UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA FORESTAL

Reconocimiento de las Caractersticas Morfolgicas que

distinguen a los Hongos en Preparaciones Temporal en Cultivo
in Vitro

CURSO : BIOTECNOLOGA FORESTAL

ALUMNO : ARECHE SINCHE Christian Brayan

DOCENTE : Ing. HEMERYTH BARTRA, Jhinmy karc

SEMESTRE : 2017 - I

FECHA DE PRESENTACION : 15/08/2017

TINGO MARIA PERU

JUNIO, 2017
 I. INTRODUCCION

Los hongos son esenciales para la naturaleza, dada su capacidad para

mineralizar toda clase de materia orgnica con lo que contribuyen al equilibrio
de los ciclos biogeoqumicos. El objetivo de este breve ensayo es mostrar en lo
general la importancia de los hongos para la fertilidad del suelo, en la
agricultura y el ambiente. Por el potencial enzimtico que tienen incluso uso
para eliminar xenobitcos que daan el equilibrio natural.

Hoy en da, el uso de hongos en agricultura constituye uno de los

avances ms significativos en la bsqueda de soluciones naturales para en el
mejoramiento del suelo, el fortalecimiento de los cultivos, as como el control
efectivo de patgenos y otros males que atenten contra la salud de los cultivos.

Estos avances se apoyan cada vez ms en la bsqueda de soluciones

agrcolas en armona con el medio ambiente, el uso consciente de los suelos,
el aprovechamiento de procesos biolgicos tanto en los cultivos, as como en el
control de plagas y patgenos.

Existen infinidad de hongos que son usados en la agricultura, los

cuales son de gran beneficio para el suelo y las races de las plantas,
permitindoles tomar del suelo los macro nutrientes ms importantes, tales
como fsforo y potasio, entre tantos otros, directamente involucrados en el
crecimiento y fortalecimiento de las plantas.

Objetivo general:
Reconocimiento de las Caractersticas Morfolgicas que distinguen a los
Hongos en Preparaciones Temporal en Cultivo in Vitro

Objetivos especficos:

Reconocer los tipos de hongos en medio de cultivo temporal.

Describir las caractersticas presentadas de las observaciones en el
microscopio electrnico.
 II. REVISION DE LITERATURA

2.1. Hongos beneficiosos en la agricultura

Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a

los cambios de condiciones ambientales y en la medida en que se han podido
adaptar a estos cambios, se han distribuido en una gran diversidad de hbitats
incluyendo los de condiciones extremas sobre todo de fsico qumico.

Los microorganismos del suelo son los componentes ms

importantes del mismo. Constituyen lo que se conoce como la parte viva del
suelo, y son los que ayudan con la dinmica de transformacin y desarrollo.

En un solo gramo de tierra podemos encontrar millones de

microorganismos altamente beneficiosos para los cultivos. Estos
microorganismos son las bacterias, hongos, algas y protozoarios, y son
quienes le dan al suelo sus caractersticas de fertilidad, por lo tanto, de
condiciones favorables para los cultivos.

Por otro lado, los hongos y bacterias, aparte de ayudar en la

prevencin de enfermedades y contribuir con el crecimiento sano y fuerte de
las plantas, son los protagonistas principales en los procesos de
descomposicin orgnica, a partir de la cual se nutren y crecen, creando con
ello el llamado reciclaje de materia orgnica.

Los procesos de descomposicin de la materia orgnica y la

liberacin de nutrientes en el suelo se dan de modo simultneo, facilitando as
la existencia de otros seres vivos.

Y precisamente los hongos y las bacterias son los recicladores por

excelencia. De no existir estos microorganismos con la capacidad de
descomponer y transformar la materia orgnica, sta se acumulara, generando
grandes daos a los ecosistemas, ya que un proceso natural se vera trancado,
imposibilitando as la continuidad de la vida.

