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ICIDCA.

Sobre los Derivados de la Caa de


Azcar
ISSN: 0138-6204
revista@icidca.edu.cu
Instituto Cubano de Investigaciones de los
Derivados de la Caa de Azcar
Cuba

Guerra, Mercedes; Ortega, Grisel


Separacin, caracterizacin estructural y cuantificacin de antocianinas mediante mtodos qumico-
fsicos. Parte I
ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, vol. XL, nm. 2, mayo-agosto, 2006, pp. 35-44
Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar
Ciudad de La Habana, Cuba

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=223120664005

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Mercedes Guerra, Grisel Ortega

Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar (ICIDCA)


e.mail: mercedes.guerra@icidca.edu.cu

RESUMEN

Las antocianinas son compuestos fenlicos del grupo de los flavonoides y estn presen-
tes en la naturaleza como pigmentos en las flores, frutos y hojas de algunas plantas. Se
presenta una revisin bibliogrfica sobre separacin y caracterizacin estructural de las
antocianinas. Se describen las propiedades qumico-fsicas y los mtodos utilizados para
la separacin y purificacin de las mismas en materiales vegetales y en extractos comer-
ciales. Se muestran diferentes adsorbentes y sistemas de fase mvil especficos en anli-
sis de mezclas de antocianinas utilizando los mtodos de cromatografa de placa delga-
da y HPLC.

Palabras clave: Antocianinas, flavonoides, Cromatografa de Capa Delgada,


Espectroscopa UV-VIS, adsorbente, fase mvil

ABSTRACT

Anthocyanins are phenolic compounds that belong to the flavonoid group and appear in
nature as pigments in flowers, fruits and leaves of some plants.
The present paper is a bibliographic description concerning to the separation and struc-
tural characterization of anthocyanins and describe its physico-chemical properties and
the methods used in their separation and purification from plant materials and com-
mercial extracts. Different adsorbents as well as specific movil-fhase systems in tests of
anthocyanins mixtures, using methods of thin layer chromatography are shown.

Key words: Anthocyanins, flavonoid, Thin Layer Chromatography, VIS-UV Spectroscopy,


adsorbent, movil-phase

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INTRODUCCIN El paso principal en la biosntesis de
todos los flavonoides est relacionado con
Las antocianinas son compuestos fenli- la formacin de un intermediario chalcona.
cos del grupo de los flavonoides (1) y estn Se reporta que la formacin de la chalcona
presentes en la naturaleza en forma de pig- se produce por condensacin de la coenzi-
mentos en flores, frutos, bayas y hojas con ma p- coumaril.
grandes variedades de estructuras qumicas, En los primeros intermediarios de la for-
concentraciones y siendo caracterstica de macin de chalcona se identifican tres uni-
cada material y atributo especfico para la dades de malonil-CoA enzima (acetil -CoA.
caracterizacin del mismo. Tambin se con- La chalcona y echinatina presentan un
sidera que son metabolitos secundarios de modelo de hidroxilacin inusual, ya que la
las plantas con actividad biolgica. funcin cetona insaturada en la molcula de
En la actualidad en la industria alimen- chalcona normal sufre una transposicin.
taria, cosmetolgica y farmacutica son uti- Los grupos hidroxilos se convierten en 5,7
lizados una gran cantidad de compuestos dihidroxiflavonoides.
obtenidos por va sinttica que ocasionan La sntesis de flavona es altamente espe-
graves daos a la salud, entre los cuales se cfica slo para p-coumaril-CoA enzima y
encuentran los colorantes. Por esto, la ten- para grupos hidroxilos.
dencia actual es sustituir este tipo de com- Las Flavonas se forman a partir de meca-
puesto de amplio uso por pigmentos de ori- nismos de oxidacin. Las dihidroflavonas
gen natural, sobre todo de compuestos que son intermediarios importantes en la biosn-
imparten coloraciones rojos brillantes (2) tesis de diferentes flavonoides. Por ejemplo,
que brindan un aspecto ms atractivo para para la biosntesis de cianidina y quercitina,
la comercializacin de algunos productos. el dihidrokaempferol se reporta como un
En estudios recientes, se ha reportado excelente precursor.
que las antocianinas inhiben el crecimiento En la biosntesis de taxifolina ocurre la
de las clulas (3) cancergenas y ayudan a incorporacin de chalcona con retencin de
prevenir el cncer del coln e impiden un protn en la posicin C-2. Esto excluye
enfermedades del corazn al inhibir la sn- que para los intermediarios y la formacin
tesis del colesterol, mejoran la circulacin y de chalcona pueda ocurrir por la va de un
fragilidad de los vasos capilares (4), logran- epxido.
do beneficios antienvejecimiento. Por esta La formacin de isoflavonoides puede
razn, se ha incrementado la demanda del ocurrir mediante una reestructuracin en el
producto, lo que conlleva a la bsqueda de esqueleto de la chalcona involucrando un
nuevas tcnicas para la obtencin de anto- cambio en las posiciones de enlaces 1,2 -ar-
cianinas a grandes escalas y en particular la licos.
de origen natural, por lo que se ha encami-
nado la va biosinttica, lo cual ha conlleva- Caracterstica qumico-fsica de las antocia-
do a los estudios de separacin, caracteriza- ninas
cin estructural y al desarrollo de nuevas Las antocianinas son compuestos fenli-
tcnicas analticas para cuantificar las anto- cos caracterizados por la presencia de un
cianinas obtenidas. aglicn (antocianidina) del grupo de los fla-
vonoides. Su frmula bsica est conforma-
da por dos anillos aromticos unidos por
DESARROLLO DEL TRABAJO una estructura de tres carbonos. En su
forma natural, esta estructura corresponde a
Mecanismo de biosntesis de los flavonoides hetersidos formado por la combinacin de
un aglicn (antocianidina) y de un azcar
Las variaciones en la estructura del (generalmente glucosa). Si adems del az-
esqueleto de los flavonoides se reportan que car en la molcula existe un radical acilo,
dependen de reacciones de hidroxilacin entonces son antocianinas aciladas (1) (5).
O- metilacin y formacin de glucsidos y Con pH cido las antocianinas son muy
oxidacin del anillo B. Algunas variaciones estables, pero esta estabilidad se reduce,
asociadas con el anillo B han sido encontra- cuando el pH se aproxima a la neutralidad,
das para los isoflavonoides y rotenonas. (5) llegando a destruirse completamente con

