Tecnicas de Monitoreo PDF

III CURSO DE BIOSEGURIDAD
LABORATORIO ESTATAL DE SALUD PBLICA
Tcnicas de monitoreo
para la deteccin de
microorganismos en el
medio ambiente
Gloria Alicia Figueroa Aguilar

Condiciones Ambientales
REQUISITO: El laboratorio debe asegurarse que

las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los
ensayos microbiolgicos,
no invaliden los resultados de ensayo ni comprometan la
calidad requerida de los resultados.
Ejemplos de condiciones ambientales

no deseables
Condiciones Efecto posible sobre el Lugar a monitorear

Ambientales ensayo
Deficiente Contaminacin de las rea de siembra y
esterilidad muestras y cultivos de preparacin de
biolgica muestras
Mayor polvo en Contaminacin de las rea de siembra y
suspensin en muestras y cultivos de preparacin de
el aire muestras
El laboratorio debe establecer:
Un programa documentado de limpieza y desinfeccin

que tenga en cuenta
los resultados de vigilancia de las condiciones ambientales y la
posibilidad de contaminacin cruzada.
Para la desinfeccin se deben tomar en cuenta agentes

antimicrobianos que no pongan en riesgo la salud del
operador y que no daen las superficies de trabajo
Limpieza y desinfeccin
Organizarlastareas de limpiezaydesinfeccin del laboratorio.
Establecer la frecuencia de realizacin de lasmismas
Se detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel
de limpiezarequerido (trapeohmedo, trapeomojado, etc.),
los desinfectantes a prepararysumodo de uso.
El personal querealiza la actividad
Propsito:paraque loslaboratoriosestn en
condicionesadecuadaspararealizar los ensayosypermitir al
personal quetrabaje en forma segura.
Limieza y desinfeccin
Son los procedimientos operativos
empleados durante la realizacin del
trabajo en el laboratorio.
Tiene como principal objetivo evitar la

contaminacin en todas las etapas del
ensayo, de lo contrario implicara
obtener resultados errneos, la infeccin
del personal, etc.
El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones :
Por ejemplo:
Asegurarse que el rea de trabajo est limpia y que no haya corrientes de aire.
Limpiar la superficie de trabajo con un desinfectante adecuado, antes y despus del
trabajo.
Durante la siembra y manipuleo estril de muestras no hablar y evitar toser, en caso
necesario utilizar un cubrebocas.
Abrir los tubos de ensayo y botellas cerca de la llama del mechero.
Trabajar, evitando movimientos innecesarios.
La manipulacin del material patgeno o txico requiere trabajar en reas cerradas o
bajo campanas de bioseguridad.
Utilizar el equipo de seguiridad apropiado de acuerdo a la actividad.
Evitar la formacin de aerosoles. Se pueden formar al abrir las cajas de Petri, los tubos,
las botellas o los frascos, al usar mezcladores, jeringas, centrfugas, etc. y cuando se
esterilizan asas.
Relativo al rea de trabajo:
Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, no debe ser usado

fuera del rea de trabajo del laboratorio.
Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios,

etc. Y en el rea del laboratorio no comer, beber, fumar.
Relativo a la Higiene del personal tcnico:

Antes y al finalizar la labor en el laboratorio, el personal debe lavarse las
manos con un producto adecuado (jabn desinfectante).
El personal debe tener uas cortas y limpias, el pelo debe estar recogido,
no tener anillos ni pulseras. Uso de cubrebocas cuando sea necesario.
El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe

realizar exmenes microbiolgicos.
MONITOREO AMBIENTAL:
La calidad microbiolgica del aire y las superficies

del laboratorio en microbiologa es
un indicador de la efectividad de las tareas realizadas en
cuanto a:
FLos programas de limpieza y desinfeccin y a el

cumplimiento del reglamento interno de trabajo.
Procedimiento: MONITOREO AMBIENTAL.
Establece :
FMetodologa para la toma de muestra.

F Lugares de toma de muestra.
F Lmites de tolerancia o criterios de aceptacin o rechazo.
FFrecuencia de monitoreo.
FAcciones correctivas a tomar en caso de desvos de los lmites
establecidos.
Esto se aplica tanto a control ambiental del rea analtica del

laboratorio como para las campanas de flujo laminar y /o
bioseguridad, EN ACTIVO Y EN PASIVO.
El procedimiento de muestreo para monitoreo ambiental

puedeincluir (dependiendo del ensayo que realiza el laboratorio):
Determinacin cuantitativa de microorganismos presentes en

el ambiente (recuento total o recuento de determinados tipos
de microorganismos como por ejemplo hongos).
Determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o

