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c a P t u l o
Enzimas: regulacin
de actividades
Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD
75
VB Molculas
grandes
Molculas ~P Molculas
V VA Nutrientes ~P Desechos
pequeas pequeas
Km
S S Molculas
pequeas
[S]
fIguRA 9-2 Clula idealizada en estado de equilibrio dinmico.
fIguRA 9-1 Respuesta diferencial del ndice de una reaccin Note que el flujo de metabolitos es unidireccional.
catalizada por enzima, V, al mismo cambio creciente de la
concentracin de sustrato, a una concentracin de sustrato de Km (VA)
o muy por arriba de la Km (VB).
chas enzimas estn influidas por una amplia gama de factores fisio- intracelulares, como en su capacidad para distinguir entre diferentes
lgicos, hormonales o de la dieta. estados fsicos o conformacionales de una protena blanco. De este
La cantidad absoluta de una enzima refleja el balance neto en- modo, la va de la ubiquitina-proteasoma puede degradar de mane-
tre sus ndices de sntesis y de degradacin. En seres humanos, las ra selectiva protenas cuya integridad fsica y competencia funcional
alteraciones de las cifras de enzimas especficas pueden estar afecta- han quedado comprometidas por la prdida de un grupo prostti-
das por un cambio de la constante de ndice para los procesos gene- co o por dao del mismo, oxidacin de residuos cistena o histidina,
rales de sntesis (ks), degradacin (kdeg), o ambos. o desaminacin de residuos asparagina o glutamina. El reconoci-
miento por enzimas proteolticas tambin puede ser regulado por
Enzima modificaciones covalentes, como fosforilacin; unin de sustratos o
de efectores alostricos, o asociacin con membranas, oligonucle-
ks kdeg tidos u otras protenas. Cada vez ms pruebas sugieren que las dis-
funciones de la va de ubiquitina-proteasoma contribuyen a la acu-
Aminocidos
mulacin de especies protenicas plegadas de modo aberrante,
caractersticas de varias enfermedades neurodegenerativas.
C
S5 D LA ReguLACIN POR
ReTROALIMeNTACIN NO es sINNIMO
De INHIBICIN POR ReTROACCIN
fIguRA 9-5 Inhibicin por retroalimentacin mltiple en una va
biosinttica ramificada. Superpuestas sobre asas de retroalimentacin En clulas tanto de mamfero como de bacterias, los productos ter-
simples (flechas de color rojo punteadas), hay mltiples asas de minales producen retroalimentacin de su propia sntesis, y la
retroalimentacin (flechas de color rojo continuas) que regulan enzimas controlan, en muchos casos por medio de inhibicin por retroac-
comunes a la biosntesis de varios productos terminales. cin de una enzima biosinttica temprana. Comoquiera que sea, es
necesario distinguir entre regulacin por retroalimentacin, tr- LAs PROTeAsAs PueDeN
mino fenomenolgico desprovisto de inferencias mecanicistas, e
inhibicin por retroalimentacin, mecanismo para la regulacin
seCReTARse COMO PROeNZIMAs
de la actividad enzimtica. Por ejemplo, si bien el colesterol de la INACTIvAs DesDe eL PuNTO
dieta aminora la sntesis heptica de colesterol, esta regulacin De vIsTA CATALTICO
por retroaccin no incluye inhibicin por retroaccin. La HMG-
CoA reductasa, la enzima limitante de la colesterognesis, queda Ciertas protenas son sintetizadas y secretadas como protenas pre-
afectada, pero el colesterol no inhibe por retroalimentacin su ac- cursoras inactivas conocidas como proprotenas. Las proprotenas
tividad. La regulacin en respuesta al colesterol de la dieta com- de enzimas se denominan proenzimas o zimgenos. La protelisis
prende restriccin por el colesterol o por un metabolito del coles- selectiva convierte una proprotena por medio de uno o ms cor-
terol, de la expresin del gen que codifica para HMG-CoA tes proteolticos sucesivos en una forma que muestra la actividad
reductasa (represin de enzima) (cap. 26). caracterstica de la protena madura; por ejemplo, su actividad en-
zimtica. Las protenas sintetizadas como proprotenas son la hor-
mona insulina (proprotena = proinsulina), las enzimas digestivas
MuCHAs HORMONAs ACTAN pepsina, tripsina y quimotripsina (proprotenas = pepsingeno,
MeDIANTe seguNDOs MeNsAjeROs tripsingeno y quimotripsingeno, respectivamente), varios facto-
res de las cascadas de coagulacin de la sangre y de disolucin de
ALOsTRICOs cogulo de sangre (cap. 51), y la protena del tejido conectivo col-
Los impulsos nerviosos y la unin de hormonas a receptores de geno (proprotena = procolgeno).