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pH superior a 7. Sin embargo, las antociani- Soluble en agua, metanol, etanol, HCl
nas de tipo aciladas, como la petanina 0.5-7 % y moderadamente soluble en HCl
[petunidina 3-(6``,4`` p-coumarilramnosi- 10 %.
do)-5glucsido] son ms estables y conser-
van su color caracterstico con pH alcalino. Pelargonidina 3,5 diglucsido
Las diferencias entre los antocianos
individuales se encuentran en el nmero de Frmula emprica: C27H31ClO15.
grupos hidrxilos de la molcula y el grado Forma cristalina: Agujas rojas
de metilacin de estos grupos hidroxilos Se descompone 175-180 C
(que son los factores que caracterizan a las Soluble: en agua, alcohol
diferentes antocianidinas), de la naturaleza
y el nmero de azcares ligados a la mol- Peonidina
cula y de la posicin del enlace y en la
naturaleza y el nmero de cidos alifticos O C H3
o aromticos unidos a los azcares en la +

molcula. Respecto a estos ltimos, son OH
importantes los derivados acetilados y los p- -
Cl
cumarilados. (6)
Cuando en las antocianidinas se sustitu-

ye el grupo hidroxilo de la posicin 3 con
una molcula de azcar se conoce como
derivado sustituido 3- glucsido y con la Frmula emprica: C16H13ClO6
sustitucin del hidroxilo en la posicin 3 y Peso molecular: 336.73
5 se conoce como el derivado sustituido 3,5 Forma cristalina: Agujas carmelita rojizo
diglucsido. Soluble: En alcohol dando una solucin
Las estructuras ms comunes y sencillas rojo oscuro y moderadamente soluble
son: en agua dando una solucin carmelita
rojizo.
Pelargonidina
Derivados mono y disustituidos de la
Estructura molecular Peonidina

+
Peonidina 3, 5 diglucsido
OH Frmula emprica: C28H33ClO6
- Soluble en HCl formando agujas prpura
Cl
intenso
Punto de fusin: 165-167 C

Cianidina
Frmula emprica: C15H11ClO5
Peso molecular: 306.7 OH
No funde a 350 C +

Forma de cristales: Prisma de color carmeli- OH -
ta rojizo y soluble en alcohol, metanol, Cl
moderadamente soluble en agua y ligera-
mente soluble en cloroformo.
Derivados mono y disusttuidos de la
Pelargonidina Frmula emprica: C15H11ClO6 (7)
Soluble HCl alcohlico para dar agujas rojo
Pelargonidina-3-monoglucsido castao monohidratado, muy soluble en
alcohol y alcohol amlico dando una solu-
Frmula emprica: C21H21ClO10 cin violeta, soluble en carbonato de sodio
Forma cristalina: Agujas con color rojo cas- con color azul. y poco soluble en HCl dilui-
tao y brillo bronceado. do o H2SO4.

