Validation Manual STNAR41 Ebook S PDF

Vienna International Centre, PO Box 500, 1400 Vienna, Austria
Tel.: (+43-1) 26060-0, Fax: (+43-1) 26060-5866, www.unodc.org
Directrices para
la validacin de mtodos analticos
y la calibracin del equipo utilizado
para el anlisis de drogas ilcitas en
materiales incautados y especmenes
biolgicos
ST/NAR/41
V.09-84581Febrero de 2010 Por una calidad y perfeccionamiento continuo
Fotografas:
Fototeca de la UNODC
Seccin de laboratorio y asuntos cientficos
Oficina de las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito
Viena
Directrices para
y la calibracin del equipo utilizado para
el anlisis de drogas ilcitas en materiales
incautados y especmenes biolgicos
Por una calidad y perfeccionamiento continuo
NACIONES UNIDAS
Nueva York, 2010
Reconocimientos
El presente manual ha sido elaborado por la Seccin de Laboratorio y Asuntos
Cientficos de la Oficina de las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito
(UNODC), y su preparacin fue coordinada por Iphigenia Naidis y Satu Turpeinen,
miembros del personal del Laboratorio (bajo la supervisin de Justice Tettey).
La Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos desea expresar su gratitud y reco-

nocimiento a los miembros del Grupo Permanente del Programa Internacional de
Garanta de la Calidad de la UNODC, Dr. Robert Anderson, Dr. Robert Bramley,
Dr. David Clarke y Dra. Pirjo Lillsunde, por la concepcin terica de este manual,
sus valiosas contribuciones y su trabajo de revisin y finalizacin del texto
original.*
*Los datos de contacto de las personas nombradas pueden solicitarse a la Seccin de Laboratorio
y Asuntos Cientficos de la UNODC (Apartado postal 500, 1400 Viena, Austria).
ST/NAR/41
Esta publicacin no ha pasado por los servicios oficiales de edicin.

ndice
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1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
1.1. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
1.2. Finalidad del manual . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
1.3. Planteamiento de este manual y terminologa utilizada . . . . . . . . . . 2
1.4. Uso de este manual . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2. Validacin y verificacin de mtodos analticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
2.1. Introduccin: funcin de la validacin en la garanta de calidad y

las buenas prcticas de laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
2.2. Evolucin de los mtodos nuevos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
2.3. Etapas preliminares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.4. Validacin del mtodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.5. Verificacin del mtodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
2.6. Parmetros para la validacin/verificacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
2.7. Supervisin y control del funcionamiento del mtodo . . . . . . . . . . 13
2.8. Ejercicios de colaboracin entre laboratorios/pruebas de
rendimiento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
2.9. Directrices prcticas para la validacin de mtodos . . . . . . . . . . . . 15
2.9.1. Materiales incautados - Anlisis cualitativo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

a) Pruebas de color . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
b) Anlisis de microcristales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
c) Tcnicas espectroscpicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
d) Cromatografa en capa delgada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
e) CFG/Cromatografa en fase lquida de alto rendimiento
(HPLC)/ Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
f) CFG Inmunoensayo (semicuantitativo) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.9.2. Materiales incautados - Anlisis cuantitativo . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

a) Tcnicas espectroscpicas (UV, IR, NMR, IMS, MS) . . . . . . . 24
b) CFG/HPLC/Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
2.9.3. Especmenes biolgicos - Anlisis cualitativo

a) Cromatografa en capa delgada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
iii
Pgina
b) CFG/HPLC/Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
c) Inmunoensayos (semicuantitativos) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
2.9.4. Especmenes biolgicos - Anlisis cuantitativo . . . . . . . . . . . . . . . . 35

a) CFG/HPLC/Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
3.Calibracin/Verificacin del funcionamiento de instrumentos y

equipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
3.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
3.2. Requisitos metrolgicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
3.3. Procedimientos de calibracin/verificacin del funcionamiento de
instrumentos y equipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Pipetas automticas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Aparatos de medicin del punto de fusin . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Medidores del pH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Hornos y calefactores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
Baos de agua . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
Balanzas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
Refrigeradores y congeladores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Instrumentos para mtodos inmunolgicos . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Espectrofotmetros de radiacin ultravioleta-visible . . . . . . . . . . 43
Espectrmetros infrarrojos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Cromatgrafos de gases . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Cromatgrafos lquidos de alto rendimiento . . . . . . . . . . . . . . . . 45
Espectrmetros de masas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
Integradores cromatogrficos y sistemas de datos . . . . . . . . . . . 47
4.Modelo de procedimiento normalizado de trabajo para la

validacin de un nuevo mtodo analtico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
Referencias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
Anexo. Glosario de trminos utilizados en el manual de validacin y

calibracin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55
Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67
1. Introduccin
1.1 Antecedentes
La Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos de la UNODC presta apoyo a los laboratorios
para que implanten y apliquen sistemas de gestin de la calidad, mediante una serie de
iniciativas, por ejemplo, el ofrecimiento de estndares de referencia de sustancias sometidas
a fiscalizacin, manuales sobre mtodos recomendados de laboratorio, posibilidades de capa-
citacin y el plan de ejercicios internacionales de colaboracin, as como la promocin y
facilitacin del intercambio de informacin, materiales y datos [1].
La validacin de los mtodos analticos y la calibracin del equipo son elementos importantes
de la garanta de calidad de los laboratorios. En este manual se abordan ambas cuestiones
centrndose en el anlisis de drogas ilcitas en materiales incautados y especmenes biolgi-
cos. Puede obtenerse ms informacin sobre la garanta de calidad en otros manuales de
la UNODC.
1.2 Finalidad del manual

La finalidad del manual es servir de introduccin a la validacin de mtodos estadsticos y
a la verificacin del funcionamiento del equipo del laboratorio. Su diseo responde al deseo
de que sirva de orientacin prctica a las autoridades nacionales y analistas para validar
mtodos en el marco de sus programas internos de garanta de calidad actuales.
Los procedimientos descritos en el manual constituyen una sntesis de la experiencia de

cientficos de varios laboratorios respetados de todo el mundo. Adems, como elemento de
la garanta de calidad y de las buenas prcticas de laboratorio, muchas organizaciones pro-
fesionales han elaborado directrices para la validacin de mtodos, que se han tenido en
cuenta al preparar este manual. Aunque los detalles de los protocolos de validacin de mto-
dos varen segn su contexto, tambin hay un conjunto comn de principios que subyace en
todos los sistemas. En general, en este manual se intenta promover medidas nacionales, y
armonizarlas, estableciendo unas directrices aceptables internacionalmente. Tambin es impor-
tante sealar que se centra especficamente en la cuestin de la garanta de calidad y las
buenas prcticas en los laboratorios de anlisis de drogas. Tambin puede servir como material
educativo y como instrumento para incitar a los laboratorios a considerar los problemas que
plantea la garanta de la calidad.
1
2 Directrices para el anlisis de drogas ilcitas en materiales incautados y especmenes biolgicos
1.3Planteamiento de este manual y

terminologa utilizada
Los captulos posteriores estn dedicados a la validacin de mtodos analticos y la calibracin
y verificacin del funcionamiento de instrumentos y equipo. La validacin y verificacin de
mtodos tiene por objeto asegurarse de que los resultados obtenidos responden a los fines
previstos mientras que la calibracin y verificacin del funcionamiento de los instrumentos
y equipo pretende garantizar que funcionen correctamente. La validacin de un sistema ana-
ltico, denominada tambin frecuentemente prueba de la conveniencia del sistema, se centra
en controlar el funcionamiento combinado del mtodo y el equipo en los procedimientos de
anlisis ordinarios.
El manual se divide en cuatro partes principales y un glosario.
En la PARTE I se ofrece un panorama general de la teora y la prctica de la validacin de

mtodos y la calibracin de instrumentos y la verificacin de su funcionamiento.
En la PARTE II se pretende ofrecer a los analistas una gua prctica. Contiene unas reco-
mendaciones imperativas sobre la forma de validar mtodos cualitativos y cuantitativos para
analizar tanto materiales incautados como especmenes biolgicos. Estas recomendaciones
inmediatas tienen por objeto ayudar a identificar de forma rpida y sistemtica los requisitos
que han de cumplirse para la validacin.
En la PARTE III se pretende ofrecer una gua prctica para la calibracin y la verificacin
del funcionamiento de instrumentos y equipo, y est subdividida en funcin de los procedi-
mientos utilizables para verificar distintos instrumentos y equipo.
En la PARTE IV se ofrecen ejemplos de procedimientos normalizados de trabajo para la

validacin de mtodos con el fin de ayudar a los directores de laboratorios a preparar este
tipo de documentacin para incluirla en el manual de calidad del laboratorio.
En el ANEXO se ofrece un glosario de trminos que tienen estrecha relacin con los temas
tratados en este manual.
1.4 Uso de este manual

Los enfoques de la validacin de mtodos propuestos en el presente manual se han selec-
cionado en funcin de la utilidad y el valor demostrados. Sin embargo, aunque se ofrezcan
varios esqueletos de modelos para la validacin de mtodos que pueden ser utilizados par-
cialmente de forma directa, se recomienda que los directores de los laboratorios supervisen
la preparacin de unos procedimientos internos de validacin respetando las orientaciones
que se ofrecen. La eleccin final del sistema de validacin de mtodos sigue en manos del
director del laboratorio, quien deber asumir adems la responsabilidad de asegurarse de que
el personal respeta los procedimientos establecidos.
Parte I. Introduccin 3
Hay que destacar la importancia que adquiere en todos los asuntos relacionados con la
garanta de calidad que el personal est convenientemente capacitado. El cumplimiento de
un programa escrito y formalizado de garanta de la calidad, algo que exige cualquier sistema
de acreditacin externa, slo puede asegurarse si colabora en ello un personal informado y
consciente.
Un complemento importante de la elaboracin de un programa interno de garanta de la

calidad es participar en un plan de anlisis externo de los resultados, y por eso se recomienda
a los laboratorios participar en programas de anlisis de resultados y pruebas circulares como
las que se realizan en los ejercicios internacionales de colaboracin (EIC) organizados por
la UNODC en el marco del programa internacional de garanta de calidad. Ms adelante,
cuando se aborde la validacin de los mtodos analticos (vase el apartado 2.8. de la
Parte II), se subraya la importancia de las comparaciones de ensayos entre laboratorios.
La Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos agradece las observaciones que pueda recibir
sobre el contenido y utilidad del presente manual. Estas observaciones pueden dirigirse a:
Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos

Oficina de las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito
Centro Internacional de Viena
Apartado de correos 500
A-1400 Viena
Austria
Fax: +43-1-26060-5967
Correo electrnico: lab@unodc.org
Sitio web: http://www.unodc.org/
2.Validacin y verificacin de mtodos
analticos
2.1Introduccin: funcin de la validacin en la

garanta de calidad y las buenas prcticas de
laboratorio
Los mtodos utilizados en un laboratorio de anlisis qumicos han de ser evaluados y some-
tidos a prueba para asegurarse de que producen unos resultados vlidos y coherentes con el
objetivo previsto, es decir, han de ser validados. Los laboratorios que adopten los mtodos
recomendados por la UNODC* deben o bien revalidarlos o bien verificarlos como proceda
para garantizar su funcionamiento adecuado en su entorno habitual. La verificacin supone
menos operaciones experimentales que la validacin (vanse los apartados 2.4. y 2.5. de la
Parte II infra).
Todos los mtodos nuevos que se introduzcan en un laboratorio deben estar adems docu-
mentados, y todos los analistas que los vayan a utilizar han de recibir una formacin adecuada
y demostrar su competencia en su utilizacin antes de empezar a actuar en casos concretos.
Tambin necesitan una revlida, o al menos una verificacin, los mtodos comercializados.
Los procedimientos recomendados por los fabricantes han de respetarse lo mximo posible.
En caso contrario, si se introducen cambios importantes, se necesitar una validacin com-
pleta. Si un mtodo se modifica o se aplica en una situacin nueva (por ejemplo, una muestra
de matriz nueva) se necesitar una revalidacin o una verificacin, segn el alcance de la
modificacin y el carcter de la nueva situacin. Por ejemplo, se necesitar una revalidacin
si un mtodo diseado para actuar con orina se utiliza con sangre; se necesitar una verifi-
cacin si se utiliza una columna cromatogrfica de un carcter o una dimensin diferentes.
No se necesitar adoptar ninguna medida si la modificacin es slo pequea, por ejemplo,
si se sustituye una columna cromatogrfica por otra del mismo tipo.
La validacin o la verificacin de un mtodo se realizan mediante una serie de pruebas

normalizadas y experimentales de las que se obtienen datos sobre su exactitud, precisin,
etc. El proceso que ha de seguirse para ello debe constar por escrito como procedimiento
normalizado de trabajo. Una vez validados o verificados los mtodos, su utilizacin habitual
*La Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos de la UNODC ha publicado una serie de manuales
dedicados a los mtodos recomendados para analizar las principales drogas que son objeto de abuso,
que se han publicado con la signatura ST/NAR. Puede solicitarse toda la serie o nmeros individuales.
5
en el laboratorio debe ser autorizada formalmente por la persona responsable, por ejemplo,
el director del mismo [2].
En el certificado de mtodo autorizado o documento similar que se establezca en el manual

de garanta de calidad se anotarn los detalles del mtodo y los datos en que se bas su
evaluacin, entre ellos los siguientes:
yy Denominacin del mtodo

yy Analito(s)
yy Matriz de la muestra
yy Fundamento cientfico del mtodo
yy Datos del estudio de validacin (exactitud, precisin, selectividad, intervalo, lmite
de deteccin, etc.)
yy Nombre y cargo de la persona responsable de la autorizacin
yy Fecha.
Tmese nota de que los procedimientos normalizados de trabajo para validar o verificar un
mtodo, lo mismo que cualquier otro procedimiento normalizado que figure en el manual de
calidad del laboratorio, deben ser aprobados por el director del laboratorio.
Una vez aprobados, es fundamental que se respeten estrictamente todos ellos. Si se introducen
variaciones, debe dejarse constancia documental del hecho. Si se introduce un cambio impor-
tante ser necesario volver a validar las nuevas condiciones del mtodo. En cualquier caso,
debe utilizarse la ltima versin aprobada de los procedimientos normalizados de trabajo.
La documentacin que se maneja en un sistema de garanta de la calidad es compleja por

naturaleza y por consiguiente los laboratorios han de disponer de un procedimiento adecuado
de control de la documentacin, como se recomienda en las Orientaciones para la implanta-
cin de un sistema de gestin de la calidad en los laboratorios de anlisis de drogas [3].
Los sistemas propuestos en la bibliografa dedicada al proceso de validacin pueden diferir

de las presentes directrices en algunos aspectos porque la validacin depende necesariamente
del uso previsto. Una de las ventajas de estas directrices es que se ocupan en exclusiva del
anlisis cualitativo y cuantitativo de sustancias estupefacientes sometidas a fiscalizacin que
se encuentren en materiales incautados o especmenes biolgicos.
2.2 Evolucin de los mtodos nuevos

En las normas ISO y en otras publicaciones [4, 5, 6] pueden encontrarse esquemas de cmo
evoluciona un mtodo nuevo. El esquema que figura a continuacin es de aplicacin general.
Validacin y verificacin de mtodos analticos 7
Etapa Supone
ETAPAS PRELIMINARES
1. Identificar los requisitos Establecer el objetivo final
2. Elegir el mtodo que se postular Bsqueda en la bibliografa de informacin

