BIOQUIMICA

ORIENTADA AL

ANALISIS CLINICO

Corresponde a las asignaturas

BIOQUMICA Y ANALTICAS II Y III
Luis Simes Telma Brich

CARRERA DE TECNICO EN ANALISIS CLINICOS

FACULTAD DE MEDICINA FUNDACION H.A.BARCELO

 Bioqumica

ndice

PARTE I BIOQUIMICA ...........................................................................................................7

CAPTULO I...............................................................................................................................11
La Qumica ....................................................................................................................................11
El reino de la Vida..........................................................................................................................11
Sistemas energticos......................................................................................................................17
Qumica orgnica...........................................................................................................................18
Particularidades de los compuestos
orgnicos e inorgnicos..................................................................................................................19
Sistemas Buffer..............................................................................................................................32
CAPITULO 2...............................................................................................................................53
Funciones de la qumica orgnica..................................................................................................53
CAPITULO 3 - ............................................................................................................................81
Glucidos.........................................................................................................................................81
CAPITULO 4...............................................................................................................................107
Lipidos...........................................................................................................................................107
CAPITULO 4...............................................................................................................................135
Aminocidos, peptidos y proteina..................................................................................................135
CAPITULO 5...............................................................................................................................165
Enzinas...........................................................................................................................................165
CAPITULO 6...............................................................................................................................171
Acidos nucleicos............................................................................................................................171
CAPITULO 7...............................................................................................................................185
Funciones y Objetivos Del Laboratorio Clinico............................................................................185
Etapas del proceso de Laboratorio Clnico....................................................................................186
Evaluacin y seleccin de mtodos...............................................................................................186
Tecnicas De Analisis De Laboratorio............................................................................................188
Tecnicas Analiticas Fotometricas...................................................................................................191
CAPITULO 8...............................................................................................................................203
Tecnicas Electroquimicas...............................................................................................................203
Electroforesis.................................................................................................................................207
Cromatografa................................................................................................................................210

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 Luis E. Simes

CAPITULO 9...............................................................................................................................229
Medio Interno.................................................................................................................................229
Electrolitos.....................................................................................................................................230
Metodologia ..................................................................................................................................231
Equilibrio Acidos Base (A-B)........................................................................................................231
Disturbios Clnicos Simples Del Estado Acido Base.....................................................................236
CAPITULO 10.............................................................................................................................241
Fsiologia y Funcin Renal.............................................................................................................241
Examen Fsico................................................................................................................................243
Examen Qumico...........................................................................................................................244
Excrecin De Los Productos Del Metabolismo Nitrogenado........................................................246
Fisiopatologa De La Funcin Renal.............................................................................................250
CAPITULO 11..............................................................................................................................253
Metabolismo De Glucidos.............................................................................................................253
Insulina...........................................................................................................................................254
Glucagn........................................................................................................................................256
Alteraciones Del Metabolismo De Los Hidratos De Carbono - Diabetes Mellitus (DM).............256
Tcnicas De Anlisis Para Valorar El Matabolismo De Los Glucidos..........................................258
CAPITULO 12.............................................................................................................................265
Bioquimica De Los Lpidos...........................................................................................................265
Metabolismo De Los Lpidos.........................................................................................................270
Interpretacin clnica De La Alteracin De Los Niveles De Lpidos Plasmaticos........................272
Tecnicas Analaticas.......................................................................................................................274
CAPITULO 13.............................................................................................................................289
Enzimas..........................................................................................................................................289
Enzimologa Diagnstica...............................................................................................................291
Mapa enzimtico tisular.................................................................................................................292
Determinacin De Niveles Sricos De Enzimas............................................................................293
Enzimas Cardacas.........................................................................................................................296
Enzimas Pancreaticas.....................................................................................................................301
Enzimas Hepaticas.........................................................................................................................303
CAPITULO 14.............................................................................................................................311
Sistema Endocrino.........................................................................................................................311
Hormonas.......................................................................................................................................313
Receptores hormonales..................................................................................................................314
Hipotlamo.....................................................................................................................................316
Hipofisis.........................................................................................................................................317

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 Bioqumica

CAPITULO 15.............................................................................................................................339
Liquidos De Derrame y LCR.........................................................................................................339
CAPITULO 16.............................................................................................................................351
Control De Calidad Interno De Procedimientos Analticos...........................................................351
Captulo 17....................................................................................................................................361
Especificaciones De Calidad Y Variabilidad Biolgica (VB) ......................................................361
CAPITULO 18.............................................................................................................................367
Validacin De Resultados..............................................................................................................367
CAPITULO 19.............................................................................................................................379
Sistema Informtico En El Laboratorio Clnico............................................................................379

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Luis E. Simes

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 Bioqumica

PARTE I

BIOQUIMICA

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Luis E. Simes

A Patricia, Antonella y Aldana

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 Bioqumica

Este libro est destinado a los alumnos que cursan la Carrera de Tcnico en Anlisis Clnicos de nuestra Facultad.
La primera parte se adapta a los contenidos mnimos de la asignatura Bioqumica. En razn de la fuerte co-
rrelacin vertical de contenidos que se verifica con la Asignatura Anlisis Clnicos II, es que se ha elaborado
la segunda parte del texto en consonancia con el programa vigente, articulando sus temticas coincidentes,
aunque reorientadas desde la teora hacia su aplicacin. Mientras la primera parte se enfoca al desarrollo de
los aspectos estructurales de la Bioqumica, necesarios para cimentar el conocimiento de los principales grupos
bio-inorgnicos, orgnicos y biolgicos comprometidos en este mbito del saber, la segunda se propone el de-
sarrollo de aspectos fisiopatolgicos, analticos e instrumentales fuertemente vinculados con las habilidades y
destrezas que el tcnico debe adquirir y desarrollar. Finalmente, en orden a la articulacin horizontal derivada
del proceso analtico, se desarrollan los captulos correspondientes a la etapa post-analtica, con la pretensin
de consolidar el cierre adecuado de la gestin operativa del Laboratorio de Anlisis Clnicos, atendiendo a
las pautas de excelencia y calidad requeridos por las normas jurdicas, los principios ticos y el compromiso de
cada gestor vinculado con las prcticas sanitarias, publicas y privadas atinentes a las responsabilidades y desa-
fos del equipo de salud, del cual el tcnico en Anlisis Clnicos es un actor esencial.

Quiero en esta breve sinopsis agradecer a nuestro Rector, Prof. Dr. Hctor Alejandro Barcel y al Vicerrector, Lic.
Axel Barcel, por apoyar esta edicin bibliogrfica como un smbolo concreto del cumplimiento de una meta
de nuestra Institucin Universitaria, cual es la de formar profesionales con capacitacin acadmica de exce-
lencia con fuerte compromiso tico-profesional. Este libro humildemente pretende ser un pequeo engranaje
que contribuya al sostenimiento y alcance de las metas y objetivos institucionales desarrollados exitosamente
durante ms de cuatro dcadas.

Debo en estos prrafos reconocer el trabajo de produccin de contenidos y amena redaccin de los captulos de
Anlisis Clnicos II y Anlisis Clnicos III desarrollado por la Docente de esas asignaturas, Dra. Telma Brich, quien
con gran dedicacin y exacta rigurosidad se encarg de desplegar los mejores recursos para que el conocimien-
to fluya hacia los alumnos de manera clara y atractiva, y con el entusiasmo con el que asume el cotidiano
desafo docente en nuestra universidad

En este texto tampoco podan faltar, como es habitual, los significativos aportes del Sr. Guido Breglia en el diseo
grfico de frmulas y figuras y del Sr. Omar Breglia en la produccin fotogrfica, quienes no escatimaron esfuer-
zos a la hora de completar con xito esta demandante tarea, con particular dedicacin y esmero.

Adems fue elocuente la colaboracin brindada por la Sra. Mara Emilia Censi, alumna de la Escuela de Ayudan-
tes de nuestra Carrera, en el trabajo de correccin de textos de los captulos de Bioqumica, trabajo al que se
aboc con entusiasmo y eficiencia manifiesta.

Agradezco al editor de este libro, In. Jorge Sarmiento de Editorial Universitas, por la responsabilidad con que afron-
ta cada nueva edicin, aportndonos su expertis en la materia, a la vez que brindando su particular orienta-
cin sobre las directrices necesarias para converger en un producto editorial de calidad.

Seguramente no ha estado a mi alcance evitar errores propios, por lo que gustoso agradecer todas las sugerencias
y correcciones, que de buena voluntad, el lector espontneamente quiera hacernos llegar, a fin de poder ser
salvadas en ediciones posteriores, y fundamentalmente para bien de nuestros estudiantes.

Mientras tanto espero que este libro ayude a que los alumnos y lectores, puedan avanzar, aunque sea en parte,
hacia la consecucin de sus metas.

Luis Simes

Buenos Aires, Febrero 2015

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 Bioqumica

CAPTULO I

PARTICULARIDADES DE LA QUMICA ORGNICA

LA QUMICA

La qumica conforma una unidad. Como ciencia que estudia la materia, se rige por leyes invariables que in-
cluyen a todas las sustancias qumicas. Sin embargo, la necesidad de organizar los conocimientos en el vasto
campo del saber que abarca, llev a hacer una primera divisin en ella: las qumicas inorgnica y orgnica.
Las leyes generales gobiernan todo el espectro de la qumica, pero sus particularidades estructurales y fun-
cionales permiten sustentar esa primera divisin prctica. Cuando alboreaba el siglo XIX, ya se saba que
las sustancias que constituan los compuestos vegetales y animales, posean un elemento comn en todas
ellas: El Carbono. Por eso la Qumica Orgnica recibe tambin el nombre de Qumica del Carbono. Para al-
gunos, la qumica del Carbono resultaba asimilable a Qumica de la vida. La clsica definicin de vida (nacer,
crecer, reproducirse y morir) encuentra a la luz de los conocimientos actuales, dificultades para incorporar
a todo los posibles mecanismos vitales insertos en esas caractersticas del estar vivo. El conjunto nacer,
crecer, reproducirse y morir, no se cumple siempre en todas las especies incluidas en cada uno de los reinos
vivos. Para encontrar una propiedad que pudiera conceptualizar el vitalismo, se propuso que un ser vivo era
aquel que pudiera evidenciar procesos y mecanismos bioqumicos: poseer biomolculas en su composicin,
participar en procesos metablicos y manifestar intercambios energticos, incursos todos ellos en procesos
fsicos, qumicos y biolgicos dinmicos; en sntesis, denotar procesos vitales activos, aunque no evidencien
las cuatro etapas del nacer, crecer, reproducirse y morir. Algunas bateras no siguen estas cuatro etapas
estrictamente y hay cristales inorgnicos que s lo hacen. No obstante, aun despus de lograda la primera
sntesis de una sustancia orgnica1, gran parte del mundo cientfico de finales del Siglo XIX, sigui pensan-
do en la existencia de un fluido vital que animaba lo inanimado. Toda forma de vida tal como la conocemos,
siempre muestra la presencia de carbono en su composicin. Las nuevas experiencias y evidencias, alejaron
rotundamente la teora del fluido vital. La transicin hacia el Siglo XX, trajo otros cambios paradigmticos en
la ciencia: el pasaje de la concepcin del energetismo, ampliamente sostenida a la sazn por las sociedades
cientficas europeas, hacia el atomismo, las teoras de la Relatividad de Einstein que sorprendieron al mun-
do y la intrusin de la mecnica cuntica en un mundo de la ciencia fsica preconformada bajo el diseo del
newtonismo, sacudieron intensamente preconceptos histricamente arraigados.

EL REINO DE LA VIDA

Luego de tratar de enfocar el concepto de vida, con el fin de involucrar a todos los organismos vivientes a
pesar de las muy particulares diferencias que puedan existir entre ellos, se sintetiza en las dinmicas vitales
que son abarcadas por el estudio de la Bioqumica.

La evolucin ha evidenciado que ciertas estructuras esenciales se modifican poco, (se encuentran muy con-
servadas) ya que conllevan mecanismos fundamentales comunes en gran parte de los organismos, sean
plantas, bacterias o animales, y un cambio sobre los mismos puede derivar en seres no viables.

1 1928. Friedrich Wler sintetiza la urea.

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 Luis E. Simes

Existen tres dominios muy marcados en la naturaleza:

a. Arqueobacterias

b. Eubacterias

c. Eucariotas

Desde el punto de vista evolutivo, las arqueobacterias son las estructuras ms antiguas, pudiendo haber
dado origen a los reinos de eubacterias y eucariotas. Por el hecho de haber sido descubiertas ms reciente-
mente, las arqueobacterias son menos conocidas en sus procesos y estructuras. Constituyen formas de vida
adaptadas a ambientes demandantes con alta salinidad, elevadas temperaturas, grandes presiones o pH
extremos. Las eubacterias abarcan el gran dominio de microorganismos procariotas (gram positivos, gram
negativos, cido alcohol resistentes, ciano y flavobacterias, etc.). Los dominios de las arqueo y las eu bac-
terias parecen haber divergido muy tempranamente en la evolucin, diferencindose en sus mecanismos y
adaptaciones al entorno.

Este enorme grupo de bacterias se particularizan en subgrupos que se relacionan con el desarrollo en am-
bientes con oxgeno o carentes de l (aerobios o anaerobios), por su fuente de energa, (foto o quimiotro-
fo, segn utilicen compuestos qumicos o luz solar u otras fuentes electromagnticas), auto o hetertrofos
segn su aporte de carbono provenga del CO2 o de compuestos qumicos. stos ltimos pueden ser lito u
organotrofos, segn su fuente provenga de minerales o de compuestos orgnicos.

Ncleo No Procariota
Si Eucariota
Hbitat Ambientes extremos Arqueobacterias
Ambientes normales Eubacterias
N clulas Una Unicelulares
Elevado Pluricelulares
Tamao No visible a simple Microscpicos y ultramicroscpi-
vista cos
Visibles para el ojo Macroscpicos
humano
Si Aerbicos
No Anaerobios estrictos
Oxgeno Parcial Facultativos
Luz Radiacin Fototrofo

Fuente de Electromagntica
Energa Compuestos qumicos CO2 Autotrofos
Compues- Hetero- Inorgnicos Litotrofos
Quimiotro- tos qumi- trofos Orgnicos Organotrofos
fos cos

Clula

Todas las estructuras agrupadas en los tres dominios mencionados, poseen una unidad funcio-
nal denominada clula. La clula se clasifica en dos grandes grupos, de acuerdo a la ausencia

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 Bioqumica

o presencia de ncleo: procariota y eucariota respectivamente. Adems las estructuras vitales

pueden ser uni o multicelulares de acuerdo a que se desenvuelvan aisladamente o que se inte-
gren en organizaciones supracelulares complejas. A pesar de la gran variedad de organismos
existentes, la gran mayora de ellos pertenecen al reino de los seres microscpicos. Estn
formados por una pequesima masa gelatinosa, rodeada por una membrana. Justamente esa
es la mnima porcin capaz de mostrar las caractersticas que definen a los fenmenos vitales.
Estos representantes de la vida microscpica son los seres unicelulares como mencionamos,
mientras que otras especies, mostrarn un agrupamiento celular en tejido.

Las clulas muestran una organizacin estructural interna (miofibrillas del citoesqueleto y organelas) con
subespecializacin funcional. Esta organizacin implica tanto la presencia de organelas con funciones par-
ticulares y regulacin de acciones necesarias para la sobrevida y un grado de actividad de sus membranas
que las diferencian del mero concepto de envoltorio para cumplir muy activas funciones vitales.

Las clulas ms simples poseen una membrana externa que envuelve al protoplasma (Procariotas).Otras, las
eucariotas, ms refinadas, exhiben un pequeo ncleo rodeado por una membrana semejante a la externa,
denominada membrana nuclear. Las clulas vegetales adems poseen por fuera de la membrana celular
una estructura de mayor rigidez denominada pared celular. Segn las teoras actuales la gran diversidad de
clulas que existe, provienen de una nica clula inicial. Considerando que la edad de la tierra es de 4.500
millones de aos, en 700 millones de aos se dieron las condiciones para que algunas molculas autorepli-
cantes de cido ribonucleico, ARN, se rodearan de molculas lipdicas que originaron la primera organiza-
cin articulada.

Las diferentes clulas cuentan con estructuras organizadas, ms o menos smiles, asociaciones moleculares
y supramoleculares, compuestos biolgicos macro, unidades funcionales, enzimas, molculas intermedia-
rias en los sistemas energticos, adems de sustancias inorgnicas, todas imprescindibles para el manteni-
miento de las funciones de supervivencia de cada clula.

La membrana plasmtica es una doble capa lipdica, constituida por fosfolpidos que orientan sus colas no
polares hacia el interior de esa doble capa. Adems de los fosfolpidos incluye colesterol, protenas de mem-
brana, glicolpidos que cumplen funciones de receptores, de sealizacin, etc. Los principales fosfolpidos
son la fosfatidil colina, en la capa externa, y la fosfatidil etanol amina, la fosfatidil serina y el fosfatidil ino-
sitol, en la interna. La esfingomielina, y los glicolpidos, tienen una orientacin preferente hacia el interior
celular y, mientras que el colesterol muestra su presencia en ambas capas.

Las protenas que integran la membrana tienen movilidad para poder cumplir con sus funciones, constituyen-
do un mosaico fluido2. Estas protenas dotan a la membrana de una estructura tanto de sostn como funcio-
nal a travs de protenas integrales que recorren toda la membrana, y otras en menor proporcin que aso-
man de la bicapa. Este movimiento es lateral, pero queda regulado por la estructura y la presencia de otras
protenas, conformando dominios y regiones. La estructura de bicapa fluida se mantiene merced a enlaces
no covalentes que se establecen entre las molculas en sus ambientes polares y no polares. Las interacciones
de puente hidrgeno e inicas actan en los ambientes polares, mientras que las fuerzas de Van der Waals
determinan interacciones polares o no polares, como las fuerzas de London en ambientes hidrofbicos.

Adems de fosfolpidos y protenas la membrana posee, aunque en menor cantidad, glcidos constituyen-
tes del glicoclix, conformando un perfil de marcacin de las rutas de sealizacin intra e intercelular.

La membrana interviene en procesos de intercambio de molculas, a travs de los siguientes mecanismos:

2 Modelo de Singer y Nicholson.1972

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 Luis E. Simes

- Difusin pasiva: La realizan las molculas pequeas a travs de espacios de membrana, o

canales. Este mecanismo es utilizado por el agua y molculas pequeas. Si son mayores, la
facilidad en el pasaje est determinada por la mayor liposolubilidad de la sustancia: macromo-
lculas hidrofbicas. En el caso del agua, si se produce una diferencia de osmolaridad entre
ambos lados de la membrana, el agua pasa por accin de la presin osmtica desde el am-
biente menos concentrado al ms concentrado, procurando igualar las actividades qumicas de
ambos espacios, concentrando al primero y diluyendo al segundo equivalentemente hasta que
se igualan. Cuando la sustancia interviniente en el gradiente osmolar, posee carga elctrica,
(como las protenas que se cargan negativamente a pH fisiolgico), la presin osmtica se
denomina onctica.

- Difusin facilitada: Las molculas hidroflicas que no pueden utilizar el mecanismo anterior
en razn de su insolubilidad en compuestos orgnicos, utilizan protenas especficas (permea-
sas) o canales inicos.

- Transporte activo: Se debe utilizar energa para efectivizar el desplazamiento de las molculas
contra gradiente de concentracin. El transporte puede ser unidireccional o bidireccional. Por
ejemplo, la bomba sodio/potasio, transporta sodio hacia el exterior y potasio hacia el interior
celular, contra gradiente y utilizando energa ATPasa.
Difusin smosis
El soluto atraviesa membrana El soluto no atraviesa membrana
La actividad qumica se iguala por pasaje de La actividad qumica se iguala por pasaje de sol-
soluto vente
El soluto pasa de la zona ms concentrada a la El solvente pasa de la zona ms diluida a la ms
ms diluida concentrada

La membrana posee funcin de endocitosis, incorporando partculas mediante invaginaciones de la

membrana que forma vesculas hacia el interior celular. Cuando el material incorporado es una solucin, la
actividad se denomina pinocitosis. Si en cambio se procesan partculas mayores, como grmenes, alergenos
o virus, ser un proceso de fagocitosis. Estas molculas incorporadas se distribuyen en los canales reticulares
para ser conducidas hacia la membrana o destruidas en los lisosomas

La exocitosis es el proceso inverso, mediante el cual la clula transporta al exterior ciertas sustancias.
Las vesculas conteniendo el material a exportar, se fusionan con la membrana celular, abrindose al exterior.
Puede ser espontnea o dirigida, mediada por receptor, generalmente dependiente de calcio, que origina una
accin especfica frente a estructuras reconocibles. Los neurotransmisores son exportados por este sistema.

Las clulas se relacionan entre s, organizadamente para constituir tejidos, mediante molculas de adhe-
sin, de cuatro tipos: caderinas, selectinas, integrinas e inmunoglobulinas. Las clulas pueden intercambiar
material con sus vecinas mediante canales llamados uniones gap.

Por otra parte, la presencia de receptores permite que la clula interaccione con molculas especficas y
que pueda seguir un curso de accin mediante informacin mediatizada por estas estructuras intermedias.

Receptores:

Los receptores son estructuras capaces de interactuar con otras molculas, libres o acopladas a clulas,
que actan como ligandos. De acuerdo con la energa de interaccin comprometida en el proceso entre ambas
estructuras, ser la afinidad que se manifieste. Esta vinculacin receptor- ligando origina una serie de cambios
conformacionales en la clula portadora. En ciertos casos se produce una endocitosis ligando-receptor. Este
mecanismo permite que la clula determine una serie de comportamientos que intensifiquen o que inhiban
ciertas respuestas. Las seales se disparan por accin del ligando, o bien por la generacin de molculas co-
munes en estos procesos, denominados segundos mensajeros (AMPc, Ca++, IP3, GPS).

14
 Bioqumica

Estos segundos mensajeros, en general desencadenan dos mecanismos de respuesta:

a) Activacin de una enzima interna de la membrana como la adenilato ciclasa o guanilato ciclasa que
se ubican en el interior de la membrana. Cuando un ligando las activa se incrementan los niveles de
AMPc o GMPc, que producen modificaciones sobre el metabolismo celular. Este mecanismo activa
ciertas enzimas a travs de un proceso de fosoforilacin por kinasas especficas.

b) Receptores acoplados a canales de Ca++: el ligando produce modificaciones que facilitan la entrada
de Calcio a la clula o bien su liberacin desde compartimentos intracelulares. El calcio puede actuar
directamente sobre sistemas enzimticos, o a travs de la protena calmodulina, activada.

Tomado de scs, Illinois.com

Ncleo: es la organela ms notable de las clulas eucariotas, y contiene en su interior el material gentico.
En l se realiza la replicacin del ADN y la sntesis de ARN mensajero, como as tambin el procesamiento
de ste. El ncleo posee dos membranas (interna y externa) que se unen en el polo nuclear. ste es el lugar
de pasaje de materiales entre ncleo y citoplasma. Las molculas chicas lo atraviesan, pero las grandes re-
quieren de protenas transportadoras. El material gentico en interfase se halla fuertemente condensado en
cromosomas. Posee un nuclolo que es el lugar de ensamblaje de ARN ribosomal y de los ribosomas.

Retculo endoplsmico: es un sistema de membranas relacionado con el ncleo que recorre el citoplasma.
Se denomina rugoso cuando integra a su estructura a los ribosomas, ocupndose de funciones relacionadas
con protenas. Tanto interviene en el transporte de macro molculas, como en la marcacin, plegamiento,
procesamiento y exportacin de protenas. En el caso del Retculo endoplsmico liso, sus funciones se rela-
cionan con la exportacin de lpidos. Los ribosomas son estructuras que presentan diferente masa segn el
tipo de clula. Su magnitud se expresa en unidades S3 (que determina los coeficientes de las partculas en
los procesos de ultracentrifugacin, conforme su densidad). Estn conformados por protenas y ARN riboso-
mal. En las clulas eucariotas presenta dos unidades estructurales, la mayor de 40 y la menor de 20 unida-
des S. Cada una de ellas est conformada por diferentes ARN ribosomales.

Mitocondrias: son organelas rodeadas por doble membrana, encargadas de las funciones fundamentalmen-
te energticas. Se relacionan con la produccin de energa y con el funcionamiento de la cadena respiratoria
por transporte de electrones entre molculas intermediarias. Poseen un ADN propio, circular, de aproxi-
madamente 15.000 pares de base. Actualmente se consideran que se originaron en estado libre y que en
algn momento de la evolucin se integraron al citoplasma de otra clula, en un proceso de simbiosis que
favorecera la situacin de ambas unidades.

Complejo de Golgi: es un sistema de sacos, con estructura de membrana, relacionado con el procesamiento
de macromolculas. Participa activamente del procesamiento de protenas, lpidos y glcidos. Existe en esta
estructura una zona cis donde se procesan y pasan a una zona trans donde se almacenan y se distribuyen
mediante el retculo endoplsmico.

Lisosomas y Peroxisomas: Son sistemas vesiculares cerrados por membrana nica que contienen enzimas.
Los primeros poseen pH bajo y enzimas para la digestin molecular como las hidrolasas cidas que llegan
desde el aparato de Golgi. Los peroxisomas se relacionan con sistemas oxidativos, principalmente asociados
al metabolismo de lpidos.

3 Por Theodor Svedberg, quien desarroll la ultracentrfuga analtica.

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 Luis E. Simes

Citoesqueleto: es una estructura interna, muy compleja y activa, que no slo se encarga de mantener la forma
de la clula, sino tambin de provocar sus movimientos (citoquinesis). Tiene tres complejos principales: a)
El primero est conformado por actina polimerizada (cabeza-cola), constituyendo una hlice. Se encuentra
interrelacionado con protenas que intervienen en los procesos de contraccin, fagocitosis y modificaciones
de la forma celular. La actina es una protena motora cuya energa es aportada por la hidrlisis del ATP y que
es esencial en los procesos de contraccin muscular. Trabaja en asociacin con otra protena, la miosina. b)
La otra estructura est integrada por los filamentos intermedios, que estn asociados a unas 50 protenas
diferentes que no participan de los movimientos, sino que constituyen el andamiaje que sostiene a la clula.
Se apoyan en la membrana nuclear y se dirigen hacia la membrana citoplasmtica. C) El tercer componente
lo constituyen los microtbulos, formados por polimerizacin reversible de la protena tubulina. Se extienden
desde un centro llamado centrosoma y estn asociados a las modificaciones de la clula, reorganizndose
en la etapa de mitosis, estructurando al huso mittico para un proceso muy delicado, como lo es la segre-
gacin de los cromosomas; adems conforman axones, dendritas, flagelos y cilias Los movimientos estn
fundamentados en la actividad de las protenas dinesinas en una direccin y las quinesinas, en la opuesta.
De esta articulacin direccional de las protenas se organizan los movimientos celulares basados en accin de
los microtbulos.

Tomado de eltamiz.com

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 Bioqumica

La diferencia entre las clulas procariotas y eucariotas4 se sintetizan en el siguiente cuadro:

Particularidad Clula Procariota Clula Eucariota

Organismos Bacteria Hongos, le-
vaduras,
Tamao Hasta 10 De 10
100 m
Ncleo No Si
Vacuolas No Si
Mitocondrias No Si
Ribosomas 70 s 80 s
Aparato de No Si
Golgi
Retculo en- No Si
doplsmico
Citoesqueleto No si
ADN Bicatenario Bicatenario
circular empaquetado
en cromoso-
ma
ARN mensa- Sin madu- Con madura-
jero racin cin
Replicacin y Citoplas- Nuclear
traduccin mtica
Metabolismo Anaerobio Aerobio
- aerobio
Reproduccin Asexuada Mitosis
binaria meiosis

SISTEMAS ENERGTICOS

Existen dos tendencias universales a las cuales estn sometidos los sistemas en el universo: la energa y la
entropa. La energa es la capacidad de realizar trabajo, y existe en numerosas variedades interconvertibles:
qumica, elctrica, cintica, potencial, etc. Cuando un vegetal fotosinttico incorpora la energa lumnica del
sol, sintetiza compuestos orgnicos, los cuales proveen energa qumica; es decir que se verific una inter
transformacin energtica: de lumnica a qumica. Este fenmeno es explicado por la primera ley de la ter-
modinmica. La segunda ley se ocupa de la entropa. La entropa es el grado de desorden de un sistema:
as, un vaso sano tiene baja entropa, pues sus molculas estn ordenadas, y se conoce la regularidad de
su distribucin. En cambio al romperse, sus molculas se desordenan y entonces su entropa aumenta. Un
mazo de cartas ordenado, tiene baja entropa. Es factible conocer que despus de un 5 vendr un 6 y que
ese 5 estaba antecedido por un 4. Cuando la informacin es alta por que el sistema est ordenado, la en-
tropa ser baja. Cuando mezclemos el mazo de naipes, estaremos aumentando el desorden y la desinfor-
macin y en consecuencia ahora la entropa del mazo aumenta. La tendencia espontnea de los sistemas,
explicada por la Energa libre de Gibbs, ocurre hacia estados de menor energa posible, y hacia la mxima
entropa. Entonces, ordenar un sistema, que naturalmente se desordena, requiere energa, y esta es una
intervencin no es espontnea.

4 En razn del enfoque de nuestro estudio no se incluyen las caractersticas particulares de las clulas vegetales. Algunas funciones se
encuentran simplificadas.

17
 Luis E. Simes

La vida tiene un alto grado de organizacin, por lo cual su entropa ser mnima. Por ello, mantener la es-
tructura y dinmicas vitales requieren de un elevado uso de energa que debe ser aportada desde el exte-
rior.

Resulta esencial para el mantenimiento funcional y la supervivencia de las clulas, aisladas u organizadas,
una estricta regulacin de la energa que soporte todos los caminos metablicos esenciales, que conllevan
al orden metablico y a la disminucin de la entropa.

La energa captada como qumica o lumnica, debe ser transformada para adaptarla a un formato aprove-
chable por los sistemas celulares: metabolismo, movimiento, contraccin, fagocitosis, etc. Cualquier sistema
de transformacin de la energa conducir a que una cierta fraccin de la misma se trasforme en calor. El ca-
lor no es til para convertirse en trabajo cuando el sistema es isotrmico. Las transformaciones que realiza
la clula son altamente eficientes y muy especficas, es decir que se orientan hacia una mecnica de elevada
utilidad y especificidad. Las diferentes etapas metablicas se acoplan de manera tal que hacen al sistema
altamente eficiente, amparadas en un paradigma de mximo rendimiento a costa de baja utilizacin de
recursos.

Esta sistemtica acoplada ofrece resultados ms eficientes y conservativos, regulacin del entorno, mejores
rendimientos oxidativos y una sostenida proteccin del sistema.

QUMICA ORGNICA

Como expresramos, la qumica orgnica es una divisin dentro de la qumica , que abarca un gran nmero
de componentes, los que cumplen las leyes de la qumica, aunque presentan particularidades que permiten
diferenciarlas de los compuestos propios del reino mineral : la qumica inorgnica.

El mundo de la qumica orgnica presenta un extraordinario nmero de compuestos merced a las peculia-
res propiedades del tomo de carbono, capaz de originar mltiples configuraciones en tres dimensiones y
componentes que conforman un billonario e inabarcable catlogo. A pesar de tan enorme diversidad, son
muy pocos los elementos de la tabla peridica que entran en su composicin. De los ms de 100 elementos
conocidos, redondean el nmero de 20 aquellos comunes en el mundo orgnico. A estos elementos que
forman parte de los sistemas biolgicos y que en general se encuentran en concentraciones mayores que
las que poseen en el ambiente, se los denomina organognicos y ms usualmente bioelementos.

Como dijimos, el Carbono es el gran representante de la qumica orgnica, gracias a su capacidad de unirse
consigo mismo constituyendo desde pequeas hasta enormes cadenas, ciclos y esferas5. Los dos grandes
acompaantes del Carbono son el Hidrgeno, para formar hidrocarburos (compuestos secundarios) y el Ox-
geno, tro que conformar compuestos ternarios como los alcoholes, cetonas, cidos orgnicos, glcidos y
muchas grasas y metabolitos intermedios. Aparece despus un cuarto integrante de este privilegiado grupo:
el Nitrgeno, necesario para constituir sustancias cuaternarias: los compuestos nitrogenados.

Si se integran dos nuevos elementos a ste cuarteto, se tendr por completado el grupo biognico principal:
al incorporar al Fsforo, sern posibles los cidos nucleicos, mientras que el Azufre, componente de tres
aminocidos (cistena, treonina y cistina), contribuye a la conformacin de gran cantidad de protenas6. Es-
tos seis elementos, C, H, O, N, P y S se agrupan bajo la denominacin de Bioelementos Primarios.

5 En estos aspectos, aunque ms limitadamente, el Silicio presenta esa particularidad, siendo potencialmente capaz de originar una qumi-
ca del Silicio y Una vida basada en el Silicio?
6 Cistina, Cistena y Metionina

18
 Bioqumica

Otros elementos fundamentales a la hora de conformar sustancias orgnicas, son: Cloro, Sodio, Potasio, Cal-
cio, Magnesio, los que se encuentran en forma inica (electrolitos), y clasificados en el grupo de los bioele-
mentos secundarios.
Otros tomos que resultan esenciales para el funcionamiento de los sistemas biolgicos, caracterizados por
encontrarse en muy baja concentracin en esos ambientes (trazas), son denominados oligoelementos. Entre
ellos se distinguen los metales de transicin Manganeso, Molibdeno, Cinc, Selenio, Vanadio y Cromo. En
general, todos los bioelementos poseen bajo peso molecular ya que en principio los elementos de alta masa
pueden ser causantes de patologas al provocar alteraciones celulares e histolgicas, por saturacin enzim-
tica y competitividad con la consecuente alteracin de algunas vas metablicas normales7. En la tabla que
se observa a continuacin, se mencionan a los principales elementos que actan en los sistemas orgnicos
Bioelementos y sus Pesos Atmicos
PRIMARIOS C (12) H (1) O (16) N (14) P (31) S (32)
SECUNDARIOS Cl (36) Na (23) K (39) Ca (40) Mg (24) Fe (56) I (127)
Mn(55) B(11) Br (80) Si(28) Cu(64) F(19) Zn(65)
OLIGOELEMENTOS Mo(96) V(51) Co(59) Se(79) Cr(52) Sn(119) Ni 59)

PARTICULARIDADES DE LOS COMPUESTOS

ORGNICOS E INORGNICOS.
A pesar de la gran variabilidad de compuestos qumicos conocidos, existe una serie de caractersticas que permiten
simplificar la clasificacin de los diversos compuestos naturales y sintticos en sustancias orgnicas e inorgnicas.
Esas particularidades se sintetizan en la tabla siguiente:

Caracterstica Compuestos Inorg- Compuestos Orgni-

nicos cos
Elementos Cualquiera excep- Bioelementos
to los gases inertes
(Grupo VIII)
Cantidad de com- Menor de 500.000 Millones
puestos

Enlaces prevalentes Inicos Covalentes

Velocidad de reaccin Alta Baja

Comportamiento Termoestables Termolbiles

frente a la Tempera-
tura
Solubilidad Hidrosolubles Liposolubles

Estabilidad Elevada Baja

7 Los metales pesados como el mercurio y el plomo se comportan como txicos (HIdrargismo y Saturnismo)

19
 Luis E. Simes

El agua

El mundo y los organismos vivientes estn basados fundamentalmente en esta molcula de excepciona-
les propiedades que la coronan en un puesto de singular jerarqua entre todas las sustancias conocidas. El
agua, por definicin y accin es el solvente universal para los sistemas acuosos, o hidrosolubles. El principio
qumico que expresa igual disuelve a igual, agrupa a las sustancias en dos grandes campos: el de las sus-
tancias hidrosolubles y la de las sustancias orgnicas o liposolubles.