Estos conocimientos aplicados a la agricultura, llevan al

aprovechamiento de los restos de productos post cosecha, o en los cultivos de
siembra directa en la tierra. Ese manto que se forma por rastrojo es de vital
importancia, ya que permite que los microorganismos acten para conservar y
prolongar la fertilidad del suelo, aprovechando al mximo los restos orgnicos.

Un suelo frtil, es aquel que tiene una alta reserva de estos

microorganismos naturales, los cuales pueden garantizar el desarrollo
favorable y sostenible de los cultivos, incluso despus de muchas cosechas, al
proveer a las plantes los nutrientes necesarios para su desarrollo.

Dentro de esos microorganismos del suelo frtil, el uso de hongos

en agricultura constituye una parte muy importante, ya que ayuda
considerablemente con varios aspectos muy importantes tales como:

- Control de otros microorganismos perjudiciales para los cultivos al

vencerlos en el control de nutrientes

- Eliminacin de enfermedades y patgenos por medio del

parasitismo directo, penetran los patgenos eliminndolos por completo

- Funcionan como potentes antibiticos, protegiendo los cultivos de

una gran variedad de infecciones y enfermedades

Como lo mencionamos previamente, existen una gran variedad de

estos hongos en agricultura, pero queremos fijar nuestra atencin en el hongo
Trichoderma, debido a lo siguiente:

- La extensin de su uso en muchos tipos de suelos y cultivos

- Su fcil reproduccin

- Inocuidad en las partes internas de la planta

- Las posibilidades de obtenerlo naturalmente o de inocularlo en el

suelo y races de las plantas.

2.2. Influencia de los microorganismos en el cultivo in vitro

Los principales microorganismos asociados con la superficie de las

plantas son: hongos, levaduras, bacterias, spiroplasmas y micoplasmas. Las
reas donde se concentran mayor cantidad de nutrientes en la superficie de las
plantas son: nctar, ceras, tejidos senescentes, etc. Las poblaciones de hongos
y bacterias pueden desarrollarse en residuos de insectos, adems, las
hendiduras, pelos densos y superficies mucilaginosas pueden albergar
microorganismos.

2.3. Contaminantes microbianos introducidos en el laboratorio

Los microorganismos que se introducen en el laboratorio son

generalmente habitantes del suelo que se encuentran en el ambiente;
saprofitos o patgenos de las plantas, as como habitantes de la microbiota
normal del cuerpo humano que se relacionan con procederes inadecuados en
el laboratorio, condiciones higinico sanitarias deficientes o incumplimientos de
la disciplina tecnolgica.

Ciertas bacterias entran al cultivo de tejidos con los explantes

iniciales pero otras son claramente introducidas en el laboratorio. Entre los
hongos filamentosos contaminantes, los gneros encontrados con mayor
frecuencia han sido Aspergillus, Cladosporium, Penicillium, Fusarium,
Alternaria yNeurospora.

Las bacterias son consideradas como los contaminantes ms

comunes y las que ocasionan los problemas ms serios, porque pueden ser
sistmicas, y su deteccin es ms difcil.

2.4. Deteccin e identificacin de microorganismos contaminantes

Los contaminantes fungosos no son difciles de detectar en el

medio de cultivo pues su crecimiento es visible en forma de colonias aisladas o
alrededor de los explantes. Los caracteres culturales de su crecimiento no
difieren del observado en medios de cultivos micolgicos.

Las bacterias tambin crecen superficialmente en el medio del

cultivo de las plantas, alrededor de los explantes y dentro del propio medio de
cultivo; si estn asociadas al tejido vegetal no se distinguen colonias aisladas
sino una masa bacteriana en forma de pliegues, halos o rosetas en el interior
del medio slido y se aprecia abundante y escaso crecimiento sobre la
superficie. En el medio lquido forman turbidez uniforme o no, pelculas o
sedimento.
 La afirmacin de que los cultivos estn libres de contaminantes por
apreciacin visual de la ausencia de crecimiento bacteriano en el medio puede
conducir a certificaciones errneas. Las bacterias en ocasiones a diferencia de
otros microorganismos no producen crecimiento visible hasta mucho tiempo
despus de que fueron introducidas.

