Teste rpido para diagnstico

Aula 3
de hepatite B
Princpio do teste VIKIA HBsAg

Os testes rpidos utilizados para triagem da infeco pelo vrus da hepatite B (HBV) baseiam-
se na tcnica de imunocromatografia de fluxo lateral, que permite a deteco do antgeno de
superfcie do HBV (HBsAg) no soro, plasma ou sangue total.

Os testes rpidos para deteco de HBsAg que so enviados aos estados e municpios pelo
Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais (DDAHV), so adquiridos atravs de processo
licitatrio. Em 2013, o kit VIKIA HBsAg foi o produto licitado (Figura 1) e, na medida em que
outros kits forem adquiridos, novas aulas sero includas nos cursos da Srie Telelab.

Figura 1 Kit Vikia

O VIKIA HBsAg um teste qualitativo de imunocromatografia de fluxo lateral para a pesquisa

do HBsAg circulante. baseado na associao de anticorpos monoclonais e policlonais contra o
HBsAg, permitindo a deteco dos principais subtipos circulantes do vrus B.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 1

O teste composto por um suporte que contm uma membrana de 1 - BSA-biotinilado um
nitrocelulose, uma rea (S) para colocao da amostra e tampo e conjugado composto de
outra (janela de leitura) para leitura do resultado. Entre as duas reas, albumina de soro bovino
(BSA) ligado a biotina.
na membrana de nitrocelulose, esto impregnados dois conjugados
constitudos por uma mistura de dois anticorpos monoclonais anti-HBs
ligados a microesferas de poliestireno de cor vermelha e um complexo
BSA-biotinilado1 ligado a microesferas de poliestireno de cor azul.

A amostra dispensada no poo designado por S (do ingls sample,

ou amostra, em portugus) e migra por capilaridade ao longo da
membrana de nitrocelulose. Se o HBsAg estiver presente na amostra, vai
formar um complexo antgeno-anticorpo com os anticorpos especficos
contra o antgeno de superfcie do vrus B (anti-HBs) presentes nas
microesferas vermelhas.

Os complexos antgenos-anticorpos migram ao longo da membrana e

ligam-se aos anticorpos anti-HBs, fixados na janela de leitura, na rea
de Teste (T), formando uma linha vermelha, visvel na membrana. O
princpio metodolgico do teste mostrado de maneira resumida na
Figura 2.

Ao mesmo tempo, o complexo BSA-biotinilado, ligado s microesferas

azuis impregnadas na membrana, migra com a amostra e liga-se ao
anticorpo antibiotina, imobilizado na rea de Controle (C), formando uma
linha azul visvel.

Figura 2 Princpo metodolgico do teste VIKIA HBsAg

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 2

 Composio do kit VIKIA HBsAg
e materiais complementares
Composio do kit VIKIA HBsAg
O conjunto diagnstico, apresentado na Figura 3, contm os elementos relacionados na sequncia
de 1 a 6.

Figura 3 - Elementos no kit HBsAg

O Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais da Secretaria de Vigilncia em Sade do

Ministrio da Sade (DDAHV) recomenda aos profissionais que realizam a coleta por puno
digital que utilizem o capilar fornecido juntamente aos kits distribudos pelo Ministrio da Sade
em vez das micropipetas de plstico contidas no envelope lacrado.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 3

 !
A micropipeta contida no envelope (item 2) no utilizada para coleta
de amostras com punao digital. Ela indicada para utilizao de
plasma, soro ou sangue total obtidos por puno venosa.

Embalagem
Na embalagem do kit, o fabricante utiliza alguns smbolos que necessitam de interpretao.
Observe, no quadro a seguir, o que cada um significa.

REF Referncia de catlogo

Fabricante

IVD Dispositivo mdico para diagnstico in vitro

Limites de temperatura

Prazo de validade

LOT Cdigo de lote

i Consultar as instrues de utilizao

Contedo suficiente para n testes

2 No reutilizar
Quadro 1 - Smbolos presentes na embalagem do kit HBsAg

!
Quando realizar o teste, registre o nmero do lote do kit no seu
protocolo de trabalho. Os dispositivos de teste, diluente e lancetas
apresentam nmeros de lote individuais, mas o nmero do lote
para registro o que est gravado na caixa.