Las sustancias inorgnicas y polares tienen tendencia a disolverse en agua, mientras que las orgnicas, y
fundamentalmente lipdicas se disuelven en solventes orgnicos o lipoflicos. Por esto, clulas conformadas
por gran cantidad de agua, y clulas baadas en el lquido intersticial acuoso, determinan que el organismo
humano denote una elevada proporcin de agua en su constitucin, pero que debe convivir e interactuar
eficazmente con sustancias liposolubles (Hidrofbicas).

Distribucin del agua corporal

El agua corporal no se encuentra uniformemente distribuida en el organismo, sino que acta en tres com-
partimentos separados principales:
Intracelular ; Intersticial ; Intravascular

Esta distribucin depende de la condicin fsica y de salud, del gnero y de la edad entre otras variables con-
dicionantes. Para un adulto normal de sexo masculino, el agua comprende aproximadamente el 60% de su
peso corporal. En general esa proporcin es menor en las mujeres y en los adultos mayores y ms elevada en
nios. Hay una tendencia a la deshidratacin que aumenta con la edad, situacin frecuente en las personas
mayores. Ahora bien, esa masa de agua no es cuantitativamente equivalente en cada espacio. Se sabe que
aproximadamente, del total, un 40% es intracelular; el 20% restante constituye el fluido extracelular, que
est dividido a su vez en dos espacios: el intravascular, correspondiente a los fluidos contenidos en el sistema
circulatorio y linftico y por fuera de esos sistemas se encuentra el lquido extravascular, o intersticial. A este
ltimo espacio, tambin se lo denomina medio interno, ya que es el que baa a todas las clulas del organis-
mo, lo que le permite evidenciar las condiciones generales del organismo, y consecuentemente el estado de
la homeostasis.

Intracelular (40%)

Agua corporal (60%)

Intravascular (5%)

Extracelular (20%

Intersticial ( 15%)

Estas proporciones son orientativas; varan con la edad y el gnero: los lactantes tienen menos del 30%
de agua extracelular, mientras que en el nio esa proporcin aumenta hasta un 75%, para disminuir en el
anciano. En general, la deshidratacin del anciano disminuye su agua intracelular, aumentando el lquido
extracelular, que se manifiesta con la aparicin de edemas. El ingreso y egreso de agua se encuentran regu-
lados con el fin de mantener la proporcionalidad de los diferentes sectores y la osmolaridad del medio.

20
 Bioqumica

Propiedades del Agua

El agua posee propiedades muy particulares. Por su condicin de solvente universal para los compuestos
inorgnicos, juega en el organismo un rol vital esencial. Su carcter dipolar es inherente a esas particulares
caractersticas y propiedades.

El dipolo molecular se origina por la forma estructural del agua (ngulos de enlace de 104), y por el gra-
diente elctrico que se establece entre los tomos electropositivos (Hidrgeno) con electronegativo (Ox-
geno). Esto determina que las molculas de agua se comporten como pequeos imanes, que generan inte-
racciones atractivas entre las molculas del sistema. Este tipo de interaccin inter molecular, se denomina
puente hidrgeno, y es importante, no slo para dotar de sus particulares caractersticas al agua, sino tam-
bin que resulta trascendental en algunas molculas biolgicas, a las que estabiliza y sostiene en sus estruc-
turas funcionales, como ocurre en el caso de las protenas y de los cidos nucleicos, por citar slo algunos.

La distribucin de carga dentro de cada molcula genera una polaridad que ejerce una
atraccin entre las zonas con densidad elctrica negativa de una con las de densidad positi-
va de otra, que se denominan interaccin de puente hidrgeno1.

Si se compara la molcula de agua con otras molculas de composicin qumica semejante, como anhdridos
o hidruros, se pone de manifiesto que el punto de ebullicin del agua, debera ser mucho ms bajo. Si se diera
esa situacin, el agua hervira aproximadamente a 30 C, lo que generara una gran masa de vapor en el
planeta, a la manera de las nubes de venus, por lo que no se daran las condiciones adecuadas para conce-
bir la vida tal como la conocemos. La particular distribucin de cargas de su molcula, genera interacciones
atractivas (que aunque dbiles en la individualidad, resultan fuertes en la multiplicidad) que elevan su punto
de ebullicin a 100C cuando la presin es de 1 atm. facilitando su presencia global como sustancia lquida.
Otra particular propiedad del agua la constituye su existencia en los tres estados de la materia: vapor de agua,
hielo y agua lquida. Esta presencia trifsica origina a ciertas condiciones de temperatura y presin el punto
triple del agua, que son las condiciones en las cuales el agua convive en sus tres estados de fase.

21
 Luis E. Simes

218 PC

Hielo Agua

PT Vapor

0 200 400 K

El punto crtico establece el lmite por encima del cual el agua lquida puede convertirse en gas. Por debajo
de l, la transformacin se produce de lquido a vapor, que es proceso que se produce en las condiciones
normales. El punto triple ocurre a bajas temperaturas y presiones (cercano a 0 C y 0,006 atm. respectiva-
mente Por el contrario el punto crtico se verifica a elevadas presiones y temperaturas (673 K y 218 atm.)

Otra caracterstica que distingue al agua de otras sustancias, es su densidad. Como bien se sabe, la densidad
es la masa de una sustancia por unidad de volumen; en general la densidad disminuye cuando aumenta
la temperatura, ya que se incrementa el volumen para la misma masa. La particularidad del agua es que
existe un intervalo de temperaturas en las que es menos densa a menor temperatura. Efectivamente, todos
hemos observado el fenmeno por el cual el hielo flota en el agua lquida. Esto ocurre a diferencia de otras
sustancias donde el slido por ser ms denso tiende a hundirse en su lquido. En el caso del agua, densidad
del hielo es menor (0,97 g/ml) que la del agua a 4C. (1 g/ml). Esto hace que el hielo se dilate cuando baja
de 4C y es por ello que una botella con agua revienta cuando se congela.

Las fuerzas de atraccin de las molculas determinan al menos tres de las propiedades fundamentales de
los lquidos, de los cuales el agua es un exponente muy particular: la viscosidad, la tensin superficial y la
presin de vapor. Adems, por su elevado calor especfico al agua demuestra una gran capacidad termorre-
guladora.

La viscosidad es el grado de fluidez que posee un lquido y obedece a las fuerzas de rozamiento que se pro-
ducen entre los diferentes ordenamientos o capas moleculares de cada sustancia. Cuanto ms rozamiento
exista entre ellas, menos se desplazar una sobre otra, y en consecuencia, mayor ser la viscosidad. Si se
incrementa la temperatura de un fluido, la energa cintica de sus molculas aumentar, lo que facilitar el
desplazamiento interno, disminuyendo la resistencia y aumentando la fluidez: la viscosidad es inversamente
proporcional a la temperatura.

En la vida diaria, estamos acostumbrados a percibir la distinta viscosidad que tienen los fluidos utilizados
cotidianamente: nos damos cuenta que el agua es menos viscosa que la miel y que esta es ms viscosa
que el aceite, o que la nafta es muy poco viscosa, por ejemplo. La viscosidad es un factor muy importante
para la circulacin de la sangre. Las poliglobulias como la deshidratacin que originan valores elevados de
hematocrito, dificultan el pasaje de la sangre muy viscosa por las redes capilares y arteriolares, pudiendo
generar isquemia en algunos tejidos.

22
 Bioqumica

La tensin superficial es un fenmeno que se manifiesta en la superficie de un fluido, y que origina una es-
pecie de pelcula que deforma o tensiona esa misma superficie. Como consecuencia de esa tensin es
que podemos ver una pluma, o un insecto en la superficie del agua sin que se hundan. Esta propiedad, tiene
una cierta importancia fsica, ya que es la que posibilita la absorcin de un lquido sobre un papel, o que
origina el efecto de capilaridad, por el cual un lquido penetra espontneamente, an en contra de la grave-
dad, en tubos de pequeo calibre, y que favorece por ejemplo la circulacin de la sangre.

Esta tensin superficial, hace que los lquidos, a volmenes pequeos, adquieran forma de gotas. El mer-
curio, y el agua, por poseer alta tensin superficial, forman gotas. El alcohol, el ter, por el contrario no lo
hacen. El fenmeno se origina en la reorientacin de las energas intermoleculares, como consecuencia de
que las molculas de la superficie, no tienen partculas con las cuales interaccionar hacia arriba y por ello,
esas fuerzas atractivas se lateralizan, generando una energa adicional que horizontaliza el fenmeno en la
superficie.

Los lquidos presentan el fenmeno de vaporizacin, que consiste en el pasaje de molculas desde la masa
lquida a la fase de vapor. Se denomina evaporacin, cuando el fenmeno es lento y a temperatura ambien-
te. La cantidad de molculas que pasan a la fase vapor se equilibra en algn punto con las que realizan el
camino inverso (del vapor al lquido). El escape de las molculas del lquido, hacia la fase vapor, depende
de la atraccin existente entre las molculas de la fase lquida y de la presin externa; cuando la atraccin
intermolecular es baja, ms fcilmente pasarn las molculas del lquido a la fase vapor, y viceversa. Cuando
un lquido se encuentra en un recipiente cerrado, comienzan a pasar molculas desde el lquido a la fase
gaseosa. Cuando se llega a un punto mximo, en el cual el nmero de molculas que pasa a vapor es igual
al nmero de molculas de vapor que retornan al lquido, se ha alcanzado un equilibrio, punto que se deno-
mina Presin de vapor. Cundo sta iguala a la presin atmosfrica, decimos que el lquido hierve. El calor
necesario para realizar este proceso en un gramo de lquido, se llama calor de vaporizacin.

Punto de Ebullicin (PE)

Como ya se expresara, el PE es la temperatura a la cual la presin de vapor del lquido iguala a la presin
atmosfrica, producindose el pasaje de lquido a vapor del total de las molculas.

Mientras el proceso se lleva a cabo, la temperatura del sistema permanece inalterada.

Equilibrio de fases

Dijimos que los lquidos en general presentan una superficie plana que constituye el lmite superior de su
masa, y que se encuentra en contacto con la masa gaseosa. Si el recipiente que contiene un lquido, se en-
cuentra abierto, el lquido, en el tiempo, se evaporar completamente. A pesar de que en ningn momento
se ha superado el punto de ebullicin, el lquido termina por vaporizarse en su totalidad. Todos hemos
observado ste fenmeno al dejar agua en recipientes abiertos. Aunque la temperatura ambiente sea muy
inferior al PE del agua, el lquido se evapora completamente en un tiempo que depender de la superficie
del recipiente, de la presin atmosfrica y de la temperatura ambiente. Esto significa, que aunque la tem-
peratura no llegue al punto de ebullicin, algunas molculas alcanzan la suficiente energa cintica como
para escapar de la masa lquida hacia el vapor a temperaturas menores. Cuanto mayor sea la presin de
vapor de una sustancia, menor ser su punto de ebullicin, ya que deber suministrar menos calor para lo-
grar el pasaje del total de las molculas a la fase vapor.

Como ejemplo podemos observar que la presin de vapor del ter etlico a 25C es de 58,6 y la del agua de
23,76 torr., por lo cual cabe esperar que el punto de ebullicin del ter sea menor que el del agua, lo que se
confirma en la prctica: a una atm. de presin, el Pto. Eb. Del ter es de 35C. mientras el del agua alcanza
100C.

23
 Luis E. Simes

Agua Eter

Es necesario aportar ms calor al agua que al ter ya que ste tiene mayor presin de vapor que el agua.

Calor especfico

El calor especfico es la cantidad de calor que debe absorber una sustancia para aumentar su temperatura
en un grado centgrado8. Est muy relacionado con el calor de vaporizacin. El agua tiene el calor especfico
ms elevado de todos los lquidos, lo que la constituye en un excelente termorregulador, ya que absorbe
gran cantidad de calor, sin modificar notoriamente su temperatura.

Es bien conocido el efecto regulador del agua en el ambiente. Aquellos entornos secos como los desiertos,
muestran una gran amplitud trmica. Durante las horas del da, se alcanzan temperaturas prximas a los 50
C, pero durante la noche la temperatura puede situarse alrededor de 0 grados, e incluso menos. Por el con-
trario, las tierras costeras, muestran una baja amplitud trmica al actuar el agua como termorregulador. Por
otra parte, en el momento de salir el sol, la temperatura ambiente disminuye en virtud de que se requiere
gran cantidad de energa para vaporizar el agua de roco depositada durante la noche. En los cuadros febri-
les, el sudor del cuerpo, debe ser evaporado. Como el calor especfico del agua es muy elevado, su vapori-
zacin se produce con alta absorcin de calor, lo que enfra eficientemente la superficie corporal.

Electrolitos

Se denomina electrolito a toda sustancia que al disolverse genera iones. Por consiguiente, se produce el
desdoblamiento de sustancias en el medio acuoso; este proceso de desarmado de molculas neutras
origina estructuras individuales que en total presentan igual cantidad de cargas positivas y negativas, (equi-
valencia de cargas), es decir que se mantiene la electro-neutralidad del sistema. Los electrolitos tienen
acciones biolgicas importantsimas siendo fundamentales para el mantenimiento de funciones fisiolgicas
en la clula. Como en los sistemas biolgicos el solvente preponderante es el agua, los iones al poseer carga
elctrica, encuentran un medio muy adecuado para desarrollar su actividad qumica. Es as que intervie-
nen en reacciones de xido reduccin, del medio interno y estado cido base, de contractilidad muscular y
conduccin nerviosa y en intercambios transmembrana entre otras numerosas funciones.

8 De 14,5 a 15,5C

24
 Bioqumica

Una sustancia soluble en agua, hipotticamente denominada AC que pueda desdoblarse en iones, mostrar
un comportamiento como el que se muestra a continuacin:

AC (Aq) =========== A - + C +

A partir de una especie elctricamente neutra que se desdobla, se originan una partcula negativa, (anin) y
su contraparte positiva, (catin), mientras se mantiene la electroneutralidad del sistema. Los cationes, posi-
tivos, se denominan as ya que son atrados por el ctodo (polo negativo de una batera); como contraparti-
da, los aniones se dirigen espontneamente al nodo (polo positivo).

As, el Bicarbonato de Sodio, Na CO3 H, se disocia en catin sodio y anin bicarbonato:

Na CO3 H ===== Na + + CO3 H-

Los cationes preponderantes en el hombre son: Na+, K+; Ca+ + y Mg+ + de los cuales el sodio tiene ubicacin
extracelular, mientras que el potasio y el magnesio son mayoritariamente intracelulares. Esas diferencias de
concentracin se logran a costa de un importante gasto de energa. Estos gradientes posibilitan la contracti-
lidad celular y el envo de mensajes en msculos y nervios al producirse la despolarizacin y repolarizacin
de las clulas por la movilidad transmembrana de los iones. La bomba Na+ /K, + es la encargada de mantener
al K+ mayoritariamente en el medio intracelular y al Na+ fuera de la clula.

Los aniones ms relevantes para el organismo son el cloruro, el bicarbonato, el fosfato y los proteinatos,
incluyendo hemoglobinatos.
El agua como solvente

El agua es considerada un solvente universal a nivel biolgico por su gran capacidad de disolucin sobre un
sinnmero de sustancias, ya sean inicas, covalentes polares o anfipticas. La solubilidad de un soluto en
agua est relacionada con el punto de saturacin, es decir la mxima concentracin que ese solvente puede
admitir en solucin a una temperatura y presin determinadas. De acuerdo con el tipo de soluto, podemos
considerar las siguientes interacciones:

Disoluciones inicas

Al disolverse un cristal inico (Cloruro de sodio, ioduro de potasio, por ejemplo), los iones se separan. Las
molculas de agua se intercalan de manera que los cationes son rodeados por molculas de agua, orien-
tadas con el oxgeno hacia el catin. Por contrapartida, el anin queda enfrentado con la zona positiva de
las molculas de agua. Este proceso se denomina solvatacin. Los solutos inicos tienen alta solubilidad en
agua, y nula en solventes orgnicos, hidrofbicos o no polares.

Disoluciones covalentes

Sustancias como la glucosa o la urea, integran el grupo de los compuestos covalentes. No poseen carga elc-
trica como en el caso anterior, pero sus molculas exhiben un gradiente interno de cargas que originan un
fenmeno de polaridad, con extremos de mayor densidad positiva y negativa alejadas. La solubilizacin se
realiza mediante la interaccin de los puentes hidrgeno que el agua establece con los grupos polares del
soluto (oxhidrilos9, amino, nitro, etc.), permitiendo la formacin de soluciones de tipo molecular.

Disoluciones Anfipticas
Se denominan compuestos anfipticos aquellos en los cuales su estructura exhibe una regin francamente polar,
9 En este libro se utilizarn indistintamente las palabras oxhidrilo como hidroxilo. La primera
es la ms arraigada, mientras que la segunda es ms correcta.

25
 Luis E. Simes

separada de extremos apolares. Cuando una molcula de este tipo se encuentra con el agua, sufre modificacio-
nes estructurales que le permiten exponer la parte polar hacia al agua, estableciendo interacciones hidroflicas,
y alejar las zonas hidrofbicas de la fase acuosa, al mximo posible. Si se trata de monocapas que sean anfip-
ticas, stas tendern a curvarse, a los efectos de dejar las zonas polares enfrentadas al agua, y las hidrofbicas,
encerradas hacia adentro, donde generan un saco no polar.

Estas estructuras se llaman micelas. Otra posibilidad es que se acerquen entre s dos monocapas, enfrentndose
entre ellas las zonas no polares. Se forman as bicapas, las cuales enfrentan hacia el agua una bicapa hidroflica.
En el caso que sea la bicapa la que se cierre, se forma un liposoma. Esta estructura es la que evolucion para
originar las primeras clulas arcaicas.

tomado de Wikipedia.org

Sistemas Insolubles
Cuando el soluto es no polar, no puede intercalarse con las molculas de agua ya que existe una repulsin entre
las formas polares y las estructuras no polares. Esto origina una interfase que separa a los dos lquidos en fases
diferentes, sin que se produzca ningn fenmeno de disolucin. Por agitacin la interfase se desarma pudiendo
originar emulsiones.

Un mbito esencial de las disoluciones se relaciona con la regulacin de la acidez y el mantenimiento del
estado cido-base, que desarrollamos a continuacin.

Estado cido Base

Es comn en la vida diaria hablar de sustancias cidas y alcalinas. Ahora veamos lo que podemos decir de
ellas desde el punto de vista qumico.

I. Brnsted y Lowry definieron:

ACIDO, a toda sustancia capaz de entregar protones.

En correspondencia con lo anterior, definieron

BASE, como toda sustancia capaz de recibir protones.

De lo expuesto, queda claro que por propia definicin, para que exista un cido, se necesita una base y vice-
versa, adems de un protn transferible.

26
 Bioqumica

Cuando estas sustancias participan en sistemas reversibles, hasta lograr el equilibrio se llevan a cabo reac-
ciones en ambas direcciones. As, el que se comport como cido, al entregar su protn se transforma en
base, ya que puede recibirlo nuevamente; y viceversa.: quien tuvo comportamiento bsico, al recibir un pro-
tn, se transform en cido. De esta manera quedan planteada reacciones cido base- conjugadas.

Esto se refleja en el esquema a continuacin:

. AH + B ==== BH+ + A-
. A1 B1 A2 B2

Aqu podemos observar que el cido-1 origina la base-2 y que la base-1 origina el cido-2.Los electrolitos
pueden ser fuertes o dbiles, en funcin de su tendencia a disociarse, esto es, la fuerza con la que los reac-
tantes se transforman en producto. En cada par conjugado, si uno de los miembros se comporta como elec-
trolito fuerte, su contraparte ser dbil y viceversa.

En relacin co su tendencia a disociarse, podemos encontrar dos grupos: fuertes y dbiles.

cidos y bases fuertes

cidos y bases dbiles

Una forma de medir esa tendencia a disociarse, es a travs de la utilizacin de la constante de equilibrio.

Si una reaccin, como la siguiente, sufre el proceso de transformacin:

A + B ===== C + D

Su constante de equilibrio, queda determinada:

[C][D]
Keq = -------------------------
[A][B]

Recordemos que si Keq, es mayor que 1, la reaccin se encontrar desplazada a la derecha.

En el caso de tratarse de un electrolito fuerte, los reactantes se agotarn, con lo cual el valor del denomina-
dor ser 0.

27
 Luis E. Simes

Por consiguiente, si el denominador vale 0, ante cualquier valor que tenga el numerador, el resultado de la
razn siempre ser infinito () ya que es el valor que se obtiene de dividir cualquier nmero por 0.

Entonces decimos que los cidos y bases sern fuertes cuando el valor de su Ka o Kb, respectivamente, sea
infinito.

De acuerdo con su tendencia disociativa, al plantear la constante para la reaccin

ClH + H2O Cl- + H3O+

se verifica que al final ya no queda ClH, por lo que su valor en la frmula de la constante ser 0, y por consi-
guiente el resultado de la constante ser igual a infinito.

[Cl- ] [H3O+ ] n . n
Keq = ------------------------- = ------------------ =
[ ClH ] 0 *

*Cualquier nmero dividido por 0 , indicando este valor que se trata de un cido fuerte.

Como podr observarse, el agua no fue incluida en la frmula; esto obedece a que el agua se comporta
como solvente (fase dispersante) y su valor es una constante, por lo que se incluye en la constante de Equi-
librio.

Ahora veremos el ejemplo de un hipottico cido dbil.

Consideremos que al comienzo de la reaccin, hay 10.000.000 de molculas de cido

dbil
AH y que al al-
canzarse el equilibrio quedan 9.999.990 molculas del cido ya que 10 molculas de ellas se desdoblan en
10 de partculas A- y 10 molculas de hidronio, H3O+ .
AH + H 2 O ======= Ac- + H3O+
Al inicio: 10.000.000 0 0
En el equilibrio 9.999.990 10 10

[A-] . [H3O+] 10.10 100 102

Ka = ------------------- = --------------- = ~ ----------------- = ------- = ~ 1 x 10 -5
[AH] 9.999.990 10.000.000 107

28
 Bioqumica

Observamos que el valor de K es menor que 1, lo que indica que se trata de un cido dbil.

Por tratarse de ecuaciones conjugadas, se establecen las siguientes correlaciones:

Un cido fuerte genera Base Dbil

Una Base Dbil genera cido Fuerte

Y a la recproca:
Un cido dbil genera Base Fuerte

Una Base fuerte genera cido Dbil

Esto, aplicado al ejemplo considerado ser:

AH + H 2 O === A- + H3O+

Ac d Bd BF AF

II. Acido-Base de Lewis

En muchas reacciones, sobre todo de la qumica orgnica, la acidez y basicidad de las sus-
tancias, as como sus reacciones, se explican a travs de un mecanismo de transferencia
electrnica. Para Lewis, un cido es todo grupo qumico capaz de recibir electrones y una
base, toda sustancia capaz de entregar un par electrnico. Con este mecanismo se estable
un enlace covalente. As vemos que un protn (pobre en electrones), se combina con Ox-
hidrilo, (rico en electrones). ste entregar sus electrones en exceso (dador) por lo que se
comporta como base, recibindolos el protn que se comporta como cido.

H+ + HO - == H 2O

cido de Lewis Base de Lewis

Las sustancias que buscan zonas de baja densidad electrnica se llaman nucleoflicas. Por
el contrario, aquellas que reaccionan con zonas de alta densidad electrnica sern electro-
flicas.

H+ + NH3 == NH+ 4

cido de Lewis Base de Lewis

El agua como electrolito

El agua tiene un comportamiento electroltico, ya que es capaz de disociarse en iones. Sin embargo, esta
disociacin es muy dbil, ya que en condiciones normales, en el equilibrio, de cada diez millones de moles
de agua, slo un mol se encuentra disociado, segn se expresa en la siguiente ecuacin:
H 2 O + H 2 O === H3O+ + -OH
1 mol 1 mol 1x10-7 moles 1x10-7 moles

29
 Luis E. Simes

Si planteamos la constante de equilibrio para esa reaccin, nos queda:

[HO- ] [H3O+ ]
K = -----------------------
[H2O ] 2

El agua, por ser disolvente, es una constante, (k) por lo cual se puede incluir en la K obtenida, cambiando
de miembro y originando una nueva constante, llamada constante del agua:
Kw = K . k = [HO-] [H3O+]

Se sabe que en un mol de agua, se encuentran disociados 1x10-7 moles ionizados. Reemplazando en la fr-
mula:

El producto inico del agua, Kw es:

Kw = [HO-] [H3O+] = 10 -7. 10 -7 = 10 -14

Para evitar el tratamiento de frmulas con excesiva cantidad de ceros, Srensen propuso la utilizacin de
logaritmos negativos (simbolizados matemticamente por p).

Al aplicarle logaritmo negativo al Kw, se obtiene el pKw

pKw = - log 10-14

- log 10 -14 = - (- 14 . log 10) ; el logaritmo de 10 es 1;
= - (-14 . 1) = 14
pKw = pH + pOH = 14;

de donde, el logaritmo negativo de hidronio es pH y el logaritmo negativo de oxhidrilo es pOH.

pH = - log [ H3O+] = - log 1x10-7 = 7

pOH = - log [ OH ] = - log 1x10-7 7

De esta manera se hace evidente que los valores de pH e hidronio, se encuentran vinculados a travs de su
logaritmo decimal negativo.

Obsrvese que siempre la suma de pH y pOH a 25 C da 14

Un listado de varias condiciones de acidez se muestra como ejemplo en la tabla siguiente:

pH [ H3O] [OH-] pOH Estado del medio

11 10-11 10-3 3 Alcalino
9 10-9 10-5 5 Alcalino
7 10-7 10-7 7 NEUTRO
6 10-6 10-8 8 cido
4 10-4 10-10 10 cido

30
 Bioqumica

Resulta evidente que cualquiera de los cuatro valores (pH, pOH, [-OH] e [H3O+]) son individualmente suficien-
tes para expresar la escala de acidez de una sustancia; por ello, para que resulten prcticos para comparar
diferentes situaciones cido-base, es conveniente tomar uno de ellos para una escala comparativa; en razn
de esto, se decidi utilizar casi exclusivamente al pH, como patrn de acidez de los sistemas.

Esta escala de 0 a 14 muestra que a menor pH, a mayor acidez.

Escala de pH:

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 12 14
ACIDEZ CRECIENTE NEUTRO ALCALINIDAD CRECI ENTE

Clculo de pH en cidos y bases dbiles

Cuando se trate de cidos y bases dbiles, se debe tener en cuenta, que a diferencia de los electrolitos fuer-
tes, la concentracin de Hidronio ser menor que la concentracin del cido agregado. Observemos este
fenmeno sobre la reaccin del cido actico:

AcH + H2O ===== Ac- + H3O+

Si al principio de la reaccin tenemos una concentracin de cido a la que llamamos Co ,al llegar al equili-
brio, una fraccin de reactantes se habr transformado en productos. Como ignoramos cunto se ha produ-
cido, a esa cantidad la llamaremos x.

Entonces en el equilibrio quedar:

Co x de reactantes; y se forma

x de productos;

Para el ejemplo del cido actico, observamos:

AcH + H2O ===== Ac- + H3O+

INICIAL : Co

EQUILIBRIO Co x x x

Al comienzo de la reaccin solo hay cido Actico (Co) y en el equilibrio se formaron x moles de Ac- y x mo-
les de H3O+. Entonces de AcH queda lo inicial, menos lo formado de productos:
Co x moles de AcH

Planteando la constante de Equilibrio, para esa reaccin, nos da:

[Ac-] . [ H3O+]
Ka = ------------------------------ (4)
[ AcH]

31
 Luis E. Simes

Observando que por cada mol de H3O-, se forma un mol de Ac , podemos decir que
[Ac-] = [ H3O+]

por lo cual podemos reemplazar en la frmula (4), [Ac-] por su igual, [ H3O+]

[ H3O+] [ H3O+]
Ka = ----------------------------- (5) ; es igual a
[ AcH]

[ H3O+]2
Ka = ------------------------------ (6)
[ AcH]

Si aceptamos que el cido actico es un cido dbil, podemos considerar que el valor de X (fraccin disocia-
da), es relativamente baja por lo que podr ser despreciada, y considerar a [AcH]=C0 entonces reemplazamos
en (6)
[ H3O+]2
Ka = ------------------------------ (7)
C0

Despejando [ H3O+]2, queda

H 3O + = ( Co K a )

Teniendo en cuenta que por tratarse de electrolitos dbiles, la disociacin es mnima, y que adems se de-
bera ver inhibida por la presencia del ion comn hidronio aportado por el agua, en la prctica es comn
utilizar sin mayor margen de error la concentracin inicial del cido como la concentracin del equilibrio.

Aunque la ecuacin de segundo grado es ms exacta que la aproximacin que aqu utilizamos por su mayor
sencillez, la simplificacin resulta suficiente para la mayora de los clculos que debemos realizar.

Por consiguiente, es una buena aproximacin que nos permite determinar con aceptable exactitud la con-
centracin de hidronio [H3O +]; ste se puede averiguar, como la raz cuadrada de la concentracin inicial del
cido (Co) por la constante del cido dbil (Ka).

Un tratamiento similar se puede hacer para las bases dbiles, y determinar la concentracin de oxhidrilos [
HO - ] con buena aproximacin, a travs de la raz cuadrada de la concentracin inicial (Co) por la constante
bsica (Kb) de la base.

HO- = ( Co K b )

SISTEMAS BUFFER

Se denomina sistema Buffer, amortiguador o tampn, a sistemas constituidos por un cido dbil y una de
sus sales o por una base dbil y una sal derivada de ella.

Siguiendo con el ejemplo del cido actico, como cido dbil, podr constituir un buffer con una de sus sa-
les, por ejemplo el acetato de sodio. De esta manera se conforma un par AcH/ Ac-

32
 Bioqumica

Otros ejemplos de buffers son:

Fosfato dicido/ fosfato monocido: PO4 H2 - / PO4 H =

Amonaco/ amonio: NH3 / NH4 +

Proteinato/protena: Prot- / Prot

Hemoglobinato/hemoglobina: Hb- / Hb

Carbnico/bicarbonato: CO3 H2 / CO3 H -

La principal propiedad de los buffers radica en su facultad de evitar las variaciones marcadas en la acidez del
medio. Se dice de ellos que son reguladores del pH. Esta facultad est basada en el mecanismo de adquirir o
liberar protones del o al medio, de acuerdo con las modificaciones sufridas por el sistema.

Si un medio posee un pH determinado, significa que tiene una concentracin de protones relacionada. Si un
buffer est presente, ante cualquier tensin aplicada al medio, el buffer reaccionar de manera de compen-
sar esa tensin, tal lo establecido por el principio de Le Chatelier.

Si al agua se le agrega un cido, se le estar incorporando protones, y en definitiva, disminuyendo su pH. En

cambio s un buffer se encuentra presente, el pH tender a no modificarse. Usando como ejemplo al buffer
fosfato dicido / fosfato monocido, veremos que este par de electrolitos sufrir un desplazamiento que
compense el exceso de protones externos agregados.

HPO4 = + H+ ======= H2PO4

Al agregar protones, cada molcula de HPO4 = tomar un protn y se transformar en PO4 H2 con lo que
se lograr mantener la concentracin de protones del medio, recuperando el valor de pH, ya que slo los
protones impactan en el valor de pH. Siendo insensible este a las variaciones del par HPO4 = /H2PO4 -

Entonces, ante un agregado de H+, el sistema buffer se desplazar hacia la derecha. Por el contrario, si el
medio tiene una prdida de protones (aumento del pH), el sistema reaccionar desplazndose a la izquier-
da, para liberar los protones necesarios hasta compensar esa diferencia, y recomponer el valor de pH. Por
supuesto que los buffers tienen una propiedad reguladora, pero limitada. Llegar un punto en el que la ca-
pacidad del buffer ser superada y el pH se ver finalmente modificado.

GB

33
 Luis E. Simes

Si al medio se agregan protones, el sistema buffer se desplazar hacia la izquierda con el fin de que no se
incremente la concentracin de protones existentes en el medio.

Si por el contrario, el sistema requiere ms protones para que no suba el pH, el buffer se desplazar a la de-
recha a los efectos de proveer los H+ necesarios a esos requerimientos.

gb

Ecuacin de Henderson Hasselbalch

Esta reaccin resulta muy til para conocer las condiciones de accin de un buffer.

Un ejemplo es lo que ocurre a nivel biolgico con la regulacin del pH que tiene un rango muy restringido en
los sitemas vivos.

Como las clulas en sus procesos metablicos producen dixido de carbono, y ste con agua forma cido
carbnico, el pH del medio descendera. Pero a su vez el cido libera un protn y produce bicarbonato. Si
observamos la reaccin que representa lo expresado:

CO2 + H2O ==== CO3H2 ====== CO3H- + H+

Esta serie de reacciones se verifica en la clula. stas, a travs de los procesos oxidativos, llevan a cabo su
camino metablico con la incorporacin de oxgeno que permite utilizar la glucosa, concluyendo el proceso
con la produccin de CO2 y H2 O

Notemos que el anhdrido carbnico proveniente del metabolismo, se elimina por sangre venosa en los
pulmones (proceso respiratorio), mientras que el agua se eliminar por diversas vas, entre ellas la renal;
prestemos atencin al proceso por el cual el CO2 se combina con agua para formar cido carbnico
CO2 + H2O ==== CO3H2

Esta es una reaccin energticamente muy desfavorable, por lo que se lleva a cabo a travs de la interven-
cin de una enzima especfica, la anhidrasa carbnica.

El cido formado se disocia (cuando el medio es pobre en protones), en bicarbonato y protn (H+)) en un
proceso regulado por el rin (proceso metablico)

34
 Bioqumica

CO3H2 ===== CO3H- + H+

Integrando ambas reacciones, queda:

CO2 + H2O === CO3H2 ==== CO3H- + H+

El anhdrido carbnico, CO2 representa LO ACIDO, y su destino est en el sistema respiratorio; el bicarbona-
to, representa lo BASICO, ocupndose de su equilibrio el rin.

Desarrollamos la frmula de la constante de equilibrio para un cido dbil, en el miembro derecho de la

ecuacin:

CO3H2 ===== CO3H- + H+ ; Y le aplicamos su constante de equilibrio, nos queda:

[CO3H-] . [ H+]
Ka = ------------------------ ; Si despejamos protn, se obtiene
[ CO3H2]

Ka [CO3H2]
[ H+] = --------------------------- ; Al aplicar logaritmos negativos (p) , obtenemos:
[ CO3H-]

[ CO3H-]
pH = Ka + log -------------------- ; Generalizando, podemos decir que
[CO3H2]

el pH en un medio buffer es igual a la constante cida ms el logaritmo de la concentracin de sal sobre la de cido.

C sal
pH = Ka + log --------------------
C cido

En el caso del organismo humano, el buffer bicarbonato es el principal regulador del pH. Considerando que
el pH normal en 7, 40 y sabiendo que el pKa del cido carbnico es 6,1, si reemplazamos estos valores en la
frmula (3), veremos que
[ CO3H-]

7,40 = 6,10 + log ----------------

[CO3H2]

Para que se cumpla la igualdad, el segundo trmino del miembro de la derecha debe valer 1,30.

Entonces, el logaritmo de qu nmero nos dar 1,3? Al resolver, vemos que el logaritmo del nmero 20 es
1,3, es decir que para que se mantenga el pH del organismo en esos valores, la relacin entre el bicarbonato
y el cido carbnico ([CO3H-] / [CO3H2]), debe ser igual a 20, (es decir 20 partes de bicarbonato por cada parte
de cido carbnico). La regulacin gaseosa del CO2 a travs del sistema respiratorio resulta fundamental en-
tonces para el mantenimiento del estado cido base. Una acumulacin de CO2 puede llevar, si no es compen-
sado, a una acidosis de tipo respiratoria. Por otra parte, el bicarbonato es regulado a nivel renal, y cualquier
modificacin de su homeostasis, llevar a alguna patologa del medio interno de carcter metablico.

