An lisis

Microbiolo gico
del Suelo
Docente: Dors Yupnqui S.

Estudiante: Jess Brandan Sez

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INDICE

I. INTRODUCCION 2

II. OBJETIVOS.. 3
i. Objetivos Generales. 3
ii. Objetivos Especficos.. 3

III. MARCO TEORICO 4

IV. METODOLOGIA Y PROCEDIMIENTOS. 6

V. RESULTADOS. 9

VI. BIBLIOGRAFIA.. 10

I. INTRODUCCION

El suelo es un ecosistema que contiene una gran variedad de poblaciones microbianas cuyos
miembros representan muchos tipos fisiolgicos. Las caractersticas qumicas, fsicas y

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biolgicas de un suelo particular, as como la presencia de crecimiento de plantas influirn en el

nmero y actividades de sus diversos componentes microbianos. Adems, a causa de la
naturaleza heterognea del suelo varios tipos fisiolgicos de organismos sern encontrados en
las proximidades cercanas de uno a otro. La comunidad microbiana en suelos es importante
por su relacin con la fertilidad del suelo y con los ciclos biogeoqumicos de los elementos,
ademas del uso potencial de los miembros especficos para aplicaciones ambientales e
industriales. Por lo que existe la necesidad de conocer, enumerar y aislar los miembros
principales y menores de la comunidad microbiana en suelos.

II. OBJETIVOS

i. General

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Conocer las tcnicas bsicas para realizar una toma de muestras de suelo para anlisis
microbiolgico.

ii. Especficos

Realizar recuentos de microorganismos del suelo empleando el mtodo de recuento en

placa profunda mediante diluciones en serie.

Establecer el nmero aproximado de la poblacin microbiana en el suelo y realizar una

discusin teniendo en cuenta los parmetros fisicoqumicos bsicos.

III. MARCO TEORICO

El suelo es un ecosistema que contiene una gran variedad de poblaciones microbianas cuyos
miembros representan muchos tipos fisiolgicos. La comunidad microbiana en suelos es
importante por su relacin con la fertilidad del suelo y con los ciclos biogeoqumicos de los
elementos, adems del uso potencial de los miembros especficos para aplicaciones
ambientales e industriales. Por lo que existe la necesidad de conocer, enumerar y aislar los
miembros principales y menores de la comunidad microbiana en suelos.

La cuenta viable de microorganismos del suelo puede realizarse por la tcnica de cuenta en
placa profunda; los principios fundamentales de estas tcnicas son (1) dispersin de una
muestra en un diluyente apropiado (solucin fisiolgica), (2) distribucin de una alcuota a un
medio apropiado de crecimiento, (3) incubacin bajo condiciones ptimas, y (4) conteo de las
colonias desarrolladas o lectura.

i. Toma de muestras

La muestra debe ser representativa del rea donde sea colectada. Un muestreo representativo
es aquel que cubre la mayor parte del terreno. Las muestras deben tomarse con elementos

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estriles, retirando previamente la materia orgnica de la superficie. Se hace un hoyo en V;

luego se remueve de un lado una capa de tierra de 3cm de grueso, despus se elimina la tierra
de ambos lados del hoyo y se toma la muestra del centro del hoyo.

Una vez seleccionado el sitio se retira el material de cobertura y se procede a tomar muestras
entre 10-20 cm de profundidad para muestras de suelo, y lo ms cercano a la raz de la planta
para muestras de rizosfera (maximo 5cms de distancia).

Las muestras para anlisis microbiolgico deben ser tomadas en bolsas de papel y no en bolsa
plstica para evitar la elevacin de temperatura y la condensacin. Deben ir correctamente
marcadas o etiquetadas con nombre, direccin de la finca entre otros.

ii. Tipo y cantidad de muestras a tomar

Muestra simple: Es la que se obtiene con una sola extraccin de suelo. Son usadas en trabajos
de investigacin y en suelos muy homogneos. S recomienda cuatro muestras por hectrea,
de 1 kilogramo de suelo cada una.

Muestra compuesta: Se refiere a la muestra de suelo obtenida por la extraccin de varias

muestras simples o submuestras, reunidas en un recipiente y bien mezcladas, de donde se
retiran de 0,5 a 1 kg de suelo. Son las ms usadas para la planificacin de la fertilizacin. Se
recomienda 15-20 submuestras por parcela de muestreo.

iii. Sitios de Muestreo

El muestreo de suelos se deber realizar al azar y en las siguientes formas Instrumentos

Un instrumento de muestreo requiere dos condiciones importantes:

1) Que tome una capa uniforme desde la superficie hasta la profundidad determinada.
2) Que se pueda obtener el mismo volumen de suelo en cada extraccin. Entre ellos se
encuentran: el barreno (existen diferentes tipos) y la pala.

iv. Situaciones no muestreables

No se deben tomar muestras de suelo a la orilla de los caminos, alambrados, bebederos,

dormideros, montes, surcos muertos, antiguas construcciones y sectores de carga de
fertilizantes o agroqumicos.

Las muestras de suelo virgen se debern tomar dentro del monte o debajo de los alambrados,
estas sirven como puntos de comparacin con los suelos bajo cultivo.

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Qu es un Anlisis de Suelo?

El anlisis de suelo, es un conjunto de medidas qumicas y fsicas realizadas sobre una muestra
de suelo. Realizado antes de la siembra, nos permite conocer con que nivel de nutrientes
contara el cultivo; una vez sembrado, nos habla de la reserva de nutrientes. Un anlisis de
suelo, es una herramienta bsica, pero de un gran valor a la hora de realizar la fertilizacin.
Tambin permite al agricultor o Ingeniero/a Agrnomo/a:

Determinar el nivel de nutrientes del suelo (deficiencia, buena o mala provisin).

