Universidad nacional san

Antonio abad del cusco.

Facultad De Ciencias Agrarias Tropicales

efecto de la
concentracin de
sustrato sobre la
actividad enzimtica

bioqumica experimental

Qco. Rosa Teresa Ramos

Fernndez

Jesusa Arias Gamarra

SEMESTRE: 2014-II
1. Presentacin
2. Introduccin
3. Objetivos generales
4. Marco terico
5. Material y reactivos
6. Procedimiento
7. Datos y/o observaciones
8. Cuestionario
9. Conclusiones
10. Bibliografa
11. Anexos
 El xito tiene que ver con la
satisfaccin que Sentimos como
seres humanos por lo que es
Nuestra vida
El presente trabajo es presentado
con el fin de
De inculcar conocimientos para el
xito de nuestra preparacin y Tener una actitud
positiva
Y voluntad para ser buenos
profesionales.
Como estudiante Damos a conocer a
travs de nuestros trabajos el
Conocimiento y aprendizaje; por lo
tanto es Importante presentar este
trabajo.
Agradecindole a usted por
brindarnos sus conocimientos y
experiencias
Esperando que sea de su agrado
 INTRODUCCION
En la presente prctica se estudiaron las propiedades fsicas y qumicas en la

reaccin de un hgado de pollo ante los catalizadores.

La regeneracin heptica es una respuesta fundamental del hgado ante el dao

tisular. La compleja interaccin de factores que determinan esta respuesta envuelve

un estmulo (experimentalmente, una hepatectoma), expresin de genes, sntesis

de diversos factores de crecimiento y la interaccin de otros factores que modulan

la respuesta.

En contraste con otros tejidos capaces de regeneracin (mdula sea, piel), la

regeneracin heptica no depende de un grupo de clulas germinales (stem cells)

sino que se produce por la proliferacin de todas las clulas maduras remanentes:

los hepatocitos (las clulas funcionales principales), clulas epiteliales biliares (que

recubren los canalculos), clulas endoteliales fenestradas (que recubren los

sinusoides hepticos y permiten una intercambio directo entre la sangre y los

hepatocitos), clulas de Kupffer (macrfagos en los sinusoides) y las clulas de Ito

(clulas estrelladas cuyos largos procesos envuelven a los hepatocitos, que

almacenan vitamina A, sintetizan diferentes protenas del tejido conectivo y

secretan diferentes factores de crecimiento). Todas proliferan para restablecer el

tejido perdido pero la velocidad de su respuesta es diferente. Los hepatocitos son

los primeros en proliferar, primero alrededor del espacio peri portal y luego

extendindose hacia las venas centrales. Las otras clulas proliferan despus de

los hepatocitos hecho que sugiere que son los estos los que producen el estmulo

para dicha proliferacin.

3.- OBJETIVOS GENERALES
La prctica tiene los siguientes objetivos:

Realizar el manejo de los instrumentos de laboratorio involucrados en la

prctica.
Estudiar las variables que involucran la reaccin de las soluciones en el
hgado.
Realizar mediciones de reaccin en el hgado

4.- MARCO TERICO

4.1 los catalizadores biolgicos.
Un biocatalizador es un catalizador de las reacciones bioqumicas de los seres
vivos. Se consideran biocatalizadores las enzimas, las hormonas y las vitaminas.
Un biocatalizador reduce o aumenta la energa de activacin de una reaccin
qumica, haciendo que sta sea ms rpida o ms lenta. Cada reaccin qumica
en un ser vivo, ya sea unicelular o multicelular, requiere la presencia de uno o
ms biocatalizadores (enzimas), pues si no existieran stas ocurriran en
desorden total.
Las enzimas son los catalizadores biolgicos que facilitan las reacciones qumicas
que tienen lugar en los seres vivos. Sin ellas las reacciones qumicas seran tan
lentas que la vida se detendra. Adems, las enzimas se diferencian de cualquier
otro catalizador gracias a su alta especificidad tanto en las reacciones que
catalizan como en el sustrato involucrado en ellas
lo que hacen es acelerar procesos qumicos dentro del organismo que se
llevaran a cabo en un tiempo muy grande si no existieran dichos catalizadores.
Estas enzimas se activan cuando una sustancia especfica ingresa en ella y
comienza a producirse la reaccin.

