Ajuste inducido

La enzima no acepta simplemente al sustrato, sino que tambin exige que el sustrato se
distorsione a algo cercano al estado de transicin. El ajuste inducido implica la distorsin de la
enzima, as como la del sustrato. Esta distorsin puede ser local o puede comportar un cambio
importante de la conformacin de la enzima. Una visin grfica de esta distorsin puede
observarse con la enzima hexoquinasa y que cataliza la fosforilacin de la glucosa a glucosa-6-
fosfa-to en el primer paso de la ruta metablica denominada gluclisis. La estructura de esta
enzima se ha determinado mediante difraccin de rayos X en ausencia de glucosa, y cuando est
ligada la glucosa. La unin de la glucosa hace que dos dominios de la enzima se plieguen uno hacia
el otro, con lo que se cierra la hendidura del lugar de unin alrededor del sustrato.

Libre y cerradura

Segn este modelo, la enzima acomoda el sustrato especfico de la misma manera que la
cerradura lo hace con su llave especfica. Aunque el modelo de la cerradura y la llave explicaba la
especificidad enzimtica, no permita aumentar nuestra comprensin de la catlisis en s, ya que
una cerradura no hace nada a su llave.

Triosa fosfato isomerasa (estado intermedio) (glucolisis)

La enzima, triosa fosfato isomerasa cataliza la interconversin del gliceraldehdo-3-fosfato (G3P) y

la dihidroxiacetona fosfato (DHAP),
El lugar activo de la triosa fosfato isomerasa incluye un residuo de glutamato (Glu 165) y uno de
histidina (His 95) que son esenciales para la fncin de esta enzima. A pH fisiolgico, el glutamato
est cargado negativamente (por tanto, es bsico) y ayuda a extraer el protn del carbono 2 del
G3P. Al mismo tiempo, la histidina acta como un grupo cido donador de protones (HA) para
trasladar protones entre el grupo carbonilo del sustrato y el OH de C-2. As pues, la reaccin
parece que se produce de la siguiente forma:

La catlisis por la triosa fosfato isomerasa comporta el fomento y la estabilizacin de un

intermediario enediol.

Serina proteasa: trisina y quimiotripsina (que aa estn relacionados)

Consideremos que la catlisis de la hidrlisis del enlace peptdico es por una de las serina
proteasas. Esta importante clase de enzimas incluye la tripsina y la quimotripsina, enzimas
denominadas proteasas porque catalizan la hidrlisis de los enlaces peptdicos en los polipptidos
y las protenas. Las serina proteasas se distinguen porque todas ellas tienen un residuo de serina
que desempea un papel crucial en el proceso cataltico.

Cada una de las serina proteasas corta preferentemente una cadena polipeptdica en el lado
carboxilo de aminocidos especficos. La tripsina corta preferentemente en el lado carboxilato de
los residuos de aminocidos bsicos como la lisina o la arginina, mientras que la quimotripsina
acta ms frecuentemente si un residuo hidrfobo (como la fenilalanina) se encuentra en esta
posicin. Las serina proteasas hidrolizan tambin una amplia gama de steres.

Las regiones del lugar activo de todas las serina proteasas tienen diversos factores comunes. En
concreto, siempre existe un residuo de aspartato, un residuo de histidina y un residuo de serina
agrupados alrededor de la depresin del lugar activo. Estos residuos son Asp 102, His 57 y Ser 195
en la estructura de la quimotripsina. Se trata de un bolsillo que est situado siempre cerca de la
serina del lugar activo. En la tripsina, este bolsillo es profundo y estrecho, con un carboxilato
cargado negativamente en su parte inferior, lo cual permite captar y mantener una cadena lateral
larga y de carga positiva como la de la Usina o la arginina. En la quimotripsina, el bolsillo es ms
ancho y est recubierto de residuos hidrfobos para acomodar una cadena lateral hidrfoba,
como la de la fenilalanina. Es la naturaleza de este bolsillo lo que da a cada serina proteasa su
especificidad.

Habr observado que las dos enzimas que se han descrito con detalle, la triosa fosfato isomerasa y
la quimotripsina, tienen ambas histidina y un residuo cido en su lugar activo, lo cual no es
infrecuente, ya que la histidina es muy comn en los lugares activos debido a su facilidad para
aceptar o donar protones a pH fisiolgico. Los residuos como Glu, Asp, Lys y Arg son tambin
participantes comunes en las transferencias de protones y sirven frecuentemente para realizar
enlaces electrostticos con las molculas de sustrato. Otros residuos, como serina y cistena, a
veces tambin desempean funciones importantes en los lugares activos de las enzimas.

La catlisis de la ruptura del enlace peptdico por las serina proteasas comporta la estabilizacin de
estados intermediarios tetradricos.
Cinetica enzimtica

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la
especifidad del enzima. Esto se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. La velocidad
puede determinarse midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.
Ecuacin de michaelis-menten

En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el

complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el
enzima libre:

Hipotesis del estado estacionario

La hiptesis del estado estacionario establece que la concentracin del complejo enzima-sustrato
se mantiene casi constante durante gran parte de la reaccin.

Represenacion de Lineweaver
representacin de Eadie-Hosfstee

Una representacin de Lineweaver-Burk proporciona una forma rpida de comprobar el

cumplimiento de la cintica de Michaelis-Menten y permite evaluar con facilidad las constantes
crticas. Como veremos, tambin permite discriminar los distintos tipos de inhibicin y regulacin
enzimtica. Un inconveniente de la representacin de Lineweaver-Burk es que suele requerir una
extrapolacin larga para determinar CM con la correspondiente incertidumbre del resultado. Por
consiguiente, a veces se utilizan otras formas de representacin de los datos. Una alternativa es
reordenar la ecuacin y representarla segn Eadie- Hofctee.

donde 'v' representa la velocidad de la reaccin, 'Km' es la constante de Michaelis-Menten, [S] es

la concentracin del sustrato y 'vmax' es el mximo de la velocidad de la reaccin.

est menos afectado por el margen de error que el diagrama de Lineweaver-Burke, debido a que
asigna el mismo peso a todos los puntos para cualquier concentracin del sustrato o velocidad de
reaccin.

Una de las consecuencias es que las variables en la ordenada y en la abscisa no son

independientes, sino que ambas dependen de la velocidad de reaccin. En consecuencia, cualquier
error experimental se manifiesta en ambos ejes.
Adaptacion de la ecuacin de MM