Las altas presiones osmticas, el pH y determinadas hormonas

pueden inhibir o limitar el crecimiento bacteriano. Se ha comprobado que las
citoquininas ejercen un efecto bacteriosttico sobre ellas.

Por estas razones se precisa de mtodos de deteccin rpidos y

seguros, como la transferencia de fragmentos del material vegetal a medios
bacteriolgicos donde crecen varios representantes de este grupo o tambin se
utilizan componentes de medios bacteriolgicos en el medio de cultivo de
plantas y el empleo de mtodos turbidimtricos.

2.5. Principales fuentes de contaminacin

La contaminacin microbiana es un problema multicasual y la

determinacin de la fuente que la origina se dificulta a menudo ya que los
microorganismos pueden ser introducidos en varios puntos del proceso
productivo, principalmente, por ineficiente desinfeccin de los explantes
primarios utilizados en la fase de establecimiento, por inadecuada manipulacin
del material vegetal, deficientes tcnicas de asepsia, incompleta esterilizacin
del medio de cultivo, por fallos en el funcionamiento del flujo laminar, o a travs
del ambiente de los locales de trabajo. Adems, pueden diseminarse en las
habitaciones por caros, trips y hormigas.

El explante

En dependencia del tipo de explante utilizado los microorganismos

superficiales o endofticos de las plantas pueden ser introducidos al cultivo in
vitro. Con el cultivo de meristemos, pueden ser eliminados muchos de ellos
pero en explantes de hojas, peciolos o tallos en su mayora pueden ser
introducidos.
 Los mtodos de desinfeccin utilizados no siempre eliminan las
poblaciones de microorganismos asociados a los tejidos de las plantas,
muchos son capaces de permanecer latentes en el interior de las clulas, en
los espacios intercelulares o en los haces conductores y quedan protegidos de
los agentes qumicos. De esta forma se introducen en el cultivo de tejidos, se
propagan con el material vegetal y pueden manifestarse sobre los medios de
cultivo en la fase de establecimiento o permanecer sin expresarse por largos
perodos de tiempo.

El ambiente

El ambiente de los locales de trabajo es una fuente de

contaminacin ya sea directa o indirectamente. A travs de las corrientes de
aire las partculas de suelo cargadas de esporas son arrastradas y penetran a
los locales por los acondicionadores de aire; son transportadas o introducidas
por el hombre y permanecen en el ambiente por condiciones higinicas
inadecuadas.

Para realizar el cultivo de tejidos se requiere del mantenimiento de

condiciones aspticas. El uso de aires acondicionados domsticos, los cuales
intercambian constantemente aire con el ambiente, elevan las probabilidades
de entrada de microorganismos. Es importante el estricto mantenimiento de la
limpieza para disminuir la carga microbiana ambiental, as como la
organizacin adecuada del proceso productivo.

El hombre

El hombre interviene directamente en todas las operaciones y es

una fuente primaria de contaminantes a travs del estornudo, la tos, la
conversacin, etc. La presencia de microorganismos contaminantes que son
habitantes de la microbiota normal del cuerpo humano como por ejemplo:
Staphylococcus epidermidis o Candida albicans, generalmente indican
ineficientes tcnicas de asepsia por parte de los operarios.

En el trabajo dentro de la cabina del flujo laminar es donde el

operario puede introducir la mayora de los microorganismos. Incumplimientos
de la disciplina tecnolgica contribuyen al incremento de la contaminacin y
llegan a ocasionar prdidas muy costosas. Juega un papel importante el
personal tcnico y auxiliar que labora en la limpieza y fregado de frascos, en la
preparacin y esterilizacin del medio y en el control de la calidad.