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Cianidina 3-glucsido Delfidina 3,5 diglucsido

Frmula emprica: C21H21ClO11 Frmula emprica: C27H31ClO17


Soluble en HCl diluido en medio alcohlico Cristales en forma de hoja con brillo bron-
con formacin de lminas o prisma carmeli- ceado en HCl diluido
ta rojizo con brillo metlico. Soluble en Insoluble en agua fra, alcohol, cido dilui-
alcohol con fuerte florescencia y en carbo- do. Soluble en HCl diluido y caliente.
nato de sodio con azul-violeta.
Se descompone a 205 C sin fundir Delfina

Cianidina 3-ramnoglucsido Con sustitucin de una molcula de glucosa


y cido hidroxibenzoico.
Frmula emprica: C27H31ClO15 Frmula emprica: C41H39ClO21
Agujas rojas en HCl o primas oscuros en Cinta o prisma de color rojo-carmelitoso
HCl diluido metanlico. oscuro en HCl al 3 %
Soluble en agua caliente, alcohol. Descompone a 200-203 C.
Soluble en agua con descomposicin, alco-
Cianidina 3-galactsido hol diluido, acetona, alcohol en ebullicin.
Frmula emprica: C21H21ClO11
Agujas rojas con brillo bronce metlico en Violana
HCl en medio metanol
Descompone a 210-212 C Con sustitucin de glucosa, ramnosa y
Soluble en agua, etanol, metanol, HCl dilui- cido p-hidroxicinamico
do. Prcticamente insoluble en HCl al 7 %. Frmula emprica: C36H37ClO18
Lmina violeta azulado con brillo verde
Cianidina 3,5 -diglucsido metlico en HCl metanlico y ter
Soluble en alcohol amlico, HCl 0.15-0.5 %,
Frmula emprica: C27H31ClO6 menos soluble en HCl 1 %, ligeramente
Lminas con brillo metlico en HCl diluido soluble en agua y prcticamente insoluble
Punto de fusin: 203-204 C. en HCl 5-12 %.

Cianidina 3-soforosida o mecocianina Malvidina

Frmula emprica: C27H31ClO16.


Cristales rojos oscuros en HCl diluido y ace- H3C O OH
+

tato de etilo o agujas rojo oscuro en HCl en
medio alcohlico al 2 % O C H3 C l-
Soluble en agua.

Delfinidina

Frmula emprica.C15H11ClO7 Frmula emprica: C17H15ClO7


Prismas o agujas carmelita-chocolate con Peso molecular: 366.75
brillo metlico en HCl 5 % Prismas con forma rmbica con aparicin
Soluble en metanol, etanol, acetato de etilo del color rojo por luz trasmitida y brillo
verde cuando tiene contacto con el solvente
toma un brillo azul acero.
Derivados de la delfidina mono y disusti- Usualmente se obtienen los cristales mono
tuido o dihidratado y las sales anhidra son muy
higroscpica y no funde a 300 C
Delfidina 3-glucsido Soluble en alcohol absoluto dando una
solucin rojo-violeta, soluble alcohol amli-
Frmula emprica: C21H21ClO12 co. Ligeramente soluble en agua.
Cristales rojo oscuro en HCl diluido En metanol, el compuesto es soluble por
formacin de una solucin color rojo, pero

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comienzan a separarse cristales de color Punto de fusin: 178 C
rojo, los cuales se observan violeta por la En HCl diluido se obtienen cristales en
luz transmitida. forma de lmina violeta con brillo cobrizo.

