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Nesta aula voc conhecer os testes treponmicos mais utilizados, suas indicaes de uso e as
limitaes dessas metodologias.
Atualmente os ELISA e suas variaes, por permitirem automao, tambm so utilizados como
testes de triagem em laboratrios ou em hemocentros com grande rotina.
Trata-se de testes qualitativos. Sua reatividade indica que o usurio teve contato com Treponema
pallidum em alguma poca de sua vida e desenvolveu anticorpos especficos.
So testes indicados para confirmao do diagnstico, quando a triagem feita com um teste no
treponmico. Veja a seguir apresenta os testes treponmicos mais utilizados no Brasil.
3 - liofilizado que
passou por um processo
Reagentes e insumos para o FTA-abs de desidratao usado
para preservar alimentos
perecveis, princpios
ativos, bactrias etc.
Atualmente os testes so apresentados na forma de conjuntos O elemento (partcula,
molcula etc.) congelado
diagnsticos (kits), que geralmente incluem: e a gua retirada por
sublimao, sem que
passe pelo estado lquido.
lminas com os antgenos j fixados, embaladas individualmente;
conjugado fluorescente com o ttulo pr-determinado;
soluo adsorvente2 ou sorbent;
os soros controles positivos e negativos;
soluo concentrada de salina tamponada com fosfato (PBS)
para a lavagem das lminas.
A reao de FTA-abs uma tcnica de imunofluorescncia indireta (IFI). Essa tcnica utiliza
Treponema pallidum (da cepa Nichols) fixado em reas demarcadas de lminas de vidro em que
so feitas as reaes. Veja na Figura 1 a representao do seu princpio metodolgico.
Anticorpo Conjugado
treponmico fluorescente
da amostra
Reao de FTA-abs
!
Utilize sempre um controle positivo e um controle
negativo em toda a lmina de FTA-abs.
Confira o tempo e a temperatura utilizados para inativar a amostra. Nestes casos, teste
novamente a amostra aps a correo do problema.
Verifique se a amostra foi congelada e descongelada vrias vezes, o que pode causar
diminuio ou perda de reatividade. Neste caso, solicite uma nova amostra.
Observe se o antgeno contm muitos restos celulares e (ou) outros contaminantes
biolgicos.
Os conjugados fluorescentes podem ter perdido a marcao com a fluorescena ou podem
apresentar contaminao bacteriana ou fngica. Nestes dois casos, observa-se intensa
fluorescncia inespecfica.
Certifique-se de que o tempo e a temperatura de incubao da reao foram os
recomendados pelo fabricante.
Verifique as condies do microscpio e da lmpada de fluorescncia.
Confira se o pH da salina tamponada com fosfato utilizada para a lavagem das amostras
est em 7,20,2.
!
Se houver constatao de que h problemas com o antgeno
de T. pallidum ou com o conjugado fluorescente, verifique
primeiramente se houve problema de m conservao ou se
os reagentes esto fora do prazo de validade estabelecido pelo
fabricante.
Se aps a adoo dessas medidas o resultado permanecer inconclusivo, utilize outra metodologia
para tentar esclarecer o resultado e se possvel colete nova amostra.
Os anticorpos presentes no soro ligam-se aos antgenos que esto na superfcie das hemcias,
resultando na hemaglutinao.
Para evitar resultados falso-positivos, retire a eletricidade esttica da placa de reao, passando
uma gaze mida embaixo da placa antes de iniciar a incubao.
Alm disso, incube a reao em local onde no haja vibrao, para evitar que a ligao dos
anticorpos s hemcias ou s partculas de gelatina seja desfeita, o que causa resultados falso-
negativos.
!
No reutilize as placas de microtitulao para fazer esta reao.
Placas usadas devem ser descartadas.
Reagente
Quando h hemaglutinao (ou aglutinao), forma-se uma
rede ou tapete de hemcias (ou de partculas de gelatina) Reagente
unidas aos anticorpos, a qual se espalha por toda a superfcie
do poo da placa em que foi realizada a reao;
No reagente
Quando no h hemaglutinao, as hemcias (ou as partculas
de gelatina) se depositam e formam um boto compacto no No reagente
fundo do poo da placa em que a reao foi realizada;
Inconclusiva
Neste caso, no h formao completa da hemaglutinao Inconclusiva
nem do boto, por isso se observa um misto dos dois,
no sendo possvel definir se a amostra reagente ou no
reagente. Quando isso ocorre, o teste deve ser repetido.
As reaes devem ser feitas sempre de acordo com as instrues dos fabricantes, pois existem
variaes na forma de revelar os anticorpos das amostras que se ligaram aos antgenos fixados.
Essas reaes so semi ou totalmente automatizadas, e necessitam de equipamentos
especficos.
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