(depender de: la disponibilidad de equipo sobre el mtodo actual; o identificacin de
e instalaciones, los conocimientos del un mtodo similar; o nuevo enfoque;
personal y los requisitos de capacitacin de o recomendacin de colegas,
ste, las disposiciones de los reglamentos) o recomendacin de la UNODC o de otra
organizacin competente
3. Desarrollar el mtodo Evaluacin preliminar para establecer si

puede cumplir los requisitos
VALIDACIN DEL MTODO
4. Identificar el tipo de mtodo (los (Vase el prrafo 4 de la Parte II)

requisitos especficos dependern de que el
mtodo sea cualitativo o cuantitativo y de
las tcnicas que hayan de utilizarse)
5. Preparar la documentacin de la Definir por escrito los trabajos experimenta-

validacin les y el proceso de validacin (vase el
prrafo 6 de la Parte II)
6. Redactar las instrucciones para los (Vase ST/NAR/25)

usuarios (procedimientos normalizados de
trabajo con ese mtodo)
7. Recibir la autorizacin de la direccin (Vase el prrafo 1 de la Parte II)
SUPERVISIN Y CONTROL DEL FUNCIONAMIENTO DEL MTODO
8. Realizar controles de calidad para Utilizar normas identificables, muestras en

vigilar el cumplimiento de los criterios de blanco, muestras aadidas con otras
aceptacin del mtodo, dado el objetivo sustancias, grficos de control, etc. y
final (vase la etapa 1) programas de anlisis externo de los
resultados
9. Examinar el mtodo y proponer Volver a validar cuando proceda y preparar

cambios revisiones de los procedimientos normaliza-
dos de trabajo
10. Recibir autorizacin de la direccin Actualizar los procedimientos normalizados

de trabajo
2.3 Etapas preliminares

La cuestin fundamental a resolver antes de crear un nuevo mtodo es establecer qu uso se
har de los resultados. De este uso derivarn los criterios de calificacin del funcionamiento
del mtodo, lo que puede dar lugar a que se establezca, o limite, el nmero de tcnicas entre
las que elegir. Valga un ejemplo: cualquier mtodo de anlisis cuantitativo de drogas fisca-
lizadas en materiales incautados tendr que cumplir algunos requisitos mnimos de exactitud
y precisin, selectividad, etc., para que pueda aceptarse su utilizacin general. Un segundo
ejemplo sera el siguiente: la utilizacin de un mtodo de anlisis de metabolitos de estupe-
facientes en especmenes biolgicos en concentraciones dbiles puede exigir a su vez la
utilizacin de tcnicas que tengan la mayor sensibilidad y selectividad posibles, condiciones
que slo pueden cumplir la cromatografa en fase gaseosa o la cromatografa en fase lquida
combinada con una espectrometra de masas.
En lo que respecta a los recursos humanos y financieros del laboratorio, es importante evitar
la especificacin innecesaria de requisitos de funcionamiento, ya que puede suponer que se
prolonguen los plazos para realizar los anlisis, un aumento de los costes y un exceso de
informacin.
2.4 Validacin del mtodo

Las buenas prcticas de fabricacin vigentes en los Estados Unidos (Cdigo de Reglamentos
Federales, Administracin de Alimentos y Drogas), la Pharmacopoeia Convention de los
Estados Unidos, la Asociacin de Salud Pblica Americana y la Conferencia Internacional
de Armonizacin [2], entre otros, han sido la base de diversos protocolos de validacin de
mtodos que pueden encontrarse en la bibliografa especializada y ser tiles. Adems, el
Grupo de trabajo cientfico para el anlisis de drogas incautadas (SWGDRUG), la ENFSI,
la UIQPA y Eurachem/CITAC han publicado series detalladas de recomendaciones [5].
Los mtodos se pueden clasificar de distinta forma [7], pero en el presente caso debe esta-
blecerse una diferencia clara entre los mtodos cualitativos y los cuantitativos.
Los mtodos cualitativos de anlisis de drogas exigen la definicin de una serie de parmetros
cuyo cumplimiento es necesario para la validacin:
yy Especificidad/selectividad
yy Lmite de deteccin
yy Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio)
yy Estabilidad.
Cuando se trate de mtodos cualitativos en los que sea necesario establecer un nivel de
concentracin definido (un umbral) para reflejar resultados, deben determinarse los tres par-
metros adicionales siguientes:
yy Linealidad
yy Exactitud (sesgo) (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en labora-
torio) en el umbral de concentracin
yy Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio) en
el umbral de concentracin.
Los mtodos cuantitativos de anlisis de drogas exigen, para su validacin, que se determine
la siguiente serie de parmetros que han de cumplirse:
yy Especificidad/selectividad
yy Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio)
yy Linealidad y rango de trabajo
yy Exactitud (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio)
yy Recuperacin
yy Incertidumbre de la medicin
yy Estabilidad.
Otros parmetros cuya determinacin es aconsejable, pero no fundamental, son el lmite
inferior de cuantificacin y la robustez. En el caso de que los mtodos cualitativos y cuan-
titativos hayan de ser utilizados por ms de un laboratorio, cada uno de ellos debe verificar
el mtodo y debe determinar con los otros su precisin y exactitud.
2.5 Verificacin del mtodo

Si un laboratorio est utilizando un mtodo que ya ha sido validado, no es necesario volver
a validarlo en su totalidad aunque deba verificarse el cumplimiento de los parmetros mnimos
antes enumerados. Normalmente la verificacin supone determinar el cumplimiento de menos
parmetros y hacer menos mediciones de cada parmetro que si se tratara de una validacin.
Los resultados de la verificacin pueden diferir levemente de los obtenidos en la validacin,
pero debe determinarse si son aceptables teniendo en cuenta el objetivo que se persigue al
utilizar el mtodo.
Los mtodos cualitativos de anlisis de drogas requieren, para su verificacin, que se deter-
mine la siguiente serie de parmetros:
yy Especificidad/selectividad, si la matriz de la muestra difiere de la utilizada cuando

se elabor el mtodo
yy Precisin (en condiciones de repetibilidad o reproducibilidad).
En el caso de los mtodos cualitativos que tienen un umbral de concentracin para reflejar
resultados, deben determinarse los siguientes parmetros adicionales:
yy Exactitud (sesgo) en el umbral de concentracin

yy Precisin en el umbral de concentracin.
La exactitud y la precisin deben determinarse en el umbral de concentracin.
Los mtodos cuantitativos de anlisis de drogas exigen la determinacin de la siguiente serie

de parmetros para su verificacin:
yy Especificidad/selectividad y lmite de deteccin si la matriz de la muestra difiere

de la utilizada al elaborarse el mtodo
yy Exactitud (sesgo) (en condiciones de repetibilidad o reproducibilidad)
yy Precisin (en condiciones de repetibilidad o reproducibilidad).
2.6 Parmetros para la validacin/verificacin
Especificidad (selectividad)
Este parmetro se relaciona con el grado en que otras sustancias interfieren en la identificacin
y, si procede, en la cuantificacin de los analitos de que se trate. Mide la capacidad del
mtodo para identificar/cuantificar los analitos en presencia de otras sustancias, endgenas o
exgenas, en una muestra de la matriz en las condiciones exigidas por el mtodo.
La especificidad se determina aadiendo materiales que podran encontrarse en la muestra.

Por ejemplo, para hacer un ensayo de la especificidad de un mtodo inmunolgico aplicado
a especmenes biolgicos pueden utilizarse sustancias que potencialmente reaccionen entre
s; una prueba de la especificidad de un mtodo visual sera aadir sustancias interferentes
que puedan ocultar o enmascarar la reaccin de color; un mtodo cromatogrfico para deter-
minar la concentracin de drogas ilcitas en muestras clnicas no debe admitir interferencias
por parte de los frmacos que quepa esperar que se utilicen simultneamente. La especificidad
depende de la concentracin y debe determinarse el margen de error de calibracin en su
nivel ms bajo. La validacin debe garantizar el buen funcionamiento del mtodo, y que ste
distingue los efectos de las impurezas, las sustancias que reaccionan entre s, etc., que podran
estar presentes en la matriz.
Lmite de deteccin
Se trata de la concentracin mnima de analito que puede ser detectada e identificada con
un determinado grado de certidumbre. El lmite de deteccin se define tambin como la
concentracin mnima que puede distinguirse del ruido de fondo con un determinado grado
de confianza. Para estimar el lmite de deteccin pueden utilizarse varios mtodos, todos los
cuales dependen del anlisis de especmenes en blanco y el examen de la relacin entre la
seal y el ruido. Por lo general se acepta un requisito mnimo de relacin seal/ruido de 3/1.
El lmite de deteccin no es un parmetro robusto y puede resultar afectado por cambios
menores del sistema analtico (por ejemplo, temperatura, pureza de los reactivos, efectos de
matriz, condiciones instrumentales). Por tanto, es importante que este parmetro sea siempre
verificado por laboratorios que hayan adoptado mtodos previamente validados.
Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad)
La precisin mide el grado de acuerdo entre los resultados analticos obtenidos de una serie
de mediciones repetidas del mismo analito realizadas en las condiciones previstas en el
mtodo. La precisin refleja los errores aleatorios que se producen cuando se utiliza un
mtodo.
Las condiciones en que se mide la precisin se dividen, segn opinin general, en condiciones
repetibles y condiciones reproducibles.
La repetibilidad de las condiciones existe cuando el mismo analista analiza muestras el mismo
da y con el mismo instrumento (por ejemplo, cromatgrafo en fase gaseosa) o los mismos
materiales (por ejemplo, reactivos para pruebas visuales) y en el mismo laboratorio. Cualquier
cambio de estas condiciones (por ejemplo, diferentes analistas, diferentes das, diferentes
instrumentos, diferentes laboratorios) implica que las condiciones slo sern reproducibles.
La precisin normalmente se mide en trminos de coeficiente de variacin o desviacin tpica
relativa de los resultados analticos obtenidos con patrones de control preparados indepen-
dientemente. La precisin depende de la concentracin y debe medirse con concentraciones
diferentes dentro del rango aceptado, normalmente en la parte baja, media y alta de ste.
Una precisin aceptable en el nivel inferior de concentracin es del 20%. Con concentraciones
ms altas la precisin debe ser mayor. En algunos casos estos criterios de aceptacin pueden
suavizarse, por ejemplo, en los anlisis de muestras de autopsias, en los que los efectos de
matriz pueden ser importantes.
Linealidad y margen de error (rango)
Tradicionalmente se considera que un mtodo es lineal cuando existe una relacin directa-
mente proporcional entre la respuesta obtenida cuando se aplica el mtodo y la concentracin
del analito en la matriz dentro del rango de concentraciones del analito buscado (rango de
trabajo). El rango de trabajo viene definido por la finalidad del mtodo y puede representar
slo una parte de la totalidad de la lnea recta. Habitualmente los criterios de aceptacin
implican una prueba de la bondad de ajuste. Frecuentemente se utiliza como criterio de la
linealidad un coeficiente de correlacin (r) elevado, del 0,99. Sin embargo, este criterio no
basta para demostrar que existe una relacin lineal, por lo que cabe considerar que se puede
utilizar un mtodo que no permita establecer un coeficiente de correlacin tan alto como
el 0,99 pero permita cumplir los fines previstos. Estos parmetros no son aplicables a los
mtodos cualitativos salvo si se establece un umbral de concentracin para reflejar
resultados.
Exactitud (sesgo)
Medicin de la diferencia entre los resultados previstos del anlisis y el valor de referencia
aceptado, debido a un error sistemtico del mtodo y del laboratorio. Normalmente se expresa
en porcentaje. La exactitud y la precisin determinan el error total del anlisis. La exactitud se

determina tericamente utilizando material de referencia certificado (MRC) si es posible, mto-
dos de referencia, estudios en colaboracin o mediante comparacin con otros mtodos [4].
En la prctica, pocas veces se dispone de MRC para analizar drogas objeto de consumo
indebido. Para las drogas de este tipo que se encuentran en los fluidos biolgicos se dispone
de los MRC del Instituto Nacional de Normas y Tecnologa (NIST) de los Estados Unidos,
pero no abarcan un gran nmero de sustancias. Como alternativa, pueden utilizarse los patro-
nes de referencia de una organizacin autorizada, como la UNODC, la Direccin de Lucha
contra las Drogas (DEA) de los Estados Unidos o un proveedor comercial acreditado.
Lo normal es estimar la exactitud analizando muestras aadidas con tres concentraciones

distintas (baja, media y alta) que abarquen la totalidad del rango de trabajo. La concentracin
de estas adiciones estndar debe ser distinta de la utilizada para preparar las curvas de cali-
bracin y debe prepararse con una solucin estndar de trabajo distinta. Los criterios de
aceptacin de la exactitud deben ser similares a los utilizados para medir la precisin.
Recuperacin
Por recuperacin de analitos en un ensayo se entiende la respuesta del detector ante una
adicin o extraccin de analito de la matriz, en comparacin con su respuesta ante la con-
centracin real del estndar de referencia verdadero (los materiales incautados). Tambin puede
entenderse como el porcentaje de droga, metabolito o estndar interno presente inicialmente
en el espcimen, que llega hasta el final del procedimiento. Tratndose de especmenes bio-
lgicos, las muestras en blanco de la matriz biolgica despus de haberse obtenido los ltimos
extractos pueden ser objeto de una adicin estndar del componente puro y autntico con su
concentracin real y ser analizados a continuacin. Los experimentos de recuperacin deben
hacerse comparando los resultados analticos de las muestras extradas con tres concentraciones
(normalmente iguales a las de las muestras de control utilizadas para valorar la precisin y
exactitud de un mtodo). No es necesario que la recuperacin del analito sea del 100%, pero
el grado de recuperacin (del analito y del estndar interno) debe ser estable (con cualquier
tipo de concentracin analizada), precisa y reproducible (ms del 20%).
Medicin de la incertidumbre [8, 9, 10]
Los laboratorios de anlisis deben establecer y aplicar procedimientos de estimacin de la

incertidumbre de las mediciones [1]. Tener en cuenta la incertidumbre aumenta la garanta
de que los resultados y conclusiones obtenidos con los mtodos y programas analticos uti-
lizados permiten cumplir los objetivos fijados [11].
En metrologa, la incertidumbre se define como un parmetro asociado con el resultado de

una medicin que caracteriza la dispersin de los valores que puede atribuirse razonablemente
al mensurando. (Mensurando: cantidad concreta medida.).
En trminos ms prcticos la incertidumbre se puede definir como la probabilidad oel nivel

de confianza. Cualquier medicin que hagamos entraar un cierto grado de incertidumbre,
por lo que el intervalo de incertidumbre que se fije ser el rango dentro del cual se situar
el valor real con un determinado grado de confianza. Normalmente se utiliza un grado de

confianza del 95% [12].
Entender qu significa la incertidumbre es fundamental para interpretar los resultados e infor-

mar sobre ellos [11]. El laboratorio debe intentar al menos identificar todos los motivos de
incertidumbre y hacer una estimacin razonable de ellos, y debe asegurarse de que la forma
de informar sobre los resultados no transmite una falsa sensacin de incertidumbre.
La incertidumbre de las mediciones, por lo general, tiene muchos componentes. La incerti-

dumbre se calcula estimando los errores que se producen en las distintas etapas del anlisis,
por ejemplo, la etapa preanaltica, la homogeneizacin, el pesaje, el pipeteado, la inyeccin,
la extraccin, la derivacin, la recuperacin y las curvas de calibracin. Los datos exigidos
para la validacin, por ejemplo, la exactitud y precisin en condiciones de repetibilidad/
reproducibilidad, reflejan ya muchos de estos factores y deben ser utilizados.
Pueden hacerse estimaciones de la incertidumbre (con el nivel exigido de confianza del 95%)
utilizando la siguiente frmula:
en la que u1, u2 etc. son los motivos individuales de incertidumbre.
Los motivos individuales de incertidumbre, que representen menos del 20% del motivo ms
importante, tienen escasa incidencia en la incertidumbre general y pueden omitirse en el
clculo.
Estabilidad
Para validar un mtodo debe demostrarse en qu medida los analitos se mantienen estables
durante todo el procedimiento de anlisis, incluido su almacenamiento antes y despus de
ste. En general, la medicin se hace comparando patrones recin preparados con una con-
centracin conocida con patrones similares almacenados durante diferentes perodos de
tiempo y en diferentes condiciones. Vase la nota 13 y las referencias a que remite [13].
2.7Supervisin y control del funcionamiento del

mtodo
Despus de haber sido validado o verificado, y de haberse empezado a utilizar, cualquier
sistema de garanta de la calidad exige una vigilancia continua para establecer si sigue fun-
cionando de acuerdo con las especificaciones. Este proceso de vigilancia supone un control
continuo de la calidad del mtodo a travs de muestras en blanco, controles y calibradores
y el examen de los componentes del sistema (lo que a veces se denomina prueba de la
conveniencia del sistema) [14], por ejemplo, funcionamiento de las columnas cromticas en
trminos de resolucin y forma de los picos, respuesta de los detectores y especificaciones
de los reactivos. Para el control del mtodo deben establecerse unos lmites claros (por
ejemplo, la variabilidad aceptable de la respuesta del detector), as como las medidas correc-
tivas que deben adoptarse si se traspasan, entre ellas la recalibracin, la reverificacin o la
revalidacin del mtodo.
2.8Ejercicios de colaboracin entre laboratorios/