JAMAIS UTILIZE TESTES FORA DO PRAZO DE VALIDADE

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 4

Materiais necessrios no fornecidos
Alm dos elementos fornecidos no kit, so necessrios os seguintes materiais para a execuo
do teste rpido:

Equipamentos de proteo individual (EPIs);

Equipamento para marcar tempo (cronmetro ou relgio);
lcool 70%;
Algodo ou gaze;
gua sanitria ou soluo de hipoclorito de sdio entre 2,0 a 2,5%;
Recipiente para descarte de material biolgico e perfurocortante.
Caneta tipo marcador para escrever no dispositivo de teste
Papel absorvente para forrar a rea onde sero feitos os testes rpidos

Cuidados e precaues para utilizao

O manuseio e execuo dos testes rpidos necessitam de alguns cuidados.

O teste exclusivo para diagnstico in vitro, e deve ser realizado por pessoas que tenham
participado de capacitao tcnica, presencial ou por meio de ensino a distncia.

Utilize os reagentes de cada kit at a data de validade definida pelo fabricante, estampada na parte
externa da embalagem. Quando acabar o dispositivo de teste ou qualquer reagente do kit, jogue
todo o restante fora em recipiente apropriado.

O dispositivo de teste descartvel, e ele deve ser conservado no envelope lacrado at o

momento da utilizao.

Para a manipulao do kit, devero ser adotadas todas as precaues que se aplicam aos
produtos potencialmente infecciosos, o que inclui no ingerir nem inalar tais produtos, bem como
descartar os seus componentes apenas em local apropriado.

! Todas as amostras devem ser consideradas potencialmente infectantes, e

devem ser manipuladas e descartadas de acordo com as precaues de
utilizao e descarte recomendadas no Brasil pela RDC/ANVISA n 306 de
07/12/2004 e suas atualizaes, ou em conformidade com a regulamentao
em vigor no pas de utilizao.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 5

 Condies de armazenamento
e estabilidade
Os componentes do kit permanecero estveis at a data de validade indicada nas respectivas
embalagens, se forem conservados nas condies exigidas, listadas a seguir:

Para uso exclusivo in vitro;

Utilizar at a data de validade;
Manter o dispositivo no envelope lacrado at a utilizao;
Proteger da umidade e da luz solar
Conservar o kit em temperatura entre 4 e 30C.

!
Os kits podem ser armazenados em geladeira (4 a 8C), mas
sempre na parte de baixo, para evitar que congelem, ou em
temperatura ambiente (armrios ou estantes), desde que dentro
da faixa recomendada pelo fabricante.

Caso no seja possvel controlar a temperatura do local de

armazenamento, os kits devem ser acondicionados em caixas
trmicas e retirados apenas na hora do uso.

Figura 4 Exemplos de
caixas trmicas disponveis
no mercado

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 6

 Coleta e preparao da amostra
Para realizar o teste rpido necessrio que a coleta da amostra seja feita respeitando as
recomendaes do fabricante. Essas recomendaes para uso correto do produto esto descritas
no folheto informativo que fornecido no kit. A coleta de amostra por puno digital realizada
com o auxlio de uma lanceta retrtil. A aspirao do sangue que brota na perfurao do dedo
deve ser feita por meio do tubo capilar. Desta forma, embora o kit Vikia inclua uma micropipeta
descartvel (indicada para utilizao de plasma, soro ou sangue total por puno venosa), o
DDAHV recomenda a utilizao do capilar fornecido em conjunto no kit.

A seguir, voc acompanhar uma instruo passo a passo para a realizao do teste para
deteco do HBsAg. Porm, antes de iniciar o teste, lembre-se de deixar os reagentes atingirem
a temperatura ambiente e, s ento, retire o dispositivo do envelope lacrado e coloque-o numa
superfcie plana, limpa, livre de vibraes e forrada com material absorvente.

1 Selecione o dedo para puno, higienize a rea com algodo embebido

em lcool 70% e faa a puno do dedo com o auxlio de uma lanceta
retrtil.

2 Recolha a amostra utilizando o tubo capilar. Mantenha o tubo capilar na

posio horizontal e recolha o sangue at atingir a marca preta do tubo
capilar, sem que haja a formao de bolhas de ar.

3 Em seguida, coloque o tubo capilar na posio vertical, tampe o orifcio

da frente com o dedo e, com a outra mo, aperte a extremidade do
capilar para dispensar todo o volume de sangue na rea do dispositivo
de teste indicada com um S. No permita a formao de bolhas de ar
no poo. Caso isso ocorra, repita o teste.

4 Imediatamente aps a adio da amostra, adicione uma gota da soluo

tampo na mesma rea (S) em que foi adicionada a amostra. No
permita a formao de bolhas de ar no poo. Caso isso ocorra, repita o
teste.

5 Acione o cronmetro e faa a primeira leitura do teste, em 15 minutos. Se o teste for reagente, o
resultado est definido. Se o teste for no reagente na primeira leitura, aguarde at 30 minutos.

