Sei sulla pagina 1di 8

9

c a P t u l o

Enzimas: regulacin
de actividades
Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD

IMPORTANCIA BIOMDICA den hacerlo a una disminucin precipitada de la misma. En conse-


cuencia, los valores de Km para casi todas las enzimas tienden a ser
El fisilogo del siglo xix Claude Bernard enunci la base conceptual cercanos a la concentracin intracelular promedio de sus sustratos,
para la regulacin metablica. Observ que los organismos vivos res- de modo que los cambios de la concentracin de sustrato generan
ponden de modos apropiados tanto cuantitativo como temporalmen- cambios correspondientes del flujo de metabolitos (fig. 9-1). Las
te para permitirles sobrevivir a los mltiples desafos planteados por respuestas a cambios de la concentracin de sustrato representan un
cambios de sus ambientes externo e interno. Despus, Walter Cannon medio importante pero pasivo para coordinar el flujo de metaboli-
acu el trmino homeostasis para describir la capacidad de los tos y mantener la homeostasis en clulas quiescentes. Sin embargo,
animales para mantener un ambiente intracelular constante a pesar ofrecen un alcance limitado para mostrar respuesta a cambios en
de los cambios en su ambiente externo. Ahora se sabe que los organis- variables ambientales. A continuacin se comentan los mecanismos
mos responden a cambios en sus ambientes externo e interno por que regulan la eficiencia de las enzimas de una manera activa en
medio de ajustes balanceados y coordinados de los ndices de reac- respuesta a seales internas y externas.
ciones metablicas especficas. Las perturbaciones de la maquinaria
de estmulo-respuesta, de la cual depende el mantenimiento del equi-
librio homeosttico, pueden ser nocivas para la salud de seres huma- El flujo de metabolitos tiende
nos. El cncer, la diabetes, la fibrosis qustica y la enfermedad de a ser unidireccional
Alzheimer, por ejemplo, se caracterizan por disfunciones de la regu-
Pese a la existencia de oscilaciones a corto plazo de las concentracio-
lacin desencadenadas por agentes patgenos o mutaciones genti-
nes de metabolitos y de enzimas, las clulas vivas existen en un esta-
cas. Muchos virus oncognicos elaboran tirosina cinasas de protenas
do dinmico de reposo en el cual las concentraciones medias de
que modifican los eventos reguladores que controlan los modelos de
intermediarios metablicos permanecen relativamente constantes
expresin de gen, lo que contribuye al inicio de cncer y la progresin
con el tiempo (fig. 9-2). Aun cuando todas las reacciones qumi-
del mismo. La toxina de Vibrio cholerae, el agente causal del clera,
cas son hasta cierto grado reversibles, en las clulas vivas los pro-
inhabilita vas de estmulo-respuesta en las clulas del epitelio intesti-
ductos de reaccin sirven como sustratos para y son eliminados
nal al producir ADP-ribosilacin de las protenas de unin a GTP
por otras reacciones catalizadas por enzima. De este modo, mu-
(protenas G) que enlazan receptores de la adenilil ciclasa en la super-
chas reacciones nominalmente reversibles ocurren de manera uni-
ficie celular. La activacin consiguiente de la ciclasa conduce al flujo
direccional. Tal sucesin de reacciones metablicas acopladas se
irrestricto de agua a los intestinos, lo que resulta en diarrea masiva y
acompaa de un cambio global de la energa libre que favorece el
deshidratacin. Yersinia pestis, el agente causal de la peste, elabora
flujo unidireccional de metabolitos (cap. 11). El flujo unidireccional
una protena-tirosina fosfatasa que hidroliza grupos fosforilo en pro-
de metabolitos a travs de una va con un cambio negativo global
tenas clave del citoesqueleto. Se cree que las disfunciones en los sis-
grande en energa libre es anlogo al flujo de agua a travs de una
temas proteolticos de los cuales depende la degradacin de protenas
tubera en la cual un extremo est ms bajo que el otro. Las vueltas
defectuosas o anormales, participan en enfermedades neurodegene-
y codos en la tubera simulan pasos individuales catalizados por en-
rativas, como la de Alzheimer y la de Parkinson. As, el conocimiento
zima con un cambio pequeo negativo o positivo de la energa libre.
de los factores que controlan los ndices de reacciones catalizadas por
Empero, el flujo de agua a travs de la tubera permanece unidirec-
enzima es esencial para un entendimiento de la base molecular de la
cional debido al cambio general de altura, que corresponde al cam-
enfermedad. Este captulo esboza los modelos mediante los cuales se
bio general de la energa libre en una va (fig. 9-3).
controlan los procesos metablicos y proporciona ejemplos ilustrati-
vos. Captulos subsiguientes ofrecen ms ejemplos.
LA COMPARTAMeNTALIZACIN
LA ReguLACIN DeL fLujO AseguRA efICIeNCIA MeTABLICA
De MeTABOLITOs PueDe Y sIMPLIfICA LA ReguLACIN
seR ACTIvA O PAsIvA
En eucariotas, las vas anablicas y catablicas que interconvierten
Las enzimas que operan a su velocidad mxima no pueden mostrar productos comunes pueden tener lugar en compartimientos subce-
respuesta a un aumento de la concentracin de sustrato, y slo pue- lulares especficos. Por ejemplo, muchas de las enzimas que degra-