Seguir el estado de fertilidad del suelo a travs de los aos.

Disminuir las deficiencias de fertilidad del suelo.

Conocer la aptitud del suelo, determinando limitantes y potenciales.

v. Manejo de la muestra en el Laboratorio

Llegada la muestra con su humedad al laboratorio, si los anlisis que requiere son los antes
mencionados, el primer anlisis a realizar es el de nitratos ya que se realiza sobre la muestra
hmeda. Luego se pesa una porcin de suelo hmedo (20 o 30 gr) y se la coloca en la estufa a
105 C a secar, para determinar la humedad. Otra porcin de la muestra es colocada en
bandeja de plstico, con sus datos y nombre de cliente y se deja secar. Esta ser utilizada para
determinar: materia orgnica, fsforo, sulfato, pH y conductividad elctrica.

IV. METODOLOGIA Y PREOCEDIMIENTOS

i. Nitrgeno

Las plantas obtienen el nitrgeno principalmente del suelo, donde se encuentra bajo la forma
orgnica, la que no es disponible inmediatamente para la planta, sino despus de un proceso

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de mineralizacin llevada a cabo por los microorganismos del suelo, el cual procede en la
direccin siguiente: nitrgeno orgnico, amonio, nitrito, nitrato; la cantidad de nitrato
producida finalmente depende de la disponibilidad del material en descomposicin. Si la
relacin carbono: nitrgeno (C/N) es alta aparece muy poco o casi nada de nitrgeno como
nitrato.

El nitrgeno disponible en el suelo se encuentra principalmente como nitrato. La capa arable

del suelo puede tener un contenido de nitrgeno bajo la forma de nitrato entre 2 a 60 ppm.
Este contenido de nitrato vara con la estacin, ya que es muy soluble en agua y las aguas de
lluvia o riego lo pueden arrastrar hacia el subsuelo. Las plantas pueden absorber el nitrgeno
tambin bajo la forma de in amonio. El nitrgeno absorbido como nitrato es rpidamente
reducido a in nitrito mediante la accin de la enzima nitrato reductasa que contiene
molibdeno (Mo). La transformacin del nitrato a in amonio es catalizada por la enzima nitrito
reductasa.

La principal diferencia entre el nitrgeno en forma de nitrato y amonio, es que todo el nitrato
del suelo se encuentra disuelto en la solucin del suelo, mientras que si el suelo contiene
mucha arcilla y humus, gran parte del in amonio se encuentra como catin intercambiable y
no en solucin. Quizs por esta razn un fertilizante en forma de nitrato acta mucho ms
rpido que uno en forma de amonio.

Ciertas plantas pertenecientes a la familia de las leguminosas tienen la capacidad de asimilar el

nitrgeno atmosfrico, por las races al formar una asociacin simbitica con bacterias del
gnero Rhizobium.

Es un importante elemento constituyente de la clorofila, protoplasma, protenas y cidos

nucleicos. Tiene un papel importante en el proceso de fotosntesis. La falta de nitrgeno y
clorofila significa que el cultivo no utilizar la luz del sol como fuente de energa para llevar a
cabo funciones esenciales como la absorcin de nutrientes. El nitrgeno es tambin un
componente de las vitaminas. Aumenta el crecimiento y desarrollo de todos los tejidos vivos,
mejorando la calidad de los vegetales y forrajes de mucha hoja, as como el contenido proteico
de los cereales.

Tcnica para la determinacin de nitratos (NO3-)

El cadmio metlico reduce a nitritos los nitratos de la muestra. El ion nitrito reacciona en medio
cido con el cido sulfanlico para formar una sal intermedia de diazonio. Esta sal se une al
cido gentsico para formar un producto de color mbar, al que se le medir la absorbancia con
un espectrofotmetro.

Espectrofotmetro utilizado

Es un espectrofotmetro marca HACH modelo DR / 2000. Tiene la particularidad de que todas

las determinaciones que se realicen en este instrumento, se debe utilizar un volumen de 25 ml.
A dems, cuenta con una memoria donde se graban las curvas de calibracin para las distintas
determinaciones, lo cual no hace falta de clculos manuales, ni del uso de otros programas
para obtener la concentracin del analito que se esta determinando.

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Este espectrofotmetro fue utilizado para las determinaciones de: nitratos en suelo, sulfatos en
agua y suelo y fsforo en suelo.

Esquema de un Espectrofotmetro

Procedimiento

La determinacin se realiza sobre la muestra de suelo hmeda (humedad propia).

Pesar 20 gr de suelo hmedo en un erlenmeyer de 125 ml, adicionar 1 gr de sulfato de calcio di

hidratado (CaSO4.2H2O), 40 ml de agua destilada y agitar durante 1 min. Luego filtrar con un
papel de filtro adecuado (Double Rings 102 cualitativo), tomar 25 ml del filtrado y colocarlo en
la celda de medicin. Si se presenta turbidez en el filtrado, filtrar nuevamente hasta que
desaparezca.

En el fotmetro:

Ingresar el nmero de programa para nitrgeno de nitrato (N-NO3-). Presionar: 355. La

pantalla mostrar: fijar a 500 nm.

Girar la perilla de longitud de onda hasta que la pantalla pequea muestre 500 nm. Fijada la
longitud de onda, la pantalla mostrar: muestra cero luego mg/L N-NO3-.

