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v12n3p214-226
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Unesp, Botucatu, SP, Brasil, rodrigorepke@hotmail.com, sihelio@agronomo.eng.br, carloscjs82@gmail.com,
sjbicudo@fca.unesp.br
RESUMO - Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do uso da bactria diazotrofica Azospirillum brasilense
inoculada via sementes em associao com doses de nitrognio no desenvolvimento de plantas de milho. A pesquisa
foi composta por um ensaio com delineamento experimental de blocos ao acaso, com quatro repeties, em esquema
fatorial duplo. O fator 1, dois nveis: sem e com aplicao da soluo da bactria Azospirillum brasilense nas sementes;
e o fator 2, seis doses totais de nitrognio: zero, 80, 105, 130, 155 e 180 kg ha-1. As avaliaes morfolgicas da planta
e da espiga foram realizadas aos 20, 40, 60, 80 e 100 dias aps a emergncia. A aplicao da bactria diazotrofica
Azospirillum brasilense via soluo nas sementes, acompanhada ou no de doses de nitrognio sinttico, no interfere
no desenvolvimento de plantas e na produtividade da cultura do milho. A adoo desta prtica no substitui o uso
de fertilizantes nitrogenados e tampouco permite a reduo da dose. A adio de fertilizantes nitrogenados promove
maior desenvolvimento das plantas, com aumento da produtividade.
Palavras-chave: Zea mays; fixao biolgica de nitrognio; adubao nitrogenada.
ABSTRACT - This study aimed to evaluate the effect of the use of diazotrophic bacterium Azospirillum brasilense
inoculated to seeds in combination with nitrogen on the development of corn plants. The experiment was carried out
in field using a randomized block design in a double factorial arrangement with four reapplications.. The factor 1: with
and without the bacterium application in the seed; and factor 2: six nitrogen doses: 0, 80, 105, 130, 155 and 180 kg ha-1.
The trangenic maize hybrid 2B587 Hx was used. The morphological evaluations of plant and ear were done at 20, 40,
60, 80 and 100 days after emergence (DAE). Grain yield was measured at 115 DAE. The application of diazotrophic
bacterium Azospirillum brasilense solution via the seeds, with or without synthetic nitrogen did not interfere with plant
development and yield of maize. The adoption of this practice does not replace the use of nitrogen fertilizers nor allows
dose reduction. The addition of nitrogen fertilizers promotes greater plant growth and increased productivity.
Key words: Zea mays; biological nitrogen fixation; nitrogen fertilization.
O milho (Zea mays L.) uma cultura mun- diazotrficos, fixadores de N, em associaes
dialmente importante em virtude de sua diversi- que, com o passar do tempo, sofreram especifi-
dade de utilizao, da extenso da rea cultivada caes, produzindo relaes muito estreitas entre
e de sua elevada capacidade produtiva. Os maio- a planta e a bactria. Dentre os microorganis-
res produtores mundiais so os Estados Unidos, mos fixadores de N encontrados em associaes
a China e o Brasil. Porm, o manejo inadequado com razes de gramneas, as espcies do gnero
da adubao ainda um dos principais fatores que Azospirillum constituem um dos grupos mais estu-
contribuem para que no ocorra aumento da pro- dados (Hartmann & Baldam, 2006).
dutividade (USDA, 2011). Esses microorganismos pertencem sub-
uma cultura exigente em nutrientes, prin- classe das proteobactrias, a qual comporta um
cipalmente o nitrognio (N), cuja deficincia pode grande nmero de bactrias simbiticas e associati-
reduzir entre 10% e 22% o rendimento de gro. vas a plantas, tais como Rhizobium, Bradyrhizobium,
As plantas deficientes em N apresentam amarele- Agrobactetirium e Gluconacetobacter. Essas bac-
cimento das folhas mais velhas, seguidas de clo- trias so gram-negativas de vida livre, com meta-
rose generalizada e perda foliar. Em alguns casos, bolismo de carbono e N bastante versteis, confe-
podem ser observadas deformaes nas pontas das rindo-lhes competitividade durante o processo de
espigas (Subedi et al., 2009). colonizao. Utilizam no seu metabolismo fontes
A maioria dos solos das regies tropicais de N como amnia, nitrato, nitrito, aminocidos e
deficiente em N e, geralmente, apenas 50% do nitrognio molecular. A forma de ao de bactrias
N-fertilizante aplicado nesses solos aproveitado Azospirillum ainda no foi totalmente compreen-
pelas plantas, sendo o restante perdido por lixivia- dida. At o momento, sabe-se que possuem capa-
o e volatilizao, entre outras causas. O aumento cidade de fixar N atmosfrico quando associadas
da demanda por fertilizantes nitrogenados, aliado com gramneas, podendo atuar na solubilizao do
ao seu elevado custo, tem direcionado as pesquisas fosfato inorgnico. O Azospirillum spp. apresenta
para o processo de fixao natural (Saikia & Jain, ampla distribuio nos solos tropicais e subtropi-
2007). cais (Elmerich & Newton, 2007).