35
 Luis E. Simes

Otro buffer de importancia fisiolgica lo constituye el sistema cido fosfrico / fosfato. Como el cido fosf-
rico tiene tres hidrgenos, tiene tres valores de pKa, uno para cada protn. Pero en los sistemas buffers nos
interesa el pKa ms prximo al del sistema donde ejerce su accin reguladora.

Para el caso del cido fosfrico corresponde al par fosfato monocido/ fosfato dibsico:
pH = 7,2 + log ( HPO4= / ( H2 PO4- )

El otro sistema buffer de importancia en el organismo lo constituye el sistema hemoglobina/hemoglobinato.

Estas reacciones ocurren en el eritrocito. La primera, en la sangre oxigenada, cuando la hemoglobina tom
el oxgeno en los pulmones. La segunda cuando el eritrocito ya liber oxgeno en los tejidos y se carga de CO2
para formar cido carbnico por accin de la anhidrasa carbnica. El cido carbnico se disociar en CO3H- +
H+. El bicarbonato sale del eritrocito, intercambindose con cloruro, para mantener la electroneutralidad. En
el pulmn se libera el CO2 para ser expirado, y es reemplazado en la hemoglobina por el oxgeno. Se observa
as que la sangre arterial es ms alcalina que la sangre venosa.
H Hb O2 ======= Hb O2 - + H+ pK = 6,7 ( en las arterias desde los pulmones a los tejidos)
Oxihemoglobina reducida oxihemoglobinato

H Hb ======= Hb - + H+ pK = 7,9 ( en las venas desde los tejidos a los pulmones)

Hemoglobina reducida Hemoglobinato

pH regulado

Los valores de pH en el organismo se encuentra acotado en rango muy estrecho: 7,35 a 7,45 con un valor
central ideal de 7,40. Cuando los valores se extralimitan de 7 hacia abajo o de 7,80 hacia arriba el organismo
entra en condiciones muy riesgosas. Para los valores inferiores a 7,35 se estar en acidosis y en aquellos
casos en que los valores sean mayores a 7,45, en alcalosis. A pesar de coexistir con sustancias muy cidas o
muy alcalinas, el organismo logra mantener su homeostasis con gran eficiencia. Esto se consigue por la ac-
cin de:
I.Ventilacin pulmonar; II. Filtrado renal; III. Medios buffers

La ventilacin pulmonar es un mecanismo que influye rpidamente en el pH ya que depende de la frecuencia

y profundidad de la respiracin. Si se mantiene constante la formacin de CO2 metablico, y la frecuencia res-
piratoria baja, tender a acumularse CO2 y a bajar el pH. Por el contrario, cuando se hace rpida y profunda,
emitir ms CO2 del que se produce y el pH tender a subir. Una respiracin profunda y rpida (hambre de
aire o en guarda griega por el formato de la grfica respiratoria) es la respiracin llamada de Kusmmaul que se
observa compensando la acidosis cetodiabtica. La presin de CO2 indica el aporte respiratorio en la patologa.
Su incremento lleva a la acidosis respiratoria. Es un sistema de rpido impacto.
La Filtracin renal conforma un sistema regulador, pero de accin ms lenta que el sistema respiratorio. La
molcula central del proceso renal, es el bicarbonato, cuya presencia representa un efecto alcalinizaste. Si bien
en el medio interno el rango de pH es muy estrecho, el de la orina es amplio (5 a 7) lo que muestra que el rin
elimina sustancias que en el intersticio causaran alteraciones y patologas. Se filtran aproximadamente 180
litros de sangre por da, aunque slo se producen 2 litros de orina. En ese accionar el rin filtra, concentra, y
reabsorbe metabolitos de acuerdo a las necesidades homeostticas. Fosfato, bicarbonato, amonio, urea, sodio,
potasio juegan finos equilibrios perfectamente regulados por el nefrn. Las alteraciones cido base que tienen
origen en el rin se clasifican como metablicas: acidosis por prdida de bicarbonato o alcalosis en caso de
producirse su incremento

36
 Bioqumica

Buffers. Subsecuentemente al accionar de los rganos implicados en la regulacin cido base, se encuentran
acoplados los sistemas buffers de acuerdo a su pertinencia. El principal buffer extracelular es el carbnico/ bi-
carbonato y los principales sistemas reguladores intracelulares son los Hemoglobina/ hemoglobinato y fosfato
dicido/fosfato monocido.
Con un ejemplo aplicativo, muy simplificado a los efectos didcticos, y que ser profundizado en los captulos
de Anlisis clnicos (Parte 2), se visualiza en la tabla siguiente el impacto orgnico de la alteracin de esos me-
tabolitos para los cuadros clnicos no compensados, con sus consecuencias patolgicas:

Cpto. Pulmn Rin

pH CO2 CO3 H -
N Acidosis Metablica
0
N Acidosis Respiratoria
N Alcalosis Metablica
N Alcalosis Respiratoria

Para revisar el tema cido base, resulta conveniente repasar las frmulas de aplicacin en sta rea:

FRMULAS GENERALES
1. Kw = [H3O ] [HO- ]
+
5. [H3O+ ] = 10 pH
2. pKw = pH + pOH 6. [HO- ] = 10 pOH
3. pH = - log [H3O+ ] 7. Ka = ([H3O+ ] [A- ]) / ] [AH]
4. pOH = -log [HO- ] 8. Kb = ([HO- ] [B+ ]) / ] [B]
Para electrolitos dbiles
9. [H3O ] = (Co Ka)1/2
+
10. [HO- ] = (Co Kb)1/2
Para hidrlisis
11. Kh: Kw / Ka 12. Kh: Kw / Kb
Para Buffers
13. pH = pKa + log (sal/ acido) 14. pOH = pKb + log (sal/base)

Estados xido - Reduccin

Las reacciones de xido-Reduccin corresponden a un grupo muy importante de interacciones qu-

micas que se caracterizan por producir intercambio de electrones. Se las denomina genricamente
reacciones REDOX. As como vimos que las reacciones cido base de Brnsted Lowry transcurren
con un intercambio de protones10, las de xido reduccin se producen por intercambios electrnicos.

10 La teora cido-base de Lewis se explica sobre el intercambio de electrones, pero no es trata-

da en este texto.

37
 Luis E. Simes

El concepto cotidiano de oxidacin se halla incorporado al lenguaje comn, interpretndose correctamente

que un elemento expuesto al aire se oxida, pues incorpora oxgeno a su molcula. Hasta el advenimiento
de los metales inoxidables, era muy comn convivir con utensilios que mostraban signos de herrumbre (oxi-
do) en su superficie. Qumicamente, el concepto de oxidacin resulta ms amplio que el mero fenmeno
de incorporar oxgeno. Durante un proceso de xido-reduccin, se verifica el intercambio de electrones y la
modificacin del estatus de las sustancias que intervienen en el intercambio:

Una sustancia A se Oxida cuando Una sustancia B se Reduce, cuando

Entrega electrones Recibe electrones

Aumenta su valencia Disminuye su valencia

Se comporta como reductor Se comporta como oxidante

En una reaccin REDOX, se verifica, SIEMPRE, un intercambio de electrones.

Como ejemplo observamos el par cadmio/zinc.

Cd++ + Zn ==== Cd + Zn++ (1)

Observamos que el elemento Cadmio sufre un cambio desde el estado +2 al 0, por lo cual decimos que se
reduce. Para que esto ocurra debe recibir dos electrones:

Cd++ + 2 e- ==== Cd (2)

La otra modificacin electrnica que se verifica es la correspondiente al elemento Zinc, que pasa del estado
0 al +2, es decir se oxida. Ese cambio de carga requiere que haya entregado dos electrones desde el tomo
de Zn.

Zn ==== Zn++ + 2 e- (3)

La reaccin global (1) se produce como consecuencia del acoplamiento de dos media reacciones (hemi- reac-
ciones). Esto no obedece a un diseo terico, sino que se encuentra fundamentado en una realidad fsica.
A diferencia de las reacciones cido-base, en las que es necesario que los reactantes estn en contacto
entre s, en las reacciones de xido reduccin los reactantes pueden estar en recipientes separados. Slo se

38
 Bioqumica

requiere que exista un puente conductor elctrico que los relacione y un puente salino que evite su satura-
cin.

Veamos:

Si en un recipiente se coloca una barra de Cadmio, sumergida en una sal de Cd++, y en otro recipiente, una
varilla de Zinc, sumergida en una sal de Zn++, al unir ambas varillas con un cable conductor la reaccin co-
menzar a desarrollarse; este sistema formado por dos cubas relacionadas por un conductor y un puente
salino11 (que no est representado en el dibujo), se llama pila de Daniell.

El Zn de la celda galvnica de la derecha, para transformarse en Zn++, libera 2 electrones; esos electrones
circulan por el conductor elctrico y se dirigen al vaso representado a la izquierda (3) ; Corresponde a una
reaccin de OXIDACION, pues ENTREGA electrones, comportndose como REDUCTOR.

Al llegar los electrones a travs del conductor, se combinan con el Cd++, originando Cd (metlico). Esta es
una hemi reaccin de REDUCCION (2), pues RECIBE electrones. Al reducirse se comporta como OXIDANTE.

En el caso del ejemplo, se observar un incremento en la masa del borne de cadmio metlico, y una dismi-
nucin en el tamao de la varilla de cinc.

11 El puente salino es un tubo que relaciona ambas cubas para evitar la saturacin inica

39
 Luis E. Simes

En base a sta realidad fsica es que se plantean las reacciones de xido reduccin, bajo la forma de dos
medias reacciones acopladas. Combinando ambas, se obtiene la reaccin completa de xido reduccin, sin
que necesariamente compartan el mismo recipiente.

Potenciales Estndar de Reaccin E

La colocacin de un conductor que comunica ambas cubas, implica la transferencia de electrones, o lo que
es lo mismo la generacin de una corriente elctrica.

Por ello, la colocacin de un voltmetro en el conductor, permite medir los voltajes que se establecen en
cada reaccin. Se sabe que para cada par de elementos enfrentados, se producen distintos voltajes. Visto
as se requerira efectuar las mediciones de todos los posibles pares de elementos en sus diferentes estados
de oxidacin.

Con la finalidad de evitar este inconveniente, se ide un electrodo de H2 / H+, en condiciones de normalidad
(1 Molar, 25C y 1 atm. de presin), al cual se le asign arbitrariamente un valor de voltaje 0, que sirviera
como patrn de comparacin12. Cuando se relaciona este electrodo estndar, frente a los diferentes ele-
mentos se obtiene un valor que identifica a cada par, y que se encuentran tabulados para su consulta y utili-
zacin. Por ejemplo, la reaccin Fe+++ / Fe ++ fue medida frente a la cupla estndar de hidrgeno y se obtuvo
un valor de 0,77 V. Por otra parte si la medicin del par Co ++ / Co frente al electrodo estndar dio 0,25
V, cuando se realice la reaccin

Co + Fe+++ ======= Co ++ + Fe ++

Bastar con consultar los valores de tabla para conocer los voltajes de cada par y su resultado para esta
reaccin.

El voltaje de cada par se denomina potencial estndar de celda, E, Y la suma de los valores de ambos pares,
ser el Potencial de reaccin, E.

Potencial estndar y energa libre

El E permite determinar la orientacin y fuerza de la reaccin, siempre que se cumplan las condiciones
estndar para cada reaccin. Pero como en la mayora de las reacciones las concentraciones son distintas de
1M se necesita aplicar la ecuacin de Nernst, para determinar la tendencia de la reaccin en esos casos de
condiciones no estndar. La ecuacin de Nernst incorpora los valores de concentracin de las especies en el
equilibrio y lo que se obtiene entonces es el potencial de Celda E, en condiciones no estndares.

El potencial de reaccin E est relacionado con la energa libre de Gibbs (energa del sistema que puede
ser utilizada por el mismo), y que se determina a travs de la ecuacin:

G = -n F E

En la que n es el nmero de electrones intercambiados y F la constante de Faraday13.

12 Como la concentracin de H +
es 1M, el pH=0; para las reacciones biolgicas se considera que el pH normal es de 7,40, el voltaje de la
cupla es de 0,42 V.
13 96,5 kJ/V.mol

40
 Bioqumica

Cuando el potencial de la reaccin E es positivo, la reaccin ser termodinmicamente favorable cuando

se desarrolle de izquierda a derecha. Para estos casos espontneos la G ser negativa porque denota un
balance energtico favorable.

Con estas herramientas se conocen la orientacin e intensidad de las reacciones de xido- reduccin.

Cuando necesitamos interpretar el estado de oxidacin de ciertas sustancias orgnicas, sin apelar al uso de
los valores de los potenciales de reaccin, podemos utilizar el recuento de hidrgenos y oxgenos de cada
sustancia, para, a travs de ese recuento obtener una indicacin orientativa del estado oxidativo de las es-
pecies qumicas. En el caso de los compuestos orgnicos, podemos hacer una comparativa de su estado de
oxidacin, a travs de la cantidad de tomos de H y O que posee cada uno. Cuanto ms tomos de oxge-
nos o menos hidrgeno de posea un compuesto, ms oxidado se encontrar. Veamos a continuacin, orde-
nado de menos oxidado a ms oxidado:

Observando el contenido de hidrgeno y oxgeno, el siguiente ejemplo contribuye a visualizar lo expresado:

N tomos Alcano Alqueno Alquino Alcohol Aldehdo Cetona cido

CHO - CH3 = CH2 C H CH2-OH CHO = C =O C O OH
Hidrgeno 3 2 1 3 1 0 1
Oxgeno 0 0 0 1 1 1 2

Podemos observar que a medida que se progresa desde la izquierda a la derecha se pasa de un estado ms
reducido (prevalencia de H) a uno ms oxidado (Prevalencia de O). As corroboramos que un cido est ms
oxidado que un aldehdo (ambos tienen un hidrgeno, pero el cido tiene un oxgeno ms) o que un alco-
hol, est ms reducido que una cetona (ambos tienen un oxgeno, pero el alcohol tiene tres hidrgenos y el
grupo ceto ninguno).

Se muestra ms adelante un cuadro que contiene pares redox de sustancias que tienen entidad en diversas
funciones biolgicas, con sus respectivos valores de E

xido reduccin en compuestos orgnicos

Cuando consideramos a los organismos que obtienen su energa tanto de la luz como de los compuestos
qumicos, nos referimos a dos sistemas o mecanismos de accin diferentes, pero que conllevan en comn
un efecto central: el rol de los electrones en el proceso. Como ya se expresara, un intercambio de electrones
caracteriza a las reacciones de xido-reduccin.

Por ejemplo, uno de los seis grupos en los que se han clasificado a las enzimas es el de xido-reductasas.
En l se encuentran las deshidrogenasas, enzimas que favorecen las oxidaciones biolgicas. Con su inter-
vencin, por ejemplo el cido lctico se transforma en pirvico, y los aceptores de hidrgeno de la cadena
respiratoria se oxidan al perder hidrgenos.

En la siguiente tabla se muestran ejemplos de potenciales de xido reduccin, que interesan a sustancias
que intervienen en procesos metablicos de la clula eucariota14. Por ejemplo, el oxgeno se muestra como
el principal receptor de hidrgeno, para formar agua, en el ms comn de los procesos oxidativos: la respi-
racin

14 Tomado de Biochemistry. 6 th
Ed.Berg et. al. Freeman Ed.

41
 Luis E. Simes

Sustancia Oxidada Sustancia Reducida e- inter Voltaje de H

cambiados hemireaccin E
Succinato cetoglutarato 2 - 0,67
Acetato Acetaldehido 2 - 0,60
NAD +
NADH + H +
2 - 0,32
NADP +
NADPH + H +
2 - 0,32
FAD FADH2 2 - 0,22
Piruvato Lactato 2 - 0,19
Citocromo b (III) Citocromo b (II) 1 +0,07
Ubiquinona Ox. Ubiquinona Red. 2 +0,10
Citocromo c (III) Citocromo c (II) 1 +0,22
Hierro (III) Hierro (II) 1 +0,77
O 2 + H2 H2O 2 +0,82

Transporte de electrones:

Las deshidrogenasas que se relacionan con ciertos dinucletidos como la NAD+ (Nicotinamida, Adenina Di
nucletido), las flavin adenina dinucletido y las ferroproteninas entre otras, tienen importantes acciones
biolgicas fundamentales que se sustentan en procesos de xido reduccin qumica.
El tomo de Carbono

Ya se ha expresado la importancia del carbono como elemento esencial en la constitucin de los compues-
tos orgnicos.

12,0107

C 6
1s2 , 2s2,2p2

El Carbono es el elemento nmero 6 de la tabla peridica, por lo cual su ncleo posee 6 protones. Se encuen-
tra ubicado en el perodo 2 y en el grupo 14 (4 A) de la tabla peridica. Su masa atmica es 12, lo cual implica
que posee 12 nucleones, por lo cual aparte de los 6 protones mencionados, contiene 6 neutrones. Ms del
90% del carbono natural se encuentra en esa conformacin isotpica15. Un pequeo porcentaje corresponde
al istopo estable 13. Este ismero posee 7 neutrones. El Carbono 14, que posee 8 neutrones, tiene un decai-
miento radiactivo con una vida media16 de 5760 aos, propiedad que es utilizada para medir la antigedad de

15 Los elementos se identifican por el nmero de protones que poseen y que se corresponden con el nmero atmico Z. Sin embargo el
mismo elemento puede poseer distinto nmero de protones en su ncleo, mostrando diferentes variantes isotpicas: Istopos 12, 13 o 14 del Car-
bono: todos tienen 6 protones, pero el nmero de neutrones de sus ncleos es 6, 7 y 8 respectivamente.
16 Vida media y perodo de semidesintegracin son conceptos diferentes pero en algunos casos asimilables.

42
 Bioqumica

las sustancias que componen cuerpos antiguos, constituyndose en una eficaz herramienta que presta utili-
dad en el terreno de la investigacin histrica, a la geologa, a la arqueologa y a la paleontologa entre otras.

En cumplimiento de la electroneutralidad, se requiere que este elemento contenga 6 electrones. stos se

distribuyen segn la siguiente configuracin electrnica: 1s2, 2s2 , 2p2 , representados en las casillas cunti-
cas que se observan a continuacin:

S P

Como la energa de los subniveles 2s y 2p es muy similar, los electrones de esos subniveles pueden compor-
tarse como si pertenecieran al mismo subnivel, y en consecuencia siguen la regla de Pauli, que expresa que:
No se completa un orbital si en el mismo subnivel an existen orbitales vacos Hay una preferencia ener-
gtica por la situacin de orbitales semi-completos.

Para cumplir con esta regla, un electrn del orbital 2s (lleno) pasar al tercer orbital 2p (vaco).

De esa manera en el nivel 2 quedan un orbital s y tres orbitales p semillenos:

2 s1 , 2px1 , 2py1 , 2pz1

Hibridizacin

La hibridizacin es un proceso por el cual ciertos orbitales son capaces de mixturarse, es decir mezclarse
para originar nuevas formas llamadas orbitales hbridos.

43
 Luis E. Simes

sp3

Al existir cuatro electrones en orbitales energticamente similares, se produce una mezcla entre los cuatro,
generndose cuatro nuevos orbitales mezcla (o hbridos), idnticos, llamados sp3.

Este nombre obedece a que cada uno est formado por una parte de orbital s y tres partes de orbitales p,
es decir un total de 4 orbitales hbridos sp3.

Los cuatro orbitales originados son iguales entre s. Como cada uno de sus electrones estn desapareado
son capaces de originar cuatro enlaces idnticos entre s, que se orientan hacia los vrtices de un tetraedro
y que particularizan las estructuras carbonadas.

Estructuras basadas en el Carbono

El carbono se constituye en un elemento tan especial, en razn de que es prcticamente el nico tomo17
capaz de unirse covalentemente consigo mismo para formar largas cadenas, ciclos, esferas o tubos que ofre-
cen una enorme variedad estructural sobre la cual construir una gran diversidad de compuestos orgnicos,
biolgicos, polimricos, tanto naturales como artificiales de importancia para la vida y para la sociedad.
Tipos de enlace

Un tomo de carbono puede unirse con un tomo de carbono vecino, mediante enlaces simples, dobles o
triples.

Enlace simple

Entre cada carbono se establece un enlace covalente. La distancia interatmica carbono- carbono es de 1,51
Armstrongs, quedando tres enlaces libres para combinarse con otros elementos o grupos qumicos.

17 El Silicio tiene propiedades similares, aunque en menor escala.

44
 Bioqumica

El carbono se estructura mediante hibridizacin sp3, cuando emplea sus uniones simples. Esta disposicin
origina ngulos de enlace de 109 28, donde los cuatro orbitales hbridos sp3 se orientan hacia los cuatro
vrtices de un tetraedro perfecto.

GB

Enlace doble

En estos casos dos tomos de carbono se unen por un enlace doble, quedando disponibles para generar
otras combinaciones dos enlaces por cada tomo de carbono.

La distancia del enlace doble es de 1,34 A y su energa de combinacin es de 146 kcal/mol.

Utilizan hibridizacin sp2. En este tipo de hibridizacin, se mezclan dos orbitales 2 p con el orbital 2s , gene-
rando 3 orbitales hbridos sp 2 quedando un orbital p sin combinar. Esto origina tres orbitales idnticos que
se dirigen sobre un plano hacia los vrtices de un tringulo, mientras el orbital p sin mezclar permanece
perpendicular al plano.

45
 Luis E. Simes

El enlace triple tiene una longitud de 1, 42 A y una energa de 200 kcal/mol Tngase en cuenta que esta
energa duplica prcticamente la energa de enlace del CH : 99 kcal/mol.

Cuando se generan enlaces triples, se produce la mezcla de un orbital p con el orbital s, quedando dos elec-
trones en su original configuracin p. Los dos orbitales hbridos sp, se orientan sobre una recta, mientras los
dos electrones p restantes se ordenan en ngulos perpendiculares.

Los enlaces sp se orientan sobre una recta a 180 y los dos orbitales p sin hibridizar se acomodan en ngulos de 90

Clasificacin de los carbonos en las cadenas ramificadas

Cuando los tomos de carbono se unen en cadenas, modifican algunas de sus propiedades, diferencindose
en carbonos primarios, secundarios, terciarios y cuaternarios. De esta manera un mismo grupo unido a car-
bonos diferentes, puede dar propiedades distintas.

46
 Bioqumica

La clasificacin se establece de acuerdo con la cantidad de otros carbonos a los que se une un tomo; es
decir que un carbono es primario cuando se une a otro carbono; secundario cuando se une a dos y as suce-
sivamente. Esto queda ejemplificado en el siguiente esquema:

Variedades alotrpicas del Carbono

Las variedades alotrpicas de un elemento son las diferentes presentaciones que ste puede exhibir, confor-
me la diferente disposicin de sus tomos. Por ejemplo, el oxgeno presenta una conformacin estructural
de dos tomos (O2); pero si esa conformacin es de O3, estaremos en presencia de su variedad alotrpica
llamado ozono.

O=O

O O

Oxgeno Molecular Ozono

Respecto del carbono son muy conocidas dos variantes alotrpicas: el Grafito, de color negro, conformacin
amorfa, consistencia pastosa y muy blanda (principal componente de la mina de lpices o usado como lubri-
cante) y el Diamante, brillante, transparente, cristalino y de una dureza extrema18. En el siglo XX se demos-
traron dos nuevas presentaciones: los Fullerenos, algunos como el denominado Bucky ball, conformados por
estructuras esfricas similares a una pelota de futbol, conteniendo 60 tomos de carbono, que permitir
desarrollar aplicaciones como rulemanes microscpicos y otras formas biotecnolgicas y el grafeno, material
de extraordinaria flexibilidad y de mayor dureza que la del acero. Es una estructura laminar semejante a un
panal, pero de slo un tomo de espesor. Ambos prometen extraordinarias posibilidades para la nanotecno-
loga y otros empleos como la energa limpia y los equipos electrnicos de gran velocidad, resistencia y flexi-
bilidad. Los grafenos en su presentacin cilndrica plegada, obturada en sus extremos por fullerenos, tambin
son conocidos como nanotubos. stos resultan de gran utilidad para desarrollos biotecnolgicos. En el 2004
se presentaron las Nanoespumas, como otra presentacin alotrpica del carbono, en el cual los tomos de
carbono forman un semiconductor de hexgonos y heptgonos pero de curvatura inversa a los fullerenos.
Otra presentacin particular que ofrece el carbono son los Carbinos o LAC (Por Carbono Acetilnico Lineal).
Su estructura qumica es una cadena repetitiva de carbonos acetilnicos: -(CC)n- Las formas descriptas
hasta aqu son las ms captadas, pero existen otras presentaciones particulares en virtud de la gran versatili-
dad del tomo de carbono para comunicarse con otros carbonos. Esto se lo brinda una estructura electrnica
privilegiada que es el poseer 4 electrones de valencia, lo que lo sita a mitad de camino sobre la regla del
octeto (dar 4 electrones o recibir 4 electrones es una ventaja estructural importante) Existen otras variedades
conocidas como el Diamante cbico, la Caota o el Carbono metlico y otras no completamente aceptadas.

18 El diamante es la sustancia ms dura conocida, estando catalogado como 10 en la escala de dureza de Mohr. La otra sustancia de extre-
ma dureza conocida es el Nitruro de Boro ( N ; B ) por su entrecruzamiento de enlaces.

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 Luis E. Simes

tomado de uadex.mx, donde se aprecian los enrollamientos del grafeno.

La superpresin reorganiza las interacciones entre tomos y el grafito se transforma en diamante sinttico.

El pequeo Clark Kent se divierte aplicando super presin al carbn y produce una modificacin alotrpica del carbono para obte-
ner diamantes.

Enlace qumico

I. Enlaces Qumicos interatmicos: Formacin de molculas

La formacin de compuestos tiene su origen en el hecho de que los tomos aislados tienen mayor energa
que los tomos combinados en compuestos estables. La forma de enlace adquiere distintas caractersticas,
que a los efectos de este tratado, se clasifican principalmente en:
a. Enlace inico.

b. Enlace covalente.

Una forma de alcanzar esa mayor estabilidad es cuando completan su ltimo nivel electrnico. Este fen-
meno es conocido como regla del octeto, la que se logra al originarse interacciones que conducen a niveles
orbitales externos completos.

Desarrollaremos a continuacin los principales enlaces interatmicos, tambin identificados como intramo-
leculares.

48
 Bioqumica

A. Enlace Inico

El enlace Inico, tambin llamado Electrovalente, es un enlace que se concreta al transferirse electrones des-
de un tomo electropositivo (dador) hacia el ms electronegativo (recepetor). El tomo que cede electrones,
se transforma en positivo (catin) y el que recibe, en negativo (anin). Al originarse iones de cargas opuestas,
se produce inmediatamente una atraccin electrosttica que los une. Generalmente se produce entre ele-
mentos del grupo I o II con los del grupo V, VI o VII de la tabla peridica.

Para conseguir la ionizacin o transferencia electrnica se requiere que la diferencia de electronegatividades

(adimensionales y determinadas en la escala de Pauling) que se establece entre los elementos participantes
del enlace sea mayor de 1,7.

Por ejemplo, cuando se produce la interaccin entre sodio (Electronegatividad 0,9) y flor (Electronegatividad
4), se verifica una diferencia de electronegatividad igual a 3,1; en este caso se producir un enlace electrova-
lente o inico que llevar a la formacin del Fluoruro de Sodio.

El sodio (Na) tiene 8 electrones en su penltimo nivel y un electrn en el ltimo nivel y el Flor tiene 7 en
su ltimo nivel. En consecuencia, si el sodio entrega su electrn ms externo, se transforma en catin (+1), y
el flor en anin (-1) . As cumplen con la regla del octeto, es decir alcanzar el total de ocho electrones en
sus respectivos ltimos niveles. Esto permite disminuir su energa y establecer una atraccin electrosttica
entre cargas opuestas que une a los elementos.

Unin inica o electrovalente. Cumple con

- Regla del octeto (8 electrones en el ltimo nivel electrnico)

- Disminucin de la energa del sistema y

- Establecemiento de una atraccin electrosttica entre iones de cargas opues-

tas que se originan en la transferencia electrnica desde el tomo mas elec-
tropositivo al mas electronegativo.

Estos son enlaces propios de los compuestos salinos o inorgnicos, solubles en agua y que forman general-
mente retculos cristalinos. Son altamente estables.

B . Enlace Covalente

El enlace covalente se produce cuando los elementos comparten uno o ms electrones, con el fin de alcanzar
cada uno de ellos el nmero de ocho electrones en el ltimo nivel19. Mientras que en el enlace electrovalente
o inico, se produce con ese objetivo la transferencia de electrones, en los enlaces covalentes, los electrones
se comparten entre ambos tomos, para lograr el mismo fin, pero por mecanismos diferentes.
Enlace electrovalente: Transferencia de electrones

Enlace covalente: Electrones compartidos

19 . Completar su nivel. En el caso del H, su nivel se completa con dos electrones (He).

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 Luis E. Simes

Ya vimos que el carbono, en razn de su particular estructura electrnica, poda generar enlaces simples,
dobles y triples. Esto se basa en las diferentes hibridaciones que pueden realizar sus electrones de enlace,
como ya fuera descripto.
Hibridizacin sp3 : 4 orbitales iguales sp3

Hibridizacin sp2 : 3 orbitales sp2 y un orbital p

Hibridizacin sp : 2 orbitales sp y 2 orbitales p

Cuando estos elementos comparten electrones para formar un doblete electrnico con otros tomos, a los
efectos de completar sus orbitales de valencia, se conforman enlaces de tipo covalente.

Cuando ese doblete de electrones, que forma el enlace est constituido por un electrn proveniente de cada
tomo, decimos que se trata de un enlace covalente puro.

Si en cambio, cuando por requerimientos electrnicos estructurales, el doblete que se establece para confor-
mar el enlace, es formado por electrones aportados por uno slo de los tomos involucrados, estaremos en
presencia de un enlace covalente dativo. Uno ser tomo dador y el otro, receptor.

Los enlaces covalentes, tanto puros como dativos, pueden ser apolares o polares. Cuando el enlace se es-
tablece sobre dos grupos iguales, sin diferencia de electronegatividades entre esos ncleos, el enlace ser
apolar. Si ese enlace se produce entre tomos diferentes, la diferencia de electronegatividades har que el
par electrnico del enlace se ubique ms cerca del tomo electronegativo y en consecuencia la molcula
resultante mostrar un desplazamiento de sus cargas. Estas molculas se denominan polares y tienen funda-
mental importancia en las reacciones qumicas, propiedades estructurales y funcionales.

La estabilidad y fuerza del enlace covalente est determinada por la disminucin de energa potencial que
experimentan los electrones, cuando se encuentran bajo la accin de dos ncleos. En la fortaleza del enlace
se tienen en cuenta entonces,
a. Cuanto mayor sea la disminucin energtica producida, mayor ser la estabilidad del enlace y

b. Cuanto mayor sea la diferencia de electronegatividades de los tomos enlazados, mayor ser la
polaridad de la molcula.

II. Enlaces Qumicos intermoleculares

As como la unin de diferentes tomos determina la formacin de molculas, se da tambin el caso de que
las molculas ya formadas, interaccionan con otras molculas que las rodean a travs
de fuerzas de atrac-
cin o de repulsin. Estas interacciones son definidas genricamente como fuerzas intermoleculares. Estas
fuerzas propician la existencia de lquidos y slidos al generar la atraccin entre partculas para configurar la
estructura interna particular de cada estado fsico.

La conformacin de sustancias bajo las caractersticas de fluidos, requiere de la existencia de interacciones

que relacionen a las molculas entre s, ya sea desde la perspectiva de acciones tanto repulsivas como atrac-
tivas. Afirmamos que los slidos requieren desde el punto de vista lgico, fuerzas atractivas superiores a las

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 Bioqumica

repulsivas y que el esquema inverso se verifica en los gases. Obviamente los lquidos se sitan a mitad de ca-
mino entre estas dos formas. A partir de esa realidad, se comienzan a definir cules son las fuerzas que atraen
a las molculas entre s, para darle sus caractersticas de fluido. El conocido fenmeno del agua demuestra
como una sustancia de la que se esperara un punto de ebullicin de ~25 C, hierve a 100 C.

Reconocemos las siguientes interacciones20:

a. Ion- Dipolo

b. Fuerzas de Van der Waals : Dipolo Dipolo (inducido o permanente)

i. Dipolo Dipolo Permanente : Puente de Hidrgeno

ii. Dipolo Dipolo Inducido

c. Fuerzas de Dispersin de London: Dipolo inducido dipolo inducido

a. Fuerzas Ion Dipolo21

Estas fuerzas se establecen entre iones y molculas dipolares. Tienen importancia en la disolucin de elec-
trolitos en agua. Como las molculas dipolares tienen extremos con densidad de carga positiva y negativa, se
ordenarn frente a los iones de manera tal que se produzca una atraccin electrosttica entre opuestos. Los
extremos negativos de los dipolos se orientan hacia los cationes y los extremos dipolos positivos hacia los anio-
nes. Estas interacciones contribuyen a aumentar las fuerzas cohesivas en la solucin.
fuerzas de Van der Waals:
Dipolo- Dipolo Permanente22
Este tipo de interaccin se produce cuando en el sistema existen molculas polares. Esto hace que se genere
una interaccin entre el extremo de densidad positiva de una molcula, con el extremo de densidad elctrica
negativa de otra. Se da en compuestos que no tienen tomos muy electronegativos, como por ejemplo en el
sulfuro de hidrgeno (SH2); Estas fuerzas son cien veces menores (1 Kcal/mol.) que un enlace covalente tpico.
Enlace Puente Hidrgeno
Este es un caso especial de interaccin dipolo-dipolo, pero de mayor intensidad. Se produce cuando las mol-
culas presentes contienen hidrgeno unido a un tomo electronegativo, como Oxgeno, Flor o Nitrgeno; se
establece entre esta estructura y otro tomo electronegativo una atraccin entre dipolos opuestos que eleva
la cohesin molecular de la sustancia. Es decir que el tomo de hidrgeno ( + ) tiende un puente entre dos
tomos electronegativos ( ) .
En el caso del agua, los hidrgenos de su molcula presentan una distribucin de carga de densidad positiva,
mientras que sobre el oxgeno se encuentra el extremo con densidad elctrica negativa. De esta forma, en el
agua se conforman redes en donde los oxgenos se orientan hacia los hidrgenos de molculas vecinas y vice-
versa. Esta atraccin intermolecular incremente fuertemente la atraccin y ocasiona que el punto de ebullicin
del agua sea mucho ms elevado que el que cabra esperar de no producirse este tipo de interaccin. Su inten-
sidad es de aproximadamente el 10% de un enlace covalente, por lo que estas resultan al menos 5 veces ms
intensas q las otras interacciones intermoleculares. Los compuestos que presentan interacciones de este tipo
poseen puntos de ebullicin ms elevados que aquellos compuestos estructuralmente semejantes que son
apolares (ej: propano y propanona). El enlace por puente hidrgeno resulta fundamentales para mantener al
agua en estado lquido a temperatura ambiente y muy importante en la determinacin de las conformaciones
estructurales de protenas, cidos nucleicos y en las propiedades de alcoholes y glcidos por ejemplo.

Compuesto Punto de Ebullicin Estado fsico en condiciones ambientales Puente H

20 No existe entre diferentes investigadores un criterio nico de clasificacin para estas interacciones, por lo cual la aqu presentada es una
de entre otras posibles.
21 O fuerzas de Keesom que son las que involucran accin electrosttica
22 Las interacciones llamadas de Van der Waals son consideradas en conjunto como las fuerzas atractivas o repulsivas intermoleculares por
el Gold Book o IUPAC.