75

09 Bender.indd 75 27/11/09 13:54:38


76 SECCIN I Estructuras y funciones de protenas y enzimas

VB Molculas
grandes

Molculas ~P Molculas
V VA Nutrientes ~P Desechos
pequeas pequeas
Km

S S Molculas
pequeas

[S]
fIguRA 9-2 Clula idealizada en estado de equilibrio dinmico.
fIguRA 9-1 Respuesta diferencial del ndice de una reaccin Note que el flujo de metabolitos es unidireccional.
catalizada por enzima, V, al mismo cambio creciente de la
concentracin de sustrato, a una concentracin de sustrato de Km (VA)
o muy por arriba de la Km (VB).

dan protenas y polisacridos residen dentro de organelos denomi- A


nados lisosomas. De modo similar, la biosntesis de cidos grasos
ocurre en el citosol, mientras que la oxidacin de cidos grasos tiene
lugar dentro de las mitocondrias (caps. 22 y 23). La segregacin de B
ciertas vas metablicas dentro de tipos de clulas especializados
puede proporcionar compartamentalizacin fsica adicional. De
manera alternativa, la posesin de uno o ms intermediarios nicos
puede permitir que vas que al parecer se oponen coexistan incluso
en ausencia de barreras fsicas. Por ejemplo, a pesar de muchos in- fIguRA 9-3 Analoga hidrosttica para una va con un paso
termediarios y enzimas compartidos, tanto la gluclisis como la glu- limitante de la velocidad (A) y un paso con un valor de G cercano a
coneognesis son favorecidas desde el punto de vista energtico. cero (B).
Esto podra no ser cierto si todas las reacciones fueran iguales. Si
una va se favoreciera en el aspecto energtico, la otra se acompaa- tida de la biosntesis de cidos grasos (cap. 23). Cuando se inhibe la
ra de un cambio de la energa libre G de igual magnitud pero con sntesis de malonil-CoA, las reacciones subsiguientes de la sntesis
signo opuesto. La espontaneidad simultnea en ambas vas depende de cidos grasos cesan por falta de sustratos. Como rectoras natu-
de la sustitucin de una o ms reacciones por otras diferentes fa- rales del flujo metablico, las enzimas que catalizan pasos limitantes
vorecidas desde el punto de vista termodinmico en la direccin constituyen blancos eficientes para intervencin reguladora me-
opuesta. La enzima glucoltica fosfofructocinasa (cap. 18) es rem- diante frmacos. Por ejemplo, la inhibicin por medicamentos tipo
plazada por la enzima gluconeognica fructosa-1,6-bisfosfatasa estatina de la HMG-CoA reductasa, que cataliza la reaccin limi-
(cap. 20). La capacidad de las enzimas para distinguir entre las coen- tante de la colesterognesis, restringe la sntesis de colesterol.
zimas similares en el aspecto estructural NAD+ y NADP+ tambin
origina una forma de compartimentalizacin, porque segrega los
electrones del NADH que estn destinados para la generacin de ReguLACIN De LA CANTIDAD
ATP a partir de los del NADPH que participan en los pasos reducti-
vos en muchas vas biosintticas.
De eNZIMA
La capacidad cataltica de la reaccin limitante en una va metabli-
ca es el producto de la concentracin de molculas de enzima y su
El control de una enzima que cataliza eficiencia cataltica intrnseca. Por ende, resulta que la capacidad
una reaccin limitante regula una va cataltica puede influir tanto al cambiar la cantidad de enzima pre-
metablica completa sente como al alterar su eficiencia cataltica intrnseca.
Si bien el flujo de metabolitos a travs de vas metablicas incluye
catlisis por muchas enzimas, el control activo de la homeostasis se
logra por medio de regulacin de nicamente un subgrupo selecto
Las protenas se sintetizan y degradan
de estas enzimas. La enzima ideal para intervencin reguladora es de manera continua
aquella cuya cantidad o eficiencia cataltica dicta que la reaccin que Al medir las tasas de incorporacin de los aminocidos 15N marca-
cataliza sea lenta en comparacin con todas las otras en la va. Por dos hacia protenas, y los ndices de prdida de 15N desde protena,
ende, el decremento de la eficiencia cataltica o de la cantidad del Schoenheimer dedujo que las protenas del cuerpo se encuentran en
catalizador para la reaccin limitante de la velocidad (o cuello de un estado de equilibrio dinmico en el cual se estn sintetizando y
botella), reduce el flujo de metabolitos por toda la va. A la inversa, degradando de manera continua, proceso llamado recambio de
un incremento de su cantidad o eficiencia cataltica aumenta el flujo protena. Aun cuando las concentraciones de estado de equilibrio
a travs de la va en conjunto. Por ejemplo, la acetil-CoA carboxilasa de algunas enzimas y otras protenas permanecen en esencia cons-
cataliza la sntesis de malonil-CoA, la primera reaccin comprome- tantes, o constitutivas, con el tiempo las concentraciones de mu-

09 Bender.indd 76 27/11/09 13:54:43


Captulo 9 Enzimas: regulacin de actividades 77

chas enzimas estn influidas por una amplia gama de factores fisio- intracelulares, como en su capacidad para distinguir entre diferentes
lgicos, hormonales o de la dieta. estados fsicos o conformacionales de una protena blanco. De este
La cantidad absoluta de una enzima refleja el balance neto en- modo, la va de la ubiquitina-proteasoma puede degradar de mane-
tre sus ndices de sntesis y de degradacin. En seres humanos, las ra selectiva protenas cuya integridad fsica y competencia funcional
alteraciones de las cifras de enzimas especficas pueden estar afecta- han quedado comprometidas por la prdida de un grupo prostti-
das por un cambio de la constante de ndice para los procesos gene- co o por dao del mismo, oxidacin de residuos cistena o histidina,
rales de sntesis (ks), degradacin (kdeg), o ambos. o desaminacin de residuos asparagina o glutamina. El reconoci-
miento por enzimas proteolticas tambin puede ser regulado por
Enzima modificaciones covalentes, como fosforilacin; unin de sustratos o
de efectores alostricos, o asociacin con membranas, oligonucle-
ks kdeg tidos u otras protenas. Cada vez ms pruebas sugieren que las dis-
funciones de la va de ubiquitina-proteasoma contribuyen a la acu-
Aminocidos
mulacin de especies protenicas plegadas de modo aberrante,
caractersticas de varias enfermedades neurodegenerativas.

