LUCA GRIPPO

Biologa vegetal
Clase 10: Floracin y desarrollo floral
Cuando se habla de floracin no se est hablando de todas las plantas. De acuerdo a la historia coevolutiva,
hay plantas que florecen y otras que no (por ejemplo, helechos). Cuando se habla de floracin se hace
referencia a los angiospermas, que son las plantas con flores y conforman el grupo ms diverso.

Las modificaciones en el desarrollo de las plantas se producen en una nica regin, el meristema apical del
vstago. Los cambios morfolgicos que surgen de estas transiciones en la actividad del meristema se
denominan cambios de fase. Durante la transicin de la fase juvenil a la fase adulta, los cambios morfolgicos
ms obvios se observan en el tamao y forma de la hoja. Los cambios de fase son un ejemplo de la plasticidad
del desarrollo de las plantas. La transicin de hojas juveniles a hojas adultas es solo un tipo de cambio de fase.
El proceso de switch es raramente reversible y asegurarse de que el tiempo de esta transicin es el ptimo
para la polinizacin y el desarrollo de las semillas es un factor decisivo para el xito reproductivo. Se vio que
mltiples contribuciones ambientales y tambin endgenas influencian el tiempo del switch. Se puede definir
floracin como la transicin de la etapa de crecimiento vegetativa a reproductiva.

Se entiende por evocacin floral a los eventos que ocurren en el meristema apical vegetativo que conducen
a la formacin de un meristema floral y por ltimo a flores. Es una suma de todos los eventos que ocurren en
el meristema apical del vstago, que comprometen a las clulas del mismo a producir flores.
La evocacin floral depende de factores internos (ritmos circadianos, seales autnomas, giberelinas) y de
factores externos (fotoperiodo y vernalizacin).

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La particularidad de Arabidopsis es que es una planta anual. Florece una vez y se muere el organismo. Hay
plantas bi o pluri anuales que van a florecer ms veces al ao recin cuando llegan a la fase adulta reproductiva.
A veces a las plantas les toma varios aos hasta que empiezan a florecer.

A la izquierda se muestra una planta de Arabidopsis en la fase vegetativa de crecimiento, en la que slo se
producen hojas. A la derecha se muestra una planta en la fase reproductora, en la que la planta produce flores
en lugar de hojas, alarga el tallo principal y genera tallos secundarios en las axilas de hojas previamente
formadas.

Arabidopsis es, desde el punto de vista del tiempo de floracin, una planta facultativa de da largo. Esto significa
que puede florecer en un rgimen de das cortos (unas 8 -10 horas de luz al da, equivalente al otoo/invierno),
pero los das largos (unas 16 horas de luz al da, equivalente a primavera/verano) promueven una floracin
mucho ms temprana (tres semanas desde la germinacin de las semillas, frente a dos meses en das cortos).

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Entre los numerosos mutantes afectados en el tiempo de floracin se pueden distinguir al menos dos grupos:
aquellos que florecen ms tarde slo en das largos, y aquellos que florecen ms tarde tanto en das largos
como en das cortos. Esto indica que los primeros definen una va de sealizacin que se activa
preferentemente en das largos, mientras que los segundos participan en la promocin de la floracin
independientemente de cul sea el fotoperodo.

Vas de sealizacin en la floracin

Estas vas pueden inducir la floracin por separado, pero tambin tienen algunos puntos de contacto con
algunos genes en particular. El anlisis gentico de mutantes con el tiempo de floracin alterado permiti
diseccionar la induccin de la floracin en al menos cuatro vas de sealizacin: la primera se activa cuando
los das son largos, la segunda funciona fundamentalmente cuando los das son cortos y depende de las
giberelinas, la tercera participa en la regulacin de la floracin en respuesta a la temperatura de crecimiento y
la cuarta est implicada en la vernalizacin.