Los equipos y el instrumental

La esterilizacin por calor hmedo en autoclave se emplea

comnmente para eliminar los microorganismos de los medios de cultivo, de la
calidad de este paso depende en gran medida la continuidad del proceso. Los
problemas en la esterilizacin pueden deberse a fallos en los funcionamiento
de las autoclaves o a errores en su manipulacin.

Determinados microorganismos son particularmente introducidos

por esta va, como por ejemplo: el gnero Bacillus, que puede contaminar los
medios por insuficiente esterilizacin o mal funcionamiento de las autoclaves y
puede ser diseminado durante las operaciones con el material vegetal.

Las colonias bacterianas pueden detectarse dentro del medio a

partir de las 24 horas de preparado y luego emergen a la superficie
ocasionando daos severos a las plantas. Esta problemtica es muy comn en
las biofbricas, de ah la importancia de mantener en reposo los medios de
cultivo por 24-72 horas para verificar la calidad de la esterilizacin. La cabinas
de flujo laminar si funcionan adecuadamente proporcionan condiciones de
asepsia para el trabajo en biotecnologa vegetal, pero esto depende en gran
medida del uso, cuidado y revisin peridica de los filtros.

Los equipos destinados al tratamiento de agua (desionizadores,

destiladores, etc.) tambin pueden introducir contaminacin; por fallos en el
mantenimiento o procederes inadecuados, en sus resinas pueden abrirse
oquedades donde los microorganismos, principalmente bacterias, se sitan y
multiplican.

En los laboratorio con clima centralizado, estos equipos tambin

pueden introducir y diseminar contaminacin. Cuando se combinan la limpieza
ineficiente de los cuartos con la existencia de focos contaminantes y se
producen fluctuaciones de temperatura; en los conductos de aire hongos
filamentosos como Cladosporium sp. se pueden multiplicar y esparcir. Adems,
los instrumentos utilizados se esterilizan con calor seco o se flamean en
alcohol, pero si esto no se hace por el tiempo suficiente las esporas de Bacillus
spp. pueden sobrevivir y contaminar los cultivos.

2.6. Hongos filamentosos y levaduras

La mayora de los hongos y levaduras aislados del cultivo de

tejidos de plantas pertenecen a gneros y especies que estn ampliamente
distribuidos y pueden encontrarse en edificaciones, ambientes externos, en el
aire de los laboratorios y como saprofitos o patgenos en la superficie area de
las plantas en el campo.

En el caso de estos microorganismos no se mantienen latentes en

el cultivo de tejidos; muchos de ellos son considerados patgenos in vivo y
tambin pueden causar daos en el cultivo de tejidos por parasitismo directo.

Algunos hongos patgenos como Botrytis, Alternaria, Penicillium

y Aspergillus han sido capaces de crecer inicialmente en el medio sin plantas,
y lograr su establecimiento posterior en el tejido de stas, despus que el
metabolismo y crecimiento de las mismas disminuy.

Los hongos y levaduras aparecen en los cultivos de tejidos ms

viejos, los cuales han estado visiblemente libres de contaminantes durante
meses o aos. Estos microorganismos pueden ser aislados al azar, del aire de
los laboratorios, de medios vertidos sin plantas y de cultivos de tejidos que han
estado in vitro por ms de un ao.

Existe una estrecha correlacin entre las especies y gneros de

hongos y levaduras encontradas en el aire del laboratorio, los medios vertidos
sin plantas y los cultivos viejos, que indica que la fuente de mayor
contaminacin fngica es el aire del laboratorio, y que los hongos y levaduras
pueden ser introducidos por manipulacin despus del autoclaveo. Se plantea
que tales microorganismos no han sido hallados de forma latente en el cultivo
de tejidos y que esta contaminacin llega a su punto mximo durante los
meses de altos contenidos de esporas en el aire externo y en el laboratorio.