Tomar los 25 ml de filtrado que se encuentran en la celda de medicin y agregar el contenido

de una bolsa de reactivo en polvo de nitrato (Nitra Ver 5) y tapar. Nota: Si la muestra es nica,
el paso 3 deber omitirse. El reactivo en polvo contiene cadmio metlico, cido Gentisico,
Sulfato de Magnesio, cido Sulfanilico y fosfato Monobsico de Potasio.

Presionar: SHIFT TIMER. Agitar la celda hasta que el cronmetro suene en un minuto. Nota:
Si la muestra es nica deje pasar el tiempo y haga lo mismo en 5.

Cuando suene el cronmetro, presionar: SHIFT TIMER comenzar un periodo de reaccin de

5 minutos sin agitacin. Nota: si hay nitratos, se desarrollara un color mbar.

Llenar otra celda de medicin con 25 ml de muestra (blanco). Nota: Si la muestra es nica,
este paso se realizara con la muestra misma.

Cuando suene el cronmetro, la pantalla mostrar: mg/L N-NO3-. Colocar el blanco en el

soporte de la celda. Cerrar el escudo para la luz.

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Presione ZERO la pantalla mostrar: Puesta en cero luego: 0,0 mg/L N-NO3-. Nota: Si la
muestra es nica, realizar el paso 3 luego agite 1 min y dejar reaccionar 5 min despus del
paso 8.

Quitar el tapn. Colocar la muestra preparada en el soporte de la celda. Cerrar el escudo

para la luz. Nota: Quedara un deposito de cadmio despus de disolver el polvo de reactivo
Nitra Ver 5 y no afectar el resultado.

Presionar: READ. La pantalla mostrara: Leyendo..., luego se visualizar el resultado en mg/L

de nitrgeno de nitrato (N-NO3-).

Clculos:

ppm N-NO3- = mg/L N-NO3- x [40 / (20 - gr agua)]

gr agua son los evaporados a 105 C (humedad del suelo), mg/L N-NO3- son los ppm medidos,
40 es el volumen del filtrado, 20 son los gramos de suelo hmedo y ppm N-NO3- son los mg de
nitrgeno de nitrato en 1000 gr de suelo seco.

ppm NO3- = ppm N-NO3- x 4,428

ppm N-NO3- son los mg de nitrgeno de nitrato en 1000 gr de suelo seco, 4,428 es un factor
que surge de dividir los pesos moleculares en gramos del ion nitrato sobre el de nitrgeno. Y
ppm NO3- son los mg de nitratos en 1000 gr de suelo seco.

ii. pH

El pH tpicamente va de 0 (cido) a 14 (bsico) en disolucin acuosa, e indica la acidez o la

alcalinidad de una solucin.

Las letras pH son una abreviacin de "pondus hydrogenii", traducido como potencial de
hidrgeno, y fueron propuestas por Sorensen en 1909, que las introdujo para referirse a
concentraciones muy pequeas de iones hidrgeno. Sorensen, por tanto, fue el creador del
concepto de pH, que se define como el logaritmo negativo de la actividad de los iones
hidrgeno en una solucin:

pH = -log [H+]

A 25 C, el producto inico del agua pura es K w = [H+][OH-] = 10-14, por lo tanto:

log Kw = log [H+] + log [OH-]

-14 = log [H+] + log [OH-]

14 = -log [H+] - log [OH-]

pH + pOH = 14

Con lo que en un medio neutro [H+] = [OH-] =10-7. Un medio cido ser aquel en el que [H+] >
[OH-] y uno bsico aquel en el que [H+] < [OH-]. Es decir, en una solucin cida [H+] >10-7 y pH
< 7, en una neutra [H+] = 10-7 y pH = 7 y en una bsica [H+] < 10-7 y pH > 7.

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El pH del suelo es importante porque las plantas slo pueden absorber los minerales disueltos
en el agua, mientras que la variacin del pH modifica el grado de solubilidad de los minerales.
Por ejemplo, el aluminio y el manganeso son ms solubles en el agua a un pH bajo, y cuando
esto ocurre, pueden ser absorbidos por las races, siendo txicos a ciertas concentraciones. Por
el contrario, determinadas sales minerales que son esenciales para el desarrollo de las plantas,
tal como el fosfato de calcio, son menos solubles a un pH alto, lo que hace que estn menos
disponibles para ser absorbidos y nutrir las plantas.

Tambin el pH del suelo afecta al proceso de lixiviacin de las sustancias nutritivas para las
plantas. Un suelo cido tiene una capacidad menor de retencin catinica porque los iones
hidrgeno desplazan a los cationes como el de potasio y el de magnesio los cuales son
posteriormente lavados del suelo, disminuyendo la riqueza de nutrientes disponibles. Por el
contrario, en un suelo de pH neutro o bsico los iones de Ca+2, Na+ y K+ reemplazan a los H+.

El rango optimo del pH del suelo para el crecimiento de la mayor parte de los vegetales es de 6
a 7 porque la mayor parte de las sustancias nutritivas de las plantas estn disponibles en este
intervalo. En algunos suelos, incluso con un pH natural de 8, pueden obtenerse buenos
rendimientos agropecuarios. Sin embargo, a partir de tal umbral las producciones de los
cultivos pueden mermar.

El pH del suelo influye en el desarrollo de las plantas y a su vez el pH del suelo es afectado por
los vegetales y otros organismos. Por ejemplo, el intercambio catinico realizado por las races
de las plantas reduce el valor del pH, la descomposicin del humus produce productos que
pueden aumentar o disminuir el pH y la respiracin celular de los organismos edficos que
producen CO2 que pasa a H2CO3 generando H+ y una posterior disminucin del pH.