Va autnoma
La va autnoma controla la floracin independientemente del fotoperodo. El gen flowering locus c (FLC) es
un factor de transcripcin del tipo MADS que se expresa mayormente en el pice del vstago y la raz que
acta como un represor de la floracin ya que reprime los integradores de las vas de floracin FT, SOC1 y

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LFY. Las bajas temperaturas disminuyen los niveles de ARNm FLC. Es ampliamente expresado en la planta,
pero cumple su papel principal en las hojas expandidas. Esta va involucra factores que reprimen a FLC a
travs del procesamiento de RNA y regulacin epigentica, por lo tanto, los genes al reprimir FLC van a permitir
que transcurra la floracin. Los genes que se encuentran corriente arriba de FLC y lo reprimen son FCA, FLD,
FLK, FPA, FVE, FY y LD. Algunos de estos genes son genes de procesamiento de ARN y lo que van a hacer
es reprimir la expresin de FLC a nivel de ARN. Otros de los genes operan de manera epigentica a nivel de
metilacin de histonas. La sacarosa y las altas temperaturas inhiben a FLC.
A pesar de su "autonoma" respecto al fotoperodo, su actividad responde a otras seales ambientales, como
la temperatura de crecimiento y la vernalizacin. Est ligada a la va de vernalizacin, en este caso la floracin
se induce por seales internas, por ejemplo, la produccin de un determinado nmero de hojas
Si se tienen plantas mutantes en cualquiera de los genes de la va autnoma, etas van a tener un incremento
de FLC y, por lo tanto, van a tener demorada la transicin a floracin.
La sacarosa est relacionada con esta va ya que cuando la planta crece cambia su concentracin. Tiene la
capacidad de estimular la floracin en Arabidopsis aumentando la expresin de LFY por un mecanismo
desconocido.

Va de la vernalizacin
La vernalizacin es la habilidad de una planta de florecer en la primavera luego de una exposicin prolongada
al fro del invierno o un equivalente artificial. Este mecanismo lo utilizan las plantas que tiene un invierno
marcado para poder sincronizar la floracin. Esto le permite a la planta censar el da y cuando haya una mejor
calidad de luz y temperatura poder florecer correctamente. Segn la planta puede ser de 1 a 3 meses y de
10C a -2C. El equivalente artificial es lo que se hace en el laboratorio de poner las semillas dos das en
heladera a 4C y de esa manera uno se puede asegurar que cada genotipo va a florecer los mismos das y con
el mismo nmero de hojas. La vernalizacin involucra la supresin de genes que reprimen la floracin y puede
ser reversible por altas temperaturas. Se da mayoritariamente en cereales de invierno como trigo o centeno.
Hay dos formas de cuantificar el tiempo de floracin. Una es contar desde que se germino la planta cunto
tiempo tardo en florecer y otra, que es la ms usada para Arabidopsis, es contar el nmero de hojas. El recuento
de numero de hojas es un buen parmetro ya que no es tan sensible a variaciones o fluctuaciones que puede
tener la temperatura de la cmara de crecimiento (a veces se corta la luz o se rompe el aire acondicionado y
estas variaciones de temperatura pueden cambiar los das en los que florece la planta).

Flowering locus C (FLC) es un potente represor de la floracin. En la imagen se puede ver una planta salvaje
y otra transformada con FLC bajo un promotor constitutivo, el cual adems de aumentar su expresin la va a
expresar en lugares ectpicos. Se puede ver que la mutante genero mucha cantidad de hojas y aun no floreci.
Cuando una wt florece posee entre 9 y 13 hojas dependiendo de la cmara de crecimiento. Dependiendo de
en qu parte de la va se encuentra involucrado un gen, el fenotipo va a ser ms fuerte o ms dbil.

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Si un gen se encuentra muy corriente arriba en la va de floracin la cascada que tiene por debajo
va a ser grande y por lo tanto los fenotipos que da son muy fuertes
Si un gen se encuentra muy corriente abajo en la va de floracin la cascada que tiene por debajo
es pequea y por lo tanto los fenotipos no son muy fuertes
FLC tiene un rol central en la va de vernalizacin. Se vio que las mutantes en la va de vernalizacin que tienen
altos requerimientos de vernalizacin tienen una gran cantidad de FLC mientras que en plantas vernalizadas
hay un nivel de FLC reducido. Se puede decir que sin vernalizacin, la floracin es reprimida por FLC. La
vernalizacin produce una la metilacin de la protena FLC, que queda reprimida y no se expresa.
Hay un gen involucrado en esta va denominado FRIGIDA (FI) que, al igual que FLC, reprime la floracin. FI
se encuentra expresado en variedades sensibles a la vernalizacin e induce a FLC estabilizando su ARNm.
Otros genes que participan son VRN1 y VRN2, que llevan a una represin de FLC por metilacin inducida por
el fro. Estos genes, a nivel epigentico, van a regular las metilaciones de las histonas y van a evitar que FLC
sea transcripto. Estos genes van a formar un complejo denominado polycomb. VRN1 y VRN2 metilan las
histonas y activan la floracin (evitan que se exprese FLC).
Para silenciar FLC se trimetilan unas histonas, lo que hace que el ADN se empaquete de tal manera que la
ARN polimerasa II no pueda realizar la transcripcin, no se exprese FLC y no se reprima la floracin.