Na natureza, alguns organismos procario- A principal barreira utilizao do
tos conseguem assimilar o N atmosfrico e trans- Azospirillum na cultura do milho tem sido a incon-
form-lo em NH3, processo chamado de fixao sistncia dos resultados de pesquisa, que podem
biolgica, realizado atravs do complexo enzim- variar de acordo com a cultivar, as condies eda-
tico nitrogenase. A fixao biolgica pode ser res- foclimticas e a metodologia de conduo da pes-
ponsvel por aproximadamente 65% do total de N quisa (Bartchechen et al., 2010).
fixado na Terra, sendo, assim, o segundo processo Assim, objetivou-se avaliar o efeito do uso
biolgico mais importante depois da fotossntese da bactria diazotrfica Azospirillum brasilense
(Cantarella, 2007). inoculada via sementes em associao com doses
Nas razes de muitas plantas cultivadas, de nitrognio no desenvolvimento de plantas de
existem populaes ativas de microorganismos milho.
TABELA 1. Tratamentos aplicados na implantao e nos estdios fenolgicos quatro e seis folhas totalmente
estendidas V4 e V6, respectivamente, em ensaio de campo com hbrido de milho 2B587Hx.
Soluo de Doses de Nitrognio kg ha-1
Trat. Azospirillum Cobertura
brasilense* Total Implantao
V4 V6
1 Sem Zero Zero Zero Zero
2 Com Zero Zero Zero Zero
3 Sem 180 30 80 70
4 Com 180 30 80 70
5 Sem 155 30 80 45
6 Com 155 30 80 45
7 Sem 130 30 80 20
8 Com 130 30 80 20
9 Sem 105 30 75 Zero
10 Com 105 30 75 Zero
11 Sem 80 30 50 Zero
12 Com 80 30 50 Zero
Nmero de bactrias por ml = 2.10
* 8
com e sem aplicao de Azospirillum brasilense. feita de acordo com as metodologias de Raij et al.
Os parmetros morfolgicos da planta, os compo- (2001), disposta na Tabela 2.
nentes da espiga e a produtividade foram avaliados No tratamento das sementes com a soluo
atravs da correlao simples de Pearson. de bactrias fixadores de nitrognio, foi aplicada
Os dados climatolgicos relativos ao per- a dose recomendada pelo fabricante, equivalente
odo experimental de dezembro de 2010 a abril de a 100 ml do inoculante comercial ha-1 do produto
2011, perodo no qual se deu o desenvolvimento da Masterfix Gramneas Lquido, na concentrao de
cultura do milho, esto apresentados na Figura 1. 2.108 bactrias ml-1. Minutos antes da semeadura,
O solo da rea experimental foi classificado foram aplicados 3,06 ml do produto comercial em
como Latossolo Vermelho distrofrrico de textura 1.800 sementes, resultando na mdia de 340 mil
argilosa (Embrapa, 1999), com relevo suave ondu- unidades formadoras de colnia por semente. Para
lado e com boa drenagem. A rea foi anteriormente tanto, foram utilizados sacos de plstico onde as
cultivada com milho no vero e aveia preta no in- sementes, previamente contadas, receberam o pro-
verno. O preparo do solo foi realizado atravs de duto. Para homogeneizao da distribuio da solu-
arao e gradagem, grade aradora com 10 discos de o, as embalagens foram agitadas por 5 min aps
26 polegadas e grade niveladora com 32 discos de a aplicao do produto. As sementes inoculadas
18 polegadas, e a caracterizao qumica do solo, no foram tratadas com fungicidas e inseticidas.
