Optimizacion Del Detector DAD y Resoluci PDF

Optimizacin del
Detector DAD
y
Resolucin de
Problemas Tpicos
de HPLC.
Isidre Masana
Especialista de Productos UHPLC/MS
Agilent Technologies
Algunas Soluciones a Problemas Tpicos en HPLC?
Cmo Mejorar
Cmo Resolver
Sensibilidad?
?
Solapamientos?
El pico es Puro?
Detecto todas las
impurezas?
1220 Infinity 1260 Infinity 1290 Infinity
Cmo Reducir Tiempo Cmo Cuantificar

en la Preparacin de Simultneamente
Tampones y Muestras? Trazas y Mayoritarios?
Transferencia de
mtodos entre distintos
modelos?
Pgina: 2
Soluciones con Deteccin DAD
Sens. x10 con celda 60mm
con Tecnologa Max Ligth Cmo Resolver
?
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
Optimizando Condiciones
Deteccin DAD El pico es Puro?
Detecto todas las
impurezas?
Cmo Reducir Tiempo Cmo Cuantificar

en la Preparacin de Simultneamente
Tampones y Muestras? Trazas y Mayoritarios?
Transferencia de
modelos?
Pgina: 3
Diseo ptico DAD/MWD Agilent Series
(1090/1050) 1100/1200/1260 Infinity: Optimizado
para la Mejor Sensibilidad y Flexibilidad.
+30aos Experiencia* Verificacin
Automtica de
Longitudes de Onda
Lmpara de
Tungsteno Excelente Resolucin
Espectral
Lentes Filtro de 950 nm
xido de
Holmio 190 nm
Amplio "Diode-Array"
Lmpara de de 1024
Rango de Deuterio Elementos
Longitudes
de Onda Celda de
Flujo
Rendija Red
Programable Hologrfica
Optimizacin 1 a 16 nm
Rpida de la Tecnologa compartida con
Sensibilidad y Espectrofotmetro UV/VIS Agilent-8453
Resolucin *1er DAD:1979 LC-DAD:1982 HP-1040
Pgina: 4
Optimizacin de Sensibilidad / Resolucin
Espectral con Rendija Programable
Espectro benceno
perfil NO habitual en LC
1 nm
Rendija
2 nm slit slit
4 nm
8 nm
Rudo < 1x10-5AU
Rendijas ms gruesas proporcionan mayor intensidad de luz, y en consecuencia mejor sensibilidad,

pero una menor resolucin espectral. No obstante la anchura tpica de las bandas espectrales en
disolucin (30-60nm) se ve poco afectada por la utilizacin de p.e. rendijas de 8 nm.
Pgina: 5
Resumen Optimizacin de Sensibilidad con
Detectores Diode Array Agilent
cido Anisdico
PTIMO: - Rendija: 8nm (16)
- Seal: 255/30 Ref. 340/100
Longitud de Onda
Analtica
Ancho de Banda de Referencia
100 nm
mAU
30 nm Longitud de Onda de Referencia

(lo ms prxima posible a la analtica)
Ancho de Banda 340 nm
al 50% de la altura
Longitud de onda (nm)
Pgina: 6
Influencia de la Frecuencia de Adquisicin
de Datos en la Sensibilidad
2.3 seg
1.0 seg
0.1 mAU
0.3 seg
0.1 seg
Tiempo de PeakWidth
S/N
Respuesta (min) *
Tiempo (min) 2.3 sec 0.1 6.1

1 0.05 3.7
Ruido estadstico Detector n = nmero de puntos 1.0 sec
n promediados
0.3 sec 0.01 1.8
Vlido para cualquier tipo de detector HPLC / GC / CE
0.1 sec 0.005 1
Ventajas optimizacin: - Mejora sensibilidad sin prdida resolucin
- Ahorro de espacio de disco duro * Utilizar un PK WD de adquisicin
del orden del WIDTH (integracin)
- Reprocesado ms rpido de los datos. del pico ms fino de inters
RSD% ~ 100 / (S/N)pico-pico
RSD%<1% >15 ptos./pico 1<RSD%<3% 12 ptos./pico RSD%10-12% 8 ptos./pico
Espectralmente
?
con Tecnologa Max Ligth Cmo Resolver
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
Deteccin DAD
El pico es Puro?
Detecto todas las
impurezas?
Cmo Reducir Tiempo

