APOSTILA DE AULAS PRTICAS DE

SNTESE DE ORGNICA DE FRMACOS

Professores: Dr. Arildo Jos Braz de Oliveira

Dra. Regina Aparecida Correia Gonalves

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SEGURANA NO LABORATRIO

Algumas regras devem ser sempre seguidas sem exceo, tais como os
procedimentos bsicos de segurana em um laboratrio de Sntese de
Frmacos.

O cumprimento de algumas normas bsicas de segurana garante no s

a integridade de quem as cumpre, mas a de todos os seus colegas e da
Instituio.

O contedo prtico consiste na realizao de pequenos projetos envolvendo

sntese orgnica de produtos qumicos e frmacos. O objetivo principal da disciplina ,
alm de aprimorar os conhecimentos tericos, orientar os alunos na pesquisa
bibliogrfica na rea de sntese de frmacos, leitura crtica de artigos, elaborao e
execuo de reaes e apresentao de resultados de forma escrita e oral.

Para evitar acidentes no laboratrio seja, antes de tudo, responsvel. Uma

simples distrao sua pode, na melhor das hipteses, levar ao desperdcio de tempo e de
reagentes ou arruinar o trabalho de seu colega. Como exemplo, distraes na ordem ou
velocidade de adio dos reagentes, usar pipetas sujas (mesmo que apenas com gua)
em reagentes de uso comum ou a troca de frascos na hora do descarte podem ter
consequncias graves.

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 A seguir listamos algumas regras bsicas para a segurana no
laboratrio:

1) Ler previamente informaes sobre toxicidade, segurana no manejo das

substncias utilizadas e o que fazer com o lixo qumico obtido;

2) Sempre saber o que est fazendo e ter todas as anotaes necessrias no caderno
de laboratrio. Mantenha todos do laboratrio informados sobre seus experimentos;

3) Saber onde esto e como usar mscaras, extintores, areia, cobertores, lavador de
olhos e chuveiro;

4) Rotular devidamente todas as amostras e lixo qumico;

5) Nunca jogar restos de solventes/reagentes ou de suas amostras na pia.

6) Colocar vidros quebrados em recipiente apropriado e no na lata do lixo.

7) Lavar e secar bem toda a vidraria utilizada. Manter a bancada e equipamentos

sempre limpos;

8) Saber como os equipamentos funcionam e sua voltagem antes de utiliz-los. Na

dvida, leia sempre o manual;

3
9) Colocar os culos de segurana antes de entrar no laboratrio e s retir-los aps
sair. Os culos devem ter filtro de UV para serem usados na visualizao de placas de
ccd na cmara de UV;

10) Usar jaleco sempre e luvas quando necessrio;

11) Nunca pipetar com a boca (nem mesmo gua). No cheirar e no provar suas
amostras. No comer e no beber no laboratrio;

12) Sempre lavar as mos;

13) Se cometer algum engano ou erro, AVISE!!! Todos podem cometer erros, voc
no conseguir manter o segredo por muito tempo e as consequncias da sua
omisso podem ser graves; e, finalmente,

14) Na dvida, sempre pergunte !

4
 Reaes de Interconverso de Grupos Funcionais

Reaes de Interconverso de Grupos Funcionais

1. Reduo do acetoacetato de etila com borohidreteo de sdio (NaBH4)

Reao:

OH
O
NaBH4 / CH3OH CH3
CH3
90 minutos

(+/-)-1-feniletanol
Acetofenona
(pr-quiral)