En muestreos realizados en laboratorios de tres pases europeos el

40 % de las levaduras encontradas fueron Candida guilliermondiilfamata o
Candida parapsilosis, el 20 % otras Candida spp. y el 40 % Rhodotorula spp.;
de los hongos filamentosos el 35 % fueron Penicillium spp, el 17 % Aspergillus,
el 8 % Alternaria y el 8 % Fusarium spp.

Se plantea que existen tres posibilidades para los hongos del aire
exterior que entran con el frasco de cultivo dentro del flujo laminar":

Los contaminantes pueden ser introducidos si los operadores

trabajan muy cerca del borde de la cabina del flujo laminar. Esto fue
corroborado por los hallazgos donde los contaminantes se aislaron del aire
entre los 15-20 cm de la cabina, all los cultivos de Hosta indexados
negativamente, que fueron subcultivados cerca del borde de la cabina, se
contaminaron a una proporcin mayor que cuando se hizo dentro de sta (ms
profundamente).

Los frascos de cultivo en la mayora de los laboratorios tienen

depsitos de polvo visibles en la tapa y en la superficie, a partir de los cuales
las poblaciones fungosas y de levaduras similares a las del aire pueden ser
aisladas. Las esporas de hongos y las clulas de las levaduras en el polvo,
pueden ser introducidas mediante el flujo del aire en la cabina, cuando los
frascos se abren.

Los operadores han encontrado que las esporas de Penicillium y

Botrytis cinerea que se establecen en la tapa del frasco, pueden germinar en la
pelcula de agua de condensacin (que a menudo se forma sobre el borde del
frasco) y desarrollarse activamente en el interior del mismo.

Un estallido repentino de hongos y levaduras como contaminantes

asociados con infestacin de caros y trips ha causado grandes prdidas en
los lugares infectados. Estos organismos pueden penetrar en la mayora de los
pomos de cultivos y crear grandes problemas, principalmente por introduccin
de hongos y levaduras dentro del cultivo de tejidos, por lo que son
considerados vectores de contaminacin.

A). Fusarium oxysporum

Index Fungorum (2007), describe la siguiente clasificacin

taxonmica:

Reino : Fungi

Divisin : Ascomycota

Clase : Sordariomycetes

Orden : Hypocreales

Familia : Nectriaceae

Gnero : Fusarium

Especie : F. oxysporum

F. oxysporum presenta micelio incoloro al principio, pero conforme

madura adquiere un color crema o amarillo plido y bajo ciertas condiciones
adquiere una tonalidad rosa plido o algo prpura, este patgeno produce tres
tipos de esporas asexuales que son: Microconidios: que tienen de una a dos
clulas y son las esporas que el hongo produce con una mayor frecuencia y en
una mayor abundancia en todas las condiciones; macroconidios: Son las
esporas tpicas de Fusarium, estan constituidos de 3 a 5 clulas, se adelgazan
gradualmente y se encorvan hacia ambos extremos; el ultimo tipo de espora
son las clamidosporas, que estn constituidas por una o dos clulas, son de
pared gruesa y son esporas redondas que se forman terminal o intercalarmente
en el micelio ms viejo o en los macroconidios del hongo (Agrios, 2005;
GEFOR, 2007), es un saprofito abundante y activo de suelo y de la materia
orgnica; teniendo una amplia gama de hospedantes, incluyendo especies
forestales; causa los sntomas siguientes: marchitamiento vascular,
amarillamientos, podredumbre de raz, y chupadera; la ms importante de
estas es marchitamiento vascular; temperaturas elevada 25C 35C y
condiciones moderadas de humedad favorecen la invasin y el desarrollo de la
enfermedad (Smith et al., 1992).

Los hongos de almacenamiento, principalmente Aspergillus y

Penicilllum spp. Se desarrollan en semillas que tienen un contenido de
humedad del 12-18 por ciento.