en la Preparacin de
Tampones y Muestras?
Cmo Cuantificar
Simultneamente
Transferencia de Trazas y Mayoritarios?
modelos?
8-37m
Pgina: 8
Resolucin Espectral de Picos Cromatogrficos
Solapados: Cmo cuantificar A en presencia de B?
Posibilidad de restar la
285 nm absorbancia de una zona en
B la que el compuesto
sin Ref.
Abs A interferente absorbe lo
mismo
SUPRESIN ESPECTRAL Longitudes Onda
del compuestos B tR Analtica Referencia
B
Absorbancia
285 nm
con Ref. 325
A Abs A
tR
(Referencia Longitud Onda (nm)

alternativa 260) 285 325
Longitud de Onda Longitud de Onda
Analtica referencia
Pgina: 9
Selectividad Agilent DADs: Supresin
Espectral de Picos Utilizando Longitud de Onda
de Referencia DAD1 B, Sig=430,50 Ref=570,100, TT (COLO0219\001-2801.D)
E-132
E-104
E-124
E-129
E-133
mAU
175
150
*DAD1, 4.292 (203 mAU,Apx) Ref=4.152 & 4.592 of 001-2801.D
*DAD1, 9.079 (1162 mAU, - ) Ref=8.706 & 10.952 of 001-2801.D 125
Norm. 100
75
50
1000
25
E-132
0
800 4 6 8 10 min
E-133
*DAD1, Sig=630.00, 30.00 Ref=590.00, 38.00 , EXT of 001-2801.D
600
mAU : 630/30 nm ref: 590/38 nm
175
150
125
E-132
400
100
200
75
50
Suprimido
25 Espectralmente
0
0
4 6 8 10 min
450 500 550 600 650 700 nm *DAD1, Sig=612.00, 30.00 Ref=645.00, 20.00 , EXT of 001-2801.D
Ref: 590 Ref: 645 mAU : 612/30 nm ref: 645/20 nm

612 630 175
150
125
Esta opcin permite Resolver 100

E-133
Suprimido
75
Espectroscpicamente Picos 50
25
Espectralmente
Cromatogrficamente Solapados. 0
4 6 8 10 min
Pgina: 10
Espectralmente
Cmo Resolver
?
con Tecnologa Max Ligth
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
Optimizando Condiciones Deteccin DAD con Banda Ancha
Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?
Cmo Reducir Tiempo

en la Preparacin de Cmo Cuantificar
Tampones y Muestras? Simultneamente
modelos?
10-35m
Pgina: 11
Deteccin UV "Universal"
Deteccin DAD con Banda Ancha
WL 260 nm, BW 80 nm BANDA ANCHA

80nm.
WL 250 nm, BW 4 nm
BANDA ESTRECHA 4nm

WL 280 nm, BW 4 nm
4 5 6
Tiempo (min)
Anchos de banda de 80-100 nm permiten disponer de un detector "Universal

- Muy til en optimizacin composicin del eluyente
- Deteccin de compuestos no esperados
(Debe ser > = anchura de la rendija seleccionada)
Pgina: 12
Universalidad Agilent DADs: Utilizando
Deteccin con Banda Ancha
DAD1 A, Sig=525,250 Ref=800,100, TT (COLO0219\001-2801.D)
525/250 nm: detecta todo lo que absorba entre 400 y 650 nm.
8.412
9.081
mAU
250
200
5.903
3.057
4.289
150
5.527
100
50
0
3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 C, Sig=430,50 Ref=570,100, TT (COLO0219\001-2801.D)
BANDA ANCHA
3.057
5.527
mAU
250
200 250nm.
150
100
430/50 nm
50
0
3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 D, Sig=512,50 Ref=650,100, TT (COLO0219\001-2801.D)
5.903
8.412
mAU
250
200
150
512/50 nm *DAD1, 9.059 (4.7 mAU,Apx) Ref=8.926 & 9.232 of 001-3001.D
*DAD1, 8.406 (2.9 mAU, - ) Ref=8.345 & 8.505 of 001-3001.D
*DAD1, 5.912 (1.2 mAU, - ) Ref=5.806 & 6.066 of 001-3001.D
100 *DAD1, 5.532 (1.4 mAU, - ) Ref=5.445 & 5.659 of 001-3001.D
*DAD1, 4.299 (1.1 mAU, - ) Ref=4.219 & 4.412 of 001-3001.D
50 *DAD1, 3.065 (1.5 mAU, - ) Ref=2.959 & 3.212 of 001-3001.D
Norm.
0
4
E-104/102
3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 E, Sig=620,60 Ref=750,100, TT (COLO0219\001-2801.D)
E-124/129 E-132E-133
3
9.081
mAU
E-102:Tartrazina
620/60 nm
250
4.289
2
200 E-104: Amarillo Quinolina
150 E-124: Ponceau 4R 1
100
E-132: Carmn ndigo 0
50
400nm
0 400 500 600 700 800
3 4 5 6 7 8 9 min
650nm
Pgina: 13
Espectralmente
Cmo Resolver
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
? Solapamientos?

Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?
Pureza Espectral de un Pico
Cmo Reducir Tiempo
en la Preparacin de
Cmo Cuantificar
Transferencia de Simultneamente
Trazas y Mayoritarios?
modelos?
13-32m
Pgina: 14
Consideraciones para la Determinacin de la
Pureza Espectral de un Pico.
Se fundamenta en calcular la similitud de los espectros a lo largo del pico,
con uno (o varios) que se toman como referencia
El pico deber estar bien integrado, o con un
umbral de mnima intensidad espectral
correcto y en un rango de long. Onda con
buena linealidad (no empiece a saturar detector).
Alternativa: definir arrastrando el ratn la zona del pico
para calcular su pureza.
Si no se utiliza el clculo automtico del factor
de pureza mnimo, ste se deber ajustar
correctamente.
p.e. tomando como referencia el factor
de pureza que den patrones a concentracin
similar.
En caso de picos impuros revisar en
que zona del pico y del espectro se produce
la desviacin.
Pgina: 15
Clculo Pureza Espectral del Pico
Ejemplos Clculo Factor de Similitud
Coef. Correlacin = 0.999963 x1000
100 Factor de Similitud = 999.963
Cada nm. del espectro se
Patrn (mAU)
80 300 representa por un punto en
funcin de su absorbancia
Normalizado
60
200 entre los 2 espectros a
Patrn o comparar.
40 Espectro de
Referencia
100
20
Desconocido
0
Patrn (maU) o Espectro de Referencia

0
250 300 0 50 100 150
Longitud de Onda (nm) Desconocido (mAU)
100 Desconocido
300
80 Coef. Correlacin = 0.056
Normalizado
Factor de Similitud = 56
Patrn o 200
60
Espectro de
Referencia
40 100
20
0
0
250 300 350 400 0 10 20 30
Longitud de Onda (nm) Desconocido (mAU)
Pgina: 16
La Importancia del Ajuste del Umbral de
Intensidad Espectral Mnima para Pureza
de Pico
Pureza Mnima calculada

En un pico mal integrado y automticamente
con un Threshold espectral
excesivamente bajo es
habitual obtener falsos picos
impuros
2
100 220n +1
83 0
+m
80
60 2
2 Ajuste de regresin
3
Patrn
100 4+ + lineal
83 2280nm0
40 3 +0 Coeficiente de correlacin = 0.92399
2 7+ 2
80 Patrn 0++ Factor de Similitud = 923.99
3 60
+0 5
20 3 10 0
+
60 23
+0
0 +3
0
40 0 20 40 60 80 100
20
Desconocido
0
220 250 280 300
Pgina: 17
Ejemplo picos Puro/ Impuros Espectralmente
Arrastrando icono se define la franja del pico

para calcular su pureza cuando su umbral e
integracin son incorrectos
Pico impuro: impureza

en la cola del pico
Pico puro mal integrado

pero con umbral
intensidad espectral
correcto
Pgina: 18
con Deteccin DAD
Espectralmente
Cmo Resolver
?
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?
Cmo Reducir Tiempo Pureza Espectral de un Pico
en la Preparacin de
Cmo Cuantificar
mtodos entre distintos Trazas y Mayoritarios?
modelos? 30x Rango Dinmico con HDR-DAD
19-26m
Pgina: 19
Incremento 30x del Rango Dinmico
Lineal para cuantificar en 1 sola
inyeccin compuestos a
muy distinta
concentracin.
Agilent 1200 Infinity High Dynamic Range

(HDR-DAD) Solution
1260/1290 Infinity HDR-DAD
Pgina: 20
Combinaciones Dosis Fijas de Varios Principios
Activos (API) con Muy Distinta Respuesta: *from Roche
Switzerland
Sin la opcin HDR-DAD se requerirn
2 inyecciones con distinto volumen
7 UA
Agilent 1200 (black): API 2: 10 ml injected
Agilent 1200 (red): API 1: 100 ml injected
Infinity HDR-DAD (blue): API 1 and 2
simultaneously: 70 ml injected
3 UA
API 2
API 2: iny. 10 ml (API 1 baja resp.)

