UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Escuela Farmacia y Bioqumica

ANLISIS BIOQUIMICOS Y CLNICOS I I

INFORMES DE PRCTICA

Docente :
Q.F. Dra Roca Laos, Maritza
Integrantes:
Allauja Gamonal, Henry

Mircoles 8 de Marzo del 2017

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ANTIBIOGRAMA

INTRODUCCIN

El antibiograma por el mtodo de difusin en

agar es una prueba en la que se enfrenta la
bacteria inoculada sobre la superficie de un
medio de agar con una solucin antibitica
absorbida en discos de papel de filtro. Este
mtodo est estandarizado y los halos de
inhibicin han sido obtenidos
correlacionndolos con las CMI y aparecen
en unas tablas. Hay varios factores que afectan al halo de inhibicin: la carga del
antibitico en los discos, la difusin del antibitico en el medio de cultivo, el tamao
del inculo bacteriano, la composicin y grosor del medio de cultivo, la velocidad del
crecimiento bacteriano y el tiempo de incubacin. Los discos de antibiticos son
adquiridos comercialmente. Deben contener la cantidad establecida de antibitico y
ser conservados a 4C protegidos de la humedad.

El inculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la escala de

McFarland, aproximadamente 10 8 UFC/ml y ser preparado en solucin salina
estril o caldo de cultivo.

OBJETIVOS DE LA PRCTICA

Determinar la sensibilidad a diversos antibiticos de un determinado

microorganismo
Comprender el concepto de antibitico y su especificidad de accin sobre
determinadas bacterias.
Conocer el concepto de cepa sensible y resistente.
Entender el concepto de halo de inhibicin.
Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulacin
de materiales biolgicos.

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MATERIALES Y EQUIPO:

Cultivo puro de la bacteria (placa problema)

Placas de LB agar.
Discos comerciales de antibiticos.
Hisopos estriles
Pinzas de laboratorio.
Asa de siembra
Suero fisiolgico
Tubos de ensayo
Algodn
Regla milimetrada
Mechero de ron
Fosforo
Guantes
Cinta adhesiva
PROCEDIMIENTO

ANTES DE EMPEZAR
No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra
biolgica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para
evitar contaminaciones.
Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor
especial. Estos contenedores sern llevados posteriormente a una planta
de tratamiento de residuos biolgicos, donde sern incinerados.
Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente
identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.
Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para
evitar su contaminacin o la nuestra.
Al acabar la prctica, se deben lavar bien las manos.

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SIEMBRA DEL MICROORGANISMO PROBLEMA

Vertemos una pequea cantidad de suero fisiolgico estril (2-5 ml) en
un tubo de ensayo.

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A partir de la placa problema, que contiene colonias del microorganismo

cuya sensibilidad a los antibiticos queremos determinar, tomamos una
muestra SUPERFICIAL de UNA SOLA COLONIA con un asa de
siembra.

Introducimos el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamos el

asa para realizar una suspensin de las bacterias en el suero fisiolgico.

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Introducimos un hisopo estril en el tubo, mojar el hisopo estril en la

suspensin. Escurrir el exceso de lquido contra las paredes del tubo de
ensayo. Tapar el tubo e inocular la placa pasando muy suavemente por
la superficie de la placa agar nueva. En esta ocasin realizaremos una
siembra en csped, es decir, por toda la superficie de la placa, para
conseguir que crezca bacterias de modo masivo (no interesa aislar
bacterias). Es importante que la siembra sea SUPERFICIAL, sin
profundizar en el medio de cultivo. (se puede Inocular dos veces ms
en ngulos de 60).

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Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y

marcando con una A la tapa (Antibiograma).

COLOCACIN DE LOS DISCOS DE ANTIBITICO

Tomando ahora con las pinzas (NUNCA CON LAS MANOS) un disco de
cada uno de los antibiticos que se facilitan (cada disco es un papel de
filtro que contiene una suspensin de uno varios antibiticos a la
concentracin teraputica).

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Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar la superficie

con las pinzas. es muy importante que el disco contacte con el medio de
cultivo en un nico sitio. Realizamos la misma operacin con los otros
cinco antibiticos, colocando los nuevos discos separados de los
anteriores, formando un hexgono.

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INCUBACIN Y OBSERBACIN
Se llevan las placas a incubar la placa en posicin invertida a 37C
(temperatura corporal) durante 24 horas. tras este periodo se recogen
las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano.

MEDICIN DEL HALO DE INHIBICIN

Por la parte trasera de la placa incubada mediremos el dimetro de los
halos de inhibicin que se han formado alrededor de los discos de
antibitico a los que la bacteria problema es sensible.

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Se anota los datos en la placa, indicando con un nmero del 1 al 6, el

antibitico colocado en el disco y dibujando la presencia o ausencia de
halos y su tamao en mm.
Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina si la bacteria
es sensible (S) o resistente (R) a cada antibitico y antalo en la tabla, en
las columnas correspondientes.

RESULTADOS

Disco Antibitico Tamao del Halo de Sensible (S) Resistente (R)

Inhibicin (mm)
1 Amoxicilina + 14 mm
Ac. clavulanico
2 Cefuroxima 12 mm
3 Nitromicina ---------
4 Cefaclor 21 mm
5 Norfloxaxcino 27 mm
6 Ampicilina 16 mm

CONCLUSIN

Mediante un Antibiograma podemos establecer qu tratamiento ser el ms

adecuado para el paciente afectado por una infeccin por la bacteria que estemos
estudiando.

Alrededor de cada disco de antibitico, las bacterias sensibles a ese antibitico no

habrn podido reproducirse y, por lo tanto, no forman colonias, dejando un hueco
alrededor del disco. Si el halo de inhibicin es suficientemente grande, se usara
ese antibitico a la concentracin teraputica (la que el antibitico puede alcanzar
en el lugar de la infeccin sin que se produzcan efectos txicos o secundarios) se
dice que la bacteria es sensible al antibitico. Por eso se mide el efecto y se
consultan las tablas.

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