La propiedad qumica ms importante en un suelo destinado a cultivos, quizs sea la actividad

de los iones hidrgeno. La actividad de otros iones nutrientes depende del pH.

Los factores que afectan la medida de pH son:

Contenido de agua o relacin suelo / agua: cuanto ms diluida es la suspensin, mayor

es el pH medido sea el suelo cido o alcalino.

Desecacin de la muestra: si la medicin se hace en suspensiones obtenidas con suelo

seco al aire, el pH es diferente al obtenido con muestra que conserva la humedad
natural.

Sales solubles: el pH de la suspensin disminuye a medida que aumenta la

concentracin de sales nutras como NaCl o CaSO4.

Presin de CO2: el aumento de la concentracin de gas, hace disminuir el pH. Por lo

tanto deben especificarse las condiciones experimentales y ambientales en que se
realiza la determinacin.

Tcnica para la determinacin del pH

La tcnica consiste en una potenciometra ion-selectiva con un electrodo de vidrio.

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Un electrodo de pH es un tubo lo suficientemente pequeo como para poder ser introducido

en un recipiente normal. Est unido a un pH-metro por medio de un cable. Un tipo especial de
fluido se coloca dentro del electrodo; este es normalmente cloruro de potasio 3M. Algunos
electrodos contienen un gel que tiene las mismas propiedades que el fluido 3M. En el fluido
hay un alambre de plata. El sistema es bastante frgil, porque contiene un sensor. El censor es
una membrana que internamente contiene HCl de actividad constante, en contacto con un
electrodo interno de Ag,AgCl. Cuando se expone a la solucin estndar o problema, se hidrata
e intercambia iones Na+ por H+ para formar una capa superficial de iones H+. Esta, junto a
puntos fijos de silicatos cargados negativamente, produce un potencial en la interfase vidrio-
solucin, que es una funcin de la actividad del in H+ y cuando esto haya sido determinado el
pH aparecer digitalmente en el pH-metro. El potencial depende de la temperatura de la
solucin. Es por eso que el pH-metro tambin muestra la temperatura.

Esquema de un electrodo combinado para medir pH.

Procedimiento:

Para la determinacin se utiliza una relacin suelo / agua de 1 / 2,5.

Pesar 10 gr. de suelo seco en un vaso de precipitados y agregar 25 ml de agua destilada, agitar
con una varilla de vidrio hasta lograr una suspensin de las partculas. Dejar reposar 30 min,
pasado este tiempo, agitar nuevamente e inmediatamente medir el pH.

Valoracin de los suelos de acuerdo a su pH

Muy cido pH < 5,5

cido pH 5,6 - 6,9

Neutro pH 7 - 7,5

Alcalino pH 7,6 - 8,5

Muy alcalino pH > 8,6

iii. Conductividad Elctrica

Se basa en la propiedad que tienen los iones disuelto en agua de conducir la corriente elctrica
o de ofrecer resistencia al paso de esta en proporcin a la cantidad de sales disueltas.

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Cuando un suelo tiene un exceso de sales solubles se le denomina suelo salino. La medida de
la conductividad elctrica (CE) del suelo y de las aguas de riego permite estimar en forma casi
cuantitativa la cantidad de sales que contiene. El anlisis de la CE en suelos se hace para
establecer si las sales solubles se encuentran en cantidades suficientes como para afectar la
germinacin normal de las semillas, el crecimiento de las plantas o la absorcin de agua por
parte de las mismas.

Las sales solubles que se encuentran en los suelos, estn formadas principalmente por los
cationes Na+, Ca2+ y Mg2+ asociados con los aniones Cl-, SO42-, NO3- y HCO3-.

La CE de una solucin se mide a travs de la resistencia que ofrece el paso de la corriente en

la solucin que se encuentra entre los dos electrodos paralelos de la celda de conductividad al
sumergirla en la solucin.

La conductividad se informa a 25 0C.

El instrumento utilizado tiene como fundamento a un puente de Wheatstone. Consta de

cuatro resistencias, R1 y R2 que son conocidas, Rv que se una resistencia variable y Rx que es la
resistencia que proporciona la solucin del suelo.

Mediante Rv lo que se debe lograr es que A y B estn al mismo potencial, lo cual se sabe de
acuerdo al instrumento detector que se utilice: si es un galvanmetro, la aguja no acusa paso
de corriente.

Puente de Wheatstone. Conductmetro

Los instrumentos traen escalas graduadas en unidades de resistencia (homs) o de

conductividad Siemens/cm (S/cm).

Los equipos para medir la conductividad funcionan sobre la base del puente de Wheatstone,
no obstante en muchos casos no se usa la resistencia variable y un componente mecnico o
electrnico mide directamente la resistencia o conductividad de la solucin basndose en el
desequilibrio elctrico producido.

Debido a que la conductividad se expresas en S/cm, y como los electrodos utilizados no

siempre tienen 1cm2 de rea y la distancia que los separa no es exactamente 1cm, es necesario
hallar un factor llamado constante de celda por el cual han de multiplicarse las lecturas
obtenidas para hallar la conductividad.

R= (d/A) por lo tanto C= 1/R = A/d entonces C= k donde k= A/d y = 1/

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R: resistencia de la solucin al paso de la corriente elctrica.

: resistencia especfica.

d: distancia entre los electrodos.

A: rea de los electrodos.

C: conductividad.

k: constante de celda.

: conductividad especfica.

Procedimiento:

Se utiliza una relacin de suelo / agua de 1 / 2.