API 1
API 1: iny. 100 ml (API 2 satura detector.)
API 1+2: iny. 70 ml con HDR
Pgina: 21
Rango Dinmico x30 con HDR-DAD
Combina 2 DADs con celdas Max-Light de 3.7 mm y 60 mm
Detector Signal
[AU/cm]
Clculo de la seal combinada:

60 mm path-length para bajas concentraciones
3.7 mm path-length para altas concentraciones
3.7 mm path-length
60 mm path-length
~3x mayor Conc

10 x mayor
lmite superior [g/mL]
sensibilidad
30x Rango Dinmico (HDR-DAD)
Pgina: 22
Soluciones Cromatogrficas
Espectralmente
Sens. x10 con celda 60mm Cmo Resolver
con Tecnologa Max Ligth Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
? UHPLC y Flujos Elevados

Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?
en la Preparacin de
Cmo Cuantificar
22-23m
Pgina: 23
Flujos Elevados Mejoran la Capacidad de
Separacin con Gradientes Parmetro dependiente de:
Flujo (ml/min)
Analito
K = (87 x F x Tg) / ( % x V0 x S) Modificador Orgnico
Factor de Capacidad Volumen muerto de la columna

Retencin en Gradientes
Tiempo del gradiente (min) % de incremento de Modificador Orgnico
S: definir la sensibilidad del analito a variaciones en la proporcin de modificador orgnico.
Valores tpicos S: aumentan con el tamao de la molcula
2-5 molculas pequeas / 10 molculas grandes (pptidos) / 40 molculas muy grandes (protenas)
Al aumentar el tamao de la molcula aumenta su sensibilidad a cambios de composicin del eluyente.
S K aumenta el poder de separacin aumentara.
AUMENTAR el flujo aumentar capacidad de separacin
EJEMPLO - REDUCCIN TIEMPO ANLISIS: Reducir Tg Aumentando F
Al mantener TG x F = constante el perfil de la separacin NO vara
5
Columna: ZORBAX Eclipse XDB-C8 5
F = 2.0 mL/min 4.6x50, 3.5m F = 3.0 mL/min
Gradiente 45 90% B en 3 y 2 min
Tg = 3 min 4
Fase Mvil: A:25mM Na2HPO4 , pH 3
Tg = 2 min 4
B: Metanol
1
Flujo: 2 y 3 mL/min
3 Temperatura: 35C
1
2
2 3 min Muestra: Frmacos Cardiacos:1. Diltiazam 2
3
min
2. Dipyradamole 3. Nifedipina
4. Lidoflazina 5. Flunarizina
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 Time (min) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 Time (min)
Pgina: 24
Agilent Poroshell: el poder de separacin
de flujos elevados
} 0.5m Ideales para UHPLC con
equipos de 400bars
Ncleo
2.7m Slido Columnas Superficialmente Porosas: permiten muy
1.7um elevadas velocidades lineales con elevada
resolucin y menor presin (40-50%) que las <2m
2 segundos!!
10 segundos!!
Muestra de tranquilizantes
Columna: Porosa superficial
Poroshell-120 50 x 2.1mm, 2.7um
Flujo 3.5ml/min, ~ 700 bar
0.095sec PW 0.140secPW Gradiente 2-92% ACN en 0.4min
T= 80 C
0.5 s
Pgina: 25
Espectralmente
Sens. x10 con celda 60mm Cmo Resolver LCxLC
Cmo Mejorar
Sensibilidad?
? Solapamientos?
UHPLC y Flujos Elevados
Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?
en la Preparacin de
Cmo Cuantificar
26-19m
Pgina: 26
LCxLC: Cromatografa Bidimensional Exhaustiva
Comprehensive 2D-LC and heart-cutting 2D-LC
Comprehensive 2D-LC (LCxLC): El eluyente completo de la primera columna se inyecta a
la 2 columna y se analiza con gradientes muy rpidos,
un pico de la primera dimensin debe muestrearse al
menos 3 a 4 veces. El tiempo en la 2 dimensin coincide
con el de la recoleccin del eluyente y los picos se
LC1 reconstruyen mediante software.
LC2
LC2
LC1
1st peak from 2nd peak from 3rd peak from