Existen varios catalizadores:

Catalizador inorgnico Catalizador industrial

Catalizador de
alimentos

4.2.-actividad enzimtica
 Es el nmero de moles de sustrato que reaccionan para formar producto,
por mol de enzima y por unidad de tiempo. Esto supone que la enzima est
plenamente saturada con sustrato y por tanto que la reaccin se efecta
con su mxima rapidez

El ndice de recambio muestra la eficiencia impresionante de la catlisis

enzimtica. Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la
cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un
minuto.

5.-MATERIALES Y REACTIVOS
Reactor:
1 botella de plstico de 100ml-250ml con una perforacin lateral
1 tapn de jebe
1 aguja
2 jeringas con agujas de 5cm y 10cm

Sensor:
1 vaso de vidrio de 200ml-250ml
1 probeta de 100ml
1 manguera o cnula de venoclisis
3 hgados completo de pollo mantenidos en refrigeracin
50ml de agua oxigenada (H2O2 al %)
3 pipetas serolgicas de 5 ml con graduaciones de 0,1ml
4 recipientes pequeos
15 frascos pequeos con su respectivo tapn
Agua destilada
Tiras de papel indicador de pH
Cloruro de sodio o sal de mesa
Hidrxido de sodio
cido clorhdrico
1 frasco con agua destilada
Refrigeradora o caja trmica con cubos de hielo para mantener el hgado
frio
6.-PROCEDIMIENTO

Empezaremos ensayando el efecto de diferentes concentraciones de agua

oxigenada sobre la reaccin catalizada por las sustancias presentes en el hgado,
para tal experiencia:

1. Construye el sistema mostrado que consiste de un reactor y un sensor.

2. Vierte 100ml de agua dentro del sensor
3. Toma un extremo de la manguera e introdcela hasta el fondo de una
probeta invertida
4. Succiona con la boca el extremo libre de la manguera de modo que el nivel
de agua dentro de la probeta empiece a subir hasta que pudee
completamente llena de agua.

Equipo de Probeta
venoclisis

Botella y
el hgado
Recipiente
de agua
destilada

REACTO SENSOR

5. Prepara frascos con diferentes concentraciones de agua oxigenada segn

la tabla 1.
6. Succiona un trozo de hgado de 2,5g y gurdalo en refrigeracin y sobre
(hielo).
7. Coloca el trozo de hgado dentro del reactor y cirralo hermticamente con
su respectivo tapn.
8. Conecta el extremo libre de la manguera al tubo de salida del reactor.
9. Retira la jeringa del tapn del reactor, teniendo cuidado de no remover la
aguja
10. Carga la jeringa con 3ml de agua oxigenada correspondiente al frasco N
1 de la tabla N 1 acopla la jeringa que perfora el tapn evitando presionar
el embolo. Inyecta el agua oxigenada inmediata y rpidamente. Agita
suavemente el reactor.
11. Observa los cambios producidos en el reactor y en el sensor. Anota el
volumen de agua desplazada en los 2 primeros minutos de iniciada la
reaccin.
12. Toca las paredes del reactor y determina su se producen cambios de
temperatura durante la reaccin
13. Realiza las observaciones y anotaciones pertinentes.
 14. Demostrar el sistema reaccionado el lquido del reactor del experimento
anterior.
15. Enjuague el trozo de hgado con agua destilada y vuelve a utilizarlo con las
otras frascos descritos en la tabla N 1. Determina la concentracin de
H2O2 que produzca el mayor desplazamiento de agua por unidad de
tiempo.

Tabla 1: prepara una batera de frascos de H2O2 as:

Diluciones de sustrato para cada ensayo.

