UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.

ZOOTECNIA

MICROSCOPIA Y OBSERVACIN DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCION
Uno de los principales equipos de usados por muchos aos en el laboratorio de
microbiologa es el microscopio, el cual es un instrumento de precisin que
consiste en una serie de lentes diseadas y acomodadas para proporcionar
buenas condiciones, las mximas aproximaciones posibles del objeto que se
desea observar.
La morfologa de los microorganismos puede examinarse de dos formas:
observando microorganismos sin colorear (en fresco) y observando clulas
muertas teidos por colorantes.
El examen en fresco permite conocer algunos de sus caractersticas (morfologa,
tamao, movimiento, etc.) sin embargo los microorganismos vivos son incoloros
y no se pueden visualizar fcilmente al microscopio ptico normal cuando se
encuentran suspendidos en agua, de ah que se utilizan colorantes para
aumentar su contraste con en el entorno que los rodea y hacerlos visibles.
Los colorantes son compuestos aromticos solubles en agua (generalmente en
sales) que contienen un ion orgnico coloreado y otro ion inorgnico.
Pueden dividirse en dos grupos cidos y bsicos el colorantes es acido si la
porcin coloreada tiene carga negativa, es decir, si tiene un anin coloreado
siendo en este caso repelido por estructuras de la clula que presenten la misma
carga, el caso de la superficie bacteriana y el colorante se denomina bsico si la
porcin coloreada es el catin, cargado positivamente y con afinidad por
estructuras de la clula con carga negativa, como la superficie celular.

2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.ZOOTECNIA

OBTETIVOS

reconocer de manera directa las diferentes partes del microscopio

compuesto
aprender a utilizar de manera correcta el microscopio
observar microorganismos vivos en el microscopio
estudiar su morfologa y agrupacin
apreciar los diferentes tamaos de los microrganismo eucariotas y
procariotas

MATERIAL Y METODOS

agua estancada o fruta en descomposicin

microscopio compuesto
laminas porta objetos
laminas cubre objetos
aceite de cedro
asa de siembra
cultivo de microorganismos

MTODOS

Reconocimiento de las partes del microscopio el alumno tratara de identificar con

ayuda del docente de prctica las principales partes del microscopio
observacin microscpica
Iluminar haciendo funcionar el dispositivo para que se encienda la fuente luz
Enfocar las muestras proporcionadas por el docente, usando el lente de menor
aumento, tiene un tope inferior que impide la ruptura de las lminas al observar
Intentar mantener los dos ojos durante la observacin aun as el microscopio sea
monocular
Para la observacin de microorganismos sin teir se pueden utilizar dos tipos de
preparaciones montaje hmedo y montaje en gota pendiente

2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.ZOOTECNIA

En el primer caso tomar una muestra de la gota depositada con asa de siembra
previamente esterilizado, el un porta objetos colocar sobre la misma un
cubreobjetos presionando suavemente
En el segundo caso depositar una gota de la muestra en el centro de un
cubreobjetos limpio y colocarlo invertido sobre el pocillo de portaobjetos
excavado de manera que la gota no se mueva ni tenga contacto con los lados l
el fondo de la depresin
tincin simple
Aquella en la que se utiliza un colorante que generalmente tie alas
microrganismos este tipo de tincin se denomina directa.

Tincin diferencial
Es aquella que emplea secuencialmente dos colorantes que permiten distinguir
los microorganismos, en funcin de diferencias de sus estructuras composicin
qumica

Tincin estructural
Se utiliza para estudiar y determinar estructuras que pueden estar presentes en
los microorganismos, en las tinciones estructurales solo se tie una parte de las
clulas
Se utiliza este tipo de tincin para reconocer la presencia de capsulas
endosporas y flagelos

TECNICA GENERAL
1. realizar una extincin con el asa de siembra esterilizada para ello se toma
una pequea gota de cada uno de los cultivos y se extiende en un
portaobjetos limpios si el cultivo procede de un medio slido, se coloca
una muestra de agua en el porta objetos y se mescla con una pequea
porcin de la muestra , hasta formar una pequea suspensin homognea
extendindola con el fin de obtener un buena pelcula. posteriormente se
deja secar al aire en la parte al ata del mechero, pero no se debe eliminar
el lquido calentando el porta objetos ala llama que pueden distorsionarse
de las clulas
2. fijar la muestra, la fijacin tiene como finalidad coagular el protoplasma de
las clulas y hacer que se adhieran al portaobjetos siendo el calor el
mtodo ms utilizado en la fijacin aunque pueden utilizarse otros
mtodos como el alcohol y otros compuestos qumicos

2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.ZOOTECNIA

3. realizar la tincin: es decir cubrir la preparacin con cuantioso agua y

dejarlo actuar por un tiempo
4. pasado el tiempo lavar con agua las preparaciones teidas para eliminar
el exceso de colorante , dejando caer el agua suavemente en un extremo
del portaobjetos se mantendr inclinado durante este proceso no se debe
dirigir el agua con demasiada fuerza sobre la preparacin para no
arrastrar la muestra
5. eliminar el exceso de agua del portaobjetos golpendolo ligeramente con
cuidado por el canto permitir que se saque la preparacin, bien utilizando
un papel secante
6. examinar la preparacin al microscopio con el objetivo de 100x colocando
previamente una gota de aceite de inmersin.

RESULTADOS:

En todos los frotis se logr observar con claridad, pues en algunos fue fallida la
tcnica, pero como opcin preventiva se realizaron 6 frotis, para que se lograra
observar por lo menos 1. De lo observado, se logr observar poco debido a que
no tomo debidamente la coloracin.

2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.ZOOTECNIA

DISCUSIN.

La clave de la realizacin de la tincin simple en seco, est en que al momento

de la fijacin, esta debe de ser cuidadosamente, pues se corre el riesgo de que
se queme la muestra; por otro lado tambin al momento de retirar el exceso de
azul de metileno con agua, debe ser de una manera lenta y cuidadosa, pues se
corre el riesgo de que se vaya con todo y muestra.

CONLUSION.

La observacin de bacterias mediante esta tcnica no es muy precisa pero se

logran algunas buenas observaciones con el lente 100x.

Se entiende por tincin (o coloracin) simple al teido de los microorganismos

aplicando slo. Una solucin colorante. Este tipo de tinciones pueden
ser positivas o negativas.

Una tincin simple es una solucin acuosa de un colorante bsico nico., el

propsito general de esta tincin es destacar por completo el microorganismo
completo para que se vanlas formas y las estructuras bsicas. El colorante se
aplica al extendido fijado durante un determinado tiempo y luego se lava y al final
se seca. En ocasiones se agrega una sustancia qumica a la solucin para
intensificar la coloracin, este aditivo se denomina mordiente.

OBSERVACIN:
Para hacer esta prctica en lo personal fue como una recapitulacin de lo ya
visto anteriormente en el lapso del curso, pero enfocndonos al ttulo de nuestra
practica primero para hacer cualquier tcnica, estudio, etc., se debe tener una
muestra del paciente, la tincin simple nos ayuda a ver la morfologa de cualquier
bacteria que se encuentra en ell cuerpo humano que nosotros mismos las
tenemos pero algunas son patgenas y hay otras que son normales.

2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.ZOOTECNIA

Anexos

2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA - E.A.P.ZOOTECNIA

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio
Escrito por Evelyn Rodrguez Cavallini, pginas: 51-55. Consultado el da: 07 de
marzo de 2012.
Introduccin a la microbiologa
Escrito por Gerard J. Tortora,Berdell R. Funke,Christine L. Case. Paginas
consultadas: 69-70 Consultado el da: 08 de marzo de 2012.