Control de la sntesis de enzima


La sntesis de ciertas enzimas depende de la presencia de inducto- HAY MLTIPLes OPCIONes PARA
res, tpicamente sustratos o compuestos relacionados desde el punto ReguLAR LA ACTIvIDAD CATALTICA
de vista estructural que inician su sntesis. Por ejemplo, Escherichia
coli cultivada en glucosa slo cataboliza lactosa luego de adicin de En seres humanos, la induccin de sntesis de protena es un proce-
un -galactsido, un inductor que inicia la sntesis de una -ga- so complejo, de mltiples pasos, que tpicamente requiere horas
lactosidasa y una galactsido permeasa (fig. 38-3). Las enzimas in- para producir cambios importantes de la concentracin total de en-
ducibles de seres humanos comprenden la triptfano pirrolasa, zima. En contraste, los cambios de la eficiencia cataltica intrnseca
treonina deshidratasa, tirosina--cetoglutarato aminotransferasa, por unin de ligandos disociables (regulacin alostrica) o por
enzimas del ciclo de la urea, HMG-CoA reductasa y citocromo modificacin covalente logran regulacin de la actividad enzimti-
P450. A la inversa, un exceso de un metabolito puede restringir ca en segundos. Los cambios de la concentracin de protena satis-
la sntesis de su enzima cognada por medio de represin. Tanto la facen requisitos adaptativos a largo plazo, mientras que los cambios
induccin como la represin implican elementos cis, secuencias de de la eficiencia cataltica son ms idneos para alteraciones rpidas
DNA especficas localizadas corriente arriba de genes regulados, y y transitorias del flujo de metabolitos.
protenas reguladoras que transactan. Los mecanismos molecu-
lares de la induccin y represin se comentan en el captulo 38. LOs efeCTORes ALOsTRICOs ReguLAN
La sntesis de otras enzimas puede estimularse mediante la unin
de hormonas y otras seales extracelulares a receptores celulares CIeRTAs eNZIMAs
especficos. En el captulo 42 se presenta informacin detallada so- Inhibicin por retroalimentacin se refiere a la inhibicin de una
bre el control de la sntesis de protena en respuesta a estmulos enzima en una va biosinttica por un producto terminal de esa va.
hormonales. En el ejemplo que sigue, para la biosntesis de D a partir de A, cata-
lizada por las enzimas Enz1 a Enz3,
Control de la degradacin enzimtica Enz1 Enz2 Enz3
En animales, muchas protenas se degradan por medio de la va de A B C D
la ubiquitina-proteasoma, cuyo descubrimiento les vali un Premio las altas concentraciones de D inhiben la conversin de A en B. La
Nobel a Aaron Ciechanover, Avram Hershko e Irwin Rose. El pro- inhibicin no depende del regreso de los intermediarios, sino de
teasoma 26S comprende ms de 30 subunidades polipeptdicas dis- la capacidad de D para unirse a Enz1 e inhibirla. Por lo general, D se
puestas en forma de cilindro hueco. Los sitios activos de sus subuni- une a un sitio alostrico separado desde el punto de vista espacial
dades proteolticas miran hacia el interior del cilindro, lo que impide del sitio cataltico de la enzima blanco. De esta manera, los inhibi-
degradacin indiscriminada de protenas celulares. Las protenas se dores por retroaccin tpicamente tienen poca o ninguna similitud
dirigen hacia el proteasoma mediante ubiquitinacin, la fijacin estructural con los sustratos de las enzimas que inhiben. En este
covalente de una o ms molculas de ubiquitina; esta ltima es una ejemplo, el inhibidor por retroalimentacin D acta como un efec-
protena pequea, de alrededor de 75 residuos, que est muy con- tor alostrico negativo de Enz1.
servada entre eucariotas. La ubiquitinacin es catalizada por una En una va biosinttica ramificada, las reacciones iniciales par-
familia grande de enzimas denominadas ligasas E3, que fijan ubi- ticipan en la sntesis de mltiples productos terminales. En la figura
quitina al grupo amino de la cadena lateral de residuos lisilo. 9-4 se muestra una va biosinttica ramificada hipottica en la cual
La va de la ubiquitina-proteasoma se encarga tanto de la de- las flechas curvas llevan desde inhibidores por retroaccin hacia las
gradacin regulada de protenas celulares seleccionadas (p. ej., cicli- enzimas cuya actividad inhiben. Las secuencias S3 A, S4 B,
nas, en respuesta a seales intracelulares y extracelulares especfi- S4 C y S3 D representan, cada una, secuencias de reaccin
cas), como de la eliminacin de especies protenicas defectuosas o lineal que son inhibidas por retroaccin por sus productos termina-
aberrantes. La clave para la versatilidad y selectividad del sistema de les. Las vas de la biosntesis de nucletido (cap. 33) proporcionan
ubiquitina-proteasoma reside tanto en la variedad de las ligasas E3 ejemplos especficos.