pruebas de rendimiento
Estos estudios son fundamentales para establecer la fiabilidad y compatibilidad de los datos
que sea necesario compartir. Los ejercicios de colaboracin se pueden considerar un compo-
nente de la validacin de mtodos, pues permiten estimar la exactitud y precisin de stos
en condiciones de reproducibilidad y determinar su robustez. Algunos ejercicios de este tipo
exigen que se utilice en cada instalacin el mismo mtodo. Los ejercicios de colaboracin
y los programas de anlisis del rendimiento se pueden utilizar para vigilar y comparar el
funcionamiento de un laboratorio con el de otros laboratorios que producen datos equivalentes.
Existen varios programas de garanta externa del control de la calidad de los anlisis de
drogas fiscalizadas, entre ellos los ejercicios internacionales de colaboracin de la UNODC.
Vanse tambin las Guas ISO/IEC 43-1 y 43-2 sobre la acreditacin de proveedores de
programas de ensayos de aptitud.
2.9Directrices prcticas para la validacin de mtodos
2.9.1 Materiales incautados - Anlisis cualitativo
Parmetro Requisitos para la validacin Criterios para la aprobacin
a) Pruebas de color
Especificidad/ Analizar las siguientes muestras en las condiciones especifica- Ninguna interferencia importante (enmascaramiento
selectividad das para la prueba y tomar nota del color obtenido en el tiempo de los resultados) por parte de sustancias cuya pre-
previsto: sencia sea normal.
Validacin y verificacin de mtodos analticos
yy Todas las drogas fiscalizadas que estn incluidas en el grupo yy Todas las drogas del grupo de inters dan resultados
de inters. negativos identificados.
Todos los componentes de fuentes naturales o de un proceso yy Menos del 5% de las muestras reales o simuladas que
de preparacin sinttica que normalmente se encuentren pre- se utilizan para la prueba contienen el analito en la
sentes en las muestras incautadas que contienen el grupo de concentracin mnima que es probable que se encuen-
drogas de inters. tre en las muestras concretas analizadas por el labo-
ratorio y que dan origen a falsos negativos.
yy Todas las sustancias que normalmente se encuentren como
yy La tasa de falsos negativos debe ser rebajada a un
diluyentes, excipientes, etc., en la matriz incautada que con-
mnimo (a ser posible un 0%) cuando se utiliza una
tenga la droga.
prueba de color para hacer una criba inicial y no se
yy Muestras de drogas fiscalizadas de otros grupos. realiza otra prueba si el resultado es negativo.
yy Una gama de muestras reales o simuladas de materiales incau- yy Menos del 10% de las muestras reales o simuladas
tados de composicin conocida por sus efectos de matriz. analizadas que no contienen el analito buscado dan
falsos positivos
El nmero de muestras analizadas debe ser lo ms amplio posi-
ble dentro de unos lmites practicables, pero se sugiere un
mnimo de 20.
15
16
2.9.1 Materiales incautados - Anlisis cualitativo (continuacin)
a) Pruebas de color (continuacin)

Lmite de Analizar muestras de una seleccin de drogas puras del grupo El lmite de deteccin debe ser lo suficientemente bajo
deteccin de inters en cantidades decrecientes hasta que no puedan ser para que el anlisis pueda cumplir su objetivo.
detectadas.
Normalmente se requerir una prueba para detectar el
Determinar los efectos de matriz en el lmite de deteccin aa- analito en la concentracin mnima que es probable que
diendo la sustancia a diversas matrices de uso frecuente en un se encuentre en las muestras analizadas por el
laboratorio. laboratorio.
El mtodo analtico deber especificar la cantidad de material

que ha de analizarse.
Precisin en Analizar al menos diez rplicas de muestras de composicin No ms de una muestra de cada cinco (el 20%) debe dar
condiciones de conocida con una concentracin de 1,25 a 2 veces el nivel del un falso negativo.
repetibilidad y lmite de deteccin.
reproducibilidad
b) Anlisis de microcristales
Especificidad/ Examinar cada droga incluida en el grupo de inters en un rango El mtodo analtico debe posibilitar por su especificidad
selectividad de matrices tpicas en las condiciones especificadas para la prueba, y selectividad el cumplimiento de los objetivos (es decir,
fotografiarlas y anotar las caractersticas que definan una droga tasas mnimas de falsos positivos con diferentes matrices
en particular o una droga incluida en un grupo establecido. cuando se hace una criba inicial de sustancias
fiscalizadas).
Directrices para el anlisis de drogas ilcitas en materiales incautados y especmenes biolgicos
Lmite de Analizar muestras de cada droga concreta perteneciente al El lmite de deteccin debe ser lo suficientemente bajo
deteccin grupo de inters en diversas matrices comunes con una serie para que el anlisis pueda cumplir su objetivo. Normal-
de diluciones que establezca la concentracin mnima en que mente se requerir una prueba para detectar el analito en
todava puede detectarse la droga con confianza. la concentracin mnima que es probable que se encuen-
tre en las muestras analizadas por el laboratorio.
Precisin en Analizar al menos diez rplicas de muestras de composicin No ms de una muestra de cada cinco (el 20%) debe dar
condiciones de conocida con una concentracin de 1,25 a 2 veces el nivel del un falso negativo.
reproducibilidad
c) Tcnicas espectroscpicas (UV, IR, NMR, IMS, MS)

Especificidad/ Analizar en las condiciones especificadas para la prueba e iden- El mtodo analtico debe posibilitar por su especificidad
selectividad tificar las absorciones, resonancias o iones caractersticos de: y selectividad el cumplimiento de los objetivos (es decir,
tasas mnimas de falsos positivos con diferentes matrices
yy Muestras de todas las drogas fiscalizadas que estn incluidas cuando se hace una criba inicial de sustancias
en el grupo de inters. fiscalizadas).
yy Muestras de todos los componentes de fuentes naturales o de
un proceso de preparacin sinttica que normalmente se
encuentren presentes en las muestras incautadas que contienen
el grupo de drogas de inters.
yy Todas las sustancias que normalmente se encuentren como dilu-
yentes, excipientes, etc., en la matriz incautada que contiene la
droga.
yy Muestras de drogas fiscalizadas de otros grupos.
17
18
c) Tcnicas espectroscpicas (UV, IR, NMR, IMS, MS (continuacin)

yy Una gama de muestras reales o simuladas de materiales incau-
tados de composicin conocida por sus efectos de matriz.
mnimo de 20.
Lmite de Analizar muestras de una seleccin de drogas incluidas en los El lmite de deteccin debe ser lo suficientemente bajo
deteccin grupos de inters en diversas matrices de uso comn en labo- para que el anlisis pueda cumplir su objetivo. Normal-
ratorios en un rango de diluciones para establecer la concen- mente se requerir una prueba para detectar el analito en
tracin mnima en la que todava pueden detectarse las drogas la concentracin mnima que es probable que se encuen-
con confianza. tre en las muestras analizadas por el laboratorio.
Precisin en Analizar al menos diez rplicas de muestras de composicin No ms de una muestra de cada cinco (el 20%) debe
condiciones de conocida con una concentracin de 1,25 a 2 veces el nivel del dar un falso negativo.
reproducibilidad
d) Cromatografa en capa delgada
Especificidad/ Teniendo precaucin de no sobrecargar la placa, analizar en El mtodo analtico debe posibilitar por su especificidad
selectividad las condiciones establecidas para la prueba y anotar los valores y selectividad el cumplimiento de los objetivos (es decir,
Rf y el color obtenidos en el tiempo previsto para: tasas mnimas de falsos positivos con diferentes matrices
cuando se hace una criba inicial de sustancias
fiscalizadas).
yy Todas las drogas fiscalizadas que estn incluidas en el grupo
de inters.
yy Todos los componentes de fuentes naturales o de un proceso
de preparacin sinttica que normalmente se encuentren en
las muestras incautadas que contienen el grupo de drogas de
inters.
tiene la droga.
yy Analizar mezclas de sustancias de Rf similar y confirmar
cules pueden ser identificadas en presencia de las otras.

deteccin grupos de inters en diversas matrices comunes y en un rango para que el anlisis pueda cumplir su objetivo. Normal-
de diluciones para establecer la concentracin mnima en la mente se requerir una prueba para detectar el analito
que todava pueden detectarse las drogas con confianza. en la concentracin mnima que es probable que se
encuentre en las muestras analizadas por el
laboratorio.
Precisin en Determinar la variacin dentro del laboratorio y entre distintos No ms de una muestra de cada cinco (el 20%) debe
condiciones de laboratorios de los valores Rf relativos obtenidos mediante la dar un falso negativo.
repetibilidad y comparacin del valor Rf de referencia con el valor Rf obtenido
reproducibilidad del anlisis en paralelo de un material estndar.
19
20
e) CFG/Cromatografa en fase lquida de alto rendimiento (HPLC)/Electroforesis capilar

Especificidad/ Analizar en las condiciones establecidas para la prueba y anotar El mtodo analtico debe posibilitar por su especificidad
selectividad los tiempos de retencin obtenidos para: y selectividad el cumplimiento de los objetivos (es decir,
tasas mnimas de falsos positivos con diferentes matrices
yy Todas las drogas fiscalizadas que estn incluidas en el grupo cuando se hace una criba inicial de sustancias
de inters. fiscalizadas).
las muestras incautadas que contengan el grupo de drogas de
inters.
tiene la droga.
Analizar mezclas de sustancias de Rf similar y confirmar que
pueden ser identificadas unas en presencia de las otras.
deteccin grupos de inters en diversas matrices comunes en un rango para que el anlisis pueda cumplir su objetivo. Normal-
de diluciones para establecer la concentracin mnima en la mente se requerir una prueba para detectar el analito en
que todava pueden detectarse las drogas con confianza (coefi- la concentracin mnima que es probable que se encuen-
ciente entre la seal y el ruido no inferior a 3/1). tre en las muestras analizadas por el laboratorio.
Precisin en Analizar al menos diez rplicas de muestras de composicin No ms de una muestra de cada cinco (el 20%) debe
condiciones de conocida con una concentracin de 1,25 a 2 veces el nivel del dar un falso negativo.
reproducibilidad La diferencia entre las RSD debe ser inferior al 2%.
Determinar el coeficiente de variacin (desviacin estndar de
los residuos (RSD) [15] de los tiempos de retencin en com-
paracin con la muestra de referencia.
f) CFG Inmunoensayo (semicuantitativo)
Especificidad/ Utilizando el proceso establecido de extraccin/ pretratamiento, Las especificaciones de los inmunoensayos en trminos
selectividad analizar: de especificidad y selectividad deben permitir cumplir
los objetivos previstos (es decir, tasas mnimas de fal-
yy Todas las drogas fiscalizadas que estn incluidas en el grupo sos positivos con diferentes matrices cuando se hace
de inters. una criba inicial de sustancias fiscalizadas).

las muestras incautadas que contengan el grupo de drogas de
inters.
tiene la droga.
yy Una gama de muestras reales o simuladas de materiales incau-
tados de composicin conocida por sus efectos de matriz.
mnimo de 20.
21
22
f) CFG Inmunoensayo (semicuantitativo) (continuacin)

deteccin grupos de inters en diversas matrices comunes en un rango para que el anlisis pueda cumplir su objetivo. Nor-
de diluciones para establecer la concentracin mnima en la malmente se requerir una prueba para detectar el ana-
que todava pueden detectarse las drogas con confianza. lito en la concentracin mnima que es probable que
se encuentre en las muestras analizadas por el
laboratorio.
Precisin en Determinar la precisin en condiciones de repetibilidad anali- No ms de una muestra de cada cinco (el 20%) debe
condiciones de zando al menos diez rplicas de muestras de composicin dar un falso negativo.
repetibilidad y conocida con una concentracin de 1,25 a 2 veces el lmite.
reproducibilidad
Nota: En la CFG-EM, el espectrmetro de masas puede funcionar como mecanismo de barrido de iones o como mecanismo SIM (seleccin de un in). En la cromatografa
lquida-espectrometra de masas en tndem, el espectrmetro puede operar como mecanismo de barrido de iones o en modo monitorizacin de reaccin mltiple (MRM).
En modo barrido de iones, el espectro de las masas se utiliza, junto con el tiempo absoluto
o relativo de retencin, para identificar y confirmar la presencia de drogas. Tratndose de
una identificacin (que remite a la especificidad y selectividad, y a la exactitud) el tiempo
de retencin y el espectro de masa de cada droga que aparezca en la muestra se comparan
con los de un patrn analizado en condiciones idnticas, normalmente en la misma tanda o
el mismo da. Como alternativa, el espectro se puede comparar con los patrones archivados,
utilizndose un sistema de bsqueda de archivos normal. El tiempo de retencin de la presunta
droga debe coincidir mucho con el del posible patrn (con un margen de exactitud de 2%)
y el espectro debe ser muy parecido visualmente al del patrn o conseguir, en una escala
0-1000, un nivel mnimo de coincidencia en la bsqueda de archivos de 900.
Cuando se utiliza en modo SIM/MRM, se eligen para cada analito de inters por lo menos
tres iones/transiciones, lo que normalmente incluir los picos de base y los iones moleculares
ms otro in de diagnstico. Tratndose de una identificacin, las reas de los picos en los
cromatogramas de los iones seleccionados en el tiempo de retencin del analito deben tener
una intensidad equivalente a las de un patrn analizado en la misma tanda y en condiciones
idnticas, con un margen de error tolerable de 20%, aproximadamente. Criterios similares
se pueden aplicar a los cromatogramas de masas generados por computadora a partir de datos
obtenidos mediante un barrido total de iones, si este modo de operar ofrece una sensibilidad
adecuada y hay un nmero suficiente de espectros de masas (ms de 12) en el pico croma-
togrfico para que puedan determinarse reas de picos con una exactitud razonable. Si el
espectrmetro de masas opera en modo ionizacin qumica, slo podr haber un in y la
identificacin de la droga tendr que hacerse en funcin del tiempo de retencin y del hecho
de que ese in est presente.
24
2.9.2 Materiales incautados Anlisis cuantitativo
a) Tcnicas espectroscpicas (UV, IR, NMR, IMS, MS)

Especificidad/ Como en el anlisis cualitativo Como en el anlisis cualitativo
selectividad
Lmite de Analizar muestras de cada droga concreta incluida en la clase (clases) Deben cumplirse los requisitos de exactitud
cuantificacin de inters en diversas matrices de uso comn en laboratorios en una y precisin.
serie de diluciones para establecer la concentracin mnima que per-
mite cuantificar todava la droga con confianza.
Linealidad y rango Analizar una muestra en blanco y otras seis muestras en blanco pre- El rango de trabajo debe permitir la obten-
de trabajo* paradas independientemente que contengan la droga de inters en cin de los resultados previstos.
seis concentraciones distintas distribuidas en intervalos iguales a lo
largo del rango de inters.
Exactitud Deben analizarse rplicas de especmenes en blanco aadidos con las Todos los resultados se encuentran en una
drogas de inters en tres niveles distintos (alto, medio y bajo) en tres banda de 20% del valor esperado en los
das consecutivos. El nmero de rplicas en cada nivel de concen- niveles de concentracin bajos y del 15%
tracin y en cada da debe ser al menos tres. La diferencia entre el en los niveles de concentracin altos.
resultado medio y el resultado esperado (vase la Parte II F) debe
expresarse en porcentaje.
Precisin Comparar los resultados obtenidos para cada espcimen en blanco y La desviacin estndar relativa no debe ser
aadido en cada nivel de concentracin establecido para determinar mayor del 20% en los niveles de concentra-
la exactitud y expresar la variacin en trminos de desviacin estn- cin bajos y del 15% en los niveles altos.
dar relativa de cada concentracin.
Recuperacin (si se Preparar muestras del analito con tres niveles de concentracin en La recuperacin debe ser reproducible con
necesita una una matriz tpica. Hganse cinco rplicas de los extractos de cada un margen de 15%.
extraccin) muestra. Al mismo tiempo analcense las soluciones estndar del
analito de que se trate. La recuperacin se calcula a continuacin Nota: como se indica en la Parte II, el por-
comparando las respuestas espectroscpicas del analito, por ejemplo, centaje de recuperacin absoluta no es fun-
las absorciones, con las de los patrones. damental en la medida en que sea reproducible
Recuperacin % = [A1/A2] x 100. y el lmite bajo de cuantificacin sea
adecuado.
Para cada muestra utilizada para la extraccin:
A1 = respuesta del analito
A2 = respuesta del patrn.
Incertidumbre Estimar los errores en cada etapa del proceso analtico utilizando los Como orientacin general, la incertidumbre
datos de la validacin, si se dispone de ellos, y calcular la incerti- debe situarse en una banda de 15% del
dumbre total (vase el apartado 2.6. de la Parte II). lmite de cuantificacin; 10% del rango
medio o alto.
b) CFG/HPLC/Electroforesis capilar
Especificidad/ Como en el anlisis cualitativo Como en el anlisis cualitativo
selectividad
Lmite de Analizar, una sola vez, diez muestras en blanco extradas de una El lmite de cuantificacin debe ser adecuado
cuantificacin matriz tpica de la droga que contengan sta en concentraciones para los fines previstos (es decir, de ser
prximas al nivel mnimo (cercano al lmite de cuantificacin) en el sometido a un control de calidad externo,
que puede percibirse una seal que indique su presencia. debe permitir el cumplimiento de los objeti-
vos de calidad que correspondan).
Expresar el lmite de cuantificacin como desviacin estndar de 3
o 10 del valor de la muestra en blanco en la posicin de la
droga.
25
26
2.9.2 Materiales incautados Anlisis cuantitativo (continuacin)
b) CFG/HPLC/Electroforesis capilar (continuacin)