Em um balo de 125 mL adicionar adicionar 5,0 mmoles acetofenona (0,62 mL,

d = 1,03 g/mL, PM = 120,14) 30 mL de metanol e resfriar a 0C a seguir adicionar
lentamente 15 mmoles de NaBH4 (0,57 g, PM = 38,0), durante um intervalo de
aproximadamente 7 minutos. Agitar a reao por 90 minutos e aps este perodo trat-la
com soluo saturada de NH4Cl (20mL).
Aps o tratamento extrair a reao em um funil de separao com diclorometano
(2 pores de 30 ml), secar a fase orgnica sobre sulfato de sdio andro, evaporar o
solvente em evaporador rotativo, ressuspender o produto em diclorometano e transferir
para um frasco previamente pesado evaporar o solvente com nitrognio gasoso ou
evaporador rotativo. Caracterizar o produto da reao por cromatografia em camada
delgada. Utilizando como eluente uma soluo de Hexano:Acetato de etila (80:20) e
como revelador uma soluo de p-anisaldedo.
Opcionalmente pode-se caracterizar o ()-1-feniletanol formado por anlise
espectroscopica de infravermelho (IV), ressonncia magntica nuclear de hidrognio e
carbono (RMN 1H, 13C) e espectrometria de massas (EM).

5
 Reaes de Interconverso de Grupos Funcionais

2. Oxidao de lcoois com Hipoclorito de Sdio

A oxidao de lcoois um dos mtodos mais empregados para a preparao de

compostos carbonlicos, oxidao de lcoois primrios leva a aldedos (ou cidos
carboxlicos se a oxidao continuada), enquanto a oxidao de lcoois secundrios
leva a cetonas. lcoois tercirios no so oxidados, pois ligaes carbono-carbono
seriam rompidas.

Os agentes oxidantes mais comuns para a converso de lcoois em aldedos e

cetonas so o trixido de cromo (CrO3) e ons cromato (CrO4 -2 e Cr2O7-2), bem como
uma srie de reagentes com formas modificadas de CrO3 como o Reagente de Collins,
em que o CrO3 complexado com piridina. (O Reagente de Collins utilizado em
meios no aquosos e especialmente til para a oxidao de lcoois primrios em
aldedos sem oxidao a cido carboxlico). O permanganato de potssio (KMnO4)
tambm pode ser usado para oxidar lcoois e at mesmo alguns alcanos.

Um agente oxidante alternativo para a preparao de cetonas, o hipoclorito de

sdio (NaOCl) em cido actico, foi introduzido por Stevens, Chapman e Weller
(Journal of Organic Chemistry, 1980, 45, 2030).

Este reagente oferece vrias vantagens: 1) mais barato - hipoclorito de sdio

comercial facilmente disponvel, 2) Oxida lcoois secundrios a cetonas rapidamente e
com altos rendimentos, e 3) Evita o problema de ter que realizar tratamentos caros para
resduos txicos metlicos gerados com reagentes de cromo e mangans.

O exemplo escolhido para ilustrar a oxidao de lcoois a oxidao do mentol

a mentona utilizando hipoclorito de sdio em cido actico. A caracterizao da cetona
produzida ser realizada atravs de Cromatografia em Camada Delgada e da reao
colorimtrica com reagente de 2,4- dinitrofenil-hidrazina. A identificao pode ser feita
atravs de Espectroscopia no Infravermelho , RMN de 1H e e de 13C e Espectrometria
de Massas.

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Reao:

H3C H H3C H
NaOCl, HOAc
H
OH O
H CH3 H CH3
CH3 CH3

Mentol (PM = 156) Mentona (PM = 154)

d = 0,890-0,895 g/mL

Mecanismo:

Uma soluo aquosa de hipoclorito de sdio (NaOCl), ou de alvejante domstico

comum, pode ser usada para oxidar lcoois secundrios em cetonas. A reao ocorre
mais rapidamente em condies cidas, por isso proposto que o verdadeiro agente
oxidante o cido hipocloroso (HOCl), gerado pela reao cido-base entre hipoclorito
de sdio e cido actico. Na oxidao do lcool, a reao provavelmente procede via
uma eliminao E2 do hipoclorito de alquila produzidos pela reao do lcool com
HOCl inicial:

Para garantir que a oxidao completa do lcool ocorra, necessrio empregar

um excesso de hipoclorito de sdio. Desde que a concentrao de hipoclorito de sdio
na gua sanitria pode variar, um teste para verificar o excesso do hipoclorito
realizado pelo uso de papel indicador de amido-iodetado. Em soluo cida, o iodeto
oxidado com hipoclorito:

-
OCl + 2I- + 2H+ Cl- + I2 + H2O

O iodo reage com o amido no papel de teste para produzir a cor prpura
caracterstica do complexo amido-iodo.
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Procedimento:

Em um erlenmeyer de 125 mL dissolver 1 g de mentol em 3 mL de cido actico

glacial e 5 mL de acetona. Adicionar lentamente 10 mL de hipoclorito comercial(que
contm cerca de 5% de hipoclorito de sdio) durante 10
minutos. Aps a adio, tampe erlenmeyer com papel alumnio e deixe reagir por mais
30 minutos, sob agitao constante, mantendo a temperatura entre 40 a 50 C, caso
necessrio utilize um banho de gelo para resfriar.

Adicionar uma gota da mistura de reao a um pedao de papel de amido-

iodetado, se o papel no ficar azul adicionar 2,5 mL da soluo de hipoclorito de sdio
5% e deixar a reao em agitao por 10 minutos, aps este perodo realizar o teste
novamente, se o papel no estiver azul adicionar mais 0,5 mL de hipoclorito de sdio e
deixar reagir por 10 minutos.

Aps a ltima adio de hipoclorito de sdio adicionar cuidadosamente 1,0 mL

de soluo saturada de bissulfito de sdio (NaHSO3 ) at o teste com o papel de amido-
iodetado negativo.

Guardar em frasco apropriado e identificado para a prxima aula.

Transferir o contedo do frasco para um tubo de ensaio e deixar a mentona (leo

viscoso) se separar da fase aquosa. Retirar o leo com o auxilio de uma pipeta Pasteur e
tranferir para um outro tubo de ensaio, a seguir adicionar 2 mL de diclorometano
(CH2Cl2) e secar com Sulfato de sdio anidro. Filtrar em funil de vidro utilizando uma
pequena poro de algodo para filtrao e recolher o filtrado num frasco de penicilina,
lavar o funil com 2 mL de CH2Cl2 e deixe-o evaporar na capela, num frasco
previamente pesado.

Aps a evaporao dissolver a amostra em um pequeno volume de acetona e

transferir com o auxlio de uma pipeta Pasteur de vidro para um frasco de penicilina
previamente pesado, deixar evaporar e depois de obter o
massa final do produto calcular o rendimento da reao

Para evidenciar a presena da cetona faa um teste de identificao utilizando o

reagente de 2,4-dinitrofenil-hidrazina. Avaliar a pureza do produto por cromatografia
8
em camada delgada em gel de slica GF254 utilizando como eluente Hexano: Acetato de
etila (70:30, volume/volume) e revelar com o reagente de p-anisaldedo. Aps a
verificao da pureza o produto poder ser purificado por cromatografia em coluna.

Teste com soluo do reagente de 2,4-dinitrofenil-hidrazina para evidenciar a

presena de aldedos e cetonas:

Princpio: A grande maioria dos aldedos e cetonas forma compostos slidos, de cor
amarela a vermelha que precipitam quando misturados com uma soluo do reagente de
2,4-dinitrofenil-hidrazina.

O 2N
R H+
C O + H2N NH NO 2
(H)R'

aldedo ou cetona 2,4-dinitrofenil-hidrazina

O 2N
R
C N NH NO 2 + H2O
(H)R'

2,4-dinitrofenil-hidrazona
(precipitado amarelo a vermelho)

Procedimento:

(a) Amostra lquida: colocar uma gota do lquido desconhecido em um tubo de

ensaio e adicionar 1 mL do reagente de 2,4-dinitrofenil-hidrazina.