09 Bender.indd 77 27/11/09 13:54:48


78 SECCIN I Estructuras y funciones de protenas y enzimas

nosina (ATP). El CTP, un producto terminal de la va biosinttica de


A B pirimidina, inhibe la ATCasa, mientras que el ATP la activa. Adems,
las concentraciones altas de ATP pueden superar la inhibicin por
CTP, lo que permite que la sntesis de nucletidos pirimidina proceda
S1 S2 S3 S4
cuando las concentraciones de nucletido purina estn altas.
C
S5 D
Los sitios alostrico y cataltico son
fIguRA 9-4 Sitios de inhibicin por retroalimentacin en una va distintos desde el punto de vista espacial
biosinttica ramificada. S1-S5 son intermediarios en la biosntesis de La disimilitud estructural entre un inhibidor por retroalimentacin
productos terminales A-D. Las flechas rectas representan enzimas que y el sustrato para la enzima cuya actividad regula, sugiere que estos
catalizan las conversiones indicadas. Las flechas curvas de color rojo efectores no son isostricos con un sustrato, sino alostricos (ocu-
representan asas de retroalimentacin e indican sitios de inhibicin por
pan otro espacio). Por consiguiente, Jacques Monod propuso la
retroalimentacin por productos terminales especficos.
existencia de sitios alostricos que son distintos desde el punto de
vista fsico del sitio cataltico. De esta manera, las enzimas alostri-
La cintica de inhibicin por retroalimentacin puede ser cas son aquellas para las cuales la catlisis en el sitio activo puede
competitiva, no competitiva, parcialmente competitiva o mixta. modularse por la presencia de efectores en un sitio alostrico. Esta
Los inhibidores por retroalimentacin, que suelen ser los pequeos hiptesis se ha confirmado por muchas lneas de evidencia, incluso
bloques de construccin moleculares de macromolculas (p. ej., cristalografa con rayos X y mutagnesis dirigida hacia sitio, lo que
aminocidos para protenas, nucletidos para cidos nucleicos), demuestra la existencia de sitios activo y alostrico distintos desde el
por lo general inhiben el primer paso comprometido en una se- punto de vista espacial sobre diversas enzimas. Por ejemplo, la ATC-
cuencia biosinttica particular. Un ejemplo muy estudiado es la in- asa de Escherichia coli es un dodecmero que consta de seis sub-
hibicin de la aspartato transcarbamoilasa bacteriana por CTP unidades catalticas y seis subunidades reguladoras; estas ltimas se
(vase ms adelante y cap. 33). unen a los nucletido trifosfatos que modulan la actividad. En gene-
Mltiples asas de retroalimentacin proporcionan control fino ral, la unin de un regulador alostrico induce un cambio confor-
adicional. Por ejemplo, un exceso de producto B aminora el reque- macional en la enzima que abarca el sitio activo.
rimiento de sustrato S2 (fig. 9-5). Con todo, S2 tambin se necesita
para la sntesis de A, C y D. De este modo, para esta va, el exceso de
B restringe la sntesis de los cuatro productos terminales, al margen Los efectos alostricos pueden ocurrir
de la necesidad de los otros tres. Para sortear esta dificultad poten- sobre Km o sobre Vmx
cial, cada producto terminal slo puede inhibir de manera parcial la Hacer referencia a la cintica de la inhibicin alostrica como com-
actividad cataltica. El efecto de un exceso de dos o ms productos petitiva o no competitiva con sustrato conlleva implicaciones me-
terminales puede ser estrictamente aditivo o, de modo alternativo, canicistas desorientadoras. En lugar de eso se hace referencia a dos
mayor que su efecto individual (inhibicin por retroalimentacin clases de enzimas reguladas: de la serie K y de la serie V. Para las
cooperativa). enzimas alostricas de la serie K, la cintica de saturacin de sustra-
to es competitiva en el sentido de que Km est incrementada sin un
La aspartato transcarbamoilasa (ATCasa) efecto sobre Vmx. Para enzimas alostricas de la serie V, el inhibidor
alostrico disminuye Vmx sin afectar la Km. Las alteraciones de Km o
es un modelo de enzima alostrica Vmx probablemente se producen por cambios conformacionales en
La ATCasa, el cataltico para la primera reaccin nica para la bio- el sitio cataltico inducidos por unin del efector alostrico en su
sntesis de pirimidina (fig. 33-9), es un blanco de regulacin por re- sitio. Para una enzima alostrica de la serie K, este cambio confor-
troalimentacin por trifosfato de citidina (CTP) y trifosfato de ade- macional puede debilitar los enlaces entre sustrato y residuos de
unin a sustrato. Para una enzima alostrica de la serie V, el efecto
primario puede ser alterar la orientacin o la carga de residuos cata-
lticos, lo que genera un decremento de la Vmx. Aun as, como con-
A B
secuencia de estos cambios conformacionales, pueden observarse
efectos intermedios sobre Km y Vmx.
S1 S2 S3 S4

C
S5 D LA ReguLACIN POR
ReTROALIMeNTACIN NO es sINNIMO
De INHIBICIN POR ReTROACCIN
fIguRA 9-5 Inhibicin por retroalimentacin mltiple en una va
biosinttica ramificada. Superpuestas sobre asas de retroalimentacin En clulas tanto de mamfero como de bacterias, los productos ter-
simples (flechas de color rojo punteadas), hay mltiples asas de minales producen retroalimentacin de su propia sntesis, y la
retroalimentacin (flechas de color rojo continuas) que regulan enzimas controlan, en muchos casos por medio de inhibicin por retroac-
comunes a la biosntesis de varios productos terminales. cin de una enzima biosinttica temprana. Comoquiera que sea, es