Se realiza un experimento fusionando GUS (gen reportero) al gen de FLC.

En ausencia de frio el patrn de expresin de GUS esta aumentado hay gran cantidad de FLC
en la planta se vera una roseta
Cuando se expone la planta a un breve periodo de frio el patrn de expresin de GUS es ms
leve hay una cantidad intermedia de FLC en la planta se ve una floracin disminuida

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Cuando se expone la planta a un periodo prolongado de frio el patrn de expresin de GUS es

prcticamente nulo hay cantidades indetectables de FLC en la planta se ve una floracin
aumentada

Va de giberelinas
Si se le agrega una hormona a la planta en forma exgena, esta va a inducir la floracin. El hecho de que las
giberelinas participan en la regulacin de la floracin se puede poner de manifiesto de dos formas: por una
parte, mutantes incapaces de sintetizar GAs denominadas ga1 no pueden florecer en das cortos, pero s en
das largos, gracias a la activacin por parte de la va facultativa de das largos. Por otra parte, la aplicacin
exgena de GAs acelera la floracin en Arabidopsis (y otras especies).
En presencia de GAs se van a degradar las protenas DELLAs no van a poder bloquear la
transcripcin de algunos genes involucrados en la floracin la planta florece
En ausencia de GAs las protenas DELLAs bloquean la transcripcin de genes involucrados en la
floracin la planta no florece

Las GAs son necesarias para la floracin temprana y para la floracin no inductiva bajo das cortos (o en la
vernalizacin). Las plantas de das corto florecen aun en das largos cuando se induce la floracin con GAs.
Hay un gen denominado GIGANTEA (GI) que dependiendo del fotoperodo induce la expresin de GAs y por
lo tanto, se induce la floracin.

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En la imagen se puede ver una planta de tipo wt de ecotipo Ler. La segunda planta es una mutante en DELLA,
por lo tanto, va a tener un aumento en GAs y florece antes. La tercera planta es de tipo wt en donde no est el
gen CO (la planta no florece). En la cuarta planta se somete la tercera a un background en donde las DELLAs
estn mutadas, por lo tanto, estimula un poco la floracin.

Va del fotoperodo
Es la va que ms estudiada est y es una de las primeras con las que se empez a trabajar. Es sensible a la
cantidad de horas de luz a la que la planta est sometida. El gen CONSTANS (CO) es uno de los ms
importantes involucrado en el fotoperodo. La protena CO es un factor de transcripcin clave en la floracin
bajo condiciones de das largos. As como su eliminacin provoca que la floracin en das largos ocurra tan
tarde como en das cortos, la activacin forzada de esta protena (mediante tcnicas de ingeniera gentica)
en das cortos provoca la floracin temprana incluso en condiciones adversas.
Esta va de sealizacin se inicia mediante la percepcin de la luz por parte de determinados fotorreceptores
de luz azul (CRY1, CRY2) y de luz en el rojo lejano (PHYA). Por mecanismos an no conocidos en profundidad,
estos fotorreceptores "comunican" la presencia de luz a los componentes (TOC1, CCA1, LHY) de un "reloj
molecular" que es capaz de determinar cul es la duracin relativa del da respecto a la noche y, en caso de
reconocer los das largos, activa la expresin de genes como CO y FT. De una manera anloga, la alteracin
del nivel de expresin de FT produce una modificacin del tiempo de floracin en proporcin directa.