Derivados de la malvidina mono y disust- Separacin y caracterizacin estructural


tuidos de las antocianinas
A continuacin se detallan las diferentes
Malvidina 3- glucsido tetrahidratado vas de tratamiento y purificacin de una
muestra, la evaluacin de la estructura
Frmula emprica: C23H25ClO12.4H2O dependiendo del tipo de material de partida
En alcohol-HCl se obtienen unos prismas que presente diferentes tipos de antociani-
oscuros con brillo verde metlico. nas.
Ligeramente soluble en agua, alcohol, glice-
rol; prcticamente insoluble en benceno, Separacin y caracterizacin de antociani-
cloroformo, ter. nas de la flor fistulosa de Monarda
Se extraen las antocianinas y otros flavo-
Malvidina 3,5 diglucsido noides de los ptalos de fistulosa de
Monarda con metanol/cido actico/agua
Frmula emprica: C29H35ClO17 (10:1:9) y se purifica el extracto en una
En HCl se obtienen prismas o agujas de columna Sephadex LH20 (3 x 80 cm). Los
color carmelita rojizo con brillo verde. flavonoides se separan por HPLC en una
Descompone a 165 C columna Spheri 10-RP18 10 (25 cm x 4.6
mm) con una elucin de gradiente, utilizan-
Malividina 3-galactsido hemihendecahi- do 5 % cido frmico/metanol y un detector
drato de longitud de onda variable y un fotodiodo.
En el cromatograma aparecen dieciseis
Frmula emprica: C23H25ClO12.5 H2O picos, cinco corresponden a pigmentos de
En HCl-metanol se obtienen cristales en antocianinas, los cuales se identifican utili-
forma de prisma o agujas de color bronce zando longitudes de onda a 280 y 510 nm.
metlico y luz transmitida violeta-azulado. Los derivados de las antocianinas y la pre-
Muy soluble en metanol, alcohol, agua fra sencia de acilacin se pueden caracterizar
formando una solucin rojo oscuro. por los tiempos de retencin y los espectros
Ligeramente soluble en acetona y prctica- UV-Visibles. Los pigmentos hidrolizados en
mente insoluble en acetato de etilo. medio cido se separan mediante
Cromatografa de papel, TLC y electrofore-
Petunidina sis.(10)

OH Separacin y caracterizacin de las anto-


+
cianinas en las frutas de edulis de
OH Passiflora y P. de suberosa
C l-
O C H3 Las antocianinas en el edulis de
OH Passiflora (la fruta de pasin) y P. de subero-
sa se extraen con metanol acidificado con
TFA (trifloroactico) al 2 %. Los extractos
Frmula emprica: C16H13ClO7 filtrados se concentran a vaco y se purifica
Peso molecular: 352,74 por particin en acetato de etilo y se aplica
En HCl diluido se obtienen cristales en forma a una columna de Amberlite XAD-7
de prisma o agujas de color carmelita gris. (Andersen, el Acta Chem Scand., 1988, 42,
462). Las antocianinas se separan en una
Derivado de la petunidina 3,5 diglucsido columna Sephadex de LH-20 (100 x 2.6 cm
i.d.) con metanol/TFA/agua (99:2:99). La
Petunidina 3,5 diglucsido Cromatografa de HPLC se realiza en una
columna ODS (20 cm x 5 mm i.d.) 5 con
Frmula emprica: C28H33ClO17 un flujo de elusin de 1.2 ml/min con cido