superficie celular desencadenan cambios del ndice de reacciones
catalizadas por enzima dentro de clulas blanco, al inducir libera-
cin o sntesis de efectores alostricos especializados llamados se- Las proenzimas facilitan la movilizacin
gundos mensajeros. El mensajero primario, o primer mensajero, rpida de una actividad en respuesta
es la molcula de hormona o el impulso nervioso. Los segundos a demanda fisiolgica
mensajeros incluyen 3,5-cAMP, sintetizado a partir de ATP por la
La sntesis y secrecin de proteasas como proenzimas inactivas en
enzima adenilil ciclasa en respuesta a la hormona adrenalina, y Ca2+,
el aspecto cataltico, protege al tejido de origen (p. ej., el pncreas)
que se almacena dentro del retculo endoplsmico de casi todas las
contra autodigestin, como puede ocurrir en la pancreatitis. Cier-
clulas. La despolarizacin de membrana originada por un impulso
tos procesos fisiolgicos como la digestin son intermitentes, pero
nervioso abre un canal de membrana que libera ion calcio hacia el
bastante regulares y predecibles. Otros, como la formacin de
citoplasma, donde se une a enzimas comprendidas en la regulacin
cogulo de sangre, la disolucin de cogulo y la reparacin de te-
de la contraccin y la movilizacin de glucosa almacenada desde
jido, slo se ponen en marcha en respuesta a necesidad fisiolgica
glucgeno, y las activa. La glucosa despus satisface las demandas de
o fisiopatolgica apremiante. Est claro que los procesos de for-
energa aumentadas de la contraccin muscular. Otros segundos
macin de cogulo de sangre y de disolucin del mismo deben
mensajeros incluyen el 3,5-cGMP y los polifosfoinositoles, produ-
estar coordinados de modo temporal para lograr la homeostasis.
cidos por la hidrlisis de fosfatidil inostidos por fosfolipasas regu-
Las enzimas necesarias de manera intermitente pero con rapidez a
ladas por hormona. En los captulos 19, 42 y 48 pueden encontrarse
menudo se secretan en una forma inicialmente inactiva puesto
ejemplos especficos de la participacin de segundos mensajeros en
que el proceso de secrecin o la sntesis nueva de las protenas
la regulacin de procesos celulares.
requeridas podra ser insuficientemente rpida para responder a
una demanda fisiopatolgica apremiante, como la prdida de san-
gre (cap. 51).
LAs MODIfICACIONes COvALeNTes
ReguLADORAs PueDeN seR
ReveRsIBLes O IRReveRsIBLes La activacin de la proquimotripsina
En clulas de mamfero, las dos formas ms frecuentes de modifica-
requiere protelisis selectiva
cin covalente reguladora son protelisis parcial y fosforilacin. La protelisis selectiva comprende uno o ms cortes proteolticos
Dado que los organismos carecen de la capacidad para volver a unir muy especficos que pueden o no acompaarse de la separacin de
las dos porciones de una protena producidas por hidrlisis de un los pptidos resultantes. Lo que es ms importante, la protelisis se-
enlace peptdico, la protelisis constituye una modificacin irrever- lectiva suele originar cambios conformacionales que crean el sitio
sible. En contraste, la fosforilacin es un proceso de modificacin cataltico de una enzima. Note que aun cuando los residuos His 57 y
reversible. La fosforilacin de protenas en residuos serilo, treonilo Asp 102 residen en el pptido B de la -quimotripsina, Ser 195 resi-
o tirosilo, catalizada por protena cinasas, es favorecida desde el de en el pptido C (fig. 9-6). Los cambios conformacionales que
punto de vista termodinmico. La eliminacin hidroltica de estos acompaan a la protelisis selectiva de la proquimotripsina (quimo-
grupos fosforilo por enzimas denominadas protena fosfatasas es tripsingeno) alinean los tres residuos de la red de transmisin de
igual de favorecida. Las actividades de las protena cinasas y de las carga (fig. 7-7), lo que forma el sitio cataltico. Note tambin que los
protena fosfatasas estn reguladas, porque de no estarlo, su accin residuos de contacto y cataltico pueden estar ubicados en diferentes
concertada sera improductiva en los aspectos tanto termodinmico cadenas peptdicas, pero an estar dentro de la distancia formadora
como biolgico. de enlace de sustrato unido.
protena, y carece de caractersticas hormonales y neurales. En con- fosforilacin constituye la base para el cdigo de histonas, que
traste, la regulacin de enzimas de mamfero por fosforilacin-des- modula la estructura de la cromatina para aumentar o silenciar la
fosforilacin comprende varias protenas y ATP, y est bajo el con- expresin de genes (cap. 38).