Linealidad y rango Analizar una muestra en blanco y otras seis muestras en blanco pre- El rango de trabajo debe permitir la obten-
de trabajo* paradas independientemente que contengan la droga de inters en cin de los resultados previstos.
seis concentraciones distintas distribuidas en intervalos iguales a lo
largo del rango de inters.
Precisin en Analizar diez muestras en blanco preparadas independientemente y La desviacin estndar de los controles de
condiciones de aadidas con la droga de inters en seis concentraciones distribuidas concentraciones bajas debe ser inferior al
repetibilidad y a intervalos iguales dentro del rango de trabajo y expresar la variacin 20% y la de los controles de otros niveles
reproducibilidad en trminos de desviacin estndar de cada concentracin. debe ser inferior al 15%.
Exactitud Analizar diez muestras en blanco preparadas independientemente y Los errores en los controles de concentracio-
aadidas con la droga de inters en tres niveles de concentracin nes bajas han de ser inferiores al 20% y en
distintos (alto, medio y bajo) y expresar la diferencia entre el resul- los dems controles inferiores al 15%.
tado medio y el resultado esperado en porcentaje.
Recuperacin Preparar muestras del analito con tres niveles de concentracin en La recuperacin debe ser reproducible con
(cuando se necesite una matriz tpica. Hganse cinco rplicas de los extractos de cada un margen de 15%.
una extraccin) muestra. Adase a cada extracto una cantidad conocida del patrn
interno. Al mismo tiempo analcense soluciones estndar del analito Nota: como se indic en la Parte II F, el
de que se trate que contengan la misma cantidad de patrn interno. porcentaje absoluto de recuperacin no es
La recuperacin se calcula a continuacin comparando la relacin fundamental en la medida en que sea repro-
entre las reas del pico del analito con las reas del pico del patrn ducible y permita un lmite bajo de cuantifi-
interno en las muestras de las que se obtuvieron extractos y en las cacin que sea adecuado.
que no.
Recuperacin % = ([A1/A2]/[A3/A4]) x 100.

Para las muestras de las que se obtuvieron los extractos:
A1 = rea del pico del analito
A2 = rea del pico del patrn interno.
Para las soluciones estndar:

Incertidumbre Estimar los errores en cada etapa del proceso analtico utilizando los Como orientacin general, la incertidumbre
datos de la validacin, si se dispone de ellos, y calcular la incerti- debe situarse en una banda de 15% del
dumbre total (vase el apartado 2.6. de la Parte II). lmite de cuantificacin; 10% del rango
medio o alto.
lquida-espectrometra de masas en tndem, el espectrmetro puede operar como mecanismo de barrido de iones o en modo monitorizacin de reaccin mltiple (MRM).
27
de que ese in est presente. A efectos de cuantificacin, uno de los iones/transiciones que
se elija se considerar in/transicin de cuantificacin y los dems servirn como iones de
control para confirmar la identidad de la presunta droga. Los cromatogramas obtenidos de los
iones/transiciones de cuantificacin se utilizan para la validacin de mtodos de manera seme-
jante a los obtenidos con otros detectores CFG como el detector de ionizacin de llama.
2.9.3 Especmenes biolgicos Anlisis cualitativo
a) Cromatografa en capa delgada
Especificidad/ Analizar en las condiciones establecidas para la prueba y anotar los valores Verificar que el mtodo analtico
selectividad de Rf (factor de retencin) de: permite satisfacer los objetivos
previstos en trminos de
yy Soluciones estndar de drogas y/o metabolitos dentro del grupo de especificidad y selectividad (es decir,
inters; produce unas tasas de falsos
yy Especmenes en blanco aadidos con drogas y/o metabolitos del grupo de positivos mnimas con distintas
inters; matrices cuando se utiliza para hacer
una criba inicial de sustancias
yy Soluciones estndar de drogas de otros grupos. fiscalizadas).

Analizar una matriz en blanco de cinco fuentes distintas por lo menos y
verificar la ausencia de sustancias que interfieran en los valores Rf del analito
o analitos de inters.
Si otras drogas o sustancias tienen valores Rf similares a los de alguno de

los analitos buscados, analizar una mezcla para comprobar si pueden ser
diferenciadas del analito o analitos buscados.
Lmite de deteccin Analizar diez rplicas independientes y aleatorias de extractos (de una matriz El lmite de deteccin debe ser lo
y umbral tpica de la droga) en blanco, aadidos con la droga de inters y con distintos suficientemente bajo para que el
niveles de concentracin. anlisis pueda cumplir sus objetivos.
Establecer el nivel mnimo en el que se detecta la droga con fidelidad. El mtodo debe permitir la deteccin
de todos los analitos buscados que
Si se ha definido un umbral de concentracin (concentracin crtica), el sobrepasen los valores de umbral.
funcionamiento del mtodo (la cromatografa en capa delgada) se verificar
realizando controles de muestras aadidas con una concentracin un 25%
29
superior a la del umbral aproximadamente.

30
2.9.3 Especmenes biolgicos Anlisis cualitativo (continuacin)

a) Cromatografa en capa delgada (continuacin)
Precisin en Determinar la variabilidad (RSD) de los valores Rf obtenidos de las muestras La RSD debe ser inferior al 20%.
condiciones de de control. Si se ha fijado un valor de umbral, la RSD debe determinarse
repetibilidad y con muestras aadidas con una concentracin que sea un 25% superior al
reproducibilidad valor de umbral aproximadamente.
b) CFG/HPLC/Electroforesis capilar
Especificidad/ Analizar en las condiciones establecidas para la prueba y anotar los tiempos Verificar la ausencia de sustancias que
selectividad de retencin de: interfieran en el tiempo de retencin
de los analitos de inters y del patrn
yy Soluciones estndar de drogas y/o metabolitos dentro del grupo de interno.
inters;
Verificar que el mtodo analtico
yy Especmenes en blanco aadidos con drogas y/o metabolitos del grupo de
permite satisfacer los objetivos
inters;
previstos en trminos de especificidad
yy Soluciones estndar de drogas de otros grupos. y selectividad (es decir, produce unas
tasas de falsos positivos mnimas con
Analizar una matriz en blanco de cinco fuentes distintas por lo menos y distintas matrices cuando se utiliza
verificar la ausencia de sustancias que interfieran en los tiempos de retencin para hacer una criba inicial de
de los analitos de inters. sustancias fiscalizadas).
Si otras drogas o sustancias tienen tiempos de retencin similares a los de

alguno de los analitos buscados, analizar una mezcla para comprobar si
pueden ser diferenciadas del analito o analitos buscados.
Lmite de deteccin Analizar muestras de una seleccin de drogas incluidas en los grupos de El lmite de deteccin debe ser lo
inters en diversas matrices comunes en un rango de diluciones para esta- suficientemente bajo para que el
blecer la concentracin mnima en la que todava pueden detectarse las dro- anlisis pueda cumplir su objetivo.
gas con confianza (coeficiente entre la seal y el ruido no inferior a 3/1). Normalmente se requerir una prueba
para detectar el analito en la
concentracin mnima que es probable
encontrar en los especmenes
analizados por el laboratorio.
Precisin en Analizar al menos diez muestras similares de composicin conocida con una No ms de una muestra de cada
condiciones de concentracin de 125 a 2 veces el nivel del lmite de deteccin. cinco (el 20%) debe dar un falso
repetibilidad y negativo.
reproducibilidad Determinar el coeficiente de variacin (RSD) de los tiempos de retencin en
comparacin con la muestra de referencia. La diferencia entre los RSD debe ser
inferior a 2%.
31
32
2.9.3 Especmenes biolgicos Anlisis cualitativo (continuacin)

c) Inmunoensayos (semicuantitativos)
Especificidad/ Los inmunoensayos comerciales contienen ya informacin sobre la especi- La reactividad con otras drogas o
selectividad ficidad y selectividad del mtodo. No es necesario verificar esta informacin sustancias no debe ser importante.
si el inmunoensayo se utiliza nicamente para los fines previstos.
La utilizacin del inmunoensayo con matrices biolgicas distintas de las ya
validadas por el fabricante, por ejemplo, sangre en lugar de orina, exigir
su validacin, especialmente en lo que respecta a los efectos de matriz.
Para validar un inmunoensayo, analizar en las condiciones establecidas para
la prueba:
yy Muestras aadidas con drogas y/o metabolitos fiscalizados del grupo de inters;
yy Muestras de drogas fiscalizadas de otras clases;
yy Sustancias que por lo comn se encuentran en la matriz en que se analiza la
droga;
yy Al menos 20 especmenes que se sepa que son positivos;
yy Al menos 20 especmenes que se sepa que son negativos procedentes de distintas
personas
Lmite de deteccin Los inmunoensayos comerciales normalmente contienen informacin sobre Debe ser sustancialmente inferior al
este lmite. nivel de concentracin fijado como
umbral para que puedan clasificarse
De ser necesaria una validacin, por ejemplo, para analizar un nuevo deri-
las muestras como positivas o
vado anfetamnico en la misma matriz o para buscar drogas en diferentes
negativas de una forma fiable.
matrices, analizar diez rplicas independientes y al azar de especmenes
blancos aadidos con la droga de inters con distintos niveles de concentra-
cin para poder determinar la concentracin mnima que puede detectarse
con fiabilidad.
Precisin en En la mayora de los inmunoensayos, la decisin de informar sobre la pre- Para establecer la repetibilidad
condiciones de sencia o ausencia de una determinada sustancia no debe basarse en el lmite (precisin dentro del da) y la
repetibilidad y de deteccin del mtodo sino en el umbral de concentracin establecido precisin intermedia (precisin en
reproducibilidad. como criterio para dar positivo. distintos das), los valores de la RSD
no deben ser inferiores al 20%.
El buen funcionamiento de un inmunoensayo con un umbral de concentra-
cin definido (concentracin crtica) debe verificarse analizando muestras de Las muestras de control aadidas han
control en tandas aadidas con concentraciones prximas al umbral (25% de ser clasificadas correctamente por
del umbral de concentracin). el inmunoensayo segn su nivel de
concentracin superior o inferior al
La precisin dentro del da (repetibilidad) puede determinarse analizando umbral.
muestras de control aadidas con una concentracin del analito que sea un
25% superior al umbral de concentracin. Debe calcularse la RSD de estos
datos.
La precisin en distintos das (precisin intermedia) puede obtenerse acu-

mulando datos sobre muestras de control aadidas con una concentracin
del analito que sea un 25% superior al umbral, lo que debe hacerse habi-
tualmente con cada tanda de anlisis. Debe calcularse el RSD de estos
datos.
lquida-espectrometra de masas en tndem, el espectrmetro puede operar como mecanismo de barrido de iones o en modo monitorizacin de reaccin mltiple (MRM)
33
En modo barrido de iones, el espectro de masas se utiliza, junto con el tiempo absoluto o
relativo de retencin, para identificar y confirmar la presencia de drogas. Tratndose de una
identificacin (que remite a la especificidad y selectividad, y a la exactitud) el tiempo de
retencin y el espectro de masa de cada droga que aparezca en la muestra se comparan con
los de un patrn analizado en condiciones idnticas, normalmente en la misma tanda o el
mismo da. Como alternativa, el espectro se puede comparar con los patrones archivados,
idnticas, con un margen de error tolerable de 20%, aproximadamente.
Criterios similares se pueden aplicar a los cromatogramas de masas generados por compu-
tadora a partir de datos obtenidos mediante un barrido total de iones, si este modo de operar
ofrece una sensibilidad adecuada y hay un nmero suficiente de espectros de masas (ms de
12) en el pico cromatogrfico para que puedan determinarse reas de picos con una exactitud
razonable. Si el espectrmetro de masas opera en modo ionizacin qumica, slo podr haber
un in y la identificacin de la droga tendr que hacerse en funcin del tiempo de retencin
y del hecho de que ese in est presente.
2.9.4 Especmenes biolgicos Anlisis cuantitativo
a) CFG/HPLC/Electroforesis capilar
Especificidad/ Analizar en las condiciones establecidas para la prueba y anotar los tiempos de Verificar que no hay un nivel impor-
selectividad retencin de: tante de sustancias que interfieren en
el tiempo de retencin del analito de
yy Soluciones estndar de drogas y/o metabolitos del grupo de inters;
inters y del patrn interno. Se con-
siderar un nivel importante el equi-
yy Especmenes en blanco aadidos con las drogas y/o metabolitos del grupo de
valente o superior al lmite de
inters; y
cuantificacin.
yy Soluciones estndar de drogas de otros grupos.
Analizar una matriz en blanco obtenida de diez fuentes diferentes por lo menos
y verificar la ausencia de sustancias interferentes en los tiempos de retencin
de los analitos de inters.
Si una droga u otra sustancia tiene un tiempo de retencin similar a alguno de

los analitos considerados, analizar una mezcla de ellos para comprobar si pueden
diferenciarse del analito buscado.
35
36
2.9.4 Especmenes biolgicos Anlisis cuantitativo (continuacin)

a) CFG/HPLC/Electroforesis capilar (continuacin)
Linealidad y Analizar una muestra en blanco que contenga la droga de inters con cinco La prueba de la linealidad debe con-
rango de trabajo* concentraciones distintas que cubran todo el rango de inters. Las concentra- firmar que el mtodo es lineal, por
ciones deben estar separadas por intervalos iguales. ejemplo, el coeficiente de regresin
debe ser superior a 0,99 en el rango
Debern analizarse seis rplicas de la muestra, por lo menos, por cada nivel de de trabajo y ste debe ser adecuado
concentracin a fin de identificar y excluir los valores atpicos. Para tal fin pueden al objetivo buscado.
utilizarse las pruebas de Grubbs o de Dixon.
Los lmites de deteccin y de cuan-
Calcular una curva de calibracin utilizando los valores medios de cada concen- tificacin deben ser muy inferiores
tracin y controlar su linealidad, utilizando por ejemplo el anlisis de regresin al punto ms bajo de calibracin.
lineal para obtener el coeficiente de regresin r2.
En los estudios de la linealidad pueden estimarse parmetros tales como el lmite