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frmico/agua (1:9) y H2O/ metanol/frmico pus de un proceso de oxidacin en presen-
(5:1:4) como fase mvil y se caracterizan las cia de oxgeno del aire. Los extractos se ana-
estructuras mediante: Espectrofotometra lizan utilizando diferentes mtodos analti-
UV-VIS de 210 a 600 nm., Espectrometra de cos para su caracterizacin y cuantificacin
masa FAB y RMN (11). como: TLC en fase inversa, Cromatografa
de HPLC y separacin en fase inversa para
Caracterizacin estructural de antociani- las antocianinas hidrolizadas y determina-
nas de arndano cin por espectrofotometra de antocianinas
Las antocianinas extradas de arndano totales como cloruro de malvidina. (14)
se analizan por Espectrofotometra UV-VIS,
Densitometra de TLC y HPLC con una eva- Composicin de los pigmentos de antocia-
luacin cuantitativa de antocianinas totales ninas en tomates rojos
por Espectrofotometra a 535 nm. Las antocianinas presentes en tomates
Las antocianinas se determinan por TLC rojos se extraen previamente utilizando ace-
en celulosa con espesor de capa de 300 F tona y se realiza una segunda extraccin
(0.1 mm espesor) con un sistema de solven- con 70 % de acetona seguido por agitacin
te formado por cido frmico/agua/cido con cloroformo/acetona (2:1). Se determina
clorhdrico (6:5:1) y se detectan a 540 nm. el contenido de antocianinas monmericas
La Cromatografa de HPLC se realiza uti- por el mtodo de pH diferencial en un rango
lizando una columna de C18 y aplicando un de 2-40 mg/100 g. La composicin de anto-
gradiente de elusin de cido frmico/aceto- cianinas se caracteriza por HPLC, anlisis
nitrilo y deteccin a 280 nm. El anlisis de espectral y espectrometra de masa. En
antocianinas de arndano result mejor todas las muestras se detecta el pigmento
empleando el mtodo de espectrofotometra pelargonidina-3-rutinosida-5-glucsido ace-
directa o posterior a una separacin croma- tilada con cido p-coumrico (15).
togrfica (TLC/HPLC). Para la evaluacin
cuantitativa, se recomienda el mtodo Complejidad de las antocianinas y su
espectrofotomtrico directo. La densitome- expresin de color
tra de TLC slo se recomienda para extrac- Se presenta una resea que incluye los
tos de alta pureza y la cromatografa HPLC factores que afectan en la formacin del
resulta apropiada para la estandarizacin de rango de colores de las antocianinas en las
extractos de arndano y la identificacin de plantas (diversidad de cromforos, rango
impurezas como cidos del tipo fenlico y natural de valores de pH de 3-7, compleji-
taninos (12). dad molecular incluyendo el origen de los
compuestos complejos y efecto intermole-
Caracterizacin de antocianinas extradas cular a rango amplio). Los mtodos que se
de arndano en muestras comerciales utilizan para estudiar estas propiedades son
Los extractos secos de antocianinas se Espectroscopa UV-VIS, RMN, Dicroismo
disuelven en HCl 0.1 M en metanol, poste- Circular y para lograr mayor selectividad
riormente se miden sus espectros y el conte- Difraccin de Rayos X. (16)
nido de antocianinas se determina a 535 nm.
Luego, se disuelven las muestras en 5 % Antocianinas aciladas de los ptalos azules
cido frmico y se analizan por HPLC en una de Salvia uliginosa
columna Partisil 10 ODS (25 cm x 4.6 mm) Los ptalos secos y congelados se
con una velocidad de elucin de 0.5 min/ml, extraen con cido frmico/metanol/agua
utilizando gradiente de cido frmico/aceto- 1:10:9); luego se filtra y se evapora hasta
nitrilo (100:0 a 9:1 en 60 min sostenidos a tener un volumen pequeo a presin redu-
90 min) y la deteccin se realiza a 280 nm. cida. Se realiza una Cromatografa de HPLC
(13) preparativa en columna ODS (10 mm d.i x
250 mm) con fase mvil cido
Separacin y caracterizacin estructural frmico/metanol/agua (1:6:13) a (1:8:11) y se
de antocianinas en el Sylvestris de Malva purifica por HPLC utilizando la misma
La extraccin de antocianinas se realiza columna con cido frmico/acetonitrilo/
con HCl-metanol, y las leucoantocianinas agua (5:16:79). El producto se identifica uti-
en el residuo se extraen similarmente des- lizando tcnicas analticas de espectrome-