trol neural y hormonal directo. En estas redes reguladoras complejas, las enzimas individua-
les muestran respuesta a diferentes seales ambientales. Por ejem-
plo, una enzima que puede fosforilarse por ms de una protena
LA fOsfORILACIN De PROTeNA cinasa en un sitio nico, puede convertirse catalticamente en
es eN eXTReMO veRsTIL una forma ineficiente (inactiva), o viceversa, en respuesta a cual-
quiera de varias seales. Si la protena cinasa es activada en res-
La fosforilacin-desfosforilacin de protena es un proceso muy puesta a una seal diferente de la que activa a la protena fosfatasa,
verstil y selectivo. No todas las protenas estn sujetas a fosforila- la fosfoprotena se convierte en un nodo de decisin. El resultado
cin; esta ltima slo se dirige a uno, o un pequeo subgrupo, de funcional, por lo general actividad cataltica, refleja el estado de
los muchos grupos hidroxilo sobre la superficie de una protena. fosforilacin. Dicho estado o grado de fosforilacin est determi-
Si bien la funcin enzimtica afectada ms a menudo es la eficien- nado por las actividades relativas de la protena cinasa y la prote-
cia cataltica de la protena, la fosforilacin tambin puede alterar na fosfatasa, un reflejo de la presencia y de la fuerza relativa de las
su ubicacin dentro de la clula, la susceptibilidad a la degrada- seales ambientales que actan a travs de cada una.
cin proteoltica, o la capacidad de respuesta a regulacin por li- La capacidad de muchas protena cinasas y protena fosfatasas
gandos alostricos. La fosforilacin puede incrementar la eficien- para marcar a ms de una protena proporciona un medio para una
cia cataltica de una enzima, y convertirla en su forma activa en seal ambiental con el fin de regular de manera coordinada mlti-
una protena, mientras que la fosforilacin de otra protena la ples procesos metablicos. Por ejemplo, las enzimas 3-hidroxi-3-
convierte en una forma intrnsecamente ineficiente, o inactiva metilglutaril-CoA reductasa y acetil-CoA carboxilasa las enzi-
(cuadro 9-1). mas controladoras para la biosntesis de colesterol y cido graso,
Muchas protenas pueden fosforilarse en mltiples sitios. Otras respectivamente son fosforiladas y desactivadas por la protena
estn sujetas a regulacin tanto por fosforilacin-desfosforilacin, cinasa activada por monofosfato de adenosina (AMP). Cuando esta
como por la unin de ligandos alostricos, o por fosforilacin-des- protena cinasa se activa sea mediante fosforilacin por una u otra
fosforilacin y otra modificacin covalente. La fosforilacin-desfos- protena cinasa o en respuesta a la unin de su activador alostrico
forilacin en cualquier sitio puede catalizarse por mltiples protena 5-AMP, las dos vas principales de las cuales depende la sntesis de
cinasas o protena fosfatasas. Muchas protena cinasas y casi todas lpidos a partir de acetil-CoA quedan inhibidas.
las protena fosfatasas actan sobre ms de una protena y se inter-
convierten entre formas activa e inactiva por la unin de segundos
mensajeros o por modificacin covalente por fosforilacin-desfos- eveNTOs ReguLADORes
forilacin. INDIvIDuALes se COMBINAN
La interrelacin entre protena cinasas y protena fosfatasas, PARA fORMAR ReDes
entre las consecuencias funcionales de la fosforilacin en diferentes
sitios, entre sitios de fosforilacin y sitios alostricos, o entre sitios De CONTROL COMPLejAs
de fosforilacin y otros sitios de modificacin covalente, propor- Las clulas llevan a cabo una compleja gama de procesos metab-
ciona la base para la formacin de redes reguladoras que integran licos que deben regularse en respuesta a una amplia gama de facto-
mltiples seales de entrada ambientales para desencadenar una res ambientales. En consecuencia, las enzimas interconvertibles, y
respuesta celular coordinada apropiada. Por ejemplo, la modifica- las enzimas de las cuales depende su interconversin no actan
cin de histonas por medio de una combinacin de acetilacin y como conmutadores de encendido y apagado aislados. Para sa-
tisfacer las demandas de mantener la homeostasis, estos bloques de
construccin estn enlazados para formar redes reguladoras inte-
CUADRO 9-1 Ejemplos de enzimas de mamfero gradas.
