3.3.

LPS
Aunque la cara interna de la membrana externa se asemeja a una
La bicapa de fosfolpidos tpica, la cara externa de la membrana externa est compuesta
principalmente de LPS. LPS asocia un hidrofbico
, El Lpido A insertado en la bicapa de fosfolpidos a
Cola hidroflica compuesta por el ncleo polisacrido y la
O - polisacrido especfico.
Las cadenas variables de polisacridos O-especficos son la base
De la identificacin antignica de los serotipos de P. aeruginosa. Esta inmunogenicidad
Los hace objetivos obvios para la inmunoterapia.
Sin embargo, la inmunizacin activa provocada por el antgeno O basado en
Vacunas carece de proteccin incluso cuando mltiples Oantigenes
Por lo tanto, se han ensayado varias vacunas basadas en antgeno O
Dcadas con xito limitado [32]. Para evitar este problema
Se han desarrollado varias estrategias. Conjugados de serotipos mltiples
Puede conjugarse adicionalmente con otro objetivo tal como
Exotoxina A [30]. Tal vacuna ha completado con xito
Fase I y II ensayos y se encuentra actualmente en un ensayo de fase III
[30, 33]. Igualmente prometedoras, las vacunas vivas atenuadas de
Mutantes de P. aeruginosa o Salmonella enteritica que expresan
Se han desarrollado antgenos O de P. aeruginosa y
Confieren proteccin en modelos animales.
Las terapias de inmunizacin pasiva contra polisacridos especficos de O
Han sido explorados durante muchos aos [37]. El principal
Obstculo de administracin de anticuerpos monoclonales obtenidos principalmente
De ratones a seres humanos ha sido recientemente superado
La aparicin de ratones transgnicos que producen anticuerpos monoclonales humanos
Anticuerpos protectores contra P. aeruginosa [38, 39]. Similar,
Anticuerpos monoclonales derivados de hibridomas humanos tambin
Desarrollo contra P. aeruginosa [30].
Otras estrategias han consistido en el uso de antimicrobianos sintticos
Pptidos conocidos por inhibir LPS tales como CAP-18.
Aunque el CAP-18 fue un potente antipseudomonal in vitro,
Vivo no mejora la supervivencia [40].
LPS es una sustancia biolgicamente activa en la medida en que es
Utilizado en muchos modelos de sepsis o lesin pulmonar aguda incluso
Aunque recientemente se ha demostrado que su potencia al imitar
La lesin pulmonar aguda depende principalmente del dao preexistente
[41] y sobre la estructura. De hecho, el componente Lpido A de
P. aeruginosa LPS activa mltiples vas pro-inflamatorias
[42 - 44]. LPS es tambin crtico para la virulencia [45], principalmente
Por su papel en la adhesin a travs de asialoGM1 vinculante [22],
TLR4 / CD14 o TLR4 / MD-2 reconocimiento [43, 44] o la unin a
CFTR [46]. En los pacientes con fibrosis qustica, P. aeruginosa se
Seleccionando mutantes con modificaciones especficas de Lpido A que
Resistencia a los pptidos antimicrobianos del husped y
TLR4 activacin [44, 47, 48].
Algunas estrategias inmunoteraputicas se dirigen a Lipid-A,
Aunque su actividad tambin se basa en la reactividad del antgeno O
[49]. Sin embargo, las nuevas estrategias se dirigen especficamente a Lipid-A porque
De su papel en la patognesis y no para el reconocimiento
Inmunolgicos. Estas estrategias pretenden inhibir la
O el segundo paso en la sntesis de Lpidos-A [50, 51]. Sin embargo, estos
Inhibidores no han sido probados en infecciones por P. aeruginosa.
33.4. Alginato
El alginato es un exopolisacrido mucoide producido por
P. aeruginosa que se compone de los polmeros de repeticin de mannuronic
Y cido glucurnico. El alginato, al igual que el LPS, funciona como
Una adhesina, anclando P. aeruginosa a las vas respiratorias colonizadas
epitelio. Condiciones circundantes en pacientes con fibrosis qustica
Pulmones y respuesta inflamatoria del husped aumentan el alginato
Sntesis que conduce a la conversin a una sobreproduccin de alginato
Mucoide fenotipo [52, 53]. Esta mucosa productora de alginato
Fenotipo se encuentra comnmente en la fibrosis qustica
El curso de P. aeruginosa infecciones. Alginato sobreexpresado
Protege P. aeruginosa de la fagocitosis, antibiticos e incluso
Atena la respuesta del husped [54, 55]. Aunque el alginato ha
Ampliamente considerado para participar en la arquitectura
P. aeruginosa biofilm en la fibrosis qustica [56] y probablemente no
Tienen un papel en algunas de las propiedades de la biopelcula [54], que tiene
Ha demostrado recientemente que el alginato no es crucial para el desarrollo de biofilm
[57].
Sin embargo, debido a esta produccin excesiva en fibrosis qustica,
El alginato ha sido un objetivo reciente en la inmunoterapia [58,
59]. Los anticuerpos monoclonales humanos dirigidos contra el alginato
Fueron eficaces en un modelo murino de neumona letal y sorprendentemente incluso contra
cepas no mucoides que producen clulas indetectables
Niveles de alginato [59]. Sin embargo, la inmunizacin activa
Contra el alginato est en proceso de optimizacin, particularmente
Mediante la conjugacin con exoA [58], con el fin de compensar
Para la variable eficacia de los anticuerpos producidos en respuesta
Al alginato [60].

4. Factores de virulencia secretados (Fig. 2)

4.1. Piocianina
La piocianina es un metabolito pigmentario azul de P. aeruginosa
Que ha demostrado tener numerosos efectos patgenos tales como
Como el aumento de la IL-8 [61, 62], deprimentes de acogida de respuesta [61, 63],
Y la induccin de la apoptosis en los neutrfilos [63]. En modelos animales
Infeccin pulmonar aguda y crnica, se demostr que la piocianina
Ser esencial para la virulencia P. aeruginosa [64]. El mismo estudio
Tambin demostraron que la instilacin de piocianina caus un
Neutrfilos en el pulmn. Adems, debido a su conocido oxidoreductive
Propiedades, la piocianina oxida el glutatin e inactiva
Catalasa en las clulas epiteliales respiratorias,
En el estrs oxidativo relacionados con el dao [65, 66]. Adems, en
Clulas de levadura, la piocianina interrumpe ATPasa vacuolar y mitocondrial
Transporte de electrones que pueden afectar a los canales de cloruro CFTR
En la fibrosis qustica [67].
Aunque no hay estrategias teraputicas dirigidas directamente a la piocianina,
Varias terapias antioxidantes han demostrado ser tiles en la fibrosis qustica
[68 - 70]. La administracin de glutatin mejorada por aerosolizacin
FEV en pacientes con fibrosis qustica [68,70]. Funcin pulmonar
Fue mejorado en pacientes con fibrosis qustica despus de un antioxidante de 8 semanas
Suplementado rgimen [68].
Recientemente, los autores han sugerido inhibir la sntesis de
Piocianina como una estrategia teraputica, aunque tales estudios
An por realizar [67,71].
4.2. Pyunderdine
Pyoverdine es un siderforo, una pequea molcula de hierro quelante
Del medio ambiente para su uso en el metabolismo de P. aeruginosa.
Pyoverdine tambin ha demostrado desempear un papel en
Virulencia de P. aeruginosa [72,73]. Una explicacin para este papel
Ha surgido recientemente cuando se encontr que la piderdina regula
La secrecin de otros factores de virulencia de P. aeruginosa,
Exotoxina A y una endoproteasa y su propia secrecin [74].
Aunque todava no hay estrategias teraputicas dirigidas a
Esta funcin de regulacin de la virulencia que
Un mecanismo de sealizacin de clula a clula lo convierte en un objetivo atractivo.
4.3. Proteasa alcalina
La proteasa alcalina es una proteasa de lisis de fibrina segregada por
P. aeruginosa a travs de un sistema de secrecin tipo I [75]. A pesar de que
Su funcin patgena slo es clara en las infecciones corneales como es la
Caso de la mayora de las proteasas de P. aeruginosa [75], puede participar en
La patognesis de la lesin pulmonar aguda. De hecho, se ha demostrado
Que existe una formacin intraalveolar masiva temprana de fibrina en la lesin pulmonar aguda
de P. aeruginosa y que la inhibicin de esta
Fibrinoformation es deletreo en un modelo animal [76]. Adems,
La eficacia de las terapias de inmunizacin pasiva y activa
El objetivo de la proteasa alcalina en un modelo murino de sepsis muestra
Que la proteasa alcalina puede tener un papel ms grande en P. aeruginosa
Patognesis y es, por tanto, un objetivo legtimo [77-79].
4.4. Protease IV
Otras proteasas secretadas por P. aeruginosa tales como proteasa
IV tambin tienen un papel en la patognesis. Aunque, la proteasa IV es
Particularmente conocido por participar en la patognesis de P. aeruginosa keratitis [80], slo
recientemente se ha establecido
Que la proteasa IV tambin est implicada en la patognesis de
Pulmonar a travs de la degradacin de las protenas tensioactivas A, D
Y B [81]. Esto puede indicar que la proteasa IV podra ser una nueva
Objetivo teraputico.
proteasa
4.5. elastasa
Elastasa, o lasB, es una metaloproteinasa secretada por
P. aeruginosa en el espacio extracelular a travs de una secrecin tipo II
sistema. Se ha demostrado que la elastasa tiene un papel
Patognesis de las infecciones respiratorias de P. aeruginosa al romper el epitelio respiratorio a
travs de la destruccin de la unin estrecha,
Aumentando as la permeabilidad epitelial y facilitando
Reclutamiento de neutrfilos [82-84]. La elastasa tambin es pro-inflamatoria,
Aumento de los niveles de IL-8 en una inflamacin de bolsa de aire de rata
Modelo [85].
La elastasa de P. aeruginosa tambin puede disminuir la respuesta inmune del husped
Mediante la escisin de las protenas tensioactivas del tracto respiratorio
A y D y Proteinase-activated receptor 2 en inactivo
Formas [86-88].
La elastasa es un candidato para la inmunizacin basada en la
P. aeruginosa como atestiguado por la eficacia de la inmunizacin con
Epitopos sintticos de la elastasa para disminuir la gravedad de la infeccin
En ratas [89]. Igualmente, los anticuerpos monoclonales dirigidos
Contra la elastasa de P. aeruginosa disminuy la permeabilidad epitelial
En una monocapa de clulas epiteliales respiratorias polarizadas [90].
La inhibicin de la elastasa secretada por P. aeruginosa con
Los inhibidores de la proteasa podran ser una opcin teraputica potencial.
Sin embargo, las estrategias teraputicas actuales del inhibidor de proteasa son
Dirigida a la secrecin ms abrumadora de la elastasa por inflamacin
Neutrfilos y se ha demostrado que son eficaces
En rata modelos de infeccin respiratoria crnica [91, 92].

4.6. Fosfolipasa C
La fosfolipasa C, ms especficamente la fosfolipasa hemoltica
C, es una fosfolipasa secretada por P. aeruginosa en la
Extracelular a travs de un sistema de secrecin de tipo II. hemoltico
Fosfolipasa C se dirige a los fosfolpidos de la membrana eucaritica
Y se ha demostrado que participa en la patognesis de
P. aeruginosa lesin pulmonar aguda [93] y en la inflamacin [94,
95]. Al igual que la elastasa, parte del efecto patgeno de la hemoltica
Fosfolipasa C puede ser debido a la inactivacin de surfactante [96].