de deteccin y el lmite de cuantificacin. Esa estimacin puede realizarse multi-
plicando por tres (si se trata del lmite de deteccin) o por diez (si se trata del lmite
de cuantificacin) el coeficiente de la relacin entre la desviacin estndar observada
en el nivel inferior de calibracin y la pendiente de la regresin lineal.
Exactitud Deben analizarse rplicas de especmenes en blanco aadidas con las drogas Todos los resultados deben situarse
de inters con tres niveles distintos (alto, medio y bajo) en tres das consecu- dentro de la banda 20% del valor
tivos. El nmero de rplicas por nivel de concentracin y da debe ser por lo esperado en los niveles de concen-
menos tres. La diferencia entre el resultado medio y el resultado esperado tracin bajos y de 15% en los nive-
(vase la Parte II F) debe expresarse en porcentaje. les altos.
Precisin en Comparar los resultados obtenidos con cada espcimen en blanco aadido en La RSD debe ser inferior al 20% en
condiciones de cada nivel de concentracin cuando se determin la exactitud, y expresar la los niveles de concentracin bajos e
reproducibilidad variacin en trminos de RSD de cada concentracin. inferior al 15% en los niveles altos.
Recuperacin Preparar especmenes del analito buscado con tres concentraciones distintas en La recuperacin debe ser reproduci-
(cuando se una matriz en blanco. Preparar cinco rplicas de extractos de cada espcimen. ble con un margen de 15%.
necesite una Aadir a cada extracto una cuanta conocida de estndar interno. Al mismo
extraccin) tiempo, analizar soluciones estndar del analito buscado que contengan la Nota: como se indica en la Parte II
misma cantidad de patrn interno. (Nota: si se conocen efectos de matriz, debe F, el porcentaje de recuperacin
obtenerse una cantidad equivalente de extractos de una matriz en blanco y absoluta no es fundamental en la
aadirse a las soluciones estndar junto con el estndar interno). medida en que sea reproducible y el
lmite bajo de cuantificacin sea
La recuperacin se calcula a continuacin comparando el coeficiente entre el rea
adecuado.
donde se sita el pico del analito y el rea donde se sita el pico del patrn
interno en las muestras de las que se obtuvieron los extractos y en las que no.
Recuperacin % = ([A1/A2]/[A3/A4]) x 100.
Para las muestras de las que se obtuvieron los extractos:
Para las soluciones estndar:
Incertidumbre Estimar los errores en cada etapa del proceso analtico utilizando los datos de Como orientacin general, la incerti-
la validacin, si se dispone de ellos, y calcular la incertidumbre total (vase dumbre debe situarse en una banda
el apartado 2.6. de la Parte II). de 25% del lmite de cuantifica-
cin; 20% del rango medio o alto.
37
lquida espectrometra de masas en tndem, el espectrmetro puede operar como mecanismo de barrido de iones o en modo monitorizacin de reaccin mltiple (MRM).
de que ese in est presente.
A efectos de cuantificacin, uno de los iones/transiciones que se elija se considerar in/

transicin de cuantificacin y los dems servirn como iones de control para confirmar la
identidad de la presunta droga. Los cromatogramas obtenidos de los iones/transiciones de
cuantificacin se utilizan para la validacin de mtodos de manera semejante a los obtenidos
con otros detectores CFG como el detector de ionizacin de llama.
3.Calibracin/Verificacin del
funcionamiento de instrumentos
y equipo
3.1 Introduccin
El funcionamiento de los instrumentos y el equipo de laboratorio pueden alterarse con el
paso del tiempo, ya sea a corto plazo, debido a las fluctuaciones del entorno, o a largo plazo,
debido al envejecimiento de los componentes mecnicos, pticos o electrnicos. Los pequeos
cambios pueden pasar desapercibidos e inducir a error en los resultados obtenidos. Adems,
el funcionamiento puede resultar afectado por reparaciones o por la sustitucin de mdulos
o componentes. Tambin es posible que un equipo nuevo no haya sido controlado o sometido
a prueba antes de la entrega para establecer si cumple las especificaciones.
En un laboratorio que mantenga un sistema de gestin de la calidad, todos estos aspectos

del trabajo analtico se controlan, y se controlan tambin los posibles errores instrumentales
por medio de unos procedimientos peridicos de mantenimiento y calibracin preventivos.
La forma en que se controla el funcionamiento de los instrumentos y el equipo (para referirse
a este proceso se utilizan los trminos verificacin [4] o calificacin [16] del funcionamiento),
y la frecuencia de las calibraciones (intervalo), deben estar estipuladas en los procedimientos
normalizados de trabajo.
La verificacin del funcionamiento debe basarse en pruebas que no se ajusten especficamente

a un mtodo concreto y en las que se utilicen calibradores y patrones rastreables, permitiendo
as que el equipo pueda ser comparado entre laboratorios. La verificacin del funcionamiento
no se relaciona expresamente ni con mtodos de criba inicial ni con mtodos de confirmacin.
La calibracin de los instrumentos y el equipo (por ejemplo, calibracin de la longitud de onda
de un espectrmetro infrarrojo, calibracin de masas de un espectrmetro con un sistema aco-
plado de cromatografa en fase gaseosa) es independiente del tipo de muestra que se utilice.
Existen dos enfoques tericos del proceso de calibracin:
yy El enfoque tradicional, segn el cual han de calibrarse todos los instrumentos y el

equipo, y
yy El enfoque que parte del supuesto de que slo deben calibrarse los instrumentos
que realicen mediciones fsicas y cuyos resultados sean una medicin directa de
un parmetro fsico rastreable. Por ejemplo, pueden calibrarse balanzas, espectr-
metros, termmetros, centrifugadoras y cronmetros porque existen unos estndares
39
rastreables que determinan el nivel de incertidumbre de las mediciones. En todos

los dems casos, en el laboratorio slo podr hacerse una verificacin del funcio-
namiento del equipo/instrumentos, pues sin una estimacin de la incertidumbre no
puede hacerse una calibracin.
El laboratorio tiene que decidir qu enfoque prefiere.
3.2 Requisitos metrolgicos

El laboratorio debe disponer de todos los artculos necesarios para medir muestras y del
equipo de anlisis que se necesite para realizar pruebas y calibraciones correctas. Antes de
su utilizacin, debe comprobarse y calibrarse el equipo para asegurarse de que cumple los
requisitos de laboratorio y las especificaciones estndar. El laboratorio debe disponer de un
programa y unos procedimientos establecidos de calibracin de su equipo [17].
Algunos proveedores de instrumentos y equipo pueden encargarse de certificar la calibracin

a travs de un contrato ordinario de mantenimiento. Las exigencias actuales en materia de
garanta de la calidad y buenas prcticas de laboratorio obligan a anotar en el cuaderno de
cada instrumento todos los controles y procedimientos de calibracin que se lleven a cabo
y las medidas correctivas adoptadas si un control indica que un instrumento no est bien
calibrado, de acuerdo con en el siguiente cuadro.
Datos que deben anotarse en el cuaderno de mantenimiento del

instrumento [4]
Denominacin del equipo

Nombre del fabricante, modelo y/o tipo
Nmero de serie
Fecha de recepcin del equipo en el laboratorio
Condicin en que se recibi (nuevo, usado)
Informacin detallada sobre los controles del cumplimiento de
las especificaciones pertinentes de calibracin o estndares analticos
Fecha en que entr en servicio el equipo en el laboratorio
Ubicacin actual en el laboratorio, cuando proceda
Copia de las instrucciones de manejo del fabricante
Definicin de los criterios que se utilizarn para juzgar el buen funcionamiento en
consonancia con los requisitos para realizar el tipo de anlisis que haya de
hacerse con ese instrumento
Datos detallados sobre las actividades de mantenimiento realizadas
y del posterior control del funcionamiento
Historial de los daos, problemas de funcionamiento, modificaciones o repara-
ciones de los instrumentos y de los posteriores controles del funcionamiento
Frecuencia de los controles del cumplimiento de los criterios de buen
funcionamiento
Calibracin/Verificacin del funcionamiento de instrumentos y equipo 41
3.3Procedimientos de calibracin/verificacin del

funcionamiento de instrumentos y equipo
Los procedimientos de calibracin de aparatos utilizados en qumica analtica frecuentemente
son descritos por el propio fabricante, que aporta adems informacin sobre las actividades
normales de mantenimiento y la frecuencia con que deben realizarse. A continuacin se
ofrecen directrices para establecer procedimientos estndar de calibracin de instrumentos y
equipo de uso comn, y aplicar a stos dichos procedimientos [13, 15].
Pipetas automticas
El mantenimiento ordinario exige que, aparte de una calibracin, se realicen controles peri-
dicos de las lneas de pipetas, desarmndolas y limpindolas en caso necesario.
Parmetro a calibrar: volumen de la descarga.
Mtodo: si se trata de pipetas de volumen fijo, se pipetea agua destilada en un recipiente de
peso conocido para controlar el volumen efectivamente librado. Se consigue una mayor
exactitud si la balanza utilizada para controlar el peso viene acompaada de una cmara de
pesaje que pueda saturarse con vapor de agua, que con frecuencia se libra como accesorio
con las balanzas electrnicas modernas. Las pipetas de volumen variable deben calibrarse al
menos en cuatro niveles: el nivel mximo, el nivel mnimo fijado por el encargado de las
pipetas automticas y dos o ms niveles intermedios, uno de los cuales debe ser inferior al
punto medio de la escala. Si una pipeta de volumen variable se utiliza nicamente para
dispensar un volumen fijo slo podr ser calibrada para ese volumen fijo. Los ajustes del
mecanismo de fijacin del volumen deben hacerse, en caso necesario, siguiendo las instruc-
ciones del fabricante.
Intervalo de calibracin: el ritmo de deterioro de la calibracin debe determinarse haciendo
controles frecuentes (diarios) del calibrado. El intervalo de las calibraciones podr alargarse
entonces para adaptarlo a las condiciones del laboratorio (normalmente el intervalo ser de
tres meses).
Aparatos de medicin del punto de fusin

Parmetro a calibrar: Exactitud del termmetro.
Mtodo: Los puntos de fusin de las sustancias de referencia se miden por lo menos dos
veces.
Intervalo de calibracin: Cada seis meses.
Medidores del pH
Parmetro a calibrar: Exactitud y linealidad del pH.
Mtodo: Los indicadores preparados comercialmente o los indicadores estndar (que pueden bus-
carse en cualquier farmacopea) han de utilizarse de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Intervalo de calibracin: Diariamente cuando est en uso.
Hornos y calefactores
Parmetro a calibrar: Temperatura.

Mtodo: El control se realiza con un pirmetro porttil o un termmetro de precisin, que
deben situarse lo ms cerca posible del sensor de temperatura del horno.
Intervalo de calibracin: Anualmente, y despus de cada reparacin que pueda influir en el
funcionamiento del horno/calefactor.
Baos de agua

Mtodo: Termmetro de precisin/de referencia.
Intervalo de calibracin:Trimestralmente, cuando se sustituya el termmetro del bao de agua
o cuando ste no haya sido utilizado durante un tiempo prolongado (semanas o meses).
Balanzas
Antes de su utilizacin, las balanzas deben ser comprobadas para asegurarse de que estn
limpias y equilibradas en la superficie en que se encuentren. Es fundamental que cada ao
haga una visita de mantenimiento un ingeniero calificado. Las balanzas utilizadas para realizar
mediciones fundamentales (es decir, cuando la suma de las incertidumbres que genere el
proceso de pesaje represente un factor importante de la exactitud del resultado final o, en
otros trminos, cuando puedan significar un 10% del error total) deben disponer como mnimo
de un certificado de calibracin. Estos certificados deben ser emitidos por un organismo
acreditado externo o por un personal de laboratorio adecuadamente capacitado. Los certifi-
cados deben ser renovados anualmente.
Parmetro a calibrar: exactitud.

Mtodo: Los pesos de referencia se utilizan de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
El usuario puede decidir, cuando as lo exijan los resultados requeridos, utilizar unos patrones
de peso con un nivel de exigencia mayor que los preparados por el fabricante. Una secuencia
tpica sera controlar el punto cero de la balanza con el platillo vaco y a continuacin poner en
ste el peso de referencia y ajustar la lectura para que refleje el valor correcto. Obsrvese que
los patrones de peso deben manejarse con gran cuidado utilizndose pinzas con las puntas lisas,
ya que las puntas rugosas pueden daarlos. Las balanzas electrnicas modernas frecuentemente
disponen de sistemas internos de calibracin del peso y el control se realiza de forma automtica
de acuerdo con una secuencia prefijada por el fabricante o, en su caso, por el usuario.
Intervalo de calibracin: Las microbalanzas utilizadas para preparar patrones de referencia
deben ser controladas diariamente o, si no se utilizan diariamente, cada vez que lo sean. Las
balanzas de mesa para reactivos y para medir pesos menos importantes pueden ser controladas
con menor frecuencia, por ejemplo, cada semana o mes, pero es importante comprobar la
rapidez con que se producen los desajustes a fin de determinar cul es el intervalo de cali-
bracin correcto. Tambin deben realizarse controles de la calibracin cada vez que se mueva
la balanza de sitio.
Refrigeradores y congeladores
Mtodo: Termmetro de precisin. La temperatura debe mantenerse dentro de una banda

mxima de 5 grados de la temperatura requerida.
Intervalo de calibracin: Continuamente.
Instrumentos para mtodos inmunolgicos

Existen muchos mtodos inmunolgicos distintos y la mayora depende de una comparacin
directa con un patrn de calibracin incluido en cada tanda de muestras a analizar. Tiene
especial importancia el umbral de concentracin del analito utilizado, por lo que el analista
debe conocer cul es el umbral de concentracin establecido por el fabricante del juego de
inmunoensayo que utilice. Los procedimientos de calibracin a seguir son los establecidos
por el fabricante.
Como excepcin notable a este procedimiento general cabe sealar los juegos de inmunoen-
sayo desechables (a veces denominados pruebas de palito), que a veces tienen mecanismos
de control interno, pero no siempre. En principio, deben reflejar un resultado positivo o
negativo si la concentracin del analito buscado es superior o inferior al umbral. Cabe
sealar que con frecuencia interviene un cierto grado de interpretacin por parte de quien
realiza la prueba y que, como siempre, un operador capacitado y con experiencia obtendr
resultados ms exactos y coherentes que otro con menos experiencia.
Espectrofotmetros de radiacin ultravioleta-visible

Parmetro a calibrar: Exactitud de la longitud de onda y repetibilidad, exactitud
fotomtrica.
Mtodo: La absorcin de las longitudes de onda de las radiaciones UV se controla con filtros
de holmio y didimio, que deben ser suministrados por el fabricante. La exactitud de la lon-
gitud de onda y la repetibilidad se controlan en toda la gama de radiacin UV-visible. Han
de obtenerse por lo menos dos espectros. La desviacin mxima ha de ser 1,0 nm.
Intervalo de calibracin: Anualmente.
Espectrmetros infrarrojos
Los procedimientos que se indican a continuacin afectan slo a los espectrmetros inde-
pendientes. Los instrumentos combinados, como los espectrmetros CFG/FT-IR se deben
calibrar de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Parmetro a calibrar: Resolucin.

Mtodo: Se comprueba la gama total del instrumento con una pelcula de poliestireno. Debe
diferenciarse el pico de absorcin de 3095 nm del de 3080 nm y la absorcin de 3020 nm
debe diferenciarse de la de 3015 nm.
Intervalo de calibracin: Trimestralmente.
Parmetro a calibrar: Exactitud de la longitud de onda.
Mtodo: Se escanea una pelcula de poliestireno y se controla la exactitud de los picos en

2852, 1602 y 1028 nm [18]. La exactitud debe ser de 3-5 nm en el rango 4000-2000 nm
y de 1,5-2,5 nm en el rango inferior a 2000 nm.
Intervalo de calibracin: Trimestralmente.
Cromatgrafos de gases
Entre las operaciones ordinarias de mantenimiento cabe mencionar los controles del septum,
el sistema de inyeccin, las presiones del gas y los filtros internos (por ejemplo, filtros de
oxgeno, impurezas, humedad e hidrocarburos), el nivel de la seal de base y el ruido de
fondo. Dependiendo del grado de utilizacin del instrumento, puede ser conveniente establecer
un programa de mantenimiento ordinario que suponga un cambio semanal del septum y el
mezclador del inyector (con mayor frecuencia si se analiza un gran nmero de muestras).
Parmetro a calibrar: Temperatura del horno.
Mtodo: Controlar con un pirmetro porttil de referencia o un termmetro de precisin, que

debe situarse lo ms cerca posible del sensor de temperatura del horno.
Parmetros a verificar: Calidad de la columna (eficiencia, resolucin, forma del pico, tiempos
de retencin).
Mtodo: Se analiza un grupo de estndares de uso ordinario. La precisin de los tiempos de

retencin puede medirse inyectando el estndar tres veces o ms. Tambin pueden medirse
las reas de los picos (vase ms adelante integradores). Es til dibujar un diagrama de
control de los parmetros, como tiempos/ndices de retencin.
Intervalo de la verificacin: Mensualmente.
Parmetros a verificar: Sensibilidad del detector, seal de base y ruido de fondo.
Mtodo: Se analiza un grupo de patrones de uso ordinario y se compara con resultados

anteriores.
Intervalo de verificacin: Mensualmente.