1st dimension 1st dimension 1st dimension
Pgina: 27
Hardware LCxLC Flexibilidad de Mdulos
2 Dimensin
1290 Infinity
2pos/4port-duo
One or two
Binary Pump
1290 Infinity
1 Dimensin TCC Loop1
waste
Nueva vvula Agilent

2D-LC con 2 rutas de
flujo completamente
simtricas y vaciado a
1290 Infinity 1290 Infinity Optional
Loop2 contracorriente
Optional de
Binary Pump Autosampler or 1260 1260/1290
HiP Autosampler Infinity Detector
1260/1290
ambos
Infinity
loops.
1 Dimensin Detector
For 1st
dimension 1260/1290
1260 Infinity chromatogram To monitor
Infinity detector
Capillary Pump 1260 Infinity and peak- waste-line
2 Dimensin
Autosampler triggering
La mayora de Bombas o Autoinyectores Agilent sirven en la 1st dimensin!

1260 Infinity Binary or
Cas todos los detectores estn soportados!
Quaternary Pump La 2 dimensin requiere una Bomba 1290 Infinity Binaria.
Pgina: 28
Muy Sencilla y Rpida Programacin Grfica
del Gradiente de la 2 dimensin.
Muy sencilla programacin grfica del

gradiente de la 2 dimensin (operacin muy
tediosa y laboriosa por procedimientos habituales)
Pgina: 29
Espectralmente
con Tecnologa Max Ligth SFC LCxLC
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?

Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?

en la Preparacin de
Cmo Cuantificar
30-15m
Pgina: 30
Exceso Enantiomrico (impurezas):
Tpica Aplicacin Farmacetica dficil.
Mezcla Racmica: R- 1,1-bi-2-naphthol y S 1,1-bi-2-naphthol
ChiralCel OD-H, 4.6 ID x 250
mm, 5 m (Chiral
Column
Technologies)
Supercritical CO2
Fluid
MeOH w. 0.1% TFA + 0.1%
Modifier DEA
Outlet Pressure 150 bar
Flow Rate 2.0 mL/min

% modifier
Isocratic 25%
Temperature 30C
Injection Volume 5 L
Detection DAD, 220 nm
OH
OH
Permite el Anlisis de impurezas Quirales < 0.05% !!!
Pgina: 31
The Agilent 1200 Infinity Analytical SFC System
The New Standard in Performance, Cost-efficiency, Reliability and Ease-of-Use
Highest Analytical SFC Performance.... Ever

HPLC-like Sensitivity, Precision and Dynamic Range >10,000 for
accurate quantitation of 0.01% level impurities
Lowest Operating Cost, Green Chemistry

10-15x lower operating costs by compatibility with standard grade
CO2 instead of liquid SFC grade CO2
Lowest solvent consumption and waste generation
Ease of use, Flexibility and Reliability

Highest investment protection by modular, reversible
design. Customers can reconfigure their SFC system
for HPLC.
Upgrade option* for pre-exisiting Agilent 1100 and
1200 LC systems (*incluye bomba binaria SFC).
ChemStation control, data analysis and reporting
Agilent warranty and service quality
Single Vendor Solution Single Vendor Support
Makes routine analytical SFC a reality!
Pgina: 32
Espectralmente
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?

Deteccin DAD
Detecto todas las
impurezas?
El pico es Puro?
Cmo Reducir Tiempo
en la Preparacin de Pureza Espectral de un Pico
ISET Cmo Cuantificar

