UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

INFORME #2
SEGUNDO PARCIAL
DETERMINACIN DE PROTENAS POR EL MTODO DE
LOWRY (FOHN CICALTEAU)

AUTORES:

Franco Bravo Gustavo

Reyes Sosa Yajaira

Carriel Angie

Ramn Sandy

GRUPO: G1-B

DOCENTE: Msc. Nilda Cedeo Albn

FECHA: 11/07/2017

CICLO:

2017-2018
1. TITULO

Determinacin de protenas por el mtodo de Lowry (Fohn cicalteau)

2. MARCO TEORICO

El ensayo de protenas de Lowry es un ensayo bioqumico para la determinacin del nivel

total de protenas en una disolucin. La concentracin total de protenas se detecta por la
diferencia de color con una disolucin de muestra, que es medida utilizando tcnicas
de colorimetra.

La cuantificacin de protenas de manera precisa es esencial para todos los experimentos

relacionados a protenas en una multitud de temas de investigacin. Se han desarrollado
diferentes mtodos para cuantificar protenas totales, o alguna en particular en un ensayo
dado. Los mtodos de cuantificacin de protenas totales incluyen mtodos tradicionales tales
como la medicin de la absorbancia a 280 nm, los ensayos de Bradford y cido bicinconnico,
as como mtodos alternativos como el de Lowry o ensayos novedosos desarrollados por los
proveedores comerciales. Los proveedores comerciales tpicamente proveen un kit bien
diseado y conveniente para cada tipo de ensayo. Los mtodos para cuantificar protenas
individuales incluyen el ELISA, el Western blot y, ms recientemente, la espectrometra de
masas, entre otros.

El ensayo de Lowry, propuesto por Oliver H. Lowry en 1951, se basa en dos reacciones
qumicas. La primera reaccin es la reduccin de los iones de cobre en condiciones alcalinas,
los cual forma un complejo con los enlaces peptdicos (reaccin de Biuret). La segunda es la
reduccin del reactivo de Folin-Ciocalteu por el complejo cobre-enlace peptdico, el cual
causa un cambio en el color de la solucin a azulado con una absorcin en el rango de 650 a
750 nm [4]. La cantidad de protena en la muestra puede ser estimada utilizando una curva
de calibracin con una solucin de una protena estndar seleccionada, tal como la ASB.
Ventajas del mtodo de Lowry

Muy sensible. El rango es de 0,1 a 1 mg/mL.

Menos afectado por la turbidez de la muestra.
Ms especfico que la mayora de los otros mtodos.
Relativamente simple.
Se puede completar en 1 a 1,5 h.

Desventajas del mtodo de Lowry

El color vara con diferentes protenas (ms que el mtodo de Biuret).

El color no es estrictamente proporcional a la concentracin de protenas.
La sacarosa, lpidos, buffers fosfato, monosacridos y hexoaminas interfieren con la
reaccin.
Las altas concentraciones de azcares reductores, sulfato de amonio y compuestos
con sulfidrilo interfieren con la reaccin.

3. Fundamento de la prctica.

El mtodo de Lowry es el ms apropiado para concentraciones de protenas entre 0.01

1.0 mg/mL y se basa en la reaccin del Cu+, producido por la oxidacin del los enlaces
peptdicos, con el Reactivo de Folin-Ciocalteu (una mezcla de cido fosfotngstico y cido
fosfomolbdico en la reaccin de FolinCiocalteu).

Reactivo de Folin-Ciocalteu: caracterstica de grupos -OH reductores que, junto con los
complejos cuproproticos de la reaccin del biuret, reducen el reactivo de Folin, el cual vira
a color azul oscuro. El espectro de absorcin del reactivo de Folin reducido presenta un
mximo de absorcin a 700nm y su intensidad es proporcional a la de protenas que existe
en la muestra.

4. Objetivo general
Determinacin la cantidad de protenas utilizando el mtodo de lowry y la curva de
estandarizacin.
5. Objetivos especficos
Relacionar las absorbancias de los estndares o patrones con sus anotaciones en una
curva de estandarizacin.
Utilizar los clculos correspondientes para determinar la concentracin de la
muestra A.

6. Procedimiento.

Tubos 1 2 3 4 5 6 7
Estndar 100 200 300 400 500 -- -- ul
Muestra -- -- -- -- -- 500 -- ul
Agua 400 300 200 100 -- -- 500 ul
destilada
Reactivo 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 Ml
trabajo
Reposar 10min
Reactivo 250 250 250 250 250 250 250 ul
folin
Leer las absorbancias a 700nm, frente al blanco

7. Resultados

Muestra A: 25mg/dl

Clculos

500ul 50mg 500ul 50mg

100ul X = 10mg 300ul X= 30mg

500ul 50mg 500ul 50mg

200ul X = 20mg 400ul X = 40mg

500ul 50mg

500ul X = 50mg

TUBOS ABSORBANCIA
Tubo1 0.227
Tubo2 0.398
Tubo3 0.534
Tubo4 x
Tubo5 0.896
Tubo6 0.488

CURVA DE ESTANDARIZACIN
8. Conclusin:

Por medio del mtodo de lowry determinamos la presencia de protenas y analizamos la

absorbancia a cada uno de los tubos y mediante los clculos respectivos determinamos la
concentracin de la muestra.

9. Aprendizaje:

Aprendimos a cuantificar las protenas mediante el mtodo de lowry en mg.

10. Anexos:
11. Bibliografa:

http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0prelicin--00-0----0-10-0---0---0direct-10-
--4-------0-1l--11-es-50---20-about---00-0-1-00-0-0-11-1-0utfZz-8-
00&a=d&cl=CL1&d=HASH0177c0b33293a81c94025160.5.2.1.4

http://www.labome.es/method/Protein-Quantitation.html

https://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/4.pdf