Pesar 10 gr de suelo seco y agregar 20 ml de agua destilada, agitar con una varilla de vidrio
hasta lograr una suspensin de las partculas. Dejar reposar 30 min. Pasado este tiempo, agitar
nuevamente e inmediatamente medir la CE.

Valoracin de la conductividad elctrica de los suelos

CE (ms/cm) Valoracin

0,0 - 0,5 Normal

0,5 - 1,0 Lig. alta

1,0 - 2,0 Alta

2,0 - 4,0 Muy alta

iv. Materia Orgnica

Se puede definir materia orgnica (MO) en sentido amplio y en sentido estricto. En el primer
caso son todos los compuestos de origen biolgico que hay en el suelo, independiente del
grado de alteracin de los mismos.

En sentido estricto son todos los compuestos de descomposicin y resntesis de la materia

orgnica incorporada al suelo, de estructura diferente al material original y de una estabilidad

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frente a la descomposicin mayor que los dems compuestos orgnicos del suelo (sustancias
hmicas).

La materia orgnica, influye mucho sobre las propiedades del suelo, tanto fsicas, fsico-
qumicas y qumicas. Algunas de ellas son:

Bajos contenidos de materia orgnica y predominio de limos y/o arenas muy finas determinan
susceptibilidad de los suelos al sellado o encostramiento, disminuyendo las velocidades
iniciales de infiltracin de agua al suelo.

La materia orgnica tiene un efecto directo sobre la capacidad de retencin de agua, ya que al
ser un coloide hidrfilo es capaz de retener del 80 al 90 % de su peso en agua y un efecto
indirecto, ya que modifica la porosidad del suelo, incrementando la proporcin de los que
almacenan agua.

En periodos cortos de tiempo, si se producen grandes adiciones de materia orgnica puede

provocar altas concentraciones de CO2, con disminucin del tenor de O2.

El color oscuro de la materia orgnica hmeda provoca una absorcin de energa radiante
provocando que el suelo se caliente.

En suelos con bajo contenido de coloide mineral, la materia orgnica es la principal

responsable del intercambio cationico de los suelos.

Aumenta la capacidad buffer del suelo ya que se ionizan distintos grupos segn el pH del suelo,
evitando cambios bruscos del mismo. Esta propiedad se debe a la presencia en la materia
orgnica de diferentes grupos funcionales, as a valores de pH entre 5 - 6 se ionizan grupos
carboxilos, pH 7 - 9 oxhidrilos fenlicos y entre 9 - 10 oxhidrilos alcohlicos.

Puede haber disminucin del pH del suelo cuando la mineralizacin es muy activa, debido a la
generacin de grandes cantidades de CO2.

El 98% del N, del 20 al 50% del P y del 60 - 70% del S, estn bajo formas orgnicas. El aporte
que la materia orgnica hace de estos nutrientes es funcin de su cantidad y evolucin.

La materia orgnica puede afectar la disponibilidad de micronutrientes por la capacidad de

formar quelatos con stos Cu, Fe, Mn, Zn, etc. La constante de estabilidad de estos compuestos
es alta con Cu y baja con Fe y Mn, lo que permite una lenta liberacin de los mismos.

Tcnica para la determinacin de Materia Orgnica (Walkley-Black)

Los mtodos ms exactos de determinacin de C, implican la combustin con evolucin de

CO2, pesada, etc. Los mtodos aproximados ms rpidos para determinar materia orgnica del
suelo, se basan en la oxidacin de la materia orgnica mediante un agente oxidante aadido en
exceso al suelo, con la subsiguiente valoracin redox o determinacin colorimtrica del exceso
de agente oxidante.

El mtodo de Walkley-Black, utiliza una calefaccin menos intensa, permite diferenciar en gran
parte, la materia que integra el humus del suelo de las fuentes extraas de C orgnico, tales
como el grafito y el carbn vegetal. Mientras los otros mtodos de combustin por va seca

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incluyen todo el C elemental, el mtodo de Walkley-Black excluye de un 90 a un 95 % del

mismo.

Reaccin entre Cr2O7-2 en medio cido y C orgnico:

2 (Cr2O7-2 + 14 H+ + 6 e- 2 Cr+3 + 7 H2O)

3 (C + 2 H2O CO2 + 4 H+ + 4e-)

2 Cr2O7-2 + 3 C + 16 H+ 4 Cr+3 + 8 H2O + 3 CO2

Reaccin entre Cr2O7-2 no consumido (exceso) y Fe+2:

Cr2O7-2 + 14 H+ + 6 e- 2 Cr+3 + 7 H2O

6 (Fe+2 Fe+3 + 1e-)

Cr2O7-2 + 14 H+ + 6 Fe+2 2 Cr+3 + 7 H2O + 6 Fe+3

Reactivos:

Dicromato de potasio (K2Cr2O7), 1 N. Se disuelven en agua destilada 49,04 gr exactos de la sal,

y se diluye hasta un litro.

cido sulfrico (H2SO4) concentrado.

Indicador cido N-fenilantramlico. Se disuelve 0,2 g del indicador en 100 ml de una solucin al
0,2% de Na2CO3.

Sulfato ferroso amnico Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O o sal de Mohr, 0,1 N. Se disuelven 39,22 gr de la

sal en 800 ml que contengan 4 ml de cido sulfrico concentrado. Llevar a un litro.

Procedimiento:

La determinacin se realiza sobre la muestra seca, para esto se coloca la muestra en bandejas
de plstico y se dejan secar al aire.

Tamizar la muestra por un tamiz de malla de 0,5 o 1,0 mm. Pesar 0,5 gr de suelo e introducirlo
en un erlenmeyer de 250 ml.