09 Bender.indd 78 27/11/09 13:54:52


Captulo 9 Enzimas: regulacin de actividades 79

necesario distinguir entre regulacin por retroalimentacin, tr- LAs PROTeAsAs PueDeN
mino fenomenolgico desprovisto de inferencias mecanicistas, e
inhibicin por retroalimentacin, mecanismo para la regulacin
seCReTARse COMO PROeNZIMAs
de la actividad enzimtica. Por ejemplo, si bien el colesterol de la INACTIvAs DesDe eL PuNTO
dieta aminora la sntesis heptica de colesterol, esta regulacin De vIsTA CATALTICO
por retroaccin no incluye inhibicin por retroaccin. La HMG-
CoA reductasa, la enzima limitante de la colesterognesis, queda Ciertas protenas son sintetizadas y secretadas como protenas pre-
afectada, pero el colesterol no inhibe por retroalimentacin su ac- cursoras inactivas conocidas como proprotenas. Las proprotenas
tividad. La regulacin en respuesta al colesterol de la dieta com- de enzimas se denominan proenzimas o zimgenos. La protelisis
prende restriccin por el colesterol o por un metabolito del coles- selectiva convierte una proprotena por medio de uno o ms cor-
terol, de la expresin del gen que codifica para HMG-CoA tes proteolticos sucesivos en una forma que muestra la actividad
reductasa (represin de enzima) (cap. 26). caracterstica de la protena madura; por ejemplo, su actividad en-
zimtica. Las protenas sintetizadas como proprotenas son la hor-
mona insulina (proprotena = proinsulina), las enzimas digestivas
MuCHAs HORMONAs ACTAN pepsina, tripsina y quimotripsina (proprotenas = pepsingeno,
MeDIANTe seguNDOs MeNsAjeROs tripsingeno y quimotripsingeno, respectivamente), varios facto-
res de las cascadas de coagulacin de la sangre y de disolucin de
ALOsTRICOs cogulo de sangre (cap. 51), y la protena del tejido conectivo col-
Los impulsos nerviosos y la unin de hormonas a receptores de geno (proprotena = procolgeno).
superficie celular desencadenan cambios del ndice de reacciones
catalizadas por enzima dentro de clulas blanco, al inducir libera-
cin o sntesis de efectores alostricos especializados llamados se- Las proenzimas facilitan la movilizacin
gundos mensajeros. El mensajero primario, o primer mensajero, rpida de una actividad en respuesta
es la molcula de hormona o el impulso nervioso. Los segundos a demanda fisiolgica
mensajeros incluyen 3,5-cAMP, sintetizado a partir de ATP por la
La sntesis y secrecin de proteasas como proenzimas inactivas en
enzima adenilil ciclasa en respuesta a la hormona adrenalina, y Ca2+,
el aspecto cataltico, protege al tejido de origen (p. ej., el pncreas)
que se almacena dentro del retculo endoplsmico de casi todas las
contra autodigestin, como puede ocurrir en la pancreatitis. Cier-
clulas. La despolarizacin de membrana originada por un impulso
tos procesos fisiolgicos como la digestin son intermitentes, pero
nervioso abre un canal de membrana que libera ion calcio hacia el
bastante regulares y predecibles. Otros, como la formacin de
citoplasma, donde se une a enzimas comprendidas en la regulacin
cogulo de sangre, la disolucin de cogulo y la reparacin de te-
de la contraccin y la movilizacin de glucosa almacenada desde
jido, slo se ponen en marcha en respuesta a necesidad fisiolgica
glucgeno, y las activa. La glucosa despus satisface las demandas de
o fisiopatolgica apremiante. Est claro que los procesos de for-
energa aumentadas de la contraccin muscular. Otros segundos
macin de cogulo de sangre y de disolucin del mismo deben
mensajeros incluyen el 3,5-cGMP y los polifosfoinositoles, produ-
estar coordinados de modo temporal para lograr la homeostasis.
cidos por la hidrlisis de fosfatidil inostidos por fosfolipasas regu-
Las enzimas necesarias de manera intermitente pero con rapidez a
ladas por hormona. En los captulos 19, 42 y 48 pueden encontrarse
menudo se secretan en una forma inicialmente inactiva puesto
ejemplos especficos de la participacin de segundos mensajeros en
que el proceso de secrecin o la sntesis nueva de las protenas
la regulacin de procesos celulares.
requeridas podra ser insuficientemente rpida para responder a
una demanda fisiopatolgica apremiante, como la prdida de san-
gre (cap. 51).
LAs MODIfICACIONes COvALeNTes
ReguLADORAs PueDeN seR
ReveRsIBLes O IRReveRsIBLes La activacin de la proquimotripsina
En clulas de mamfero, las dos formas ms frecuentes de modifica-
requiere protelisis selectiva
cin covalente reguladora son protelisis parcial y fosforilacin. La protelisis selectiva comprende uno o ms cortes proteolticos
Dado que los organismos carecen de la capacidad para volver a unir muy especficos que pueden o no acompaarse de la separacin de
las dos porciones de una protena producidas por hidrlisis de un los pptidos resultantes. Lo que es ms importante, la protelisis se-
enlace peptdico, la protelisis constituye una modificacin irrever- lectiva suele originar cambios conformacionales que crean el sitio
sible. En contraste, la fosforilacin es un proceso de modificacin cataltico de una enzima. Note que aun cuando los residuos His 57 y
reversible. La fosforilacin de protenas en residuos serilo, treonilo Asp 102 residen en el pptido B de la -quimotripsina, Ser 195 resi-
o tirosilo, catalizada por protena cinasas, es favorecida desde el de en el pptido C (fig. 9-6). Los cambios conformacionales que
punto de vista termodinmico. La eliminacin hidroltica de estos acompaan a la protelisis selectiva de la proquimotripsina (quimo-
grupos fosforilo por enzimas denominadas protena fosfatasas es tripsingeno) alinean los tres residuos de la red de transmisin de
igual de favorecida. Las actividades de las protena cinasas y de las carga (fig. 7-7), lo que forma el sitio cataltico. Note tambin que los
protena fosfatasas estn reguladas, porque de no estarlo, su accin residuos de contacto y cataltico pueden estar ubicados en diferentes
concertada sera improductiva en los aspectos tanto termodinmico cadenas peptdicas, pero an estar dentro de la distancia formadora
como biolgico. de enlace de sustrato unido.