Parmetro a calibrar: Capacidad de lectura del detector de gases.
Mtodo: Se utiliza un medidor de flujos de pompas de jabn o un medidor electrnico cali-

brado de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Intervalo de calibracin: Cuando se limpie o repare el detector, o cuando se cambie la

columna analtica o se deteriore el funcionamiento. La dificultad de encendido de un detector
de ionizacin de llama indica muchas veces que la velocidad de flujo es incorrecta.
Cromatgrafos lquidos de alto rendimiento
Los trabajos ordinarios de mantenimiento de los sistemas de cromatografa de lquidos de

alto rendimiento (HPLC) incluye el recambio peridico de los filtros, internos y en lnea, y
de las columnas de almacenaje, lo que normalmente debe hacerse cuando la presin inversa
supera el lmite aceptable (es decir, se sita por encima del nivel mximo de presin dentro
de la columna). Si los mtodos se transfieren de un instrumento a otro puede ser necesario
comprobar la exactitud de algunos parmetros como la velocidad de flujo, la temperatura de
la columna y la composicin del eluyente, que influyen en los tiempos absolutos y relativos
de retencin.
Parmetro a calibrar: Exactitud del flujo.
Mtodo: Los efluyentes de la columna se recogen en una probeta o frasco volumtrico durante
el tiempo adecuado.
Intervalo de calibracin: La velocidad absoluta del flujo con frecuencia es menos importante
que su variacin durante una tanda de anlisis, pero debe ser controlada si se utiliza un
mtodo estndar, oficial o recomendado.
Parmetro a calibrar: Repetibilidad del flujo y precisin volumtrica del inyector.
Mtodo: Se inyecta tres veces, o ms, un grupo de estndares de uso ordinario y se mide la
precisin de los tiempos de retencin y las reas de los picos.
Intervalo de calibracin: Mensualmente, o bien diariamente si esta prueba est integrada en

un sistema de comprobacin diaria del buen estado de los aparatos.
Parmetro a calibrar: Coeficiente seal del detector/ruido.
Mtodo: Se analiza un grupo de estndares utilizados normalmente y se comparan los resul-

tados con los de anlisis anteriores. El ruido de base se mide en intervalos de 0,5 a 1 minutos
y se calcula el promedio. El ruido se calcula con un programa informtico (si lo suministra
el fabricante) o grficamente, definiendo dos lneas horizontales que abarquen todas las varia-
ciones observadas y midiendo la distancia vertical entre ellas. El nivel del ruido puede medirse
mientras fluyen los eluyentes y sin ese flujo, para definir as la contribucin del sistema de
alimentacin de eluyentes al ruido.
Intervalo de calibracin: Mensualmente.

Parmetro a calibrar: Exactitud del detector de longitudes de onda (detectores de UV-visible

y de fluorescencia).
Mtodo: La absorcin de las longitudes de onda UV se comprueba con un filtro de xido de

holmio, suministrado por el fabricante (y rastreable hasta el patrn primario) que tiene un
mximo de absorcin de longitud de onda de 361 nm que es caracterstico. La exactitud de
la longitud de onda y la reproducibilidad se controlan en todo el rango de radiacin UV-visible.
La desviacin mxima (admisible) es de 1,0 nm. La emisin de longitudes de onda de la
fluorescencia normalmente se controla utilizando un patrn, por ejemplo, sulfato de quinina,
que tiene unos picos de excitacin de 255 y 355 nm y un pico de emisin de 455 nm.
Espectrmetros de masas
Los espectrmetros de masas se regulan y calibran de forma semejante tanto si son un ins-
trumento independiente o estn combinados con interfaces cromatogrficas (GC-MS y LC-MS
y sus derivaciones con mltiples sectores). Existen diferencias entre los instrumentos cua-
drupolares y los de sector magntico, en especial si estos ltimos son capaces de ofrecer una
alta resolucin. La mayora de los instrumentos de laboratorio de este tipo estn controlados
directamente por un sistema informtico y la regulacin y calibracin se realizan automti-
camente. El sistema informtico genera un mensaje de advertencia cuando el instrumento
deja de cumplir los requisitos de funcionamiento prefijados, y muchas veces ordena directa-
mente una intervencin del operador, por ejemplo, limpiar la fuente.
Parmetros a calibrar: Regulacin de la fuente y calibracin de las masas.
Mtodo: Se introduce en el espectrmetro un compuesto de calibracin, como el perfluoroke-

roseno (PFK) o la heptacosafluoroperbutilamina (perfluoroperbutila-mina) por la rendija
correspondiente. La fuente se regula por medio de una seleccin de fragmentos de iones para
obtener una sensibilidad y un rea de los picos ptimas, y obtener unas relaciones masa/
carga de los picos (por ejemplo, m/z 69, 219 y 264, y 502, en el espectro de la perfluoro-
perbutilamina), que normalmente vienen determinados por el fabricante. Los espectros se
almacenan y comparan con el espectro de referencia en lo que respecta a la asignacin de
masas y la intensidad relativa de los picos.
Intervalo de calibracin: Diariamente o inmediatamente antes de su utilizacin.
Integradores cromatogrficos y sistemas de datos
La validacin de los sistemas y los programas informticos es un trmite de especial impor-

tancia que debe estar a cargo del fabricante. Sin embargo, sigue siendo responsabilidad del
usuario asegurarse de que los programas informticos han sido validados. La validacin
formal de los programas informticos puede ser realizada por el proveedor en nombre del
usuario, pero este ltimo deber ensayarlos para que se produzca la aceptacin formal. El
ensayo permite establecer si se satisfacen los criterios establecidos para los programas infor-
mticos. Los fabricantes incluyen actualmente de forma rutinaria en sus productos funciones
de prueba y diagnstico para validar los sistemas.
Parmetro a calibrar: Exactitud de las reas integradas de los picos.
Mtodo: O bien se utiliza la funcin de prueba integrada en el cromatgrafo o bien se realiza

un anlisis de un patrn ordinario y se compara con anlisis anteriores.
Intervalo de calibracin: Las comprobaciones ordinarias se realizan por lo general diaria-

mente. Las pruebas de funcionamiento del material informtico pueden realizarse a intervalos
ms amplios, por ejemplo, mensualmente.
4.Modelo de procedimiento
normalizado de trabajo para la
validacin de un nuevo mtodo
analtico
Para validar un mtodo se necesita un procedimiento normalizado de trabajo que est redac-
tado con claridad. Se han publicado varios ejemplos de procedimientos normalizados de
trabajo para mtodos cromatogrficos [19]. El modelo que figura a continuacin no es apli-
cable universalmente ya que no es posible preparar un solo protocolo o procedimiento nor-
malizado de trabajo que abarque todas las situaciones. Las directrices que a continuacin se
ofrecen abarcan las situaciones ms comunes.
Nombre del laboratorio Revisin Pgina

1/x
Autor Responsable Responsable de Revisin anterior Fecha

del examen la aprobacin
Archivo Cdigo
Ttulo del procedimiento normalizado de trabajo
Por ejemplo, validacin de mtodos de cromatografa en fase gaseosa.
Objetivo del procedimiento normalizado de trabajo
En esta seccin debe consignarse una breve descripcin del mtodo a validar, con inclusin
de la planificacin, el funcionamiento y la documentacin que correspondan.
Realizacin de la validacin
Indquense detalladamente las medidas previstas para determinar el cumplimiento de los

parmetros de la validacin.
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Puede adoptar la forma de un plan de trabajo, un cuadro, etc., como el siguiente:
50
Tanda Linealidad, exactitud

0 36 a 48 muestras (6 niveles de concentracin, 6-8 anlisis de rplicas en cada nivel, y adems 20 especmenes
Total 36-48
Este cuadro corresponde a un estudio previo a la validacin para determinar la utilidad del mtodo.
Muestras de validacin
Lmite inferior Lmite superior
Patrones de de de
Tanda calibracin cuantificacin Nivel intermedio cuantificacin
6 niveles + 1 Exactitud Exactitud Recuperacin Estabilidad Exactitud Selectividad Muestras
blanco totales
1 6-8 rplicas 3 3 3 12 27-29
2 6-8 rplicas 3 3 12 3 27-29
3 6-8 rplicas 3 3 8 3 23-25
4 6-8 rplicas 3 3 3 15-17
5 6-8 rplicas 3 3 3 15-17
Total 139-175 muestras
Modelo de procedimiento normalizado de trabajo para la validacin de un nuevo mtodo analtico 51
Clculo de los resultados e interpretacin
Describir los procedimientos para calcular el cumplimiento de los parmetros a partir de

los resultados de los experimentos y de los criterios de aceptacin Vase el prrafo 2.9.
de este manual.
Informacin de los resultados
Informar sobre los resultados de la validacin. Debe describirse el mtodo, deben documen-
tarse los resultados de cada parmetro de validacin y deben extraerse conclusiones acerca
de si el mtodo permite cumplir los objetivos.
Archivo de los datos del estudio de validacin
El informe de la validacin (firmado, fechado y autorizado) debe ser conservado, junto con
el plan de validacin y todos los datos experimentales, en un almacn seguro, y ser fcilmente
recuperables.
Referencias
Se trata de las referencias propias de este procedimiento normalizado de trabajo, por

ejemplo, las referencias tericas del mtodo de validacin.
Referencias
1. Publicaciones de la UNODC: Brochure on the International Quality Assurance Programme
y Protocolo de los ejercicios internacionales de colaboracin. Pueden descargarse en ingls en
el sitio web de la UNODC: http://www.unodc.org/unodc/en/scientists/publications.html.
2. D.R. Jenke, Chromatographic Method Validation: A review of Current Practices and

Procedures. I. General Concepts and Guidelines, J. Liq. Chrom. & Rel. Technol., vol. 19
(1996), pgs. 719 a 736.
3. Oficina de las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito, Orientaciones para la

implantacin de un sistema de gestin de la calidad en los laboratorios de anlisis de drogas,
ST/NAR/37, 2009.
4. General criteria of competence for calibration and testing laboratories, UKAS, Tedding-
ton, Reino Unido.
5. Scientific Working Group for the Analysis of Seized Drugs, Scientific Working Group
for the Analysis of Seized Drugs (SWGDRUG) Recommendations, 2008.
6. Organizacin Internacional de Normalizacin/Comisin Electrotcnica Internacional,

ISO/IEC 17025:2005 General Requirements for Competence of Testing and Calibration
Laboratories.
7. E. Prichard (ed.), Trace Analysis: A structural approach to obtaining reliable results.

(Royal Society of Chemistry, Cambridge, 1996), pgs. 32 a 39.
8. Eurachem/Cooperation on International Traceability in Analytical Chemistry (CITAC),

EURACHEM/CITAC Guide: Expression of uncertainty in qualitative testing, 2003.

EURACHEM/CITAC Guide: Measurement uncertainty arising from sampling: a guide to
methods and approaches, 2007.

EURACHEM/CITAC Guide CG4: Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement, 2nd
Edition, 2000.
11. SWGDRUG, Quality Assurance/General Practices Recommendations, 2008.
12. A.G. Rowley, Evaluating Uncertainty for Laboratories, A Practical Handbook (versin
1.1, 2001).
53

EURACHEM/CITAC Guide: Guide to Quality in Analytical Chemistry, 2002.
14. L. Huber, Good Laboratory Practice: A primer for HPLC, CE and UV-visible spectros-
copy (Hewlett-Packard Co., publicacin nm. 12-5091-6259E, 1993).
15. Organizacin Internacional de Normalizacin, ISO 9000:2000 Quality management sys-

tems Fundamentals and vocabulary.
16. Organizacin Internacional de Normalizacin, ISO 9001:2008. Quality management

systems Requirements.
17. Organizacin Internacional de Normalizacin/Comisin Electrotcnica Internacional

ISO/IEC 17025:2005 General Requirements for Competence of Testing and Calibration Labo-
ratories, prrafos 5.5 y 5.6.
18. Organizacin Mundial de la Salud, Farmacopea internacional, tercera edicin.

Volumen 1: Mtodos generales de anlisis.
19. David M. Bliesner, Validating Chromatographic Methods, (John Wiley & Sons, 2006,
pg. 72).
Puede obtenerse ms informacin sobre los documentos de referencia en las siguientes direc-
ciones (al 16 de junio de 2009):
UNODC http://www.unodc.org/
SWGDRUG http://www.swgdrug.org/
ISO http://www.iso.org/iso/home.htm
EURACHEM http://www.eurachem.org/
ANEXOGlosario de trminos utilizados
en el manual de validacin y
calibracin
Las definiciones estn tomadas del Glosario de la UNODC (ST/NAR/26) al que se han aadido
trminos o definiciones (sealadas con un asterisco). Si no se encuentran al final, las referencias
de las fuentes de las definiciones pueden encontrarse en el Glosario antes citado.
anlisis replicado: Realizacin de mltiples anlisis de distintas partes de un material de

ensayo utilizando el mismo mtodo en las mismas condiciones, por ejemplo, el mismo ope-
rador, los mismos aparatos, el mismo laboratorio.
analito (o analito buscado): Sustancia que debe identificarse o medirse.
analito sustitutivo: Sustancia bien caracterizada que se toma como representativa del
analito [3].
bondad de ajuste: Grado en que un modelo, una distribucin terica o una ecuacin se
ajusta a los datos reales.
calibracin: Serie de operaciones que sirven para determinar, en condiciones especificadas,

la relacin existente entre los valores indicados por un instrumento o un sistema de medicin,
o los valores de una medida real, y los valores conocidos del mensurando.
calibrador: Analito puro en un disolvente o matriz apropiado que se utiliza para preparar la
curva de calibracin. Los calibradores tienen una composicin semejante a los controles de
calidad pero se han de preparar de forma independiente, ya que los segundos se utilizan para
comprobar la exactitud de la curva de calibracin.
calificacin del funcionamiento*: Vase verificacin del funcionamiento.
caractersticas de funcionamiento*: Aspectos fundamentales de un mtodo analtico que se

evalan a los efectos de desarrollarlo y validarlo, entre ellos, exactitud (sesgo), linealidad,
lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, rango, recuperacin, repetibilidad, reproducibi-
lidad, robustez y especificidad (selectividad).
certificacin: Procedimiento por el que un organismo de certificacin reconoce oficialmente

que un organismo, persona o producto cumple determinadas especificaciones.
certificado de mtodo autorizado*: Documento que certifica que un mtodo analtico ha

sido validado para sus fines previstos en el laboratorio y ha sido autorizado a tal fin por el
director del mismo, quien deber firmar el certificado.
55
cocromatografa*: Procedimiento que consiste en dividir la solucin purificada que ser

analizada antes de realizar la cromatografa en dos partes y:
- una de ellas es cromatografiada directamente;
- la otra parte es aadida con el analito que ha de ser identificado en una cantidad
conocida y esta mezcla de la solucin a analizar y el analito se cromatografan. La
cantidad de analito ha de ser similar a la cantidad estimada de analito en la solucin
analizada [5].
coeficiente de correlacin: Nmero que indica el grado de relacin recproca de dos varia-
bles. Los coeficientes de correlacin varan entre 0 (sin correlacin) y -1 o +1 (correlacin
perfecta).
coeficiente de variacin (o desviacin estndar relativa): Medida utilizada para com-
parar la dispersin o variacin en grupos de mediciones. Es el cociente entre la desviacin
estndar y la media, multiplicada por 100 para expresarla en porcentaje del promedio.
comparaciones de ensayos entre laboratorios (comparaciones de ensayos interlaborato-

rios): Vase estudios en colaboracin.
concentracin: Cantidad de una sustancia, expresada en unidades de masa o molares, que

hay en una unidad de volumen de fluido.
concentracin crtica (o umbral): Concentracin de una droga en un espcimen que
se utiliza para determinar si se debe considerar ese espcimen positivo o negativo. En
algunas circunstancias se recomienda que la concentracin crtica sea igual al lmite de
deteccin. Vase umbral.
contaminacin*: Aumento del analito en el proceso de extraccin, en lugar de producirse

las prdidas que normalmente se registran cuando se estima la recuperacin.
control de calidad: Sistema general de procedimientos y procesos de laboratorio encamina-

dos a controlar la calidad de los resultados analticos de un laboratorio.
controles: Especmenes utilizados para determinar la validez de la curva de calibracin, es

decir, la linealidad y estabilidad de un ensayo cuantitativo o de una determinacin cuantitativa
a lo largo del tiempo. Los controles se preparan a partir de material de referencia (separa-
damente de los calibradores, es decir, se pesan o miden por separado), que se adquiere o se
obtiene de una reserva de especmenes o muestras anteriormente analizados. Siempre que
sea posible, los controles debern prepararse en las mismas matrices que los especmenes o
muestras y que los calibradores.
correccin de la recuperacin*: La recuperacin de analitos frecuentemente es inferior al

