Universidad Industrial de Santander

Facultad de Salud
Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico
Programa de Microbiologa y Bioanlisis
Hematologa II
Gua de Laboratorio

Cecilia Salamanca Ojeda, Martha Lucia

Docentes
Snchez Jaimes y Ruth Stella Snchez Flrez.

DETERMINACION DE FIBRINOGENO

El Fibringeno es una glicoprotenina que se encuentra en el plasma y en los granulo

plaquetarios, es el factor de la coagulacin que se encuentra en mayor concentracin
plasmtica (200-500 mg/dl).
Cuando se produce un trauma o lesin vascular la trombina formada activa al fibringeno
convirtindolo en monmero de fibrina que se polimerizan espontneamente y luego son
estabilizados dando lugar a la malla insoluble de fibrina.
Niveles bajos de fibringeno pueden encontrarse en desordenes hereditarios tales como:
hipofibrinogenemia, afibrinogenemia, disfibrinogenemia y en otras circunstancias como
enfermedad Heptica, coagulacin intravascular diseminada y sndromes fibrinoliticos.
Niveles elevados pueden encontrarse en diabetes, enfermedad inflamatoria, etc.

FUNDAMENTO DEL METODO

El ensayo se basa en el mtodo de Claus, designado como procedimiento de referencia por
el NCCLS (Natural Commites for Clinical Laboratory Standards).
Cuando un exceso de trombina se adiciona a un plasma diluido, el tiempo de coagulacin
es inversamente proporcional a la concentracin de fibringeno plasmtica. El tiempo de
coagulacin obtenido se compara posteriormente con una preparacin de fibringeno
estandarizada.

REACTIVOS PROVISTOS
REACTIVO A: Viales que contienen Trombina liofilizada, una vez reconstituida equivale
aproximadamente a 100 unidades de trombina/ml.
REACTIVO B: Solucin de Imidazol 0.05 M, pH 7,3.
Calibrador: Vial con plasma liofilizado.

INSTRUCCIONES PARA EL USO:

El reactivo A, reconstituir con agua destilada segn las indicaciones de la Etiqueta, dejar
reposar por 30 minutos y luego mezclar suavemente, hasta lograr disolucin completa antes
de su uso. Despus de reconstituido puede durar 5 das refrigerado y 30 das congelado.
El reactivo B, viene listo para usar.
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Hematologa II
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MUESTRA:
Plasma obtenido a partir de sangre anticoagulada con Citrato de sodio a 3.8%.

PROCEDIMIENTO:
1. CURVA DE CALIBRACION:
CALIBRADOR SOLUCION B DILUCION CONCENTRACION
0,1 ml 0,4 1:5 -
0,1 ml 0,9 1:10 100%
0,1 ml 1,4 1:15 -
0,1 ml 1,9 1:20 -
0,1 ml 2,9 1:30 -

2. Precalentar 0.2 ml (200ul) de cada dilucin a 37 C por dos minutos. Se procesan por
duplicado..
3. Disparar el cronometro al agregar 0,1 ml (100 ul) del reactivo A reconstituido (No
precalentar el reactivo A) a las diluciones preincubadas y registrar el tiempo de formacin
del coagulo.
4. Calcular el tiempo de coagulacin promedio para cada dilucin, por duplicado.
5. Construir la curva de calibracin del fibringeno representando los tiempos de
coagulacin en funcin de la concentracin del fibringeno. Unir por una recta la mayora
de puntos representados. La recta debe contener por lo menos tres puntos consecutivos.
DILUCION REACTIVO B CALIBRADOR CONCENTRACION FACTOR
DE FIBRINOGENO DILUCION
1:5 0,4 0,1 ml * mg/dl X2=
1:10 0,9 0,1 ml * mg/dl X1=
1:15 1,4 0,1 ml * mg/dl X 0,67 =
1:20 1,9 0,1 ml * mg/dl X 0,5 =
1:30 2,9 0,1 ml * mg/dl X 0,33 =
*Concentracin de fibringeno indicada en el rotulo del calibrador
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El valor de Fibringeno de cada dilucin de la curva se determina multiplicando la

concentracin de fibringeno en el calibrador por el factor de dilucin. Por ejemplo, si en el
calibrador se indica un nivel de fibringeno de 260 mg/dl, entonces las diluciones 1:5, 1:10,
1:15, 1:20 y 1:30 tienen 520, 260, 173, 130 y 87 mg/dl respectivamente.