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 Luis E. Simes

PH3 - 87,7 C Gas No

HCl - 84,2 C Gas No
H2 S - 59,6 C Gas No
HF + 19,5 C Lquido Si
H2 O + 100 C Lquido Si

Interaccin dipolo, dipolo transitorio:

Esta tipologa se observa en sistemas en los que coexisten una molcula polar con otra molcula inicialmente
no polar. Al acercarse una molcula no polar a una polar, sta le induce carga, y genera en la otra una pola-
ridad de corta duracin, llamada dipolo transitorio. En este caso, se reorientan las molculas de manera tal
que los extremos con densidad positiva ( +), se enfrenten a los extremos con densidad negativa ( ). Estas
distorsiones de las nubes electrnicas, generan las asimetras que posibilitan las interacciones referidas de
muy corta duracin, pero de alta repeticin.
c. Interacciones de Dispersin. Fuerzas de London,

Son las nicas fuerzas de atraccin que se observan en molculas no polares. Son de muy corto alcance y se
producen por la avidez del ncleo de un tomo por la nube electrnica de otro tomo. Esta accin genera di-
polos transitorios que actan entre tomos y molculas diferentes. La capacidad de polarizacin se incrementa
con el tamao de las nubes electrnicas, por lo cual estas fuerzas tienen mayor preponderancia cuando ms
grande es el radio atmico, es decir mayor tamao de su nube electrnica o mayor nmero de electrones. Si
bien algunos autores mencionan a las fuerzas hidrofbicas lipdicas como un caso particular, e realidad se pue-
den encuadrar dentro de las fuerzas de dispersin.
Cualquier molcula no polar (enlace covalente por ejemplo entre dos tomos iguales), tendr su doblete enla-
zante equidistante de los respectivos ncleos. Sin embargo, el movimiento de los electrones genera asimetras
instantneas que se ven reflejadas en interacciones producto del desplazamiento de las cargas. Estas fuerzas
son causantes de que el bromo tenga un comportamiento lquido a temperatura ambiente en lugar de gaseoso.
Las formas moleculares, los compactamientos y los alineamientos de partculas tambin tienen efectos sobre
las interacciones de London. Estas fuerzas de dispersin tambin son dbiles (0,5 a 2,5 Kcal/mol) y tienden a
incrementarse con el PM y el aumento del nmero de electrones.

Interaccin Intensidad Se observa en molculas

Puente Hidrgeno 2 a 10 kcal/mol Con F H ; N- H ; O-H
Dipolo dipolo 1 kcal/mol Slo Polares
Fuerzas de London 0,5 a 2,5 kcal/mol Todas

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 Bioqumica

CAPITULO 2

FUNCIONES DE LA QUMICA ORGNICA

Compuestos Binarios

Hasta aqu hemos descripto las particularidades referidas al principal elemento de las estructuras biolgi-
cas: el tomo de carbono. A partir de ahora describiremos las sustancias formadas por carbono e hidrgeno,
las que se agrupan bajo la clasificacin de compuestos binarios. En razn de ello reciben el nombre genrico
de HIDRO-CARBUROS23. Los hidrocarburos, componentes prevalentes del petrleo, pueden ser clasificados
en:
A) Alifticos: constituyen cadenas. Estos se pueden dividir en

a. saturados, cuando los enlaces entre cadenas son simples,

b. Insaturados cuando poseen dobles o triples enlaces

B) Cclicos: Sus estructuras centrales estn formadas por ciclos cerrados. Estos se clasifican a su vez en:

a. Isocclicos: Cuando los ciclos poseen solamente carbonos en sus vrtices. Pueden ser

Ciclo Alcanos, cuando son de cadena simple

Ciclo Alquenos si poseen doble enlace, o

Aromticos, como es el caso del benceno que posee tres dobles enlaces deslocali-
zados
Funcin Hidrocarburo

Son compuestos binarios, ya que estn formados solamente por dos elementos: Carbono e Hidrgeno. En
este grupo encontramos a los alcanos que son hidrocarburos con la mxima cantidad de hidrgeno que
pueden admitir (se saturan con hidrgeno). Los enlaces carbono-carbono son no polares, lo cual es deter-
minante para las propiedades de los compuestos que conforma. Las interacciones intermoleculares estn
regidas en este caso, principalmente, por fuerzas de London.

Los alcanos son tambin denominados parafinas, (del griego, = poca afinidad) porque son poco reactivos.
Las frmulas en el espacio tienen el formato que les determinan la orientacin de los cuatro enlaces iguales
de cada tomo de Carbono: ngulos de 109 28.

23 Hidro por hidrgeno y no por agua , tal como se emplea comnmente.

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 Luis E. Simes

Foto O.Breglia

Como la verdadera distribucin resulta difcil de graficar, en general las frmulas son dibujadas en un plano.
A continuacin, la misma molcula, el butano

gb

Un formato an ms simplificado consiste en expresar la frmula molecular, agrupando cada carbono con sus
hidrgenos. Vemos a continuacin el mismo compuesto, pero bajo esta consigna:
CH3 CH2 CH2 CH3

La frmula molecular del butano es: C4H10 donde se indica la cantidad de cada elemento en la frmula. La
mxima simplificacin es la frmula mnima que indica la relacin existente entre los diferentes tomos; en
ste caso, es C2 H5 , que no es representativa de la realidad estructural , sino que slo expresa la mnima
relacin existente entre los tomos de los elementos integrativos.

En los alcanos por cada tomo de carbono presente existe el doble de tomos de hidrgeno ms dos.
La frmula general de los alcanos es

Cn H2n+2

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 Bioqumica

Reglas de Nomenclatura IUPAC

La denominacin de los compuestos orgnicos se encuentra sistematizada por las Reglas de la IUPAC24.
Esencialmente los nombres de los compuestos orgnicos constan de dos partes. La parte inicial o prefijo
indica la cantidad de carbonos que posee la frmula, y al final del nombre (un sufijo) que explicita de qu
tipo de funcin qumica se trata.

Los prefijos que indican la cantidad de tomos de Carbono se basan en nombres griegos:

1 C : Met- ; 2C : Et- ; 3C: Prop_- ; 4 C: But- ; 5 C: Pent- ; 6 C: Hex- ; 7 C: Hept- ; 8 C: Oct- ; 9 C: Non- ; 10 C:
Dec-

Los sufijos para los hidrocarburos son:

Alcanos: Ano ; Alquenos : Eno ; Alquinos: Ino ; Radicales: Ilo

Cuando se trate de frmulas cclicas, al nombre se le antepondr el prefijo: Ciclo

Ejemplos:
Alcano de 4 carbonos: Butano

Alqueno de 5 carbonos con doble enlace en C 2: 2- Penteno

Alquino con 6 carbonos y triple enlace en 3: 3- Hexino

Radical de 3 carbonos: Prop ilo

Ciclo alcano de 3 C: ciclopropano

Ciclo alqueno de 4 C: ciclobuteno

Nota: Cuando resulta necesario indicar la posicin de algn grupo, como el doble o el triple enlace, se em-
plea un nmero para localizar la misma, contando desde el extremo que genere el menor nmero:

2- Penteno es correcto, pero si contamos desde el otro extremo ser 4-Penteno. El segundo es incorrecto
por que origina un nmero mayor.

C1H3-C2H=C3H-C4H2-C5H3 C5H3-C4H=C3H-C2H2-C1H3

2- penteno ( correcto) 3- penteno ( incorrecto)

Ntese que se trata del mismo compuesto y que la nica diferencia es desde cual extremo se comenz el
recuento.

Hay al menos dos cuestiones muy importantes a tener en cuenta:

a) Largo de la cadena: para nombrar al compuesto, cuando una cadena es ramifi-

cada, se debe elegir la cadena ms larga para asignar el nombre.

24 La Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada (International Union of Pure

and Applied Chemistry),

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 Luis E. Simes

Ejemplo incorrecto

Visto con esta distribucin, el compuesto de arriba parecera ser una cadena de pentano (en gris), que en el
carbono dos tiene un radical etilo (circulado), por lo que lo denominaramos 2-etil Pentano (un etilo en car-
bono 2 de una cadena de cinco carbonos).

Pero, si miramos con atencin, se observa que existe una cadena de seis carbonos (en gris) y un metilo
(circulado) en carbono 3 de la cadena, por lo que el nombre correcto es: 3 metil hexano. Obsrvese que se
trata de un mismo compuesto, de frmula C7 H16

Ejemplo correcto

b) Numeracin de los sustituyentes: Para numerar los sustituyentes, como vimos

en el ejemplo correcto ubicamos un grupo etilo en carbono 3. Pero si hubi-
ramos contado desde la derecha, sera 4- etil hexano, y esa denominacin es
incorrecta ya que se debe tratar de que los nmeros de los carbonos sustituidos
sea el ms bajo.
Alcanos

Los alcanos constituyen lo que se denomina una serie homloga. Cada uno de los compuestos
de la serie, se diferencia del anterior y del posterior en un mismo grupo (-CH2 en el caso de
los alcanos). Esta homologa se manifiesta en propiedades que van variando paulatinamente.
Los primeros cuatro alcanos son gaseosos, los siguientes son lquidos hasta el 15; el 16 (hexa-
decano) ya es un slido. Tambin se observa que los puntos de fusin y de ebullicin como as
tambin la densidad se incrementan a medida que aumenta el peso molecular en la serie. Son
menos densos que el agua y no se disuelven en ella.

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 Bioqumica

Ciclo Alcanos

Son hidrocarburos cuya estructura central es un ciclo, es decir que son alcanos, que cierran su
cadena abierta, para formar un ciclo. Cada carbono ocupa un vrtice, a los cuales se unen dos
hidrgenos por cada uno. Para ello debieron perder dos hidrgenos, uno de cada extremo, para
poder enlazar sus valencias libres entre s. Llevan el mismo nombre que el alcano correspon-
diente, pero anteponiendo la palabra ciclo. El primer cicloalcano de la serie es el ciclo propa-
no, compuesto de tres carbonos, que adquiere forma triangular. El segundo, el ciclo butano es
un cuadrado, el tercero el ciclo pentano adquiere la forma de un pentgono y el ciclo hexano
se asimila a un hexgono. Los ciclo alcanos son compuestos ms reactivos que los alcanos co-
rrespondientes, ya que son ms inestables por su tendencia a abrir el ciclo. Tambin presentan
mayor punto de fusin, mayor punto de ebullicin y mayor densidad que el alcano homlogo
correspondiente. Si recordamos que el ngulo de enlace normal del carbono es de 109, vea-
mos cmo se desva de ese valor de acuerdo con la figura que adquiera el ciclo; al tener que
conformar un tringulo en el ciclo propano, sus ngulos debern ser de 60, en el ciclobutano
(cuadrado) ser de 90, en el ciclopentano de 108, y en el ciclohexano de 120. Cuanto
mayor sea la diferencia entre los ngulos de los compuestos, y 109, ngulo normal de enlace
simple, mayor ser la tensin e inestabilidad de esos compuestos (tendencia a romperse). Por
esto, en el ciclo propano y en el ciclo butano, las tensiones son grandes por lo que cuando
reaccionan tienden a romper el ciclo, dando compuestos de adicin. (Por ejemplo adicionan
un halgeno, como bromo y abren su cadena para originar halogenuros [bromuro] de alquilo.

Teora de las tensiones de Baeyer

Cuanto mayor sea la desviacin de los ngulos respecto de 109,

ms inestable y en consecuencia ms reactivo ser el compuesto.

En razn de ello, el ciclopropano y el ciclobuntano reaccionan con ruptura del ciclo. En cambio el ciclo pen-
tano, que posee ngulos muy similares a 109, origina compuestos sin romper su ciclo, por lo que origina
compuestos de sustitucin (reemplaza hidrgenos por otros grupos qumicos). El ciclo hexano con ngulos
de 120, debera ser ms inestable que el ciclopentano, pero no lo es. Pareca muy difcil en base a las ten-
siones que existieran compuestos cclicos de 7, 8 o ms carbonos. Sin embargo, se conocen ciclos de 32
tomos. Esto puedo ser explicado por la teora de Sachse.

Teora de Sachse y Mohr

Los ciclos de 6 o ms tomos de carbono muestran algunos tomos fuera del plano, lo cual modifica los ngulos y alivia las
tensiones, justificando la existencia de esos cicloalcanos de nmero superior.

Mientras el ciclopentano sigue muy bien el plano, el ciclohexano se deforma para aliviar tensiones y presen-
ta carbonos fuera del plano (Teora de Sachse y Mohr), en conformaciones silla y bote. La conformacin
silla es ms estable que la bote, ya que en esta ltima los carbonos 3 y 6 pueden tener impedimentos est-
ricos, sobre todo en los compuestos sustituidos. La forma bote giro (twist) es una forma girada que aleja los
referidos carbonos. Existe otra forma intermedia que es la media silla.

57
 Luis E. Simes

tomado de ucv.cl

Los cicloalcanos y sus derivados son aislados principalmente del petrleo, ms especficamente de la frac-
cin nafta, por lo que se los engloba como naftenos. El ciclopropano es un potente anestsico, y ciertos
derivados de cicloalcanos presentes en ciertos vegetales (agrupados como terpenos) los caracterizan por
color, aroma y propiedades. (Pineno en el pino, jazmona en el jazmn, piperitona en la menta, etc.)
Heterociclos

Los ciclos que se han considerado hasta aqu, estn conformados exclusivamente por carbo-
nos. Pero existe una enorme serie de ciclos que adems de carbono poseen otros tomos como
nitrgeno, oxgeno o azufre. A ste tipo de estructuras que dan base a innumerables sustancias
de trascendencia, se los denomina heterociclos. A continuacin se muestran ejemplos, los que
sern tratados en los casos particulares en los que intervengan en sustancias que se estudian
en la materia.

Furano Pirrol Imidazol Pirazol

Pirano Piridina Pirazina Pirimi-
dina
Radicales

Se denominan radicales a aquellas estructuras qumicas que poseen una o ms valencias de

enlace libres. Son tomos o molculas muy reactivas, por cuanto todo electrn de enlace tiene
avidez por combinarse con otras estructuras y as bajar su alta energa de excitacin, formando
nuevas molculas. Los radicales de hidrocarburos (de alcanos, alquenos, cicloalcanos, benc-
nicos por ejemplo) se originan cuando sus molculas homlogas pierden hidrgeno, originan-
do radicales, en general, con una valencia libre.

Los radicales originados en alcanos se llaman alquilos y los de los cicloalcanos cicloalquilos
respectivamente. Al transformarse en radicales, se cambia el sufijo ano de los alcanos por ilo.

La frmula general de los radicales es Cn H2n+1

58
 Bioqumica

Los radicales de los alcanos se denominan alquilos (Metilo, propilo, pentilo, fenilo, bencilo).
Alquenos

Se denomina alqueno a todas las estructuras que formadas por Carbono e Hidrgeno, presen-
ten al menos una doble ligadura entre dos carbonos consecutivos.

La presencia de uno o ms dobles enlaces en una estructura hidrocarbonada, modifica las pro-
piedades respecto de su homlogo respectivo.

Los alquenos tambin constituyen una serie homloga, de manera tal que se verifican modifi-
caciones paulatinas de sus propiedades, conforme se modifica el nmero de carbonos.

En la serie de alquenos, el primero es el eteno, ya que no puede haber alquenos con un solo
carbono. El propeno y el buteno son gaseosos y hasta el decaocteno (18C) son lquidos. Tie-
nen mayor densidad que los alcanos correspondientes, y menores puntos de fusin y ebulli-
cin. Son insolubles en agua y solubles en alcohol y en ter.

Los alquenos tienen una propiedad muy importante: su capacidad de polimerizacin. Los
polmeros son grandes molculas conformadas por unidades repetitivas unidas, que se deno-
minan monmeros. Los polmeros se encuentran en sustancias biolgicas (como el almidn,
el glucgeno), o en molculas sintticas de variados usos como los plsticos, el tefln, el po-
lietileno, poliestireno y el plexigls, entre una gran cantidad de ejemplos.

Por otra parte la presencia de un segundo enlace entre carbonos, ocasiona que:

a. El enlace resulte ms corto. Mientras el enlace entre carbonos con enlace simple es de 1,54
A, en el doble enlace ser de 1,34 A

b. Tambin tienen mayor energa de enlace. Mientras la energa del enlace simple es de 83
Kcal/ mol, la del enlace doble es 1,46 A.

c. En el enlace doble, uno de ellos es de tipo sigma (s), por superposicin de orbitales hbridos
sp2, bastante estable. El segundo enlace, (pi) se forma por los orbitales p, perpendiculares al
plano de la molcula y son ms inestables, lo que les aporta mayor reactividad que la de los
respectivos alcanos.

d. Los carbonos unidos por enlace tienen su rotacin restringida, cosa que no ocurre en el
enlace simple. Esto genera mayor rigidez a la estructura y la posibilidad de originar ismeros
geomtricos.

Los alquenos adquieren gran importancia en la conformacin de polmeros que han modifica-
do la industria y las condiciones de vida a travs de la sntesis de numerosas sustancias como
los plsticos, cauchos, tefln, polietilenos, poliestirenos, etc.

La frmula general de los alquenos es Cn H2n

Alquinos

Los alquinos son hidrocarburos que poseen al menos un triple enlace entre dos carbonos con-
tiguos. Ese triple enlace est formado por un enlace sigma (s) y dos enlaces pi, perpendicula-
res al plano y entre s. Tambin constituyen una serie homloga de propiedades paulatinamen-

59
 Luis E. Simes

te cambiantes. Sus nombres utilizan el sufijo INO. El primer alquino es el Etino (o acetileno).
Cuando resulta necesario indicar la posicin del triple enlace por existir alternativas para su
ubicacin, se coloca un nmero antecediendo al nombre (Por ejemplo, 1-Butino o 2- Butino)
Estos compuestos menos densos que el agua, son ms densos que los alquenos respectivos, y
resultan solubles en solventes orgnicos e insolubles en solventes acuosos.

La existencia de triple enlace confiere una serie de propiedades particulares a este grupo de
molculas.

a. stos son ms inestables que los enlaces simples lo que le confiere mayor reac-
tividad a estos compuestos.

b. El enlace triple resulta ms corto (1,20 A) y de mayor energa (200 Kcal/mol)

que los dobles y simples enlaces.

La frmula general de los alquinos es Cn H2n-2

Compararemos en la siguiente tabla, las propiedades de un representante de cada grupo de los hidrocarbu-
ros

PENTANO CICLOPENTANO 1-PENTENO 1-PENTINO

C5H12 C5H10 C5H10 C5H8
Est. agregacin lquido lquido lquido lquido
Densidad (g/ml) 0,63 1,88 0,641 0,70
Pto. Fusin (oC) -131 - 49 -165 -95
Pto.Ebullicin ( C)
o
36,2 49 30,1 40

Hidrocarburos bencnicos
Durante mucho tiempo, a ciertos compuestos provenientes de rboles, flores y otras fuentes naturales se
los agrup bajo el nombre de compuestos aromticos, en razn de presentar diferente variedad de fragancias.
Pero esta gran diversidad se corresponda con un alto nmero de diferentes estructuras qumicas. Por eso en
la actualidad se prefiere agrupar a las sustancias que poseen uno o ms ncleos bencnicos bajo el nombre de
hidrocarburos bencnicos, ya que el compuesto original de la serie es el Benceno.

El benceno es una estructura cclica de frmula C6H6. Cost muchos aos de trabajo poder determinar su
estructura molecular, ya que la frmula mnima establecida era CH, y esta proporcionalidad era casi imposible
de explicar para tomos de carbono de valencia 4 enlazados a hidrgenos de valencia 1. Fue Kekul quien es-
tableci que el benceno estaba constituido por 6 carbonos enlazados en un ciclo hexagonal y con un hidrgeno
en cada carbono. Para cumplimentar con las exigencias de la valencia, explic que existan tres doble enlaces
alternados. Pero como el benceno no presenta dos compuestos alternativos derivados, esos dobles enlaces no
podan estar fijos. Aplicando la teora de la resonancia de Heisenberg (fenmeno por el cual entre los dobles
enlaces alternados se produce un desplazamiento de pares electrnicos generando un efecto estabilizador),
se pudo explicar que los tres dobles enlaces del benceno estn constantemente resonando, es decir, cam-
biando de lugar.

60
 Bioqumica

Ello lleva a que la mayora de las veces el benceno es representado como un hexgono que muestra sus
seis carbonos con hidrgeno, mientras un crculo simboliza a sus tres doble enlaces alternantes.

En este texto utilizaremos preferencialmente la forma de doble enlace.

En sntesis, el anillo bencnico es una estructura muy estable, producto de los efectos de resonancia por el
cual los electrones de los dobles enlaces, estn en constante cambio de posicin.

El Benceno, puede originar compuestos de

i. Sustitucin, como en el clorobenceno, donde un tomo de ste halgeno

reemplaza a un hidrgeno. C6H6 C6H5Cl

ii. Adicin: Se agregan dos tomos por cada doble enlace que se transforma en
simple, como en el ciclohexano. C6H6 C6H12

El Benceno puede fusionarse con otras molculas iguales, generando molculas policclicas
como

61
 Luis E. Simes

FUNCIONES OXIGENADAS SIMPLES

Hasta aqu hemos descripto funciones qumicas binarias, formadas slo por tomos de carbono e hidrge-
no: hidro-carburos [C; H]. Cuando se oxidan se obtienen sustancias ternarias que contienen C; H y O. En este
grupo encuadraremos a los alcoholes, aldehdos, cetonas y cidos.
a. ALCOHOLES

Los Alcoholes conforman un grupo de sustancias caracterizadas por la presencia del grupo funcional oxhi-
drilo. Se clasifican en primarios, secundarios o terciarios, segn el tipo carbono sobre el cual se ubique el
grupo funcional.

Alcohol primario : - CH2 OH ;

Alcohol secundario : - CH OH ;

Alcohol terciario : - CH OH ;

Nomenclatura: los alcoholes se denominan igual que los alcanos correspondientes, pero cambiando el sufijo
ano por OL.

La presencia de oxhidrilo les confiere a los alcoholes propiedades polares e hidrosolubilidad. En razn de
que a diferencia de los alcanos los alcoholes establecen enlaces de puente hidrgeno entre sus molculas,
tienen temperaturas de ebullicin ms elevadas que sus alcanos correspondientes. A medida que aumenta
el nmero de carbonos la proporcin de OH- respecto del resto de la molcula disminuye y en consecuencia
la serie va adquiriendo propiedades no polares. Prevalece en estos casos la proporcin de largas cadenas no
polares frente a un slo oxhidrilo. Por ello, los doce primeros alcoholes son lquidos.

Si se aumenta la cantidad de oxhidrilos las propiedades polares aumentan. Los alcoholes en los cuales se
equilibran las propiedades polares y no polares no disuelven ni compuestos hidrosolubles (por estar rodea-
do de varios carbonos no polares), ni hidrofbicos, ya que estos son repelidos por los oxhidrilos. Cuando el
alcohol posee dos oxhidrilos se denominan genricamente glicoles (por ejemplo, etano DI ol o glicol).
Metanol.

62
 Bioqumica

Es el primer alcohol de la serie: CH3 OH

Es un alcohol soluble en agua, sumamente txico por ingestin o por inhalacin, capaz de atacar el parn-
quima heptico o el nervio ptico produciendo hepatitis o ceguera. En altas dosis (200 ml) es capaz de pro-
vocar la muerte.

Etanol

El ms popular de los alcoholes, denominado alcohol fino o puro, antiguamente llamado alcohol etlico.
CH3 CH2 OH

Presente en las bebidas alcohlicas como vino, cerveza y otras bebidas fermentadas, es translcido, inco-
loro, voltil, y posee un olor caracterstico. Cuando la concentracin alcohlica en las bebidas es mayor del
15%, fue concentrado por algn mtodo de destilacin del fermentado.

El alcohol de quemar, tambin llamado desnaturalizado, se logra por el agregado de sustancias desagrada-
bles al paladar (alcohol metlico, derivados de hidrocarburos, alcanfor), a los efectos de disuadir su utiliza-
cin como bebida.

El etanol tiene gran tendencia a absorber agua, por lo cual el alcohol denominado puro tiene un 95% de
pureza, siendo el 5% restante de agua, constituyendo una mezcla azeotrpica.25El etanol al 100%, es deno-
minado alcohol absoluto. Se debe tener bien sellado, a efectos de evitar la absorcin de agua ambiental.

El etanol es producido en los procesos de fermentacin alcohlica por levaduras que actan sobre almidn
u otros azcares, as:

En algunos pases, el etanol se utiliza mezclado con nafta para producir alconafta, la cual produce menos
polucin atmosfrica. No debe confundirse con el biodiesel, que es un producido proveniente de lpidos
vegetales y animales para ser agregado a los combustibles.

Los alcoholes superiores (ms de 20 at. de carbono) se esterifican para formar ceras.

Etilenglicol: es el etanodiol, (CH2 OH - CH2 OH); se utiliza como refrigerante y en la sntesis de polmeros. En
mamferos es un depresor del sistema nervioso central, y a altas dosis (aproximadamente 100 ml.) puede
resultar mortal.

Glicerol: Es un tri alcohol, (propano tri ol), tambin llamado glicerina, de sabor dulzn, que no es txico.
Constituye lpidos como los glicridos y fosfolpidos.

(CH2 OH - CH OH - CH2 OH);

Polioles: Cuando las cadenas poseen mayor longitud podrn tener ms oxhidrilos unidos. As podemos men-
cionar al butano tetra- ol (eritrol), Pentano penta ol (ribitol) y hexano hexol (Glucitol, manitol y galcatol) de
importancia en relacin al grupo qumico de los glcidos.

25 Mezclas de compuestos que poseen punto de ebullicin constante.

63
 Luis E. Simes

Alcohol benclico: Derivado del Tolueno (metil-benceno) se encuentra en aceites esenciales, en ciertas flores
y se utiliz como anestsico y aromatizante. Se obtiene reemplazando en el benceno un hidrgeno por un
grupo alcohol primario ( - CH2 OH).

Fenol: Se denomina fenol a la molcula de benceno que posee un oxhidrilo. Es un slido blanco, cristalino,
irritante y custico. Se utiliza como antisptico y conforma polmeros como la baquelita.

Cresoles: alcoholes derivados del tolueno (metil-benceno), con gran poder antisptico.

Catecol: es el o-dihidroxibenceno, que resulta de inters al formar parte de las catecolaminas, de impor-
tancia como neurotransmisores (adrenalina, noradrenalina, dopamina). Su ismero para es la hidroquinona,
utilizado en revelado fotogrfico y en farmacologa como despigmentador cutneo.

Para y orto hidroxi fenol

Aldehdos y Cetonas

64
 Bioqumica

Como ya se expresara, los aldehdos corresponden a aquella funcin qumica que posee un grupo carbonilo,
(-H C = O) en un carbono primario. Los aldehdos se denominan como el alcano correspondiente, colocando
el sufijo AL: metanal, etanal, etc. Sus nombres comunes son formaldehido y acetaldehdo respectivamente.
El formaldehido es el componente diluido del formol. Si el grupo carbonilo se encuentra sobre un benceno,
estamos en presencia del benzaldehdo.

Las cetonas poseen igualmente el grupo carbonilo, pero sobre un carbono secundario. Se denominan como
el alcano correspondiente, pero con la terminacin ONA: propanona, butanona, etc.

El grupo carbonilo dota a estos compuestos de propiedades polares. Ello obedece que el O es electronega-
tivo y genera una polaridad en el grupo, donde la densidad de carga negativa se ubica sobre el oxgeno y la
densidad elctrica positiva sobre Carbono:
+
C = O -

La propanona es la comnmente denominada acetona. Los aldehdos y cetonas forman parte de compues-
tos que determinan el aroma particular de muchas plantas y flores.

Juegan un rol fundamental en la composicin de los glcidos, al conformar aldosas y hexosas. Cuando reac-
cionan con los grupos oxhidrilo, establecen los enlaces hemiacetlicos, identificado por un puente oxgeno,
presentes en los glcidos cclicos, como ciclos furano o pirano.

Quinonas: las quinonas (compuestos cclicos di ona), como la benzoquinona, naftoquinonas, constituyen
un grupo de inters biolgico ya que cumplen funciones en vegetales, hongos y mamferos. Conforman la
estructura de la vitamina K, se encuentra en la alfalfa, y como colorante rojo en la alizarina, o marrn en la
fumigatina del hongo aspergillus.

ACIDOS

La funcin cida (carboxlica) es primaria, y se caracteriza estructuralmente por poseer uno o varios grupos
carboxilos, para formar mono o policidos.

65
 Luis E. Simes

OH
C=O

Los cidos se obtienen por la oxidacin fuerte de un alcohol primario, o por la oxidacin suave de un aldeh-
do.

Se nombran como el alcano correspondiente con la terminacin OICO. En algunos casos se mantiene el uso
del nombre tradicional, (cido actico) aunque esos nombres tienden a ser reemplazados por sus equiva-
lentes IUPAC (etanoico).

El grupo carboxilo, al igual que el grupo carbonilo, es un grupo polar, con la densidad de carga positiva cer-
cana al carbono y la densidad negativa alrededor del oxgeno:

La propiedad principal es su carcter cido que le permite establecer interacciones con grupos afines y par-
ticipar en reacciones de equilibrio cido-base.

Cuando los cidos carboxlicos u orgnicos poseen ms de 10 carbonos se los denomina cidos grasos, por
su importante participacin en la composicin de ciertos lpidos, como los acil glicridos y los fosfolpidos.
Los de mayor presencia en estos sistemas, son los cidos grasos con un nmero par de tomos de carbono.
Ello se debe a que en los procesos biolgicos son originados por sntesis a partir de dos cidos menores
iguales, lo que concluye en la conformacin de molculas cidas que por duplicacin dar un nmero par
de tomos de carbono.

Los cidos carboxlicos pueden ser saturados o insaturados segn posean ligaduras simples o ligaduras do-
bles respectivamente. Cuando se trate el tema de lpidos resaltaremos las caractersticas e impacto biolgi-
co y fisiopatolgico de cada uno de ellos.

Los cidos que poseen dos grupos carboxlicos son denominados DICARBOXILICOS, como lo son el cido
oxlico o el cido malnico.

Por su participacin en ciclos metablicos, son importantes los cidos TRIcarboxlicos.

Dentro de los cidos aromticos podemos mencionar al cido Benzoico,

y al cido m- venzo di oico* :

66
 Bioqumica

*El segundo Carboxilo se ha simplificado.

El cido saliclico extrado del sauce tiene propiedades antipirticas y antiinflamatorias. Su acetilacin origina
cido Acetil-Saliclico (aspirina).

Dentro de los cidos con funciones mixtas mencionamos por su importancia al cido gliclico (etano di-
oico), al lctico (propanol-oico) al pirvico (propanona oico) y al saliclico (o-hidroxibenzoico).

Se detallan en la siguiente tabla los principales cidos orgnicos con sus nombres vulgares:

Nombre IUPAC Nombre Vulgar

NC Frmula
cido cido
1 H COOH Metanoico Frmico
2 CH3 COOH Etanoico Actico
3 CH3 CH2 - COOH Propanoico Propinico
4 CH3 CH2 CH2 -COOH Butanoico Butrico
5 CH3 CH2 - CH2 - CH2 - COOH Pentanoico Valrico
16 CH3 (CH2) 14 - COOH Hexadecanoico Palmtico
18 CH3 (CH2) 16 - COOH OctadecAnoico Esterico
18 CH3 (CH2) 7 CH=CH - (CH2) 7 COOH 8- OctadecEnoico Oleico
20 CH3 (CH2) 3 ( CH2 CH=CH) 4 - (CH2) 3 -COOH 5,8,11,14- Eicosatetraenoico Araquidnico
2 COOH COOH Etano DI oico Oxlico
3 COOH (CH2) COOH Propano Di oico Malnico
4 COOH (CH2)2 COOH Butano Di oico Succnico

Ciertos derivados de cidos tienen importancia metablica. Por ejemplo, en el Ciclo de Krebs, proceso aer-
bico del metabolismo en las mitocondrias, es tambin llamado de los cidos tricarboxlicos.

67
 Luis E. Simes

En este ciclo, juega un rol muy importante el cido

ctrico, y otros derivados de cidos, que muchas ve-
ces se encuentran expresados como sus radicales:
citrato, oxalacetato, malato, fumarato, succinato,
etc.

Estos alfa hidroxicidos son muy abundantes en la

naturaleza:

El cido lctico en la leche, el mlico en la manza-

na, el tartrico en las uvas y el ctrico en limones y
naranjas.

FUNCIONES OXIGENADAS COMBINADAS

Las funciones oxigenadas compuestas o combinadas se caracterizan por poseer puente oxgeno. A diferen-
cia del puente hidrgeno, que es una interaccin intermolecular, sostenida sobre interacciones electro mag-
nticas, estos puente oxgeno estn establecidos por uniones qumicas intra moleculares covalentes

Las funciones oxigenadas que hemos visto hasta el momento pueden reaccionar entre s para formar com-
puestos ms complejos, como producto de esas interacciones qumicas.

Es as que podemos mencionar la capacidad de reaccin que tiene el grupo oxhidrilo consigo mismo o con
aldehdos, cetonas o cidos.

En este punto es importante hacer notar que el grupo carbonilo es un grupo funcional dinmico, capaz de
coexistir simultneamente bajo dos formas. En la estructura de la izquierda se encuentra como carbonio
(Carbono con doble enlace al oxgeno). En la segunda, el doble enlace se ubica entre los dos carbonos y el
carbonilo se transforma en oxhidrilo. Estas dos estructuras interconvertibles establecen un equilibrio din-
mico denominado equilibrio Ceto enol
C COH
I II
C=O C

El nombre corresponde a la realidad en que el carbonilo ligado a carbono secundario constituye la funcin
qumica cetona (de all ceto). Adems, como ya viramos respecto de la nomenclatura de los compuestos
orgnicos, el sufijo eno corresponde a doble ligadura y ol a alcohol, es decir que un enol es un grupo qumi-
co alcohlico sobre carbonos con doble enlace. Este tipo de equilibrio en dos estados se denomina tauto-
mera, y puede verse en el diseo siguiente:

Estos enlaces son polares, recayendo la densidad de carga positiva sobre carbonos e hidrgenos y la den-
sidad de carga negativa sobre los tomos de oxgeno. Estas condiciones generan compuestos reactivos ca-
paces de combinarse entre s, entre los que podemos mencionar teres, steres, anhdridos, hemiacetales,
etc.

68
 Bioqumica

teres: son compuestos formados por la combinacin de dos alcoholes con prdida de una molcula de
agua. Los alcoholes intervinientes pueden ser primarios, secundarios o terciarios, alifticos o cclicos.

Los oxhidrilos de cada una de las molculas alcohlicas, reaccionan para formar agua, quedando libres dos
enlaces (uno por cada molcula), lo que genera un puente oxgeno entre dos restos hidro carbonados pro-
venientes de los alcoholes.

R1 - OH + HO- R2 ====== R1 -O- R2 + H.OH

Si R1 y R2 son iguales, decimos que el ter obtenido es simtrico, pero si R1 es distinto R2 podemos afirmar
que se trata de un ter asimtrico. Por ejemplo:

CH3 O - CH3 ,

el ter metlico proviene de la reaccin de dos alcoholes iguales (metanol) Se trata de un ter simtrico. Su
nombre IUPAC es: metano oxi metano.

Por el contrario, si reacciona un metanol con un propanol, se obtendr el ter metil proplico:
CH3 O - CH2 - CH2 - CH3

cuyo nombre IUPAC es metanooxipropano.

Nomenclatura: los teres se denominan colocando el nombre del alcano menor, seguido de la palabra oxi y
luego el nombre del alcano ms grande:

El metano oxi propano es ejemplo de un ter asimtrico.

El ter etlico ( etano oxi etano ) fue muy utilizado durante muchos aos como anestsico por ser depre-
sor del sistema nervioso central.

steres:

Los steres son compuestos que se originan mediante la combinacin de un alcohol con un cido. Se produ-
ce una reaccin anloga a la de los teres, ya que se produce una deshidratacin por participacin del oxhi-
drilo del cido con el hidrgeno del oxhidrilo del alcohol.