TABELA 2. Resultados da anlise qumica do solo da rea experimental nas camadas de 0-20 e 20-40 cm de
profundidade, amostrados antes da instalao do experimento.
a concentrao bacteriana terica foi de aproxima- pocas de avaliao para doses de N superiores a
damente 340 mil unidades formadoras de colnia 105 kg ha-1 (Figura 2C). Os maiores valores de rea
semente-1, bem superior, portanto, ao mencionado foliar foram registrados aos 60 DAE (florescimen-
por Arsac et al. (1990). Neste caso, a ausncia da to), diminuindo a partir dessa fase, independente
resposta inoculao pode estar relacionada ao ex- do tratamento.
cesso de unidades formadoras de colnia. O aumento do teor de N disponibilizado s
Outro fator seria a diminuio na propor- plantas proporcionou maior crescimento e aumento
o de diazotrficos no solo em virtude da adio da rea foliar. Folhas bem nutridas em N tm maior
do fertilizante nitrogenado. A adio de fertilizante capacidade de assimilar CO2 e sintetizar carboi-
nitrogenado altera a diversidade destas bactrias dratos durante a fotossntese, resultando em maior
(Bergamaschi, 2006). Hungria (2011), em tra- crescimento e durao da rea foliar. Na fase de
balho com plantas de milho inoculadas, salienta gro leitoso, a planta necessita apresentar teores
que, nos tratamentos que receberam 100% de N na de slidos solveis prontamente disponveis, ob-
forma mineral de ureia, o efeito da inoculao com jetivando a evoluo do processo de formao de
Azospirillum foi em geral anulado. gros. Assim, a fotossntese mostra-se imprescin-
Quanto ao efeito isolado das doses de N na dvel. Em termos gerais, considera-se como impor-
morfologia das plantas de milho, em todas as po- tante caracterstica condicionadora de produo a
cas de avaliao, foram observados efeitos quadr- extenso da rea foliar, que permanece fisiologica-
ticos nas massas de matria seca da folha (MMSF) mente ativa aps a emergncia das espigas (Castro
e matria seca do colmo (MMSC), com elevao et al., 2008).
das doses de nitrognio (Figura 2A e B). A deficincia de N pode acelerar a senescn-
Os resultados obtidos corroboram com ou- cia foliar devido ao retranslocamento de nitrognio
tros publicados, em que as respostas positivas so das folhas mais velhas para os pontos de cresci-
relacionadas ao acmulo de massa de matria seca mento, diminuindo a rea foliar fotossinteticamente
pelas plantas em funo da aplicao de doses de N ativa. Esse processo promove significativa queda no
(Arajo et al.,2004; Gomes et al., 2007). rendimento da cultura, principalmente pela reduo
Este e outros estudos disponveis na litera- do comprimento e do dimetro das espigas, peso de
tura evidenciam a estreita relao do crescimento espigas e de gros (Wolschick et al., 2003).
das plantas de milho com o suprimento de N. O A altura das plantas foi influenciada pelas
processo de crescimento do vegetal depende do N doses de N nas trs pocas avaliadas. Aos 20 dias
para realizao da sntese de protena, absoro i- aps a emergncia (DAE), o efeito foi linear, acompa-
nica, fotossntese, respirao, multiplicao e dife- nhando o aumento da dose de N. Nas demais pocas,
renciao celular, proporcionando uma vegetao foram observados efeitos quadrticos. A partir dos 40
verde e abundante, com aumento da folhagem e r- DAE, o crescimento em altura continuou sendo maior
pido crescimento (Okumura et al., 2011). para as plantas adubadas com N. No entanto, aumen-
Para a rea foliar fotossinteticamente ativa, tos da dose de N no resultaram em maior altura de
foram observados efeitos quadrticos em todas as planta aos 60 DAE (Figura 2D).
