[UNIVERSIDAD SAN PEDRO] 28-06-17

PRACTICA N 5
COLESTEROL Y TRIGLICERIDOS

COLESTEROL

OBJETIVOS

Establecer la importancia del colesterol en el

organismo
Mencionar los estados patolgicos que
involucran al colesterol
Describir las pruebas clnicas empleadas
para la determinacin del colesterol.
Explicar la importancia del colesterol en el
metabolismo humano y su relacin con
diversas patologas.
Determinar la concentracin de colesterol en
una muestra biolgica mediante el mtodo enzimtico colorimtrico .

INTRODUCCION

El colesterol es una sustancia hidrfoba, insoluble en medio acuoso y por tanto

insoluble en el plasma sanguneo. El colesterol se sintetiza sobre todo en el
hgado, pero tambin en la piel, intestino, glndulas suprarrenales, el ovario, el
testculo, el rin y el pulmn. Todas las sustancias que en el organismo
producen cido actico pueden ser precursoras del colesterol (cidos grasos,
glucosa, algunos aminocidos, etc.). El colesterol es esencial para el
funcionamiento normal del organismo ya que es: Componente estructural
esencial de membranas de todas las clulas animales y partculas subcelulares
y que cumple con diversas funciones como son:

Estructurales en las membranas celulares

Sntesis de cidos biliares
Sntesis de hormonas
Transporte de lpidos a travs de las lipoprotenas
Precursor de vitamina D

Debido a la atencin que se ha dado a los alimentos libres de colesterol, es

interesante observar que el organismo produce la mayor parte del colesterol en
forma endgena. Las fuentes dietticas aportan tan slo de 150 a 300 mg
diarios mientras que el hgado sintetiza 1.5 g al da. De hecho el exceso de
carbohidratos y protenas de la dieta se utiliza para producir molculas de
acetato, que posteriormente sirven para producir colesterol y cidos grasos.
Los lpidos endgenos que genera el hgado son transportados posteriormente
en forma de lipoprotenas para su uso en todo el cuerpo. La circulacin
sistemtica de colesterol es posible gracias a la formacin de complejos
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solubles por unin a protenas, las lipoprotenas sricas y entre ellas las de tipo
(LDL) son las que representan el mayor porcentaje, con aproximadamente un
60-70% del total.

El colesterol es un constituyente primario de las lipoprotenas de baja densidad

(LDL), pero puede encontrarse tambin en lipoprotenas de alta densidad
(HDL) y en las de muy baja densidad (VLDL). Las diversas lipoprotenas y a
poprotenas asociadas, cuando se analizan directa o indirectamente, producen
datos diagnsticos tiles para el analista, ya que es posible determinar el riesgo
de coronariopata. Clnicamente es importante, ya que existe una relacin entre
la concentracin del colesterol plasmtico y la presencia de problemas
cardacos coronarios. Los mtodos analticos que se emplean actualmente
utilizan colesterolesterasa para el colesterol y permite examinar lotes grandes
de muestras con exactitud y rapidez. Las concentraciones sricas de colesterol
disminuyen en: desnutricin, esteatorrea, hepatitis, hipertiroidismo, personas
con infeccin aguda, anemia y cncer. Las concentraciones sricas de
colesterol aumentan en: hiperlipoproteinemia, cncer de la cabeza del
pncreas, hipotiroidismo, sndrome nefrtico, el tercer trimestre del embarazo,
predisposicin gentica

FUNDAMENTO DEL MTODO

El colesterol esterasa hidroliza los steres de colesterol presentes en la

muestra dando colesterol libre y cidos grasos, en una posterior oxidacin
enzimtica mediante el colesterol oxidasa se forma H2O2 y colesterona. El
H2O2 se valora por la reaccin Trinder, mediante un cromgeno, fenol y 4-
Aminoantipirina, en presencia de Peroxidasa, formando una quinonimina cuya
coloracin, encarnada, es proporcional a la concentracin de colesterol
presente en la muestra.
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MATERIALES