En la imagen se visualizan fotos tomadas en el tiempo de una planta salvaje y una planta que tiene mutado el
gen CO. Al da 22 ya se puede visualizar que la planta wt floreci y la mutante no. La planta con una mutacin
en CO recin florece en el da 52 (ms del doble de tiempo que la planta wt). Prcticamente la planta wt se
encuentra entrando en la senescencia cuando la mutante comienza a florecer.
Durante las horas de luz, prcticamente no hay expresin del gen CO. Slo hay expresin de CO en oscuridad,
tanto en da largo como en da corto (aunque no es igual el patrn).
Para que la planta florezca, el pico de mxima expresin de CO o inductor floral debe coincidir con la mxima
expresin de los factores reguladores del ciclo circadiano, al final del perodo de luz, de un reloj biolgico que
se resetea cada 24 horas.

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El flowering locus T (FT) es una protena nuclear y citoplasmtica, acta en el ncleo como parte de un complejo
transcripcional con FLD. Es regulado por CO, por lo que la cantidad de su ARNm cicla durante el da. Este
aumenta conforme aumenta la duracin del da. Se dice que FT es un florgeno ya que pasa de las hojas a la
planta nueva por un injerto, no atraviesa agar ni tejidos muertos, necesita conexin anatmica de tejido vivo y
se mueve a travs del floema.
Una planta con una mutacin en FT va a tener un fenotipo muy similar a la mutante en CO, es decir, va a
florecer con un nmero elevado de hojas y de forma tarda.
Cuando se intenta rescatar la mutante FT con CO se puede ver que el nmero de hojas varia, lo cual demuestra
que CO esta corriente arriba de FT, sino no lo hubiese rescatado. Si CO no estuviese relacionado con floracin
o con FT no lo hubiera rescatado.
SOC1 es un integrador de las vas de sealizacin de la floracin y se encuentra corriente debajo de FT, por
lo tanto, una mutacin en SOC1 implica una planta que va a florecer tarde. La planta mutante de FT tambin
puede rescatar la sobreexpresin de CO. Si se tiene una planta con un promotor constitutivo como 35S y CO
sobreexpresaba y se la cruza con otra en donde SOC1 esta mutado, la planta resultante no va a florecer tan
rpido ya que CO lo hace a travs de SOC1 finalmente. Por lo tanto, si bien se sobreexpresa la protena que
induce la floracin, esta posee un fenotipo bastante similar a la planta wt.
Alrededor de los 10 das, FT, CO y SOC1 hacen su pico de expresin. A pesar de que las plantas suelen
florecer a los 26 das, toda la cadena que se encuentra downstream lleva su tiempo hasta que se expresa. Por
lo tanto, estas protenas tienen su pico un tiempo considerablemente antes del momento de floracin.
Si se realiza una mutacin en FT, SOC1 si bien baja su expresin, lo que sucede es que se da un corrimiento
de cuando se da el pico. En vez de realizarlo en el da 10 lo hace en el da 12. La planta no deja de florecer,
simplemente se retrasa el pico y por lo tanto se retrasa la floracin.