100%. Si no se hace una adicin estndar (que compensa automticamente la recuperacin
incompleta) los resultados del anlisis han de ser multiplicados por un factor de correccin
con objeto de obtener los valores que se hubieran registrado si la recuperacin fuera del 100%.
Esto implica que la recuperacin del mtodo sea conocida, lo que ser cierto si el mtodo ha
sido validado ya que la recuperacin es una de las caractersticas funcionales que se mide.
criterios de aceptacin: Condiciones que han de cumplirse para que una operacin, proceso
o artculo, como un componente del equipo, se considere satisfactorio o que se ha completado
de forma satisfactoria. A continuacin se ofrecen ejemplos concretos.
Anexo 57
criterios de aceptacin (para programas informticos)*: Criterios que ha de cumplir

un producto informtico para completar con xito la fase de prueba o satisfacer los
requisitos de la entrega.
criterios de aceptacin de especmenes o muestras: Procedimientos para aceptar o
rechazar los especmenes recibidos en el laboratorio de anlisis. Esos procedimientos se
centran en la evaluacin de la idoneidad de la cadena de custodia.
curva de calibracin: Relacin existente entre la respuesta de seales del instrumento y

diversas concentraciones del analito en un disolvente o matriz apropiado.
desviacin estndar (o tpica): Dato estadstico que muestra la extensin o dispersin de

las puntuaciones en una distribucin de stas. Se calcula determinando la raz cuadrada de
la varianza. Se aplica a toda clase de mediciones repetidas, por ejemplo, entre lotes, dentro
de un mismo lote, en la repetibilidad y en la reproducibilidad.
diagrama de control: Grfico de los resultados de ensayos con respecto a un perodo de tiempo
o a una secuencia de mediciones en el que se trazan los lmites dentro de los cuales se prev
que estarn los resultados si el plan analtico est en un estado de control estadstico [6].
director de laboratorio*: Persona calificada que asume la responsabilidad profesional, orga-

nizativa, educativa y administrativa de los anlisis de drogas del laboratorio.
distribucin de probabilidad terica: El nmero de veces que cabe esperar obtener un

nmero determinado de aciertos en un gran nmero de ensayos. Distribuciones de probabi-
lidad terica importantes son la normal, la t, la de x2 y la F.
efecto de matriz*: Alteracin o interferencia directa o indirecta en la respuesta de un ins-

trumento, como un espectrmetro LC-MS/MS, debida a la presencia de analitos no buscados
(en el anlisis) o de otras sustancias interferentes en las muestras.
ensayo (o prueba): Operacin tcnica que consiste en determinar una o ms caractersticas

o comportamientos de un producto, material, equipo, organismo, fenmeno fsico, proceso o
servicio dado, de conformidad con un procedimiento especificado.
equipo*: En general, los aparatos necesarios para una operacin [7] Ms en concreto, el
equipo fsico necesario para realizar una medicin analtica, por ejemplo, un cromatgrafo
en fase gaseosa.
error: Accin considerada incorrecta o equivocada.

error aleatorio: Componente del error total de una medicin que vara de forma impre-
decible. Ello hace que los distintos resultados queden a ambos lados del valor
promedio.
error sistemtico: Componente del error total de una medicin que vara de forma
constante. Ello hace que todos los resultados sean errneos en el mismo sentido.
error total: Suma de errores aleatorios y sistemticos.
especificacin: Exposicin de requisitos, normalmente por escrito.

especificidad:
a) Vase selectividad.
b) Porcentaje de resultados negativos acertados que se obtiene cuando se analizan
muestras que se sabe que no contienen el analito.
c) Capacidad de un mtodo para medir nicamente lo que se aade a las muestras. Por
especificidad se entiende la capacidad de identificar inequvocamente el analito en presencia de
otros previsibles componentes. Normalmente se tratar de impurezas, degradantes, matriz, etc.
espcimen: Todo material sometido a examen, estudio o anlisis.
estabilidad (de una muestra durante el anlisis): Resistencia a la descomposicin o a otros

cambios qumicos, o a la desintegracin fsica.
estndar (patrn) de referencia: Estndar, generalmente de la mejor calidad disponible en

un determinado lugar, del que se derivan las mediciones hechas en ese lugar.
estndar (patrn) del analito*: Sustancia claramente definida en su mayor nivel de
pureza disponible que se utiliza como referencia en el anlisis.
estndar (patrn) interno: Adicin de una cantidad fija de una sustancia conocida que
no se encuentra presente como constitutiva del espcimen, a fin de identificar o cuantificar
otros componentes. Las caractersticas fisicoqumicas del estndar interno deben aproxi-
marse lo ms posible a las del analito. Compuesto de laboratorio (por ejemplo, un
compuesto anlogo de estructura similar y estable) que se aade a los patrones de cali-
bracin y las muestras con una concentracin conocida y constante para facilitar la
cuantificacin del analito buscado.
estndar (patrn) nacional*: Estndar o patrn reconocido mediante una decisin
nacional oficial como base para fijar el valor, en un pas, de todos los dems estndares
o patrones de la cantidad de que se trate.
estndar (patrn) primario*: Estndar o patrn que tiene las mejores calidades metro-
lgicas en un campo determinado.
estndar (patrn) rastreable*: Estndar o patrn de referencia que tiene tambin la
propiedad de ser rastreable. Normalmente tendr un certificado de anlisis que ofrecer
informacin detallada sobre los estndares nacionales o internacionales utilizados para
determinar su composicin.
estudio de la interferencia*: Estudio realizado para comprobar la selectividad (o especifi-

cidad) de un mtodo, que se realiza aadiendo materiales que podran encontrarse en los
especmenes y que se sospecha que estn causando interferencias.
estudios en colaboracin (o comparaciones de ensayos entre laboratorios): Organizacin,

realizacin y evaluacin de ensayos de elementos o materiales idnticos o similares por dos
o ms laboratorios diferentes segn condiciones predeterminadas. Su finalidad principal es
la convalidacin de mtodos analticos o la formulacin de mtodos de referencia.
exactitud (sesgo, veracidad): Capacidad para obtener un resultado verdadero [1]. En los
ensayos cuantitativos, la exactitud expresa el grado de acuerdo entre el valor verdadero y el
Anexo 59
valor obtenido despus de repetir el ensayo cierto nmero de veces. La exactitud se ve

afectada por los errores sistemticos y los errores aleatorios.
exactitud (de un instrumento de medicin):

Capacidad de un instrumento de medicin de dar respuestas prximas al valor
verdadero.
Nota: en este contexto la exactitud es un concepto cualitativo [2].
falso negativo: Resultado de un ensayo que indica que no hay droga ni metabolito presentes
cuando, en realidad, esa droga o metabolito est presente en cantidad superior al umbral o
concentracin crtica designada.
fiabilidad: Grado en que un experimento, ensayo o procedimiento de medicin arroja resul-

tados exactos en ensayos repetidos.
garanta de calidad: Todas las actividades planificadas y sistemticas que se llevan a cabo
en el marco de un sistema de garanta de la calidad a fin de garantizar adecuadamente que
un laboratorio cumplir los requisitos de calidad. Parte de la gestin de la calidad se centra
en garantizar que se cumplirn los requisitos de calidad.
grado de confianza (o coeficiente de confianza): Medida de probabilidad relacionada con

un intervalo de confianza, que expresa la probabilidad de la verdad de una afirmacin en el
sentido de que el intervalo incluir el valor del parmetro.
incertidumbre: Parmetro asociado con el resultado de una medicin que caracteriza la

dispersin de los valores que puede atribuirse razonablemente al analito.
Estimacin que acompaa a los resultados de un anlisis y que define el rango de valores
en el que se afirma que se sita el valor verdadero.
instrumento (instrumentacin, aparato de medicin)*: Dispositivo para hacer una medi-

cin, por s solo o en combinacin con otro equipo.
intervalo de calibracin*: Frecuencia con que se comprueba el funcionamiento especfico

de cada instrumento o componente del equipo segn el programa de mantenimiento preventivo
de laboratorio.
intervalo de confianza: Serie de valores que comprende el valor verdadero con un
determinado grado de probabilidad. Este grado de probabilidad se llama grado de
confianza.
laboratorio: Instalaciones donde se realizan anlisis a cargo de personal calificado con equipo
adecuado.
lmite de cuantificacin/lmite inferior de cuantificacin: El menor contenido mensurable

que permite cuantificar el analito con un grado razonable de exactitud y precisin. En algunos
laboratorios, el lmite inferior de cuantificacin se considera equivalente a la concentracin
mnima de calibracin del rango de trabajo, ya que la exactitud y precisin de esta concen-
tracin se verifica en todos los lotes/tandas de anlisis.
El contenido igual o superior al punto de concentracin mnima en la curva de calibracin.

lmite de deteccin: El menor contenido mensurable del que se puede deducir la presencia
del analito, con un grado razonable de certeza estadstica. La menor concentracin de un
analito que el mtodo de anlisis puede diferenciar con fiabilidad del ruido de fondo.
El menor contenido que puede medirse con una certeza estadstica razonable.
lmite superior de cuantificacin: El mayor contenido de analito de una muestra que
puede definirse cuantitativamente con precisin y exactitud.
linealidad: La linealidad de un mtodo analtico designa su capacidad de obtener resultados

de laboratorio que son proporcionales directamente, o por medio de un clculo matemtico
bien definido, con la concentracin de analitos en las muestras de un determinado rango.
(Vase tambin regresin lineal.)
La linealidad define la capacidad del mtodo de obtener resultados analticos proporcionales

a la concentracin del analito.
lote (o tanda de anlisis): Grupo compuesto por una o ms muestras que se analizan en
condiciones prximas a la repetibilidad. Normalmente debe contener calibradores y muestras
de control de calidad adems de las muestras que han de analizarse.
lote (o tanda de anlisis)*: Serie completa de muestras analticas con un nmero ade-
cuado de patrones y muestras de control de la calidad para su validacin. En un da
pueden completarse varias tandas (o lotes) de anlisis o bien el anlisis de un lote (o
tanda) puede llevar varios das.
manual de prcticas de calidad: Documento en que se indican las polticas, los procedi-
mientos y las prcticas de calidad generales de una organizacin [10]. Documento en que se
especifica el sistema de gestin de la calidad de una organizacin.
material de referencia certificado (MRC): Material de referencia del cual se han certificado
por un procedimiento tcnico una o ms propiedades, que va acompaado de un certificado
o de otra documentacin expedido(a) por un organismo de certificacin relacionado(a) con
esa documentacin.
matriz: Material que contiene el analito, por ejemplo, orina o sangre.

matriz biolgica*: Material discreto de origen biolgico del que pueden extraerse mues-
tras que pueden ser procesadas de forma reproducible. Como ejemplo cabe citar la sangre,
el suero, el plasma, la orina, las heces, la saliva, los esputos y varios tejidos discretos.
media: Si no se especifica otra cosa, designa la media aritmtica.

media aritmtica o promedio: Suma de los distintos valores de una serie, dividida por
el nmero de valores.
medicin*: Conjunto de operaciones que tienen por objeto determinar el valor de una
cantidad.
mtodo (o mtodo analtico): Procedimiento detallado (definido) para realizar un anlisis.

mtodo postulado*: Mtodo analtico que ha sido seleccionado y desarrollado para
Anexo 61
resolver un determinado problema analtico y que ha de ser validado para demostrar que
puede cumplir el objetivo analtico previsto antes de ser utilizado.
mtodo de referencia: Mtodo desarrollado por organizaciones o grupos que recurren
a los estudios en colaboracin o a modalidades anlogas para su convalidacin. Su valor
depende de la autoridad de las organizaciones que lo propugnan.
muestra aadida: Material de ensayo que contiene una adicin conocida de analito.
muestra en blanco: Espcimen o muestra que no contiene el analito.
negativo: Indica que el analito est ausente o por debajo de una concentracin crtica. Si bien
a veces se utiliza no detectado como sinnimo de negativo, no se recomienda este uso.
organismo de certificacin: Organizacin independiente de carcter cientfico con facultades

para expedir certificaciones. El organismo de certificacin puede estar acreditado, o no.
organizacin: Empresa, sociedad o instituto (o una parte de ellos, por ejemplo, un labora-
torio), privado o pblico, con funciones y administracin propias. Entre las organizaciones
internacionales que se ocupan del anlisis qumico se encuentran las siguientes: Asociacin
Internacional de Toxiclogos Forenses (AITF), Comit Olmpico Internacional (COI), Fede-
racin Internacional de Qumica Clnica (FIQC), Organizacin de Cooperacin y Desarrollo
Econmicos (OCDE), Organizacin Internacional de Normalizacin (ISO), Programa Inter-
nacional de Proteccin frente a los Productos Qumicos (PIPPQ) y Unin Internacional de
Qumica Pura y Aplicada (UIQPA).
patrn externo*: Patrn preparado directamente con una sustancia de referencia, por ejem-
plo, como solucin madre o como serie de diluciones de la solucin madre. No se prepara
con el mismo tipo de matriz de los especmenes o muestras que se analizarn y por consi-
guiente no es necesaria una extraccin antes del anlisis.
patrn de calibracin*: Matriz biolgica a la que se ha aadido una cantidad conocida
del analito. Los patrones de calibracin se utilizan para calcular curvas de calibracin a
travs de las cuales se determina la concentracin de analitos en las muestras de control
de calidad y en las muestras con una cantidad del analito desconocida.
patrn internacional*: Patrn reconocido por un acuerdo internacional como base para
fijar el valor de todos los dems patrones de la cantidad de que se trate.
positivo: Indica la presencia del analito en grado superior a una concentracin crtica
designada.
practicabilidad*: Capacidad de poner algo en prctica. En el laboratorio, significa la ausencia

de equipo, reactivos, instrumentos o condiciones ambientales que sean innecesariamente com-
plicados, lo que permite utilizar un mtodo de forma habitual [9].
precisin: Grado de acuerdo (o desacuerdo) entre los resultados independientes de ensayos

obtenidos en condiciones prescritas. Por lo general depende de la concentracin del analito,
dependencia que debe determinarse y documentarse. La precisin se expresa normalmente
como imprecisin y se calcula como desviacin estndar de los resultados de los ensayos.
Una mayor imprecisin se traduce en una desviacin estndar tambin mayor. Por resultado
independiente se entiende el obtenido sin que medie influencia alguna de otros resultados
anteriores obtenidos con un material idntico o anlogo. La precisin comprende la repeti-

bilidad y la reproducibilidad.
Medida de la reproducibilidad de mediciones de un conjunto, es decir, de la dispersin de
un conjunto en torno a su valor central.
precisin (intermedia)*: Precisin medida en condiciones intermedias a las de repeti-
bilidad y reproducibilidad: por ejemplo, precisin medida por diferentes analistas, a lo
largo de un plazo prolongado, dentro de un solo laboratorio.
Expresa la variacin dentro de un laboratorio: diferentes das, diferentes analistas, dife-
rente equipo, etc.
probabilidad: Medicin matemtica de la verosimilitud de que algo ocurra, expresada en

una fraccin o un porcentaje. Los valores de probabilidad estadstica varan entre 1 100%
(siempre) y 0 0% (nunca). La frecuencia relativa obtenida despus de una larga serie de
mediciones o resultados dar aproximaciones adecuadas de la verdadera probabilidad. Tam-
bin se entiende de otras maneras: como expresin, en cierta forma indefinible, de un grado
de creencia, o como la frecuencia lmite de una ocurrencia en una serie aleatoria infinita.
procedimiento: Forma especificada de realizar una actividad. A efectos de la garanta de

calidad, los procedimientos deben consignarse por escrito.
Forma establecida de realizar una actividad o proceso.
procedimientos normalizados de trabajo: Procedimientos consignados por escrito en
los que se describe cmo realizar ciertas actividades de laboratorio.
promedio: Vase media aritmtica.
prueba de la conveniencia del sistema*: Validacin de un sistema analtico. Se hace una

prueba para comprobar el funcionamiento del sistema y si un determinado mtodo analtico
cumple las especificaciones de funcionamiento que constan en la documentacin [12].
prueba de la robustez*: Programa experimental entre laboratorios que se pone en
prctica antes de un estudio entre laboratorios, con el fin de examinar el comportamiento
de un proceso analtico cuando se introducen pequeos cambios en las condiciones
ambientales y/o de trabajo, similares a los que pueden producirse en los distintos
laboratorios.
rango (rango de trabajo, rango de calibracin): Intervalo de concentraciones en el que

puede lograrse una exactitud y una precisin aceptables. Estadsticamente, es la diferencia
entre los valores mnimo y mximo de un conjunto de mediciones.
rango de cuantificacin (cuantificacin)*: El rango de concentraciones, incluidos los
lmites inferior y superior de cuantificacin, que pueden ser cuantificadas de forma fiable
y reproducible, y con exactitud y precisin, a travs de la relacin entre la concentracin
y la respuesta (vase tambin rango).
rastreabilidad: Capacidad de rastrear la historia, aplicacin o ubicacin de una entidad por

medio de los registros o actas en que se haya consignado. Propiedad de un mtodo cuyas
mediciones arrojan resultados que pueden relacionarse, con un grado determinado de incer-
tidumbre, con una determinada referencia, por lo general un estndar nacional o internacional,
Anexo 63
mediante una cadena ininterrumpida de comparaciones.