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS DE PACIENTES Y CONTROLES

1. Preparar diluciones 1:10 de los plasmas de pacientes y plasmas de controles normales,
bajos y altos, con el reactivo B.
2. Precalentar 0.2 ml de cada dilucin 37 C durante 2 minutos.
3. Rpidamente adicionar 0.1 ml del Reactivo A y registrar el tiempo de formacin del
cogulo.
4. Repetir la determinacin y promediar el resultado para cada muestra.

CALCULO DE LOS RESULTADOS:

Conocido el tiempo de coagulacin del paciente y los controles, ingresar estos valores a la
curva estndar e interpretar el valor de fibringeno para cada caso.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS:

Si el tiempo de coagulacin para la muestra es demasiado corto (Por ejemplo menor a 7
segundos) diluir el plasma 1:20 con el reactivo B y volver a realizar el procedimiento. El
resultado se multiplica por 2.
Si el tiempo de coagulacin para la muestra es demasiado largo (Por ejemplo mayor a 35
segundos) diluir el plasma 1:5 con el reactivo B y volver a realizar el procedimiento. El
resultado se multiplica por 0.5.

VALORES DE REFERENCIA:
El intervalo de valores observados en pacientes normales oscila entre 200400 mg/dl.

BIBLIOGRAFIA:
Inserto Fibringeno Wiener lab. Rosario, Argentina
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DETERMINACIN DE FACTOR VIII

SIGNIFICADO DIAGNSTICO
La determinacin de los factores de la coagulacin VIII, IX, XI y XII en plasma es indicada
para:
- Aclarar la causa de la prolongacin del PT PTT
- Diagnosticar los estados de deficiencia congenitos o adquiridos de estos factores
- Para distinguir entre disproteinemia y alteraciones en la sntesis de protenas (en
combinacin con mtodos inmunoqumicos).
La determinacin de la actividad de los factores VIII y IX sirve adems para controlar una
teraputica de sustitucin con concentrados del factor VIII o del factor IX para la hemofilia
A o B.

PRINCIPIO DEL MTODO

La deficiencia en uno de los factores del sistema intrnseco de la coagulacin conduce a la

prolongacin del tiempo de tromboplastina parcial (PTT). Para la determinacin de cada
factor se va amedir el PTT de una mezcla de plasma deficiente correspondiente con el
plasma del paciente. Un plasma de paciente, deficiente en un factor especfico, no est en
condiciones de compensar este factor en el plasma deficiente correspondiente, por lo cual
va a resultar una prolongacin del PTT.

La actividad del factor de la coagulacin en % de la norma, va a ser determinada sobre una

curva de referencia, la cual ha sido establecida por medio de dilucin de plasmas humanos
estndar o de un pool de plasmas normales mezclado con este plasma deficiente.

Los plasmas deficientes en los factores de la coagulacin son plasmas humanos,

liofilizados, con una actividad restante de factores VIII, IX, XI o XII < 1%. Los plasmas
deficientes van a ser preparados por inmunoadsorcin de plasmas normales y vienen libres
de antgenos del factor respectivo. El contenido de fibringeno se encuentra sobre 1 g/l y la
actividad de los otros factores de la coagulacin est sobre el 40% de la norma. Los
plasmas contienen manitol (20 g/l) como estabilizador.

PREPARACIN DE REACTIVOS
Plasma deficiente: Disolver el contenido de un frasco con 1 ml de agua destilada. Dejar en
reposo por lo menos 15 min., entre + 15 y +25 C y luego mezclar cuidadosamente por
agitacin suave (sinformacin de espuma). Agitar cuidadosamente una vez ms antes de
usar
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Estabilidad y almacenaje: El plasma deficiente, sin abrir, conservado a una temperatura

entre +2 y +8 C, es utilizable hastala fecha de vencimiento dada en la etiqueta.