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En un da largo, durante el perodo de luz el ARNm de CO se encuentra reprimido, recin comienza a hacer su
pico de expresin durante los momentos de oscuridad. En cambio, en un da corto, los picos se corren. El pico
de expresin de CO se mantiene un poco entrada la noche. Se puede ver que hay una diferencia entre el nivel
de ARNm y el nivel de FT que se tiene. La protena hace el pico junto cuando lo hace el ARNm entrada la
noche, pero rpidamente cae. Esto tiene implicancias fisiolgicas y funcionales bastante relevantes. CO se va
a unir al promotor de FT y va a inducir su expresin, por eso sus picos coinciden. Hay un mecanismo de
degradacin de la protena CO que permite que no se acumule durante la noche. El ARNm se traduce a
protena, pero, llega un momento en el que la planta empieza el regular la cantidad de protena que va a haber
y esto tiene un sentido. En la cmara uno le pone 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad, pero en la naturaleza
no es as. Las plantas deben sobrevivir a las distintas estaciones del ao, las cuales tienen distintos
fotoperodos. La no acumulacin de CO es una manera que tiene la planta de censar que el da se va alargando.
De esta manera, va a aumentar la expresin de FT, pero llega un momento en que el periodo de oscuridad es
tan corto que hay menos tiempo disponible para la degradacin de CO. De esta manera, la planta se da cuenta,
por ejemplo, de que est iniciando la primavera. Esto es una seal para la planta de que esta en un buen
momento para florecer.
La planta adems es capaz de censar la cantidad de luz. Por ejemplo, la luz roja que generalmente se
encuentra asociada a la cercana a otras plantas o al sombreado, le da el indicio a la planta de que no es un
buen momento para florecer. La luz azul, por el contrario, le indica a la planta que hay buena cantidad de luz.
Los fitocromos tienen la capacidad de unirse a COP1. COP1 es la protena encargada de degradar CO por la
noche, mediante la ubiquitinacin y posterior degradacin por proteosoma.
La luz azul es captada por los criptocromos, los cuales interactan con COP1 y evitan la degradacin de CO.
En das cortos, hay mayor cantidad de COP1 ya que no hay luz que puedan censar los fitocromos y por esto,
hay ms degradacin de CO. Los niveles de CO siempre son bajos o casi nulos en das cortos. Por esta razn,
en das cortos le cuesta mucho a la planta florecer.

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Todos estos mecanismos comienzan en la hoja. CO y FT se expresan en hoja y esto tiene sentido ya que los
criptocromos se encuentran dentro de los cloroplastos, los cuales estn en la hoja. FT se transcribe y traduce
en hoja, se transloca y va por el floema al meristema apical del vstago. Hay que recordar que FT siempre se
encuentra formando parte de un complejo.

Va de la edad
Esta es una recientemente descubierta mediante la cual la planta puede censar qu tan vieja o joven es. Esta
mediada por micro ARN, los cuales se vio que no estn regulados ni por fotoperodo ni por vernalizacin (la
expresin de ellos no se modifica). Se encontr que en la fase juvenil hay una alta expresin del microARN
156, y a medida que pasa el tiempo y la planta pasa a la fase adulta, su expresin disminuye y aumenta la
expresin del microARN 172. El microARN 172 es el que induce la floracin. Se sabe que hay una familia de
factores de transcripcin denominada SPL que estn relacionados a la induccin de la floracin.

La edad y el nmero de hojas se relaciona con el contenido de sacarosa, y este a su vez, regula la expresin
del microARN 156, que es un regulador negativo de la expresin del gen SPL, importante para desencadenar
el pasaje de la etapa vegetativa a la reproductiva.

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Se dice que tanto FT y SOC1 son genes de floracin y son integradores de las vas ya que se encuentran
involucrados en ms de una va y modulan la respuesta. Todas convergen en esos puntos.

Genes involucrados en el desarrollo floral

Los genes de identidad de meristema son los que definen en qu se va a transformar el meristema (tienen
la habilidad de transformarse en cualquier tejido o rgano). Uno ellos es LEAFY (LFY), gen especfico de
plantas, que no existen homlogos en clulas de animales. Hay una sola copia en Arabidopsis y no existen
dominios proteicos que sugieran una funcin bioqumica. LFY es suficiente para conferir identidad floral en
primordios en desarrollo cuando es expresado bajo un promotor viral. LFY:VP16 fue usado como herramienta
para estudiar su funcin, sugiriendo que LFY se une al ADN. Este gen es un activador clave de los genes
maestros (llamados ABCE) que dividen al primordio floral en las regiones que van a dar lugar a los rganos de
la flor adulta.
Los genes de identidad de rganos definen la funcin que va a tener el meristema en un rgano especfico.
Determinan el destino de las clulas del primordio floral. Estos genes forman parte del modelo ABCE que
explica las bases moleculares del desarrollo floral.

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Los genes hometicos regulan el desarrollo de partes u rganos. Las mutantes hometicas presentan un
desarrollo ectpico de rganos. En plantas, son factores de transcripcin de la familia MAD-box.