Simultneamente
30x Rango Dinmico con HDR-DAD
modelos?
32-13m
Pgina: 33
Problema: Reproduccin de Analisis en
Gradiente con diferentes HPLCs: - Impacto del
volumen muerto y de la calidad de la mezcla
DAD1 B, Sig=275,4 Ref=400,40 (B:\RIC\AGI...RIC DATA\1 PHARMA METOCLOPRAMIDE\WAD PHARMA\XBRIDGE-2000004.D)
mAU
1200 Series LC Quatenary Pump
8.930
200
150
8.121
12.005
12.215
100
9.975
12.393
8.323
8.747
3.049
2.747
50
9.545
0
2 4 6 8 10 12
DAD1 C, DAD1B, DAD: Signal B, 275 nm/Bw:4 nm Ref 400 nm/Bw:60 nm (B:\RIC\AGI...A\GV 1PHARMA\HPLC000001.D)
mAU 1290 Infinity LC
6.088
6.872
10.249
9.937
200
7.923
2.884
150 6.328
6.673
2.744
100
7.480
50
0
2 4 6 8 10 12
DAD1 C, DAD1B, DAD: Signal B, 275 nm/Bw:4 nm Ref 400 nm/Bw:60 nm (B:\RIC\AGI...A\GV 1PHARMA\HPLC000003.D)
mAU
8.538
9.325
12.395
Sample: 0.5% impurities in formulation (metoclopramide)
200
El resultado:
10.379
12.630
Xbridge C18, 150x3 mm, 3.5 m dp,
Diferencias en los RT y resolucin

0.45 ml/min, Eluent: A =0 .25 % AmAc, B = ACN,
150
12.763
8.744
Gradient: 0-15 min; 5-57 % B
9.159
3.320
100
Se juntan 2 picos!
2.887
50
9.951
0
2 4 6 8 10 12
Pgina: 34
Tecnologa de Emulacin Inteligente
- Como trabaja (1290 con un 1200)
mAU
400
350
Inyecctin
300
Mismas condiciones de gradiente
250 pero desplazando el gradiente y
emulando el perfil del gradiente a
200
clonar
150
100 Programa de gradiente

1290 gradiente
50
1200 gradiente
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 min
Pgina: 35
Intelligent System Emulation Technology ISET
- Seleccin de Modelos a Emular
Emulacin de cualquier HPLC/UHPLC con el

Seleccionar 1290 y la nueva tecnologa ISET.
modelo
Bomba
Seleccionar
modelo
autoinyector
Pgina: 36 June 28, 2012

Analisis de Impurezas con 1100 y 1290 Binario
Columna: 4.6 x 50 mm, 1.8 m
mAU
10 Rs= 3.23
5 1100 Series Binary LC
0
1 1.25 1.5 1.75 2 2.25 2.5 2.75 3 3.25 min
mAU
Rs= 2.92
10 1290 Infinity LC
5
0
1 1.25 1.5 1.75 2 2.25 2.5 2.75 3 3.25 min
mAU
10
Rs= 3.29 1290 Infinity LC
5
con iSET
0
1 1.25 1.5 1.75 2 2.25 2.5 2.75 3 3.25 min
Pgina: 37
Espectralmente
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?

Deteccin DAD
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity Detecto todas las
con BlendAssist. Nueva bomba impurezas?
El pico es Puro?
Cmo Reducir Tiempo
ISET Cmo Cuantificar

Simultneamente
modelos?
36-9m
Pgina: 38
Nueva Bomba 1290 Infinity Cuaternaria:
Asistente de Mezclas BlendAssist
BlendAssist: una sencilla herramienta para la programacin del gradiente y
dilucin online de tampones y modificadores a partir de soluciones stock.
Ejemplo de 2 mtodos con modificadores:

1. 5 to 95% gradiente de ACN con 0.1% TFA en
Agua y 0.08% TFA in ACN.
Water
Water
1% TFA 2. 20 80% gradiente de ACN con 0.5% TFA en
Agua y 0.4% TFA en ACN.
Sin BlendAssist necesita o mezclar perviaemnte

los disolventes necesarios, o mediante el uso de
soluciones stock de TFA en agua y en ACN
programar complejos gradientes cuaternarios (%
A, B, C, D).
ACN Con BlendAssist: basta programar el gradiente

ACN 1% TFA binario H2O/ACN y definir el factor de dilucin!
Pgina: 39
Bomba 1290 Infinity Cuaternaria con BlendAssist
Programacin BlendAssist
Ahorra tiempo de personal: al reducir

necesidad de preparar tampones.
Reduce posibilidad de error y mejora la
trazabilidad.
Mejora la reproducibilidad (distintos das).
Nueva tecnologa de mezclado a baja presin con InletWeaver y active damping:

Gradientes con elevada exactitud y precisin de 1-99% (en rango composicin).
Slo <350L volumen retado del gradiente.
Versin opcional BlendAssist Pro con funcionalidades adicionales
Pgina: 40
Comparacin de Mezcla de Fases Mviles: Dinmica
(online) vs. Manual con Diferentes Usuarios
Anlisis of Glucocorticoides
Norm.
30
25
20
15
6 fases mviles mezcladas dinmicamente
10
1 2 3 4 min
El mezclado dinmico mejora

Norm.
considerablemente la reproducibilidad* de
40
35
tiempos de retencin (*entre das y entre usuarios)
30
25
20
6 fases mviles mezcladas manualmente
15 (por diferentes usuarios)
10
5
Usuarios1 a 6
0
1 2 3 4 min
Pgina: 41
Espectralmente
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?

Deteccin DAD
El pico es Puro?
Cmo Reducir Tiempo
Autoinyectores con capacidad
de Mezcla/ Derivatizacin Cmo Cuantificar
ISET Simultneamente
mtodos entre distintos 30x Rango Dinmico con HDR-DAD
modelos?
40-5m
Pgina: 42
Preparacin Muestra en Inyector Automtico.
Ejemplo Derivatizacin precolumna: Aminocidos (OPA + FMOC)
Disponible en : 1290 Infinity,1260 Infinity, 1200, 1100, 1050, 1090
Muestra Reactivo
VWD1 A, Wavelength=338 nm, TT (AASM0531\095-0101.D)
mAU VWD1 A, Wavelength=338 nm, TT (AASM0531\003-0201.D)
VWD1 A, Wavelength=338 nm, TT (AASM0531\007-0401.D)
ALA
Dosificador
de Muestra
Unidad
350 de
GLY
DERIVATIZACION AMINOACIDOS Muestreo
1.-Toma 5 l tampn Borato (vial 2)
300 2.-Toma 1 l reactivo OPA (vial 3) Bomba
3.-Toma O l agua (vial 1) - lavado exterior aguja
a columna
4.-Toma 1 l muestra AAS (vial X)
250 5.-Toma O l agua (vial 1) lavado aguja
6.-Mezclar 7 l 6 veces Derivatiza AAS PRIMARIOS
7.-Toma O l agua (vial 1) - lavado exterior aguja deshecho
200
8.-Toma 1 l reactivo FMOC (vial 3)
9.-Mezclar 8 l 3 veces Derivatiza AAS SECUNDARIOS LEU
10.-INYECTAR ARG LYS
150 PRO
GLU VAL
ILE
100 THR
ASN PHE
ASP MET ORN
SER TYR
50 HIS CYS-CYS
TRP
0
ROJO: muestra AAS libres
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
Tambin es til para mezclar patrones durante la puesta a punto de mtodos o p.e. para automatizar la
derivatizacin con FMOC en el anlisis de Glifosato y AMPA por LC/MS
Pgina: 43
Espectralmente
Solapamientos?
Cmo Mejorar
Sensibilidad?

Deteccin DAD
El pico es Puro?
Cmo Reducir Tiempo
LC/MS en la Preparacin de AMDS Pureza Espectral de un Pico
Autoinyectores con capacidad
de Mezcla/ Derivatizacin Cmo Cuantificar
ISET Simultneamente
mtodos entre distintos 30x Rango Dinmico con HDR-DAD
modelos?
42-3m
Pgina: 44
LC/MS-QqQ: La clave para la Productividad
1 columna para todo C18
Los mismos eluyentes
ESI+: A: 0.1%HCOOH
Pesticidas, Herbicidas,
B: 95% ACN/ 0.1%HCOOH
Micotoxinas, Aflatoxinas
Vitaminas, Hormonas,
beta-gonistas, Frmacos
Mtodos (gradientes y transiciones)

especficos para cada familia.
Antibiticos, Sudanes,
Melaminas,.......... La selectividad y robustez de QqQ en MRM calibrando
sobre matriz permite el uso de columnas y eluyentes
comunes para una gran variedad de aplicaciones.
REDUCE COSTES especialmente de mano de obra
...........
Pgina: 45
Resumen: Algunas Soluciones a Problemas Tpicos
en HPLC
con Tecnologa Max Ligth Espectralmente
Cmo Mejorar SFC Cmo Resolver LCxLC
Sensibilidad? Solapamientos?
Optimizando Condiciones UHPLC y Flujos Elevados
Deteccin DAD
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity Deteccin DAD con Banda Ancha