Adems, la fosfolipasa hemoltica puede suprimir el husped
Neutrfilo oxidativo respuesta de ruptura [97]. Sin embargo,
La estrategia a la fecha se dirige especficamente a la fosfolipasa C
Patogenicidad mediada, aunque es interesante observar que
Varios antibiticos antipseudomonales pueden disminuir la secrecin
De fosfolipasa C en un aislado clnico de P. aeruginosa [98].
4.7. Exotoxina A
La exotoxina A (ExoA), secretada en el espacio extracelular
A travs de un sistema de secrecin de tipo II es una ADP-ribosil transferasa
[99] inhibiendo el factor de elongacin-2 (EF-2) inhibiendo as
La sntesis de protenas y conduce a la muerte celular [100]. ExoA tiene
Tambin se ha demostrado para deprimir la respuesta del husped a la infeccin [101,
102]. Entre las toxinas extracelulares, ExoA tiene un papel
Virulencia de P. aeruginosa [103], aunque en menor medida
Efectores del sistema de secrecin tipo III tales como ExoS [104]. En efecto,
Un mutante deficitario ExoA fue 20 veces menos virulento que el
Cepa salvaje en ratones [103].
La inmunizacin pasiva dirigida a ExoA aument la supervivencia en
Un modelo murino de P. aeruginosa infeccin [105] y en un murino
Modelo de la sepsis derivada del intestino [77]. Debido a estas propiedades inmunognicas
Propiedades, no txico alterado ExoA se ha utilizado
Particularmente con xito como objetivo para la inmunoterapia multivalente
En la vacuna quimrica con protenas de la membrana externa
I y F [106] o protena pilina [29]. Una alternativa al uso de
ExoA para evitar la toxicidad ha sido la inmunizacin con
ExoA codificacin de ADN, exitosamente probado en animales [107, 108].
5. Sistema de secrecin tipo III (Fig. 3)
Los sistemas de secrecin tipo III son compartidos entre Yersinia, Salmonella,
Especies de Shigella y Pseudomonas como mecanismo
Inyectan directamente toxinas en las clulas husped. La secrecin tipo III
(TTSS) de P. aeruginosa es una estructura compleja de tipo pilus
Permitiendo la translocacin de protenas efectoras de la
Bacterias, a travs de las membranas bacterianas y en el eucaritico
Citoplasma a travs de un apndice tipo aguja que forma un poro
En la membrana eucaritica [109]. Hay cuatro toxinas conocidas,
Expresados de forma variable en diferentes cepas y aislamientos, inyectados
En clulas husped por P. aeruginosa a travs del TTSS: ExoY,
ExoS, ExoT y ExoU.
5.1. ExoS
ExoS es una citotoxina bifuncional con dos dominios activos, una
C-terminal de ADP-ribosiltranferasa y un extremo N-terminal
Rho GTPasa-activating protein (GAP) dominio. La ADP-ribosiltransferasa
Actividad requiere un cofactor de clulas eucariotas:
14 - 3 - 3 - protena [110]. El papel patgeno de ExoS es principalmente
Atribuible a la actividad ADP-ribosiltranferasa que conduce a
Interrupcin de la organizacin normal del citoesqueleto [111, 112],
Aunque GAP actividad tambin desempea un papel similar [111, 113]. Adicionalmente,
Recientemente se ha demostrado que el dominio C-terminal
Se une a TLR2 y el dominio N-terminal se une a
TLR4, mostrando que ExoS tambin puede modular el husped inmune
Y la respuesta inflamatoria [114]. Aunque generalmente se reconoce
Que ExoS es menos citotxico que ExoU [111, 115],
Su secrecin es mutuamente excluyente en cepas silvestres de
P. aeruginosa, lo que implica que ExoS sigue siendo una gran citotoxina
En ciertas cepas [115, 116]. Adems, el riesgo
Mortalidad aument a 8,7 en los pacientes que estaban infectados
Una cepa que expresa un TTSS funcional y que secreta
ExoS o ExoU [117] subrayando la importancia de esta toxina
En la patognesis de la infeccin por P. aeruginosa. Sin embargo,
No hay estrategias teraputicas que se centran en la toxina en s mismo.
5.2. ExoT
ExoT es similar a ExoS, con doble ADP-ribosiltranferasa
Y GAP, aunque la ADP-ribosiltranferasa ExoT,
Inicialmente se consider deficiente comparado con el de ExoS, los objetivos
Diferentes vas [118 - 122]. Aunque, ExoT tiene
Efectos sobre el citoesqueleto eucariota como ExoS, y ha sido
Inhibicin de la internalizacin de Pseudomonas y la
Reparacin [123, 124], se considera slo una pequea citotoxina [111].
Sorprendentemente, ExoT se encontr incluso para disminuir la citotoxicidad
Debido a ExoU en una cepa especfica [115]. Por lo tanto, a menos que
Este efecto protector produce una va teraputica especfica, ExoT en s mismo no parece ser un
candidato interesante en la orientacin de la patognesis de P. aeruginosa.

5.3. exoY
ExoY es una adenilato ciclasa [125] inyectada directamente en la
Citosol del husped por el TTSS y aumenta el cAMP citoslico,
Por un cofactor eucaritico. Este aumento de la concentracin citoslica
El AMPc conduce a un aumento de la relacin intercelular microvascular pulmonar
Formacin de huecos y aumento de la permeabilidad pulmonar [126]. Sin embargo,
Este papel de ExoY en la patognesis general de P. aeruginosa
Puede ser necesario explorar an ms como la mayora in vitro e in vivo
Los modelos de citotoxicidad slo muestran un efecto menor de ExoY
[115]. Por lo tanto, ExoY podra ser un potencial, aunque menor, teraputico
objetivo.
5.4. ExoU
Se descubri recientemente que ExoU tena una fosfolipasa / lisofosfolipasa
Alterando las membranas celulares eucariotas despus de
Translacin a la clula por parte del TTSS y activacin por un
Cofactor eucariota desconocido [127-129]. ExoU es ampliamente reconocido
Como la citotoxina principal secretada a travs del TTSS,
Aunque un estudio reciente ha demostrado que la acumulacin
ExoU-independiente / TTSS mediada patogenicidad est lejos de ser
Menor [130]. ExoU es 100 veces ms citotxico que ExoS [115] y exoU secrecin solo por el TTSS
confiere citotoxicidad
En modelos animales de lesin pulmonar que conduce a la sepsis [111, 131,
132]. Adems, ExoU es responsable de la descompartimentacin
De la respuesta inflamatoria en un modelo de pulmn agudo
Lesin que conduce a la sepsis [133]. En pacientes infectados con una cepa
Expresando ExoU el riesgo relativo de mortalidad aument a 2,3
[117]. En la neumona asociada al respirador de P. aeruginosa,
ExoU fue secretado por aislamientos de pacientes ms severamente enfermos
[134]. Dado que ExoU juega un papel tan importante
Patognesis de la infeccin por P. aeruginosa, representa una
Objetivo teraputico atractivo. De hecho, la inmunoterapia anti-ExoU
Ha sido explorado pero se considera decepcionante. La inmunizacin de
Los ratones con ExoU recombinante slo conferan una supervivencia del 80%
Contra el reto intratraqueal PA103 en comparacin con el 100% de supervivencia
Con PcrV recombinante [135]. Asimismo, la inmunizacin pasiva
Con Anti-ExoU IgG slo permiti el 50% de supervivencia.
Aunque apenas estamos empezando a entender el mecanismo
De la citotoxicidad ExoU, los inhibidores de la fosfolipasa A2 ya
Con xito se ha utilizado in vitro [136]. Adicionalmente, elucidar
El mecanismo de activacin de ExoU por desconocido
Los cofactores eucariotas podran presentar nuevas opciones teraputicas.
Como hemos visto, el TTSS est implicado en la patognesis
A travs de la translocacin de mltiples toxinas en las clulas husped,
Sin embargo, tambin parece que puede participar en
Virulencia de P. aeruginosa en s misma. De hecho, los mutantes que expresan
El TTSS pero no las toxinas son citotxicos [115]. Esta citotoxicidad
Imputables al propio aparato TTSS puede explicar, en
Parte, por qu la patogenicidad independiente de ExoU en su conjunto es
Mayor [130], aunque ExoS se considera moderadamente citotxica
Y ExoT y ExoY se consideran citotoxinas menores. Por lo tanto,
El TTSS es un importante cancdidate para la patognesis-targeting
Tanto porque transloca citotoxinas en los receptores eucariticos
Clula y porque el propio aparato puede desempear un
virulencia.
Varias protenas que componen este sistema han sido estudiadas,
Entre los cuales PcrV es una protena estructural probable de la translocacin
Estructura, o "aguja", del TTSS. PcrV desempea un papel
En el ensamblaje del poro de translocacin en la clula eucaritica
Membrana [137]. Los primeros estudios mostraron una supervivencia del 100% en ratones
Recibir inmunoterapia anti-PcrV activa o pasiva antes
Una instilacin intratraqueal de PA103 [135]. Subsecuente
Los estudios han continuado demostrando la eficacia de la inmunoterapia anti-PcrV
En modelos animales de infeccin por P. aeruginosa y
Se han generado con xito anticuerpos monoclonales.
6. Deteccin de qurum (Fig. 4)
QS es un mecanismo compartido por bacterias Gram-negativas que
Permite la sealizacin celular de bacterias a bacterias a travs de molculas pequeas,
Acil homoserina lactonas (AHL), tambin conocidas como autoinductores
Que se difunden libremente a travs de las membranas bacterianas. Cuando un
Se obtiene cierta densidad bacteriana o "qurum", estas molculas
Alcanzar una concentracin umbral en la que, como cofactores
Reguladores transcripcionales, que permiten la expresin de genes coordinados
En toda una poblacin bacteriana. Este gen coordinado
Expresin se refiere a los genes de supervivencia y, lo que es ms importante,
Genes que codifican factores de virulencia y formacin de biofilm. el
El descubrimiento de estos sistemas ha creado todo un campo de investigacin
Y varias revisiones en profundidad estn disponibles [142,143].
Para nuestros propsitos, basta con saber que hay dos
Tales sistemas QS en P. aeruginosa, las y rhl que interactan en
Una manera jerrquica, la primera activacin de la segunda y ambas
Siguiendo caminos generales similares (Fig. 4). Brevemente, un gen que codifica
Se activa una autoinductora sintasa (genes "I", lasI o rhlI)
El autoinductor sintetizado (oxododecanilo o oxohexanoil-
Homoserina lactona) se difunde en el medio ambiente,
Alcanza una concentracin umbral que le permite unirse a la transcripcin
Activadores que forman un complejo que activa, entre
Otros, genes que codifican factores de virulencia tales como elastasa, ExoA,
Protenas del aparato del sistema de secrecin tipo II, proteasa alcalina,
Alginato, piocianina y piroddina.
Esta capacidad de P. aeruginosa para coordinar el upregulation
De genes de virulencia en toda una poblacin se traduce en
Patogenicidad de las cepas capaces de QS en comparacin con QS
Deficientes mutantes a lo largo de una variedad de modelos animales [45,
144 - 146]. Adems, varios estudios han demostrado que la
Autoinductor La N- (3-oxododecanoil) -L-homoserina-lactona es inmunomoduladora
Y puede deprimir las respuestas del husped [147-150].
Estos roles de QS en virulencia e inmunomodulacin hacen
Es un candidato muy interesante para la patognesis dirigida a la teraputica
En la medida en que las estrategias potenciales que implican cada paso de QS se han trazado en
una revisin a fondo [151].