Si se tiene una mutante de CO (con floracin retrasada), si se quiere rescatar el fenotipo una forma es
sobreexpresar SOC1 ya que, al estar mutado CO no hay expresin de FT y no hay expresin de SOC1. Pero,
al estar sobreexpresado uno se independiza de los genes anteriores. SOC1 se llama supresor of overexpresion
of CO, por lo tanto, uno se puede imaginar que la sobreexpresante tiene una floracin rpida, con muy pocas
hojas.
FT por una va distinta a la de SOC1 induce a AP1, que es un gen involucrado en el desarrollo de los rganos
florales.

Modelos establecidos para el desarrollo floral

El modelo ms aceptado para entender la floracin en Arabidopsis es el llamado modelo ABC, el cual supone
que existen interacciones entre cinco factores de transcripcin que se agrupan en cuatro clases de genes
hometicos, grupos de genes que se traducen en protenas y que regulan la expresin del ADN mediante una
activacin selectiva segn su concentracin relativa.
Un gen hometico es un gen al que se le atribuye una identidad. Se los puede reconocer porque si se los
muta, en el lugar hay una interconversin o una aparicin ectpica de un rgano que ah no debera estar. En
moscas, por ejemplo, si haba una pata aparece un ala. En Arabidopsis, por ejemplo, si haba un ptalo aparece
un spalo. En plantas, los genes hometicos pertenecen a la familia MADS, que contienen un dominio de unin
a ADN.
En Arabidopsis las cuatro clases de rganos florales (spalos, ptalos, estambres y carpelos) se inician en
verticilos separados, que sera una regin espacial en donde se forman cada uno de ellos. Las cuatro regiones
que se diferencian en la flor son, desde afuera hacia adentro:
Verticilo 1: 4 spalos separados
Verticilo 2: 4 ptalos blancos
Verticilo 3: 6 estambres, dos ms cortos y cuatro ms largos
Verticilo 4: 1 pistilo formado por dos carpelos fusionados, con numerosos vulos (gineceo)

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Para que esto se forme correctamente, en cada verticilo se tienen que expresar un conjunto de genes
hometicos. Por ejemplo, para que se forme el verticilo 1 se les puso el nombre a los genes necesarios como
genes de clase A.
Tres actividades o funciones que dan identidad a los rganos florales de una manera combinatoria:
Actividad A: especifica spalos (AP1, AP2)
Actividad A + B: especifica ptalos (AP2, AP3, Pi)
Actividad B + C: especifica estambres (AP3, P1, AG)
Actividad C: especifica carpelos (AG)
Los genes hometicos no se expresan en todo el perodo de desarrollo, sino nicamente cuando tienen que
darle identidad a los meristemas. Una vez que realizan esta funcin, activan una cascada de seales por debajo
de ellos relacionadas con proliferacin celular, diferenciacin, elongacin, etc.
Los genes hometicos se expresan normalmente hasta el estadio 6, aunque pueden despus ser reclutados
para cumplir otras funciones. A lo largo de los estadios se pueden ver como las clulas aumentan su dimetro
y se ensanchan hacia arriba. En el estadio 5 ya se pueden ver los pices que posteriormente van a formarlos
spalos. stos son los primeros que se forman ya que es una manera de proteger al resto del meristema.
Cuando se produce la autopolinizacin la flor sigue encerrada, es decir, los spalos siguen envolviendo todo.
Arabidopsis es una planta que se dice que es cleistgama, que significa que autopoliniza con la flor cerrada.
Cuando se abre el gineceo hay algo de reproduccin cruzada pero bsicamente ya se polinizo la planta.
As como las citoquininas mantienen el estado indiferenciado de los meristemas, en las auxinas es necesario
que se produzca un pico para que se genere un rgano nuevo. Las auxinas son hormonas muy vinculadas al
posicionamiento de rganos. Los picos de auxinas inducen la expresin de genes de la familia MAD-box, que
son los ABC y dan la identidad al rgano.