A continuacin, aadir mediante pipeta de doble aforo, 5 ml exactamente medidos de K2Cr2O7

1 N, realizando leves movimientos de giro para lograr intimo contacto entre el suelo y la
solucin. Aadir por las paredes y lentamente 10 ml de H2SO4 c.c y continuar mezclando
suavemente durante un minuto. Dejar la muestra en reposo durante 30 min. Simultneamente
realizar un blanco (sin suelo) de la misma forma.

Valoracin por retroceso: diluir la disolucin agregando 85 ml de agua destilada (volumen total
de100 ml). Tomar una alcuota de 20 ml a un erlenmeyer de 125 ml y agregar 40 ml de agua
destilada, 2 ml de H2SO4 c.c y 4 gotas del indicador N-fenilantramlico y mezclar.

Valorar esta disolucin y el blanco con sal de Mohr 0,1 N, procedente de una bureta, hasta
viraje de rojo a verde brillante.

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Clculos:

%MO= ml de K2Cr2O7 x (1 - T/S) x 1,34

S: ml de la sal de Mohr gastados en la valoracin del blanco.

T: ml de la sal de Mohr gastados en la valoracin de la muestra.

v. Fsforo

El fsforo se encuentra en el suelo casi exclusivamente como ortofosfato y todos los

compuestos son derivados del cido fosfrico (H3PO4) u ortofosforico. Los fosfatos en el suelo
se pueden dividir en dos grandes grupos: inorgnicos y orgnicos. Los inorgnicos se encuentra
bajo varias formas (H2PO4-, HPO4-2, PO4-3) las cuales dependen del pH y los iones H+ se
reemplazan por cationes formando sales.

Los orgnicos se encuentran en la materia orgnica como fosfolipidos, acidos nucleicos,

fosfatos metablicos, fosfoproteinas y fosfatos de inositol.

El fsforo es uno de los nutrientes esenciales para el crecimiento de las plantas. Sus funciones
no pueden ser ejecutadas por ningn otro nutriente y se requiere un adecuado suplemento de
fsforo para que la planta crezca y se reproduzca en forma ptima. El fsforo se clasifica como
un nutriente primario, razn por la cual es comnmente deficiente en la produccin agrcola y
los cultivos lo requieren en cantidades relativamente grandes.

El Fsforo es absorbido por la planta principalmente como (H2PO4-), pero tambin se absorbe
como ion (HPO4-2). El pH del suelo controla la abundancia relativa de esas dos formas inicas.
El in (H2PO4-) se favorece por debajo de pH 7 y el in (HPO4-2) por encima de pH 7. Si el pH
es muy alcalino todo el fsforo se encuentra bajo la forma de (PO4-3), la cual no es absorbible
por las plantas.

Se encuentra en la planta como un componente de carbohidratos activados (por ejemplo la

glucosa -6- fosfato, fructosa -6- fosfato, fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato, glucosa -1- fosfato,
etc). Acidos nucleicos, constituyente de cromosomas, fosfolpidos, fosfoaminocidos que
forman parte de fosfoproteinas.

El fsforo desempea una funcin nica y exclusiva en el metabolismo energtico de la planta;

sin su intervencin no seria posible la fotosntesis.

Los carbohidratos antes de ser metabolizados son fosforilados. La presencia de fsforo en la

estructura molecular de los azcares, los hace ms reactivos.

El fsforo es tambin parte de la fitina, que es la principal forma de almacenamiento de fsforo

en la semilla. Alrededor del 50% del fsforo total en las semillas de las leguminosas y del 60 al
70% en los cereales se almacena como fitina o compuestos muy parecidos. Un mal suplemento
de fsforo puede reducir el tamao, nmero y viabilidad de las semillas.

Adems, el fsforo es necesario para la divisin celular, crecimiento merismatico, para el

desarrollo de semillas y frutos. Favorece el desarrollo de las races al comienzo de la

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vegetacin. Favorece el ahijamiento en cereales, hace que sus caas sean ms resistentes al
encamado y forma mayor nmero de espigas.

Tcnicas para la determinacin de Fsforo mtodo de BRAY y KURTZ

F- tiene la propiedad de formar complejos con Al+3 y Fe+3, con liberacin de fsforo retenido
en los suelos por estos cationes trivalentes. Las reacciones pueden representarse en disolucin
cida de la siguiente forma:

3 NH4F + 3 HF + AlPO4 H3PO4 + (NH4)3AlF6

3 NH4F + 3 HF + FePO4 H3PO4 + (NH4)3FeF6

AlPO4, representa los diferentes fosfatos hidratados e hidroxlicos de Al, incluyendo las capas
superficiales adsorbidas o precipitadas sobre xidos y aluminosilicatos. Anlogamente, FePO4,
representa los distintos fosfatos hidratados e hidroxlicos de Fe, incluyendo las capas
adsorbidas o precipitadas sobre xidos de hierro. La reaccin con FePO4, no es completa para
fosfato concrecionado o recubierto de xido de hierro. Adems, fluorferrato es inestable en
medio neutro o alcalino, de modo que el fsforo correspondiente a AlPO4, puede fraccionarse
mediante extraccin con NH4F 0,5 N. La especie (NH4)3AlF6, puede precipitar cuando existe un
gran exceso de F-.

El procedimiento de extraccin de fsforo disponible de los suelos mediante NH4F en HCl (Bray
y Kurtz), se usa ampliamente, pues los resultados son concordantes con la respuesta de las
cosechas a la fertilizacin con fosfatos. La inclusin de un cido conduce a la disolucin de los
fosfatos de Ca ms activos e impide la precipitacin (en forma de fosfato clcico) de fsforo
disuelto a consecuencia de las reacciones anteriores.