Propiedad de los resultados de una medicin o del valor de un estndar que permite relacio-
narlos, con un grado determinado de incertidumbre, con una determinada referencia, por lo
general un estndar nacional o internacional (es decir, mediante una cadena ininterrumpida
de comparaciones).
Capacidad de rastrear la historia, aplicacin o ubicacin de lo que se est considerando.
recuperacin: Porcentaje de droga, metabolito o estndar interno presente inicialmente en

el espcimen y que llega hasta el final del procedimiento.
Trmino utilizado en qumica analtica y de preparaciones para designar la fraccin de la
cantidad total de una sustancia que se recupera despus de un proceso qumico. Se mide
aadiendo una cantidad conocida de analito en una matriz en blanco y comparando el resul-
tado con la cantidad realmente reflejada en el anlisis.
regresin lineal: Mtodo de describir la relacin entre dos o ms variables mediante el

clculo de la lnea recta o las coordenadas de ajuste ptimo.
repetibilidad: Grado de acuerdo entre los resultados de mediciones sucesivas de un mismo

analito realizadas en condiciones repetibles, por ejemplo, el mismo mtodo, el mismo mate-
rial, el mismo operador, el mismo laboratorio, y en un perodo de tiempo breve. Los resultados
deben expresarse en trminos de desviacin estndar de la repetibilidad, coeficiente de varia-
cin de la repetibilidad o intervalo de confianza del valor medio.
Grado de acuerdo entre los resultados de mediciones sucesivas del mismo mensurando rea-
lizadas en las mismas condiciones de medicin.
reproducibilidad (en laboratorio): Grado de acuerdo entre los resultados de mediciones

sucesivas del mismo analito de un material idntico realizadas utilizando el mismo mtodo
en condiciones diferentes, por ejemplo, operadores diferentes, laboratorios diferentes y en el
curso de un perodo de tiempo largo. Los resultados deben expresarse en trminos de des-
viacin estndar de la reproducibilidad, coeficiente de variacin de la reproducibilidad o
intervalo de confianza del valor medio. Designa tambin la precisin del mtodo en las
mismas condiciones de trabajo en un perodo corto de tiempo.
Grado de acuerdo entre los resultados de mediciones del mismo mensurando realizadas en
condiciones de medicin distintas.
resultado (o decisin final)*: Etapa final de la secuencia prevista por un mtodo analtico,
que normalmente supone aplicar una tcnica a un extracto o preparacin a fin de obtener
datos sobre la composicin de la muestra.
robustez*: Capacidad de un mtodo para no verse afectado por pequeas variaciones deli-
beradas de sus principales parmetros.
La robustez de un procedimiento analtico mide su capacidad para no verse afectado por
pequeas variaciones deliberadas de los parmetros del mtodo y sirve de indicio de su
fiabilidad en su uso normal.
Tambin: capacidad de un proceso de medicin para soportar pequeas variaciones incontro-
ladas o involuntarias en sus condiciones de funcionamiento.
La robustez de un mtodo analtico mide el grado de reproducibilidad de los resultados
analticos obtenidos de las mismas muestras en diversas condiciones, por ejemplo, diferentes
laboratorios, analistas, instrumentos, lotes de reactivos, tiempos de ensayo, temperaturas o
das. La robustez normalmente refleja la no influencia en los resultados analticos de las
variables que representan los mtodos y ambientes de trabajo y que influyen en el mtodo
analtico. La robustez mide la reproducibilidad de los resultados analticos a pesar de la
variacin normal de las condiciones entre un laboratorio y otro, y un analista y otro.
selectividad (o especificidad): Designa el grado en que un mtodo permite determinar la

presencia de un analito o analitos concretos en una mezcla compleja sin interferencia de los
dems componentes de esa mezcla. El mtodo perfectamente selectivo para un analito o
grupo de analitos se denomina especfico. En laboratorio, el trmino especfico designa el
mximo de selectividad.
cualitativa: Grado en que otras sustancias interfieren en la identificacin de una sustancia

por medio de un determinado procedimiento; cuantitativa: este adjetivo se utiliza con un
sustantivo (por ejemplo, coeficiente constante, ndice, factor, nmero) para definir cuantitati-
vamente las interferencias.
sensibilidad: a) Diferencia en la concentracin del analito que corresponde a la menor dife-

rencia de respuesta del mtodo susceptible de ser detectada. Est representada por la pendiente
de la curva de calibracin. Tambin equivale a tres veces el promedio del ruido de fondo de
muestras en blanco del mximo de fuentes distintas posible (cinco como mnimo, pero lo
ideal seran 20). A veces se emplea errneamente con el significado de lmite de deteccin.
b) Porcentaje de resultados positivos acertados cuando se analizan muestras que se
sabe que contienen el analito [11].
c) Evaluacin de la respuesta de un instrumento de medicin en funcin de la evolucin
del estmulo.
sistema analtico (sistema de medicin)*: Conjunto completo de instrumentos de medicin,

y otro equipo, ensamblados para realizar una medicin concreta [4]. En el contexto del anlisis
de drogas fiscalizadas en materiales incautados o especmenes biolgicos, el sistema analtico
est formado por balanzas de laboratorio, medidores de pH, cromatgrafos, equipo de croma-
tografa en capa delgada, etc., que utiliza el analista para desempear sus funciones.
tcnica*: Una tcnica es un principio cientfico, por ejemplo, la cromatografa en fase gaseosa
o la espectrometra ultravioleta, que se puede utilizar para obtener datos sobre la composicin
de un material. No es frecuente aplicar directamente una tcnica a una muestra, ya que
muchas veces es necesaria una extraccin u otra operacin. Por tanto, una tcnica se utiliza
en la ltima etapa de un mtodo analtico que normalmente es la de decisin final.
umbral: Cantidad, nivel o lmite particular y significativo a partir del cual algo comienza a
ocurrir o a producir efectos. Vase concentracin crtica.
validacin (validacin de mtodos)*: Confirmacin, mediante el examen y la aportacin de

pruebas objetivas, de que se cumplen todos los requisitos particulares del uso especfico al
que se pretende destinar el mtodo [8]. La Pharmacopoeia de los Estados Unidos define la
validacin de un mtodo analtico como el proceso que permite establecer, mediante estudios
de laboratorio, que las caractersticas de funcionamiento del mtodo satisfacen los requisitos
Anexo 65
que han de cumplir los anlisis previstos. Como definicin de trabajo debe retenerse la idea
de que un mtodo vlido:
- ha de ser apropiado (fiable) para los fines previstos;
- ha de proporcionar datos analticos tiles en una determinada situacin;
-ha de cumplir los requisitos preestablecidos (especificaciones) para resolver el
problema analtico;
-ha de ofrecer el nivel de resultados establecidos (exactitud, coherencia, fiabilidad);
- ha de hacer lo que se supone que hace.
valor: Expresin de una magnitud en trminos de un nmero y una unidad de medicin

apropiada.
valor verdadero: Valor que caracteriza una magnitud perfectamente definida en las
condiciones existentes cuando se examina esa magnitud. El valor verdadero de una
magnitud es un concepto ideal y, en general, no puede conocerse exactamente.
Valor conforme con la definicin de una magnitud determinada.
verificacin: Confirmacin mediante el examen y la aportacin de pruebas objetivas de que

se han cumplido los requisitos especificados.
verificacin (o calificacin) del funcionamiento*: Mtodo oficial y rastreable nacio-
nalmente de evaluacin del funcionamiento de un instrumento en funcin de procedi-
mientos y especificaciones definidos previamente. La verificacin del funcionamiento
debe implicar la utilizacin de pruebas que no sean especficas de un mtodo concreto
y para las que se utilicen calibradores y estndares rastreables nacionalmente.
Bibliografa
National Institute for Drug Abuse, Urine Testing for Drugs of Abuse, Research Monograph
73 (Rockville, Maryland, Department of Health and Human Services, 1986).
IUPAC, Compendium of Analytical Nomenclatura, The Orange Book 3rd Edition,

J. Inczedy, T. Lengyel, y A.M. Ure, Blackwell Science, 1998 [ISBN 0-632-05127-2], dispo-
nible en lnea http://old.iupac.org/publications/analytical_compendium/.
Comit Olmpico Internacional/Comit de Materiales de Referencia de la Organizacin

Internacional de Normalizacin, Quality control of analytical data produced in chemical
laboratories, publicacin 271, proyecto de protocolo presentado al Quinto simposio interna-
cional sobre la armonizacin de los planes internos de garanta de calidad para laboratorios
analticos, Washington, D.C., 23 de julio de 1993.
Organizacin Internacional de Normalizacin, International Vocabulary of Basic and General

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Comunidad Europea, Guideline Criteria for Reference Methods, BNL SP/Lab/div (92) 5
(1992), pg. 27.
Comit Olmpico Internacional/Comit de Materiales de Referencia de la Organizacin Inter-

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tories, publicacin 271, presentada al Quinto simposio internacional sobre la armonizacin
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Diccionario de ingls Chambers, W & R Chambers Ltd., Edimburgo (1990).
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8402, Quality Management and Quality Assurance Vocabulary (Ginebra, 1991).
G.T. Wernimont, en W. Spendley (Ed.), Use of Statistics to Develop and Evaluate Methods,
Association of Official Analytical Chemists, Arlington, VA, pgs. 78 a 82 (1985).
Quality Assurance: The Route to Efficiency and Competitiveness, 3 ed., L. Stebbing, Ellis
Horwood (1993).
R.S. Galen y S.R. Gambino, Beyond Normality: The Predictive Value and Efficienciy of
Medical Diagnoses, John Wiley & Sons, Nueva York, 1975.
L. Huber, Validation of Computerized Analytical Systems, Interpharm Press Inc., Buffalo

Grove, IL, 1996.
67
Fotografas:
Fototeca de la UNODC
Vienna International Centre, PO Box 500, 1400 Vienna, Austria
Tel.: (+43-1) 26060-0, Fax: (+43-1) 26060-5866, www.unodc.org
Directrices para
y la calibracin del equipo utilizado
para el anlisis de drogas ilcitas en
materiales incautados y especmenes
biolgicos
ST/NAR/41
V.09-84581Febrero de 2010 Por una calidad y perfeccionamiento continuo

Validation Manual STNAR41 Ebook S PDF

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Tel.: (+43-1) 26060-0, Fax: (+43-1) 26060-5866, www.unodc.org

Por una calidad y perfeccionamiento continuo

La Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos desea expresar su gratitud y reco-

Esta publicacin no ha pasado por los servicios oficiales de edicin.

2. Validacin y verificacin de mtodos analticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

2.1. Introduccin: funcin de la validacin en la garanta de calidad y

2.9.1. Materiales incautados - Anlisis cualitativo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

2.9.2. Materiales incautados - Anlisis cuantitativo . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

2.9.3. Especmenes biolgicos - Anlisis cualitativo

2.9.4. Especmenes biolgicos - Anlisis cuantitativo . . . . . . . . . . . . . . . . 35

3.Calibracin/Verificacin del funcionamiento de instrumentos y

4.Modelo de procedimiento normalizado de trabajo para la

Anexo. Glosario de trminos utilizados en el manual de validacin y

1.2 Finalidad del manual

Los procedimientos descritos en el manual constituyen una sntesis de la experiencia de

1.3Planteamiento de este manual y

El manual se divide en cuatro partes principales y un glosario.

En la PARTE I se ofrece un panorama general de la teora y la prctica de la validacin de

En la PARTE IV se ofrecen ejemplos de procedimientos normalizados de trabajo para la

1.4 Uso de este manual

Un complemento importante de la elaboracin de un programa interno de garanta de la

Seccin de Laboratorio y Asuntos Cientficos

2.1Introduccin: funcin de la validacin en la

La validacin o la verificacin de un mtodo se realizan mediante una serie de pruebas

En el certificado de mtodo autorizado o documento similar que se establezca en el manual

yy Denominacin del mtodo

La documentacin que se maneja en un sistema de garanta de la calidad es compleja por

Los sistemas propuestos en la bibliografa dedicada al proceso de validacin pueden diferir

2.2 Evolucin de los mtodos nuevos

1. Identificar los requisitos Establecer el objetivo final

2. Elegir el mtodo que se postular Bsqueda en la bibliografa de informacin

3. Desarrollar el mtodo Evaluacin preliminar para establecer si

VALIDACIN DEL MTODO

4. Identificar el tipo de mtodo (los (Vase el prrafo 4 de la Parte II)

5. Preparar la documentacin de la Definir por escrito los trabajos experimenta-

6. Redactar las instrucciones para los (Vase ST/NAR/25)

7. Recibir la autorizacin de la direccin (Vase el prrafo 1 de la Parte II)

SUPERVISIN Y CONTROL DEL FUNCIONAMIENTO DEL MTODO

8. Realizar controles de calidad para Utilizar normas identificables, muestras en

9. Examinar el mtodo y proponer Volver a validar cuando proceda y preparar

10. Recibir autorizacin de la direccin Actualizar los procedimientos normalizados

2.3 Etapas preliminares

2.4 Validacin del mtodo

yy Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio)

2.5 Verificacin del mtodo

yy Especificidad/selectividad, si la matriz de la muestra difiere de la utilizada cuando

yy Exactitud (sesgo) en el umbral de concentracin

Los mtodos cuantitativos de anlisis de drogas exigen la determinacin de la siguiente serie

yy Especificidad/selectividad y lmite de deteccin si la matriz de la muestra difiere

2.6 Parmetros para la validacin/verificacin

La especificidad se determina aadiendo materiales que podran encontrarse en la muestra.

Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad)

Linealidad y margen de error (rango)

en porcentaje. La exactitud y la precisin determinan el error total del anlisis. La exactitud se

Lo normal es estimar la exactitud analizando muestras aadidas con tres concentraciones

Medicin de la incertidumbre [8, 9, 10]

Los laboratorios de anlisis deben establecer y aplicar procedimientos de estimacin de la

En metrologa, la incertidumbre se define como un parmetro asociado con el resultado de

En trminos ms prcticos la incertidumbre se puede definir como la probabilidad oel nivel

el valor real con un determinado grado de confianza. Normalmente se utiliza un grado de

Entender qu significa la incertidumbre es fundamental para interpretar los resultados e infor-

La incertidumbre de las mediciones, por lo general, tiene muchos componentes. La incerti-

3.Calibracin/Verificacin del funcionamiento de instrumentos y

4.Modelo de procedimiento normalizado de trabajo para la

1.3Planteamiento de este manual y

2.1Introduccin: funcin de la validacin en la

2.7Supervisin y control del funcionamiento del

2.8Ejercicios de colaboracin entre laboratorios/

3.3Procedimientos de calibracin/verificacin del