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tra de masa FAB y RMN-H` a 500 y 600 Masa-electrospray. La Cromatografa HPLC
Mhz en metanol conteniendo HCl al 0.1 % se realiza (despus de hidrlisis alcalina y
(17). cida) en columna C-18 (25 cm x 4.6 mm
d.i) 5 con gradiente de elucin (1ml/min)
Cianidina 3-(2``,3``digaloilglucosido) en usando sistema de solvente acetonitrilo/
hojas rojas cido fosfrico/cido actico (el programa se
Se pesan 400 g de hojas rojas de la flor detalla en el trabajo) y deteccin a 280, 310
"Crimson King"y se extraen con TFA (triflo- y 520 nm. Como resultado del estudio
roactico) al 1 % en metanol. Se filtra y se estructural se obtienen dos tipos de cianidi-
purifica por particin con acetato de etilo na: cianidina-3-glucsido y cianidina -3-
seguido por cromatografa usando columna rutinosida y un tercer pigmento amarillo
Amberlita XAD-2. Las antocianinas diaceti- naranja detectado por Espectrometra de
ladas (cianidinas) se separan en columna de Masa (20)
Sephadex LH-20 utilizando una elucin
paso a paso con metanol/TFA/agua de Enlace convalente entre pigmentos de
(19.8:0.2:80 a 59.4:0.6:40). Las estructuras antocianinas-flovonol de la flor
se identifican empleando Espectrometra Agarparthus azul
RMN homo y heteronuclear RMN-2D a Se separan dos antocianinas de la flor de
600.13 y 150.92 MHz para H`y C13 y los Agaparthus azul. La purificacin involucra
valores de los datos espectrales UV-VIS de la varios pasos cromatogrficos, el primero
cianidinas separadas (18). con Diaion Hp-20, una comatografa de
columna con Sephadex G25, celulosa, Rp y
Pigmentos de antocianinas de tulipanes Toyopearl HW-40 y los productos separados
La flor de tulipn "Queen Wilhelmina" se caracterizan por RMN-H`, RMN-C13,
se extrae con metanol conteniendo TFA al Espectrometra de Masa-Cromatografa
1% y se realiza una particin con acetato de Gaseosa, HPLC acoplado a un espectrofto-
etilo. Las antocianinas se separan por cro- metro UV-VIS seguida de una hidrlisis
matografa de columna Amberlite XAD-7 y cida o bsica. La estructura encontrada es
se purifican usando una columna Sephadex una delfidina diglucsido p-coumarilada
LH20 y un sistema de solvente agua/meta- unido a flavonol triglucsido. (21)
nol/TFA(80:19.6:0.4). La Cromatografa de
HPLC se lleva a cabo en columna Hipersil Petunidina 3-O- ramnopiranosida-5-O-
ODS. La identificacin de estructuras se glucopiranosa y otras antocianinas de la
realiza mediante espectroscopa UV-VIS uti- flor Vicia villosa
lizando como solvente metanol/cido clor- Las antocianinas se extraen toda la
hdrico al 0.01 % en un rango de longitud de noche de la flor Vicia Villosa con 1 L de
onda entre 240-600 nm, espectroscopa metanol/ cido actico (19:1; Solvente A) y
RMN y masa con ionizacin a presin luego se filtra y se concentra el solvente A
atmosfrica e inyeccin de flujo y como filtrado.
resultado se obtienen estructuras molecula- Este concentrado se extrae con acetato de
res del tipo de dos pelargonidinas y dos cia- etilo 3 x 300 ml y se aplica a una columna
nidinas con grupos acilos enlazados a la Amberlite XAD-7. Las antocianinas se eluyen
posicin axial del azcar (19). con 1 L del solvente A y se separan en colum-
na de Sephadex LH-20 (10 cm x 1 cm d.i) con
Purificacin e identificacin de antociani- metanol /agua/TFA (39.9:60:0.1). El TLC se
na de capulina (Prunus serotina ERC) realiza con slica microcristalina F5565
Las antocianinas se extraen en acetona, Merck con 1-butanol/cido actico/ agua
se somete a un proceso de particin con clo- (4:1:5) como fase superior y cido
roformo y se purifica en un cartucho de frmico/cido clorhdrico/agua (1:1:2). Se
fase slida C18 . toma una alcuota de 15 l y se inyecta en
Los mtodos de bisulfito y pH diferen- una columna de HPLC Hypersil ODS 5 m
cial se utilizan para determinar el contenido (20 cm x 5 mm d.i) con cido frmico y
de antocianinas monomricas y color poli- cido frmico/agua/metanol (1:4:5) por elu-
mrico. Las antocianinas se identifican por sin isocrtica y gradiente. Se separan tres
anlisis espectral, HPLC, Espectrometra de antocianinas que se identifican por:

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Espectrofotometra UV-VIS con registro del mente. El lmite deteccin de la cianidina 3-
espectro de 240 a 600 nm, RMN homo y O- rutinosida y cianidina 3-O- rutinosi-
heteronuclear, RMN 2D y como estructuras da-7-O--Dglucosido fue de 1.2 mol. Las
se propone el 3-O- ramnopiranosida-5-O- estructuras se confirman por Espectrome-
glucopiranosidas de petunidina (71 %), tra UV-VIS, RMN y masa-FAB. Estos com-
delfidina (12 %) y malvidina (9 %). (22) puestos son los responsables del color rojo
de la flor de lirio.(23)
Antocianinas de flores y Lirio (Liliaceae)
Se pesa 1 g de segmentos secos y conge- Antocianinas en plasma humano despus
lados de 10 cultivos de flores, incluyendo de una administracin oral de un extracto
adems una especie de Lirio y se extraen de baya de saco
con 13 ml de acetonitrilo al 50 % conte- Un mililitro de plasma se disuelve en
niendo 3 % de TFA. Se filtra y el extracto se 200 l de una solucin acuosa de 0.44 M de
pasa por una columna Develosil ODS-Hg-5 TFA y la mezcla se aplica en un cartucho de
(25 cm x 4.6 mm d.i) a 40 C con gradiente extraccin en fase slida Sep-Pak C18. Las
de elusin (1ml/min) con acetonitrilo acuo- antocianinas se eluyen con TFA a 0.44 M
so de 0-30 % conteniendo 0.5 % de TFA en metanol y posteriormente, la fase se
durante 30 min y deteccin de diodo en un evapora a sequedad y se redisuelve en
rango de 260 - 530 nm. Una segunda elusin solucin de TFA a 0.44M. Una porcin de
con 1.5 ml/min con agua/TFA (99:1, solven- la solucin se analiza por HPLC con una
te A) y acetonitrilo/agua/TFA (3:7:0.05, sol- columna Zorbax SB-C18 (25 cm x 4.6 mm
vente B, abarcando 16,38, 44, 50, 67 y 100 % d.i) con un gradiente de elusin (1ml/min)
de B a 0,3,10,20,25 y 40-50 min respectiva- con solucin acuosa de acetato de sodio 25
Tabla 1. Valores de Rf x100 de antocianinas y ant ocianidinas en varios sistema s de solventes

Poliacrilonitrilo
-Poliamida (7:2)
mezclada con
Silica Gel Celulosa
Adsorbente 40 ml de 0.05 M Celulosa Poliamida
D-O MN 300
fosfato de
potasio
primario
Antocianid inas A B C D E F G F G
Cianidina 3 glucsido 46
Cianidina 3 triglucsido 42
Cianidina 3,5 glucsido 36 52
Delfinidina 3 glucsido 36
Delfidina 3,5 glucsido 35 26
Malvidina 3 glucsido 57 60 61
Malvidina 3,5 glucsido 54 44 33
Peonidina 3,5 glucsido 56 37
Petunidina 3 glucsido 38
Antocianinas
Cianidina 31 83 92 47 53 70 75 57 75
Delfidina 21 41 34 50 60 50 72
Malvidina 37 95 94 62 61 87 84 84 91
Paeonidina 39 55 65 90 86 83 85
Pelargonidina 41 51 71 95 92 69 78
Petunidina 27 54 46 70 75 72 79

42 ICIDCA No. 2, 2006


mM (fase mvil B) (de 0-24 % de B en A bajo de investigacin en el tema de separa-
durante 50 min, 38 % de B en A durante cin, identificacin y cuantificacin de
110 min hasta 100 % de B en A durante estas molculas a partir de plantas superio-
120 min) y deteccin a 520 nm. Dos picos res o por cultivo de clulas inferiores.
de antocianinas se pueden separar si se
modifica la programacin de fase mvil de
0-26 % de B en A durante 20 min hasta 33 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
% de B en A durante 80 min (24).
1. Salinas, Y.; Martnez, F.; Soto, M. Efectos
Caractersticas de las antocianinas en de la mixtamalizacin sobre las antociani-
Cromatografa de Capa Delgada nas del grano de maces pigmentados
En la tabla 1 se observan los Rf de algu- Agrociencia .37 (6) pp. 617-628, Nov-Dic
nas antocianinas y antocianidina en varios 2003.
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de Inters permanente No 3.056 5 de
marzo de 2005. pp. 726-730.
CONCLUSIONES 7. Valls, J.; Lampreave, M.; Nadal, N.; y
Arola, L. Importancia de los compuestos
En esta revisin se muestran las diferen- fenlicos en la calidad de los vinos tintos
tes estructuras moleculares de las antociani- Enologa: pp 119-121, marzo 2000.
nas presentes en diversos materiales de ori- 8. Indice de MERCK Eleventh Edition, USA:
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ICIDCA No. 2, 2006 43


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