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Aula

LIGAO, RECOMBINAO E
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MAPEAMENTO GNICOS

META
Discutir a importncia dos princpios que regem a origem da diversidade gentica a cada gerao
celular e a construo de mapas fsicos para a localizao de genes em cada cromossomo do
genoma.

OBJETIVOS
Ao final desta aula, o aluno dever:
compreender a importncia dos mecanismos de ligao gnica e recombinao para a origem da
diversidade gentica nas populaes naturais;
construir mapas genticos.

PR-REQUISITOS
Antes de iniciar o estudo da Recombinao Gentica, o aluno dever fazer uma leitura sobre a As
Leis de Mendel em um livro de gentica Gentica consultando a bibliografia recomendada.
Gentica Bsica

INTRODUO

A diversidade biolgica de determinada espcie o conjunto de car-


actersticas morfolgicas e siolgicas que a torna capaz de responder s
mudanas ambientais. Essa diversidade originada pelos diferentes con-
juntos de alelos estocados nos diferentes indivduos de uma populao. As-
sim, quanto mais diversicada for esta populao, maior a variabilidade de
respostas s mudanas ambientais e, consequentemente a sua sobrevivncia.
Os mecanismos genticos que do origem a essa diversidade, a seg-
regao independente e a recombinao gnica, ocorrem durante a diviso
celular meitica, gerando os gametas.
Na segregao independente dos cromossomos (Fig. 1), ou 2 Lei
de Mendel, os cromossomos e seus genes podem combinar-se ao acaso,
gerando gametas com diferentes arranjos, como em um sorteio. As com-
binaes mais freqentes so as parentais; as menos freqentes so a de
gametas recombinantes, ou seja, com novas combinaes. As propores
esperadas sero 1:1:1:1.

No entanto, nem todos os genes se comportam de maneira indepen-


dente, pois quanto mais prximos estiverem no cromossomo maior a
probabilidade de serem herdados juntos. A nica maneira de separ-los por
meio do crossing-over ou recombinao gnica, que ocorre durante a prfase
da meiose I, permitindo que genes muito prximos no cromossomo possam
ser re-arrumados a cada diviso celular, gerando gametas com diferentes
combinaes. Mas, diferente da segregao independente de Mendel, na
recombinao gnica a proporo de recombinantes maior e a anlise dos
cruzamentos mostra uma proporo maior dessas combinaes.
Pode-se relacionar a freqncia de recombinantes produzida pelo
crossing over distancia entre os genes, mostrando o rearranjo de genes
ao longo de um cromossomo e permitindo construir mapas fsicos dos
cromossomos antes dos mapas moleculares, como veremos neste capitulo

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Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
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Cada espcie de organismo deve conter de centenas a milhares de genes


e, geralmente, um nmero menor de cromossomos. Para entender essa
desigualdade as analises genticas mostram que cada cromossomo um
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pedao de DNA, que carrega centenas ou poucas centenas de diferentes
genes que esto dispostos ao longo dele como contas em um colar
Os cromossomos so, por isso, chamados grupos de ligao, pois con-
tm um grupo de genes que so ligados juntos. O nmero de grupos de
ligao corresponde ao nmero de tipos de cromossomo de dada espcie.

Figura 2 Estrutura de um cromossomo evidenciando cromossomos ligados

P. exemplo, em humanos

Figura 3- Cariograma humano

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Gentica Bsica

- 22 grupos autossmicos de ligao


- Um grupo de ligao do cromossomo X
- Um grupo de ligao do cromossomo Y

O termo ligao (linkage) tem dois signicados relacionados:


1. Dois ou mais genes podem estar localizados no mesmo cromossomo.
2. Genes que so muito prximos tendem a ser transmitidos juntos.

BREVE HISTRICO DOS ESTUDOS DE


RECOMBINAO

Logo aps a descoberta dos trabalhos de Mendel, em 1900, seus ex-


perimentos foram repetidos por vrios cientistas, utilizando-se de diferentes
modelos, animais e vegetais, para corroborar seus estudos. Assim, em 1905,
William Bateson e Reginald Punnett conduziram um cruzamento em ervilha
de cheiro envolvendo 2 traos diferentes:
- Cor da or e forma do gro.
- Esperavam uma proporo fenotpica de 1:1:1:1 na gerao F2.
- Encontraram resultados surpreendentes que no souberam explicar.