09 Bender.indd 79 27/11/09 13:54:54


80 SECCIN I Estructuras y funciones de protenas y enzimas

1 13 14 15 16 146 149 245


Pro-CT

fIguRA 9-6 Representacin bidimensional de


1 13 14 15 16 146 149 245
la secuencia de eventos proteolticos que a la
-CT
postre dan por resultado la formacin del sitio
cataltico de quimotripsina, que incluye la
trada cataltica Asp 102-His57-Ser195 (vase la fig. 14-15 147-148
7-7). La protelisis sucesiva forma proquimotripsina
(pro-CT), tt-quimotripsina (tt-Ct), y en ltima 1 13 16 146 149 245
instancia -quimotripsina (-CT), proteasa activa -CT
cuyos tres pptidos permanecen relacionados por
enlaces covalentes intercaternarios. S S S S

LA MODIfICACIN COvALeNTe sas que catalizan su interconversin. La facilidad de interconver-


sin de enzimas entre sus formas fosfo- y desfosfo- explica, en
ReveRsIBLe ReguLA eNZIMAs parte, la frecuencia con la cual la fosforilacin-desfosforilacin
CLAve De MAMfeRO se utiliza como un mecanismo para el control regulatorio. La
fosforilacin-desfosforilacin permite alterar las propiedades
Las protenas de mamfero son los blancos de una amplia gama de
funcionales de la enzima afectada slo durante el tiempo que sa-
procesos de modificacin covalente. Las modificaciones como
tisfaga una necesidad especfica. Una vez que la necesidad ha
prenilacin, glucosilacin, hidroxilacin y acilacin de cido gra-
desaparecido, la enzima puede convertirse de regreso a su forma
so introducen caractersticas estructurales singulares en prote-
original, preparada para responder al siguiente evento estimula-
nas recin sintetizadas, que tienden a persistir durante toda la dor. Un segundo factor que fundamenta el uso difundido de
vida de la protena. Entre las modificaciones covalentes que regu- fosforilacin-desfosforilacin de protenas yace en las propieda-
lan la funcin de las protenas (p. ej., metilacin, acetilacin), la des qumicas del grupo fosforilo mismo. Para alterar las propie-
ms frecuente con mucho es la fosforilacin-desfosforilacin. Las dades funcionales de una enzima, es necesario que cualquier
protena cinasas fosforilan protenas al catalizar la transferencia modificacin de su estructura qumica influya sobre la configu-
del grupo fosforilo terminal de ATP hacia los grupos hidroxilo de racin tridimensional de la protena. La alta densidad de carga
residuos serilo, treonilo o tirosilo, lo que forma residuos O-fos- de los grupos fosforilo unidos a protena en general 2 a pH
foserilo, O-fosfotreonilo u O-fosfotirosilo, respectivamente (fig. fisiolgico y su propensin a formar fuertes puentes salinos
9-7). Algunas protena cinasas se dirigen hacia las cadenas latera- con residuos arginilo y lisilo, hacen de ellos potentes agentes
les de residuos histidilo, lisilo, arginilo y aspartilo. La forma no para modificar la estructura y funcin de protenas. La fosforila-
modificada de la protena puede regenerarse mediante elimina- cin regularmente influye sobre la eficiencia cataltica intrnseca
cin hidroltica de grupos fosforilo, catalizada por protena fos- de una enzima o sobre otras propiedades al inducir cambios con-
fatasas. formacionales. Por tanto, los aminocidos marcados por fosfori-
Una clula de mamfero tpica posee miles de protenas fos- lacin pueden estar, y por lo general lo estn, relativamente dis-
foriladas y varios cientos de protena cinasas y protena fosfata- tantes del sitio cataltico en s.

