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INTRODUCCION
Existen dos tipos de bacterias, gram positivas y gram negativas; las primeras presentan un
peptidoglicano en la pared celular ms grueso que las negativas, esto hace que cuando se
sometan al mtodo de coloracin o tincin gram, las bacterias positivas no se tian y las
negativas si se decoloren y finalmente se tian con las gotas de safrandina. Esto mtodo se
desarrollo en el laboratorio y a continuacin se explica y se analiza paso a paso.
2. REVISION LITERARIA
Las bacterias son microorganismos unicelulares mucho ms simples que las clulas eucariotas.
Su tamao puede variar aproximadamente entre 0,2 y 5 milsimas de milmetro.
Las bacterias tienen una envoltura rgida o pared bacteriana que determina su forma: cocos
(esfrica), bacilos (cilndrica alargada), cocobacilos (bacilos cortos redondeados),
espiroquetas (helicoidales), etc.
En ocasiones, sobre todo dependiendo de las condiciones de cultivo (edad de cultivo, tipo de
medio slido o lquido, presencia de antibiticos, etc.) una misma especie puede presentar una
morfologa variable. A este fenmeno se le denomina pleomorfismo.
Las bacterias pueden presentarse como clulas aisladas o formando grupos. Esta caracterstica
es tambin importante para poder identificarlas. En algunas casos la aparicin de las bacterias
formando agrupaciones no es una caracterstica de estas in vivo sino un efecto de ciertas
tcnicas de tincin (como en el caso del gnero Staphylococcus que aparece formando racimos
slo en preparaciones fijadas y teidas; pero no en muestras vivas).
A veces las bacterias no se dividen totalmente, no se individualizan, y entonces dan lugar a
agrupaciones de diferentes formas: estreptococos y estreptobacilos (cadenas de cocos o de
bacilos, respectivamente), estafilococos (racimos), diplococos (conjuntos de dos), difteroides
(en ngulo o empalizada), sarcinas (agrupaciones en ttradas o en grupos de ocho cocos
dispuestos en forma de cubo).
Formas bsicas en que se puede visualizar la morfologa bacteriana en una tincin GRAM:
Cocos
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la divisin celular. Diplococos, aparecen por
pares. Estreptococos, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos, aparecen en grupos
irregulares, a veces de gran tamao.
Bacilos
Empalizadas,
Forma de vara: Dos bacilos
Cadenas de bacilos: Bacilos lado con
se llaman juntos:
Estreptobacilos lado o en figuras en
Bacilos Diplobacilos
X, V o Y
TINTICIN DE GRAM
Es esta una coloracin diferencial que permite dividir a las bacterias en Grampositivas,
refirindose a aquellas que toman el primer colorante utilizado que tie las bacterias de color
violeta y las Gramnegativas, las que toman el ltimo colorante utilizado en la tcnica como
colorante de contraste que las tie de rojo o rosado.
En las bacterias gramnegativas, la pared est formada por dos capas. La capa interna est
compuesta por peptidoglucano. La capa externa contiene fosfolipidos y protenas y unas
molculas llamadas lipopolisacaridos. Estos lipopolisacaridos de las bacterias gramnegativas
son sustancias especialmente txicas: se denominan endotoxinas, y son responsables de
algunas de las consecuencias ms raves de las infecciones.
El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en
agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de los
microorganismos grampositivos, tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca no
puede atravesar. En las clulas gramnegativas, los lpidos de la pared (ms abundantes que en
las clulas grampositivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del
complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teora, pero es indudable la
importancia general de la pared celular.
Cocos Gram-positivos
Racimos: forma tpica de Staphylococcus sp, como S. aureus
Bacilos Gram-positivos
Cocos Gram-negativos
Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis. Tambin Moraxella sp y Acinetobacter
sp aparecen con morfologa de diplococos. Acinetobacter puede ser pleomrfico, y a veces aparece
como coco Gram-positivo.
Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o Gram-negativo, y, a
menudo, Gram-variable.
