MANUAL DE

PRCTICAS DE
LABORATORIO

INGENIERIA ENBIOTECNOLOGA
INGENIERA GENTICA
 FICHA TECNICA

FICHA TCNICA
INGENIERA GENTICA

Fecha: 26-febrero-2016
Nombre del catedrtico: Abrahan Ramrez Gonzlez

Nombre de la prctica: Electroforesis

Clave:

Nmero de prctica: 3 Duracin en horas: 2

Una de las herramientas para anlisis de genes amplificados en la

Justificacin: tcnica de PCR, y confirmar la expresin del gen de inters.

Objetivos/Resultados de Obtener un amplicn de aproximadamente 200 pb, como

aprendizaje: resultado de una reaccin en cadena de la polimerasa.

Laboratorio donde se desarroll de la prctica:

LAB02
Actividades a desarrollar:
Preparar el gel de
agarosa 1X
Preparar el buffer de corrida
Correr el producto de PCR en el gel previamente preparado.
Visualizar el producto obtenido en un fotodocumentador.

Evidencia a generar en el desarrollo de la prctica:

Reporte de la prctica incluyendo el anlisis de los resultados
Obtencin de un amplicn.

COMPETENCIAS HABILIDADES

Obtencin de un producto de PCR

, anlisis e interpretacin de los resultados Manejo instrumental del
esperados, asi como aplicacin de la tcnica laboratorio, grado biologa
de electroforesis. molecular
Preparar geles de agarosa.
Realizar la separacin del DNA en

geles de agarosa por

Electroforesis.
Elabor: Abrahan Ramrez
Gonzlez Revis: Dra.Rosaura Aparicio Fabre
INTRODUCCIN
El alumno investigar la introduccin, aplicacin de los geles de agarosa.

OBJETIVO

Conocer el fundamento terico prctico de las herramientas electroforticas y sus aplicaciones

a nivel molecular.

MATERIALES REQUERIDOS POR EQUIPO (Cristalera)

CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES
1 Peine electroforesis

1 Micropipeta de 20 l

1 Micropipeta de 200 l

1 Micropipeta de 1 ml

1 Micropipeta de 10 l

Ca
1 ja con puntas para Estriles
micropipeta de 200 l
(amarillas
)

1
Probeta de 100 ml

1
Probeta de 500ml
Gradilla para tubos
1 eppendorf

Contened
1 or para desechos
 lquidos y slidos.

500ml por requipo

1 Matraz 200 250 ml Por equipo
 EQUIPO REQUERIDOS
NOMBRE ESPECIFICACIONES
Fotodocumentador Uno por grupo
Camra de
electroforesis Una por equipo

Fuente de poder Una por equipo o grupo ( si no hay suficientes)

Peine Uno por equipo

Cables Un par por equipo

Balanza Una por grupo
Microondas Uno por grupo
Pinzas para tomar el
matraz caliente Una por equipo

OTROS MATERIALES
REQUERIDOS (No suministrados
por el Laboratorio)
CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES
1 Cinta Adhesiva

1 tubo Producto de PCR

Tupper ( Suficiente espacio para

1 el gel)
1 Espatula

REACTIVOS REQUERIDOS
NOMBRE CANTIDAD S I R O

Marcador de peso molecular DNA Poe grupo

Bromuro de etidio Por grupo X

Buffer TAE 1 X (Buffer de corrida) X

500ml
Agua esteril

Buffer de carga para DNA Pr grupo X

Agarosa Por grupo x

 X Neurotxico,
trabajar
siempre con
guantes

S: Riesgo a la Salud I: Riesgo de Incendio R: Riesgo de reactividad O:especificaciones

Manejo y disposicin de los reactivos requeridos:

Los geles de agarosa y el buffer de corrida se pondrn en un contenedor especial

antes y despus de usarlo

Los residuos de los reactivos utilizados se inactivarn con carbn activado y se

almacenarn en el contenedor de txicos para su disposicin final de la UPEMOR.

Nombre del reactivo Datos importantes de la ficha tcnica

Incendio: combate,
derrame

Salud
Ambiente

Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se

utilizarn en el laboratorio.
Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se
utilizarn en el laboratorio

Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se

utilizarn en el laboratorio
 PROCEDIMIENTO O METODOLOGA

1.- Descongelar los productos de PCR

2.- Pesar la agarosa concentracin final 1X

3.- Aforar a 50ml con TAE 1X.
4.- Fundir la agarosa en el microondas 2 minutos.
5.- Enfriar la garosa fundida, temperatura que soporte la palma de la mano.
6.- Armar el kit de electroforesis (cmara, base y peine).
7.- Vaciar la garosa a la base de electroforesis.
8.- Esperar a que solidifique la agaorsa
9.- Retirar el peine, evitando romper el gel.
10.- Preparar el buffer de corrida 500 ml a 1X.
11.- Colocar el buffer de corrida a la cmara de electroforesis, donde se encuentra el gel para correr, hasta
cubrir totalmente el gel.
12.- Cargar el Marcador de peso molecular en el gel.
13.- Mezclar el buffer de carga con el producto de PCR.
14.- Cargar la mezcla el producto de PCR en el gel de agarosa.
15.- Colocar los cables respectivamente, segn las propiedades del ADN.
16.- Prender la fuente de poder y programar el tiempo de corrida a 80 volts por 40 minutos.
17.- Pasado el tiempo de corrida, retirar el gel y teirlo con Bromuro durante 5 minutos.
18.- Prender el fotodocumentador.
19.- Retirar el gel del bromuro de etidio y colocarlo en el fotodocumentador para ser visualizado por UV.
20.- Anlisis de resultados.
21.- Desechar el gel en el lugar respectivo.
 ___________________________
Cuestionario.

1. Mecanismo funcional molecular del bromuro de etidio

2. Como se deben colocar los cables y porque?

3. Cmo funciona el buffer de corrida?

REPORTE DE LA PRCTICA

El reporte deber incluir:

Introduccin
Diagrama de fluijo de la metodologa

Fichas tcnicas y de seguridad de los reactivos utilizados (de

TODOS)
Anlisis de los resultados
Conclusiones
Respuesta a los cuestionamientos realizados durante la prctica.
Cuestionario contestado
Discusin
Conclusiones
Referencias

EVIDENCIAS DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS DURANTE LA PRCTICA

En este espacio se ponen las observaciones, graficas, clculos matemticos dibujos,
datos, esquemas, tabla de datos, etc. Que se generaron durante el desarrollo de la
prctica.

DISCUSIN
 CONCLUSIN

BIBLIOGRAFA

El alumno la adicionar despus de investigar la introduccin, fichas tcnicas y

especificaciones de cada reactivo.