Entre estas estrategias, varias han sido exploradas experimentalmente.
QS puede inhibirse con xito por antagonistas competitivos
Anlogos de acil-homoserina-lactonas (AHLs) que conducen a disminucin
La produccin de elastasa y la formacin de biofilm [152]. el
La sealizacin de AHL se degradan por AHL-lactonases. Plantas naturalmente
Que expresan estas lactonasas tienen una resistencia
QS patgenos capaces [153]. Insercin de una AHL-lactonasa
Gen en PAO1 condujo a una disminucin de la produccin de factores de virulencia
[154]. En esta bsqueda de inhibidores QS, tras el descubrimiento
Que las furanonas antibacterianas producidas por la macroalga marina
Eran capaces de inhibir el QS, las furanonas sintticas fueron
Desarrollado [155]. Las furanonas sintticas inhiben con xito QS
Y reducir la expresin del factor de virulencia, aumentar el aclaramiento bacteriano
Y supervivencia en modelos murinos de infeccin pulmonar por P. aeruginosa
[155 - 157]. Perseguir la bsqueda de inhibidores QS ha llevado
Desarrollo de estrategias de cribado que hayan logrado
Se muestran las propiedades inhibidoras de QS de nuevos compuestos de
Ajo extractos [158]. Ms cerca de la prctica clnica, ha sido
Encontr que la azitromicina inhibe QS, disminuyendo el factor de virulencia
Expresin y produccin de biopelculas [159, 160]. Este efecto
Puede tener en cuenta, en parte, los efectos antipseudomonales de la subinhibicin
Concentraciones de macrlidos [161, 162].
7. Gentica
La fuente de la versatilidad patgena de P. aeruginosa es
Indudablemente es genoma nico. Secuenciacin de este genoma
Se logr en el ao 2000 y revel un genoma excepcionalmente grande
De 6,3 millones de pares de bases en 5570 genes predichos (cepa PAO1).
Entre estos, 8,4% estn involucrados en la regulacin de genes, haciendo
P. aeruginosa el patgeno con mayor nmero de genes
Dedicada a la reglamentacin [163]. Esto en s mismo podra explicar la
Adaptabilidad de P. aeruginosa a tantos ambientes hostiles
Y su impresionante variedad de mecanismos patgenos. Adicionalmente,
Aunque el genoma de P. aeruginosa se conserva notablemente
En cepas entre diferentes aislamientos [164] e incluso
Entre diferentes cepas [163-165], el 10% del genoma es variable
Y organizados en bloques, o islas en el ncleo conservado
[164]. Se ha demostrado sucesivamente que estas islas comprenden
Codificacin de materiales para factores de virulencia conocidos como ExoU
[165], y hasta 19 genes implicados en la virulencia en un modelo de
Lesin trmica del ratn [166]. Estas islas, as denominadas
Las "islas de patogenicidad" proporcionan a P. aeruginosa una
Versatilidad patgena.
Es accesible la patogenia a la orientacin teraputica en una
Nivel en P. aeruginosa? Dada la informacin anterior,
Sera altamente deseable. De hecho, los oligonucletidos antisentido
O pptidos antisentido inhiben la expresin gnica especfica
En Escherichia coli [167] y en Staphylococcus aureus
[168]. En un estudio en vivo en animales en el que anti - NF - kappaB
La terapia antisentido aument la supervivencia en choque endotxico y
Peritonitis [169]. Sin embargo, este enfoque an no se ha desarrollado
En infecciones por P. aeruginosa.

8. Conclusiones
Aunque hemos limitado el alcance de esta revisin al
La orientacin teraputica de los mecanismos bacterianos directos de la patognesis,
P. aeruginosa tambin interacta con las clulas husped en el desencadenamiento
O modulando una multitud de vas que conducen a
Deterioro de las defensas o lesiones del husped [170]. Estas interacciones
Tambin puede ser accesible a terapias especficas, as como el xito
De protena C activada en la modulacin de la inflamacin /
Los trastornos de la coagulacin de la sepsis ha demostrado [171].
Entre las estrategias teraputicas que hemos revisado, muchos,
Incluyendo las ms prometedoras, son inmunoterapia activa o pasiva,
basado. Las ventajas de la teraputica inmunolgica
Son especialmente la alta especificidad que permite
De estos mecanismos patognicos muy especficos y, por tanto,
efectos adversos. Adems, las estrategias de inmunizacin activa
Contra P. aeruginosa se estn llevando a cabo con el desarrollo
De una vacuna anti-PcrV que podra transformar la
Evolucin de los pacientes altamente susceptibles a P. aeruginosa
Como pacientes con fibrosis qustica. Una revisin actual de todo el
Estrategias de desarrollo de vacunas contra la
P. aeruginosa ha sido publicado recientemente [172].
La diversidad de mecanismos patognicos de P. aeruginosa
Combinada con la extrema adaptabilidad conferida a
P. aeruginosa por su gran genoma altamente dedicado a la regulacin
De la expresin gnica hacen que P. aeruginosa sea
"Superbug" ... y ya es hora de que encontremos el "Kryptonite".
Abstracto
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria metablicamente verstil que puede causar
Una amplia gama de infecciones oportunistas graves en pacientes con
condiciones mdicas. Estas infecciones se caracterizan por una intensa accin neutroflica
Respuesta que da como resultado un dao significativo a los tejidos del husped ya menudo
exhiben
Resistencia a los antibiticos que conducen a la mortalidad. El tratamiento de las infecciones
persistentes
Por la resistencia adaptativa, debido al estado de crecimiento de la
Bacterias en el paciente incluyendo la capacidad del microorganismo de crecer como biofilm.
Una matriz de factores de virulencia de P. aeruginosa contrarresta las defensas del husped y
puede
Causar dao directo a los tejidos del husped o aumentar la competitividad de la bacteria.
Se necesitan con urgencia nuevos mtodos de prevencin y tratamiento para
De los pacientes con infecciones por P. aeruginosa. Esta revisin describe las dos
Principales tipos de infecciones pulmonares de P. aeruginosa y proporciona una visin general del
husped
Respuesta y cmo la capacidad genmica de P. aeruginosa contribuye a la
Patognesis y persistencia de estas infecciones.
Introduccin
La bacteria Gram-negativa Pseudomonas aeruginosa es
Un patgeno oportunista que normalmente habita el suelo y
Superficies en ambientes acuosos. Su adaptabilidad y alta
Resistencia intrnseca a los antibiticos le permite sobrevivir en
Gama de otros entornos naturales y artificiales, incluyendo
Superficies en instalaciones mdicas. Infecciones graves de P. aeruginosa
Son a menudo nosocomiales, y casi todos estn asociados
Con defensas del husped comprometidas como en la neutropenia,
Quemaduras graves o fibrosis qustica (CF, Tabla 1, Lyczak et al.,
2000). Las opciones teraputicas son cada vez ms limitadas debido a
La aparicin y propagacin continuada de antimicrobianos
Cepas resistentes; Como resultado, las infecciones por P. aeruginosa
Demostrar una alta morbilidad y mortalidad. En los Estados Unidos
P. aeruginosa se encuentra entre los centros hospitalarios ms
Patgenos y es el segundo patgeno ms comn
Aislados de pacientes con neumona asociada a ventilador
(VAP, Hidron et al., 2008). Dada la severidad de P. aeruginosa
Infecciones y el limitado arsenal antimicrobiano con
Para tratarlos, encontrar alternativas de prevencin y
Tratamiento es una prioridad urgente.
Infecciones de Pseudomonas en las vas respiratorias
aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa es una de las ms comunes
Patgenos que causan infecciones respiratorias de los
Pacientes. Las infecciones de las vas respiratorias se clasifican a menudo en dos tipos,
Aguda o crnica, y la transmisin puede ser hospitalaria o
Adquirido en la comunidad, aunque este ltimo es raro y
Siempre asociada a un defecto subyacente en la inmunidad
(Arancibia et al., 2002). Las neumonas nosocomiales agudas son
Tpicamente el resultado de un traumatismo directo, como el
Epitelio por intubacin o inhalacin de humo. Crnico
Las infecciones pueden ocurrir cuando los antecedentes mdicos
Condicin no permite una respuesta inmune eficaz,
Como en los ancianos o individuos con FQ.
Infecciones pulmonares agudas
La alta incidencia de P. aeruginosa en las instituciones de salud
Contribuye al mal estado de salud de la poblacin
Pacientes, la alta tasa de transporte de los frmacos multirresistentes
Cepas en salas de hospitales y uso previo de antibiticos de amplio espectro (Otter et al., 2011).
Aunque las tasas varan entre
Estudios e instituciones, la VAP demuestra generalmente la
Mayor mortalidad, hasta el 30% (Williams et al., 2010).
Los pacientes con VAP a menudo sufren de un epitelio roto
Inducida por la insercin del tubo endotraqueal, que puede
Sirva como un reservorio para que P. aeruginosa crezca como
Biofilm en la superficie de plstico (Williams et al., 2010). Estas
Biofilms son difciles de eliminar y tratar como biofilm asociado
Las bacterias exhiben una resistencia altamente aumentada a los antibiticos
Y desinfectantes. Esto explica en parte el
xito de los regmenes de tratamiento con antibiticos que se
Antes de la formacin de biofilms en comparacin con el
Persistente de P. aeruginosa infecciones despus de un biofilm ha
desarrollado.
Las infecciones pulmonares agudas tambin ocurren en aquellos que no pueden
Para montar una respuesta adecuada del host. Subyacente inmune
Deficiencias que pueden predisponer a la infeccin por Pseudomonas
Incluyen la vejez, la neutropenia debida a la quimioterapia del cncer,
O inmunosupresin debido al trasplante de rganos. As,
La neumona adquirida en la comunidad es ms frecuente
Pacientes que en pacientes sanos (Williams
Et al., 2010). Las infecciones nosocomiales tambin son
Porque los pacientes con inmunodeficiencia son frecuentemente
Hospitalizados y por lo tanto expuestos a depsitos de Pseudomonas
En el mbito de la asistencia sanitaria.
Infecciones crnicas de los pulmones
Si no se erradica durante la fase de infeccin aguda, P. aeruginosa
Puede adaptarse al entorno pulmonar para crecer como un
Biofilm resultando en una infeccin crnica. Los ms conocidos
Casos de infecciones pulmonares pseudomonas crnicas son los
Pacientes con FQ, la mayora de los cuales desarrollan un Pseudomonas
Infeccin pulmonar por la adolescencia y pueden vivir con
Infeccin por 20 o ms aos. En los individuos con FQ, un
Mutacin en el regulador transmembrana de la fibrosis qustica
(CFTR), un canal de cloruro dependiente de AMPc, da como resultado un
Deshidratado y espesado de la superficie de la va area (ASL) que
Obstaculiza el aclaramiento mucociliar de las vas respiratorias conductoras.
Las bacterias inhaladas tienen residencia en el ASL alterado y
Una infeccin aguda inicial y una inflamacin vigorosa
respuesta. El ASL engrosado afecta gravemente el sistema inmune
Respuesta, y la estimulacin inmunolgica persistente por
Las bacterias y / o la incapacidad del husped de controlar
La inflamacin produce inflamacin pulmonar crnica (Sadikot
Et al., 2005; Williams et al., 2010). Adems, hay algunas
Evidencia de que la mutacin CFTR influye en la capacidad
Del husped para controlar la inflamacin inducida por bacterias
(Blohmke et al., 2012). La destruccin de la funcin pulmonar
Debido a la respuesta inflamatoria hiperactiva, posiblemente
Exacerbado por las toxinas bacterianas, provoca la progresiva
Deterioro de la funcin pulmonar y, en ltima instancia,
Infecciones pulmonares fatales.