Hace unos pocos aos, se encontr que existen unos genes de clase E, tambin de la familia MAD-box, que
dan lugar a un nuevo modelo esta vez llamado modelo ABCE. La mayora de estos genes son de la familia
SEPALLATA (SP). Se vio que si no se encuentran estos genes no hay actividad del resto de los genes. Tambin
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se encontr una ltima clase de genes denominados genes de clase D que no slo se encuentran adentro del
carpelo, sino que tambin estn presente dentro de los vulos. Se vio que, si estos genes no estn presentes,
no se produce el vulo, y por lo tanto no hay filiales siguientes. Los genes de clase A y los genes de clase C se
reprimen mutuamente.
De esta manera, el modelo ABCE se basa en que la protena LFY estimula en el meristema a la protena AP1,
la cual activa la actividad de los genes de clase A en el verticilo 1 y 2. LFY estimula tambin junto al cofactor
UFO (proteasa dependiente de ubiquitina, que degrada a un represor de AP3) para activar AP3 en el verticilo
2 y 3. AP1 tambin estimula a AP3. Adems, LFY acta con el cofactor WUS (protena encargada de mantener
el pool de clulas indiferenciadas en los meristemas) para activar a AG que prodcela actividad delos genes
de clase C en los verticilos 3 y 4. Salvo AP2 y LFY, el resto delos genes de identidad de rganos son protenas
del tipo MADS. AG adems regula negativamente al cofactor WUS y estimula la expresin del microARN 172.

La hibridacin in situ se realiza mediante una sonda antisentido que hibrida el ARNm en la planta y luego, con
un anticuerpo contra esa sonda se puede ver en qu lugar se encuentra el gen. Esta tcnica es mejor que usar
GUS ya que sta lo que me indica es donde se encuentra el promotor. Si hay un control post transcripcional y
el gen es clivado por un micro ARN que le baja la expresin no se ve nada. La hibridacin in situ es ms eficiente
ya que donde hay un ARNm va a expresarse la protena.
En el modelo del cuarteto se puede ver que, en todos los estadios en los rganos, los factores de transcripcin
para poder unirse a sus targets funcionan como tetrmeros, los cuales involucran genes SP interaccionando y
por eso se dice que estn en todos lados interaccionando.

Se sabe, adems, que los genes de clase D estn involucrados en la identidad del meristema floral aparte de
la identidad del ovulo. En realidad, se hizo el modelo para poder explicar las flores de otras plantas. Por ejemplo,

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en monocotiledneas no hay spalos y ptalos diferenciados, hay tpalos y los ptalos se parecen a los
spalos. Si se hacen hibridaciones in situ de genes de clase B, como AP3 y PI, se los va a encontrar en las
piezas externas. Primero se intentaron levantar y clonar estos genes, luego se analiza el patrn de expresin y
se ve que se corrieron a esas piezas. Por esto, muchas monocotiledneas tienen todas las piezas de proteccin
iguales, ya que los genes de clase B se pasaron al verticilo 1.

Anlisis de mutantes

En la planta wt se pueden observar todos los componentes de la flor.

Si se muta APL2 ya no se tienen genes de clase A, no hay spalos prcticamente
Si se muta PI ya no se tienen genes de clase B
Si se muta AG ya no se tienen genes de clase C, no hay gineceos se ven un montn de ptalos,
pero no se observan carpelos
Si se muta APL3 slo se obtienen spalos
Si se muta APL2 y PI no va a haber estambres, ptalos y los spalos van a generar vulos
Si se muta APL2, PI y AG no se obtiene una pieza floral (est el meristema que da origen a la flor,
pero no est todo lo que hay corriente abajo, por lo tanto, no se forma una flor)
Hay una secuencia dentro de APL2 que es reconocida por el microARN 172 y por lo tanto lo corta. Por esto es
que los genes de clase A y C se reprimen mutuamente. Los genes de clase A reprimen a los de clase C de
forma directa, en cambio los genes de clase C reprimen a los de clase A de forma indirecta mediado por el
microARN.
Para evaluar si en otras plantas hay genes de estas clases, se puede intentar clonar las secuencias y ver a qu
se parecen, alinearlas, hacer un anlisis filogentico y analizar en que se parecen. Por ejemplo, si por la
secuencia se cree que puede pertenecer a un gen de la clase B, tomo una mutante de Arabidopsis de clase B
y le introduzco el gen que sospecho y veo si lo rescata. Si no rescata el gen, puede ser por muchas razones,
variaciones en la protena, dominio de expresin, etc. Si rescata el gen, uno puede asegurarse que ese gen es
de clase B en otra planta.

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