Integrantes:

Annelore Rowold Romero

Mauricio Lpez Crespo
Paulina Raquel Martn Cornejo
Emiliano Palma Prez del Valle
Samara Prez Harp

Prctica 6: Extraccin de alcaloides

Resultados

Se realiz una infusin de caf: 400 g de caf/ 1 L de agua, y se tomaron 200 mL. Se
agregaron 0.5 g de NaOH y se esperaron 15 minutos. Posteriormente se agreg
diclorometano y se realiz la extraccin con embudo de separacin. Se hicieron 3 lavados
con diclorometano, el primero con 50 mL y dos ms con 10 mL. Finalmente se ocup el
rotavapor para solamente quedarnos con la cafena (polvo blanco).

Tabla 1. Rendimiento de la extraccin de cafena.

Tipo de caf Gramos de Cafena Cafena Rendimiento
caf esperada (mg) obtenida (mg) (%)

Caf tostado 80 671.2 245.3 36.54

Caf verde 80 671.2 347.1 65.16

Tabla 2. Valores de pH
pH normal de caf pH de infusin caf pH infusin del caf verde
tostado

8 10 11
 Figura 1. Cafena extrada del caf verde.

Figura 2. Cafena cristalizada de caf tostado.

Anlisis

El trmino alcaloide significa anlogo a un lcali, lo que hace referencia al carcter bsico
que presentan (Gonzlez, 1991). En la tabla 2 se puede observar la medicin del pH de
ambas infusiones, preparadas con la misma cantidad de caf, y en un mismo volmen. El
pH que presenta la infusin de caf verde es ligeramente ms bsica que la infusin del
caf tostado, por lo que podra pensarse que la concentracin de cafena es mayor en la
primera.
En la tabla 1 se puede observar el rendimiento del mtodo en ambas infusiones. Los
resultados obtenidos demuestran que el rendimiento del proceso de extraccin fue mayor
para el caf verde, lo que corrobora lo esperado al medir el pH.

La separacin lquido-lquido es til para la extraccin de la cafena gracias a la migracin

del soluto de inters desde la infusin acuosa hacia el diclorometano. Se tienen dos lquidos
inmiscibles que forman fases diferentes, donde una de las fases presenta el compuesto que
se desea extraer y que puede separarse fcilmente por decantacin.
La reparticin del soluto en ambas fases depender del coeficiente de particin o K. Si el
valor del coeficiente es alto, la afinidad del soluto ser mayor en el solvente orgnico
(Guarnizo y Nel, 2009). Esto ocurre con la cafena, cuyo valor de K es de 4.8, lo que
explica la preferencia del soluto por el diclorometano.

Conclusin
Se extrajo cafena de dos tipos de grano distintos; para esto se utiliz un mtodo de
extraccin de alcaloides. La preferencia de la cafena por el diclorometano (lquidos
inmiscibles) fue muy til para la extraccin lquido-lquido, en la que se obtuvo un mejor
rendimiento del caf verde.
 Referencias

Gonzlez Alcaraz, Francisco (1991). Nomenclatura de Qumica Orgnica (2da ed., p. 590).
Universidad de Murcia: Secretariado de publicaciones.
Guarnizo Franco, Anderson y Nel Martnez, Pedro (2009). Experimentos de Qumica
Orgnica con enfoques en ciencias de la vida. Armenia, Colombia: ELIZCOM S.A.S

Prctica 7: Tcnicas cromatogrficas

Resultados

En esta prctica, se separaron y caracterizaron los componentes fitoqumicos de un extracto

de thinner de confera hecho a partir de Casuarina sp, el cual fue tratado/disuelto con tres
distintos compuestos qumicos: hexano, acetato de etilo y etanol. el extracto de thinner
contaba con la siguientes caractersticas:

peso de la muestra vegetal fresca: 350 gramos (incluye ramas y conos)

peso de la muestra vegetal en seco: 00 gramos (sin incluir ramas y conos)
volumen de thinner agregado a la muestra: 250 mililitros

Para separar y caracterizar los compuestos fitoqumicos de la muestra se utilizaron los

mtodos de cromatografa en placa fina y cromatografa en columna. sin embargo, ambos
mtodos no fueron concluidos por falta de tiempo en la sesin experimental. En la
cromatografa en columna se pudo separar el extracto en diferentes fracciones, pero no fue
posible pesarlas.

a) Cromatografa en placa fina

En una placa cromatogrfica de aluminio con dimensiones de 5 cm x 2.4 cm, se aplicaron

las tres muestras de extracto de confera disueltas en hexano (Hx), acetato de etilo (Ac) y
etanol (Et). Esta placa fina fue sometida a 7 eluciones , cada una con una fase mvil de
distinta polaridad (escalera de polaridad), por lo que se obtuvieron 7 patrones distintos de
corrimiento de bandas segn el disolvente utilizado como fase mvil. los patrones
resultantes fueron observados bajo luz ultravioleta a longitudes de onda de 453 nm y 622
nm. Las fotografas tomadas de la placa fina fueron colocadas en una tabla y editadas, y
posteriormente se cuantificaron los coeficientes de retencin (Rf) para cada banda en el
patrn de bandas observada en cada uno de los casos de elusin.