Varios estudios han seguido la progresin de Pseudomonas
Infecciones en pacientes con FQ durante el
muchos aos. Los resultados de estos estudios demostraron que
Se producen cambios fenotpicos y genotpicos en P. aeruginosa
Con el tiempo (Smith et al., 2006, Hogardt et al., 2007, Tingpej
Et al., 2007; Mena et al., 2008). Normalmente, los cambios son
Tal que la bacteria aislada de una enfermedad crnica
Infeccin es menos inflamatoria y menos citotxica que la
Cepa aislada aos antes del mismo paciente durante la
Fase inicial aguda de la infeccin. En particular, estos
Cambios incluyen una prdida de flagelo y pili, necesaria para
Adherencia y motilidad, y por corolario para la inyeccin de
Toxinas secretadas tipo 3 (ya que la adherencia es un requisito previo); el
Mutacin de mucA, mucB o mucD, haciendo que las clulas se formen
Colonias mucoides que pueden protegerlas de las
Inmune (Mathee et al., 1999); La evolucin de
Altamente resistentes a los antibiticos, que son
Promovida por la terapia antibitica prolongada; cambios en
Lipopolisacrido, incluyendo el lpido alterado A (Ernst et al.,
2006, 2007), y prdida del antgeno O (Hancock et al., 1983);
Y alteraciones en la deteccin del qurum (QS), tales como inactivacin
De lasR (Winstanley & Fothergill, 2009). Tales cambios son
Promovido por la aparicin frecuente de cepas mutatorias
El pulmn de la FQ (Oliver, 2010). Estas cepas alteradas son
Comparativamente avirulento cuando se usa para infectar ratones en modelos
De la infeccin pulmonar aguda, pero no estn obstaculizados en su
Establecer infecciones crnicas (Bragonzi et al., 2009).
Las infecciones crnicas de los pseudomonas pulmonares
Con personas que tienen bronquiectasias crnicas y enfermedades crnicas
Enfermedad pulmonar obstructiva (EPOC). Bronquiectasias crnicas
Es la dilatacin irreversible de las vas respiratorias bronquiales
Por la destruccin de tejido muscular y elstico, usualmente la
Resultado de una infeccin respiratoria grave en la niez. el
El dao se limita generalmente al lbulo en el que el
Infeccin, y la infeccin subsiguiente no
untado. A diferencia de los pacientes con FQ, aquellos con bronquiectasias no-CF
Generalmente no tienen anomalas genticas
Causando un defecto en su sistema inmune, y por lo tanto, el
La enfermedad es el resultado de un deterioro del aclaramiento mecnico
Resultado de los daos causados por la infeccin primaria
(Williams et al., 2010). La EPOC es causada por una inflamacin crnica
De los tejidos pulmonares que conducen al estrechamiento de las vas respiratorias
Pasajes que resultan en una restriccin del flujo de aire. Cigarrillo
El tabaquismo es considerado como el factor de riesgo ms
Desarrollo de la EPOC, mediante el cual los productos qumicos nocivos
El humo del cigarrillo disregula las respuestas normales del
Innato en el pulmn (Provinciali et al., 2011). Los pacientes con EPOC con frecuencia son ancianos,
Proceso complejo de envejecimiento contribuye a una disminucin
Funcin pulmonar y los cambios producidos por la
El humo del cigarrillo ocurre tpicamente gradualmente sobre dcadas.
La incidencia de infecciones por Pseudomonas en pacientes
La EPOC oscila entre 4% y 15%, y las manifestaciones clnicas
De estas infecciones difuminan la fron-
Y crnica con bronquitis leve y neumona con
Siendo comn la sepsis (Williams et al., 2010). Muchos pacientes
Con EPOC son capaces de eliminar la infeccin, pero casi
Muchos desarrollan una infeccin persistente que se caracteriza por
Exacerbaciones peridicas (Murphy et al., 2008). El 1- y
Tasas de mortalidad a 2 aos despus de la hospitalizacin por
La exacerbacin de la EPOC es alta, oscilando entre el 22% y el 49%.
Con el actual aumento global de las tasas de tabaquismo (en
Pases de bajos ingresos), la EPOC es una de las principales causas de muerte
Que est aumentando en la prevalencia (Hurd, 2000).
Respuesta del husped a la infeccin de las vas respiratorias de Pseudomonas
Los seres humanos pueden respirar en exceso de 10 000 L por da (Flato
Et al., 1996), y el aire inhalado contiene microorganismos
Y partculas del ambiente. A pesar de esto, la
Pulmones de un individuo sano generalmente permanecen
Infeccin, reflejando la eficacia de la inmunidad innata. En el
Conduccin de las vas respiratorias, el epitelio es la primera lnea de defensa
Contra los agentes infecciosos, desempeando una amplia gama de
La respuesta innata a la infeccin. Varios tipos de clulas juegan un
Papel en las defensas inmunolgicas de las vas respiratorias,
Clulas dendrticas, clulas T, macrfagos y neutrfilos
(Figura 1). La prevencin de la colonizacin y el
Por lo tanto, P. aeruginosa de las vas areas
Coordinado de muchos tipos de clulas, y por esta razn,
La persistencia en el pulmn no es una tarea fcil para un microorganismo.
Los sntomas y los resultados de la infeccin por P. aeruginosa
Dependen tanto de la respuesta apropiada del anfitrin como
Virulencia bacteriana que actan en gran medida para contrarrestar
Respuesta del husped. Una visin general de la respuesta del
La infeccin por Pseudomonas se da aqu.
Clulas epiteliales
El aire inhalado comienza su recorrido en las vas nasal y traqueal
Pasajes A partir de ah, la rama de las vas respiratorias conductoras
Mltiples veces en los bronquios pulmonares cada vez
Pasajes donde terminan en los alvolos de intercambio de gas.
Los pasos conductores estn revestidos con un pseudoestratificado
Epitelio formado por varias clulas morfolgicamente
Tipos que cumplen una serie de funciones crticas. Como primer sitio
De contacto para las partculas inhaladas, incluidos patgenos,
Las clulas epiteliales forman una barrera fsica contra la infeccin y actan
Centinelas para alertar al sistema inmune innato y adaptativo
A la infeccin (Whitsett, 2002).
Las clulas epiteliales ciliadas son el tipo celular predominante
Dentro de la va area, que comprende ms del 50% del epitelio
superficie. Cada clula ciliada contiene aproximadamente 300
Extensiones de la membrana celular llamadas cilios, que son
Alimentado por numerosas mitocondrias. Estas clulas ritmicamente
Golpear sus cilios de una manera unidireccional para empujar
Partculas hacia arriba y fuera del pulmn. As, el papel principal
De estas clulas es el transporte de partculas mucosas y mucosas, incluyendo microorganismos,
del pulmn A la garganta (Knight & Holgate, 2003).
Las clulas secretoras contienen numerosos grnulos para la produccin,
Almacenamiento y secrecin de glicolpidos de mucina (goblet
Clulas) y el surfactante bronquiolar (clulas Clara y tipo 2
clulas epiteliales). Las mucinas son de alto peso molecular y altamente
Macromolculas glicosiladas que se unen eficazmente y atrapan
Muchas partculas extraas. El despliegue de los diversos carbohidratos
Las cadenas de la capa de moco depende del nivel
De hidratacin, concentracin inica y pH (Knowles & Boucher,
2002). Se ha propuesto que una consecuencia de la
La mutacin CFTR es la deshidratacin de la capa mucosa,
Haciendo que las cadenas laterales de carbohidratos de las mucinas
Desplegarse inadecuadamente, dificultando su capacidad para
Partculas y hacerlas ms propensas a unirse a las clulas
Mucinas MUC1 y MUC4, pegando as eficazmente
La capa mucosa al epitelio y la prevencin de la mucociliar
(Knowles y Boucher, 2002). Clara clulas en
Los conductos bronquiales inferiores y las clulas epiteliales tipo 2 en
Los alvolos secretan surfactante pulmonar, una lipoprotena
Complejo que baja la tensin superficial en el aire-lquido
Y por lo tanto evita el colapso alveolar al final
De exhalacin. Las protenas tensioactivas tienen funciones
Y patgenos microbianos opsonizantes (Chroneos
Et al., 2010).
Los epitelios tambin secretan muchas otras molculas que pueden jugar
Papeles en la defensa del pulmn. Protenas complementarias
Secretadas por las clulas epiteliales actan para unir agentes infecciosos
Y promover la fagocitosis. Citocinas y quimiocinas,
Particularmente el poderoso IL-8 atrayente de neutrfilos humanos,
Tambin son secretadas por clulas epiteliales, tras la activacin de sus
Receptores de tipo peaje (TLR), para permitir el reclutamiento y la activacin
De las clulas del sistema inmune innato y adaptativo
(Holt et al., 2008). Defensa del husped (antimicrobiano) catinico
Pptidos, tales como b-defensinas y LL-37, y catinico
Protenas como la lisozima y la lactoferrina se secretan en la
Lumen del pulmn o depositado por desgranulacin de las clulas fagocticas
Clulas, y se encuentran en mayores concentraciones
Durante la infeccin o la inflamacin (Devine, 2003). Sin embargo,
El papel especfico de estos pptidos en la defensa del pulmn
Es un tema de discusin. La actividad antimicrobiana de estos
Pptidos ha demostrado ser sensible a las altas concentraciones de sal
Concentraciones, particularmente a cationes divalentes tales como Ca2 +
Y Mg2 + que existen en concentraciones milimolares en la mayora
Tejidos Adems, los polisacridos tales como los aninicos
Glicosaminoglicanos (por ejemplo, heparina), y posiblemente mucinas,
Se unen a estos pptidos catinicos e inhiben su accin.
Por el contrario, tales pptidos tienen una inmunomodulacin profunda
Actividades, que incluyen actividades que ayudan a
Resolucin de la infeccin y la inflamacin, como la
Reclutamiento y actividad antiinflamatoria en la neutralizacin
Estmulos inflamatorios microbianos como lipopolisacrido
(Afacan et al., 2012, Hancock et al., 2012).
Clulas fagocticas
Un sello de la respuesta inflamatoria a un Pseudomonas
La infeccin pulmonar es el reclutamiento de neutrfilos. Este reclutamiento
Es dependiente de la produccin de quimiocinas,
Particularmente IL - 8 (humano) y KC (ratn), miembros de la
CXC familia de quimiocinas. Los ratones que se administran anti-
CXCR demuestran una reduccin del 50% en el nmero
De los neutrfilos reclutados en los pulmones cuando
Desafiado con P. aeruginosa y tienen mucho ms pobres
Supervivencia (Tsai et al., 2000). Neutrfilos fagocitosa
Y matar las bacterias en el pulmn a travs de una serie de
Molculas microbicidas eficaces, incluyendo oxgeno reactivo
Y especies de nitrgeno, y molculas no oxidativas tales como
Defensina pptidos antimicrobianos, lisozima y neutrfilos
Elastasa. Aunque los neutrfilos son importantes en el husped
Defensas, cuando son estimuladas por citoquinas inflamatorias
O molculas bacterianas como el lipopolisacrido que
Inflamacin y degranulacin, causando
Considerables daos locales (Williams & Parkos, 2007).