MUESTRA BIOLOGICA: Suero

3 Tubos de ensayo de 13 x 100
mm
1 pipetas de 1mL
1 pipeta de 10L
Puntas
Gradilla

REACTIVOS
Colesterol
Estndar

EQUIPOS
Espectrofotmetro

PREPARACIN

El paciente debe encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin

ejercicio vigoroso) y bajo su dieta ordinaria del da anterior a la prueba.
La muestra debe recolectarse en ayuno total excepto agua, durante un
lapso de 12 a 14 horas antes de la prueba.
La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el
cual no contiene anticoagulante.
Suero
La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 10 minutos para
separar el suero.
La estabilidad de la muestra es de una semana guardada, tapada y a 2-
8 C 3 meses congelada a -20 C.
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PARTE PRCTICO

1. Pipetear en tubos de ensayo

BLANCO STAND MUESTRA

ESTAND 10 ul
MUESTRA 10 ul
REACTIVO 1 ml 1 ml 1 ml

2. Mezclar e incubar 5 minutos a 37c o 10 minutos a temperatura

ambiente
3. Ajustar el espectrofotmetro a cero con el blanco de los reactivos
4. Leer a 505nm (500-550) la densidad ptica del estndar y de la muestra.
5. La coloracin ser estable durante 60 min.
6. Correr todas las muestras

CALCULOS

LINEABILIDAD DEL METODO

Hasta valores de 600 mg/dL o 15.4 mmol/L.

Para concentraciones superiores la muestra se diluye 1:2 con solucin
salina 0.9%, multiplicando el resultado por 2.

RESULTADOS

Rx MUESTRA VALORES DE REFERENCIA

COLESTEROL 142.6 mg/dl < 200 mg/dl
HDL 30.2mg/dl > 35 mg/dl
LDL 52.7mg/dl <130mg/ dl

VALORES NORMALES
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TRIGLICRIDOS

OBJETIVO

Determinar los niveles de triglicridos en

la sangre
Realizar la determinacin de triglicridos
sricos en una muestra biolgica con un
mtodo enzimtico.
Destacar la importancia de los
triglicridos en el metabolismo humano y
su relacin con diversas patologas.

INTRODUCCIN

Los triglicridos son steres de glicerol y cidos grasos que provienen de la

dieta o son sintetizados principalmente en el hgado. Los triglicridos se
transportan en el plasma en las lipoprotenas y son utilizados por el tejido
adiposo, msculo y otros. Su principal funcin es suministrar energa a la
clula. El mayor contenido de los triglicridos se encuentra en quilomicrones y
VLDL. Las concentraciones elevadas de triglicridos en suero pueden ser
debidas a alteraciones hepatobiliares, diabetes mellitus, nefrosis,
hipotiroidismo, alcoholismo, hiperlipoproteinemia familiar tipo IV (elevacin de
VLDL) y tipo V (elevacin de VLDL y quilomicrones), rara vez son tipo I
(elevacin exclusiva de quilomicrones). El diagnstico clnico no debe
realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe
integrar los datos clnicos y de laboratorio. No es tan clara la relacin entre la
enfermedad cardiaca coronaria (CHD) y la hipertrigliceridemia como con los
niveles de colesterol LDL. Sin embargo, por estudios de metanlisis se
consideran los triglicridos un predictor independiente al colesterol de CHD.

FUNDAMENTO DEL METODO

Los triglicridos son hidrolizados enzimticamente a glicerol, el cual, mediante

Glicerol cinasa y Glicerol-P-oxidasa, libera el perxido de hidrgeno que se
valora mediante la reaccin de Trinder, de acuerdo a las siguientes reacciones.
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MATERIALES

MATERIAL BIOLOGICO: Suero

3 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
1 pipetas de 1mL
1 pipeta de 10L
Puntas para
Gradilla
REACTIVO
Reactivo triglicrido
Estndar
EQUIPO
Espectrofotmetro

PREPARACION

El paciente deber encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin

ejercicio vigoroso) y bajo su dieta ordinaria del da anterior a la prueba.
La muestra debe recolectarse en ayuno total de 12 a 14 horas antes de
la prueba, excepto agua.
La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el
cual no contiene anticoagulante, (Suero)
Para separar el suero la muestra debe centrifugarse durante 10 minutos
a 3500 rpm

PARTE PRACTIVO

1. Pipetear en tubos de ensayo:

BLANCO ESTAND MUESTRA

ESTAND -------- 10 ul --------
MUESTRA -------- -------- 10 ul
REACTIVO 1 ml 1m 1 ml
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2. Mezclar e incubar 5 min a 37C o 10 min a temperatura ambiente.