Figura 4 Experimento envolvendo ligao gnica em ervilhas

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Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
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Entre os anos de 1910 e 1915, porm, os estudos de Thomas Hunt


Morgan e seus colaboradores em Drosophila melanogaster, mostraram
tambm, desvios da 2 lei de Mendel. Seus estudos associariam genes e
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cromossomos denitivamente. A escolha desse organismo foi essencial
para os estudos de Morgan, uma vez que essas moscas so de pequeno
tamanho (3 a 4 mm), de fcil manuseio, tm um ciclo de vida muito
curto (aproximadamente 12 dias), alm de serem extraordinariamente
fecundas (cada fmea pode originar 200 a 300 descendentes ao longo
da sua vida), terem sexos facilmente distinguveis, apresentam grande
diversidade de formas e o seu caritipo possui apenas quatro pares de
cromossomas (trs autossmicos e um par de cromossomas sexuais).
Nesses estudos, Morgan e col. analisaram cruzamentos envolvendo 2
caracteres autossmicos: cor do olho e tamanho das asas em Drosophila.
Sabia-se que a cor do olho era determinada por um gene (vermelho ou pr-
pura), e o tamanho da asa (normal ou vestigial). O cruzamento de indivduos
de olhos vermelhos e asa normais com outro de olhos prpura com outro
de asas vestigiais gerava s indivduos com olhos vermelhos e asas normais:
Cor dos olhos: Vermelho- pr+ (dominante), pr- prpura (recessivo)
Forma das asas: normal- vg+ (dominante), vg- vestigial (recessivo)

P pr/pr. vg/vg X pr+ / pr+. vg+/ vg+

Gametas pr. vg pr+ vg+

Dibrido de F1 pr+/ pr . vg+/ vg

Cruzamento-teste pr+/ pr . vg+/ vg X pr/pr. vg/vg (testador)

O cruzamento teste, que serve para testar a segregao do geni-


tor dibrido em relao ao genitor recessivo (testador), mostrou uma
proporo diferente da mendeliana (1:1:1:1), revelando nmeros dife-
rentes de descendentes com combinaes parentais e recombinantes,
como segue:

pr+. vg+ 1.339


pr . vg 1.195
pr+ . vg 151
pr . vg+ 154
2.839
Esse desvio mostra que as 2 primeiras combinaes de genes es-
to ligadas. Observando-se o percentual de recombinantes na prole,
Morgan percebeu que o numero de indivduos era aproximadamente
igual (151 ~ 154), gerando um total de 305, que uma freqncia de
10,7 ou (305/2839) X 100.

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Com esses dados Morgan postulou que os genes estavam sica-


mente ligados no mesmo cromossomo e as combinaes so mantidas
juntas na prole.
Desse modo cou comprovado que os genes que esto juntos no
mesmo cromossomo no segregam de modo independente;
Mas se os genes esto ligados como mostra a alta proporo de
combinaes parentais, como aparecem as combinaes novas, re-
combinantes?
Morgan sugeriu que, durante a meiose, quando h o pareamento de
homlogos, os cromossomos podem trocar pedaos, em um processo
chamado crossing-over.
Esse processo permite a recombinao gnica. O crossing-over
ocorre durante a prfase I da meiose no estgio bivalente, onde
cromtides no-irms de cromossomos homlogos trocam pedaos
de DNA. Essa troca pode ocorrer em qualquer local entre 2 molculas
complementares de DNA, mas no constante.

Figura 5 Crossing-over e recombinao durante a meiose

A evidncia citolgica do crossing-over so os quiasmas-pontos de unio


entre as cromtides no-irms de cromossomos homlogos que trocaram
pedaos durante a meiose.