Tabla 3. Fotografas del patrn de bandas y revelado de las placas cromatogrficas para los
7 distintos tipos de eluyentes

Fase mvil
Luz visible Luz UV (453 nm) Luz UV (622 nm)
(disolvente)
 A
C D B
E
D

Hexano (1 F
ml.)

A B

8:2 hexano-
acetato de
etilo (2 ml.) C D B
A D
E C

A B C
D

1:1 hexano- E F
acetato de
etilo (2 ml.)
 A
B C

D B

2:8 hexano-
acetato de
etilo (2 ml.)

A B C
D

Acetato de
etilo (1 ml.)
F
E
 A B C
D
D

E F
1: 1 acetato-
acetona (2
ml.)

A B C
D
D

Acetona (1
ml.)

Tabla 4. Distancias recorridas por las bandas correspondientes a los patrones obtenidos al
eluir la placa cromatogrfica con las tres muestras de extracto de confera en la esclera de
cmaras de elucin.

Eluyente (Fase mvil)

8:2 1:1 Hexano- 2:8 Hexano- 1:1 Acetona-

Hexano Hexano- acetato de acetato de Acetato acetato de Aceton
(1 ml.) acetato de etilo (2 ml.) etilo (2ml.) de etilo etilo (2 ml.) a (1
etilo (2ml.) (1 ml.) ml.)

A 3.9 3.75 4.1 4.1 4.1 4.15 4.15

 B 3.8 1.65 4 3.9 4 4 4.1

C 3.7 1.6 3.95 3.8 3.9 4 4.1

D 3.65 1.6 3.85 3.2 3.8 3.9 3.9

E 3.45 1 2.8

F 2.2 2.8

Tabla 5. Coeficientes de refraccin (en orden descendente) correspondientes a los patrones

de bandas obtenidos al eluir la placa cromatogrfica con las tres muestras de extracto de
confera en la esclera de cmaras de elucin.

Eluyente (Fase mvil)

8:2 1:1 Hexano- 2:8 Hexano- 1:1 Acetona-

Hexano Hexano- acetato de acetato de Acetato acetato de Aceton
(1 ml.) acetato de etilo (2 ml.) etilo (2ml.) de etilo etilo (2 ml.) a (1
etilo (2ml.) (1 ml.) ml.)

A 0.975 0.9375 1.025 1.025 1.025 1.0375 1.0375

B 0.95 0.4125 1 0.975 1 1 1.025

C 0.925 0.4 0.9875 0.95 0.975 1 1.025

D 0.9125 0.4 0.9625 0.8 0.95 0.975 0.975

E 0.8625 0.25 0.7

F 0.55 0.7

Figura 3. Compuestos orgnicos presentes en la especie Casuarina sp. segn el diccionario

de productos naturales del sitio web www.dnp.chemnetbase.com
 Anlisis y discusin

a) Cromatografa en placa fina

Los distintos patrones de bandas obtenidos en las 7 diluciones realizadas durante la

experimentacin son producto de las interacciones moleculares entre los compuesto
fitoqumicos del extracto de confera, la fase estacionaria (la capa de slica gel de la placa) y
la fase mvil (disolvente o eluyente). Se puede observar en la tabla 3 que las placas eluidas
con los disolventes acetona, acetato de etilo, acetona-acetato de etilo (1:1), y hexano-
acetato de etilo (1:1), presentaron un patrn en el cual las bandas, que representan distintos
compuestos de diferente peso molecular y distinta naturaleza, tuvieron una resolucin pobre
(no lograron separarse por completo), y adems sobrepasaron el lmite superior marcado en
la placa (es decir, que la placa se ahog). Lo anterior probablemente ocurri debido a que el
eluyente era ms polar que la muestra, y por lo tanto los compuestos fitoqumicos se
desplazaron rpidamente y no se separaron adecuadamente, provocando que la resolucin
fuera pobre. Lo anterior se ve respaldado con los Rf calculados para esos eluyentes, ya que
estos tuvieron valores no ptimos, es decir, que se encontraban por encima del intervalo
ptimo, e incluso superiores a 1 (lo cual no es vlido para este mtodo de separacin, ya
que el valor ms alto que se puede alcanzar es Rf=1).