Bacilos Gram-negativos
Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae, y Campylobacter sp, como C. jejuni
3. MATERIALES Y METODOS
MATERIALES:
- Placas petri.
- Porta objetos.
- Aguja de kolle.
- Mechero bunsen.
- Cristal violeta.
- Lugol.
- Alcohol-cetona.
- Safranina.
- Aceite de inmersin.
4. RESULTADOS
CEPAS:
Colocar la cepa.
Secar con papel toalla las partes alrededor donde se coloco la cepa.
Gram ( - ): No se va a decolorar.
5. CONCLUSIONES
En el laboratorio se logro observar la coloracin de ambas bacterias gram (+) y (-), luego con
el alcohol se pudo observar la decoloracin de la bacteria gram (+).
Con la ayuda del aceite, se puede observar en el microscopio (100x) las bacterias gram
positivas y negativas con su respectiva distribucin y coloracin.
6. BIBLIOGRAFIA
Segn la manipulacin que efectuemos sobre la muestra a observar y segn los colorantes que
empleemos durante el proceso, podemos hablar de diferentes modalidades de tincin.
Sin Tincin
Es el montaje directo hmedo o examen en fresco: las muestras se extienden directamente sobre la
superficie de un portaobjetos para su observacin. El material que es demasiado espeso para
permitir la diferenciacin de sus elementos puede diluirse con igual volumen de solucin salina
fisiolgica estril.
Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del material. Este tipo de preparacin
se emplea para detectar trofozotos mviles de parsitos intestinales como Giardia, Entamoeba,
huevos y quistes de otros parsitos, larvas y gusanos adultos, Trichomonas, hifas de hongos, etc.
Tincin Simple
Es la tincin en que se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien
con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH
digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la clula husped, pero no acta
sobre los polisacridos de las paredes celulares de los hongos.
Esta tcnica permite observar la morfologa y tamao de las bacterias, as como los tipos de
agrupaciones que forman.
Tincin diferencial
Con esta tincin tu vas a poder ver morfologa, tamao, organizacin de las bacterias y adems
categorizar los microorganismos en varios grupos, segn su afinidad con el colorante que tu estas
utilizando. Estas tinciones utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de ms de una
sustancia tintrea. En algunas tcnicas de coloracin, las tinciones diferenciales ms importantes
que se emplean en bacteriologa son las de Gram y la tincin cido-resistente. Ambas tinciones se
utilizan para obtener informacin acerca de la composicin de las capas de la pared celular de las
clulas bacterianas.
Las gram positivas cuando realizar el procedimiento de tincin de gram, puede ver que
luego de aadir lugol, el colorante cristal violeta se mantiene en el interior de la bacteria. Las
gram negativas al aadir lugol pierden la coloracin del cristal violeta y si le aades otro
colorante, por ejemplo la safranina, adoptaran ese color.
Mycobacterium tuberculosis
GRAMPOSITIVAS
Staphylococcus aureus Es una especie bacteriana integrada por formas cocaceas, que se dividen
en ms de un plano, por lo que se agrupan regularmente en racimos. Son inmviles y carecen de
esporas. Son gram positivas.
GRAMNEGATIVA
Escherichia coli se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos
animales, y por ende en las aguas negras. sta y otras bacterias son necesarias para el
funcionamiento correcto del proceso digestivo, adems de producir las vitaminas B y K. Es un
bacilo que reacciona negativamente a la tincin de Gram (gramnegativo), es anaerbico
facultativo, mvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas.
Haemophilus es un gnero de bacterias Gram negativas con forma de cocobacilos pero muy
pleomrficas. Aunque la forma tpica es la cocobacilar, se consideran pleomficas porque pueden
realmente variar drsticamente su morfologa.
Enterobacter cloacae es una bacteria que pertenece al gnero Enterobacter, de la familia de las
Enterobacteriaceae. Es un bacilo Gram negativo Oxidasa negativo y Catalasa positivo presente
en el aparato digestivo humano.