Francisco Castillo Rodrguez 570 biotecnologa ambiental

Temperatura ptima: la temperatura es otro factor ambiental que influye y que

afecta el crecimiento del cultivo microbiano y celular; poniendo el juego, la propia
supervivencia de la clula o microorganismo. La temperatura afecta a las clulas
y microorganismos cultivados de dos formas distintas:

1. Conforme aumenta la temperatura, aumenta tambin la velocidad de

las reacciones enzimticas y el crecimiento se hace ms rpido;
2. Por encima de un mximo temperatura, se produce la
desnaturalizacin de las protenas celulares y la descomposicin de los
componentes celulares esenciales para mantener la vida, causando la
muerte de las clulas o microorganismos en cultivo.
La fabricacin de abono es mucho ms rpido ya que el proceso se completa en
dos a cuatro das despus del producto se hace reposar al menos Durante un
mes antes de ser comercializados en este caso se requiere alrededor de 560 de
materia orgnica la ventaja de este mtodo es que se puede planificar Cmo va
ocurrir el proceso Aunque siempre es deseable hacer un margen de la
temperatura termfilas para la eliminacin de patgenos y la aceleracin del
proceso de las altas temperaturas

Sistema de Control de pH
El sistema controla el pH del medio de cultivo; que es generada por los productos
de desecho y el metabolismo propio del cultivo celular o microorganismos. Un
sistema de control de acidez consta de:
Dos subsistemas mecnicos servo controlados

1. Sistema Dispensador de cido: que consta de:

Dispensador asptico de cido (Hall);

Filtro micro poro en lnea;
Manguera flexible resistente al cido;
Bomba peristltica;

1. Sistema Dispensador de lcali: que consta de:

Dispensador asptico de lcali (NaOH);

Filtro microporo en lnea;
Manguera flexible resistente al lcali;
Bomba peristltica;
Nota: recuerde que las mangueras flexibles se deben conectar al sistema
(biorreactor) mediante un tubo de adicin de reactivo para cada una de ellas.
Un sistema de control formado por:
 Controlador de pH: ordena y regula la accin del motor que controla a las
bombas peristlticas que suministran el cido y el lcali.
Un sistema de medicin: formado por:

Sensor de pH: sonda o probeta electroqumica que mide la acidez y dice

al controlador de pH, la situacin del medio.
pH ptimo: toda clula y microorganismo poseen un rango de acidez (pH)
dentro del cual, es posible su crecimiento con normalidad; dentro de ese
rango, existe un pH ptimo en el cual el crecimiento es mximo y muy bien
definido.
Al crecer los microorganismos en ambientes naturales, su rango de pH se
acerca a los valores del hbitat en que se desarrolla; el rango normal de acidez
en que pueden sobrevivir la mayora de los microorganismos es 2,0 pH 10,0.
La mayora de los hbitats tienen valores de pH de 5,9 por lo que, los
microorganismos que viven en esos hbitats tienen un pH ptimo equivalente
(5,9).
Algunos rangos de pH ptimo son: para levaduras entre 3,5 y 5,5; para
bacterias entre 6,0 y 7,5; para mohos, segn la cepa, se extiende entre 3 y 7;
para clulas en cultivo entre 6,0 y 7,5.
La forma exacta de la curva de acidez es muy variada y depende del
metabolismo propio de cada microorganismo o clula por lo que, no se ha
formulado un modelo general y simple para representarla.
Sistema de Control de Temperatura
Mantiene estable y dentro de un rango ptimo requerido por el cultivo para su
mximo crecimiento, la temperatura interna del sistema.
Un sistema de control de temperatura consta de:
Dos sistemas de intercambio trmico:

Intercambiador de Calor: dispositivo de intercambio trmico que genera

calor o absorbe el calor excedente. El intercambiador de calor de caso y
tubos es el ms usado y se define por su rea de transferencia de calor; a
mayor rea de transferencia de calor, mayor capacidad de absorber calor.
Serpentn: medio fsico por el cual el calor es absorbido o transmitido al
fluido. El tubo del serpentn debe ser de acero inoxidable 304 o 316
(preferiblemente) y se recomienda que sea delgado para una mejor
transferencia de calor.
Un sistema de control:

Controlador de Temperatura: sistema que ordena y regula la accin del

motor que controla las servo vlvulas que regulan el flujo de lquido fro o
caliente.
Un sistema de medicin:

Sensor de temperatura: sonda (termocopla) que mide la temperatura.