Algunos hongos importantes que se desarrollan despus de la cosecha:

Aspergillus flavus: se desarrolla en las protenas, los almidones y las

grasas, causando su deterioro; en particular, hace reducir la calidad del aceite.
Algunas cepas producen la toxina venenosa llamada anatoxina, sobre todo en
semillas oleaginosas y cereales que no se han secado suficientemente.

Aspergillus niger: anlogo a A.flavus, pero la toxina que produce no es

tan peligrosa. Las cabezas de las esporas son negras.

Grupo de Aspergillus glaucus: un grupo muy comn de mohos capaces

de desarrollarse en sustratos con muy bajo contenido de humedad y elevado
contenido de azcar (son generalmente los invasores primarios de productos
de cultivos almacenados).
 III. METODOS

3.1. Metodologa

Despus del cultivo in vitro que se realiz con semillas de

capirona haban medios de cultivos en las que si fueron exitosas y otras en
las que no, por ese motivo se evalu los posibles consecuencias, en este
caso tipos de hongos que pudo haber afectado.

3.2. Tincin

La metodologa de tincin se realiz con azul de metileno en la

cual se introdujo primero el hongo disperso, seguidamente de 1 a 2 gotas de
dicho producto mencionado.

3.3. Materiales

Portaobjetos

Cubreobjetos

Agua destilada

Azul de metileno

Agujas de diseccin

Cultivos de hongos

Microscpio electrnico
 IV. RESULTADO

En particular los granos y las semillas son infectados por diversos

hongos en el campo entre ellos Fusarium sp., Alternaria sp. yPenicillium sp.
Por otra parte, los granos tambin pueden ser invadidos por hongos de
almacn, siendo Aspergillus sp. y Penicillium sp. los principales gneros
de hongos que se presentan (Moreno 1988).

Durante Bsu desarrollo en los granos, los hongos causan diferentes

clases de daos, siendo los ms importantes la prdida de capacidad de
germinacin, decoloracin, calentamiento y produccin de micotoxinas
(Moreno ME, Gil GM 1991).

Se tiene una identificacin ms apropiada el cual es Hongo de

Penicillium spp, dada a todas las caractersticas mencionadas.
 V. DISCUSIONES

Existen varios mtodos de control de plagas, pero desgraciadamente

las sustancias qumicas empleadas en el control de insectos han provocado
el desarrollo de resistencia, contaminacin ambiental y riesgos de salud
pblica (ARENAS LC 1995). As mismo, actualmente no existe ningn
mtodo de control de hongos, slo medidas preventivas como monitorizar la
temperatura y la humedad del grano.
 Bibliografa

AGRIOS, G. 2005. Plant Pathologi. ESEVER. EE. UU. Pg. 938

Folgueras, Maryluz. La contaminacin microbiana en la

micropropagacin in vitro de las races y tubrculos tropicales/

Maryluz. Folgueras. -Tesis para aspirar al ttulo de Master en

Agricultura Sostenible (Mencin Sanidad Vegetal), L. Herrera,

Tutor. Santa Clara, Villa Clara. Universidad Central Marta Abreu

de Las Villas, 2000, -71 h.

INDEX FUMGORUM. 2007. Proyecto Internacional para Indexar los

Nombres en el Reino Fungi.

Microorganismos contaminantes en la propagacin masiva de

colocasia esculenta y Xanthosoma spp. en la Biofbrica del MINAG

en Villa Clara/ Maryluz, Folgueras[et al.] Centro Agrcola (Santa

Clara) 28, (3): 73-79, 2001.

SMITH, M; DUNEZ, J; PHILLIPS, D; LELLIOTT, R; ARCHER, S.

1992. Manual de Enfermedades de las Plantas. Edic. Mundi-

Prensa. Madrid Espaa. Pg. 238; 587 590

 ANEXO

Fig. 01: Cultivo in vitro obtenido anteriormente.

Fig. 02: Microscopio utilizado.

Fig. 03: Puesto en porta y cubre objeto (azul metileno).

Fig. 04: Vista en el microscopio con x4