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OBJETIVOS
Objetivo General:
Estandarizar el mtodo analtico para la determinacin del mercurio total presente en peces.
Objetivos Especficos:
Materiales
Reactivos
Agua Desionizada
Agua Acidificada (HNO3 3% (v/v))
Agua Acidificada (HCl 5% (v/v))
cido Clorhdrico 37% (v/v) (Merck)
cido Ntrico 65% (v/v) (Merck)
cido Sulfrico 98% (v/v) (Merck)
Perxido de Hidrogeno 30% (v/v) (Merck)
Boro Hidruro de Sodio (Merck)
Hidrxido de Sodio (Merck)
Permanganato de Potasio 5% (p/v)
Solucin Stock de Mercurio 1000 g/ml en 2% de HNO3
Material de Referencia DORM 4
Material de Referencia BCR
Muestras liofilizadas de pescado
Equipos
METODOLOGA EXPERIMENTAL
Lavado de material
El lavado del material de trabajo para la digestin de las muestras se realiz utilizando una
solucin de cido clorhdrico (HCl) aproximadamente al 5%, en esta solucin se dej el
material durante 24 horas, posteriormente se lo saco y se enjuago con agua desionizada, se
dej secar.
Digestin en microondas
Se pesa la muestra de pescado a digerir (0.25g) en los vasos de digestin utilizando una
balanza analtica (Kern 0.0001) posteriormente se aade 2 ml de perxido de hidrogeno y
6 ml de cido ntrico (HNO3) al 65%, se introduce al microondas (Ethos 900, Milestone)
(Figura 1) y se procede con la digestin como se muestra en la Tabla 1.
Tabla 1:
Programa de digestin asistida por microondas Ethos 900/Milestone para muestras de pescado
3 5 250
4 5 400
5 5 650
Ventilacin 5
Figura 1:
Digestor microondas Ethos 900/ Milestone (CASA)
Digestin en plancha
La masa a digerir es la misma que en microondas (0.25g) que se pesa en los mismos tubos
de ensayo para evitar prdidas al pasar de un recipiente a otro, para esto se necesita la
ayuda de un matraz Erlenmeyer para que sostenga el tubo.
El programa que se sigue para la digestin completa de las muestras se presenta en la Tabla
2.
Tabla 2:
Programa para la digestin de muestras de pescado en plancha
Figura 2: Figura 3:
Muestras durante la digestin en plancha Muestras una vez terminada la digestin
Una variante que se puede hacer en la digestin en plancha es utilizar para la digestin una
mezcla acida de cido ntrico cido sulfrico (H2SO4 - HNO3)
Lectura de muestras
Todas las soluciones se prepararon con agua desionizada.
Para realizar la lectura de las muestras digeridas lo primero que se realizo fue una una curva
de calibracion para lo cual se utiliz una solucin stock de Hg de 1000 g/ml en 2% de
HNO3 (Perkin Elmer N # 9300133) (Figura 6) como solucin stock para preparar una
solucin intermedia de 100g/L utilizando agua desionizada para diluir, a partir de la cual
se prepararon los estndares de la curva de calibracin mediante las diluciones adecuadas.
Las diluciones se hicieron en matraces aforados de 100, 50, y 25 ml con una solucin al
3% v/v de HNO3 (HNO3 65% MERCK), en concentraciones de 5,10, 20 y 50 g/L a los
que posteriormente se adiciono 3 gotas de KMnO4 al 5% (p/v) (KMnO4 Merck) para
preservar el elemento en solucin. Para la operacin se utiliz una micropipeta de marca
Accumax con tips descartables.
Figura 6:
Espectrofotmetro (Aanalyst 700, Perkin Elmer), con
generador de hidruros (FIAS 100, Perkin Elmer)
Preparacin de reactivos
La solucin transportadora fue preparada con 7.5mL de HCl 37% (Merck ) enrasados a un
volumen final de 500 mL con agua desionizada.