! Evite a formao de bolhas durante a aspirao do sangue e tambm ao

adicionar a soluo tampo. Isso pode levar a erros no volume adicionado e a no
validao do teste.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 7

 Interpretao dos resultados

Aps realizar os procedimentos descritos no passo a passo, hora de fazer a interpretao dos
resultados. Primeiramente, espere o cronmetro marcar 15 minutos para ler o teste. Em caso de
amostra reagente, o resultado pode ser liberado. Na situao de amostra no reagente, aguarde
30 minutos aps a adio do diluente para liberar o resultado.

Resultado no reagente
Quando o resultado for no reagente, aparecer uma linha azul na rea de controle (C) e no
aparecer nenhuma linha na rea de teste (T) (Figura 5).

Figura 5 - Interpretao de resultado no reagente no kit Vikia

Resultado reagente
Quando o resultado for reagente (Figura 6), aparecero duas linhas distintas, uma de cor azul na
rea de Controle (C) e uma de cor vermelha na rea de Teste (T).

Figura 6 - Interpretao de resultado de teste reagente no kit Vikia

A linha vermelha poder apresentar variaes na intensidade da cor, porm, mesmo quando a
colorao que surgir tiver uma intensidade muito fraca, a amostra ser considerada reagente.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 8

Teste invlido
O teste inclui um sistema de controle interno de migrao representado por uma linha azul que
aparece na rea de controle (C).

Conforme indicado no folheto que contm as instrues de uso definidas pelo fabricante, essa
linha confirma que o teste foi corretamente executado e que o resultado obtido vlido.

Caso no aparea a linha azul na rea C no tempo determinado pelo fabricante para leitura do
resultado, ou seja, aps 30 minutos da adio do tampo, o teste no ser considerado vlido,
mesmo que a linha vermelha aparea na rea T (Figura 7).

Figura 7a Dispositivo apresentando um resultado Figura 7b Dispositivo apresentando um resultado de

de teste invlido no kit Vikia ausncia de linha na teste invlido no kit Vikia ausncia de linha na zona C
zona C e na zona T. e presena de linha na zona T.

Entre as causas provveis para a invalidao do teste esto o armazenamento inadequado dos
kits, volume insuficiente da amostra, volume incorreto do tampo e a execuo incorreta do teste.

Se o teste for invlido, leia novamente as instrues do fabricante e repita o teste com a utilizao
de um novo dispositivo.

!
Se o problema persistir, no utilize mais nenhum teste desse lote.

Guarde o kit com problema, informe ao DDAHV o ocorrido e entre em contato com a empresa
fornecedora do kit. Essa iniciativa muito importante para o acompanhamento da qualidade dos
testes e para que a empresa reponha o quantitativo de testes invlidos ao DDAHV.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 9

 2 - Pool de soro ou
Limitaes do teste pool de amostras, significa
misturar partes iguais de
diversas amostras. Por
exemplo: Fazer 1 mL de
um pool de 5 amostras de
O fabricante do teste Vikia orienta os usurios a respeito de limitaes soro significa misturar 0,2
que o produto apresenta e que devem ser levadas em considerao na mL de cada uma delas.
utilizao dos kits. Para concluir esta aula, confira a seguir algumas
dessas orientaes.

Um resultado no reagente no teste rpido no permite excluir

uma infeco pelo vrus da hepatite B.
O teste foi validado com soro, plasma e sangue total. Portanto,
no deve ser utilizado com outros lquidos biolgicos.
Pool de soro2 no deve ser utilizado.
O resultado do teste deve ser sempre interpretado em conjunto
com outras informaes clnicas disponveis.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 10

 Referncias

1. Milich D.R., Immune response to the hepatitis B virus infection, animal models, vaccination,
Viral Hepatitis 1997, 3, 63-103.

2. Hollinger F. B., Hepatitis B virus, in Fields Virology, Third Edition, Lippincott-Raven Publishers,
Philadelphia, 1996, 2739-2807.

3. Blumberg B. S., Alter H. J., Visnich S., A New Antigen in Leukemia Sera, JAMA, 1965, 191,
541-546.

4. Prince A. M., An antigen detected in blood during the incubation period of serum hepatitis, Proc
Natl Acad Sci USA, 1968, 60, 814-821.

5. BioMrieux. Manual de uso do kit Vikia HBsAg. Disponvel em: <http://www.biomerieux.com.

br/servlet/srt/bio/brazil/dynPage?doc=BRZ_CLN_PRD_G_PRD_CLN_76>. Acesso em: 02 de
set. de 2014.

Diagnstico das Hepatites Virais - Aula 3 11