Un servo control:
 Servo Controlador de Temperatura: controla la temperatura a la que debe
abrir o cerrar la vlvula solenoide.
Un sistema regulador de paso de flujo:

Vlvula Solenoide: servo mecanismo actuador que regula el flujo (paso) de

lquido por la tubera o lnea de paso (abre o cierra el flujo del lquido)
Un sistema de conduccin de fluido:

Tuberas de Conduccin de Agua: el agua es fluido trmico por excelencia

para la transferencia de calor por conduccin a travs de las paredes
metlicas de la tubera. Estas deben ser de acero inoxidable.
Nota: las tuberas deben anclarse al cuerpo del biorreactor mediante un puerto
de entrada que es soporte hermtico que la sujeta a la superficie plana.
Temperatura ptima: la temperatura es otro factor ambiental que influye y que
afecta el crecimiento del cultivo microbiano y celular; poniendo el juego, la propia
supervivencia de la clula o microorganismo. La temperatura afecta a las clulas
y microorganismos cultivados de dos formas distintas:

1. Conforme aumenta la temperatura, aumenta tambin la velocidad de

las reacciones enzimticas y el crecimiento se hace ms rpido;
2. Por encima de un mximo temperatura, se produce la
desnaturalizacin de las protenas celulares y la descomposicin de los
componentes celulares esenciales para mantener la vida, causando la
muerte de las clulas o microorganismos en cultivo.
En este punto analizaremos nicamente el primer tem; ms adelante veremos
el segundo.
Para cada clula y microorganismo existe una temperatura mnima por debajo
de la cual, no hay crecimiento; es decir se inhibe el crecimiento celular.
Y una temperatura mxima por encima de la cul, la clula o microorganismo
muere.
Entre ese rango de temperaturas existe una temperatura ptima para la cual,
el crecimiento es el ms rpido posible.
Estas tres temperaturas son caractersticas de cada clula y
microorganismo y pueden variar ligeramente con la composicin del medio de
cultivo.
Clasificacin de los microorganismos de acuerdo a sus temperaturas
Tipo de Temp. Mnima Temp. ptima Temp. Mxima
microorganismo (C) (C) (C)
Psicrfilo -5 +5 12 - 15 15 - 20
Psicrtrofo -5 +5 25 - 30 30 - 35
Mesfilo 5 - 15 30 - 45 35 - 47
Termfilo 40 - 45 55 - 75 60 - 90
Determinacin de la Temperatura ptima de Crecimiento: se realiza desde
el punto de vista cintico, aplicando la Ley de Arrhenius para el crecimiento y la
muerte de clulas o microorganismos: dln (k)/dt = Ea/RT2; dln (k) = -
(Ea/R)*d(1/T) Donde: k = mx (para el crecimiento), k = mx (para la muerte),
T = temperatura absoluta, R = constante general de los gases ideales, Ea =
energa de activacin del proceso: EC para el crecimiento, Em para la muerte;
EC = 8 12.000 cal/g-mol K (crecimiento), Em = 50 100.000 cal/g-mol K
(muerte). La realizacin de la curva de crecimiento EC en conjunto a la curva de
muerte Em representada por su logaritmo ln (k) versus el inverso del tiempo 1/T
conduce a la determinacin grfica de la temperatura ptima.

Diseo de un Biorreactor de Tanque Agitado

Componentes de Diseo de un Biorreactor de Tanque Agitado
Para lograr el cumplimiento de objetivos descritos, un biorreactor de tipo tanque
agitado o CSTR (ver figura), debe contar con los siguientes componentes
bsicos en su diseo.

Cuerpo del Biorreactor: recipiente o contenedor que alberga al cultivo o

microorganismo. El contenedor es la frontera fsica entre el ambiente externo
contaminado y el ambiente interno controlado. Un tanque contenedor o
cuerpo del biorreactor se debe construir en acero inoxidable austentico, por
sus caractersticas qumicas y fsicas superiores; usualmente se prefiere los
aceros de las series 316.