3. Medir la densidad ptica a 505 nm (490-550), frente al blanco de
reactivos.
4. El color ser estable durante 30 min
5. Correr todas las muestras

CALCULOS

RESULTADO

Rx MUESTRA VALORES DE REFERENCIA

TRIGLICERIDOS 112.8 mg/ dl < 150 mg/dl

LINEABILIDAD DEL METODO

El mtodo es lineal hasta valores de 1000mg/dL (11.3mmol/L).

Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con
solucin salina 0.9%, multiplicando el resultado por 2.

VALORES NORMALES
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CMO ESTN ASOCIADOS LOS TRIGLICRIDOS AL COLESTEROL?

Cuando la persona come, los triglicridos se combinan con una protena en su

sangre para formar lo que se llama lipoprotenas de alta y baja densidad. Estas
partculas de lipoprotenas contienen colesterol. Para formar triglicridos en el
hgado el proceso es similar; el hgado toma los carbohidratos y protenas
sobrantes de la comida y los cambia a grasa. Esta grasa entonces se combina
con protena y colesterol para formar lipoprotenas de muy baja densidad, que
son liberadas al torrente circulatorio.

NIVELES ALTOS DE TRIGLICRIDOS:

Puede tener varias causas:

Exceso de peso: los triglicridos aumentan generalmente a medida que

aumenta el peso.
Consumo excesivo de caloras: Los triglicridos se elevan a medida que
se aumenta de peso o se ingieren demasiadas caloras, especialmente
provenientes de azcar y del alcohol. El alcohol aumenta la produccin
de triglicridos en el hgado.
Edad: los niveles de triglicridos aumentan regularmente con la edad.
Medicamentos: Algunas drogas como los anticonceptivos, esteroides,
diurticos causan aumento en los niveles de los triglicridos.
Enfermedades: La diabetes, el hipotiroidismo, las enfermedades renales
y hepticas estn asociadas con niveles altos de triglicridos. Entre los
grupos que deben vigilar con mayor cuidado su nivel de triglicridos se
encuentran los diabticos y las mujeres despus dela menopausia. Ms
de un 75% delos diabticos tienen los niveles de triglicridos altos y el
30% de las mujeres que han pasado por la menopausia sufren de este
mismo problema.
Herencia: algunas formas de altos niveles de triglicridos ocurren entre
miembros de una misma familia.

LOS NIVELES BAJOS DE TRIGLICRIDOS

Pueden deberse a:

Dieta baja en grasas

Hipertiroidismo
Sndrome de malabsorcin
Desnutricin

CONCLUSIN.

La prueba de triglicridos es un anlisis que se utiliza para determinar el nivel de estos

en la sangre, as como tambin para evaluar la funcin heptica y un posible riesgo
cardiovascular. Los triglicridos son transportados a todo el organismo para
dar energa o bien para ser almacenados como grasa.
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BIBLIOGRAFIA

Manual de prcticas de laboratorio de bioquimica

Manual de prcticas de bioquimica clinica
Bishop, ML. Qumica Clnica; Principios, procedimientos y correlaciones. 5 Ed.
McGrawHill, Mxico 2006.
Feduchi, CE, Blasco, CI, Romero, MCS, and Yaez, CE. 2011. Bioqumica Conceptos
Esenciales. 1st ed. Madrid: Mdica Panamericana.
Anderson, SC, and Cockayne, S. 1993. Qumica Clnica. Mxico, D.F.: Interamericana
McGrawHill.