Una vez concluido con la preparacin de todo el material y los reactivos necesarios se
estandarizo los caudales en el espectrofotmetro tanto de la solucin reductora como
tambin de la solucin transportadora 5 y 10 ml/min, respectivamente. Inmediatamente se
prosigui con la lectura de las muestras estndar donde se ley la absorbancia en funcin
de la concentracin y de esta manera se obtiene la curva patrn.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Curva de Calibracin
0,7
0,6
0,5
Absorbanci
0,4
0,3
a
0,2
0,1
0
0 10 20 30 40 50 60
Conc. de Hg (ppb)
r = 0.999994
A = 0.00128
B = 0.01246
=
Tabla 4:
Valores de concentracin de las muestras
Concentracin de
Nmero Especie Cuenca Lugar
Hg [g/g]
Potamorhina
14 Madre de Dios Laguna Mentiroso 0,42
altamazonica/latior
Potamorhina
15 Madre de Dios Laguna Mentiroso 1,35
altamazonica/latior
Potamorhina
16 Madre de Dios Laguna Mentiroso 0,35
altamazonica/latior
Potamorhina
17 Madre de Dios Laguna Mentiroso 0,34
altamazonica/latior
Potamorhina
18 Madre de Dios Limon 0,07
altamazonica/latior
Potamorhina
19 Madre de Dios Limon 0,77
altamazonica/latior
Potamorhina
20 Beni Laguna Espejos 0,05
altamazonica/latior
Puede notarse que se presenta variacin en los niveles de concentracin de las muestras de
la misma especie, esto se da debido a muchos factores como la edad del pez, el tamao, el
peso, el lugar donde viven, etc.
Mylossoma duriventre Pacupeba 2,0 Herbvoro Laguna Mentiroso 2 0,07 -0,17 0,12
Pygocentrus nattereri Piraa roja 3,7 Piscvoro Beni 3 0,96 - 1,53 1,23
Schizodon fasciatus Boga 2,0 Herbvoro Arroyo San Miguel 1 0,16 0,16
Triportheus angulatus Sardina 2,7 Invertvoro Laguna Mentiroso 4 0,30 - 1,20 0,64
1,5
0,5
a a o b ja o
c
t
n
eb qu lin al ro ga na uy
la
Pa n p a a b u ru
a Bo rdi ic Ve
Be acu b b S S Sa Sim z
P Ta
m Sa i ra Pe
P
Especie
Puede notarse que las especies con mayor concentracin promedio de mercurio son
aquellas que tienen el nivel trfico mas alto (Carnvoras), y va bajando a medida que el
nivel trfico disminuye (Herbvoras), esto es debido a la bioacumulacin que se da en las
especies. Esto puede apreciarse mejor en la Figura 9, donde se muestra el aumento de la
concentracin promedio de Hg en funcin del nivel trfico para las especies del Ro Beni.
Figura 9:
Relacin entre el Nivel Trfico y la Concentracin de
Hg en peces del Ro Beni en la Cuenca Beni
1,4
4,5; 1,29
3,7; 1,23
1,2
1
Conc. de Hg
0,8
(ug/g)
0,6
3,1; 0,49
0,4
2,4; 0,28
0,2
0
2,4 2,9 3,4 3,9 4,4
Nivel Trfico
Ro Beni Nivel Permitido Nivel Mximo
Se observa que el 58% de las especies analizadas presentan valores promedio que exceden
el lmite permitido por la OMS, y que el 25% excede el lmite mximo. Esto indica que las
explotaciones mineras en la cuenca del Amazonas tiene un efecto altamente peligroso para
las especies que habitan estas aguas y para las poblaciones que viven de la pesca.
OBSERVACIONES
- Las primeras muestras que se digirieron fue las muestras estndar BCR Y DORM-4
los mismos que se digirieron completamente en el microondas sin embargo el
DORM-4 no digiri bien en plancha esto por la cantidad de grasa que tiene, por lo
que esto ayudo a separar los peces que seran digeridos tanto en plancha como en
microondas segn el nivel trfico y haciendo un estimacin que tan grasoso podra
ser.
- A toda las muestras antes de realizar la lectura se le aade tres gotas de KMnO4 , se
observ que para las muestras digeridas por microondas era suficiente las 3 gotas ya
que se apreciaba claramente el cambio de color, sin embargo en las muestras
digeridas en plancha no fue suficiente ya que no se not ningn cambio de color, en
algunos casos se le aadi hasta 12 gotas y recin se observ el cambio en mientras
que en otras muestras no se not ningn cambio, este tambin es un factor muy
importante para la lectura ya que se vio que a medida que se aade ms KMnO4 la
lectura se hace ms grande, esto es debido a que existe demasiada materia orgnica
que no fue digerida y en ella existe mercurio atrapado.
CONCLUSIONES
TUTOR:
Dra. Carla Oporto P.
ESTUDIANTES:
Flores Pardo Bruno Alexandre
Garnica Nieves Javiel
ASIGNATURA:
Modulo Experimental
Cochabamba - Bolivia