Dimensionamiento del Cuerpo del Biorreactor: el primer paso en el diseo

de cualquier biorreactor es dimensionar el tamao del tanque o del cuerpo
del biorreactor; la prctica comn es, hacerlo a travs de variables
adimensionales: variables que representan una razn entre dos parmetros
con las mismas dimensiones. De esta forma, es posible escalar; es decir
cambiar de dimensin o tamao, el biorreactor y adaptarlo a otra escala de
proceso. Las principales relaciones adimensionales que se utilizan en
tanques agitados son: la razn de la altura de trabajo (H) al dimetro del
tanque (Dt): 3 H/Dt 1 en reactores tubulares (largos) esta relacin es de
4 - 6; la razn del dimetro del tanque (Dt) al dimetro de las hojas o aspas
(Da): Da/dt cuando el rgimen de agitacin es laminar y las
revoluciones del motor menores a 150 rpm, la relacin aumenta ; la razn
entre el dimetro de la hoja (Da) y el dimetro del espacio libre o hueco entre
el rotor y el cuerpo de la hoja (Dd): 2 Da/Dd 1 en turbinas axiales y hojas
planas esta relacin aumenta de 2 4; la razn entre el ancho de la hoja o
aspa (L) y el espesor o grosor de esta (W): 4 L/W 1 en turbinas axiales y
hojas planas esta relacin se invierte L/W 1/16. En la figura aparece
como gap (G) es el espacio libre que se deja cuando se utilizan baffles o
dispositivos amortiguadores de la turbulencia; normalmente el valor de G es:
1/12 1/16 del valor de J donde J es el ancho del baffle o amortiguador; J
por su parte se disea de acuerdo al dimetro del tanque (Dt) pero valor de
diseo es el mismo que el del espacio libre: 1/12Dt J 1/16Dt. (Hs), no
aparece en la figura, es la altura de techo o espacio libre que se deja entre la
superficie libre del lquido (H) y el techo o tapa del biorreactor, para facilitar
la operacin del sistema; el valor mnimo de la luz (Hs) es 10% de la altura
total del tanque (Ht) y el valor mximo es 50% Ht que representa el valor
mnimo de volumen de operacin . Finalmente, C es la altura de piso del
 agitador altura desde el fondo del tanque hasta el punto ms bajo de las
aspas u hojas; C se dispone sobre la base de la altura de la columna de fluido
(H), normalmente: C/H .