Afortunadamente, su vida til limitada (<24 h) y su eliminacin por
La apoptosis no inflamatoria ayuda a limitar este dao. En
Infecciones crnicas en las que la estimulacin de las
Sistema por la bacteria es persistente, el neutrfilo
Mayor riesgo de daar los alrededores
Tejidos del husped (Williams et al., 2010). Este parece ser el
Caso de CF, aunque los neutrfilos de pulmn de CF tambin parecen
Funcionalmente defectuoso, ya que no logran eliminar la infeccin. el
Base para esto no se entiende bien y puede reflejar una
El estado particular de los neutrfilos o las influencias reguladoras
De otras clulas en el pulmn. Se ha sugerido que
La deshidratacin del fluido de la superficie de las vas respiratorias en CF podra atrapar
Neutrfilos en sitios localizados y causan la induccin de
La necrosis de los neutrfilos en lugar de la apoptosis,
Patologa pulmonar (Downey et al., 2009, Hayes et al., 2011).
Los macrfagos alveolares tambin juegan un papel
Defensa de los alvolos pulmonares. Estas clulas fagocitosa
Partculas, secuestrar antgenos y secretar pequeas cantidades
De las citoquinas y quimiocinas en estado estacionario, pero cuando
Activadas durante la infeccin, estas funciones
mejorado. Aunque los macrfagos tienen capacidades fagocticas,
El papel que desempean en las infecciones por Pseudomonas
ambiguo. En algunos modelos murinos de infeccin aguda, el agotamiento
De los macrfagos pulmonares result en una falta de quimioquinas
Produccin deficiente, reclutamiento deficiente de neutrfilos y
Fagocitosis (Kooguchi et al., 1998, Fujimoto et al., 2002;
Ojielo et al., 2003). Por el contrario, otros estudios demostraron
Que el agotamiento de los macrfagos no afect la gravedad de la
(Morissette et al., 1996, Cheung et al., 2000). un
Diversos estudios han implicado el CFTR en la regulacin de
Inflamacin (con mutaciones de CFTR que promueven una
Respuesta a los agonistas microbianos; Cohen & Prince, 2012).
Por lo tanto, el ambiente de citoquinas alterado causado por la hiperinflamacin
En el pulmn de la FQ puede tener un impacto en la
Fagocitosis microbiana y muerte.
Pseudomonas aeruginosa patognesis y
Principales factores de virulencia
Como se ha mencionado anteriormente, los anlisis han
P. aeruginosa aislados de infecciones agudas difieren sustancialmente
En el fenotipo de los aislados de infecciones crnicas
(Smith et al., 2006). Aislados de infecciones agudas
Expresan una gran cantidad de factores de virulencia, mientras que en contraste,
Muchos aislamientos de las infecciones pulmonares crnicas por FQ carecen de algunas de las
caractersticas bacterianas ms inflamatorias, como flagelos
Y pili, y downregulate otros mecanismos de virulencia
Tales como el sistema de secrecin de tipo 3 (T3SS, Hogardt &
Heesemann, 2010). Adems, los aislamientos
Infecciones ms fcilmente forman biopelculas y sobreexpresan
Exopolysaccharide alginate, causando estas cepas para
Se vuelven mucoides (Sadikot et al., 2005, Kipnis et al., 2006).
Lo que sigue es una descripcin de los principales factores de virulencia conocidos
O sospechosos de contribuir a la patognesis respiratoria.
Sin embargo, los datos clnicos por naturaleza son correlativos y pueden
Confundido por mltiples mutaciones en un nico aislado, o
Presencia de mltiples aislamientos con diferentes genotipos y
Fenotipos, por lo que la contribucin de los factores de virulencia especficos
A las enfermedades humanas por lo general no ha sido probado. Sin embargo,
Hemos tratado de describir la contribucin de
Estos factores de virulencia a las enfermedades humanas cuando
disponible. Un resumen de los factores de virulencia se describe en
Higo. 2.
Flagella y pili de tipo 4
Cada clula de P. aeruginosa posee un solo flagelo polar
Y varios pili de tipo 4 mucho ms corto tambin localizados en una clula
polo. Estos apndices proteinceos funcionan tanto como
Adhesinas y como principales medios de motilidad. Flagella y pili
Tambin puede iniciar una respuesta inflamatoria.
El flagelo con aspecto de ltigo proporciona motilidad de natacin
A travs de un movimiento giratorio de sacacorchos en un ambiente acuoso
Y es una parte esencial de la quimiotaxis bacteriana.
Rfagas de natacin de lnea recta se intercalan con
'Tumbles', donde la rotacin de los flagelos se invierte transitoriamente
Y la motilidad se detiene para que la bacteria reoriente
s mismo. Durante una infeccin, la bacteria puede adherirse al husped
Clulas epiteliales a travs de la unin de su flagelo a la
Asialyated glicolpido asialoGM1 y puede provocar una fuerte
NFjB respuesta inflamatoria mediada por sealizacin
A travs de TLR5 y una respuesta mediada por caspasa-1 a travs de
El receptor tipo Nod, Ipaf (Miao et al., 2007). no flagelado
Los mutantes son defectuosos en los modelos de infeccin aguda
(Brimer & Montie, 1998, Feldman et al., 1998), pero una gran
Proporcin de aislamientos de infecciones crnicas
La regulacin negativa de los flagelos y / o la motilidad mediada por flagelos
O son aflagelados (Wolfgang et al., 2004). Como flagelos son
Que se creen necesarios para el establecimiento de infecciones,
Se han realizado ensayos clnicos de vacunas para prevenir la
Y por lo tanto la progresin posterior a una
Infeccin crnica; Sin embargo, hasta la fecha, stos no han mostrado
Mucho xito (Doring et al., 2007, Johansen et al., 2008).
Los pili de tipo 4 son, sin duda, las adhesinas ms importantes de
P. aeruginosa y tambin estn implicados en motilidad y
La formacin de biofilms. Situado en un poste de la clula, tipo 4 pili
Se extienden y se retraen como ganchos de agarre para tirar de la celda a lo largo de las
superficies slidas mediante un proceso denominado motilidad espasmdica (Kipnis
Et al., 2006). Junto con flagelos, pili tambin facilitan
Motilidad enjambrada, una forma altamente coordinada de
Superficies semislidas (Kohler et al., 2000, Yeung et al.,
2009). Pili tambin puede conducir a la agregacin, causando la bacteria
Para formar microcolonias en los tejidos diana, concentrndose eficazmente
Las bacterias en un lugar y potencialmente ofreciendo
Proteccin del sistema inmune del husped y de los antibiticos
(Craig et al., 2004, Sriramulu et al., 2005). Ciertamente,
Microcolonias de P. aeruginosa en el esputo pulmonar de
Pacientes con infeccin crnica con FQ se han observado
Y se asemejan a las colonias mucoides cultivadas en el laboratorio
(Bjarnsholt et al., 2009). Por el contrario, pili son los principales
Adhesina involucrada en la fagocitosis no opsica de Pseudomonas
(Kelly et al., 1989). Los mutantes deficientes en pilina o aquellos
Alteraciones en la motilidad nerviosa demuestran virulencia reducida
En varios modelos. Al igual que los flagelos, los pili son blancos de los anticonvulsivantes
Terapia, incluida la inmunizacin; Sin embargo, estos
Los esfuerzos se ven obstaculizados por la variabilidad antignica de pili
A travs de cepas de P. aeruginosa (Kipnis et al., 2006).
Sistema de secrecin tipo 3
Los T3SS se comparten entre muchas bacterias Gram negativas patgenas
Bacterias como un medio de inyectar toxinas directamente en
Clulas. Como tal, la P. aeruginosa T3SS es un factor determinante
De virulencia, y su expresin se asocia frecuentemente
Infecciones agudas invasivas y se ha relacionado con
Aumento de la mortalidad en los pacientes infectados (Sadikot et al.,
2005; Hauser, 2009). El apndice tipo aguja de la
T3SS, evolutivamente relacionado con flagelos, permite la translocacin
De protenas efectoras de la bacteria en el husped
Clula a travs de un poro formado en la membrana de la clula husped. Solamente
Se han identificado cuatro factores - ExoY, ExoS, ExoT y
ExoU - mucho menos que muchos otros bien caracterizado T3SS
(Por ejemplo, Salmonella enterica SPI - 1 tiene 13, Shigella sp.
25; Hauser, 2009).
El T3SS de P. aeruginosa est codificado por 36 genes en
Cinco operones, con otros seis genes que codifican el efector
Protenas y sus chaperones dispersas en otras partes del
Cromosoma (Hauser, 2009). Todo el sistema es transcripcional
Controlado por ExsA, un miembro de la familia AraC
De activadores transcripcionales (Yahr & Wolfgang, 2006).
el
Cuatro protenas efectoras de P. aeruginosa T3SS se expresan
De manera variable en diferentes cepas y aislamientos. Casi todas las cepas
Expresan una de las dos exotoxinas principales exoU o exoS pero
Muy raramente ambos (Shaver y Hauser, 2004), mientras que la mayora de las cepas
ExoY expreso y exoT que tienen roles menores (Hauser,
2009). ExoS es bifuncional, incluyendo tanto N-terminal
Actividad de la protena activadora de GTPasa y ADPribosiltransferasa C-terminal
(ADPRT). Ambas actividades tienen
Un efecto sobre la organizacin del citoesqueleto de actina,
Se entiende que la actividad ADPRT desempea un papel
patogenesia. ExoU es una fosfolipasa y se estima en
Una citotoxina 100 veces ms potente que ExoS y
Capaz de causar la muerte rpida de las clulas eucariotas del husped debido
A la prdida de integridad de la membrana plasmtica consistente con
Necrosis (Kipnis et al., 2006, Hauser, 2009). El exacto
Contribucin de cada una de las toxinas a la patognesis no est claro,
Pero se piensa que el T3SS puede permitir que Pseudomonas
Explotar las brechas en la barrera epitelial al antagonizar
Cicatrizacin de heridas durante la colonizacin y para promover lesiones celulares
Directamente (es decir, a travs de ExoU) e indirectamente (es decir, reclutamiento y
Activacin de neutrfilos) que conduce a los sntomas de
La neumona bacteriana (Hauser, 2009).
QS y formacin de biofilm
QS es un mecanismo compartido por muchas bacterias que permite
Una adaptacin coordinada de una poblacin bacteriana a
Cambios ambientales, incluyendo la adaptacin al pulmn
ambiente. Esta adaptacin est mediada por pequeas membranas-
Molculas difusibles llamadas autoinductores. Estas molculas
Son constitutivamente producidos por cada bacteria y
Actan como cofactores de reguladores transcripcionales especficos cuando
Alcanzan concentraciones umbral suficientemente altas. el
Concentracin de molculas autoinductoras en el medio
Proporcional a la concentracin de bacterias tal que cuando
La poblacin bacteriana aumenta hasta una masa crtica (es decir,
'Qurum'), y la concentracin de autoinductores se convierte en
Suficiente para causar la activacin de determinados genes posteriores
Resultando en una respuesta coordinada en toda la
Poblacin bacteriana. Se estima que hasta el 10%
De genes en el genoma y ms del 20% de los
Proteoma bacteriano expresado son regulados por QS (Deep
Et al., 2011).
Pseudomonas aeruginosa produce tres autoinductores.