indicadores dependiendo de los ensayos que realiza el
laboratorio (Ejemplo: Salmonella spp,Listeria spp,
Staphylococcus aureus).
MTODO PARA CONTROL DE CALIDAD DEL AIRE:
En activo
En pasivo
Toma de muestra: durante un tiempo estipulado (15min), se exponen placas

de Petri con medio de cultivo no selectivo y un medio para cultivo de hongos
(Cuenta Estndar / Agar papa dextrosa), en el rea de trabajo.
reas a monitorear o zonas de toma de la muestra: rea de

siembra, rea de preparacin de la muestra.
Tiempo y temperatura de incubacin: Luego de la exposicin al aire,

las placas se cierran e incuban durante 48 horas para BMA y de 3 a 5 das para
hongos.
Frecuencia de realizacin de los controles.Semanal en diferentes
turnos de trabajo.
Criterio de conformidad:nmero mximo de colonias portiempo de
exposicin de las placas. Ejemplo durante 15 minutos se permite hasta 15 colonias
Los resultados se expresan como unidades de colonias (UFC) por placa
Mtodo para muestreo de superficies

Colocar sobre la superficie que se va a muestrear una plantilla
estril de papel aluminio con un cuadro de 5x5 cm recortado en
el centro.
Humedecer un hisopo estril en una solucin amortiguadora de

fosfatos (10 mL) y eliminar el exceso de lquido.
Con el hisopo inclinado en ngulo de 30 frotar 3 veces la

superficie delimitada por la plantilla, cada una en direccin
opuesta.
Enjuagar el hisopo en la solucin amortiguadora, hasta obtener

una suspensin y repetir la operacin con el mismo hisopo, sobre
tres superficies ms.
Regresar el hisopo al tubo y retirar del mismo la parte que estuvo

en contacto con los dedos.
Bacterias mesoflicas aerobias

NOM 092-SSA1
Agitar perfectamente los tubos con la suspensin
anterior. Colocar en 2 placas petri 1 mL y 0,1 mL de la
suspensin y agregar de (15 a 20) mL de agar cuenta
estndar fundido.
Incubar a 35C por 48 horas
Contar colonias
Realizar clculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)

100cm2
Reportar como Bacterias Mesoflicas Aerobias

UFC/cm2
Coliformes
NOM 133-SSA1
Colocar en 2 placas petri 1 mL y 0,5 mL de la suspensin y
agregar de (12 a 15) mL de agar rojo violeta bilis fundido y
conservado a 45C dejar solidificar y agregar una segunda
capa (5 mL) de agar rojo violeta.
Incubar las placas durante 24 horas a 35C
Realizar la cuenta de colonias tipicas
Realizar clculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)

100cm2
Reportar como UFC / cm2

Microorganismos especficos
NOM 114 SSA Determinacin de Salmonella
spp
NOM 115 SSA Determinacin de

Staphylococcus aureus
Acciones correctivas
GRACIAS

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Gloria Alicia Figueroa Aguilar

REQUISITO: El laboratorio debe asegurarse que

Ejemplos de condiciones ambientales

Condiciones Efecto posible sobre el Lugar a monitorear

El laboratorio debe establecer:

Un programa documentado de limpieza y desinfeccin

Para la desinfeccin se deben tomar en cuenta agentes

Tiene como principal objetivo evitar la

El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones :

Relativo al rea de trabajo:

Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, no debe ser usado

Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios,

Relativo a la Higiene del personal tcnico:

El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe

La calidad microbiolgica del aire y las superficies

FLos programas de limpieza y desinfeccin y a el

Procedimiento: MONITOREO AMBIENTAL.

FMetodologa para la toma de muestra.

Esto se aplica tanto a control ambiental del rea analtica del

El procedimiento de muestreo para monitoreo ambiental

Determinacin cuantitativa de microorganismos presentes en

Determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o

MTODO PARA CONTROL DE CALIDAD DEL AIRE:

Toma de muestra: durante un tiempo estipulado (15min), se exponen placas

reas a monitorear o zonas de toma de la muestra: rea de

Tiempo y temperatura de incubacin: Luego de la exposicin al aire,

Mtodo para muestreo de superficies

Humedecer un hisopo estril en una solucin amortiguadora de

Con el hisopo inclinado en ngulo de 30 frotar 3 veces la

Enjuagar el hisopo en la solucin amortiguadora, hasta obtener

Regresar el hisopo al tubo y retirar del mismo la parte que estuvo

Bacterias mesoflicas aerobias

Incubar a 35C por 48 horas

Realizar clculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)

Reportar como Bacterias Mesoflicas Aerobias

Incubar las placas durante 24 horas a 35C

Realizar la cuenta de colonias tipicas

Realizar clculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)

Reportar como UFC / cm2

NOM 115 SSA Determinacin de

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