La modificacin covalente regula


el flujo de metabolitos
ATP ADP En muchos aspectos, los sitios de fosforilacin de protena y otras
Mg2+ modificaciones covalentes pueden considerarse otra forma de sitio
alostrico. De cualquier modo, en este caso, el ligando alostrico
Cinasa
se une de modo covalente a la protena. Tanto la fosforilacin-des-
Enz Ser OH Enz Ser O PO32
fosforilacin como la inhibicin por retroalimentacin proporcio-
Fosfatasa
nan regulacin a corto plazo, fcilmente reversible, del flujo de me-
Mg2+ tabolitos en respuesta a seales fisiolgicas especficas. Ambas
Pi H2O actan sin alterar la expresin gentica. Las dos actan sobre las
primeras enzimas de una secuencia metablica larga y a menudo
fIguRA 9-7 Modificacin covalente de una enzima regulada por biosinttica, y ambas actan en sitios alostricos ms que catalticos.
fosforilacin-desfosforilacin de un residuo serilo. No obstante, la inhibicin por retroalimentacin involucra una sola

09 Bender.indd 80 27/11/09 13:54:58


Captulo 9 Enzimas: regulacin de actividades 81

protena, y carece de caractersticas hormonales y neurales. En con- fosforilacin constituye la base para el cdigo de histonas, que
traste, la regulacin de enzimas de mamfero por fosforilacin-des- modula la estructura de la cromatina para aumentar o silenciar la
fosforilacin comprende varias protenas y ATP, y est bajo el con- expresin de genes (cap. 38).
trol neural y hormonal directo. En estas redes reguladoras complejas, las enzimas individua-
les muestran respuesta a diferentes seales ambientales. Por ejem-
plo, una enzima que puede fosforilarse por ms de una protena
LA fOsfORILACIN De PROTeNA cinasa en un sitio nico, puede convertirse catalticamente en
es eN eXTReMO veRsTIL una forma ineficiente (inactiva), o viceversa, en respuesta a cual-
quiera de varias seales. Si la protena cinasa es activada en res-
La fosforilacin-desfosforilacin de protena es un proceso muy puesta a una seal diferente de la que activa a la protena fosfatasa,
verstil y selectivo. No todas las protenas estn sujetas a fosforila- la fosfoprotena se convierte en un nodo de decisin. El resultado
cin; esta ltima slo se dirige a uno, o un pequeo subgrupo, de funcional, por lo general actividad cataltica, refleja el estado de
los muchos grupos hidroxilo sobre la superficie de una protena. fosforilacin. Dicho estado o grado de fosforilacin est determi-
Si bien la funcin enzimtica afectada ms a menudo es la eficien- nado por las actividades relativas de la protena cinasa y la prote-
cia cataltica de la protena, la fosforilacin tambin puede alterar na fosfatasa, un reflejo de la presencia y de la fuerza relativa de las
su ubicacin dentro de la clula, la susceptibilidad a la degrada- seales ambientales que actan a travs de cada una.
cin proteoltica, o la capacidad de respuesta a regulacin por li- La capacidad de muchas protena cinasas y protena fosfatasas
gandos alostricos. La fosforilacin puede incrementar la eficien- para marcar a ms de una protena proporciona un medio para una
cia cataltica de una enzima, y convertirla en su forma activa en seal ambiental con el fin de regular de manera coordinada mlti-
una protena, mientras que la fosforilacin de otra protena la ples procesos metablicos. Por ejemplo, las enzimas 3-hidroxi-3-
convierte en una forma intrnsecamente ineficiente, o inactiva metilglutaril-CoA reductasa y acetil-CoA carboxilasa las enzi-
(cuadro 9-1). mas controladoras para la biosntesis de colesterol y cido graso,
Muchas protenas pueden fosforilarse en mltiples sitios. Otras respectivamente son fosforiladas y desactivadas por la protena
estn sujetas a regulacin tanto por fosforilacin-desfosforilacin, cinasa activada por monofosfato de adenosina (AMP). Cuando esta
como por la unin de ligandos alostricos, o por fosforilacin-des- protena cinasa se activa sea mediante fosforilacin por una u otra
fosforilacin y otra modificacin covalente. La fosforilacin-desfos- protena cinasa o en respuesta a la unin de su activador alostrico
forilacin en cualquier sitio puede catalizarse por mltiples protena 5-AMP, las dos vas principales de las cuales depende la sntesis de
cinasas o protena fosfatasas. Muchas protena cinasas y casi todas lpidos a partir de acetil-CoA quedan inhibidas.
las protena fosfatasas actan sobre ms de una protena y se inter-
convierten entre formas activa e inactiva por la unin de segundos
mensajeros o por modificacin covalente por fosforilacin-desfos- eveNTOs ReguLADORes
forilacin. INDIvIDuALes se COMBINAN
La interrelacin entre protena cinasas y protena fosfatasas, PARA fORMAR ReDes
entre las consecuencias funcionales de la fosforilacin en diferentes
sitios, entre sitios de fosforilacin y sitios alostricos, o entre sitios De CONTROL COMPLejAs
de fosforilacin y otros sitios de modificacin covalente, propor- Las clulas llevan a cabo una compleja gama de procesos metab-
ciona la base para la formacin de redes reguladoras que integran licos que deben regularse en respuesta a una amplia gama de facto-
mltiples seales de entrada ambientales para desencadenar una res ambientales. En consecuencia, las enzimas interconvertibles, y
respuesta celular coordinada apropiada. Por ejemplo, la modifica- las enzimas de las cuales depende su interconversin no actan
cin de histonas por medio de una combinacin de acetilacin y como conmutadores de encendido y apagado aislados. Para sa-
tisfacer las demandas de mantener la homeostasis, estos bloques de
construccin estn enlazados para formar redes reguladoras inte-
CUADRO 9-1 Ejemplos de enzimas de mamfero gradas.
cuya actividad cataltica es alterada Un ejemplo bien estudiado de ese tipo de red es el ciclo de c-
por fosforilacin-desfosforilacin covalente lulas eucariticas que controla la divisin celular. Cuando emerge
Estado de actividad del estado quiescente, o G0, el proceso en extremo complejo de divi-
sin celular procede a travs de una serie de fases especficas desig-
Enzima Baja Alta
nadas G1, S, G2 y M (fig. 9-8). Complejos sistemas de vigilancia, lla-
Acetil-CoA carboxilasa EP E
mados puntos de control, evalan indicadores clave de progreso
Glucgeno sintasa EP E para asegurar que ninguna fase del ciclo se inicie sino hasta que la
Piruvato deshidrogenasa EP E fase previa est completa. En la figura 9-8 se desglosa de modo sim-
HMG-CoA reductasa EP E plificado parte del punto de control que regula el inicio de replica-
Glucgeno fosforilasa E EP cin de DNA, denominado la fase S. Una protena cinasa llamada
ATM se asocia con el genoma. Si el DNA contiene una rotura de
Citrato liasa E EP
doble cadena, el cambio resultante en la conformacin de la cro-
Fosforilasa b cinasa E EP
matina activa a la ATM. En el momento de la activacin, una sub-
HMG-CoA reductasa cinasa E EP unidad del dmero de ATM activada se disocia e inicia una serie, o
Abreviaturas: E, desfosfoenzima; EP, fosfoenzima. cascada, de eventos de fosforilacin-desfosforilacin de protena