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No h alterao nas seqncias de nucleotdeos no stio de troca; a


quebra e os eventos de religao ocorrem de uma forma to precisa que
no h perda, ganho ou alterao de um nico nucleotdeo.
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O crossing-over ocorre no estagio de quatro cromtides, podendo ocorrer
de um a vrios crossing a cada diviso, por cromossomo.
A freqncia de recombinao no constante ao longo de todo o
genoma e inuenciada por efeitos tanto globais quanto locais. Ela pode
medir a fora da ligao entre os genes. Quanto mais prximos, mais rara
a separao e a recombinao, ou vice-versa. Para qualquer 2 genes, a
freqncia de recombinao nunca ultrapassa 50%; pois essa s alcanada
quando os genes esto muito distantes em um cromossomo ou estiverem
em cromossomos diferentes e se distribuem independentemente. Ou seja,
no esto ligados.

Figura 6- Distribuio cromossmica envolvendo dibridos com genes ligados

Quanto ao arranjo dos alelos dominantes e recessivos, h duas con-


guraes possveis: cis, quando os alelos dominantes esto no mesmo
cromossomo e trans quando em cada cromossomo localiza-se um domi-
nante e um recessivo.

Figura 7 Conguraes de ligao entre genes ligados

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FREQNCIA DE RECOMBINAO E MAPA


GENTICO

A contribuio mais importante dos estudos de Morgan e seus colabora-


dores foi relacionar a freqncia de recombinantes produzida pelo crossing
over distancia entre os genes, mostrando o rearranjo de genes ao longo
de um cromossomo, permitindo construir mapas fsicos dos cromossomos
antes dos mapas moleculares.
A distncia entre os genes determina a probabilidade da ocorrncia de
crossing. As freqncias de recombinantes para genes ligados variam de 0
a 50%, dependendo da distancia entre eles. Como j vimos, quanto mais
distantes mais suas freqncias se aproximam de 50%, o que diculta saber
de os genes esto ligados ou em cromossomos diferentes.
O mtodo bsico de mapeamento gnico foi desenvolvido por Alfred
Sturtevant, aluno de Morgan, que associou a distancia de genes a distancia
real entre eles nos cromossomos.
Usando a freqncia de recombinante encontrada por Morgan de 10,7 %
(ver acima) Sturtevant props utiliz-la como um ndice quantitativo da distancia
linear entre os genes pr e vg em um mapa de ligao.
Ele ento deniu uma unidade de mapa (u.m.) como a distancia entre
genes para a qual um produto de meiose em 100 recombinante. Ex: a
freqncia de recombinao (FR) de 10,7 ser 10,7 u.m. A unidade de cou
tambm conhecida como centimorgan (cM), em homenagem a Morgan.
O mapa geralmente representado de maneira linear, onde os locus
gnicos delimitam as distancias entre os genes.
Ex:
Porcentagem de recombinao entre genes A e B: 19%
Porcentagem de recombinao entre A e C: 2%
Porcentagem de recombinao entre B e C: 17%
A distncia entre A e B ser de 19 centimorgans, A e C, de 2 centim-
organs e B e C, de 17 centimorgans:

CRUZAMENTO TESTE DE 3 PONTOS


Pode-se calcular a freqncia de recombinantes e, conseqentemente,
a as distancias entre os genes por meio do cruzamento-teste dibrido, como
mostrado nos cruzamentos entre os genes pr e vg , e, de maneira mais

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complexa, utilizando o cruzamento teste de 3 pontos. Essa metodologia


utiliza um cruzamento entre um tribrido e um testador triplo recessivo.
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Figura 8- Recombinao e formao de gametas em cruzamento-teste de 3 pontos.

A deteco de classes recombinantes duplas mostra que podem ocor-


rer crossing-over duplos. Um crossing-over em uma determinada regio
do cromossomo afeta a probabilidade de ocorrncia de outro crossing em
uma regio adjacente, ou seja, esses fenmenos no so independentes. Essa
interao chamada de interferncia. Se os crossings em duas regies so
independentes, ento, a frequncia de recombinantes duplos seria igual ao
produto das frequncias de recombinantes nas regies adjacentes
Interferncia (I): um crossing reduz a probabilidade de outro crossing
em uma regio adjacente