Sistema de Agitacin: tiene la funcin de generar la potencia necesaria para

producir una mezcla perfecta para el sistema de cultivo y producir un rgimen
de agitacin adecuado que, maximice la difusin de gases en el lquido y
minimice la produccin de esfuerzos cortantes y la presin hidrodinmica
local y global, para optimizar los fenmenos de transferencia de momentum,
calor y masa.
Un sistema de agitacin consta de cuatro partes mecnicas:
Motor Impulsor: suministra la potencia al eje de potencia; debe ser de corriente
alterna (a.c), preferiblemente de induccin y su potencia debe calcularse para
manejar el doble (200%) de la potencia terica requerida para agitar el fluido y el
cultivo a Re3000. Motor de Induccin (A.C): dado que un biorreactor debe
operar de forma continua durante todo el proceso de cultivo; se requiere un motor
capaz de resistir largos periodos de operacin continua y trabajo duro; por eso,
el motor debe ser de induccin de corriente alterna (a.c) y debe ser acorazado,
preferiblemente en acero inoxidable.
Eje trasmisor de la potencia: es una barra cilndrica de acero inoxidable 316L
y por lo general se disea en dimetros estndar: , , etctera para mayor
facilidad de ajuste a los estndares de motores a.c. Su longitud depende de la
profundidad del contenedor (tanque).
Acople del Eje Transmisor: ajusta y fija al motor, el eje transmisor de potencia.
Existen dos tipos de acople:
Acople-adaptador de tipo taladro: el puerto de entrada se acopla al eje del
motor por fijacin directa. El puerto de salida es un dispositivo que se adapta a
varios dimetros de broca y sujeta o abraza firmemente el eje transmisor de
potencia por presin y abrasin; similar al que utilizan los taladros mecnicos.
Acople-ajustador de tipo tornillo-rosca: el puerto de entrada se enrosca o se
fija firmemente al eje del motor. El puerto de salida es un dispositivo que abraza
el eje transmisor de potencia por un mecanismo de tornillo-rosca.
En ambos casos, el dimetro del puerto de entrada del acople que es la unin
de ste con el eje del motor debe ser de dimetro interno igual al dimetro
externo del eje del motor y el dimetro del puerto de salida que es dispositivo
sujetador del eje transmisor de potencia debe ser el mismo que el dimetro
externo del respectivo eje.
Puerto de Entrada del Biorreactor: se denomina puerto a la superficie fsica
sobre el cual se instala un dispositivo de entrada o salida al biorreactor, un
anclaje o un aparato mecnico o de medicin; el puerto es el medio por el cual,
se ajusta o fija, tal dispositivo o artefacto a la pared o superficie del tanque o del
biorreactor. Como se observa en la fotografa, el puerto de entrada es la tapa o
cara superior del tanque biorreactor y en donde se anclan o sujetan todos los
dispositivos y perifricos que se requieren para su operacin. Cada dispositivo
de anclaje o sujetador tambin un puerto menor cuyo dimetro externo es la
superficie externa total y cuyo dimetro interno es el dimetro externo del
dispositivo que sujeta. Algunos puertos tienen dos dimetros internos, cuando el
dispositivo que sujetan tiene dimetro externo y dimetro interno; por ejemplo,
los sensores o probetas medidores y el sello mecnico del eje del agitador.
Sello Mecnico: su funcin es triple: evitar la contaminacin, mantener
hermtico el sistema, servir de amortiguador de friccin. El sello mecnico
tambin debe permitir la esterilizacin in situ del biorreactor, mediante una lnea
de vapor sobrecalentado. Un sello mecnico, generalmente se disea en una de
dos configuraciones:
Cartucho rgido: que permite el rodamiento del eje de potencia a travs de
soporte de cuerpo rgido que sella y asla el paso de cualquier materia al interior
del depsito.
Cartucho flexible: que permite el rodamiento del eje de potencia a travs de un
soporte fijo al exterior pero flexible en el interior y que tambin sella y asla el
paso de contaminantes al interior del depsito.
En ambos caso el sello mecnico se especifica de acuerdo al dimetro eterno
del eje transmisor de potencia; el cual es el dimetro interno del puerto del sello
mecnico. Dentro de lo posible se recomienda el uso de sellos flexibles ya que
amortiguan mejor las vibraciones mecnicas del eje transmisor de potencia; la
desventaja es que esa flexibilidad obliga a cambiarlos ms frecuente, pues el
desgaste es mayor.
Eje Transmisor de Potencia: transmite la potencia del motor al impulsor, a
travs de, las hojas de agitacin. Existen ejes en los cuales ya vienen
incorporadas hojas o aspas de agitacin, se disean para operar en uno de dos
sistemas de flujo, segn sea, la orientacin espacial de las hojas o aletas:
Flujo axial: suministran mayor efectividad de mezclado (distribucin) y reducen
la potencia de mezclado requerida, al distribuir mejor la mezcla; sus hojas u
aspas son planas.
Flujo radial: generan mayor potencia de mezclado (turbulencia) y pueden
causar dao celular; sus hojas o aspas son del tipo hlice.
Impulsores: son los dispositivos que impulsan el fluido y el movimiento,
mediante hojas o aspas unidas al eje transmisor de potencia; pueden ser del tipo
mecnico (agitador) o hidrulico (turbina).
Agitadores: es un impulsor formado por hojas o aspas de agitacin conectadas