Dos de estos autoinductores son acil homoserina lactonas
(AHL): 3 - oxo - dodecanoil homoserina lactona (3 - oxo - C _ {12}
HSL) es producida por la LasI AHL sintasa y acta sobre la
Activador transcripcional de lasR y butiril homoserina
Lactona (C4 HSL) es producida por la RhlI AHL sintasa,
Que acta sobre el activador transcripcional RhlR. el tercero
Autoinductor es una 2-heptil-3-hidroxi-4-quinolona designada
La seal de quinolona de Pseudomonas, que es sintetizada por
Un complejo proceso multietapa que implica dos operones,
PqsABCDE y phnAB, y tres genes localizados fuera
Estos operones, pqsR, pqsH y pqsL (Deep et al., 2011;
Heeb et al., 2011). Estos sistemas QS actan de forma jerrquica
De manera positiva, con el sistema las regulando positivamente
Y la produccin de quinolonas (Heeb et al., 2011). Celda
Supervivencia, formacin de biofilm y virulencia son controlados
Estos sistemas; Por lo tanto, las cepas deficientes en cualquiera de estos
Demuestran una patogenicidad reducida (Pearson
Et al., 2000; Sadikot et al., 2005; Kipnis et al., 2006).
Los biofilms son comunidades organizadas y estructuradas de
Bacterias unidas entre s ya una superficie, y sus
Formacin est intrnsecamente vinculado a QS (Bjarnsholt et al., 2010).
Estas comunidades estn encerradas en polmeros extracelulares
Sustancias (EPS) que pueden consistir en polisacridos,
cidos nucleicos, lpidos y protenas.
La matriz EPS hace
La mayora (50-90%) del volumen de la biopelcula y
Confiere una robustez fsica y qumica a la
Comunidad, resistiendo fuerzas mecnicas (por ejemplo,
Agua) y disminuyendo la penetracin de productos qumicos txicos
(Por ejemplo, antibiticos, molculas de defensa del husped, Hall-Stoodley &
Stoodley, 2009; Lieleg et al., 2011). Adems, el
Bacterias dentro del biofilm tambin difieren sustancialmente de sus hermanos planctnicos
(natacin libre) en trminos de su
Transcripcional perfil (Waite et al., 2006). Oxgeno relativo
Y la limitacin de nutrientes dentro de la biopelcula puede contribuir a la
Lento de crecimiento observado por las bacterias del biofilm, as
A una regulacin positiva de la respuesta general de estrs alternativa
Factor sigma RpoS; Todos estos factores podran
Aumento de la resistencia a los antibiticos (Mah & O'Toole, 2001),
Que tambin se ha propuesto que se debe a la adaptacin
Cambios en la expresin gnica, penetracin lenta, QS y
Concentraciones extracelulares de antibiticos
Enzimas La resistencia antibitica y desinfectante de
Los biofilms bacterianos contribuyen enormemente a su resiliencia,
Y por lo tanto, los biofilms son un problema mdico importante.
Los biofilms pueden formar sobre el equipo mdico insertado tal como
Catteres y tubos endotraqueales (Veesenmeyer et al.,
2009), y se ha propuesto que P. aeruginosa puede
Crecen como un biofilm en tejidos del anfitrin / superficies epiteliales durante
Infecciones crnicas, particularmente en el pulmn de la FQ (Bjarnsholt
Et al., 2010).
La transicin de P. aeruginosa desde el motil a ssile
Estado en los biofilms, y viceversa, se manifiesta como un
Multitud de cambios fisiolgicos. La primera fase es inicial
Contacto seguido de fuerte (efectivamente irreversible) apego.
Esto es mediado por el tipo 4 pili, flagella, y el ms
Recientemente descubierto Copa fimbria (Mikkelsen et al., 2011).
Lo que inicia esta transicin depende en parte de la clula-tocell
Sealizacin a travs de los sistemas de deteccin de qurum Las y Rhl
Y en seales ambientales tales como antibiticos, pigmentos,
Y siderforos (Lopez et al., 2010). Por ejemplo, el
Se ha demostrado que el imipenem antibitico causa un espesamiento
De biofilms debido a la expresin inducida de alginato
Polisacrido (Bagge et al., 2004). Despus de irreversible
Las bacterias en el biofilm se multiplican como microcolonias
Y producir una matriz EPS. Tres polisacridos son
Producido para el P. aeruginosa EPS, con la importancia
Y contribuciones de cada uno variando segn la cepa.
El alginato es sobreproducido por cepas mucoides que a menudo
Aislado de los pulmones de los pacientes con FQ. Es ampliamente
Participar en la formacin de biofilms en la
CF donde se piensa que protege a las bacterias de los
Respuesta del husped; Sin embargo, la evidencia tambin sugiere que
Alginato no es un requisito para la formacin de biofilm en
(Wozniak et al., 2003, Ryder et al., 2007). el pel
Polisacrido es producido por la mayora de las cepas, mientras que el Psl
Polisacrido no est completamente codificado en todas las cepas (por ejemplo, cepa
PA14 contiene una delecin parcial en el locus psl; lpez
Et al., 2010). La maduracin continua del biofilm conduce a
Estructuras en forma de seta que se intercalan con
Canales llenos de lquido que permitan el intercambio de residuos
Productos y nutrientes (Kaplan, 2010). Posteriormente, las clulas
Pueden desprenderse del biofilm y dispersarse a travs del
Ambiente, donde pueden adherirse a otro
Superficie, renovando el ciclo de formacin de biofilm.
El cambio entre los estados mviles y ssiles est influenciado
Por varios sistemas reguladores que parecen
Varios nodos. El sistema de dos componentes GacA / GacS ha
Durante muchos aos, tanto en la formacin de biofilm como en la
virulencia. Un regulador de respuesta GacA activado (RR)
Promueve la transcripcin de los dos pequeos ARNs reguladores,
RsmY y RsmZ, que luego se unen e inactivan el
Translacional represor RsmA (Mikkelsen et al., 2011).
La RsmA secuestrada causa la formacin de biofilm a travs de
El aumento de la produccin de Pel y PsI polisacridos
Y el segundo mensajero cclico-di-GMP (Moscoso et al.,
2011) y la regulacin negativa de varios virulentos extracelular
Productos tales como piocianina, cianuro de hidrgeno y
Elastasa (Gooderham y Hancock, 2009). El sensor hbrido
RetS influye en este sistema al reprimir GacA y por
Que afecta a la produccin de di-GMP cclico a travs de la diguanil ciclasa
Y el regulador, WspR (Moscoso et al., 2011). Veinticinco
Otros reguladores se han demostrado, a un mayor o menor
Para regular recprocamente la formacin de biofilm (reflejando
El estado ssil) y la motilidad enjambrada (que refleja el movimiento
estado; Yeung et al., 2009).
proteasas
Varias proteasas son secretadas por P. aeruginosa. Estas
Las proteasas han establecido papeles en las infecciones oculares y
Sepsis, donde pueden degradar inmunoglobulinas y fibrina,
Y romper las uniones estrechas epiteliales (Kipnis et al., 2006).
Aunque su contribucin a las infecciones pulmonares es menos clara,
Se ha demostrado que las proteasas contribuyen al dao tisular
Infecciones respiratorias, incluida la degradacin de los
Tensioactivo pulmonar (Fleiszig y Evans, 2002, Hobden, 2002;
Kipnis et al., 2006).
La proteasa alcalina es una metaloproteasa de cinc secretada de tipo 1
Que es conocido por su degradacin del complemento husped
Protenas y fibronectina husped (Laarman et al., 2012). En un
Modelo murino de sepsis, proteasa alcalina en combinacin
Con exotoxina A pseudomonal se prepar y se administr
Como una vacuna anticoagulante inactivada y demostr
Proteccin estadsticamente significativa contra la infeccin subsiguiente
Por P. aeruginosa (Matsumoto et al., 1998). Adems,
Se ha demostrado que la proteasa alcalina interfiere con la flagelina
Sealizacin a travs del husped TLR5 degradando la flagelina libre
Monmeros y ayudando as a P. aeruginosa a evitar
(Bardoel et al., 2011).
Pseudomonas aeruginosa produce dos elastasas, LasA
Y LasB, que estn regulados por el qurum de deteccin
Y secreta a travs de sistemas de secrecin tipo 2 (Toder
Et al., 1994; De Kievit y Iglewski, 2000). La mayora de P. aeruginosa
Las investigaciones reservan el trmino elastasa para LasB y
'Estafililisina' para LasA. Esto es porque LasA, una serina
Proteasa, es capaz de hidrolizar el puente penta-glicina
Necesaria para la estabilizacin del peptidoglicano en la pared
Staphylococci, pero slo tiene una fraccin del elastoltico
Habilidades de LasB y se cree que mejorar la
Actividad proteoltica de LasB (Toder et al., 1994, Matsumoto,
2004). LasB se ha observado para degradar el opsonizing
Las protenas tensioactivas pulmonares A y D (Mariencheck et al., 2003).
Como resultado, los mutantes DlasB son ms susceptibles a la fagocitosis
Y se atenan para la virulencia (Kuang et al.,
2011).
La proteasa IV es una serina proteasa que puede degradar
Protenas del complemento, inmunoglobulinas y fibringeno.
Inyecciones de proteasa IV sobre la crnea en un modelo de conejo
De la infeccin ocular caus erosin del epitelio corneal, mientras que la infeccin de crneas con
una cepa deficiencia de proteasa IV
Mostraron una virulencia reducida (Engel et al., 1998). Adems,
Degradacin de la proteasa IV de las protenas A del tensioactivo husped
Y se ha demostrado que D inhibe la asociacin de
P. aeruginosa con macrfagos alveolares, demostrando una
Para esta proteasa en la supervivencia de P. aeruginosa durante
(Malloy et al., 2005).
lipopolisacrido
El lipopolisacrido es un glicolpido complejo que forma el
Externa de la membrana externa y tiene un papel en
Antigenicidad, la respuesta inflamatoria, la exclusin de
Molculas externas y en la mediacin de las
Antibiticos (King et al., 2009). P. aeruginosa produce una
Lipopolisacrido de tres dominios que consta de una membrana-
El lpido A anclado, la regin central del polisacrido y
Un polisacrido O-especfico altamente variable (O-antgeno o
O - polisacrido). La importancia del lipopolisacrido
A la bacteria y para hospedar patologa y antibiticos
Resistencia ha sometido a un estudio intenso, y una gran
Ahora se conoce sobre su biosntesis y las contribuciones
De sus dominios estructurales a las observaciones anteriores.
Debido a limitaciones de espacio, hemos limitado nuestra discusin de
Lipopolisacrido a los lpidos A y O-polisacrido, los dos
Componentes que ms aportan a Pseudomonas
Infecciones. Para dos excelentes crticas sobre Pseudomonas
Lipopolisacrido, nos referimos al lector a King et al.
(2009) y Lam et al. (2011).
Lpido A
El lpido A es un glicolpido atpico que ancla el lipopolisacrido
En la membrana externa. Al igual que el lpido A de
Otras bacterias Gram-negativas, el lpido A de P. aeruginosa es
Compuesto por un esqueleto de bifosfato de diglucosamina con
cidos grasos primarios y secundarios ligados a O y N. Estructuralmente,
El nmero, la posicin y la naturaleza del acilo enlazado
Grupos y el tipo de sustituyente a los grupos fosfato
Pueden variar entre aislamientos y tambin pueden surgir debido al crecimiento
Condiciones (Lam et al., 2011). Como el "fin de negocio" de
Lipopolisacrido, el lpido A puede ser limitado secuencialmente por
Receptores de clulas husped MD2 y CD14 que conducen a la activacin de
La va de sealizacin TLR4 a NFjB y activar la
Produccin de citoquinas pro-inflamatorias y quimiocinas,
Inflamacin y eventualmente choque endotxico (Teghanemt
Et al., 2005; Akira et al., 2006).