Coincidncia (C): proporo de recombinantes duplos observados em


relao ao esperado

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Assim:
I = 1 C, em que:
C = (n observado de recombinantes duplos - FRDO/ n esperado de
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recombinantes duplos - FRDE)
No exemplo de Drosophila:
FRDO = 8
FRDE = 0,064 x 0,132 = 0,0084 (8% de 1448 = 12)
I = 1 8/12 = 4/12 = 1/3 = 33%
C = 0 (interferncia completa, I = 1)
Nesse caso no so observados duplo recombinantes
C = 1 (ausncia de interferncia, I = 0)
Nesse caso o nmero de duplo recombinantes observado igual ao
nmero esperado de duplos recombinantes

CONCLUSO

O mapeamento de genes atravs de analise ligao serve para estimar


a posio relativa dos genes atravs da freqncia de crossing. Mas ainda
incompleto, pois no estabelece distancias em relao ao centrmero ou
telmeros, os marcos citolgicos de um cromossmico, para associar um
dado gene a um cromossomo. No entanto a analise conjunta de um gene
ligado a determinado cromossomo e seu mapa cromossmico ampliam a
analise gentica. Com o emprego das metodologias moleculares, os mapas
de ligao so associados a dados de mapas fsicos e tem fornecido infor-
maes valiosas sobre doenas e seus genes defeituosos. Essas associaes
permitiram construir um mapa mrbido (Figura 9))

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Mapa gentico humana, representando a associao entre genes e


doenas

Figura 9- Mapa gentico humano representando a associao entre genes e doenas (Fonte: www.educarchile.cl).

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do genoma humano que tem ajudado muitas famlias com doenas


genticas raras a rastrear genes de doenas em suas famlias, auxiliando no
aconselhamento gentico e no prognstico dessas doenas. Alm dessa
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aplicao, os mapas de ligao associados a outros tem auxiliado nos estudos
de logenia, na compreenso da diversidade entre espcies prximas, no
melhoramento gentico animal e vegetal e, em seu sentido mais amplo, na
compreenso da diversidade genmica de populaes naturais.

RESUMO

A formulao da teoria cromossmica da herana, associando genes a


cromossomos, foi um marco na Gentica que possibilitou o grande avano
que vemos hoje nas mais diversas reas biolgicas. A construo dos mapas
genticos, atravs da freqncia de recombinantes em cruzamentos utili-
zando diferentes espcies, nos ajudou a associar genes a locais especcos.
Essa grande estratgia associada a metodologias citogenticas e moleculares
atuais tm revelado uma gama enorme de diversidade, tanto visvel (fenti-
pos) quanto oculta, nos genomas de diferentes espcies.
Para a espcie humana, essa compreenso tem fornecido dados e met-
odologias essenciais que podem ajudar a pesquisa medica a fornecer dados
mais diretos a sociedade e impulsionado a construo de metodologias que,
em breve tempo, salvaro vidas.

EXERCCIO RESOLVIDO

Ex: Calculo de recombinao em cruzamento teste de 3 pontos (3


genes) em Drosophila:

- v: olhos vermilion.
- cv: ausncia de nervuras nas asas.
- ct: margens das asas cortadas.
P. v+v+ cvcv ctct x v v cv+cv+ ct+ct+

F.1 v+v cv+cv ct+ct x vv cvcv ctct

Distncia entre os 1 e 2 genes v e cv (crossing simples)


v cv+ ct+ 580
v+ cv ct 592
v cv ct+ 45 FR = (45+40+89+94)/1448
v+ cv+ ct 40 FR = 268/1448
v cv ct 89 FR = 0,1850 x 100
94 FR = 18,5 cM
v+ cv+ ct+ 3
v cv+ ct 5
v+ cv ct+ Total 1448

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Gentica Bsica

Distncia entre os 1 e 3 genes v e ct (crossing simples)

v cv+ ct+ 580


v+ cv ct 592
v cv ct+ 45 FR = (89+94+3+5)/1448
v+ cv+ ct 40 FR = 191/1448
v cv ct 89 FR = 0,1320 x 100
94 FR = 13,2 cM
v+ cv+ ct+ 3
v cv+ ct 5
v+ cv ct+ Total 1448
D
Distncia entre os 2 e 3 genes v e ct (crossing duplos)
v cv+ ct+ 580
v+ cv ct 592
v cv ct+ 45 FR = (45+40+3+5)/1448
v+ cv+ ct 40 FR = 93/1448
v cv ct 89 FR = 0,0640 x 100
94 FR = 6,4 cM
v+ cv+ ct+ 3
v cv+ ct 5
v+ cv ct+ Total 1448