Por otra parte, los patrones de bandas obtenidos para los eluyentes hexano y hexano-
acetato de etilo (8:2) tuvieron una mejor resolucin (las bandas estaban ms separadas
entre s, aunque esta resolucin tampoco tuvo coeficientes de retencin dentro del intervalo
ptimo. Probablemente se obtuvo este resultado puesto que los eluyentes eran de
naturaleza no polar (para el caso del hexano), o poco polar (para el caso de la mezcla
hexano-acetato de etilo), por lo que tuvieron una mayor afinidad con los compuestos
fitoqumicos presentes en la muestra, y por lo tanto la resolucin fue mejor. Aunque la
resolucin tampoco fue ptima para estos disolventes puesto que solo algunos de los
valores de Rf entraban dentro del intervalo ptimo, se puede argumentar al observar las
fotografas y los valores de los coeficientes de refraccin, que la mejor resolucin se produjo
con el eluyente hexano-acetato de etilo en una proporcin 8:2, y por lo tanto se deduce que
es el disolvente ptimo.

Cabe destacar que en casi todas las eluciones (excepto en la elucin con acetato y hexano-
acetato de etilo (2:8)), se observaron bandas con el mismo valor de Rf, lo cual podra
significar que en ambos carriles se encontr el mismo compuesto que tuvo las mismas
interacciones con la fase mvil y la fase estacionario, y por lo tanto exhibi el mismo
desplazamiento. Las bandas E y F o las bandas C y D (slo en las fases mviles de hexano
y hexano-acetato de etilo 8:2) son ejemplos de esta afirmacin.

Entre los compuestos que se esperaba encontrar en el extracto se encuentran el cinamoil,

que es un derivado del cido cinmico de naturaleza anfiptica, el alnusdiol, que es un
alcohol y se podra considerar como un compuesto poco polar, olanenodioles, triterpenoides
de naturaleza mayormente polar, y monosacridos derivados de glucosa de naturaleza
polar. as pues, se deduce las bandas correspondientes a las eluciones con disolventes no
polares como el hexano y la mezcla hexano-acetato de etilo (8:2) separaron los
componentes no polares del etracto tales como los olanenodioles o el anusdiol.

Conclusin

La cromatografa, ya sea en placa fina o en columna, es un mtodo de separacin y

caracterizacin de compuestos orgnicos bastante til en el campo de la biologa. A pesar
de que la cromatografa no implica un procedimiento que requiera de mucha experiencia
para ser realizado, si demanda una gran cantidad de tiempo ya que es un proceso
laborioso. por este motivo, no fue posible concluir las sesiones experimentales como se
indicaba en el protocolo, obteniendo as resultados poco concluyentes.

Segn la hiptesis que planteamos, se esperaba encontrar en el extracto de confera los

compuestos fitoqumicos indicados en la figura 3: al ser expuestos a eluyentes polares
como al acetato de etilo o la acetona, se esperaba separar compuestos igualmente polares
como los derivados de la glucosa o el cinamoil; en cambio, al utilizar compuestos no polares
o poco polares como eluyentes (como el hexano, o el hexano-acetato de etilo), se esperaba
que los compuestos no polares o poco polares como los triterpenoides o el alnusdiol se
desplazaran a lo largo de la placa. no obstante, ya que no se terminaron de correr las
placas correspondientes para aislar y determinar la pureza de los compuestos encontrados
en el extracto, se concluye que la hiptesis propuesta no puede ser aceptada o refutada.

Referencias
Webbook.nist.gov. (2017). trans-Cinnamic acid. [online] Disponible en:
http://webbook.nist.gov/cgi/cbook.cgi?ID=140-10-3&Units=SI [Accesado el 8 Jun. 2017].
Sciencedirect.com. (2017). On the origins of triterpenoid skeletal diversity - ScienceDirect.
[online] Disponible en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0031942203006927?via%3Dihub
[Accesado el 8 Jun. 2017].
Albtechnology.com. (2017). Alnusdiol | CAS Number: 56973-51-4 - ALB Technology
Limited. [online] Disponible en: https://www.albtechnology.com/alnusdiol-cas-56973-51-
4.html [Accesadol e 8 Jun. 2017].
Nutricin Personalizada. (2017). Fotoqumicos, los componentes qumicos de las plantas.
[online] Disponible en: https://despersonalizacin.wordpress.com/2010/07/27/fitoquimicos/
[Accesado el 8 Jun. 2017].
Dnp.chemnetbase.com. (2017). Dictionary of Natural Products. [online] Disponible en:
http://dnp.chemnetbase.com/dictionary-
search/results.do?id=12134677&props=&struct=start&disp=&si= [Accesado el 8 Jun.
2017].