09 Bender.indd 81 27/11/09 13:55:00


82 SECCIN I Estructuras y funciones de protenas y enzimas

Luz UV, radiacin ionizante, etc.

ATM cinasa DNA DNA (daado)


(inactiva)
ATM ATM ATM

ATM cinasa
(activa, disociada)
G0 ATM

Ciclo celular
P
G1 CHK1/2 cinasa
CHK1/2 CHK1/2 (activa)

M P
Cdc25
S Cdc25 Cdc25 fosfatasa
G2 (inactiva)

P
Ciclina-Cdk
Cdk Ciclina Cdk Ciclina
(inactiva)

fIguRA 9-8 Representacin simplificada del punto de control de G1 a S del ciclo de clula eucaritica. El crculo muestra las diversas etapas en
el ciclo de clula eucaritica. El genoma se replica durante la fase S, mientras que en el transcurso de la fase M las dos copias del genoma se
segregan y ocurre divisin celular. Cada una de estas fases est separada por una fase G, o de crecimiento (growth), caracterizada por un incremento
del tamao de las clulas y la acumulacin de los precursores requeridos para el ensamblaje de los grandes complejos macromoleculares formados
durante las fases S y M.

mediados por las protenas cinasas CHK1 y CHK2, protena fosfata- necesidad fisiolgica, y puede proteger al tejido de origen
sa Cdc25 y, por ltimo, un complejo entre una ciclina y una protena (p. ej., autodigestin por proteasas).
cinasa dependiente de ciclina, o Cdk. La activacin del complejo de La unin de metabolitos y segundos mensajeros a sitios distintos del
Cdk/ciclina bloquea la transicin de G1 a S, lo que evita la replica- sitio cataltico de enzimas desencadena cambios conformacionales
cin de DNA daado. La falla en este punto de control puede llevar que alteran la Vmx o la Km.
a mutaciones en el DNA que pueden conducir a cncer u otras en- La fosforilacin por protena cinasas de residuos serilo, treonilo
fermedades. Cada paso en la cascada proporciona un conducto para o tirosilo especficos y la desfosforilacin subsiguiente por
vigilar indicadores adicionales del estado de la clula antes de entrar protena fosfatasas regula la actividad de muchas enzimas
en la fase S. de seres humanos. Las protena cinasas y fosfatasas que
participan en cascadas de regulacin que responden a seales
hormonales o de segundo mensajero, constituyen redes
reguladoras que pueden procesar e integrar informacin
RESUMEN ambiental compleja para producir una respuesta celular apropiada
La homeostasis incluye mantener un ambiente intracelular y e integral.
dentro de rganos relativamente constante pese a amplias
fluctuaciones en el ambiente externo. Esto se logra por medio
de cambios apropiados en las velocidades de reacciones
bioqumicas en respuesta a necesidad fisiolgica. REFERENCIAS
Los sustratos para casi todas las enzimas por lo general estn Bray D: Protein molecules as computational elements in living cells.
presentes a una concentracin cercana a su Km. Esto facilita el Nature 1995;376:307.
control pasivo de los ndices de formacin de producto en Ciechanover A, Schwartz AL: The ubiquitin system: Pathogenesis
respuesta a cambios de las concentraciones de intermediarios of human diseases and drug targeting. Biochim Biophys Acta
metablicos. 2004;1695:3.
El control activo del flujo de metabolitos comprende cambios Graves DJ, Martin BL, Wang JH: Co- and Post-translational
de la concentracin, la actividad cataltica, o ambos, de una Modification of Proteins: Chemical Principles and Biological Effects.
enzima que cataliza una reaccin limitante comprometida. Oxford Univ Press, 1994.
La protelisis selectiva de proenzimas inactivas desde el punto Johnson LN, Lewis RJ: Structural basis for control by phosphorylation.
de vista cataltico, inicia cambios conformacionales que forman Chem Rev 2001;101:2209.
el sitio activo. La secrecin como una proenzima inactiva facilita Muoio DM, Newgard CB: Obesity-related derangements in metabolic
la movilizacin rpida de la enzima en respuesta a lesin o regulation. Annu Rev Biochem 2006;75:403.

09 Bender.indd 82 27/11/09 13:55:03

Potrebbero piacerti anche