Los enlaces libres se combinan conformando otra vez un puente oxgeno. La diferencia con los teres radi-
ca en que mientras en el caso de los teres ambos carbonos unidos al oxgeno estn unidos a hidrgenos,
mientras que en el caso de los steres, uno de los carbonos unidos al oxgeno slo posee hidrgenos, mien-
tras que el otro carbono ( proveniente del cido) posee un enlace oxo (= O).

Los steres se denominan a la manera de las reacciones cido base, con el cido terminado en ATO y el alco-
hol terminado en ILO

69
 Luis E. Simes

Propanoato de etilo. Insistimos en que el lado en que se encuentre el grupo oxo (=O),
es el correspondiente al cido (en este caso propanoico que ha reaccionado con etanol)

O
CH3 CH2. C O CH2 CH3

Etanoato de Propilo. El lado correspondiente al grupo oxo tiene dos carbonos, es decir cido etanoico fren-
te a propanol.

O
CH3 . C O CH2 CH2 CH3

Los steres son compuestos muy importantes ya que estn profusamente difundidos en la naturaleza. Son
lquidos que poseen aromas agradables a frutos y flores.

El etanoato de pentilo tiene un aroma semejante a banana, el etanoato de etilo al anan. Ya habamos di-
cho que el glicerol forma parte de los glicridos. Estos son teres del glicerol con cidos grasos. Los steres
que poseen molculas de alcohol ms largas, conforman ceras (de abejas, de carnauba, esperma de ballena,
etc.)

Saponificacin: cuando se hidroliza un ster en medio alcalino se recupera el alcohol y una sal del cido que
la formaba. Estas sales alcalinas se denominan jabones.

Anhdridos

Los anhdridos por su parte son el producto de la reaccin de dos cidos con prdida de una molcula de
agua. Los enlaces libres se unen conformando tambin puente oxgeno. En el caso de los anhdridos, los dos
carbonos unidos al oxgeno tienen grupos oxo (=O).
Nomenclatura

Se los denomina con la palabra anhdrido seguido de los nombres de los cidos que lo forman. Cuando son asim-
tricos (al igual que en el caso de los teres) se nombra el ms pequeo primero.

O O

CH3 CH2. C O C . CH3

70
 Bioqumica

O O
CH3 CH2. C O C . CH3

Anhdrido etan propanoico

Acetales: cuando dos alcoholes se combinan con un carbonilo de un grupo ceto o de un aldehdo, se forma
un acetal. En el primer paso se une un alcohol a un ceto formando un hemiacetal. Los hemi- acetales son
formas muy comunes en los glcidos. En una segunda etapa el hemiacetal se combina con otro alcohol
conformado el acetal. En la primera etapa no se pierde agua, sino que se redistribuyen los enlaces, y en el
segundo se produce una prdida de agua. En el hemiacetal se observa un puente oxgeno. Uno de los carbo-
nos (el proveniente del alcohol), al igual que en los teres estar unido a hidrgenos y el otro, proveniente
del aldehdo o cetona, tendr un oxhidrilo. La segunda etapa mostrar la prdida de una molcula de agua y
la formacin del acetal el que denotar un puente oxgeno unido a cuatro grupos alqulicos.

Cuando el cido que participa del enlace anhdrido es el cido fosfrico, se originan enlaces anhdrido de
alta energa, muy tiles para aportar energa metablica en diferentes vas.

COMPUESTOS TERCIARIOS DE AZUFRE Y NITROGENO

Hasta aqu estudiamos los compuestos ternarios con C, H y O, producto de agregar oxgeno a los hidrocar-
buros. En el caso de los compuestos ternarios azufrados, nos referiremos a compuestos que poseen C, H y
azufre.

Mencionaremos algunos ejemplos de compuestos azufrados.

TIOLES

En razn de que el Oxgeno y el Azufre pertenecen al mismo grupo qumico comparten propiedades seme-
jantes, lo que los faculta para originar compuestos similares. Por ello, es posible reemplazar el oxgeno de
los alcoholes por el azufre.

As como la funcin qumica alcohol est determinada por el grupo funcional oxhidrilo (HO-), los tioles estn
determinados por el grupo funcional sulfhidrilo (HS-), en el cual el oxgeno ha sido reemplazado por un
tomo de azufre.

CH3 OH (Metanol) CH3 SH (MetanTIol)

Al igual que los alcoholes, los tioles pueden ser primarios, secundarios o terciarios, de acuerdo con que el
carbono sobre el que se encuentre el sulfhidrilo (HS-) es decir, primario, secundario o terciario.

As como los HO- de los alcoholes interaccionan entre s, para formar teres, cuando los que reaccionan, en
lugar de alcoholes son tioles los que reaccionan a travs sus grupos sulfhidrilos, se originan Tioteres.
CH3 - O - CH3 CH3 - S - CH3

ter metlico Tio ter Metlico

71
 Luis E. Simes

Sulfamidas:

Se conocen como sulfas. Se caracterizan por poseer un grupo sulfoamido ( SO2NH2) sobre un anillo benc-
nico. La sulfamida activa tiene otro grupo amino en posicin para.
SO2NH2

. NH2

COMPUESTOS NITROGENADOS
AMINAS

Las aminas son compuestos ternarios nitrogenados que se originan al combinar amonaco (NH3) con Alco-
holes. Su grupo funcional es el amino - NH2.

Metil Amina : amina primaria

Segn se combinen uno, dos o tres alcoholes las aminas sern primarias, secundarios o terciarias:

Tri Metil Amina : amina terciaria

Cuando una molcula de amonaco se combina con cuatro alcoholes, se genera una molcula de amonio
cuaternario, unido a cuatro carbonos, y que queda cargada positivamente:
=N+=

Las aminas tienen comportamiento bsico en agua ya que el oxgeno es ms electronegativo que el nitrge-
no y puede recibir el par electrnico libre. El nitrgeno es dador y el oxgeno receptor de electrones (bases y
cidos de Lewis respectivamente).

H 2O + NH3 == HO- NH+ 4 == HONH 4

cido de Lewis Base de Lewis Hidrxido

de amonio

72
 Bioqumica

Cuando el amonaco se comporta como Amonio, NH+ 4 , formar sales y bases de amonio cuaternario.

Un representante de ste grupo son la colina y su ster acetilado, la acetilcolina:

(CH3)3 N+ CH2 CH2 OH (CH3)3 N+ CH2 CH2 O- CO CH3

La colina esterificada con cido fosfrico produce lecitinas y conforma la fosfatidil colina dentro de los fosfo-
lpidos.

La acetil colina tiene propiedades en la placa mioneural. Est regulada por la acetilcolinesterasa. La inhibi-
cin de esta enzima es objetivo de muchas toxinas, produciendo relajacin muscular total con parlisis y
muerte.

AMIDAS: Son compuestos formados por la combinacin de amonaco con un cido. El grupo funcional que-
da conformado por nitrgeno unido a un carbonilo (carbono con oxgeno).
Cuando una amida se deshidrata genera un nitrilo: N = C H y de su hidrogenacin se produce una imina

R CO NH2 RCN R CH = NH

Las amidas son importantes como grupos de caracterizacin en las protenas. En la urea, el grupo carbonilo
se une a dos grupos amino y la polimerizacin de amidas produce derivados del nylon, como la poliamida.
La urea es muy particular: recordemos que fue la primer sustancia natural sintetizada en el laboratorio, es el
producto final del metabolismo de las protenas; es un abono fundamental por su gran contenido de nitr-
geno y se utiliza en la industria de los plsticos.
NH2 CO NH2
Urea

Dentro de los nitrilos mencionamos el metano nitrilo, por su importancia como veneno: su nombre comn
es cido cianhdrico. Uno de los venenos ms potentes, capaz de inhibir enzimas respiratorias. Fue utilizado
como plaguicida, aunque por su peligrosidad su uso fue discontinuado.

ISOMERIA

Antes de ingresar en este tema, recordaremos que los elementos qumicos estn representados por su sm-
bolo qumico (Ag representa plata, Na sodio) mientras que las molculas representan las asociaciones. Un
subndice representa la cantidad de veces que ese elemento se encuentra en la molcula.

As, Cl2 muestra al cloro, el NH3 representa al amonaco, el H2CO3 al cido carbnico y el CH3- CH2-CH3 al pro-
pano, en sus estados funcionales.

Estas representaciones simblicas nos informan cules elementos y en qu proporcin se encuentra cada
uno de ellos en una determinada sustancia En muchos casos, estas representaciones bajo la denominacin
de frmula molecular resultan suficientes para identificar a la sustancia.

Sin embargo, existen muchos otros casos, en los que la frmula molecular no resulta suficiente para aseve-
rar la verdadera identidad de la sustancia o a un estado particular de ella.

73
 Luis E. Simes

As, ejemplos como el pentano, (C5H12) el butenodioico, (C4H4O4), el pentino (C5H8), el propanal (C3H6O), son
apenas unos pocos ejemplos de sustancias que por presentar isomera, requieren de que su frmula deba
ser desplegada en el plano o en el espacio a los efectos de poder visualizar sus diferenciales estructurales.
En otros casos, hasta resulta necesario realizar un desarrollo en 3-D para poder apreciar sus diferencias in-
trnsecas.

Todos estos casos son encuadrados en el captulo de la isomera.

La palabra isomera proviene del griego, isos: igual, meros: partes), es decir iguales partes.

Eso significa que son las mismas partes las que constituyen a esos compuestos pero la distribucin de sus
tomos es diferente.

Isomera se define como el fenmeno por el cual compuestos que poseen la misma frmula molecular, pre-
sentan diferentes propiedades fsicas, qumicas y / o biolgicas

A los efectos de evidenciar las diferencias en funciones y propiedades, se clasifica al fenmeno de isomera
en tres grandes campos:
a) Isomera plana

b) Isomera espacial

c) Isomera conformacional

A. ISOMERIA PLANA

La isomera plana es aquella que puede ser establecida en un plano, con la finalidad de determinar sus va-
riantes. Podemos discriminar en ella, al menos, cuatro clases:
1. Isomera de Posicin

2. Isomera de Cadena

3. Isomera de funcin

4. Tautomera

1. Isomera de posicin: Se produce cuando sobre una misma cadena se observan sustituyentes en distinta
posicin.

Por ejemplo si hablamos del Propanol, pensamos en un alcohol de 3 carbonos, por lo que su frmula general
ser: C3H8O
Ahora bien esta frmula puede corresponder a distintas variantes, segn adopte distinta distribucin de sus
tomos:
CH2OH CH2 CH3 CH3 CHOH CH3
Ahora bien, ambas frmulas corresponden al propanol, pero en el primer caso se trata del propanol 1, mien-
tras que el Segundo es el propanol 2, en razn de la posicin del grupo funcional oxhidrilo, ubicado en c1 y
en c2 respectivamente. Al cambiar la posicin de un grupo (oxhidrilo) sobre una misma cadena (3 carbonos
lineales), decimos que el propanol 1 y el propanol 2 son ejemplos de isomera de posicin.
En este grupo se encuentran por ejemplo el Buteno 1 y el buteno 2, (cambia la posicin del doble enlace),
El hexino 1, el hexino 2 y el hexino 3 (cambia la posicin del triple enlace sobre la misma cadena), el Cloro
buteno 1 y el clorobuteno 2 (se modifica la posicin del tomo de cloro) siempre sobre iguales cadenas, el

74
 Bioqumica

1,3 diamino benceno y el 1,2 di amino benceno: hay dos grupos amino sobre un ncleo bencnico. En un
caso en posicin 1 y 3 y en el otro en 1 y 2.
En el caso de los ncleos bencnicos, si hay un solo sustituyente en el anillo no es necesario nombrar ningu-
na posicin. En cambio, para dos sustituyentes se utiliza la nomenclatura orto, meta y para.
Si los sustituyentes estn en carbonos vecinos (1 y 2) se los llama orto ; si estn en 1 y 3 se los llama meta
y si estn en 1 y 4 se los llama para.
Veamos un ejemplo para el di metil benceno ( dos metilos sobre un grupo benceno, donde X representa
CH3)

orto di metil benceno para di metil benceno para di metil benceno

Cuando el benceno tiene tres sustituyentes, se utiliza la nomenclatura para trisustituidos: vec , sim y asim
segn los tres sustituyentes estn, respectivamente:
VEC: vecinal, donde los tres sustituyentes se encuentran sobre carbonos vecinos (1,2,3) ;

SIM: posicin simtrica, o alternados (1,3,5) y

ASIM: o asimtrica, que posee dos sustituyentes continuos y el tercero alternado: (1,2,4).

Vec (1,2,3) sim (1,3,5) asim (1,2,4)

Atencin!!

Slo se puede considerar isomera de posicin, cuando se compare la posicin de los sustituyentes sobre
dos cadenas o ciclos idnticos.

ISOMERA DE CADENA

Se presenta en aquellos compuestos que teniendo la misma frmula molecular, muestra diferente forma en
su cadena:

75
 Luis E. Simes

Por ejemplo el pentano, el metil butano y el 2,2 di metil propano, presentan la misma frmula molecular (
C5H12)

CH3 CH3
CH3- CH2- CH2- CH2- CH3 ; CH3 - CH - CH2- CH3 ; CH3- C - CH3
CH3

La frmula molecular en los tres compuestos es la misma, pero al tener diferente disposicin en sus cade-
nas, se produce el fenmeno de isomera. Es isomera de cadena, ya que el primero tiene una cadena de
cinco carbonos, el segundo una de cuatro y el tercero una de tres. Entonces, al coincidir su frmula molecu-
lar y ser distintas sus cadenas, se encuadran en la isomera de CADENA.

Atencin!!

Slo se puede hablar de isomera de cadena, cuando la cadena es diferente en ambos compuestos.

ISOMERIA DE FUNCION

La isomera de funcin es un tipo de isomera que se produce cuando dos o ms sustancias con la misma
frmula molecular, poseen diferentes grupos funcionales, es decir que son sustancias que pertenecen a dis-
tintos funciones qumicas.

Por ejemplo, cuando comparamos el etanol y el etano oxi etano (un alcohol y un ter respectivamente),
vemos que sus frmulas moleculares coinciden, pero son dos especies qumicas diferentes. En ese caso, los
encuadramos en los ismeros de FUNCION.
CH3 CH2OH y CH3 O CH3

Alcohol eter

Formula molecular: C2H6O.

TAUTOMERIA

Es un tipo de isomera dinmica, ya que no estamos comparando dos compuestos que tengan la misma fr-
mula molecular, sino que se trata de un compuesto que puede coexistir en al menos dos estados.

Un ejemplo de esto lo constituyen las cetonas y los aldehdos. Estos compuestos, al tener un par electrnico
doble sobre el oxgeno pueden encontrarse en otro estado. Ese par electrnico se desplaza desde el enlace
del C con el O, y se coloca entre dos carbonos. Es decir que la cadena carbonada adquiere un doble enlace.
Por otra parte, el Hidrgeno se desplaza sobre el oxgeno, para formar un alcohol. Este es un equilibrio ceto:
enol o aldo-enol.

-CH2 - C = O (ceto) -CH = C - OH (enol)

76
 Bioqumica

ISOMERIA ESPACIAL o ESTEREO ISOMERIA

En este tipo de isomera resulta necesario desarrollar las frmulas en el espacio (estreo en griego). Una
misma frmula molecular puede quedar definida en el espacio bajo dos estructuras diferentes y en conse-
cuencia, presentan diferentes propiedades.

Isomera geomtrica

Se produce en aquellas estructuras que poseen ciclos o dobles enlaces. Esta forma fija la rotacin de los
carbonos y sus sustituyentes, ofreciendo variantes diferentes, con los mismos tomos. Mientras el enlace
simple puede rotar libremente, el enlace doble y los ciclos generan planos rgidos.

Los dobles y triples enlaces o los ncleos dan rigidez a los enlaces que determinan posiciones fijas que van
a dar diferentes estructuras.

Sus frmulas moleculares son iguales, como en todo fenmeno de isomera, pero en particular esta, se basa
en que algunos grupos optan por dos posiciones al menos que no son equivalentes y que la rigidez de los
enlaces impide que puedan modificarse.

Si dibujamos un plano, como un cuadrado por ejemplo, que representa un ciclo butano y sustituimos dos
hidrgenos de diferentes molculas por dos tomos de bromo , se pueden dar dos situaciones. Que ambos
tomos sustituyentes estn del mismo lado del plano, o en planos opuestos.

El primer caso se denomina ismero cis di-bromo ciclobutano y el segundo trans- di-bromo ciclobutano.
(Del latn de este lado y del otro lado, respectivamente)

Br

Br Br Br

Otro ejemplo lo constituye el cido butenodioico como mencionramos. Ya que el Carbono 2 y el Carbono 3
del compuesto, estn enlazados doblemente, no pueden rotar, entonces se establecen dos presentaciones
diferentes para el compuesto: la forma cis y la forma trans.

COOH - C - H H - C - COOH

H - C - COOH H - C - COOH

Trans Cis

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 Luis E. Simes

En general, se puede presuponer que los compuestos trans deberan tener menos restricciones estricas
que los cis, ya que los grupos involucrados tienden a estar ms alejados entre s evitando rechazos que ele-
ven la energa del compuesto. Por ello los compuestos cis suelen ser ms densos y menos estables que los
trans. Esto es aplicable a la mayora de las sustancias, aunque no a todas, ya que existen algunas excepcio-
nes producto de distribuciones particulares. Cuando la complejidad de la estructura no pueda ser definida
slo por cis o trans se utiliza la nomenclatura R/S, la cual no abordaremos por no corresponder al enfoque
del presente curso.

ISOMERIA OPTICA

La isomera ptica es un fenmeno que se fundamenta en la diferente accin que algunos compuestos ejer-
cen sobre la luz polarizada. Al producirse esta interaccin con la luz, quedan evidenciadas diferencias es-
tructurales no observables directamente desde la estructura de los compuestos, sino desde esa interaccin
con la luz. De all el nombre de isomera OPTICA.

Espectro visible

400 450 500 550 600 650 700 750

ULTRAVIOLETA AZUL CIANO VERDE AMARILLO NARANJA ROJO INFRAROJO

La luz blanca es un conjunto de ondas electromagnticas de diferentes longitudes dentro del rango visible
(4000 a 8000 A). Estas ondas de diferente longitud, vibran en todas las posiciones posibles en el eje de
vibracin del rayo de luz. Esto da idea que si uno pudiera observar un rayo de luz de frente, lo entendera
como un tubo o cilindro.

Cuando un rayo de luz, atraviesa un colimador o algn tipo de cristal (como la calcita) se produce una difrac-
cin y emergen dos rayos que vibran en dos planos (perpendiculares entre s). Un prisma de Nicol es capaz
de producir un rayo difractado en un solo plano. Este rayo es un rayo de luz que denominamos luz polariza-
da.

Algunas sustancias tienen la capacidad de desviar el ngulo de vibracin de la luz polarizada, es decir que el
ngulo de ingreso es diferente al ngulo de egreso:

A estas sustancias capaces de actuar sobre la luz polarizada, se las denomina sustancias pticamente acti-
vas.

Qu hace que una sustancia tenga esta propiedad?

La estructura de sus tomos de carbono. Cuando alguna sustancia tiene un carbono asimtrico (tambin
llamado quiral), la sustancia tendr incidir sobre el plano de vibracin de la luz polarizada.

78
 Bioqumica

Un tomo de carbono es quiral cuando tiene cuatro grupos diferentes unidas a sus cuatro valencias. Si bien
dijimos que las valencias son iguales, si los sustituyentes son distintos se generar una asimetra que hace
que las dos estructuras sean NO SUPERPONIBLES. Esto las dota de esa propiedad. Si las sustancias desvan
la luz polarizada a la derecha, se las llama dextrgiras (d) o (+). Cuando lo hacen a la izquierda se las llama
levgiras (l) (-). Se prefiere la utilizacin de los signos (+) y (-), para evitar confusiones con la nomenclatura
de las series D y L.

Cuando se renen iguales cantidades molares de una sustancia dextrgira con su versin levgira, a la mez-
cla se la llama racemato o mezcla racmica. Es muy conocido el trabajo de Pasteur que cristaliz una mezcla
racmica de cido lctico, y observando con un microscopio separ, basndose en su forma, los cristales
dextrgiros de los levgiros.

Aqu se observa que el Carbono 2 es asimtrico, ya que se une hacia arriba con un grupo carboxilo, hacia
abajo con un metilo, con H y con OH.

La estructura molecular no permite predecir hacia donde girar la luz polarizada, ya que esta es una propie-
dad emprica. El poder rotatorio de la sustancia es una propiedad intensiva ya que no depende de la canti-
dad de sustancia.

Luz incidente luz polarizada

Rayo incidente sustancia > ngulo modificado

Aqu se observa que el Carbono 2 es asimtrico, ya que se une hacia arriba con un grupo carboxilo, hacia
abajo con un metilo, con H y con OH.

La estructura molecular no permite predecir hacia donde girar la luz polarizada, ya que esta es una propie-
dad experimental. El poder rotatorio de la sustancia es una propiedad intensiva ya que no depende de la

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 Luis E. Simes

cantidad de sustancia y es caracterstica de cada una (por ejemplo la alfa glucosa tiene un poder rotatorio
de +52).

Cuando hay un carbono asimtrico se producen dos versiones de la sustancia. Pero a medida que hay ms
carbonos asimtricos, en nmero de ismeros se incrementa de acuerdo con la frmula:
I=2n

Donde I es el nmero de ismeros que presentar la sustancia en particular y n el nmero de carbonos

asimtricos o quirales. Por esto, si una estructura posee dos carbonos asimtricos (n=2), presentar cuatro
ismeros ( 22 ). Si presenta 3, tendr ocho ismeros 23) y as sucesivamente. Por ejemplo los glcidos que
poseen 5 carbonos asimtricos presentan 32 ismeros pticos.

Cuando los compuestos son imgenes especulares uno de otro y resultan no superponibles se los llama
enantimeros. Si esas estructuras son no superponibles y TAMPOCO son imgenes especulares se las deno-
minan diastermeros.

Este tema lo veremos en detalle en el captulo de glcidos.

80
 Bioqumica

CAPITULO 3 -

GLUCIDOS
GRUPOS QUIMICOS DE IMPORTANCIA EN BIOLOGIA

Como ya fuera considerado, la qumica orgnica sobre la cual se sustenta un amplio segmento estructural y
funcional de la qumica biolgica, exhibe una cantidad extraordinariamente elevada de sustancias qumicas.
A los fines de ordenar de alguna manera esa ingente cantidad de sustancias, se las ha agrupado en diferentes
grupos qumico-funcionales tales como azcares, grasas, prtidos, cidos nucleicos, capaces de abarcar a
sustancias tan dispares como hormonas, interleuquinas, neurotransmisores, enzimas, vitaminas, anticuerpos
y cualquier otro componente de los organismos vivientes. Los cuatro grupos principales, capaces de abarcar
y subclasificar a los dems son los glcidos, las protenas, los lpidos y los cidos nucleicos.
GLUCIDOS

Los glcidos, tambin llamados hidratos de carbono o azcares, constituyen el primer grupo biolgico de
anlisis en este texto.

El nombre mas amplia y vulgarmente utilizado es el de azcares, en razn de que una gran cantidad de sus
compuestos poseen un sabor dulce. No obstante, esa denominacin se consider inexacta en razn de que
existen otros compuestos naturales dulces, pero de estructura qumica diferente; por otra parte, otros com-
puestos correspondientes al grupo de los glcidos no evidenciaban esa caracterstica de sabor. As como la
expresin azcar puede resultar inadecuada para algunos compuestos, lo mismo ocurre con la denominacin
hidratos de carbono. Los hidratos de carbono hacen referencia a una caracterstica estructural: estos com-
puestos muestran la siguiente frmula mnima:
Cn (H2 O)n

Esta representacin nos muestra que por cada tomo de carbono existe una molcula de agua, y de all pro-
viene ese apelativo: carbn hidratado o ms comnmente Hidratos de Carbono.

Esta forma de definirlos, presenta las mismas problemticas que el nombre de azcar o sacrido: algunos
glcidos no presentan esa proporcionalidad, mientras que otros compuestos que la poseen no encuadran
por sus caractersticas y propiedades en el grupo estricto de los glcidos.

Los glcidos constituyen el grupo qumico-biolgico ms abundante de la naturaleza. Cumplen importantes

funciones plsticas y energticas, conformando estructuras de sostn y reservorios energticos de rpida
utilizacin o como depsitos de reserva energtica.

Su unidad funcional, denominada OSA, corresponde un monosacrido y est formado por un grupo aldeh-
dico o cetnico sobre un polialcohol.

81
 Luis E. Simes

Los glcidos se clasifican en:

a. No Hidrolizables: Monosacridos: formado por una unidad funcional (OSA)

b. Hidrolizables:

i. Oligosacridos : 2 a 4 unidades OSA

ii. Polisacridos: alrededor de 1000 unidades OSAs.

c. Hetersidos: Productos derivados por sustitucin, oxidacin, polimerizacin, etc.

Estructura Qumica:
Los Glcidos son compuestos qumicos ternarios (formados por C, H y O) identificados como poli hidroxi
aldehdos o poli hidroxi cetonas. Para cumplir con esta estructura presentan un grupo carbonilo primario
(aldehdo) o secundario (cetona) en una cadena de carbonos con un oxhidrilo en cada uno de sendos car-
bonos. En consecuencia, la menor cadena capaz de cumplir con la definicin deber contener al menos tres
tomos de carbono (propano). Como la definicin expresa polihidroxi, hacemos un ensayo colocando un
oxhidrilo por cada carbono, y vemos as que la menor estructura capaz de cumplir con esos requisitos (un
grupo carbonilo y dos hidroxi) es ubicar esos sustituyentes sobre una cadena de tres carbonos: dihidroxi
propanal.

Oxidamos suavemente al primer polialcohol correspondiente:

CH2 OH
H C OH
CH2 OH
Glicerina o Glicerol: , Propano-tri-ol

En un carbono primario (carbonilo en carbono 1), origina

H
C=O
CH OH
CH2 OH
Gliceraldehido, primer glcido del grupo Aldosa

En un carbono secundario (carbonilo en carbono 2), origina

CH2 OH
C=O
CH2 OH
1,3 DihidroxiPropanona, primer glcido del grupo Cetosa

Estas estructuras conforman las unidades funcionales de los glcidos, denominadas OSAs, en dos grandes
grupos: Aldosas y Cetosas.

82
 Bioqumica

Importancia biolgica de los Glcidos

Los glcidos exhiben una gran versatilidad qumica, lo que los faculta para el cumplimiento de una amplia
variedad de funciones:

Energticas

Estructurales

Metablicas

Sealizacin
GLCIDOS NO HIDROLIZABLES
Monosacridos. Estn constituidos por una sola estructura bsica (OSA). Estas se diferencian en dos grupos,
segn el grupo funcional que posean:
1. cuando integran grupos aldehdos se denominan ALD OSAS

2. y si poseen grupos ceto , se tienen CET-OSAS

Nomenclatura

Para poder identificarlos, se realiza lo siguiente:

i. Se coloca un prefijo griego que indica la cantidad de tomos de carbono que posee :

1) Triosas (3),

2) tetrosas(4),

3) pentosas(5),

4) hexosas(6), y

5) heptosas (7)

6)

ii. se antepone al prefijo griego visto en i., las partculas que identifican al grupo funcio-
nal que posee :

a. ALDO para al grupo aldehdo y

b. CETO para el grupo cetnico.

83
 Luis E. Simes

De esta manera sabemos que una ALDO HEXOSA es un monosacrido de la serie aldehdica de seis carbo-
nos y que una CETO PENTOSA corresponde a un monosacrido de la serie cetnica de 5 carbonos. Veamos
la tabla siguiente, sobre lo expresado:
GRUPO FUNCIONAL N CARBONOS NOMBRE EJEMPLO
3 Aldo TRI Osa Gliceraldehdo
4 Aldo TETR Osa Eritrosa
ALDEHIDO
5 Aldo PENT Osa Ribosa
6 Aldo HEX Osa Glucosa
3 Ceto TRI Osa Di hidroxi cetona
4 Ceto TETR Osa Eritrulosa
CETONA
5 Ceto PENT Osa Ribulosa
6 Ceto HEX Osa Fructosa

Si observamos el ejemplo de arriba podemos ver que se trata de dos molculas de Aldo Hexosa (polialco-
hol de seis carbonos con grupo aldo). Sin embargo parecen estar dibujadas de diferente manera. Exactamente
y esto obedece a que estas estructuras ejemplificadas en el cuadro poseen carbonos asimtricos y con ello ad-
quiere relevancia la orientacin en el espacio que tengan los grupos unidos a cada centro de asimetra. Recur-
dese lo analizado en el captulo correspondiente a isomera. Por qu no se pueden superponer? Por su forma
tetradrica, lo que hace que existan diferencias en una tercera dimensin, como a continuacin se observa:

Notemos que los carbonos quirales o asimtricos (carbonos unido a cuatro sustituyentes diferentes), pue-
den generar dos tipos de estructuras.

X X

Y C Z Z C Y

H H

Visto as, observamos que dos estructuras formadas por el mismo grupo de tomos (CXYZH) pueden pre-
sentar dos formas distintas. Esto ocurre por la particular disposicin de los enlaces del carbono, que al generar
forma de tetraedro, hace que dos formas equivalentes no se puedan superponer. Esto implica una disparidad
estructural que genera dos molculas con diferentes propiedades, aunque sus constituyentes sean idnticos.

84
 Bioqumica

(Ver isomera ptica, cap 2)

Una forma simplificada de representacin es la siguiente:

Carbonilo ( C = O ): aldehdo en carbono 1 o ceto en carbono 2

Oxhidrilo (- OH)

Alcohol primario: -CH2OH

Es decir que la representacin grfica de la glucosa, mostrara el siguiente aspecto:

C O

H C OH

HO C H

H C OH

H C OH

C H2OH

En consecuencia, cuantos ms puntos de asimetra presente una molcula (carbono quirales), mayor ser
la cantidad de ismeros que exhiba. La cantidad de ismeros est en relacin con la frmula:

i = 2n

Siendo i el nmero de ismeros que pueden originarse con n carbonos quirales en la molcula.

Si hay un solo carbono quiral, entonces n vale 1. Como 21 =2 se establece que cuando hay un solo carbono
quiral se originan 2 ismeros; para 2 carbonos quirales, habr 22 , es decir 4 ismeros y para 4 carbonos asi-
mtricos 24 , 16 variantes para la misma frmula molecular.

85
 Luis E. Simes

Por eso, el gliceraldehdo que tiene 1 carbono asimtrico, muestra 2 formatos diferentes, mientras que
una aldohexosa , con 4 carbonos asimtricos, mostrar 16 ismeros.

Si vemos el ejemplo simplificado del gliceraldehdo, encontramos estas formas:

L- gliceraldehdo D- gliceraldehdo

Por otra parte, abajo se muestra una figura de los derivados del D- gliceraldehdo:

Si observamos la figura, vemos que al agregar un carbono al D- gliceraldehdo, se obtienen dos tetrosas,
y al agregar otro carbono, se obtienen cuatro pentosas y los de seis carbonos mostrarn ocho ismeros. Si
hiciramos lo mismo con el L- gliceraldehdo, obtendramos derivados similares:

Dos tetrosas, cuatro pentosas y ocho hexosas, con lo cual se cumple el total previsto para la frmula i = 2n

El primer grupo, se encuentra representado, se los denomina monosacridos de la serie D, mientras que al
otro grupo no especificado, se lo llama monosacridos de la serie L. Esa clasificacin en dos series, D y L, se
basa en el carbono asimtrico ms cercano al alcohol primario. Si el OH est a su derecha, corresponder a
la serie D, mientras que en el caso de OH a la izquierda, mostrar correspondencia con la serie L. Es decir,
todos los derivados del D Gliceraldehdo pertenecen a la serie D y los del L- Gliceraldehdo a la serie L.

En la naturaleza, los glcidos con actividad biolgica corresponden a la serie D.

86
 Bioqumica

Dentro de las aldopentosas destacamos a la ribosa y en las hexosas a la glucosa, galactosa y manosa. La
ceto hexosa preponderante es la fructosa.

C1
C2
C3
C4
C5
C6
D-Glucosa D-Manosa D- Galactosa D- Fructosa

Vemos en estas hexosas de importancia biolgica que cumplen con dos premisas importantes:

- todas corresponden a la serie D, ya que el OH vecino al alcohol primario tienen orientacin

hacia la derecha

- Todos los oxhidrilos de carbono 3 se orientan a la izquierda.

Cuando las formas isomricas presentan imagen especular (imagen de espejo), el tipo particular de pares
isomricos se denominan enantimeros. El ejemplo de hexosa que hemos tratado nos sirve de ejemplo:

D- Glucosa L- Glucosa

Vemos aqu que los carbonos 2,3,4 y 5 son asimtricos.

Las orientaciones de los oxhidrilos en un mismo carbono son diferentes, como si se mostraran enfrenta-
das a un espejo. En este caso decimos que los compuestos son enantimeros. Un enantimero corresponde
a cualquier estructura no superponible y que sea imagen de espejo en todos los carbonos quirales, como el
ejemplo de arriba. Cada compuesto de la serie D con su correspondiente de la serie L son enantimeros.

EPIMEROS, se denominan epmeros a aquellos compuestos que presentan diferente isomera ptica, lo
que establece que esa nueva forma tenga propiedades diferentes y se constituya en consecuencia en otro
compuesto. Si miramos la glucosa, y le damos vuelta el -OH de C2, veremos entonces que se transforma en
otro glcido llamado manosa. Decimos entonces que la glucosa y la manosa son epmeros en 2.

Si desde la glucosa hacemos lo mismo, y giramos el HO de carbono 4 , entonces obtenemos galactosa.

Decimos as que la glucosa y la galactosa son epmeros en 4. Son diferentes compuestos por el hecho de
que el oxhidrilo de carbono 4 tiene diferentes orientaciones.

En conjunto no son imgenes especulares. Cuando las estructuras son no superponibles, y NO originan
imgenes especulares, se las denomina Diastermeros.

87
 Luis E. Simes

Formas hemiacetlicas

Ya hicimos referencia a la capacidad de reaccin que tienen los oxhidrilos y los carbonilos. La capacidad de
reaccin que presentan lo oxhidrilos frente a los grupos carbonilos, hace que en condiciones favorables (sobre
todo energticas y estricas26 ) se produzca una reaccin qumica que origina hemiacetales.

Definimos entonces a los hemiacetales como compuestos que originan al reaccionar un alcohol con un
grupo carbonilo de aldehdos o cetonas.

En las aldo hexosas las reacciones del carbonilo (carbono 1), se dan ms probablemente con oxhidrilos de
carbono 4 o carbono 5. En las cetohexosas (carbonilo en 2), se relacionan mejor con los oxhidrilos de carbono
5 o de carbono 6.

Si marcamos los carbonos quirales lo primero que podemos observar es que mientras la forma aldehdica
posee cuatro carbonos quirales (2, 3, 4, y5), en la glucosa hemiacetlica observaremos cinco (1, 2, 3,4y5).
Cul es el nuevo carbono quiral? El carbono 1, marcado con un asterisco.

En el caso aldehdico, el C1 tiene un doble enlace con el O, por lo cual no es asimtrico, pero al reaccionar
y romperse ese doble enlace, aparece la quiralidad sobre ese carbono.

Qu consecuencias tiene esto? Pues que ahora es posible tener DOS glucosas diferenciadas por el C1:
con el OH a la izquierda o con el OH a la derecha.

Al formarse dos presentaciones diferentes, debemos identificarlas: se denominar alfa ( ) a la glucosa

hemiacetlica que posee su -OH de C1 a la derecha y glucosa beta ( ) a aquella cuyo C1 tiene su -OH a la
izquierda.

El carbono correspondiente originalmente al carbonilo, pasa a denominarse ahora carbono anomrico.