FIGURA 2. Anlise de regresso para matria seca da folha (A), matria seca do colmo (B), rea foliar (C),
altura de planta (D), dimetro de colmo (E) e matria seca da espiga (F) de planta de milho submetida a seis
doses de nitrognio, zero, 80, 105, 130, 155, 180 kg ha-1 em cinco pocas de avaliao: 20, 40, 60, 80 e 100
dias aps a emergncia das plntulas (DAE).
TABELA 3. Correlaes simples de Pearson para produtividade versus componentes da espiga, matria seca
da espiga (M.S.E), dimetro do sabugo ( sabugo), dimetro da espiga ( espiga), comprimento da espiga
(C.E.), nmero de fileiras de gros (N.F.), massa de 1.000 gros (M.M.S) e produtividade na colheita.
Componentes da espiga
FIGURA 3. Anlise de regresso do comprimento de espiga (A), nmero de fileira (B), massa de 1.000 gros
(E) e produtividade de gros na colheita (D) submetida a seis doses de nitrognio: zero, 80, 105, 130, 155, 180
kg ha-1.
observada discorda dos resultados apresentados matria seca das espigas, influem de forma subs-
por Carmo et al. (2012), que obtiveram aumento tancial na produtividade de gros. Essa correlao
linear significativo dessa caracterstica, em res- foi observada no presente estudo (Tabela 3). Com
posta ao aumento das doses de N. Por outro lado, exceo do nmero de fileiras por espiga, todos
Tomazela (2005) no verificou efeito de doses os demais componentes avaliados apresentaram
crescentes de N no nmero de fileiras de gros por correlao positiva com a produtividade. A massa
espiga. Segundo este autor, a ausncia ou a exis- de 1.000 gros (M.M.S) e a massa seca da espi-
tncia de registro de efeito na literatura pode ser ga (M.M.E) foram os componentes que tiveram a
explicada pelas diferentes condies de solo e de maior correlao (0,930), seguidas do dimetro da
ambiente nas diferentes reas experimentais, alm espiga (0,818).
da grande variabilidade entre os hbridos dispon- Outras pesquisas, avaliando produtivida-
veis atualmente, quanto caracterstica estudada. de de milho com diferentes doses de N, resulta-
A deficincia de nutrientes aos 20, 40, ram em produtividades de gros aumentadas con-
60, 80 e 100 dias aps a emergncia das plntu- forme foram elevadas as doses de N. No ensaio
las pode reduzir o tamanho das espigas a serem de Arajo et al. (2004), a dose de 240 kg ha -1 de
colhidas (Figura 3). Quando no limitada por N proporcionou um aumento de 28% na produti-
outros fatores, a maior disponibilidade de N au- vidade de gros quando comparada ao tratamento
menta o potencial da planta em definir maiores testemunha, que recebeu a dose zero kg ha -1 de
nmero e massa de sementes por espiga (Pttker N. Amaral Filho et al. (2005) verificaram que o
& Wiethlter, 2004). aumento nas doses de nitrognio de zero kg ha -1
Nas figuras 3C e D, esto apresentadas as para 150 kg ha -1 proporcionou maior massa de
equaes de regresso das caractersticas da es- 1.000 gros e com efeitos positivos na produtivi-
piga, como massa de 1.000 gros, e da produtivi- dade de gros.
dade de plantas de milho, como consequncia das
doses de N aplicadas. Concluses
Para a massa de 1.000 gros e a produti-
vidade de gros, as respostas adubao nitroge- A aplicao da bactria diazotrofica
nada na literatura so variadas. Oliveira & Caires Azospirillum brasilense via soluo nas sementes,
(2003) verificaram aumento linear da massa de acompanhada ou no de doses de nitrognio sint-
1.000 sementes em funo do aumento das doses tico, no interfere no desenvolvimento de plantas e
de N e que tal componente de produo foi deci- na produtividade da cultura do milho.
sivo para aumentar a produtividade de gros. No A adoo desta prtica no substitui o uso
entanto, Casagrande & Fornasieri Filho (2002) de fertilizantes nitrogenados e tampouco permite a
no constataram efeito de doses e de pocas de reduo da dose.
aplicao de N na massa de 1.000 sementes. A adio de fertilizantes nitrogenados pro-
Segundo Cruz et al. (2008), os componen- move maior desenvolvimento das plantas, com au-
tes da espiga, alm de influenciarem na massa da mento da produtividade.
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