con BlendAssist. Nueva bomba
Detecto todas las
LC/MS Cmo Reducir Tiempo passed
impurezas?
en la Preparacin de El pico es Puro?
AMDS Tampones y Muestras?
Autoinyectores con capacidad Pureza Espectral de un Pico
de Mezcla/ Derivatizacin
Cmo Cuantificar
modelos?
ISET
Pgina: 46
Agilent 1290 Infinity
El ms Verstil
UHPLC:
Cualquier tipo de columnas:
UHPLC, LC, Solid Core, Monolitics,
Columnas de 1 a 8 mm d.i.. Muchas
Longitudes hasta 25cm x1.8m. Gracias
UHPLC & UFLC con CH3OH. por su
. Atencin
..
.
Infinitas Posibilidades !!
Agilent 1290 Infinity Preguntas?
El ms Verstil
UHPLC:
Cualquier tipo de columnas:
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Columnas de 1 a 8 mm d.i..
Longitudes hasta 25cm x1.8m.
UHPLC & UFLC con CH3OH.
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Estamos a su
disposicin en
Infinitas Posibilidades !! tel.: 901.11.6890
www.agilent.com/chem customercare_spain@agilent.com

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Optimizacin del

1220 Infinity 1260 Infinity 1290 Infinity

Cmo Reducir Tiempo Cmo Cuantificar

Cmo Reducir Tiempo Cmo Cuantificar

Rendijas ms gruesas proporcionan mayor intensidad de luz, y en consecuencia mejor sensibilidad,

Ancho de Banda de Referencia

30 nm Longitud de Onda de Referencia

Longitud de onda (nm)

Tiempo (min) 2.3 sec 0.1 6.1

Cmo Reducir Tiempo

(Referencia Longitud Onda (nm)

Ref: 590 Ref: 645 mAU : 612/30 nm ref: 645/20 nm

Esta opcin permite Resolver 100

Cmo Reducir Tiempo

WL 260 nm, BW 80 nm BANDA ANCHA

BANDA ESTRECHA 4nm

Anchos de banda de 80-100 nm permiten disponer de un detector "Universal

Optimizando Condiciones Deteccin DAD con Banda Ancha

Patrn (maU) o Espectro de Referencia

Longitud de Onda (nm) Desconocido (mAU)

Longitud de Onda (nm) Desconocido (mAU)

Pureza Mnima calculada

Arrastrando icono se define la franja del pico

Pico impuro: impureza

Pico puro mal integrado

Agilent 1200 Infinity High Dynamic Range

1260/1290 Infinity HDR-DAD

API 2: iny. 10 ml (API 1 baja resp.)

Clculo de la seal combinada:

~3x mayor Conc

Deteccin DAD con Banda Ancha

Factor de Capacidad Volumen muerto de la columna

1st peak from 2nd peak from 3rd peak from

Nueva vvula Agilent

La mayora de Bombas o Autoinyectores Agilent sirven en la 1st dimensin!

Muy sencilla programacin grfica del

Deteccin DAD con Banda Ancha

Cmo Reducir Tiempo Pureza Espectral de un Pico

Outlet Pressure 150 bar

Flow Rate 2.0 mL/min

Detection DAD, 220 nm

Highest Analytical SFC Performance.... Ever

Lowest Operating Cost, Green Chemistry

Ease of use, Flexibility and Reliability

Makes routine analytical SFC a reality!

Deteccin DAD con Banda Ancha

ISET Cmo Cuantificar

Diferencias en los RT y resolucin

100 Programa de gradiente

Emulacin de cualquier HPLC/UHPLC con el

Pgina: 36 June 28, 2012

Deteccin DAD con Banda Ancha

ISET Cmo Cuantificar

Ejemplo de 2 mtodos con modificadores:

Sin BlendAssist necesita o mezclar perviaemnte

ACN Con BlendAssist: basta programar el gradiente

Ahorra tiempo de personal: al reducir

Nueva tecnologa de mezclado a baja presin con InletWeaver y active damping:

El mezclado dinmico mejora

Deteccin DAD con Banda Ancha

Deteccin DAD con Banda Ancha

Mtodos (gradientes y transiciones)

Bomba Cuaternaria 1290 Infinity Deteccin DAD con Banda Ancha