Concluso: Todos os locos esto ligados (situados no mesmo cromos-


somo), pois os valores de FR so menores que 50%.
Teste de trs pontos:
Locos FR (cM)
v e cv 18,5
v e ct 13,2
cv e ct 6,4

Observe que a soma de 13,2 e 6,4= 18,2 refere-se a soma entre os 1o


e o 2 genes e entre o 2 e o 3.

v ct cv

13,2 6,4

Com o cruzamento teste foi possvel determinar a ordem dos trs


genes no cromossomo.
As duas distncias no mapa, 13,2 cM e 6,4cM, somam 19,6 cM, que
maior que 18,5 cM (distncia calculada para v e cv) As duas classes mais
raras de gentipos correspondem a duplos recombinantes que surgem de
dois crossings.

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A deteco de classes recombinantes duplas mostra que podem ocor-


rer crossing-over duplos.
- Um crossing-over em uma determinada regio do cromossomo afeta a
probabilidade de ocorrncia de outro crossing em uma regio adjacente,
ou seja, esses fenmenos no so independentes. Essa interao chamada
de interferncia.
- Se os crossings em duas regies so independentes, ento, a frequncia
de recombinantes duplos seria igual ao produto das frequncias de recom-
binantes nas regies adjacentes.

Interferncia (I): um crossing reduz a probabilidade de outro crossing


em uma regio adjacente.
Coincidncia (C): proporo de recombinantes duplos observados em
relao ao esperado.
Assim:
- I = 1 C, em que:
- C = (n observado de recombinantes duplos - FRDO/ n esperado de
recombinantes uplos - FRDE).
- No exemplo de Drosophila:
- FRDO = 8.
- FRDE = 0,064 x 0,132 = 0,0084 (8% de 1448 = 12).
- I = 1 8/12 = 4/12 = 1/3 = 33%.

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Gentica Bsica

C = 0 (interferncia completa, I = 1).


- Nesse caso no so observados duplo recombinantes
- C = 1 (ausncia de interferncia, I = 0).
- Nesse caso o nmero de duplo recombinantes observado igual ao nmero
esperado de duplos recombinantes.

ATIVIDADES

1. Analisando-se dois pares de genes em ligamento fatorial (linkage) rep-


resentados pelo hbrido BR/br, uma certa espcie apresentou a seguinte
proporo de gametas:

48,5% BR
48,5% br
1,5% Br
1,5% bR

Pela anlise dos resultados, pode-se concluir que a distncia entre os


genes B e R de:

a. 48,5 cM
b. 97 cM
c. 1,5 cM
d. 3 cM.
e. 50 cM

2. O daltonismo deutan um carter determinado por gene recessivo ligado ao sexo.


A doena retinitis pigmentosum (cegueira completa ou parcial) determinada por gene
dominante parcialmente ligado ao sexo. Uma mulher no daltnica e com retinite,
cuja me daltnica e sem retinite e o pai no daltnico e com retinite, homozigoto,
casa-se com um homem daltnico e sem retinite. Considerando que a distncia
entre os dois locos, no X, de 10 unidades de mapa? Responda:
a) Qual a proporo genotpica esperada na descendncia?
b) Qual a proporo fenotpica esperada na descendncia?
c) Se o casal deseja ter dois lhos, qual a probabilidade de ocorrer um me-
nino normal e uma menina normal, para as duas caractersticas?

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AUTOAVALIAO

Aps estudar esta aula, consigo saber:


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1. O que caracteriza um gene ligado?
2. Quantos e quais arranjos um gene ligado pode ter?
3. Qual a funo do percentual de recombinao em um cruzamento para
a construo de um mapa gentico?
4. O que signica Interferncia?
5. O que signica Coincidncia?

PRXIMA AULA
Trataremos da herana ligada ao sexo e dos mecanismos de determi-
nao sexual

REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
Vdeos sugeridos
http://www.youtube.com/watch?v=f18U__0nBxQ&feature=PlayList&p
=36C97B9652CDB3E9&index=32

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