Decimos que las formas alfa y beta de una sustancias son formas anomricas. La alfa glucosa y la beta glucosa
son anmeros en 1 (por que el carbonilo estaba en C1). Por ejemplo, la fructosa alfa y la fructosa beta son an-
meros en 2, ya que el carbonilo original, por ser ceto, se encontraba en Carbono 2. Los carbonos anomricos
son los que lgicamente se ciclan al formar el hemiacetal.

Tipo de Isomera Caractersticas Ejemplo

Enantimero Imagen especular no superponible
2
D-Glucosa/ L-Glucosa
Diastermero Imagen No especular, no superponible Glucosa/Galactosa
Epmeros Diferencia en un carbono alcohlico Epmeros en 2: Glucosa/Manosa
Anmeros Diferencia en Carbono del carbonilo Fructosa / Fructosa

Formas de Harworth

Cuando representamos las frmulas hemiacetlicas lo hicimos bajo el formato de Fischer. Harworth pro-
puso representar las mismas frmulas bajo la forma cclica. Previendo que los enlaces caractersticos en las
formas hemiacetlicas para las aldohexosas enlazan C1 (anomrico) con C5, y las ceto hexosas C2 (anomri-
co) con C6, ambas con un puente oxgeno, presentan la forma de un hexgono. Tambin pueden establecer
26 Estricas, de estreo, espacial: desarrollo en el espacio

88
 Bioqumica

respectivamente enlaces C1 con C4, o C2 con C5, que a travs de un puente oxgeno adquiere la forma de
pentgono. Las pentosas pueden tambin adquirir estructura de pentgono. Los heterociclos oxigenados de
4 y 5 carbonos, son respectivamente el furano y el pirano, y se corresponden exactamente con las formas
de los glcidos aludidos.

Obtencin de las frmulas de Harworth

Para transformar una forma de Fischer a una forma de Harworth, se deben seguir las siguientes consignas:

1) De acuerdo con el puente oxgeno establecer si el ciclo ser de cinco o seis

carbonos, es decir, pentgono o hexgono.

2) El ciclo establece un plano horizontal. Los enlaces de los derivados estarn

por encima o por debajo del plano

3) Cuando un sustituyente de un carbono, se encuentre en la frmula de Fischer

a la derecha, se dibujar hacia abajo en la frmula de Harworth los grupos de
la izquierda se dibujan, por contrapartida, hacia arriba.

Poder rotatorio: los glcidos tienen una propiedad intensiva caracterstica: la rotacin ptica:
El poder rotatorio es caracterstico de cada sustancia, por lo cual es una propiedad intrnseca, intensiva,
como lo son el punto de fusin, de ebullicin, espectros electromagnticos, etc.

Cuando se coloca una solucin de un glcido en un polarmetro este marcar el poder rotatorio. Cuando
el polarmetro verifica rotacin de la luz polarizada a la derecha, a sustancia se identifica con un signo (+). No
se debe confundir con la D correspondiente a la serie. As, la glucosa es dextrgira, verificndose que el giro
que se produce es de + 52.

89
 Luis E. Simes

La fructosa es levgira, y entonces se identifica con un signo (-). La L se reserva para la serie, pero no tiene
relacin con la rotacin ptica.

Nomenclatura:

Una vez representadas las formas cclicas y considerando el poder rotatorio de los glcidos, su correcta no-
menclatura requiere la siguiente configuracin:

a. Letra griega para la posicin del OH anomrico

b. D o L ( maysculas) para identificar la serie y con ello la estructura

c. Signo (+) o ( - ) para identificar la desviacin del plano ptico de la luz polarizada

d. El nombre del monosacrido respectivo

El sufijo pitaosa o farinosa, de acuerdo con el ciclado Ejemplos:

N Molcula Enlace del C Serie Poder rotatorio Sustancia Ciclo

anomrico
1 D(+) Glucopiranosa Abajo D Dextrgiro Glucosa Pirano

2 L (+) Fucopiranosa Abajo L Dextrgiro Fucosa Pirano

3 D(-) Fructo furanosa Arriba D Levgiro Fructosa Furano

1 2 3

Estructura conformacional

Cuando mencionamos la teora de las tensiones de Bayer, dijimos que en base a ella cuanto ms se alejaran
de 109 los ngulos del carbono en un ciclo, ms tensin presentara el mismo. Sin embargo, resultan bas-
tante estables ya que las tensiones en el hexgono no eran tan elevadas como las esperadas. Esto ocurra
por que bajo la forma piransica, los glcidos son capaces de adquirir isomera conformacional, silla/bote.
En la isomera conformacional no se menciona ms la posicin de los sustituyentes por encima o por debajo del
plano, sino como sustituyente ecuatorial y axial. Se mantiene el plano para diferenciar las formas silla/bote. Los
C1 y C4 en el mismo plano (bote o cis) o en distinto plano (silla o trans). En este caso pueden ser silla a (C1 por
encima del plano) o silla b, (C4 por encima del plano) Cuando el sustituyente se muestra horizontal se lo denomina
ecuatorial. Cuando por el contrario la ubicacin tiende a la verticalidad se lo denomina axial.

90
 Bioqumica

BOTE SILLA

Ambas figuras representan a la glucosa beta. En el caso de bote, el -OH de C1 est hacia arriba (axial), pero
en la forma silla se transforma en ecuatorial. Existen adems las formas hemisilla y bote girado.

Mutarrotacin

Se denomina mutarrotacin al fenmeno por el cual, una sustancia va cambiando espontneamente, con
el paso del tiempo, su ngulo de accin sobre la luz polarizada.

La glucosa anhidra (sin agua), presenta aspecto de polvo cristalino blanco. Su estructura qumica corres-
ponde a la forma aldehdica. Sin embargo, al disolverse en agua, comienza una reaccin entre el grupo carbo-
nilo y un oxhidrilo de la misma molcula, para dar una estructura hemiacetlica. En consecuencia, se forma un
nuevo centro de asimetra en el carbono anomrico, para generar de la misma sustancia, dos variedades. En
esta caso glucosas alfa y beta.

En los primeros minutos, el polarmetro indica +112, pero al pasar las horas, el valor se va modificando
.quedando en +52. Cuando la glucosa aldehdica se hidrata se transforma en alfa glucosa, cuyo poder ro-
tatorio es de + 112. Luego se produce una isomerizacin activa de alfa a beta glucosa. sta tiene un poder
rotatorio +19. Cuando se alcanza el equilibrio existe un 66% de beta glucosa, un 33 de alfa y un 1% aldehdica
intermediaria entre las dos. Esa mezcla contribuye proporcionalmente determinando un punto final rotatorio
de + 52.

Glucosa alfa Glucosa aldehdica Glucosa beta

33% 1% 66%

+ 112 +19

+ 52

Derivados de monosacridos:

Muchos de los monosacridos biolgicamente activos, presentan otros grupos qumicos adems de los ya
mencionados. Pueden encontrarse grupos ms oxidados (cidos), reducidos (alcoholes) o con grupos nitroge-
nados y azufrados entre otros.

1) Reducidos (Alditoles): La reduccin de los grupos carbonilo origina un nuevo oxhidrilo, por lo cual
los monosacridos reducidos son polialcoholes. La reduccin de la manosa origina manitol y la de la
glucosa origina sorbitol. Tienen gran capacidad para atraer molculas de agua y electrolitos, por lo
cual tienen utilidad clnica. El sorbitol t posee efecto laxante y el manitol es ampliamente utilizado
para el tratamiento de los edemas, ya que recupera agua desde el intersticio hacia el sector vascular.
En los diabticos, produce depsitos en el cristalino que favorece la formacin de cataratas. Algunos
alditoles se utilizan como endulzantes de bajas caloras.

91
 Luis E. Simes

C H2OH CH2OH
I I
H C OH HO C H
I I
HO C H HO C H
I I
H C OH H C OH
I I
H C OH H C OH
I I
CH2OH CH2OH

SORBITOL MANITOL

2) Oxidados

Los monosacridos pueden ser oxidados, originndose tres posibilidades, segn cual sea el carbono
que sufra el proceso de oxidacin. De acuerdo con ello se los clasifica en monosacridos:

Aldnicos : se oxida Carbono 1

Urnicos : se oxida Carbono 6

Aldricos : se oxidan los Carbonos 1 y 6

La oxidacin del carbono 1, obliga a abrir el ciclo, es decir que tanto los derivados aldnicos como los ald-
ricos son de cadena abierta. Los urnicos como el glucurnico (ver figuras) son de ciclo cerrado y participan
de la estructura de glcidos complejos. Ya que poseen capacidad de electrolito a pH biolgico, se los en-
cuentra bajo la forma de anin glucurunato.

GB

3) Monosacridos desoxigenados: Son molculas que pierden alguno de sus oxhidrilos, manteniendo
inalterado el resto de la molcula. Mientras la ribosa es un monosacrido crucial para la conformacin
de la estructura de los cidos Ribonucleicos, (ARN) la desoxigenacin del oxhidrilo de carbono forma
2 desoxi- ribosa, componente de la columna vertebral del cido Desoxi ribonucleico (ADN). La 6
desoxi beta L Galactosa (uno de los pocos monosacridos de la serie L que intervienen en procesos
biolgicos), es denominado comnmente L- Fucosa. La fucosa forma parte de paredes celulares bacte-
rianas y conforma al antgeno H, base qumica de los grupos sanguneos ABO, de Landsteiner. Si en
lugar de galactosa el ciclo es manosa, estaremos en presencia de la ramnosa.

92
 Bioqumica

4) Aminoazcares: La aminacin de algunos carbonos dota de particulares caractersticas a los monosa-

cridos, los cual los habilita para formar parte de reacciones metablicas y de estructuras ms comple-
jas. Mencionamos como de importancia a la 2- amino glucosa y a las 2 N- acetil glucosamina.

GB

Estas molculas formarn parte de los glicoprotenas, aminoglucsidos o glico lpidos. Tambin poseen
importancia las galactosaminas.

5) Monosacridos fosforilados: cuando los glcidos entran en los circuitos metablicos, los requerimien-
tos de energa y de cargas elctricas, los llevan a combinarse con grupos fosfato. A pH 7,0 los fosfatos
se comportan como electrolitos. Ej: glucosa 6 fosfatos, glucosa 1,6 di fosfato etc.

6) Tioglcidos. En este caso un oxgeno del carbono anomrico se encuentra reemplazado por un tomo
de azufre, S.

93
 Luis E. Simes

7) Glucsidos: Son acetales. Recordemos que la reaccin de un grupo carbonilo (aldehdo o cetona) con
un alcohol genera Hemiacetales, como ya se viera anteriormente. As se formaban los glcidos hemia-
cetlicos. Cuando un alcohol reacciona con un hemiacetal, se deshidrata y forma un acetal.

Cuando el carbonilo de un monosacrido reacciona con un alcohol, pierde una molcula de agua y
forma un acetal: un glucsido

R1 R1
l l
R3 -- C O -- R2 + HO R4 H2O + R3 -- CO -- R2
I l
OH O R4
Hemiacetal alcohol agua Acetal

Los glucsidos resultan de la combinacin del monosacrido con un grupo qumico diferente, a travs
del carbono anomrico. El grupo glucdico se denomina glicona (generalmente glucosa, pentosas, oligosa-
cridos) y el resto de la molcula aginina. ste determina la naturaleza del glicsido. La unin se establece
mediante un enlace O-glicosdico. Existen varias familias de glicsidos de gran importancia para los vegetales.
Muchas veces constituyen mecanismos de defensa y adems caracterizan a los vegetales por sus sabores.
Poseen enzimas propias capaces de romper los enlaces glucosdicos. Un grupo de inters lo constituyen los
glicsidos cardiotnicos, que son esteroides. Existen varias familias vegetales que lo sintetizan, entre ellas las
de Digitallis. Por ello los frmacos antiarrtmicos y cardiotnicos tambin son llamados digitlicos. Si la glico-
na es un tioglcido, se forman los tioglucsidos, caracterizados por un enlace tioter, ms especficamente
tioglicosdico (S- glicosdico).

Por su utilizacin en biologa mencionamos al IsoPropilTioGalactopiransido (IPTG) que presenta funciones

favorecedoras de la recombinacin de genes y el OctiGlucsido, cuyas propiedades detergentes resultan de
utilidad en la ruptura de membranas biolgicas. Algunos grupos son venenos orgnicos.
GLUCOSA

La glucosa es el glcido principal del organismo. Otros azcares incorporados por la dieta son metaboli-
zados a su destino final de glucosa. El almidn se degrada a dextrinas, maltosa y finalmente concluye en una
molcula final no hidrolizable de glucosa. La galactosa y la fructosa se isomerizan a glucosa en el hgado. Su
nivel est regulado por la insulina y el glucagn.

Enlaces glicosdicos:

Son enlaces covalente que se establecen entre grupos oxhidrilos de diferentes molculas, que pierden un
molcula de agua. Por ello son de tipo ter. Si hubiera un azufre ser tioeter. Cuando participe un nitrgeno,
la unin ser de tipo amina o N- glucosdico. Estos enlaces covalentes son capaces de sufrir ruptura me-
diante la utilizacin de cidos o con enzimas hidrolticas llamadas hidrolasas.

. Los enlaces glicosdicos se identifican teniendo en cuenta los carbonos que participan y si la posicin de los
mismos es alfa o beta.

Si el carbono anomrico est en alfa, la unin ser alfa glicosdica. Se indica mejor con una flecha que relacio-
na el carbono del cual parte y hacia el que se dirige la unin en la otra molcula. Por ejemplo si se enlaza un
carbono anomrico en alfa, y se enlaza con un tomo en 3 de la otra molcula, se identificar como:

94
 Bioqumica

En otro ejemplo, si se combina un carbono anomrico 2 en beta, con un carbono 4 de la otra molcula, se
representar:

24

GLCIDOS HIDROLIZABLES

Los glcidos hidrolizables son estructuras formadas por dos o ms molculas relacionadas por enlaces glico-
sdicos. Se clasifican en:

Holsidos

Hetersidos

Los holsidos son compuestos que al final de su degradacin slo originan osas (monosacridos). En cam-
bio, los hetersidos, de mayor complejidad, adems de osas originan compuestos no glucdicos.

Los holsidos agrupan a los disacridos, oligosacridos y polisacridos, mientras que los hetersidos a poli-
sacridos complejos.
Carcter reductor:

Los glcidos pueden ser reductores o no reductores. Esto se basa en la capacidad de reaccionar con el licor
de Fehling o el Licor de Tollens.

Esta propiedad reside en las caractersticas redox de los carbonos aldehdico o cetnico, que poseen esa
propiedad. En la medida que alguno de ellos quede libre (sin enlazar) mantendr su carcter reductor, por
lo cual la molcula ser reductora. Pero en el caso de que los carbonos aldehdicos o cetnicos se enlacen
entre s, se perder el carcter reductor, lo que caracterizar a esa molcula como no reductora.
Nomenclatura:

Los holsidos se denominan de acuerdo con los siguientes determinantes:

Se mencionan los compuestos que intervienen y su enantimero D o L

Se nombra primero al que enlaza su carbono anomrico, como furanosil o piranosil, segn su ciclo

Se coloca al principio una O para los enlaces a travs de Oxgeno. Pero si fuera a travs de un nitrgeno se-
ra N- glicosdico.

Se indica la posicin de cada molcula

Se indican las posiciones de enlace

Se nombra la segunda molcula, que posee su carbonilo libre, D o L, el ciclo pirano o furano, terminado en
sido.

95
 Luis E. Simes

Ejemplo

O (D- Galactopiranosil 1 4 D Glucopiransido)

Esto indica que se une por enlace Oxgeno una molcula de galactopiranosa con glucopiranosa desde el
carbono 1 de la galactosa con el carbono 4 de la glucosa. Fructosa

DISACARIDOS

Son holsidos formados por dos monosacridos, enlazados a travs de enlaces o- glicosdico.

Hacemos referencia a los ms importantes:

Maltosa:

Denominada azcar de la malta o cebada germinada. Se conforma por la unin glicosdica de dos molculas
de glucosa, desde el carbono anomrico 1 con el 4 de la otra. En sta queda libre y activo el carbono ano-
mrico.

La maltosa se obtiene de la hidrlisis del almidn.

D- Glucopiranosil ( 1 4) D glucopiranosa

Es degradada por la aamilasa, presente en saliva y pncreas humanos.

Isomaltosa

Es similar a la maltosa y tambin conforma la molcula de almidn, interviniendo en sus ramificaciones. Se

diferencia de la maltosa en que sus enlaces son 16.

96
 Bioqumica

Tambin es sensible a la accin de la alfa amilasa. Pero cuando se degrada el almidn, muchas veces los enla-
ces 1 6 no se hidrolizan, siendo este el ltimo paso de la digestin. El residuo se denomina dextrinas lmite.

D- Glucopiranosil ( 1 6) D glucopiranosa

Celobiosa

Se obtiene de la celulosa. Es un disacrido tambin formado por dos molculas de glucosa, pero stas tienen
su carbono anomrico en posicin . En este caso no se puede digerir ya que la amilasa no acta sobre sus
enlaces .

Los roedores se alimentan de celulosa ( madera, papel telas) en razn de poseer enzimas digestivas activas
sobre estos enlaces .

D- Glucopiranosil ( 1 4) D glucopiranosa

Lactosa

Es el azcar de la leche, que est formado por una galactosa- y una glucosa-, unidas por enlaces 14

Es el glcido preponderante en la leche. Su presencia es mayor en leche materna que en la de vaca (7 a

5% respectivamente). Su valor nutricional es muy importante. Requiere de las lactasas intestinales para su
correcta absorcin. Aunque los humanos muestran niveles bajos de lactasa son suficientes para su meta-
bolizacin en los primeros aos de vida. Cuando se observa carencia de actividad de la enzima se produce
intolerancia a la lactosa, por lo cual algunas frmulas adicionan lactasa a los productos lcteos. Esta ca-
rencia observable en grandes grupos humanos (Aunque menor en etnias de frica), puede traducirse
en manifestaciones dolorosas por distensin, acumulacin de lquidos y diarreas. Raramente se
debe a causas hereditarias, algunas son secundarias a otras enfermedades crnicas o bien puede
obedecer a una baja expresin de la enzima.

Si observamos las estructuras qumicas de los disacridos enumerados, observamos que en todos ellos siem-
pre queda un carbono anomrico libre. Por ello, todas mantienen el poder reductor del carbonilo y en conse-
cuencia todos ellos son disacridos reductores.

97
 Luis E. Simes

Sacarosa: es el azcar de caa. Se obtiene tambin de la remolacha y otros vegetales. Este azcar es muy par-
ticular, muy utilizado en la alimentacin humana y generado en la fotosntesis. Adems y a diferencia de los
anteriores disacridos, todos conformados por monosacridos glucosil, ste posee una molcula de fructosa
(fructosil).
Por otra parte observamos que se enlazan ambos carbonos anomricos, por lo cual es el nico azcar NO
reductor de los mencionados. Su estructura es:

O D- glucopiranosil a1 b2 fructofuransido

Azcar invertido: es llamado as ya que en casos de hidrlisis se verifica un cambio en la direccin de la luz po-
larizada. Mientras la sacarosa es dextrgira, cuando se produce su hidrlisis por cidos diluidos o por accin
de la enzima sacarasa o invertasa, el giro de la luz se invierte a levgira; de all su nombre.

El poder rotatorio de la sacarosa es dextrgira + 66. Cuando se hidroliza, su rotacin se estabiliza tornndo-
se levgira (-19). Esto obedece a que el poder rotatorio de la fructosa es de 92 impacta ms frente a los +
52 de la Glucosa.

POLISACARIDOS

Conforman el grupo ms importante de glcidos de la naturaleza. Sus enlaces son o-glicosdicos que confor-
man estructuras de un elevado nmero de monosacridos lineales y ramificados.

HomoPolisacridos

Son molculas grandes, con un n elevado de monmeros, compuestas exclusivamente por un solo tipo de
monosacridos. No tienen poder reductor ni propiedades glucdicas. Tienen aspecto amorfo, y no son solu-
bles en agua. Cumplen funciones de reserva y de sostn. Entre los ms importantes mencionaremos:
(1) Almidn
(2) Glucgeno
(3) Celulosa
(4) Quitina
(5) Agar
(6) Dextranos
(7) Inulina

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 Bioqumica

(1).ALMIDON

El almidn es el polisacrido de reserva energtica de los vegetales, formado por fotosntesis a partir del CO2
del aire y del agua absorbida por el sistema radicular. El depsito diferencial del almidn produce la forma-
cin de diversas variedades de presentacin, caracterstica de cada vegetal. Los granos son as particulares
de cada planta (almidn de papa, de remolacha, de poroto o de batata), presentarn diferentes conforma-
ciones, dadas por el nmero de monmeros, sus ramificaciones y la proporcin generada entre las diferentes
estructuras sintetizadas.

La parte exterior presenta preponderancia de amilopectina en una proporcin que va del 80 al 90% del peso
del grano. El porcentaje restante se ubica hacia el interior, bajo la forma de amilosa.

La amilopectina tiene un n de aproximadamente 2.000 unidades. Los disacridos componentes son la mal-
tosa y la isomaltosa. Si el PM de la glucosa es de 180 Daltons, es factible calcular el PM de la amilopectina.
La cadena de amilopectina se forma con enlaces glucosdicos ( 1 4), producindose una ramificacin (
1 6) de 10 a 15 unidades, cada aproximadamente 20 glucosas de la cadena 14. Mientras la () Amilasa
digiere los enlaces () 14, no ataca las ramificaciones 1 6. En estos puntos quedan restos de agrupamientos
que se denominan dextrinas lmite, provenientes fundamentalmente de celobiosa.

En el organismo humano las () amilasas salivales y pancreticas digieren los enlaces glicosdicos, mientras
que las dextrinasas intestinales resuelven los enlaces 16.

La amilosa en presencia de lugol genera un color azul intenso caracterstico, a diferencia de la amilopectina
que genera un color rojizo ms pardo. Ambas formas son insolubles en agua y originan grumos en donde las
cadenas adquieren forma de hlices de siete residuos por vuelta. Esta disposicin genera una liberacin ms
lenta de la glucosa.

La Amilosa, ubicada preferentemente hacia el corazn del grano, est constituida por cadenas ms
cortas (300 a 400 unidades).
(2). GLUCOGENO

99
 Luis E. Simes

Constituye el principal homopolisacrido de la clula animal, estando alojado en el citosol, conjun-

tamente con las enzimas que lo degradan. En el ser humano se aloja preferentemente en hgado y
msculo esqueltico, para asegurar la rpida liberacin de glucosa, tanto para el mantenimiento de
los niveles de glucosa plasmtica como para posibilitar la contraccin muscular.

Estructuralmente el glucgeno es muy similar a la amilopectina, presentando ramificaciones ms

densas y una mayor longitud de las cadenas. Cada glucgeno puede contener aproximadamente
30.000 unidades de () D glucopiranosa. Sus enlaces o- glicosdicos son () 14 y sus ramificaciones
() 16.
(3).CELULOSA
Es una sustancia variada, muy abundante en la naturaleza. Es un componente preponderante de la
madera, el algodn, el papel, el celofn y el rayn27, entre otras sustancias28. No hay un solo tipo de
celulosa, por lo cual es de naturaleza variada. Se la clasifica en , , y celulosa de acuerdo con sus
propiedades frente a los lcalis y los cidos. Es al igual que los anteriores un slido blanco, microcris-
talino insoluble en agua. Tienen gran resistencia en razn de poseer enlaces intramoleculares de
Puente hidrgeno.
Qumicamente son grandes molculas de la () glucosa, unidas por enlace o-glicosdico 14, o por
unidades de celobiosa. Mientras las enzimas de los herbvoros poseen una la () amilasa que degrada
a la celulosa hasta glucosa, en el hombre esto no ocurre, por lo cual se elimina por intestino sin ab-
sorber. Esto estimula el peristaltismo y la eliminacin de agua y sales.
(4). QUITINA
Es un polisacrido muy semejante por sus propiedades a la Celulosa. Establece al igual que ella, en-
laces o- glicosdicos (). Forma parte esencial del exoesqueleto de invertebrados, insectos y crust-
ceos, como as tambin la pared celular de algunos hongos y algas, por lo que es de amplsima difu-
sin en la naturaleza. Su unidad es un derivado de la glucosa: la n- acetil glucosamina. Se estructura
en base a interacciones de puente hidrgeno intracatenarios, lo que les dota de dureza y rigidez. Las
cadenas que se relacionan mediante puente hidrgeno se acomodan de forma paralela en la quitina
()alfa y de manera antiparalela en la quitina ().
(5) AGAR
Sustancia de amplia distribucin en la naturaleza, de caractersticas gelatinosas, se obtiene por ebulli-
cin de ciertas especies de algas dado su alto contenido en sus paredes. Se la utiliza intensivamente
en microbiologa como medio de cultivo para el desarrollo de grmenes, en gastronoma como espe-
sante en yogures y postres y en medicina por su actividad laxante.
Corresponde a un galactano, por ser su unidad conformacional la () D- galactopiranosa, siendo sus
enlaces o-glicosdicos () 14.
(6). DEXTRANOS Y GLUCANOS
As como el almidn se constituye en sustancia de reserva para los vegetales y el glucgeno hace lo
mismo en la clula animal, los dextranos son los polisacridos de reserva en microorganismos, como
bacterias y levaduras. Conforman, al igual que la amilopectina en cadenas ramificadas de () D- Glu-
copiranosa. La diferencia est en la ubicacin de los enlaces, que en este caso corresponde a 12,
13, 16. Similares son los Beta Glucanos, que poseen enlaces 13, pero beta. Son importantes en
algunos cereales (avena, cebada, centeno)
(7).INULINA

27 Acetato de celulosa
28 El papel de filtro tratado con cido sulfrico produce papel pergamino, resistente eimpermeable. Otras producen explosivos, lacas y
fibras.

100
 Bioqumica

Es un fructano que se encuentra como material de reserva en algunas races vegetales. Las unidades
monosacridas son () D- fructofuranosa con enlaces 21.

HOMOPOLISACARIDOS
Grupo Polisacrido Monosacrido Enlace Posicin
constituyente
ALMIDON 14
16
GLUCGENO () D- Glucopiranosa () 14
16
Glucanos

DEXTRANOS 12
1 3
CELULOSA () D- Glucopiranosa 14
()GLUCANOS 13
QUITINA () D- N-Acetil Glucosamina 14
Galactanos AGAR () D- galactopiranosa 14
PECTINA () D- galacturnico () 14
Fructano INULINA () D- fructofuranosa 21
HETEROPOLISACARIDOS
Mientras los homopolisacridos estn estructurados sobre un solo tipo de monmero, en los hetero-
polisacridos existen al menos dos tipos diferentes de monoscridos que se repiten.
Tienen trascendencia en una gran cantidad de organismos, adquiriendo particular importancia en la
constitucin estructural y funcional de la matriz extracelular. Cumplen importantes funciones de sos-
tn junto al colgeno, la fibronectina la elastina, la laminina, interviniendo en la unin de las clulas
para conformar tejidos y protegiendo las clulas individuales. Cumplen adems diversas funciones
biolgicas, conforme su estructura. Tienen carcter cido, y por disociarse a pH fisiolgico se en-
cuentran en estado de polianiones, lo cual los dota de particulares caractersticas funcionales.
Estos polisacridos estn conformados por cadenas lineales de disacridos heterogneos. Su nombre
anterior, mucopolisacridos (por su alta presencia en secreciones mucosas a las que dotaban de sus
principales propiedades), di origen al nombre de enfermedades asociadas a estas molculas: Mu-
copolisacaridosis.
Actualmente reconocidos como Glicosamin glicanos (GAG), sus heterodisacridos sillares estn formados
por:
Un cido urnico (oxidado en 6)
Una hexosamina (sulfatada o no)

De acuerdo a la composicin del disacrido fundamental, se obtienen los diferentes GAGs.

Tngase en cuenta que mientras en los Homopolisacridos se repeta un monosacrido, en el caso de los
Heteropolisacridos, por propia definicin repite unidades disacridas heterogneas (un amino azcar con
un cido urnico). Por otra parte, las uniones dentro del disacrido, puede no ser la misma que la que se
utiliza en la unin

101
 Luis E. Simes

disacridos.

UNIDAD DISACRIDA

Aqu se ve un ejemplo de unidad disacrida formada por un cido urnico (a la izquierda) y una
hexosamina (a la derecha). El enlace entre ellos es beta 1-3

ACIDO ENLACE AMINA

URNICO HEXOSAMINA

D GLUCURNICO D GLUCOSAMINA

D- GALACTOSAMINA

L- IDURNICO 13 N-ACETIL GLUCOSAMINA

N- ACETIL GALACTOSAMINA

SULFATADOS SULFATADOS

ACETILADOS

Del C4 del cido urnico sale un enlace hacia el disacrido de la izquierda, y de la hexosamina sale
un enlace desde su carbono 1, hacia el disacrido siguiente de la derecha.

Mencionaremos aquellos de mayor importancia biolgica:

(1) cido Hialurnico

(2) Condroitina y condroitin sulfato

(3) Dermatan Sulfato

(4) Queratan Sulfato

102
 Bioqumica

(5) Heparina

(6) Heparan Sulfato

(1). ACIDO HIALURONICO

Es el GAG de mayor masa molecular. Est formado por una sucesin lineal de 25.000 a 50.000 unidades di-
sacridas.

El cido presente es el D-Glucurnico, y la aminohexosa es la N-Acetil-D- Glucosamina, unidas por enlaces

() 1 del cido 3 del amino. Los enlaces entre disacridos son () 1 del amino 4 del cido

Se encuentra presente como lubricante en el lquido sinovial y en el humor vtreo. Tiene gran capacidad
para fijar agua, y es sensible a la accin de la enzima hialuronidasa. sta est presente en algunas bacterias
y en el esperma, para hidrolizar GAGs de la cubierta del vulo. Una funcin de mucho inters radica en que
facilita la fijacin de factores de crecimiento de los tejidos.

(2). CONDROITINA Y CONDROITIN SULFATO

Estructuralmente es muy semejante al cido hialurnico. Slo cambia en su unidad estructural a la N-acetil-
Glucosamina por Galactosamina, siendo las posiciones de enlace exactamente las mismas. Se encuentra pre-
sente en tejido conjuntivo. Contribuye en las caractersticas tnsil y elstica en cartlagos, tendones y paredes
vasculares. Cuando la Condroitina se sulfata, adquiere gran cantidad de cargas negativas, lo cual atrae agua
con intensidad. Adems, al cargarse negativamente, se une a cationes como Ca ++ y Mg++, por lo que muestra
una alta presencia en tejidos seos.

Cuando la condroitina se sulfata lo hace sobre la N- acetil- galactosamina. Adquiere as nuevas y diversas
caractersticas: La presencia de sulfato en C4 originar Condroitin A y en C6 originar Condroitn C. No apa-
recen libres, sino unidos covalentemente a protenas conformando proteoglicanos.

(3). DERMATAN SULFATO

Tiene una presencia prevalente en piel y vasos sanguneos y vlvulas cardacas. Est relacionado con alteracio-
nes vasculares y hemostticas. Se diferencia del condroitn sulfato en que reemplaza en su unidad disacrida
al cido D- glucurnico por L- idurnico. ste es su epmero en 5. Los grupos sulfato se unen a C4 de la hexo-
samina o al C2 del cido. Tambin se encuentran unidos a protenas bajo la denominacin de Proteoglicanos.

(4). QUERATAN SULFATO

Como su nombre induce, se encuentra presente en cabellos, uas, piel y cartlagos. Cuando vara su estruc-
tura, su lugar de accin puede ser diferente, como cuando se integra a la estructura de la crnea. Siempre lo
hacen en enlazados con protenas. La estructura molecular es muy particular ya que carece de cido urnico
(que es reemplazado por galactosa), lo cual constituye una excepcin de la definicin para este grupo.

(5). HEPARINA

Es la nica integrante del grupo que tiene localizacin intracelular. Es un anticoagulante natural, producido
por los mastocitos, que inhibe la coagulacin de la sangre al estimular la actividad de la antitrombina al ge-
nerar modificaciones estructurales que facilitan su unin con coagulantes activos. Es abundante en hgado,

103
 Luis E. Simes

pulmn y msculo, aunque su presencia orgnica y tisular es general. Tiene una alta densidad de cargas
negativas, lo que favorece sus interacciones con numerosas molculas orgnicas. Su estructura unitaria est
conformada por cido Idurnico (aunque en menor proporcin tambin existe glucurnico) unido a glucosa-
mina por enlaces () 14. Los grupos amina u cidos pueden estar sulfatados (en C2 y C6 respectivamente)
y presentar grupos acetilo.

(6). HEPARAN SULFATO

Presenta una estructura similar a la Heparina, aunque se encuentra ms sulfatada. La relacin cido idur-
nico/ cido glucurnico es menor que en el caso de la heparina. Interviene activamente en procesos de la
matriz celular, adhesin intercelular y regulacin enzimtica.

MOLCULAS CONJUGADAS

Las molculas de importancia biolgica estn diferenciadas en glcidos, lpidos, protenas, de acuerdo con
una clasificacin basada en particularidades fsico-qumicas y biolgicas, pero en realidad todas trabajan arti-
culadamente en funcin de una matriz general. Es frecuente encontrar estructuras de diferentes grupos rela-
cionadas entre s. Podemos hallar formas conjugadas, en las cuales las molculas de un grupo se encuentran
conjugadas con las de otro grupo biolgico. Por ello es frecuente encontrar glcidos asociados a protenas y
a lpidos

GLUCIDOS CONJUGADOS

Si bien lo observado en las propiedades de los compuestos considerados abarcaban funciones de plsticas y
de sostn, o de reserva energtica, al asoci

arse mediante enlaces covalentes con lpidos o protenas, adquieren otras funcionalidades principales como
las de sealizacin e interacciones metablicas. Las glicoprotenas y glicolpidos participan de los caminos
del metabolismo intermediario, cumpliendo funciones primordiales para el mantenimiento de las funciones
biolgicas del hombre.

Glicoprotenas

Las glicoprotenas estn formadas por una fraccin mayoritaria de protenas unidas covalentemente a uno o
varios oligosacridos. Es comn su presencia en sangre, en la matriz extracelular y en la superficie externa de
la membrana plasmtica. Se sintetizan en los ribosomas y por el retculo endoplsmico se alojan en Golgi. La
diversidad de glcidos que presentan en su estructura permite una mayor diversidad de sealizacin celular.
Esto origina un cdigo glucdico que se encuentra actualmente en profundo desarrollo. Las lectinas son pro-
tenas capaces de reconocer motivos especficos de las glicoprotenas.

El carbono anomrico de los glcidos se unen mayoritariamente por enlaces O- glucosdicos a serina y treo-
nina, y en mucha menor escala enlaces N-glicosdico hacia residuos de Asparagina.

Proteoglicanos (Pgl)

Los proteoglucanos son molculas en las que su parte prosttica est formada por glicosaminglicanos,
GAG. El porcentaje en masa de la los glicosaminglicanos es muy superior a las de las protenas, dominando
estructuralmente y ofreciendo el mayor sitio de actividad biolgica de esta asociacin molecular. A pesar de
la frecuencia con que se asocian protenas y glcidos, se han descripto alrededor de treinta molculas de
Pgl29.

29 Lehninger. Principles of Biochemistry. Fourth Ed. Pag.256.

104
 Bioqumica

Los enlaces covalentes entre el glcido y la protena o la superficie celular se establece por enlaces glicosdi-
cos de Nitrgeno (de queratan sulfato a los aminocidos asprtico o glutmico/asparagina) u Oxgeno (de
condroitin sulfato al dipptido Serina- Glicina)

Los proteoglucanos. Existe un core de protenas a las que se unen molculas de GAG.

En el cartlago el proteoglicano cumple funciones de resistencia y flexibilidad. Su elevada carga negativa fa-
vorece la atraccin de agua y en consecuencia la regulacin de la flexibilidad y resistencia.