Reactivos:

Solucin de extraccin NH4F 0,03 N en HCl 0,025 N: pesar 1,11 gr de NH4F slido en un vaso de
precipitado de 500 ml, agregar 200 ml de agua destilada, disolver por completo y agregar 4,16
ml de HCl 6 N. Luego transferirlo a un matraz de un litro y enrasar. Despus de enrasar colocar
en un recipiente de plstico.

Solucin de reactivo cloromolbdico 1,5%: disolver 15 gr de molibdato de amonio

(NH4)6Mo7O24.4H2O, en 300 ml de agua destilada caliente a 50 C, y si es necesario se filtra la
disolucin para separar los sedimentos. Se enfra la disolucin y se aade 350 ml de HCl 10 N
lentamente y agitando. Enfriar la disolucin, diluir con agua destilada hasta 1 litro, mezclar y
guardar en frasco oscuro. La disolucin es 1,5% en molibdato y 3,5 N en HCl, y debe
remplazarse cada dos meses.

Procedimiento:

Pesar 2gr de suelo tamizado en un erlenmeyer de 125 ml, agregar 20 ml de la solucin

extractiva y agitar 5 min. Filtrar con papel de filtro adecuado (Double Rings 103 cualitativo),
tomar en una celda de reaccion 5 ml del filtrado, agregarle 20 ml de la solucin de molibdato
de amonio y esperar 10 min para que reaccin.

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En el fotmetro:

Ingresar el nmero de programa para fsforo (P). Presionar: 954 ENTER. La pantalla
mostrar: Fijar a 882 nm.

Girar la perilla de longitud de onda hasta que la pantalla pequea muestre 882 nm. Fijada la
longitud de onda, la pantalla mostrar: muestra cero luego mg/L P.

Presionar: SHIFT TIMER. Comenzar un periodo de reaccin de 7 minutos. Nota: Deje pasar
el tiempo.

Cuando suene el cronmetro, la pantalla mostrar: mg/L P.

Llenar otra celda de medicin con 25 ml de muestra (blanco). Nota: Si la muestra es nica,
este paso se realizara con la muestra misma.

Colocar el blanco en el soporte de la celda. Cerrar el escudo para luz.

Presione ZERO la pantalla mostrar: Puesta en cero luego: 0,0 mg/L P.

Quitar el tapn. Colocar la muestra preparada en el soporte de la celda. Cerrar el escudo

para la luz.

Presionar: READ. La pantalla mostrara: Leyendo..., luego se visualizar el resultado en mg/L

P.

Clculos:

ppm P= mg/L P x 50

50: factor que surge de la dilucin y de la conversin del peso de la muestra.

vi. Azufre

Los sulfatos son necesarios para el crecimiento vegetal. El azufre es absorbido por las plantas
principalmente en la forma inorgnica como sulfato (SO4-2), luego es reducido a las formas
sulfhidrilo (-SH) o disulfuro (-S-S-) e incorporado a compuestos orgnicos.

El azufre se encuentra bajo las formas orgnicas de los aminocidos, cistena, cistina y
metionina, as como en compuestos de azufre activados anlogos al ATP, adenosina 5'-
fosfosulfato (APS) y 3'-fosfoadenosina 5'-fosfosulfato (PAPS). Adems, el azufre se encuentra en
una variedad de esteres de sulfato, tales como el sulfato de colina, glicsidos del aceite de
mostaza y sulfatos de polisacridos. El azufre participa como un ligando en un gran nmero de
enzimas y metalo-proteinas, de forma resaltante en ferro-sulfo-protenas y en cupro-protenas.

El grupo sulfhidrilo (-SH) puede participar directamente en reacciones de oxido-reduccin,

como con el cido lipico y el glutatin. Los grupos sulfhdrilos pueden ser sitios reactivos de
enzimas o coenzimas, ejemplo: 3-fosfogliceraldehido deshidrogenasa y coenzima A. Muchas
enzimas son inhibidas de forma no-competitiva por reactivos que se unen a los grupos
sulfhidrilos, ejemplo: Pb, Hg, As, Ag. El azufre en forma reducida se encuentra en los anillos
heterocclicos de algunas coenzimas, como tiamina o biotina y en una cantidad de metabolitos

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secundarios como la sinigrina de Brassica nigra, que contiene azufre en forma reducida y
oxidada o la alicina, la sustancia olorosa del ajo y el factor causante de lacrimeo en la cebolla.

Su papel es imprescindible en la constitucin de enzimas de oxidacin que regulan los procesos

vitales del metabolismo en las plantas.

Ayuda a la persistencia de la clorofila, por lo que se le encuentra en mayor proporcin en los

tejidos jvenes.

Convierte los nitratos que toman las races a formas que la planta las pueda utilizar.

Tcnica para la determinacin de Sulfatos

Los iones sulfato (SO4-2) se unen con los iones bario (Ba+2) en el reactivo de sulfato Sulfa Ver 4
formando una turbidez de sulfato de bario (BaSO4) insoluble, en un medio cido que provee el
cido ctrico para que no precipiten otras sales insolubles de bario. La turbidez es proporcional
a la concentracin de sulfatos en la muestra.

Reactivos:

Solucin de fosfato de calcio Ca(H2PO4)2 2,03 gr, disolver y llevar a un litro con agua destilada.

Carbn activado.

Sobre con reactivo en polvo Sulfa Ver 4 que contiene cloruro de bario y cido ctrico.

Procedimiento:

Pesar 25 gr de suelo seco en un erlenmeyer de 125 ml, agregar 50 ml de fosfato de calcio.