Estabilidad y reconstitucin: Entre +15 y +25 C 8 horas y a -20 C 4 semanas.

El plasma deficiente, despus de reconstituido, puede congelarse y descongelarse una vez
sin que pierda su actividad de coagulacin. El plasma debe estar perfectamente cerrado y
congelarse lo ms pronto posible. La descongelacin se debe hacer a +37 C en mx. 10
min. El plasma no debe permanecer despus ms de 2 horas entre +15 y +25 C.

MUESTRA:
Plasma obtenido a partir de sangre anticoagulada con Citrato de sodio a 3.8%.

PREPARACIN DE LA CURVA DE REFERENCIA:

Se puede escoger entre plasma humano estndar o una mezcla de plasmas citratados
frescos de por lo menos 10 donantes sanos. Utilizando solucin tampn de Imidazol o
solucin tampn de dietilbarbiturato-acetato preparar las diluciones de acuerdo al siguiente
esquema y determinar los tiempos de coagulacin de acuerdo a Procedimiento:

En caso necesario se pueden preparar otras diluciones.

Graficar los tiempos de coagulacin encontrados (ordenadas) sobre papel logartmico

contra el correspondiente porcentaje de actividad del factor (abscisa). Los tiempos de
coagulacin son dependientes del principio de medida y por lo tanto del aparato de medida
de la coagulacin utilizado. Por esta razn, es necesario que cada laboratorio realice su
propia curva de referencia.
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PROCEDIMIENTO:
Antes de empezar con la medida diluir las muestras de plasma 1:5 en solucin tampn de
imidazol o en tampn dietilbarbiturato-acetato (llevar a temperatura ambiente entre +15 y
+25 C).

MUESTRA CONTROL
Plasma deficiente 100 l 100 l
Muestra diluida 100 l
Plasma control diluido 100 l
Reactivo PTT 100 l 100 l
Incubar a +37 C 2 min.
Cloruro de Calcio 100 l 100 l
Activar el cronmetro y determinar el tiempo de
coagulacin.

Pipetear en un tubo de ensayo precalentado a +37 C: Plasma deficiente 100 l, Muestra

diluida 100 l, Reactivo PTT 100 l Incubar a +37 C 2 min.
Solucin de cloruro de calcio (calentado a +37 C) 100 l. Al agregar la solucin de cloruro
de calcio activar el cronmetro y determinar el tiempo de coagulacin.

RESULTADOS
El contenido de factor de la coagulacin se obtiene leyendo en la curva de referencia en %
de la norma. Si el valor nominal dado para el plasma humano estndar no corresponde al
100% de la norma, si no por ej., al 95%, el resultado ledo se debe multiplicar por 0,95. Para
tiempos de coagulacin, los cuales correspondan a un contenido de factor de ms del 100%
de la norma, se necesitan otras determinaciones con diluciones mayores de las muestras
(por ej., 1:10). En la valoracin de estas muestras, el valor en % ledo en la curva de
referencia para esta dilucin, se debe multiplicar por un factor de correccin, por ej., para
una dilucin de 1:10 por el factor de correccin 2.

Rango de referencia
Factor VIII: 70 hasta 150% de la norma
Factor IX: 70 hasta 120% de la norma
Factor XI: 70 hasta 120% de la norma
Factor XII: 70 hasta 150% de la norma
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Cada laboratorio debe determinar su propio rango de referencia basado en el mtodo y en

el aparato de medida de la coagulacin utilizada.
Caractersticas del test
Rango de medida

El rango de medida para la determinacin de los factores VIII, IX, XI y XII se encuentra entre
1 y aproximadamente el 100%, pero en caso necesario puede extenderse hasta
aproximadamente el 200% usando una dilucin mayor de la muestra

BIBLIOGRAFIA

www.dadebehring.com