al eje transmisor de potencia; pueden tener una distribucin de flujo axial o radial.
Los propulsores de flujo radial pueden tener gran variedad de formas y diseos;
dentro de stos, las hlices son las que ms se utilizan.
Hlices: existen en tres diseos bsicos que dependen de la orientacin
espacial:
(a) Plano XY,
(b) Plano ZX,
(c) Plano ZY.
Cada orientacin (plano) describe una superficie curva que es determinada por
dos (2) de tres (3) ngulos de diseo:
(a) Plano XY, determina el ngulo de inclinacin (), este vara 15 45;
(b) Plano ZX, determina el ngulo de torsin (), este vara 16 32;
(c) Plano ZY, determina el ngulo de tensin (), este vara 15 45.
Como se observa en la figura:
(a) Hlices de superficie curva en el Plano XY estn determinadas por los
ngulos , ;
(b) Hlices de superficie curva en el Plano ZX estn determinadas por los
ngulos , ;
(c) Hlices de superficie curva en el Plano ZY estn determinadas por los
ngulos , .
Por su gran potencia y la turbulencia que generan, las hlices no se recomiendan
para cultivos de clulas sensibles; solo deben utilizarse para cultivos bacteriales
o micticos y a bajas velocidades de rotacin.
Turbinas: es un impulsor de flujo axial el cual opera como una centrfuga que
distribuye el flujo de lquido a travs de hojas planas, a todo el volumen de fluido.
El impulso axial ha demostrado ser la forma ms eficiente de diseo para reducir
esfuerzos cortantes e hidrodinmicos y disminuir la turbulencia y la potencia
requerida para homogenizar el mezclado; objetivo que se persigue en una
mezcla perfecta. Por eso se recomienda impulsores de flujo axial para cultivar
clulas sensibles o de membrana plasmtica. Dentro de stas, la turbina Rushton
(b) es el impulsor de flujo axial ms recomendado y ms eficiente para generar
una mezcla perfecta de alto perfil hidrodinmico, bajo en esfuerzos cortantes y
alto en distribucin.
Y una de control:
Control de Velocidad del Motor: los motores de induccin de corriente alterna
(a.c) tienen velocidades nominales de rotacin de 1800rpm o 3600rpm. Estas
velocidades son muy altas para los sistemas biolgicos causando la destruccin
de las clulas y microorganismos en cultivo. La velocidad de rotacin del motor
debe entonces reducirse a un mximo de 600rpm (revoluciones por minuto) para
que no cause dao celular. Usualmente se acopla a la salida de eje del rotor una
caja de reduccin de 1/3 o 1/6 para bajar la velocidad de rotacin a 600rpm.
Adicionalmente se coloca un control de velocidad que puede ser analgico o
digital al motor para un control ms fino y preciso de la velocidad de rotacin.
Agitacin y Mezclado
Relaciones de Potencia y Mezclado: conforme el dimetro de la hoja o aspa
(Dd) aumenta, tambin lo hace, la potencia (Pt) requerida para realizar el trabajo
de mezclado; la potencia de mezclado (Pm) es mayor porque el torque () se
acrecienta, recuerde que el torque es la relacin entre la fuerza (F) y el brazo de
palanca (r) y que, el brazo de palanca es el dimetro del aspa u hoja cuyo
momentum (mv) aumenta al aumentar la velocidad de rotacin (). As entonces,
cuando Dd es muy grande, debe disminuirse para reducir Pt; pero esto
ocasiona que Pm tambin se contraiga; as como la turbulencia excesiva. Caso
contrario ocurre cuando Dd es muy pequeo, debe aumentarse para mejorar
Pm y extender la turbulencia, ya que, en estos casos, es localizada (se acumula
alrededor de las aspas y hojas). Este fenmeno local que se conoce como
potencia fluida (Pf) provoca que el volumen de lquido que es afectado por la
turbulencia local (Rex) no sea suficiente para oxigenar los tejidos y clulas en
cultivo pues el Kla disminuye. Para que la Pf se transmita a todo el volumen de
operacin del fluido, es necesario que, se alcance el estado estacionario (EE) en
dicha operacin, y esto toma mucho tiempo lo que implica, un alto costo. La
mejor forma de combinar positivamente estos efectos hidrodinmicos que se
contraponen; es decir: bajar Pm y aumentar Pf es optimizar Dd. A esto se le
conoce como potencia ptima de mezclado (Pe) y se logra de dos maneras:

Colocar varias hojas o paletas (2-3) en dimetros (Dd) descendentes y

distribuidas a alturas equidistantes a lo largo de la altura de la columna de
fluido (H);
Colocar varias hojas o paletas (2-3) de igual dimetro (Dd) a alturas
equidistantes a lo largo de la altura de la columna de fluido (H).
La primera alternativa minimiza la potencia de mezclado requerida y maximiza la
potencia fluida al aprovechar mejor el gradiente de mezcla. La segunda aumenta
la potencia de mezclado y la potencia fluida pero tambin, la potencia requerida
y desaprovecha el gradiente de mezcla y difusin.
Utilizacin de Bafles: son una mejora muy utilizada ya que pueden instalarse
fcilmente en los sistemas de agitacin, disminuyen (deflectan) la turbulencia
ocasionada por las hojas o aspas del impulsor, rompen (disgregan) los cmulos
celulares y micelios que se forman en los respectivos cultivos y mejoran la
eficiencia de mezclado. La relacin ptima del dimetro del bafle (Db o J) al
dimetro de tanque (Dt) es: Db/Dt = 1/101/12. El nmero indicado de bafles es
4 para sistemas moderadamente agitados y 6 para sistemas turbulentos.