cuya actividad cataltica es alterada Un ejemplo bien estudiado de ese tipo de red es el ciclo de c-
por fosforilacin-desfosforilacin covalente lulas eucariticas que controla la divisin celular. Cuando emerge
Estado de actividad del estado quiescente, o G0, el proceso en extremo complejo de divi-
sin celular procede a travs de una serie de fases especficas desig-
Enzima Baja Alta
nadas G1, S, G2 y M (fig. 9-8). Complejos sistemas de vigilancia, lla-
Acetil-CoA carboxilasa EP E
mados puntos de control, evalan indicadores clave de progreso
Glucgeno sintasa EP E para asegurar que ninguna fase del ciclo se inicie sino hasta que la
Piruvato deshidrogenasa EP E fase previa est completa. En la figura 9-8 se desglosa de modo sim-
HMG-CoA reductasa EP E plificado parte del punto de control que regula el inicio de replica-
Glucgeno fosforilasa E EP cin de DNA, denominado la fase S. Una protena cinasa llamada
ATM se asocia con el genoma. Si el DNA contiene una rotura de
Citrato liasa E EP
doble cadena, el cambio resultante en la conformacin de la cro-
Fosforilasa b cinasa E EP
matina activa a la ATM. En el momento de la activacin, una sub-
HMG-CoA reductasa cinasa E EP unidad del dmero de ATM activada se disocia e inicia una serie, o
Abreviaturas: E, desfosfoenzima; EP, fosfoenzima. cascada, de eventos de fosforilacin-desfosforilacin de protena
ATM cinasa
(activa, disociada)
G0 ATM
Ciclo celular
P
G1 CHK1/2 cinasa
CHK1/2 CHK1/2 (activa)
M P
Cdc25
S Cdc25 Cdc25 fosfatasa
G2 (inactiva)
P
Ciclina-Cdk
Cdk Ciclina Cdk Ciclina
(inactiva)
fIguRA 9-8 Representacin simplificada del punto de control de G1 a S del ciclo de clula eucaritica. El crculo muestra las diversas etapas en
el ciclo de clula eucaritica. El genoma se replica durante la fase S, mientras que en el transcurso de la fase M las dos copias del genoma se
segregan y ocurre divisin celular. Cada una de estas fases est separada por una fase G, o de crecimiento (growth), caracterizada por un incremento
del tamao de las clulas y la acumulacin de los precursores requeridos para el ensamblaje de los grandes complejos macromoleculares formados
durante las fases S y M.
mediados por las protenas cinasas CHK1 y CHK2, protena fosfata- necesidad fisiolgica, y puede proteger al tejido de origen
sa Cdc25 y, por ltimo, un complejo entre una ciclina y una protena (p. ej., autodigestin por proteasas).
cinasa dependiente de ciclina, o Cdk. La activacin del complejo de La unin de metabolitos y segundos mensajeros a sitios distintos del
Cdk/ciclina bloquea la transicin de G1 a S, lo que evita la replica- sitio cataltico de enzimas desencadena cambios conformacionales
cin de DNA daado. La falla en este punto de control puede llevar que alteran la Vmx o la Km.
a mutaciones en el DNA que pueden conducir a cncer u otras en- La fosforilacin por protena cinasas de residuos serilo, treonilo
fermedades. Cada paso en la cascada proporciona un conducto para o tirosilo especficos y la desfosforilacin subsiguiente por
vigilar indicadores adicionales del estado de la clula antes de entrar protena fosfatasas regula la actividad de muchas enzimas
en la fase S. de seres humanos. Las protena cinasas y fosfatasas que
participan en cascadas de regulacin que responden a seales
hormonales o de segundo mensajero, constituyen redes
reguladoras que pueden procesar e integrar informacin
RESUMEN ambiental compleja para producir una respuesta celular apropiada
La homeostasis incluye mantener un ambiente intracelular y e integral.
dentro de rganos relativamente constante pese a amplias
fluctuaciones en el ambiente externo. Esto se logra por medio
de cambios apropiados en las velocidades de reacciones
bioqumicas en respuesta a necesidad fisiolgica. REFERENCIAS
Los sustratos para casi todas las enzimas por lo general estn Bray D: Protein molecules as computational elements in living cells.
presentes a una concentracin cercana a su Km. Esto facilita el Nature 1995;376:307.
control pasivo de los ndices de formacin de producto en Ciechanover A, Schwartz AL: The ubiquitin system: Pathogenesis
respuesta a cambios de las concentraciones de intermediarios of human diseases and drug targeting. Biochim Biophys Acta
metablicos. 2004;1695:3.
El control activo del flujo de metabolitos comprende cambios Graves DJ, Martin BL, Wang JH: Co- and Post-translational
de la concentracin, la actividad cataltica, o ambos, de una Modification of Proteins: Chemical Principles and Biological Effects.
enzima que cataliza una reaccin limitante comprometida. Oxford Univ Press, 1994.
La protelisis selectiva de proenzimas inactivas desde el punto Johnson LN, Lewis RJ: Structural basis for control by phosphorylation.
de vista cataltico, inicia cambios conformacionales que forman Chem Rev 2001;101:2209.
el sitio activo. La secrecin como una proenzima inactiva facilita Muoio DM, Newgard CB: Obesity-related derangements in metabolic
la movilizacin rpida de la enzima en respuesta a lesin o regulation. Annu Rev Biochem 2006;75:403.