Las modificaciones al lpido A pueden alterar la susceptibilidad de la bacteria
A polimixas y pptidos antimicrobianos catinicos como
As como cambiar sus propiedades inflamatorias. Adaptado al laboratorio
Cepas de P. aeruginosa cultivadas en medio rico exhiben
Penta- o hexa-acilada, que difieren segn la forma
Presencia de un cido decanoico en las tres posiciones. pentacylated
Las especies son predominantes (c 75%) en laboratorio
Y en aislamientos de infecciones agudas (King et al.,
2009).
Por el contrario, aislados de CF crnicamente infectados
Los pulmones demuestran hexa- ya veces hepta-acilados
Especies con propiedades inflamatorias incrementadas,
Medida de estas modificaciones parece aumentar con la
Gravedad de la enfermedad pulmonar (Ernst et al., 2007). El incremento
Inflamatoria de estas especies de lpidos A hiperaciladas
Se piensa que es debido a una alteracin en la unin del lpido A
A MD2 (Teghanemt et al., 2005), mientras que la adicin de
Aminoarabinosa en las cepas mutantes phoQ constitutivas tambin
Conduce a un lipopolisacrido ms inflamatorio (Gellatly
Et al., 2012). Del mismo modo, ambos tipos de cambios y especialmente
Aminoarabinosa a uno o ambos fosfatos puede
Contribuyen a la resistencia a los pptidos antimicrobianos catinicos
Tales como polimixinas (Ernst et al., 1999). De hecho, como inhalado
Colistina se administra rutinariamente a los pulmones de pacientes con
CF, no es ninguna sorpresa que un lpido alterado A que promueve
Se ha aislado la resistencia de Pseudomonas a partir de estos
Pacientes (Ernst et al., 2007, Miller et al., 2011). Muchos lpidos A
Modificaciones son reguladas y pueden ser inducidas como
Respuesta a un cambio ambiental; Por ejemplo, el
La adicin de aminoarabinosa puede desencadenarse mediante la unin a
Superficies epiteliales, la presencia de pptidos antimicrobianos
Actuando a travs de la ParRS o CpxRS de dos componentes
Sistemas reguladores (TCS), o limitantes (no fisiolgicos)
Mg2 + que acta a travs de la PmrAB o PhoPQ de dos componentes
Sistemas.
O-polisacrido
En cepas de tipo salvaje, el dominio de lpido A est unido a un
Conservado nueve o diez de azcar, oligosacrido ramificado
ncleo. Este ncleo A de lpido puede estar adems sustituido en aproximadamente
15% de las molculas de lipopolisacridos en P. aeruginosa
Por O-polisacrido ( 'O-antgeno'). Dos tipos de
O-antgeno puede existir simultneamente en un determinado P. aeruginosa
Clulas, y son distintas estructural y serolgicamente.
El polisacrido de la banda A ( "comn") es un homopolmero
De D-ramnosa de aproximadamente 70 azcares de largo y que
Provoca una respuesta de anticuerpos dbil. En contraste, la banda B
( "O-especfico") es un heteropolmero variable de deformacin
Tanto en longitud de cadena como en la naturaleza de los azcares, y
Este lipopolisacrido provoca una fuerte respuesta de anticuerpos
Y es la base qumica para la serotipificacin (King et al., 2009).
Algunas cepas de P. aeruginosa no producen O-polisacrido
(Cepas "speras"), mientras que otras sustituyen el lpido A
Y ncleo con slo una unidad de O-sacrido ( 'semi-spera').
Curiosamente, muchos aislamientos crnicos de P. aeruginosa pierden su
Expresin del polisacrido de la banda B (Hancock et al.,
1983) con el polisacrido de la banda A convirtindose en el dominante
Antgeno con el tiempo. Esto puede ser impulsado por
Presin para que las bacterias evadan el sistema inmune
Respuestas mediante la supresin de la ms antignica O-especficos
Polisacrido (King et al., 2009).
Otros factores de virulencia
Varios otros factores de virulencia son secretados por
P. aeruginosa y puede contribuir a su patogenicidad.
La exotoxina A es una ADPRT que inhibe el factor de elongacin del husped
2 (EF2) inhibiendo as la sntesis de protenas y conduciendo a
Muerte celular. Esta inhibicin de la sntesis de protenas tambin es probable que conduce
A la represin de la respuesta inmune del husped como se demostr
Por la disminucin de las citoquinas liberadas
La sangre estimulada con P. aeruginosa muerta por calor en el
Ausencia de exotoxina A (Schultz et al., 2000). Las cepas productoras de exotoxina A muestran un
aumento de 20 veces en virulencia en un
Murino en comparacin con los mutantes deficientes en exotoxina A
(Miyazaki et al., 1995). Las propiedades txicas de la exotoxina A
Tambin se ha demostrado que inducen la muerte de la clula husped por apoptosis,
Y por esa razn, la exotoxina A ha sido investigada como una
Inmunotoxina que se dirige a las clulas tumorales para la terapia contra el cncer
(Wolf & Els asser-Beile, 2009, Du et al., 2010).
Las lipasas y las fosfolipasas descomponen los lpidos tensioactivos
Y los fosfolpidos de las membranas de las clulas husped (Kipnis et al.,
2006). Se ha demostrado que las fosfolipasas degradan
Tensioactivo, el 90% de los cuales es lpido, causando un
Tensin superficial (Holm et al., 1991). fosfolipasas hemolticas
Son capaces de lisar directamente eritrocitos humanos y ovinos
(Ostroff et al., 1990).
El pigmento azul-verde pyocyanin da P. aeruginosa
Coloniales su color distinto y provoca estrs oxidativo
El husped, alterando la catalasa del husped, y mitocondrial
Transporte de electrones (Lau et al., 2004). Piocianina purificada
Ha sido demostrado in vitro para inducir la apoptosis en neutrfilos
As como inhibir la fagocitosis de los cuerpos apoptticos por
Macrfagos (Lau et al., 2004, Bianchi et al., 2008). Es
Tambin capaces de modular la expresin de las quimioquinas IL-
8 y RANTES por clulas epiteliales de las vas respiratorias (Denning et al.,
1998) y suprimen los latidos de los cilios. Junto con rhamnolipids,
Se ha demostrado que la produccin de piico-
Controlada por el estrs oxidativo RR, OxyR, y es
Por lo tanto, pensaba desempear un papel protector
Reactivo de oxgeno y nitrgeno producido por las clulas fagocticas
Durante la infeccin (Lau et al., 2005, Vinckx et al.,
2010).
La quelacin del hierro es una parte vital del establecimiento de infecciones y
La progresin a una infeccin crnica, como el entorno del husped
Tiene poco hierro libre debido a su propio secuestro
Molculas como la lactoferrina y la transferrina. El siderforo,
Pyoverdine, es capaz de secuestrar el hierro del husped
Depsitos y actuar como una molcula de sealizacin. Hierro unido
Pyoverdine interacta con el receptor de clulas de Pseudomonas
FpvA, y este complejo a su vez interacta con el antisigma
Factor FpvR, provocando la regulacin positiva de la exotoxina A,
Endoproteasa, y de la propia pyoverdina (Jimenez et al.,
2012). Varios otros sistemas de transporte siderforo de hierro
Existentes, lo que permite la captacin de hierro con complejos endgenos
Siderforos (por ejemplo, piochelin), hemo husped, o los siderforos
De otros microorganismos (por ejemplo, enterobactina, Cornelis,
2010).
Resistencia antimicrobiana
Las infecciones por P. aeruginosa son notoriamente difciles de tratar
Debido a su capacidad intrnseca para resistir muchas clases de antibiticos
As como su capacidad de adquirir resistencia. todo conocido
Mecanismos de resistencia a los antibiticos pueden
Esta bacteria (intrnseca, adquirida, y adaptativa); a veces
Todo dentro del mismo aislado (Tabla 2). Las tasas de resistencia
En aumento a pesar del uso de terapias con frmacos combinados
(Moore & Flaws, 2011). Como pocos medicamentos nuevos
Contra las infecciones por P. aeruginosa, ha habido un
El uso de frmacos ms antiguos como las polimixinas que
Ciones anteriores, debido a los amplios informes de toxicidad
Efectos secundarios (Livermore, 2002). A pesar de los informes de
Nefrotoxicidad y neurotoxicidad, en pacientes con FQ
Sufriendo infecciones recurrentes de bacterias multirresistentes,
Colistina (una droga polimixina) ha sido durante los ltimos 15 aos
Administrado de forma rutinaria por inhalacin (Falagas & Kasiakou,
2006), demostrando que el problema de resistencia a los antibiticos
Ha estado influyendo en las opciones teraputicas durante muchos aos.
La resistencia intrnseca se codifica en el microorganismo
cromosoma. En el caso de P. aeruginosa, la resistencia intrnseca
Se debe a la baja permeabilidad de su membrana externa,
La expresin constitutiva del eflujo de membrana (Mex)
Y la aparicin natural de un cromosoma inducible
B - lactamasa, AmpC (Strateva & Yordanov, 2009).
La membrana externa es una barrera semipermeable que
Restringe la captacin de pequeas molculas hidrfilas tales como
B-lactama a los canales de protenas de porina
Incrustado dentro de la membrana externa. Se estima que
La membrana externa de P. aeruginosa es de 10 a 100 veces menos
Permeable que la de Escherichia coli, teniendo menos
Canal porins (formado por OprF) y un nmero de pequeos
Canales porinas (formadas por protenas tales como OprD y OprB;
Breidenstein et al., 2011). Seis de resistencia-nodulacin-
(RND) se han descrito para P. aeruginosa, aunque 12 se han identificado genticamente
(Schweizer, 2003). Estas bombas de eflujo pueden
Amplia gama de antibiticos; Por ejemplo, MexAB-OprM y
MexXY-OprM puede colectivamente eflujo b-lactamas, cloranfenicol,
Fluoroquinolonas, macrlidos, novobiocina, sulfonamidas,
Tetraciclina y trimetoprim y aminoglucsidos
(Livermore, 2002, Schweizer, 2003). La b-lactamasa,
AmpC, se encuentra en el periplasma y puede
Hidrolizar varios antibiticos b-lactmicos tales como penicilinas
Y cefalosporinas. Se expresa en niveles bajos pero puede ser
Inducida por concentraciones subinhibitorias de ciertas b-lactamas.
La resistencia impartida por las bombas de eflujo y AmpC es
Intrnsicamente conectado a la permeabilidad restringida de la membrana externa,
Porque la concentracin de b-lactamas en la
El periplasma depende de la eficiencia y la velocidad con que
Son transportados a travs de las porinas del exterior
Membrana (Jacoby, 2009).
La resistencia adquirida puede ser el resultado de la
Transferencia y posterior expresin de un casete de resistencia
Absorbida por la bacteria o puede ser el resultado de
Mutaciones en los objetivos o los genes, incluidos los reguladores,
Que estabilizan o mejoran mecanismos de resistencia intrnseca
(Breidenstein et al., 2011). Elementos de ADN tales como plsmidos
Y transposones se pueden pasar entre las bacterias a travs de la conjugacin,
Transformacin o transduccin y pueden
Resistencia a uno o ms antibiticos en el
Susceptible. Estos elementos tambin pueden
Resistencia intrnseca de P. aeruginosa; Por ejemplo, el
Transferencia y expresin de una segunda b-lactamasa puede
Aumentar la resistencia a antibiticos b-lactmicos particulares y / o
Aumentar la gama de b-lactamas que se pueden resistir.