Agitar 1 min y dejar reposar 10 min. Luego agregar 0,5 gr de carbn activado y agitar 30 seg.
Filtrar con papel de filtro (Double Rings 103 cualitativo). Tomar 25 ml del filtrado en una celda
de medicin.

En el fotmetro:

1) Ingresar el nmero de programa para sulfato (SO4-2). Presionar: 705 ENTER. La pantalla
mostrar: Fijar a 450 nm.

Girar la perilla de longitud de onda hasta que la pantalla pequea muestre 450 nm. Fijada la
longitud de onda, la pantalla mostrar: muestra cero luego mg/L SO4-.

3) Tomar los 25 ml de filtrado que se encuentran en la celda de medicin y agregar el

contenido de una bolsa de reactivo en polvo de sulfato (Sulfa Ver 4), tapar y girar para
disolver. Nota: Si la muestra es nica, el paso 3 deber omitirse. El reactivo en polvo contiene
cloruro de bario y cido ctrico.

4) Presionar: SHIFT TIMER. Comenzar un periodo de reaccin de 5 minutos con

agitacin. Nota: Si la muestra es nica deje pasar el tiempo.

Cuando suene el cronmetro, la pantalla mostrar: mg/L SO4-2.

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6) Llenar otra celda de medicin con 25 ml de muestra (blanco). Nota: Si la muestra es nica,
este paso se realizara con la muestra misma.

7) Colocar el blanco en el soporte de la celda. Cerrar el escudo para luz.

Presione ZERO la pantalla mostrar: Puesta en cero luego: 0,0 mg/L SO4-2. Nota: Si la
muestra es nica, realizar el paso 3, agite 5 min.

9) Quitar el tapn. Colocar la muestra preparada en el soporte de la celda. Cerrar el escudo

para la luz.

Presionar: READ. La pantalla mostrara: Leyendo..., luego se visualizar el resultado en mg/L

de sulfato (SO4-2).

Clculos:

ppm SO4-2 = mg/L SO4-2 x 2

2: factor que surge de calcular la concentracin de SO4-2 en el volumen de extraccin y de la

conversin del peso de la muestra.

V. RESULTADOS OBTENIDOS EN LAS MUESTRAS ANALIZADAS DE SUELO

%M
LOTES pH N-NO3- P O

5,4 31,1
0-20 cm 8 7,5 ppm ppm 0,45

20-40
cm 4,5 ppm

40-60
cm 1,7 ppm

5,4 13,4
0-20 cm 2 ppm 41 ppm 0,52

20-40
cm 7,3 ppm

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40-60
cm 3,3 ppm

5,4
0-20 cm 2 10 ppm 32 ppm 0,60

20-40
cm 3,6 ppm

40-60
cm 1,4 ppm

5,7 41,6
0-20 cm 6 15 ppm ppm 0,30

20-40
cm 4,6 ppm

40-60
cm 3,4 ppm

5,1 12,5 34,8

0-20 cm 2 ppm ppm 0,52

20-40 22,3
cm ppm

40-60
cm 7,1 ppm

5,0 30,1 27,5

0-20 cm 1 ppm ppm 0,52

20-40
cm 12 ppm

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40-60
cm 9,6 ppm

4,9 25,6
0-20 cm 9 35 ppm ppm 0,80

20-40 15,2
cm ppm

40-60
cm 11 ppm

LOTES pH N-NO3- P SO4-2 CE

13,5 19,5
0-20 cm ppm ppm 1 ppm 756 S

20-40 29,7
cm ppm

40-60
cm 8,2 ppm

36,6 37,8 1253

0-20 cm ppm ppm 3 ppm S

20-40 11,9
cm ppm

40-60 10,7
cm ppm

10

17,7 28,4
0-20 cm ppm ppm 5,2 ppm 961 S

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20-40 11,2
cm ppm

40-60
cm 6,9 ppm

11

42,7 15,3
0-20 cm ppm ppm 0 ppm 734 S

20-40 16,1
cm ppm

40-60
cm 7,9 ppm

12

17,5
0-20 cm ppm ------- 7 ppm 842 S

13

12,9
0-20 cm ppm ------- 0 ppm 750 S

14

12,4
0-20 cm ppm ------- 2 ppm 985 S

15,6 44,9 18,6

15 7 ppm ppm ppm

7,1 21,3 38,1

16 5 ppm ppm 10 ppm

6,6 17,6 52,4

17 1 ppm ppm 20 ppm

6,6 48,8 11,2

18 5 9,7 ppm ppm ppm

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19

12,7
0-20 cm ppm

20-40
cm 13 ppm

40-60
cm 17 ppm

20

29,7
0-20 cm ppm

20-40 15,3
cm ppm

40-60
cm 9,4 ppm

21

10,4
0-20 cm ppm

20-40
cm 4,3 ppm

40-60
cm 3,1 ppm

22

41,2
0-20 cm ppm

20-40 15,3
cm ppm

40-60
cm 9,4 ppm

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23

23,4
0-20 cm ppm

20-40
cm 9 ppm

40-60
cm 5,6 ppm

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10,5
0-20 cm ppm

20-40
cm 9,4 ppm

40-60
cm 6,1 ppm

VI. BIBLIOGRAFIA

Haynes, W.C., Wickerham, L.J. y Hesseltine, C.W. (1955), Maintenance of cultures of industrially
important microorganisms. Appl. Microbiol. 3, 361-368.

Lopez, M.J. y Ramos-Cormenzana, A. Xanthan production from olive-mill wastewaters. Int.

Biodet. Biodegr. 263-270.

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