(b) Amostra slida: colocar cerca de 10 mg do composto e dissolver numa

quantidade mnima de etanol 95, antes de adicionar o reagente. A seguir agitar
a mistura vigorosamente. Os aldedos e cetonas daro precipitados
imediatamente.

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 Reaes de Interconverso de Grupos Funcionais

3. Usos da reao de esterificao no estudo das relaes entre estrutura e

atividade de parabenos

Os conservantes so usados em muitos cosmticos para aumentar a vida til dos

produtos, impedindo o desenvolvimento de microrganismos que podem causar doenas
ou, simplesmente, prejudicar o bom aspecto do produto final. Um conservante ideal
deve ser efetivo em uma concentrao baixa e no txica; apresentar boa solubilidade
em gua; compatibilidade com outros excipientes; no ter caractersticas organolpticas
adequadas; apresentar um amplo espectro de atividade para bactrias e fungos; e custo
razovel.

Dentre os conservantes mais utilizados em formulaes farmacuticas e

cosmticas, destacam-se os parabenos. Parabenos so steres do cido p-
hidroxibenzoico que apresentam caractersticas como amplo espectro de atividade, boa
solubilidade em gua e so incolores, inodoros e inspidos. Sabe-se que a atividade
antimicrobiana desses compostos aumenta com o aumento da cadeia carbnica do
substituinte do ster, entretanto sua solubilidade em gua decresce proporcionalmente.3
So mais ativos contra fungos do que contra bactrias. Entre os parabenos mais
utilizados como conservantes, esto o metilparabeno (1) e o propilparabeno (3).

O mecanismo de ao antimicrobiana dos parabenos desconhecido, porm

bastante complexo. Prope-se que os parabenos apresentam ao sobre a sntese de
DNA e RNA, sobre enzimas-chave como ATPases e fosfotransferases ou, ainda, sobre
os mecanismos de transporte pelas membranas.

O estudo das relaes entre estrutura qumica e atividade biolgica (REA) de

molculas bioativas uma prtica muito comum em Qumica Farmacutica Medicinal.
Os primeiros estudos deste tipo foram feitos por Crum-Brown e Fraser em 1869,
quando demonstraram que compostos contendo uma amina terciria (como a estricnina,
morfina, atropina e nicotina) se tornavam bloqueadores neuromusculares quando
metilados e, assim, transformados nos respectivos quaternrios de amnio. Desta forma,
concluram (mesmo que de maneira precipitada) que o grupo amnio quaternrio era
necessrio para a atividade bloqueadora neuromuscular. A partir de ento, a explorao

10
de grupos funcionais em molculas biologicamente ativas tornou-se uma prtica comum
entre os qumicos medicinais.

O objetivo principal de estudar as REA determinar que partes da molcula so

importantes para a atividade biolgica, e como a natureza dessas partes pode influenciar
na mesma. Isto feito sintetizando uma srie de compostos anlogos, que variam de
acordo com pequenas diferenas da molcula prottipo, e avaliando a atividade desses
compostos. Se a alterao ou retirada de um determinado grupo da molcula prottipo
gera uma atividade baixa ou nula, conclui-se que o grupo importante para a mesma.
Por outro lado, se a atividade permanece inalterada ou modifica muito pouco, porque
tal grupo no tem grande influncia.

Na prtica acadmica, transmitir a importncia do estudo das REA a alunos

uma tarefa s vezes no muito fcil. Muitas vezes os alunos compreendem o significado
de tais regras, porm, no conseguem facilmente vislumbrar como so determinadas
na prtica. Desta forma, o objetivo desta aula propor uma aula prtica que demonstre
todas as etapas do desenvolvimento de uma molcula bioativa, como a sntese,
determinao estrutural e avaliao da atividade antimicrobiana e determinao das
REA empregando-se uma reao de interconverso de grupos funcionais muito
conhecida a esterificao de cidos carboxlicos.