La resistencia adquirida tambin puede ocurrir cuando una mutacin
En un gen regulador provoca la desregulacin de un gen preexistente
Mecanismo de resistencia. Por ejemplo, como el
Inductores naturales, que incluyen los aminoglucsidos y otros
Antibiticos dirigidos a ribosomas, una mutacin en mexZ, que
Normalmente suprime la expresin de mexXY, conduce a la
Sobreexpresin de la bomba de eflujo MexXY (Matsuo et al.,
2004). Las mutaciones que resultan en alteraciones de un antibitico
Objetivo tambin puede conferir resistencia, por ejemplo
Mutacin en ADN girasa reduce la afinidad de unin de la
Enzima para fluoroquinolonas que conduce a resistencia (Schweizer,
2003; Breidenstein et al., 2011).
La resistencia adaptativa se produce cuando las condiciones ambientales
Tales como varias tensiones incluyendo la exposicin a
Concentraciones de antibiticos subinhibitorios o estados de crecimiento
Tales como la formacin de biofilm, la motilidad de enjambre o de surf o
La asociacin con las superficies epiteliales conduce a una mayor resistencia.
Estas condiciones causan un cambio en la expresin gnica
Resultando en una regulacin positiva de los genes que pueden conferir
Resistencia como se mencion anteriormente (Breidenstein et al., 2011).
Un conocido mecanismo de resistencia adaptativa en P. aeruginosa
Causa resistencia a pptidos antimicrobianos catinicos.
En condiciones especficas de induccin (limitacin de Mg2 +, exposicin
A pptidos y polimixinas y la interaccin de clulas epiteliales), un
Variedad de quinasas sensores (SKs) incluyendo PhoQ, PmrB,
ParS, CprS y CbrA independientemente regulan
Expresin del opern arnBCADTEF-udg, que causa
La sntesis y adicin de aminoarabinosa al lpido A
(McPhee et al., 2003, 2006).
Esta modificacin disminuye
Interacciones de estos pptidos catinicos con los
Membrana mediante la reduccin de la carga
Lipopolisacrido. Este efecto es transitorio porque la susceptibilidad
Cuando las condiciones inductoras especficas son
Invertido
Pseudomonas aeruginosa: contexto genmico
El xito de P. aeruginosa como patgeno oportunista
Se debe sustancialmente a la versatilidad y adaptabilidad
Codificado en su genoma. Hasta septiembre de 2012, 36 cepas
De P. aeruginosa tanto desde el punto de vista clnico como
Fuentes se haban secuenciado total o parcialmente de acuerdo con
La base de datos Entrez de NCBI. Comparado con la mayora de los otros
Bacterias que causan la enfermedad, Pseudomonas tiene una
Genoma grande, que van desde 6,22 a 6,91 Mb (Silby et al.,
2011). La secuenciacin de mltiples cepas ha revelado que
El genoma se organiza como un surtido de
Regiones intercaladas por "regiones de plasticidad genmica" que
Contienen genes nicos para cada cepa (Mathee et al., 2008).
Esto ha llevado a que P. aeruginosa sea descrito como
'Ncleo' genoma, que contiene un conjunto conservado de genes comunes
A la especie y que comprende hasta el 90% de la
Contenido genmico y un genoma "accesorio", que contiene
Genes que se encuentran generalmente en slo unas pocas cepas. Una llave
Facetaria del genoma de P. aeruginosa es el gran nmero de
Paralogous genes que han surgido por la duplicacin gentica,
Porque evolucionaron independientemente para crear familias de genes
Productos que se superponen funcionalmente pero que tienen
Propiedades o se regulan de manera diferente. Cuando se combina con
El aumento de la diversidad metablica y funcional
Por P. aeruginosa, parece probable que la evolucin de la
El genoma de P. aeruginosa surgi de la presin selectiva
Adaptabilidad ambiental (Silby et al., 2011).
Pseudomonas aeruginosa es famosamente metablicamente verstil
Y ha sido aislado de numerosos nutrientes pobres
Incluyendo superficies en instalaciones mdicas. un familiar
Anecdtica entre los cientficos de Pseudomonas es que para cualquier
O hidrocarburo imaginario, hay una especie de Pseudomonas
Que puede catabolizarlo dado oxgeno o nitrito y
tiempo suficiente. Pseudomonas tiene una preferencia bien conocida
Para el crecimiento en productos intermedios de cido tricarboxlico (TCA)
Azcares en el laboratorio (mediado a travs de CbrAB /
Crc / CrcZ), y reflejando esto, la secuenciacin de la cepa
PAO1 (la primera cepa a ser secuenciada) revel c. 300
Sistemas de transporte citoplsmicos y un nmero
De los genes que codifican las enzimas que se prev estar
B-oxidacin de diversos compuestos de carbono (Stover et al.,
2000). La gran mayora de estos sistemas de transporte son
La importacin de nutrientes y otras molculas pequeas. Varios
Los sistemas de transporte mono-, di- y tri-carboxilato fueron
Identificados, sin embargo se revelaron muy pocos transportadores de azcar
Cuando se compara con la E. coli intensamente escrutada, la
Bacterias ms estrechamente relacionadas que haban
Secuenciado en ese momento.
Tal vez ms sorprendente que su diversidad metablica es
El gran nmero de genes reguladores que P. aeruginosa
Codifica La secuenciacin de PAO1 predice 521 genes que codifican las protenas reguladoras, casi
el 10% de su genoma, un
Una proporcin mucho mayor que las bacterias secuenciadas con
Genomas (Stover et al., 2000). Los anlisis de otras bacterias
Los genomas han demostrado que las bacterias que pueden sobrevivir
En ambientes diversos tienen una mayor proporcin de
Los genomas dedicados a las protenas reguladoras que las bacterias que
Se especializan para sobrevivir en un ambiente especfico.
Muchos
De los genes reguladores identificados en P. aeruginosa
Perteneca a la clase de dos componentes de los sistemas reguladores,
Que permiten a la bacteria adaptarse rpidamente a una
cambio medioambiental.
Se identificaron muchos otros sistemas en P. aeruginosa,
Que dio una idea de la patogenicidad y la persistencia
De esta bacteria. Entre ellos se incluyeron numerosos frmacos intrnsecos
Resistencia y sistemas de eflujo, sistemas de secrecin de protenas,
Y factores de virulencia (Stover et al., 2000). quizs ms
Diciendo, el 45,8% de los marcos de lectura abiertos previstos (ORFs)
Contiene genes para los que no se puede asignar ninguna funcin o
predicho. Mientras que muchos de estos comparten homologa de secuencia
A genes predichos de funcin desconocida en otras secuencias
Bacterias, la mayora no mostr homologa con ninguna
Previamente secuenciado gen. Ms de una dcada despus de PAO1
Fue secuenciado, slo 153 de estos genes desconocidos haba sido
Funcionalmente caracterizado (Winsor et al., 2005), aunque
Casi 700 se enumeran como hipotticos conservados.
Sistemas reguladores de dos componentes

Los TCS son una de las principales familias reguladoras que se utilizan
Por una bacteria para adaptarse rpidamente a los cambios en su entorno.
En trminos de patognesis, el xito de la adaptacin
De P. aeruginosa de su suelo normal o acuoso
Ambiente hostil del husped es un
Hazaa, y gran parte de esto est controlado por TCSs. Pseudomonas
Aeruginosa tiene ms TCS que cualquier otra bacteria conocida
Patgeno, y varios de ellos han sido implicados en
Virulencia y / o resistencia a los antibiticos. Un ejemplo es el
Anteriormente mencionado GacA / LadS / RetS circuito regulador
Participacin en la formacin de biofilm y virulencia.
Los TCS constituyen un sistema primitivo de transduccin de seales
Y generalmente consisten en un SK unido a membrana que detecta
Un estmulo extracelular y un RR citoplsmico que acta
Afectan el cambio celular. En el esquema clsico de dos componentes
Transduccin de seales, el SK detecta una
(Por ejemplo, a travs de la unin del ligando), lo que provoca una conformacin
Alteracin y autofosforilacin en una
Histidina. El SK transfiere entonces el fosfato
Grupo a un aspartato conservado en el N-terminal del RR,
Activando as el dominio de salida del C-terminal del regulador,
Frecuentemente un dominio de unin al ADN de hlice-vuelta-hlice (Galperin,
2006; Gooderham & Hancock, 2009). El RR activado
Procede a alterar la expresin de genes particulares para causar
Una respuesta al estmulo. Este proceso es reversible, y
Desfosforilacin del RR sirve para devolver la clula a su
estado previo.
Los TCS son diversos, y las modificaciones estructurales y funcionales
De este sistema clsico. SKs hbridos pueden
Contienen mltiples sitios de fosfodonor y fosfoacceptor
Y pueden promover esquemas de fosforilacin multietapa que pueden
Incluyen pequeas protenas de rel de histidina, mientras que no todos los RR tienen
Dominios efectores de unin al ADN (Stock et al., 2000). el
Efector de un RR puede funcionar como una enzima, un
En una reaccin de fosfotransferencia, oa travs
Interaccin con otras protenas. Adems, las molculas pequeas
Tales como fosfato de acetilo pueden servir como fosfo-donantes para
RR (Stock et al., 2000). Tambin es posible para mltiples SKs
Para fosforilar el mismo RR o para un solo SK a
Fosforilan varios RR, como es el caso de la quimiotaxis,
En el que un nico SK, CheA, fosforila dos RR, CheB
Y CheY (Li et al., 1995), o en el qurum de deteccin
Cascada de Vibrio harveyi donde los SKs LuxN, LuxQ, y
CqsS pueden transferir cada uno el fosfato a LuxU (Jung et al.,
2011).
En P. aeruginosa, hay un predicho 64 SKs y 72
RR, y la mayora de ellos (50 sistemas) estn dispuestos como
Pares cognados en un opern. El resto no est fsicamente
Vinculados a cualquier otro gen de dos componentes y se denominan
Hurfanos Esta separacin fsica hace que sea difcil predecir
(Gooderham y Hancock, 2009). Varios
Los TCS en P. aeruginosa han sido identificados como
A la virulencia (por ejemplo GacA - GacS), formacin de biofilm (p.
WspR - WspE), y resistencia a los antibiticos (por ejemplo PhoP - PhoQ;
Gooderham & Hancock, 2009).
Significado y conclusiones
Aunque nuestra comprensin de P. aeruginosa ha avanzado
Considerablemente en los ltimos aos, esta bacteria sigue
Un flagelo en los hospitales, causando una infeccin virulenta y
Infecciones a pesar del tratamiento antibitico. Dada su ubicuidad
Hbitat, versatilidad metablica y controles reguladores complejos,
Es poco probable que P. aeruginosa llegue a estar completamente
Eliminado de los entornos hospitalarios; Por lo tanto, probado y verdadero
Los mtodos de prevencin y de intervencin temprana
Siguen siendo los mtodos de tratamiento ms eficaces para
En el futuro previsible. Mayor comprensin de Pseudomonas
Sistemas reguladores y su efecto sobre el biofilm
Dinmica y QS pueden permitirnos encontrar y explotar
Debilidades en este modo de crecimiento particularmente resiliente
Adaptar los actuales regmenes de tratamiento para prevenir la formacin de
Biopelculas o de resistencia adaptativa. De hecho, las investigaciones
Han comenzado a dirigirse a varios SDC como medio de
(Stephenson y Hoch, 2002). El desarrollo de la vacuna,
Por ejemplo, los flagelos o los flagelos de tipo 4
Antgenos, tambin pueden permitirnos prevenir la infeccin en
Estn en mayor riesgo.