Las bacterias poseen una pared celular que les da resistencia y proteccin. Mientras las bacterias gram
positivas poseen una pared gruesa, las gram negativas poseen una pared diez veces ms fina, formada por
peptidoglucano encerrado entre dos capas lipdicas. Este diferente entrecruzamiento permite que las gram
positivas tomen el colorante de yodo mientras que las negativas no lo retienen.

Los glicolpidos sern tratados en el captulo correspondiente de lpidos.

Mucopolisacaridosis

Las Mucopolisacaridosis, son enfermedades hereditarias poco frecuentes originadas en la falta o alteracin
de enzimas que intervienen en el catabolismo de los GAG. Como consecuencia se producen acmulos que
afectan al aparato locomotor, con deformidades esquelticas y al SNC, con dficit mental y muerte prema-
tura. De acuerdo con la enzima deficitaria se mencionan:

Sndrome de Hunter: Dficit de iduronato sulfatasa, que lleva al acmulo de heparn y dermatn sulfato

Sndrome de Hurler-Schei: la enzima afectada es la iduronidasa, lo que produce acmulo de los mismos me-
tabolitos.

Sndrome de Sanfilippo, acumula heparn sulfato por diversos caminos metablicos

105
 Bioqumica

CAPITULO 4

LIPIDOS
La segunda gran familia de sustancias de importancia biolgica que trataremos es el correspondiente a las grasas
o lpidos. Este es un grupo muy amplio y heterogneo de compuestos que se encuentran abarcados en base a
caractersticas fsicas. Efectivamente, mientras la definicin de glcidos se basa en la presencia de grupos funcio-
nales (Carbonilo y poli hidroxilo), las grasas se agrupan en funcin de una caracterstica fsica general dominante:
su insolubilidad en agua y concomitante solubilidad en solventes orgnicos (no acuosos). La razn de la baja o nula
hidrosolubilidad tiene su fundamento en la carencia de polaridad que denotan sus molculas. Se dice entonces
que son compuestos hidrofbicos o de elevada hidrofobicidad.

Es por ello que la heterogeneidad del grupo es muy grande, ya que muchas pueden ser las estructuras qumicas
que exhiban baja polaridad, y que no es privativa de unos pocos grupos qumicos, sino de una gran diversidad de
ellos.

Esta realidad fsico-qumica ha llevado a que existan varios sistemas de clasificacin de los lpidos: por su comple-
jidad, por sus grupos funcionales, por sus funciones, etc.

Nuestra descripcin abarcar a los lpidos simples, complejos y combinados, de mayor importancia conceptual y
prctica para nuestro enfoque, pero no haciendo hincapi en los subgrupos, sino en sus estructuras y funciones.
Aqu quedarn abarcadas sustancias liposolubles, de elevado peso molecular, formadas por esqueletos de Carbo-
no con Hidrgeno, Oxgeno, Nitrgeno, Fsforo y Azufre como principales componentes.

Caractersticas

En razn de la alta diversidad estructural de las sustancias agrupadas en este captulo, es que podemos afirmar
que los lpidos cumplen un amplio rango funcional vinculado con las actividades biolgicas que desempean en
la clula. Es as que se identifican funciones estructurales y de proteccin, energticas, hormonales, vitamnicas,
proinflamatorias y homeostticas entre otras.

Funcin estructural

Ciertos lpidos conforman membranas celulares y componen la estructura de organelas celulares. Por otra parte,
otros cumplen funciones de proteccin mecnica en clulas y organismos animales. La variabilidad que presen-
tan les permite ejercer funciones de sealizacin, reconocimiento, y antigenicidad entre otras.

Energtica y de reserva

Ciertos lpidos tienen como funcin preponderante aportar energa al organismo cuando es requerida por ste.
Se fundamenta en que los lpidos son buenos generadores de energa, mejor que otros compuestos biolgicos.
Efectivamente el rendimiento calrico es mayor que el de glcidos y protenas (9 Kcal/gr. de los lpidos vs. 4 en
azcares y protenas). A pesar que los lpidos son inmiscibles en agua y que en el organismo el incremento de
lpidos produce desplazamiento de agua, metablicamente son importantes como generadores de agua metab-
lica. Su metabolizacin aerbica (la anaerbica no se da en este grupo) termina en agua, principio aprovechable
como reserva o acumulo de energa de largo plazo. En ciertos animales es frecuente encontrar que la grasa parda
produce ms energa calrica que qumica. Se acumulan donde es necesario responder a demandas energticas
a la vez que rodean rganos a los que protegen mecnica y trmicamente.

107
 Luis E. Simes

Hormonales

Cierto tipo de hormonas estn formadas por molculas lipdicas. La interrelacin entre diferentes rganos, como
la respuesta a seales externas, queda establecida a travs de la accin que realizan algunas estructuras lipdi-
cas, en estas redes hormonales.

Vitamnicas

De la misma manera que lo expresado para las hormonas, ciertas vitaminas, que como tales no se sintetizan en el
organismo, requieren de su aporte exgeno, para cumplir funciones catalticas. Las vitaminas liposolubles confor-
man un grupo cuya estructura qumica es lipdica.

Intermediarios proinflamatorios y hemostticas

Algunos compuestos lipdicos muestran funciones proinflamatorias, y hemostticas como las prostaglandinas y el
tromboxano, respectivamente.

Saponificacin

Algunas grasas tienen capacidad de formar jabones, al comportarse como sales orgnicas. Son aquellos lpidos
que por poseer funcin carboxilo son capaces de reaccionar con cationes bsicos (como sodio, potasio) para con-
formar dichas sales orgnicas. Esta propiedad es utilizada con fundamento pedaggico para establecer un criterio
de clasificacin de sustancias lipdicas. En el ejemplo de abajo se ve como el catin ocupa el lugar del hidrgeno
carboxlico, lo que transforma al cido graso en sal orgnica, en general denominadas jabones.

CH3-(CH2) n COOH + K(OH) CH3-(CH2)n COO K + H (OH)

cido base de potasio sal de potasio agua

Pasaremos ahora a introducirnos en los lpidos de mayor importancia biolgica para nuestro campo de estudio.
Nuestros grupos de anlisis sern los siguientes:

I. CIDOS GRASOS - EICOSANOIDES

II. TERPENOS

III. ESTEROIDES

IV. ACILGLICERIDOS

V. FOSFOGLICERIDOS

VI. CERAS

VII. ESFIGOLIPIDOS

VIII. GLICOLIPIDOS

IX. LIPOPROTEINAS

I. ACIDOS GRASOS

Cuando estudiamos las sustancias cidas vimos que Brnsted y Lowry definieron como cido a toda
sustancia que frente a otra, fuera capaz de donar uno o ms protones (H+). En medio acuoso se solva-
tan, obtenindose la molcula cida Hidronio: H 3 O+. En el caso de los lpidos por no interaccionar en
medios acuosos, esta solvatacin no tendr lugar, y el protn pasar a otra estructura sin sufrir dicha
solvatacin; entre los cidos inorgnicos mencionamos casos como los del clorhdrico, perclrico, sul-
fhdrico, sulfrico, carbnico, ntrico y fosfrico entre otros muy conocidos. En el caso de los cidos

108
 Bioqumica

orgnicos mencionamos que era necesaria la presencia del grupo funcional carboxilo (- COOH), del
cual se desprenda el protn para cumplir su funcin cida. Ejemplos de estos eran el cido actico,
butrico, etc.

Como el grupo carboxilo le confiere a la molcula propiedades polares, los cidos orgnicos de un
bajo nmero de carbonos, mostrarn cierta hidrosolubilidad, la que se ir perdiendo paulatinamente
a medida que se incrementa el nmero de carbonos, y con ello el carcter apolar de la molcula. En
cierto punto, la preeminencia carbonada dotar de hidrofobicidad al cido graso.

Los cidos grasos pueden ser de cadena corta representados por el etanoico, y el butanoico. Los de
cadena media son el hexanoico, octanoico y decanoico. Pero los que verdaderamente interesarn a
nuestro estudio son los de cadena larga, a partir del compuesto de 12 carbonos. Por su tendencia a
esterificarse, se encuentra libre en bajas concentraciones.

12 C : CH3 ( CH 2)10 COOH : cido Lurico (dodecanoico)

14C : CH3 ( CH 2)12 COOH : cido Mirstico (tetradecanoico)

16 C : CH3 ( CH 2)14 COOH : cido Palmtico (Hexadecanoico)

18 C : CH3 ( CH 2)16 COOH : cido Esterico (Octadecanoico)

20 C : CH3 ( CH 2)18 COOH : cido Araqudico (Eicosanoico)

Como podr notarse, en todos los casos estamos mencionando molculas con un nmero par de
tomos de carbono. Ello obedece a que los cidos grasos activos son los de carbonos en nmero
par, ya que ellos son sintetizados a partir de dos molculas idnticas, y entonces cualquier resultado
ser un nmero par de carbonos.

El grupo enunciado anteriormente se caracteriza por mostrar exclusivamente enlaces simples entre
carbonos, por lo cual se encuadran en el grupo de los cidos grasos saturados.

Muchos otros cidos grasos presentan uno o ms dobles enlaces, conformando el grupo de cidos
grasos insaturados o etilnicos.

La aparicin del doble enlace dota a las molculas de nuevas caractersticas que las diferencian de
sus homlogos saturados.

Algunos cidos tendrn un doble enlace, mientras que otros exhibirn dos dobles en-
laces, tres o ms. Cada uno de ellos se integran al grupo de los cidos di , tri o polie-
tilnicos. La posicin del doble enlace tiene importancia para generar ismeros de po-
sicin, por lo cual resulta necesario utilizar un nmero que especifique la ubicacin
del primer carbono del doble enlace, contado desde el grupo carboxilo. Por ejemplo:

109
Luis E. Simes

CH3 - ( CH 2)7 - CH = CH - ( CH 2)7 - COOH

Monoetilnico: OLEICO : Un doble enlace (C9)

CH3 - ( CH 2)4 - CH = CH - CH 2 - CH = CH - ( CH 2)7 - COOH

Dietilnico: LINOLEICO : Dos dobles enlaces (en C9 y en C12)

CH3 - CH 2 - CH = CH - CH 2 - CH = CH - CH 2 - CH = CH - ( CH 2)7 - COOH

Trietilnico: LINOLENICO : Tres dobles enlaces (en C9, en C12 y en C15)

CH3 - ( CH 2)4 - CH = CH - CH 2 - CH = CH - CH 2 - CH = CH - CH 2 - CH = CH - ( CH 2)3 - COOH

Polietilnico: ARAQUIDONICO : Cuatro dobles enlaces (en C5, en C8, en C11 y en C14)

La posicin de la doble ligadura se indica con una letra griega delta mayscula y como superndices
se colocan las posiciones de los dobles enlaces, separados por comas. Otra manera de nombrarlos,
es en lugar de comenzar a contar desde el extremo mas oxidado (carboxilo) como indica la IUPAC, se
comienza a contar desde el metilo del carbono opuesto. Y si el carbono carboxlico es alfa, , el l-
timo se identifica con la ltima letra griega omega, El nmero que acompaa a , indica el nmero
de carbono donde est la primer doble ligadura contando desde el metilo.

Actualmente esta nomenclatura es muy usualmente utilizada tanto en el mbito nutricional y mdi-
co, como as por los medios de comunicacin y divulgacin.

En base a lo expuesto, la correspondencia para el caso de los ejemplos anteriores, se especifican de

la siguiente manera:

cido Graso Delta Omega

OLEICO : Un doble enlace (C9) 9 9
LINOLEICO : Dos dobles enlaces (en C9 y 9,12 6
en C12)
LINOLENICO : Tres dobles enlaces (en C9, 9,12,15 3
en C12 y en C15)
ARAQUIDONICO : Cuatro dobles enlaces 5,8,11,14 6
(en C5, en C8, en C11 y en C14)

110
 Bioqumica

Podemos observar en el cuadro, que el cido oleico, muy comn en aceites vegetales, como el aceite
de oliva, del que deriva su nombre, corresponde a la serie de aceites de los omega- 9. El linolnico,
pertenece a la serie de los cidos grasos omega 3, presente en el lino, que son muy recomendados
actualmente como protectores cardiovasculares, en presentaciones de venta libre, como el aceite de
cha, el aceite de pescado y el aceite de Krill.

Por otra parte, observamos que tanto el cido araquidnico como el linoleico pertenecen a la serie
omega-6. Estos se encuentran presentes en aceites refinados como el de girasol y de maz. El aumen-
to de cidos grasos omega 6, parecen estar relacionados con obesidad, diabetes y sntesis de sustan-
cias proinflamatorias. Pero no se trata de reducir al mximo la cantidad de omegas 6, sino que se debe
propender mantener la relacin entre ellos que resulte ms favorable para la salud.

No todos los cidos grasos son sintetizados en el hombre. Por ello, es necesario que estos cidos gra-
sos esenciales sean provistos por la dieta. Por ejemplo el linoleico de la familia omega 6 y el linolnico
de la familia omega 3, se incorporan a travs de los alimentos, desde fuentes vegetales o de animales
como en el caso del cido araquidnico. El organismo no puede sintetizar cidos grasos poliinsatura-
dos.

Adems, no todos los cidos grasos tienen funciones biolgicas especficas. Recurdese que cuando
tratamos el tema de monosacridos se expres que los ms activos, con muy pocas excepciones
correspondan a los monosacridos de la Serie D, ya que la serie L no presentaban interacciones
biolgicas reconocidas. En el caso de los cidos grasos, la existencia de dobles enlaces promueve la
posibilidad de adquirir dos formas diferentes a esa misma molcula: Los ismeros Cis y los Ismeros
trans. Los ismeros Cis, son los que muestran actividad biolgica favorable.

Si observamos el cido oleico, notamos que este adquiere las dos formas predichas: cis y trans. La
forma cis corresponde al aceite oleico como lo reconocemos, mientras que su forma trans, el cido
eladico, no se encuentra en el organismo humano. Pueden ser diferenciables por su temperatura de
fusin, que resultan en general menores en las formas trans que en las respectivas cis.

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Luis E. Simes

http://themedicalbiochemistrypage.org/

Propiedades de los cidos grasos:

Son molculas anfipticas, ya que presentan una zona polar, que radica en el extremo carboxilo, y una
zona no polar que corresponde a la cadena carbonada. Cuanto ms grande sea la cadena, presentarn
mayor hidrofobicidad. En general son lineales pero se pueden encontrar algunos ramificados, otros
de cadenas con un nmero de carbonos impar y otros que presentan ciclos o triples enlaces, aunque
no sean los ms comunes.

La situacin anfiptica hace que en lugares donde existe el agua, y que en el organismo es la sustancia
preponderante, las molculas se deben ordenar de manera tal que sus cabezas polares se orienten
hacia el agua y sus extremos hidrofbicos tiendan a alejarse del agua, generando una asociacin con
sus vecinas, para generar una zona no polar hacia el cual orientar sus extremos apolares.

Los diez primeros cidos son lquidos a 20C, Los cidos grasos superiores son slidos y sus puntos de
fusin crecen con el nmero de tomos de carbono.

A igual nmero de carbonos, los cidos grasos saturados presentan mayor punto de fusin que los
insaturados. Estos tendrn mayor punto de fusin que sus homlogos insaturados.

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 Bioqumica

cido Esterico ; C18:0 / PF= 69,6 C

cido Oleico ; C18:1 / PF= 13,4 C

cido Linoleico ; C18:2 / PF= -5 C

cido Linolnico ; C18:3 / PF= -11 C

El grado de insaturacin de un lpido puede ser medido por el ndice de Iodo, que evidencia la can-
tidad de dobles enlaces de acuerdo a la incorporacin de Iodo por adicin a los dobles enlaces. Los
insaturados pueden transformarse en saturados por adicin cataltica de hidrgeno. La incorporacin
de Oxgenos en las dobles ligaduras puede generar epxidos, que son un ndice de la rancidez de las
grasas.

Abajo puede observarse como a travs de la rotura del segundo enlace se produce la adicin de H, I
y O.

H H
H2 CH CH

+ I I
- CH == C - I2 CH CH

O
1/2 O2 CH CH

Eicosanoides
Los eicosanoides son molculas derivadas de cidos grasos de cadenas insaturadas de 20 carbonos (eico-
sa=20). Por ello el cido araquidnico se constituye en la molcula central de las que derivan los compuestos que
integran el grupo.

cido Araquidnico

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 Luis E. Simes

De acuerdo con la disposicin que adquieran esos 20 tomos de carbono, la conformacin de uno o ms ciclos
y la posicin y disposicin polinica en la cadena determinarn variantes con funcionalidades biolgicas muy
amplias. Estas molculas se clasifican en tres grupos:

Prostanoides,

Leucotrienos y

Lipoxinas.

Se ha verificado que estas molculas tienen ms de un receptor, los que les permiten ejercer acciones contra-
puestas, conforme el receptor con el que interacten.

a) Prostanoides
Su nombre se origin cuando al descubrirse estas sustancias se pens que se originaban en la prstata30. Sin em-
bargo, los prostanoides abarcan un grupo de sustancias con muy diversas y a veces contrapuestas funciones. En
este grupo estn las prostaglandinas, que cumplen funciones como mediadores tisulares locales.

Poseen un ciclopentano central, generado por la ciclacin de la cadena de 20 C. Abarca a las prostaglandinas, las
prostaciclinas y al tromboxano.

Prostaglandinas (PG): Son molculas de 20 tomos de Carbono que contienen un ciclopentano central. Son
hormonas locales que se encuentran en todo el organismo, cumpliendo variadas funciones. Existen hasta el mo-
mento 9 receptores de prostaglandinas que han sido identificados. La misma prostaglandina puede producir un
efecto sobre un receptor y el contrario al actuar sobre otro.

Cada grupo de PG proviene de un eicosanoide particular, lo que produce diferencias en sus dobles enlaces o ci-
clos. As la PGE2 produce contraccin del msculo liso sobre el receptor EP1 y dilatacin sobre el EP2. Una simple
modificacin estructural origina una diferencia de funciones. La PG E2 posee un =O en C9, mientras la PG F, en
esa posicin tiene un oxhidrilo. La PGE2 se diferencia de la uno en que aquella posee un doble enlace en 5. Las
funciones autcrinas y parcrinas31 de las PGs abarcan acciones sobre los bronquios, tero, paredes del estmago,
plaquetas y otras funciones sobre la liplisis y la inflamacin. Los macrfagos y monocitos segregan gran cantidad
de PGE2 como respuesta a lipopolisacridos bacterianos y mediadores de la inflamacin.

Prostaciclina (PGI):

En algunas clasificaciones se la engloba con las prostaglandinas (PGI2). Tiene accin broncodilatadora, es vasodila-
tador e induce hipotensin. Cuando se une al Receptor IP (acoplado a protena G), incrementa el flujo sanguneo
local, con eritema y edema y estimula las terminaciones nerviosas generando dolor y en consecuencia los eventos
inflamatorios. Es un importante inhibidor de la agregacin plaquetaria, facilitando el sangrado.

30 En algn momento se inquiri acerca de dnde se originaban en la mujer.

31 Son molculas que actan sobre la clula que las produce o sobre el tejido cercano, respecti-
vamente.

114
 Bioqumica

Tromboxano. Presentan un grupo oxano (pg. 49), es decir un puente oxgeno sobre el ciclopentano.

Se origina por accin de la ciclooxigenasa sobre el cido araquidnico. Es el mayor agregante plaquetario, y vaso-
constrictor potente, cuya accin favorece la hemostasia. En ese sentido se opone a la ya vista Prostaciclina, que
actuaba como inhibidor de la agregacin.

b) Leucotrienos (LT)

El nombre de los integrantes de este grupo proviene de su origen leucocitario (leuco) y de presentar sus miem-
bros tres enlaces doble (tri eno). Provienen del cido araquidnico por accin de la enzima lipo-oxigenasa. Fa-
vorecen la inflamacin aumentando la permeabilidad vascular. Su potente accin estimulante del msculo liso, la
incrimina en los procesos asmticos.

c)Lipoxinas (LP)

Este es el nico conjunto de los eicosanoides que es inhibidor de la inflamacin, disminuyendo la quimiotaxis de
los neutrfilos. As como el tromboxano es autoregulado por las prostaciclinas, las lipoxinas se oponen a la accin
de los leucotrienos.

Lipoxin B4 de Fvasconcellos 22:25, 2 November 2007 (UTC) - Own work, after KEGG entry C06315.. Disponible bajo la licencia Domi-
nio pblico va Wikimedia Commons - http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Lipoxin_B4.svg#mediaviewer/File:Lipoxin_B4.sv

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 Luis E. Simes

TERPENOS

Los terpenos son productos naturales, que por su contenido de anillos, aislados y condensados, se encuentran
muy relacionados con los cicloalcanos. Tambin observan un elevado contenido de dobles enlaces, favoreciendo
procesos de resonancia y movilidad electrnica. Los terpenos se encuentran en una gran cantidad de especies
vegetales, a las cuales identifican con algunas de sus caractersticas aromticas. Se encuentran como aceites
esenciales.

Por ejemplo el a pineno se encuentra en la esencia de pino y al guaiazuleno en el aceite de geranio.

Si bien los terpenos fueron inicialmente aislados e identificados a partir de la trementina, obtenido de una mez-
cla de hidrocarburos de C10H16, con posteridad fue generalizndose el nombre a los compuestos oxigenados de
origen vegetal insaturados y/o cclicos.

Todos los terpenos derivan de un monmero denominado isopreno:

Qumicamente se define como isopreno al 2 metil, butadieno 1,3.

CH3
l
CH2 = C CH= CH2

Esta unidad se identifica con la frmula general (C5 H8)n

La clasificacin de los terpenos se basa en la cantidad de unidades de isopreno que los constituye;

Debe tenerse en cuenta que las unidades de isopreno se pueden unir cola cola, cola- cabeza y cabeza-cabeza,
lo que aumenta exponencialmente la posibilidades de encontrar variantes qumicas sobre la misma composicin.
Tngase presente tambin que cada unidad puede tener dobles enlace o ciclos en distinta proporcin. Por otra
parte tanto los ciclos como los dobles enlaces pueden originar sobre cada uno de ellos alternativas geomtricas
cis/cis; cis /trans o trans/trans.

As encontramos una gran variedad de terpenos, de los que nombraremos por su inters para nuestro estudio:

Monoterpenos: tienen dos unidades de isopreno; su frmula molecular es C10H16; ntese que el alcano corres-
pondiente es C10 H22. Por qu hay 6 tomos de carbonomenos? Por los dobles enlaces o anillos que contengan.
Por ello podrn ser:

Acclicos con tres enlaces dobles: Geraniol

Monocclicos con 2 enlaces dobles: Mentona

Bicclicos con un enlace doble: Pinano

Tricclicos sin dobles enlaces: Tricicleno

Sesquiterpenos: tienen tres unidades de isopreno, es decir que su frmula es C15 H24 . En este grupo destacamos
al farnesol, terpeno acclico que origina escualeno.

Diterpenos: tienen cuatro unidades de isopreno, es decir que su frmula es C20 H32. A los efectos de nuestro inte-
rs, el diterpeno monocclico ms importante es la Vitamina A, presente en aceites de hgado de pescado. Es una
vitamina liposoluble, indispensable para el correcto funcionamiento del organismo, resistencia a las infecciones

116
 Bioqumica

y mantenimiento de la visin. Su precursor es el caroteno. Otro diterpeno importante es el fitol, alcohol que se
encuentra esterificado en las plantas con clorofila.

Triterpenos: tienen seis unidades de isopreno. Aqu el escualeno C30 H50, acclico, proveniente del aceite de
hgado de los peces esculidos, como el tiburn, tiene importancia prctica por ser un precursor del colesterol.
Su estructura es toda trans.

Sus miembros en general son tetra y pentacclicos.

Tetraterpenos: Contiene a los carotenos, pigmentos rojizo-anaranjados presentes en los vegetales y animales,
que tienen similitud entre s. El licopeno es acclico, de color rojo se encuentra en el tomate y la sanda.

Dentro de los tetracarotenos (ocho unidades de isopreno), bicclicos, los representantes ms significativos son
los carotenos y , mientras que el gamma() es monocclico. Otros derivados de este grupo son las xantinas.

Los carotenos son precursores de las vitaminas A, E y K.

La vitamina A (Retinol) se encuentra en alimentos de origen animal. En los vegetales est como caroteno. Su
oxidacin da retinal y posteriormente retinoico. Tiene uso en dermatologa. El retinal forma parte del proceso de
isomerizacin de los bastones en la retina.

La Vitamina E (Tocoferol), tiene diversas estructuras. La forma abundante es el Tocoferol. El efecto ms claro de
los tocoferoles es su accin antioxidante. Su oxidacin produce efecto protector sobre estructuras poliinsatura-
das, como en las membranas celulares.

La Vitamina K tiene un ciclo naftoquinona, con isoprenos laterales. La vitamina K ejerce su accin sobre protenas
de la coagulacin, como la protrombina. Con la intervencin del calcio, su accin se correlaciona con los fosfol-
pidos plaquetarios. La forma K2 la produce la flora bacteriana, por lo cual su dficit puede estar asociado al uso
crnico de antibioticoterapia.

Es importante nombrar a la Coenzima Q10, que interviene en la cadena respiratoria. Se trata de un penta terpe-
no, es decir formado por 10 unidades de isopreno.

ESTEROIDES

Los esteroides conforman un grupo complejo y polifuncional, estructuralmente constituidos un grupo ciclopenta-
noperhidrofenantreno (CPPHF), tambin llamado esterano32, o gonano.

Esterano o Gonano o CPPHF :Esta constituido por el fenantreno (pag. 49) y el ciclopentano (pag, 45). Tiene 17 carbonos en total.

Este ncleo conformado por el CPPHF posee 17 carbonos y puede adquirir diferentes estructuras conformacio-
nales: silla o bote (pg. 80). Adems se debe tener en cuenta la isomera cis/trans que se origina en presencia de
dobles enlaces o ciclos por lo cual tiene importancia si los anillos se ordenan en posicin cis o trans.

Por otra parte, la existencia de Carbonos asimtricos incide sobre la disposicin que se adopta y en consecuencia
la posibilidad de originar nuevas sustancias ismeras. Adems, los sustituyentes originan nuevas molculas. Los
C3, C10, C13 y C17, muestran mayor proclividad a adquirirlos. La nomenclatura del ciclo utiliza la partcula per-

32 Es muy importante tener en claro la numeracin de ste ncleo ya que es fundamental para
identificar correctamente los sustituyentes que originan molculas derivadas de l.

117
 Luis E. Simes

hidro, es decir que tiene la mxima cantidad de hidrgenos que les permite la estructura carbonada, es decir
simples enlaces para conformar un compuesto totalmente saturado. Por ello, la aparicin de dobles enlaces (in-
saturacin) es otro elemento estructural, capaz de originar nuevas variantes.

La estructura del esterano ms comn en los Esteroides muestra:

Isomera geomtrica: Los Ciclos B-C y C-D estn entre s en posicin trans, mientras que los ciclos A-B pueden
adquirir ambas disposiciones.

Carbonos asimtricos: son los que comparten ciclos, lo que los hace quirales: 5, 8, 9, 10, 13 y 14.

Los sustituyentes que estn por encima del plano se dice que estn en CIS o b. Por debajo del plano, ser TRANS
o

Los sustituyentes de carbonos 10 y 13 estn siempre en CIS. Se dibujan con lneas enteras.

Colesterol

Es el primer esteroide que describimos. Su importancia fisiolpatolgica no est en duda y se le presta especial
atencin como determinante de salud.

Recordemos el triterpeno escualeno (C30H50), ya que es un precursor del colesterol. Se relacionan as los terpenos
con los esteroides.

Sus particularidades estructurales son:

Anillos A/B, B/C y C/D estn en trans

Posee 27 carbonos. De los 17 originales del esterano, se agregan dos metilos en C10 y 13; que pasan a numerarse
como 19 y 18 respectivamente. En carbono 17 se agregan 8 carbonos en una cadena de seis carbonos con dos
metilos en 20 y 25.

Es un esterol por poseer un OH en C3, lo que puede generar epmeros en esta posicin

Muestra un doble enlace en C5

Puede formar steres en posicin 3 al reaccionar el OH con cidos grasos. Estos steres tienen gran poder ate-
rognico.

Los steres de Colesterol son altamente hidrofbicos, ya que perdieron el nico grupo capaz de generar puente
hidrgeno.

Tambin puede formar teres con otros alcoholes

El doble enlace se puede saturar u oxidar

Mezclado con otras grasas se torna emulsionable, adquiriendo la capacidad de absorber agua para formar emul-
siones

118
 Bioqumica

A nivel biolgico muestra una extraordinaria presencia en las membranas celulares eucariotas. Por otra parte es
un componente fundamental de las vainas de mielina en los nervios. Esto se basa en el bajo carcter dielctrico
que posee, lo que le permite actuar como un eficaz aislante de la conduccin nerviosa. A partir del colesterol se
sintetizan cidos biliares y todas las hormonas esteroideas. Es tambin un precursor de la Vitamina D, la nica
de las vitaminas liposolubles que es esteroidea. Recordemos que las otras (Provitamina A, Vitamina A, E y K) son
terpnicas. El colesterol es aportado en la dieta por los alimentos de origen animal y endgenamente es sinteti-
zado en el hgado.

cidos Biliares

Los cidos biliares poseen un ncleo colano de 24 C.

Se originan a partir del colesterol por acortamiento de la cadena carbonada, la cual queda reducida a 5 carbonos
de los cuales el carbono primario se oxida a carboxilo.

En la figura vemos el cido Clico: 3, 7 , 12 tri hidroxi colanoico.

Se puede observar que adems del OH del C3 presente en el Colesterol se hidroxilan los C 7 y 12 en configura-
cin , ya que estn por debajo del plano.

El otro cido biliar primario es el producido por la deshidroxilacin del C12: cido quenodesoxiclico (3, 7 di
hidroxi colanoico)

El -OH de C7 es importante ya que sufre su escisin por accin de las bacterias intestinales.

Al actuar las bacterias, los cidos biliares primarios pierden sus Oh de C7 generando respectivamente:

cido desoxiclico: 3, 12 di hidroxi colanoico

cido litoclico: 3, hidroxi colanoico

119
 Luis E. Simes

Oxhidrilos cidos Biliares Oxhidrilo cidos Biliares

adicionados Primarios sustrado Secundarios

cido Clico cido Desoxi

Clico
+ 7 12 3 7 12 trihidroxi 3 12 dihidroxi
colanoico colanoico

Colesterol - 7

+ 7 cido Queno cido Lito

DesoxiClico Clico
3 7 dihidroxi 3 hidroxi
colanoico colanoico

Se conjugan con el aminocido taurina y la glicina, a travs de enlaces amida, originados entre el carboxilo de los
cidos biliares y el grupo amino de los aminocidos.

De acuerdo con el aminocido que se conjugue, se obtendrn los conjugados tauro o glicoderivados:

cido biliar Glicocola Taurina

cido Clico cido Glicoclico cido TauroClico
cido DesoxiClico cido GlicoDesoxiclico cido Tauro Desoxi Clico
cido Queno Desoxi cido Glico QuenoDesoxi cido Tauro QuenoDesoxi
Clico clico clico

Son cidos dbiles que se neutralizan con sodio y potasio, originando sales biliares.

Los cidos biliares sintetizados en el hgado se almacenan en la vescula biliar. Cuando son secretados a intestino,
actan como tensioactivos emulsionantes, lo que aumenta la superficie de exposicin de las grasas, apolares, y
favoreciendo su exposicin en un medio acuoso.

Hormonas Esteroideas

Derivadas del colesterol -molcula de 27 carbonos- estas hormonas esteroideas se originan por acortamiento o
desaparicin de la cadena lateral. As como los cidos biliares poseen 24 carbonos, este grupo de molculas pre-
sentan un acortamiento mayor: 21, 19 y 18 molculas en cada tipo hormonal. De acuerdo con su origen orgnico,
se pueden subclasificar en:

120
 Bioqumica

Hormonas Crtico Adrenales (Corteza Suprarrenal)

De la zona glomerular

De la zona fascicular

De la zona reticular

Hormonas Sexuales

Masculinas

Femeninas

Las hormonas crtico adrenales se originan en la corteza de las glndulas suprarrenales, en sus diferentes zonas

Las hormonas adrenales ms importantes son:

Los mineralocorticoides, producidos en la zona glomerular, tienen 21 Carbonos. El metabolito ms importante es

la Aldosterona, que tiene funciones en la regulacin de la presin arterial y en manejo de los electrolitos. Acta
sobre el rin en el tubo contorneado distal favoreciendo la reabsorcin de sodio y agua y excretando potasio.
Tambin interviene en la concentracin de bicarbonato participando en la regulacin cido base. Integra el sis-
tema Renina- Angiotensina Aldosterona. Se encuentra disminuida en la enfermedad de Addison y aumentada
en la enfermedad de Conn. El incremento de aldosterona lleva a un hiperaldosteronismo, caracterizado por hi-
pertensin diastlica, hipopotasemia y alcalosis metablica, con una incidencia mayor en mujeres que hombres.

Los Glucocorticoides se sintetizan en la zona fascicular. Participan de la regulacin del metabolismo glucdicos. El
miembro central de este grupo es el cortisol, que tambin posee 21 tomos de Carbono. Se caracteriza por po-
seer un OH en C11. Es la hormona del stress respondiendo a ste con elevados niveles. Acta cuando disminuye
el nivel de glucemia estimulando la gluconeognesis. Por otra parte inhibe al sistema inmune y a los procesos
inflamatorios.

Los Andrgenos se generan en la zona reticular a partir del androstano, molcula de 19C.

El Androstano genera andrgenos suprarrenales (Testosterona, Androstenediona, y Androsterona) aunque en el

hombre la mayor produccin corresponde al testculo.

121
 Luis E. Simes

Un precursor comn con los estrgenos es la DehidroEpiandrosterona y su forma sulfatada.(DHEA y DHEA-S)Hor-

monas sexuales

Hormonas sexuales

Masculinas: La molcula de androstano, es la molcula inicial a partir de la cual se sintetizan las hormonas sexua-
les masculinas. Pertenecen al grupo de los compuestos esteroides de 19 carbonos. La ms importante es la Tes-
tosterona, sintetizada en las clulas de Leydig. En la mujer la testosterona es sintetizada en menor concentracin
en el ovario, que luego es convertida a progesterona en las clulas foliculares.

Un metabolito importante es la Dihidro testosterona que se produce en piel.

Femeninas: poseen funciones anabolizantes y determinan los caracteres sexuales secundarios en la mujer. Ya se
ha mencionado a la testosterona, hormona tpicamente masculina, pero que es tambin producida en menores
concentraciones en la mujer. Aqu definiremos dos grupos:

Estrgenos y Progesterona.

Los estrgenos se forman en el ovario y pertenecen al grupo de molculas de 18 carbonos. Es un compuesto aro-
mtico por tener tres dobles enlaces en el anillo A. Su ncleo fundamental es el estrano, un derivado metilado
en 18 del esterano (CPPHF). La hormona ms activa es el estradiol, que presenta hidroxilacin en 3 y beta 17. El
estriol posee tres oxhidrilos (incorpora un OH en alfa 16.y la estrona que posee un grupo funcional ceto por
oxidacin del -OH de C 17.

122
 Bioqumica

Los progestgenos son producidos por el cuerpo lteo post-ovulatorio. Su ncleo general es de progestano, que
posee metilos en 18 y 19, y una cola cetnica de dos carbonos en 17 (carbonos 20 y 21). La hormona de mayor
importancia es la progesterona, que posee un segundo grupo ceto en C3.

Es precursor de otras hormonas esteroideas; su accin es pro gestacin estimulando a la mucosa uterina para
favorecer la implantacin.