Volumen de Volumen de H2O Volumen final de

N de frasco
H2O2(ml) destilada(ml) diluciones(ml)

1 3.0 0 3

2 2.5 0.5 3

3 2.0 1.0 3

4 1.5 1.5 3

5 1.0 2.0 3

6 0.5 2.5 3

7 0.0 3.0 3

16. Para cada ensayo inyecte el volumen final de solucin (3ml) en el reactor,
siguiendo las indicaciones del texto.
17. Observe el volumen de agua desplazado en la probeta del sensor en cada
uno de los ensayos del experimento y completa la siguiente tabla con los
datos obtenidos.
Volumen de Volumen de H2O
ensayo
H2O2(ml) destilada(ml)

1 O 0.6

2 0.5 5.7

3 1.0 12.2

4 1.5 18.1

5 2.0 24.2

6 2.5 30.4

7 3.0 36

7.-DATOS Y/O OBSERVACIONES

 1. Agua destilada 3 ml; agua oxigenada 0ml
No se vio ninguna reaccin de parte del hgado pero calculadamente
Consideramos una pequea cantidad por la misma temperatura que nos rodea (
o,6)
2. Agua destilada 2,5 ml; agua oxigenada 0,5 ml
El volumen del agua bajo 5.7ml. En un tiempo de 2 minutos, en el
hgado se vio una descoloracin (sangre), y sufri quemaduras en la
parte roseada en forma de llagas de color crema.
3. Agua destilada 2 ml; agua oxigenada 1 ml
El volumen del agua bajo 12.2ml. En un tiempo de 2 minutos. En el
hgado se vio una reaccin de forma violenta, el hgado fue rodeado
por burbujas, tambin se vio las llagas en mayor volumen en la parte
roseada del hgado.
4. Agua destilada 1,5 ml; agua oxigenada 1,5ml
El volumen del agua bajo 18.1ml en un tiempo de 2 minutos. En el
hgado se vio la misma reaccin del nmero (3). Las burbujas
rodearon de la misma forma al hgado.
5. Agua destilada 1 ml; agua oxigenada 2ml
El volumen del agua bajo 24.2ml en un tiempo d 2minutos. En el
hgado se vio que haba aumentado en gran cantidad de
quemaduras (llagas). Es decir que hubo mayor reaccin de las
enzimas
6. Agua destilada 0,5 ml; agua oxigenada 2,5ml
El volumen del agua bajo 30.4 ml. En un tiempo de 2 minutos. En el
hgado se llen por completo de las llagas que le cubran, las
quemaduras que le cubran se vio en forma de llagas.
7. Agua destilada0 ml; agua oxigenada 3ml
El volumen del agua bajo 36 ml. En un tiempo de 2 minutos. El
hgado tuvo mayor reaccin de enzimas.
 9.-CONCLUSIONES

Viendo todo el procedimiento diremos que a mayor volumen de agua

oxigenada tendremos mayor variacin de volumen
Tambin al mesclar el agua oxigenada con el agua destilada se producen
diferentes fracciones.
Asimismo a mayor agua oxigenada al aplicar sobre una sustancia existe
mayor reaccin enzimtica.
Las reacciones que vimos en el hgado fue por
consecuencia de que cuando el perxido era mayor, la
reaccin del volumen del agua disminua por accin del
agua oxigenada que liberaba aire o CO2 que era quien
llenaba de aire la probeta y hacia que baje el nivel del
agua.

Primeramente En el cual
seleccionamos los perforamos el
materiales necesarios envase con tapa
de la parte arriba
y de un costado
para sumergirle
la manguera

Enseguida seleccionamos los Una vez ya

frascos del 1 a 7 para obtenidas en
introducirle agua oxigenada la cada frasco
cantidad indicada tambin se le
aade agua
potable
 Luego
cuidadosament
e colocamos en
la probeta 100
ml de agua
normal

Sacamos
de cada
frasco ya
obtenida
s

En los pasos finales el hgado tiene que

estar congelado, en donde introducimos el
frasco preparado mediante la jeringa y
vimos que las enzimas del hgado se
aceleran y produce que la cantidad de agua
en la probeta disminuya con facilidad