el punto 14 y marcar el portaobjetos con una letra Q (fase
qustica).
26. Proceder igual que en el punto 15 y 16.
27. Colocar en cmara hmeda hasta su lectura.
Estas preparaciones se pueden conservar hasta 24 horas en la cmara hmeda
en un lugar fresco o refrigerar entre 2 y 8C.
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Procedimiento
Se deben recolectar 5 muestras por las maanas en das sucesivos sin que el paciente
lave o limpie el margen anal y perianal, de la siguiente manera, a partir del primer da:
1. Despegar la cinta adhesiva transparente del portaobjeto tomndola desde su
pestaa y sin despegar el borde de fijacin quedando la superficie engomada
hacia afuera.
2. Indicar al paciente que debe colocarse en decbito ventral, se deben separar los
glteos
3. Se debe aplicar repetidamente la superficie engomada en la regin anal y
perianal.
4. Pegar la cinta adhesiva transparente sobre el portaobjetos, procurando dejarla lo
ms estirada posible en toda su extensin.
5. Colocar el portaobjeto ya utilizado en el contenedor para las muestras.
6. El paciente y/o la persona que haya colaborado en la toma de muestra debe
lavarse muy bien las manos despus del procedimiento.
7. Repetir los pasos anteriores los das restantes hasta completar las 5 muestras.
Describa las precauciones que debe tener presente al manipular estas muestras
recepcionadas en el Laboratorio de Parasitologa:
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Tcnica a desarrollar:
Debe realizar los pasos previos indicados para un EPSD y extender un frotis del
centrifugado:
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2.- De acuerdo al relato: Por qu las muestras para estudio bacteriolgico son
enumeradas en forma separada con respecto a las otras muestras recepcionadas
de la Sra. Anglica?
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A.-
B.-
A.-
B.-
C.-
A.-
B.-
C.-
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A.-
B.-
A.-
B.-
5.2.- Mencione los EPP mnimos que debe tener la Tcnico Carolina para el
procedimiento que debe realizar en la seccin de bacteriologa al procesar el
Hemocultivo.
A.-
B.-
C.-
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Pregunta Respuestas
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Pregunta Respuestas
Pregunta Respuestas
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- .
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- .
.
Colorante Base:
4.6.- Identifique el colorante base y de
contraste utilizados por la Tcnico en ..
el caso descrito
Colorante de Contraste:
...
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BIBLIOGRAFA
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part2/232.pdf
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v15_n2/pdf/a02.pdf
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