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Reaes:

O
H3C OH
O
CH3
HO

H3C O
OH
O

HO CH3

H3C O
O
OH
OH O

HO HO
CH3
OH
cido 4-hidroxi-benzico H3C O
CH3 CH3

CH3
HO

HO CH3

O
CH3
O CH3

HO CH3

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Procedimento geral para a sntese de parabenos

Em um balo de fundo redondo equipado com condensador de refluxo e

aquecimento com agitao magntica, adicionar 10 mmol de cido 4-hidrxibenzoico
em 15 mL do lcool apropriado (ou em 15 mL de diclorometano, com quantidades
estequiomtricas do lcool isopentlico na sntese do isopentilparabeno). A seguir,
adicionar 0,5 mL de cido sulfrico concentrado e deixar a soluo em refluxo por 1 h.
Ao final, neutralizar a soluo com soluo de Na2CO3 (at pH 8-9) e filtrar o produto
precipitado em funil de Buchner, lavar com gua destilada e secar em dessecador.

Caracterizao dos produtos

Metilparabeno (1): Slido branco. p.f. 126-129 C.

Etilparabeno (2): Slido branco. p.f. 113-117 C.

Propilparabeno (3): Slido branco. p.f. 93-98 C.

Isopropilparabeno (4): Slido branco. p.f. 85-88 C.

Isopentilparabeno (5): Slido levemente amarelado. p.f. 59-63 C.

Determinao da concentrao inibitria minima (CIM)

A CIM contra cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 ou Escherichia coli

ATCC 25922 ser determinada utilizando-se a tcnica de macrodiluio em tubos,
preconizada pelo Clinical Laboratories Standards Institute. Preparar solues em etanol
absoluto a 100, 75 ou 50 mg/mL dos parabenos a serem testados (dependendo da
solubilidade). A seguir, enumerar 12 tubos de ensaio contendo 5 mL de caldo Brain
Heart Infusion (BHI) estril cada. Os tubos 11 e 12 sero, respectivamente, controle
negativo (contendo apenas meio de cultura) e controle positivo (contendo meio e
inculo). As diluies preparadas em cada tubo so apresentadas na Tabela 1.

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Tabela 1. Esquema das diluies seriadas

______________________________________________________________________

Tubos

___________________________________________________________

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

______________________________________________________________________

Soluo 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20

teste (L)

______________________________________________________________________

O inculo ser preparado adicionando-se uma colnia isolada do microrganismo

diretamente em meio de cultura e incubado a 35 C por um tempo necessrio para o
crescimento entre 1 e 2 x 108 UFC/mL (determinado espectrofotometricamente a 625
nm como absorbncia entre 0,08 e 0,13).9 A cada tubo adicionar 30 L do inculo, e
incubar os tubos a 35 C por 24 h. A CIM determinada como a menor concentrao do
composto capaz de inibir completamente o crescimento visvel do microrganismo.

Determinao do coeficiente de partio octanol/gua calculado (ClogP)

Desenhar as estruturas dos parabenos obtidos no programa MarvinBeans, e o

determinar ClogP pelo plugin logP. O programa permite calcular o logP atravs dos
mtodos de Viswanadhan et al., Klopman et al. e da base de dados do PhysProp, e fazer
uma mdia ponderada dos valores. Neste trabalho, o peso de cada metodologia deve
seguir as configuraes padro do programa, sendo iguais para cada metodologia de
clculo.

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 Reaes de formao de ligao Carbono-Carbono

1. Preparao da trans-benzaloacetofenona

Reao:

O H
O C O H
C CH
3
NaOH C
+
EtOH H

Acetofenona
Benzaldedo trans-benzalacetofenona
(PM= 120) (PM= 106,1) (trans-chalcona, PM= 208,2)

Agitar magneticamente um balo de 125 mL mantido em banho de gelo (entre 0-

10 oC) uma mistura de acetofenona (6 mL) e etanol (15 mL) durante 5 minutos, a seguir
adicionar uma soluo aquosa de hidrxido de sdio a 10% (25 mL) e manter sob
agitao por mais 10 minutos.

