PREGUNTAS N1

a) Indique las reacciones involucradas en la transdesaminacin de alanina. Cmo

ser la velocidad de la transdesaminacin de alanina en el estado de saciedad?
Justifique.
b) En qu reaccin participa el esqueleto carbonado que se puede obtener a partir de
la transdesaminacin de la alanina? Seale la reaccin involucrada, sustratos,
cofactores y productos de esta reaccin
c) Cmo se regula la actividad de la enzima mencionada en el tem (b) en estado de
ayuno? Justifique.
d) Seale los principales destinos metablicos de los productos que se obtienen a
partir de la reaccin mencionada en el tem (b).

RESPUESTAS
a) alanina + alfa-cetoglutaratoglutamato + piruvato(transaminasa), y luego glutamato
+ NADP+ (o NAD+)NH3 + alfa-cetoglutarato + NADPH (o NADH) + H+ (glutamato
deshidrogenasa, GDH). En saciedad: los niveles de ATP (o GTP) aumentados inhiben
alostricamente a la GDH, por lo tanto la transdesaminacin estar inhibida.
b) Reaccin catalizada por la Piruvato Deshidrogenasa: piruvato + CoA +
NAD+Acetil-CoA + NADH + H++ CO2. Cofactores: pirofosfato de tiamina, cido
lipoico, NAD+, FAD, Coenzima A. Alternativamente: Reaccin catalizada por la
piruvato carboxilasa: piruvato + HCO3-+ ATPoxaloacetato + ADP + Pi (biotina)
c) En ayuno: La actividad de la piruvato deshidrogenasa estar inhibida porque la
enzima se fosforila por la quinasa (PDK) que se activa por AcCoA, ATP y NADH,
adems el AcCoAy el NADH inhiben alostricamente a la PDH. La enzima piruvato
carboxilasa se activa por el modulador alostrico Ac CoA, cuyos niveles se
incrementan en el ayuno.
d) El producto de la actividad de la piruvato deshidrogenasa, el Acetil CoA puede:
oxidarse completamente en el Ciclo de Krebs, combinarse con oxaloacetato para
formar citrato que se utiliza para la sntesis de AG, puede formar cuerpos cetnicos. El
NADH se reoxidar en la cadena de transporte de electrones y el CO2 se eliminara por
la respiracin El producto de la piruvato carboxilasa, el oxaloacetato se utiliza para la
gluconeognesis.
PREGUNTA N2
a) Indique todas las enzimas involucradas en la reduccin de la ubiquinona
b) Explique el efecto de la oligomicina sobre el consumo de oxgeno
c) Explique por qu se pueden formar radicales libres en la cadena de transporte de
electrones. Qu compuestos no enzimticos pueden regular la concentracin de
estas especies en la mitocondria?
d) Dados los potenciales de reduccin estndar de las siguientes hemirreacciones:
R=1,98 cal/mol. K F= 23062 cal/mol.V Piruvato + 2 H+ + 2 e- lactato E = -0,185 V
NAD+ + 2 H+ + 2 e- NADH + H+ E = -0,320 V Para el caso en el cual la
temperatura es 37 C y las concentraciones intracelulares son [piruvato] = 0,05 M
[NAD+] = 0,15 M [lactato] = 0,05M Escriba la reaccin de reduccin del piruvato y
calcule la concentracin intracelular de [NADH] cuando la reaccin se encuentra en el
equilibrio.

RESPUESTAS
a) Complejo I (NADH deshidrogenasa), Complejo II (Succinato Deshidrogenasa),
Glicerol 3-fosfato deshidrogenasa, Acil-CoA deshidrogenasa.
b) La oligomicina bloquea la entrada de protones a la matriz mitocondrial mediante la
ATP sintetasa, y por lo tanto inhibe la sntesis de ATP. Como consecuencia, aumenta
el gradiente de H+ hasta que la cadena no puede seguir transfiriendo ms protones
hacia el espacio intermembrana y por lo tanto se frena el consumo de oxgeno.
c) Los radicales libres se pueden formar en aquellas reacciones donde se transfieren
electrones en forma individual. El principal radical libre que se puede formar en la
cadena de transporte de electrones es el anin superxido, en el proceso de reduccin
del oxgeno molecular. Durante la reduccin de la molcula de oxgeno a agua se
produce ganancia de electrones en cuatro etapas, la primera de ellas genera el radical
superxido mientras que las transferencias de los dos siguientes electrones producen
la especie reactiva perxido de hidrogeno y el radical hidroxilo. Los compuestos no
enzimticos capaces de regular la concentracin de estas especies son la vitamina E y
el glutatin.
d) Respuesta: Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+ G = 0 E = 0 E = E + RTln
[oxidado] n F [reducido] -0,185 V = -0,320 V + 1,98 cal/mol. K. 310K .ln y 2. 23062
cal/mol.V -0,185 V = -0,320 V + 0,013 .ln y -0,185 V + 0,320 V = ln y
0,013 10,38 = ln y y= 32208=0,15M y entonces X= 4,6 10-6M X Tambin se acept el
clculo de la concentracin de NADH utilizando la ecuacin de DG. Se tuvo en cuenta
el procedimiento seguido ya que los valores pueden cambiar segn la aproximacin
utilizada.

PREGUNTA N3 Con respecto al trabajo prctico de determinacin de los parmetros

cinticos de la ureasa, responda:
a) Qu informacin se obtiene cuando Ud. incub una determinada concentracin de
sustrato en presencia de la enzima durante diferentes intervalos de tiempo?
b) Represente en un mismo grfico los resultados que Ud. debera haber obtenido a
partir de las mediciones de absorbancia a distintos tiempos de incubacin,
comparando la concentracin ms baja de sustrato con respecto a la ms alta.
c) Cmo transform los valores de absorbancia en los de concentracin de
amonaco?
d) Si la temperatura del bao de incubacin hubiera sido menor que la deseada (20C
en lugar de 37C), qu resultado diferente de los que calcul, hubiera obtenido en
esta condicin? Justifique.

RESPUESTAS
a) Se realizan incubaciones por distintos tiempos para cada concentracin de sustrato
con el fin de determinar la velocidad inicial de la reaccin (para cada concentracin de
sustrato), que se obtiene a partir de la tangente al origen de la curva de [Producto] en
funcin del tiempo.
b) Grfico: Diferencias entre menor y mayor concentracin: i) en el punto final: es
mayor la cantidad de producto formado a partir de ms sustrato y ii) en la pendiente
inicial: es mayor cuanto ms sustrato inicial haya.
c) En el TP lo hicieron con el coeficiente de extincin molar e (aplicando la ley de Beer
donde A= e b c, donde c=concentracin y b, una constante) pero tambin podran
decir que se usa una curva de calibracin.
d) El parmetro cintico que vara con la temperatura es la Vmax