Adicionar a esta mistura lentamente, gota a gota, o benzaldedo (5 mL), aps a

adio agitar a soluo por 2 horas mantendo a temperatura entre 25-30 oC. Aps este
perodo deixar a mistura em geladeira por 12-16 horas, coletar os cristais formados em
um funil de Buchner. Lavar os cristais com gua gelada e secar ao ar, re-cristalizar o
produto em etanol a quente (cerca de 5mL do solvente por grama do material), obtendo-
se a trans-benzalo-acetofenona em 65-75% de rendimento. Caracterizar o produto por
CCD empregando como eluente Hexano:Acetato de etila (95:5), utilizando como
revelador uma soluo de 2,4-dinitrofenilhidrazina; o ponto de fuso da trans-benzalo
acetofenona est entre 75-77 oC. O produto puro pode ser caracterizado por mtodos
espectroscpicos (IV, Ultra Violeta-Visvel, RMN, EM).

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 Reaes Enantiosseletivas

Uma das primeiras aplicaes sintticas de reaes utilizando-se micro - organismos

foi uma condensao de acilona envolvendo o benzaldedo (1910-1920) que teve
aplicao industrial na sntese da (-)-efedrina.

O O

O
CO2
O OH OH
Fermento de
C
Ph H Ph Ph
po
O OH

OH

Ph
NHMe

L-efedrina

Principais aspectos na utilizao de microorganismo em processos industriais:

So reagentes e processos ambientalmente compatveis.

Apresentam uma alta estereosseletividade.

O mais popular dos biocatalisadores utilizados na sntese em sntese orgnica o

Saccharomyces cerevisae (fermento de po, padaria ou de padeiro).

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 Quais so os motivos para o sucesso do fermento de po:

Alta enantiosseletividade.
Rendimentos qumicos compatveis.
Ampla disponibilidade.
Custo desprezvel.
No requer adio de co-fatores dispendiosos.
Facilidade de manuseio que no exige conhecimentos de microbiologia.

Comparao entre a utilizao de enzimas e clulas integras de micro-organismos e

plantas.

(a) O uso de enzimas pode ser bem sucedido quando:

O catalisador foi inexpressivo, facilmente purificado.

No requer o uso de co-fatores.

(b) O Por que e quando as enzimas podem ser vantajosas?

Na presena de somente um catalisador as dificuldades com reaes

competitivas so evitadas.

As condies de reaes podem ser facilmente controladas.

(c) Quando interessante se utilizar clulas integras de microorganismos.

As clulas possuem a(s) enzima(s) de interesse.

Quando os co-fatores requeridos por estas enzimas so muito caros.

17
(d) As desvantagens de usar de clulas ntegras:
Nas situaes na qual ocorre a competio de mais de uma enzima pelo mesmo
substrato, o que hoje em dia pode ser solucionado pela BIOLOGIA MOLECULAR.

ESTEREOSELETIVIDADE DA ENZIMA ENVOLVIDA NA REDUO

A principal enzima nas redues com leveduras e plantas a lcool desidrogenase,

que leva ao lcool de configurao (S).

Esta enantioseletividade mais comumente encontrada em bactrias, fungos e

leveduras. A regra prediz que o hidreto ser adicionado face RE da carbonila.

O O

CH3 H3C

NAD(P)H NAD(P)H

HO 1 H
H HO
3
H3C CH3
2

(S)

MTODOLOGIAS EMPREGADOS EM REAES COM FERMENTO DE PO

(a) Mtodo com adio de acar FERMENTAO.

(b) Mtodo sem adio de acar CONDIES NO FERMENTATIVAS.

18
USO E APLICAES DA REDUO ENANTIOSELETIVA DE CETONAS NA SNTESE
DE MEDICAMENTOS.

Exemplo 1: Sntese de Fluoxetina (Prozac) antidepressivo.

O O HO H O

OEt S. cerevisiae OEt

(3S)-3-Hidrxi-3-fenil-
Benzoilacetato de etila
propanoato de etila
(87% ee ismero S)

LiAlH4, ter

HO H
HO H
MsCl, Et3N, ter OH
OMs
-10 - 0 oC
(3S)-3-fenil-1,3-dihidrxi-
(3S)-3-fenil-3-dihidrxi- propano
propil metanossulfonato
CH3NH2, THF, 70 oC

NaI/acetona

HO H
HO H
CH3NH2, THF, ta NHCH3
I

(1S)-3-(metilamino)-1-fenil-
propanol
(1S)-3-Iodo-1-fenil-
propanol

F3C

O H

NHCH3

Cloridrato de Fluoxetina
(PROZAC)
87 % ee

19
Exemplo 2: Sntese de Fluoxetina (Prozac) antidepressivo. Rota da Eli Lily

O HO H

Cl S. cerevisiae Cl

(1S)-3-cloro-fenilpropen-1-ol
3-cloropropiofenona
(> 99% ee ismero S)

CF3
ta, THF, trifenilfosfina
dieil-azo-dicarboxilato
HO

F3C F3C

O H O H
1. CH3NH2, H2O, 130o C
NMe.HCl 2. HCl Cl

3. Recristalizar
Cloridrato de Fluoxetina (3S)-1-cloro-3-fenil-3-
(PROZAC- Eli Lily) [4-(fluorometilfenoxil)]propano
> 99 % ee ( > 99% ee)

20
 Reaes Enantiosseletivas

1. Reduo de acetofenona com pedaos de cenoura (Daucus carota)

Atualmente diversas partes de plantas esto sendo usadas como fonte de enzimas para
transformaes qumicas. Uma destas fontes a cenoura (Daucus carota) com o objetivo
realizar a reduo de carbonilas de cetonas aromticas como acetofenona, levando a formao
de (S)-(-)-1-feniletanol com um alto excesso enantiomrico.

Reao:

O HO H
Cenoura (Daucus carota)

Soluo aquosa, 160 rpm, 37 C, 6-7

dias

(S)-(-)-1-Feniletanol
Acetofenona
ee = 72-100%
Rendimento = 73-100%

Procedimento:

Lavar as cenouras com gua e manter em soluo de hipoclorito de sdio 5% por 20

min. Em seguida, lavar com etanol e depois corta as cenouras em finas fatias com uma lmina
ou faca limpa, de preferncia estril.

Colocar 20g da cenoura finamente fatiada, 100 mL de gua e 0,1 mL de acetofenona

dissolvida em 1 mL de dimetiformamida (DMF) em um frasco Erlenmeyer de 250 mL.

Realizar a biotransformao por agitao a 160 rpm 32C durante 3 a 7 dias. O

progresso da reao deve ser monitorado por Cromatografia em Camada Delgada (CCD).

Aps o tempo necessrio para a biotransformao transferir o meio reacional para um

funil de separao e extrair com diclorometano (2 pores de 20 mL), secar a fase orgnica
sobre sulfato de sdio anidro, evaporar o solvente em banho-maria. Ressuspender o produto em
diclorometano e transferir para um frasco previamente pesado e depois evaporar o solvente em
banho-maria novamente.

Caracterizar o produto da reao por CCD, utilizando como eluente uma soluo de
hexano: acetato de etila (80:20, v/v) e como revelador uma soluo de p-anisaldedo.

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 BIBLIOGRAFIA

COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S. Fundamentos de cromatografia.

Campinas: Editora Unicamp, 2006. 453p.

COSTA, P.; PILLI, R.; PINHEIRO, S.; VASCONCELLOS, M. Substncias

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PAVIA, D.L.; LAMPMAN, G.M.; KRIZ, G.S. - Introduction to Organic Laboratory

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HARRIS, D. C. Anlise qumica quantitativa. Rio de Janeiro: LTC, 5a ed., 2001, 862 p.

22