Grupo Nombre Origen N C

principal
Mineralocorticoides Aldosterona Corteza Suprarrenal

Zona glomerular 21
Glucocorticoides Cortisol Cortez Suprarrenal

Zona Fascicular
Progestgenos Progesterona Cuerpo lteo
Androstano Corteza suprarrenal
Andrgenos Zona Reticular 19
Testosterona Testculo, Ovario
Estrgenos Estradiol

Estriol Ovario 18

Estrona

Vitamina D
Dentro de las vitaminas liposolubles, la Vitamina D es la nica que presenta estructura esteroidea, aunque este
tenga, a diferencia de los grupos analizados hasta aqu, abierto el anillo B.

Presenta las Formas D2 (Ergocalciferol) de origen vegetal y la forma D3, (Colecalciferol). La forma activa es la que
se hidroxila en C1 en el rin y en C25 en hgado originando la forma activa 1,25 di Hidroxi- Colecalciferol.
Su sntesis se produce en la piel, donde la exposicin solar favorece la transformacin de su precursor (7-
dehidrocolesterol) por la accin de los rayos UV en Vit. D3. En algunas regiones nrdicas, donde la insolacin es
limitada, la incidencia de hipocalcemia es mayor. Su accin, similar a la de la ParatoHormona, se ejerce sobre el

123
 Luis E. Simes

metabolismo fosfoclcico, estimulando una protena de transporte en intestino. En rin aumenta la reabsorcin
de calcio y fsforo, y en el hueso favorece la re absorcin y depsito clcicos. El incremento de Vitamina D conduce
a hipercalcemia, mientras que su dficit acarrea hipocalcemia y problemas seos.

II. IV. ACILGLICERIDOS

Los acilglicridos integran un grupo de steres conformados por el polialcohol propano tri ol (glice-
rol) con cidos grasos.

Los acilglicridos pueden ser mono, di o triglicridos segn se esterifiquen uno, dos o tres cidos
grasos.

En el caso que reaccione un solo cido graso, se obtendr un Mono Acilglicrido

CH2 O CO . (CH2) n - CH3

l
CH.OH
l
CH2 OH

Vemos que slo ha reaccionado un oxhidrilo quedando dos sin reaccionar. Estos monoacilglicridos
pueden darse con cualquier cido graso, siendo muy frecuentes los de 16 y 18 carbonos, tanto satu-
rados como insaturados. Si n vale 14, estaremos en presencia de ac. Palmtico y el monoacilglicrido
ser el palmitato de glicrilo.

Diacilgliceridos:

En este caso reaccionan dos molculas de cido con una de glicerol.

Por ejemplo:

CH2 O CO . (CH2) n - CH3

l
CH.OH
l
CH2 . O CO . (CH2) n - CH3

Si n = 14, y n = 16 estaremos en presencia de 1 palmitato, 3 estearato de glicerilo, indicando que el

di acil glicrido tiene un enlace ster en el carbono 3 con el cido esterico y en 1 con el palmtico.
El Carbono 2 del glicerol, cuando los sustituyentes en c1 y c3 son diferentes, se torna quiral. En caso
de que los cidos en carbono 1 y sean iguales, el C2 no ser asimtrico.

124
 Bioqumica

CH2 O CO . (CH2) 14 - CH3

l
*CH.OH
l
CH2 . O CO . (CH2) 16 - CH3
1 palmitato, 3 estearato de glicerilo

CH3 O CO . (CH2) 16 - CH3

l
*CH.OH
l
CH2 . O CO . (CH2) 14 - CH3
1 estearato, 3 estearato de glicerilo

Estos dos casos, que podran ser considerados idnticos, se verifica que ambos son diferentes, en
razn de la estructura tetradrica del carbono. El carbono 2 en este caso es asimtrico.

Triacil Glicridos (Triglicridos)

Estas estructuras conocidas como triglicridos tienen gran trascendencia en la fisiologa y patologa
humanas.

El glicerol se encuentra esterificado por tres cidos grasos. Cuando estos son iguales entre s, los
compuestos formados son homo glicridos.

CH2 O CO . (CH2) n - CH3

l
CH3- (CH2)n - O- C O C -H
l
CH2 O CO . (CH2) n - CH3

n=n=n homoglicrido. Si n= 14, sera tripalmitato de glicerilo

Cuando son tres los cidos grasos que se combinan con el glicerol, el cido que se une al carbono 2,
por razones estricas se orienta en la direccin opuesta a los de los c1 y c3.

Dado que los carbonos del glicerol tienen libertad de giro, sus sustituyentes pueden orientarse en
120. Visto de arriba, sera:

1 2

125
Luis E. Simes

En cambio si los cidos grasos son diferentes, formarn hetero glicridos.

CH2 O CO . (CH2) 12 - CH3
l
CH3- (CH2)12 - O - C O C H
l
C H2 O CO . (CH2) 7 CH=CH (CH2)7 CH3

1,2 Di lauritato, 3 oleato de glicerilo

Los triglicridos, por tratarse de estructuras eminentemente hidrofbicas tienen comportamiento li-
pdico, mientras que los mono y diacil glicridos, conforman molculas anfipticas por la presencia
de OH libres en cadenas carbonadas. Cuanta ms longitud tengan esas cadenas grasas, mayor ser el
punto de fusin. Para igual cantidad de carbonos, las molculas insaturadas presentarn un punto de
fusin menor que las respectivas saturadas.

Dobles enlaces
N carbonos 0 1 cis 1 trans 2 3 4
4 -4,5C
16 63C 32C
18 71C 16C 45C -5C -11C
20 76C C

Grasas y aceites
En la tabla puede observarse que los glicridos saturados tienen puntos de fusin mayores que los
respectivos insaturados. Por otra parte, cuanto ms larga una cadena carbonada, ms alto su punto
de fusin. Igualmente puede observarse que los ismeros cis tienen menor punto de fusin que sus
respectivos trans.

Tengamos en cuenta que la diferencia entre aceite y grasa se establece por una caracterstica fsica: su
punto de fusin. Se considera que un aceite es todo acilglicrido que a temperatura ambiente (20C)
se encuentra en estado lquido. Por otra parte, una sustancia glicrida slida a esa temperatura
es definida como grasa. Por ello es ms frecuente que los aceites sean de cadenas ms cortas e insa-
turadas que las que conforman las grasas, sobretodo trans.

Por ser los glicridos molculas estricas, puede sufrir el proceso de hidrlisis que romper esos
enlaces covalentes para recuperar el glicerol y los cidos que los conforman.

Hidrlisis
Acil Glicrido + n H2O ==== Glicerol + n cidos grasos
Esterificacin
Muy similar al proceso de hidrlisis es la saponificacin o hidrlisis alcalina (formacin de jabn).
Ella ocurre cuando el proceso de ruptura se realiza a travs de hidrxidos de sodio o de potasio, y
no de agua, lo que produce sales de cidos grasos alcalinas ms glicerol.

Cuando el glicrido es insaturado, el doble enlace puede sufrir ataques qumicos, tales como:

Con hidrgeno se satura el doble enlace

Con oxgeno se oxida, dando cetonas, aldehdos y enlaces perxidos o epoxi. Estos son procesos
conocidos como enranciamiento de las grasas

126
 Bioqumica

Con iodo: permite calcular el ndice de insaturacin

Deshidrogenacin: los enlaces simples pueden producir dobles enlaces y estos enlaces triples por
prdida de hidrgenos

Las hidrogenaciones y deshidrogenaciones pueden producir intertransformaciones grasa/aceite.

Los tejidos animales tienen preponderancia de grasas saturadas de palmitato y estearato, mientras
que es ms comn en vegetales observar la presencia de grasas insaturadas como los oleatos y lino-
leatos.

Los triglicridos constituyen la forma ms comn de acumulacin de energa cuando el organismo

tiene ms aporte que consumo de caloras. Su exceso origina procesos cardiovasculares, con endu-
recimiento de arterias, obstrucciones y aterosclerosis. Las partculas ms ricas en triglicridos, como
veremos en el acpite de lipoprotenas, son los quilomicrones, las partculas de menor densidad.

III. FOSFOGLICERIDOS
Al igual que los acil glicridos, estas molculas estn conformadas por enlaces estricos entre glicerol,
y cidos grasos, aunque en este grupo se encuentra adems una molcula de cido fosfrico esteri-
ficando el OH de carbono 3.

O-
l
HO -- P -- OH
l
OH

Entonces observamos que dos oxhidrilos del glicerol se encuentran esterificados por cidos grasos,
mientras que el tercero se esterifica con cido fosfrico; de all se origina el nombre de fosfolpidos.

La molcula bsica del grupo, conformada por la esterificacin de la molcula de glicerol con dos
cidos grasos y un cido fosfrico se lo denomina cido fosfatdico. Al igual que en los acilglicridos,
el cido de carbono 2 del glicerol, (quiral), se encuentra hacia la izquierda, por lo que es denomina-
do cido L- fosfatdico.

CH2 O CO . (CH2) 12 - CH3

l
CH3- (CH2)12 - O -- C H
I OH
C H2 O - P - OH
OH
L fosfatdico

A pH fisiolgico, el cido fosfrico se encuentra como fosfato. Esa carga negativa origina un grupo
muy polar. Por otra parte, las cadenas carbonadas son apolares. En resumen, los fosfoglicridos son
molculas anfipticas, con una cabeza polar en el fosfato y una cola no polar en las cadenas carbo-
nadas. El C2 se transforma en Carbono quiral, por lo que se pueden generar ismeros en series L o
D.

127
 Luis E. Simes

Cabeza polar

Molcula Anfiptica

Cola no polar
Por otra parte, uno de los oxhidrilos libres del fosfato (y en otros casos dos), pueden reaccionar con
alcoholes a travs de enlaces ster, para dar fosfoglicridos. Segn sea el alcohol (o amino alcohol)
que se una al cido fosfrico, se obtendrn distintos derivados. La Fosfatidil colina (Lecitina), muy
abundante en la membrana celular, es fuente de colina, necesaria para la formacin de acetil colina,
principio colinrgico de importancia fisiolgica. Adems, por su accin surfactante, juega un rol
esencial en las membranas pulmonares, evitando su contacto y rozamiento. El Fosfatidil inositol tiene
menor presencia en la membrana, mientras que la Fosfatidil etanol amina (cefalina) y la Fosfatidilse-
rina muestran su presencia en todos los tejidos.

Hay casos de mayor complejidad, en los que un tercer glicerol es capaz de enlazarse con dos cidos
fosfatdico para originar cardiolipinas (di fosfatidil glicerol).Estas se encuentran en alta proporcin en
las fibras musculares cardacas y adems cumplen funciones en la mitocondria. La reaccin de VDRL,
utilizada para el diagnstico de la sfilis utiliza un soporte antignico de cardiolipinas.

En otros casos se produce una reaccin hemiacetlica, como en los plasmalgenos. El OH de C1 del
glicerol se enlaza al carbonilo de un aldehdo graso.

Veamos sus estructuras:

El cido fosfatdico se compone de glicerina con dos cidos grasos esterificando sus C1 y C2. El C3
ha sido esterificado con cido fosfrico ( H3PO4). A su vez, a un OH del cido fosfrico, se une otro
alcohol, formando un fosfodister.

128
 Bioqumica

Acido graso1 Glicerol Alcohol:

1 Serina
Colina
Acido graso 2 2 Etanolamina
3 cido fosfrico 4 Inositol

Cola no polar cabeza polar

Estas son tpicas molculas anfipticas con una cabeza polar y una cola no polar.

Las enzimas que hidrolizan a los fosfolpidos, son las fosfolipasas.

La fosfolipasa A1 hidroliza el enlace entre C1 del glicerol y el cido graso (1 en la figura)

La fosfolipasa A2, hace lo mismo a nivel de C2 (2) y la fosfolipasa C hidroliza el enlace ster del C3
con el cido fosfrico (3). Por otra parte, la fosfolipasa D ataca el enlace ster entre el cido fosfrico
y el alcohol ( 4).

FLA1 (1)

FLA2 (2)
1

FLC (3) FLD (4)

IV. ESFINGOLIPIDOS
Estos lpidos no poseen glicerol, sino que se forman por la esterificacin de un amino alcohol graso
insaturado, la esfingosina, de 18 carbonos (u otros alcoholes relacionados), de los cuales proviene su
nombre.

La esfingosina es el 1, 3 di hidroxi, 2 amino decaocteno-4.

1 2 3 4
CH20H CH CH CH=CH (CH2)12- CH3
NH2 OH
ESFINGOSINA

Cuando un cido graso se une al grupo amino de C2, por un puente covalente amido, se forma una
molcula de ceramida,

129
 Luis E. Simes

1 2 3 4
CH20H CH CH CH=CH (CH2)12- CH3
NH OH

R-C =O
CERAMIDA

La Ceramida es la estructura fundamental de los esfingolpidos, que se clasifican en dos grupos:

a) Fosfo esfingolpidos
Los fosfo esfingolpidos componen estructuras en las membranas celulares. El ms abundante es la
esfingomielina, que tiene un fosfato esterificando el OH de C1 de la esfingosina, y un grupo colina
esterificando al fosfato. Se conforma as una molcula anfiptica, de cabeza polar (fosfato y colina) y
dos colas hidrofbicas: esfingosina y cido graso).

Este es el nico fosfolpido de membrana, que no posee glicerol. Es muy abundante en Sistema Ner-
vioso, dando sus caractersticas a las vainas de mielina. Cuando vara el cido graso, se lo encuentra
en tejidos como mdula sea e hgado.

Glico esfingolpidos: en este grupo la ceramida se une a glcidos en lugar de cido fosfrico como en
el grupo anterior. Conforme el glcido que se integre, ser el glucolpido sintetizado. Mencionamos:

Cerebrsido: Ceramida unida a D-Glucosa o D-Galactosa, unido por enlace glicosdico 1-BETA

Sulftidos: Ceramida unida covalentemente a galactosa sulfato, 4 o 6.

Globsidos: acompaa a la ceramida a un ligosacrido neutro

Ganglisidos: a diferencia de los anteriores, intervienen oligosacridos cidos. Estas estructuras

acetiladas se unen a diferentes glcidos. En este grupo se destaca por su presencia y funciones me-
tablica y estructurales el cido N-Acetil Neuramnico (NANA). De acuerdo con la cantidad de cido
silico se denominan MG, DG, TG: mono, di, triganglisidos. Adems un subndice indica que se ob-
tiene de 5 - n, donde n es el nmero de monosacridos presentes. Por ejemplo (DG)2, indicara la
presencia de 2 NANA y tres monosacridos.

V. CERAS
Las ceras son sustancias heterogneas, en donde se encuentras cidos grasos esterificados por al-
coholes grasos33 monohidroxlicos. Son sustancias duras, insolubles en agua, que se ablandan con la
temperatura. Tienen funciones de proteccin en epidermis, y en exoesqueletos de insectos o frutas
y hojas de muchos vegetales. Se encuentran en la carnauba, esperma de ballena, lanolina, estearina,
etc.

33 Recordamos que en este libro utilizmos el trmino graso para referirnos a alcoholes de cadena larga (16 a 34 carbonos).

130
 Bioqumica

Son otros ejemplos de ceras:

N C cido N C Alcohol Cera

(16 a 30 at) ( 16 a 34 t)
16 Palmtico 16 Cetlico Palmitato de Cetilo
18 Esterico Estearato de cetilo
20 Araqulico Estearato de Araquilo
26 Certico 26 Cirlico Cerotato de Cirilo
30 Miriclico Cerotato de Miricilo
30 Melsico 18 Octadeclico Melistato de Octadecilo

VI. LIPOPROTEINAS
Hemos recalcado en numerosas oportunidades que el solvente biolgico por excelencia, adems de
ser la sustancia ms abundante del organismo humano, es el agua. Por otra parte, el estudio de los
lpidos nos llev a que la definicin del grupo sede los lpidos se estableca por una realidad fsica,
ms que por los grupos funcionales, diversos, que los determinan internamente: su insolubilidad en
agua. Este choque entre dos tipos de sustancias, que no se pueden disolver entre s, y que adems
deben compartir estructuras y funciones, encontraba una solucin a esa tensin con la formacin de
bicapas y micelas, es decir una resolucin mecnica y fsica a ese conflicto. La otra posibilidad es que
se formen estructuras como las anfipticas que permitan compartir una parte de la molcula polar
con los medios acuosos, y la parte no polar con los medios hidrfobos.

La experiencia de los transportadores de metabolitos en sangre y tejidos, ofreci un antecedente

para reconocer que las protenas podan constituirse en los transportadores, que asociadas a los
diferentes lpidos, posibilitara su transporte en medios acuosos como el sistema sanguneo,
el intersticio y el citosol.

Esta asociacin entre diferentes protenas y diferentes lpidos origina las lipoprotenas.

Las lipoprotenas son estructuras qumicas que muestran asociacin entre lpidos y protenas con el
fin de cumplimentar independientemente, sus diferentes funciones biolgicas.

Los primeros estudios sobre el tema demostraron que la ultracentrifugacin del plasma renda dife-
rentes fracciones, que fueron clasificadas por su orden de densidad crecente.

Las fracciones encontradas fueron:

Menor de 0,96 g/ml., denominadas quilomicrones

Entre 0,96 y 1,006: Lipoprotenas de muy baja densidad, VLDL

Entre 1,006 y 1,019: Lipoprotenas de densidad intermedia IDL

Entre 1,019 y 1,063: Lipoprotenas de baja densidad, LDL

Mayores de 1,063: Lipoprotenas de alta densidad, HDL

Estos cinco grupos lgicamente diferentes composiciones lipo-proteicas. Por otra parte, denotaron
una disminucin de su tamao y un incremento en la composicin de sustancias ms pesadas, que
llevan a ese aumento de densidad.

La parte complementaria a los lpidos son las protenas. Las protenas que integran grupos hetero-
gneos se denominan APO protenas. Hay varios tipos de Apo protenas integradas a las fracciones
lipoproteicas.

131
 Luis E. Simes

Las protenas que integran estos grupos, no slo cumplen funciones de transporte, sino que tambin
muestran otro tipo de actividad, como interaccin con receptores o regulacin metablica, tanto
estimulante como inhibitoria.

Las principales Apo protenas son:

A-I ; A-II ; A-IV : integran la fraccin HDL

B- 100: mayoritaria en LDL y B-48 en quilomicrones

C-I y C-II, predominantemente en VLDL y quilomicrones; C-III en HDL

D : presente en HDL

E34 : Predominante en VLDL

Fracciones Lipoproticas:

Quilomicrones: Son partculas grandes, que flotan en el plasma originando sobrenadantes lechosos.
Se sintetizan en intestino, son ricos en triglicridos y pobres en Apoprotenas, donde la Apo B-48 es
la predominante. Son producidas en el intestino a partir del aporte de triglicridos exgenos.

VLDL Very Low Density Lipo-Protein), Lipoprotena de MUY baja densidad. Son ricas en triglicridos
pero menores que los quilomicrones. Son capaces de producir turbidez al plasma. Son ricas en trigli-
cridos, pero en este caso de origen endgeno (heptico). Ocupan aproximadamente la mitad de la
partcula El colesterol y los fosfolpidos componen el otro 40%, quedando slo un 10 % de protena
conformando la lipoprotena. La Apo B-100 es mayoritaria, presentando algo de C y E. Dentro del
rango de densidades que define a estas partculas puede observarse un espectro de variacin gran-
de en tamao. Las ms pequeas corresponden a partculas que se han ido transformando al perder
parte de su cobertura por accin de las enzimas. Algunos autores denominan a estas partculas de
VLDL procesadas enzimticamente como IDL, Intermediate Density Lipo Protein. (IDL, que tienden a
desaparecer rpidamente).

LDL: Lipoprotenas de baja densidad (Low Density Lipo Protein) Son menores que las partculas ya
nombradas, por lo que an en concentraciones patolgicas no ocasionan turbidez al plasma. Consti-
tuyen el 50% de las lipoprotenas. A su vez, el integrante mayoritario de esta fraccin es el colesterol
esterificado (aproximadamente 50%). El 25% de su masa corresponde a la Apo B-100. Las diferentes
subfracciones encontradas presentan diferentes tamao y composicin. Las ms pequeas se en-
cuentran asociadas a enfermedades cardiovasculares ateromatosas.

HDL: Lipoprotenas de alta densidad (High Density Lipo Protein). Conforman la fraccin con partcu-
las de menor tamao. Casi no poseen triglicridos y el 50% de estas partculas estn conformadas
por partes semejantes de colesterol, mayoritariamente esterificado, con leve predominio de fosfol-
pidos. Las apo predominantes son Apo A-I y A-II.

Las HDL presentan subfracciones HDL-2 y HDL-3. Su disminucin, predispone a enfermedades cadio-
vasculares.

Enzimas asociadas:

El sistema de las lipoprotenas, en las cuales las fracciones proteicas pueden presentar actividad
metablica o enzimtica, se encentra bajo la accin de un conjunto de enzimas que participan de su
metabolismo, y entre las que se pueden mencionar:

Lipoproten Lipasa (LPL),

34 Las apopretena Apo- E en diferentes variantes( E-2, E-3 y E-4) han sido asociadas al mayor
riesgo de adquirir del Mal de Alzheimer.

132
 Bioqumica

Enzima presente en el tejido adiposo, acta sobre quilomicrones y VLDL, hidrolizando los triglicri-
dos. Los fosfolpidos y la Apo C-II participan como cofactores hidrolticos.

Lipasa Heptica, (LH): secretada por los hepatocitos, Participa en la conversin de VLDL residual e
IDL en LDL. Participa tambin del metabolismo de las HDL.

Lecitin- Colesterol- Acil- Transferasa (LCAT)

Participa en la esterificacin del Colesterol, por transferencia de cidos grasos de la lecitina al coles-
terol, promoviendo su esterificacin. Se sintetiza en hgado y acta sobre HDL, interviniendo en la
eliminacin de las capas superficiales de las VLD. Es activada por Apo A-I.

Las implicancias patolgicas, defectos genticos, receptores y aspectos clnicos como los de determi-
naciones metodolgicas se describen con mayor detalle en el captulo de lpidos, Anlisis clnicos,
parte 2.

133
 Bioqumica

CAPITULO 4

AMINOCIDOS, PEPTIDOS Y PROTEINA

El tercer gran grupo de sustancias biolgicas que abordaremos son las Protenas, estructuras muy
complejas y de caractersticas extraordinarias en razn de su funcionalidad y diversidad.

Al igual que los polisacridos, se estructuran sobre la repeticin de unidades basales, pero a diferen-
cia de aquellos, esas unidades son de mucha mayor variabilidad. La disposicin tridimensional que
adquieren las dota de enormes posibilidades funcionales y estructurales, como enzimticas y hor-
monales entre otras. Cada protena est formada por la unin de aminocidos que establecen enla-
ces covalentes entre s, desde una pocos unidades repetidas hasta la formacin de superestructuras
con miles de unidades componentes de extraordinaria versatilidad.

Aminocidos (aa)
Los aminocidos (aa), tal como su nombre lo indica, formados por un carbono, denominado , al
cual se unen un grupo amino, un grupo carboxilo, un hidrgeno y una cadena complementaria, R.
De tal forma, ese carbono a, se torna quiral, al enlazarse a cuatro grupos diferentes. Existe una sola
excepcin a esa asimetra, y es cuando R =H, en el caso del aa. Glicina.

COOH
I
H2 N - C* - H
I
R

Los -aminocidos se denominan proteinognicos, ya que son los que tienen la facultad de formar
protenas.

La cadena carbonada se identifica con otras letras griegas consecutivas. De acuerdo a donde se enla-
ce el sustituyente conformar aa. , bgd...,. etc. Recurdese que en los cidos grasos utilizamos
esta nomenclatura para referirnos al ltimo carbono de la cadena como omega ().

C C C C C OOH

Por ejemplo, el neurotransmisor -amino butrico, posee el grupo amino en el C . La -alanina, me-
tabolito del ciclo de bases nitrogenadas, porta ese grupo funcional en C .Tampoco son proteinogni-
cos otros conocidos aa. Como la ornitina y la taurina.

Se reconocen 20 aa. Ya que son los que se obtienen al hidrolizar cualquier tipo de protena. Por otra
parte, en el cdigo gentico se corresponden con los anticodones de los RNA de transferencia, con-
formados para cada aminocido. Por consiguiente, son 20 los aminocidos proteinognicos. Algunos
se definen como esenciales o semiesenciales de acuerdo a la necesidad del metabolismo humano
de que sean aportados por la dieta ya que no son sintetizados por el organismo. Los aminocidos no
esenciales, aproximadamente la mitad, se sintetizan en el organismo. Estas propiedades son comunes
a la gran mayora de los mamferos.

135
 Luis E. Simes

aa. esenciales aa. no esenciales

L Abv aa. L Abv aa.
F Fen Fenil alanina A Ala Alanina
H His Histidina (nios) B Asx Asparagina/Aspartico
I Ile Isoleucina C Cys Cistena
K Lis Lisina D Asp Asprtico
L Leu Leucina E Glu Glutmico
M Met Metionina G Gli Glicina
R Arg Arginina (semi) N Asn Asparagina
T Tre Treonina P Pro Prolina
V Val Valina Q Gln Glutamina
W Trp Triptofano S Ser Serina
X - otro Y Tir Tirosina
Z Glx Glutamina

En razn de la importancia que tienen las interacciones intermoleculares en la conformacin estruc-

tural de las protenas, de la cual devienen sus caractersticas estructurales y funcionales, resulta til
clasificarlos de acuerdo con las caractersticas elctricas del grupo R.

La mayora de los aa. tienen un grupo carboxilo y un grupo amino, lo que determina neutralidad elc-
trica. Sin embargo, existen algunos aminocidos que no poseen esa equivalencia. Los amino-cidos
cidos tienen dos grupos carboxilos y un amino (aa. glutmico o asprtico), mientras que los aa.
bsicos tienen dos grupos aminos y un grupo carboxilo (histidina, arginina, lisina). Los aminocidos
con cadena lateral no polar tienen carcter hidrofbico y tienden a disponerse hacia zonas hidrof-
bicas. Los del grupo polar sin carga, tienen zonas en sus molculas capaces de generar interacciones
hidroflicas, como los puente hidrgeno, con lo cual denotan mayor solubilidad. Los grupos cargados
a pH=7, tanto positivos como negativos son fuertemente polares y en consecuencia hidrosolubles. En
razn del pH del organismo (7,40), es de inters tener en cuenta que los aminocidos se encuentran
ionizados. Los carboxilos, al comportase como grupos cido entregan el H + quedando cargados ne-
gativamente y los grupos amino, al recibirlo, se carga positivamente.

Estructural A pH 7,40 H+
- COOH - COO-
- NH2 - N H3 +

ESTRUCTURA DE AMINOACIDOS
No obstante, en el listado y en el grfico a continuacin se muestran sin ionizar por razones didc-
ticas. Ms adelante sern tratados conforme adquieran sus condiciones fsico-qumicas acordes al
medio. Cuando los grupos R- son cadenas se llaman alifticos o acclicos. Cuando son cerrados, se
llaman cclicos. Si en estos casos, poseen dobles enlaces resonantes (Benceno, fenilo), se llaman
aromticos.

136
 Bioqumica

La clasificacin general de los L- aminocidos proteinognicos es la siguiente:

De acuerdo con esta clasificacin, se muestran los grupos R a continuacin35

AA: NO POLARES

Los aminocidos no polares se caracterizan por su hidrofobicidad. Esto determina que sean constituyentes de pro-
tenas globulares, en las cuales se orientan hacia su interior donde existe un ambiente hidrofbico aislado del agua
lo cual contribuye a disminuir las tensiones energticas de los medios con distinta solubilidad. La metionina, es el
aminocido inicial de las cadenas nativas, determinado por el codn AUG. Lo integran los siguientes aminocidos.
el grupo aliftico, con R no polar:

35 Se han subrayado los aminocidos esenciales.

137
 Luis E. Simes

CH3
o Valina: CH- CH3
CH3
o Leucina: - CH2 CH- CH3
CH3
o Isoleucina: - CH CH2- CH3

o Metionina: - CH2 CH2- S--CH3, (azufrado)

Los grupos R de los aminocidos alifticos Cclicos son:

o Prolina (es un iminocido): - oPirrol-COOH

o Triptofano: - CH2 Indol

o Fenil Alanina: - CH2 Fenilo

La prolina es en realidad un iminocido ya que el grupo carboxilo est unido al grupo imino en un ciclo (pirrol) .
Es un componente fundamental del colgeno. El triptofano es fundamental en la sntesis de serotonina y la fenil
alanina, es constituyente del colgeno interviniendo adems en la sntesis de catecolaminas, L-Dopa (que es el
dihidroxilado 3,4) y algunos neuropptidos que veremos mas adelante.

AA: POLARES SIN CARGA

En este grupo encontramos, y en particular entre los alifticos, los siguientes, identificados por sus grupos -R:

Glicina o glicocola: (C aquiral ): -H

Serina - CH2 OH

Treonina CH OH - CH3

Cistena (su dmero por puente disulfuro origina Cistina): - CH2 SH

Asparagina (amida de cido asprtico): - CH2 CO- NH2

Glutamina (amida de cido glutmico): - CH2 CH2 - CO- NH2

En los que se observa la presencia de grupos oxhidrilos, sulfhidrilos y amino, los cuales aportan polaridad a la
molcula, lo que facilita el establecimiento de interacciones intra e intermoleculares. En general cumplen funcio-
nes de detoxificacin heptica. La metionina es el primer aminocido que se sintetiza en las cadenas peptdicas y
que luego ser procesada.

Y entre los cclicos solamente a la Tirosina: - CH2 Fenil- OH , la cual tiene funciones de neuroransmisin.

AA: POLARES CON CARGA

Estos aminocidos poseen carga elctrica. Los negativos tienen un carboxilo adicional y los bsicos un grupo ami-
no de mas.

Aminocidos con restos polares Negativos

138
 Bioqumica

o cido Asprtico: - CH2 COO-

o cido Glutmico: - CH2 CH2 COO-

Y Aminocidos con restos polares Positivos

o Lisina: - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 NH3 +

o Arginina: - CH2 - CH2 - CH2 NH - C = NH2 +

NH2

o Histidina: - CH2 Imidazol

La asparagina y la glutamina cumplen funciones metablicas en el sistema nervioso central. La lisina

y la arginina son importantes en el sistema inmunolgico.

Veamos sus estructuras -R, unidas al carbono- .

Tomado de psu.edu

Otra forma de clasificacin es de acuerdo a los grupos que posee: cidos, bsicos, hidroxilados, azu-
frados, aromticos,etc.
Isomera de los aminocidos

En razn de la quiralizacin del carbono alfa, los aminocidos poseen actividad sobre la luz polarizada. Cuando la
inclinacin del plano del rayo polarizado al atravesar la solucin de aa. se produce hacia la derecha, decimos que
tiene comportamiento ptico dextrgiro y se simboliza con un signo positivo: (+). Si la desviacin del plano de la
luz polarizada es hacia la izquierda, ser levgiro, y se identifica con un signo negativo (-).

139
 Luis E. Simes

Series L y D: El carbono asimtrico produce dos variantes estructurales. Si colocamos al Carboxilo (carbono 1) hacia
arriba, el grupo amino puede estar a derecha o a izquierda, originando dos posibilidades: series D y L . Esto tiene
se refiere a su orientacin espacial, no a su condicin ptica:

COOH COOH
I I
H - C - NH2 NH2 - C - H
I I
R R

D aminocido L- aminocido

La Serie D es aquella que estando el carbono hacia arriba, muestra al nitrgeno amnico a la derecha y el hidrgeno
a la izquierda. As como los glcidos biolgicamente activos, preponderantemente corresponden a la serie D, los
aminocidos funcionales pertenecen a la serie L. En sntesis los aminocidos proteinognicos son los , de la
serie L.

En aquellos casos en los que haya mas de un carbono asimtrico, se aplica la frmula ya vista en el captulo de
glcidos: I = 2n

En donde I es el nmero de ismeros y n el nmero de carbonos asimtricos. Para un solo carbono existen dos
ismeros, y para aquellos casos en los que poseen dos carbonos quirales, el nmero de ismeros ser de 4. Se
pueden generar diastermeros o enantimeros.

Propiedades cido-bsicas de aminocidos

Como venimos considerando, los aminocidos son estructuras qumicas que poseen un grupo carboxlico (cido)
y un grupo amina (bsico). Esto los convierte en estructuras muy interesantes, ya que se mantiene un juego de
equilibrios cido base sumamente dependiente del entorno y de las condiciones fsico-qumicas que enfrente.

Por otra parte, en aquellas estructuras con dos carboxilos o dos grupos amino se verifican condiciones funcionales
ms complejas y ms verstiles en cuanto a funcionalidad y estructura.

Los grupos cido base de los aminocidos corresponden a electrolitos dbiles, por lo cual su disociacin est deter-
minada por sus constantes cido-base. Con el fin de simplificar la exposicin y anlisis utilizamos sus pKa, es decir
el logaritmo negativo de su constante:

pKa = - log Ka

Cuanto mayor sea la fuerza del cido, menor ser su pKa. El aminocido tiene la particularidad, tanto de recibir
como de entregar protones, y en consecuencia es una estructura capaz de actuar tanto como base o como cido,
es decir, presenta un comportamiento anftero.

140
 Bioqumica

HH COOH COO- COO-

+
H3N- C - H +
H3N- C H H2N - C - H

R R R

H+ H+ H+Medio cido H +
H+ H+ H+ Equilibrio Medio Bsico

H+Abundancia de Protones Ion Zwiterion Escasez de Protones

H H H H H
+ + + + +
H saturan al aa. H
+ +

H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ HH+ neutro Se extraen del aa.

H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +
H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +
H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + al medio
H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +
H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +

H + H+ H H + H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+

H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +
H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +
H+ H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H +

Figura: En un medio cido, la abundancia de protones incrementa la unin de estos al aminocido. En cambio, en
el medio bsico, la escasez de protones en el medio, desplaza los equilibrios hacia la liberacin protnica desde
el aa. hacia el medio.

Vemos as que:

La acidez del medio condiciona el equilibrio elctrico del aminocido

Cuando el aa. est en un estado elctricamente neutro (posee carga 0), decimos que la cantidad de cargas positi-
vas (-NH3+) iguala a la de cargas negativas (-COO-), es decir que los aminocidos neutros presentan concentracin
de estructuras catinicas equivalentes a las aninicas. Este estado en el cual un aminocido presenta equivalen-
cia de cargas se denomina forma dipolar o ion Zwitterion.

Como dijimos que el estado elctrico de los aminocidos depende de la acidez del entorno, habr un pH particular
en el cual el aa. presentar igual cantidad de cargas positivas que negativas, es decir carga 0. En estas condiciones,
el aminocido no migra en un campo elctrico.

Se denomina punto isoelctrico, Pi, al pH en el cual el amino-cido presenta carga 0

pI = pH del ion Zwitterion.

Cada aminocido tiene su valor pI individual, que se alcanza cuando ambas cargas estn en equilibrio.

Aminocido -COOH -NH3+ RH - o RH+

Glicina 2.34 9.60
Alanina 2.34 9.69

141
 Luis E. Simes

Valina 2.32 9.62

Leucina 2.36 9.68
Isoleucina 2.36 9.68
Serina 2.21 9.15
Treonina -
2.63 10.43
Metionina 2.28 9.21
Fenilalanina 1.83 9.13
Triptofano 2.38 9.39
Asparagina 2.02 8.80
Giutamina 2.17 9.13
Prolina 1.99 10.6
Aspartico 2.09 9.82 3.86*
Glutamico 2.19 9.67 4.25*
Histidina 1.82 9.17 6.0*
Cisteina 1.71 10.78 8. 33*
Tirosina 2.20 9.11 10.07
Lisina 2.18 8.95 10.53
Arginina 2.17 9.04 12.48

Cuando el pH es inferior al pK , el exceso de protones en el medio favorecer la protonacin y cuando sea mayor
estar como anin. El punto de equilibrio, como se expres, queda establecido cuando se fija el valor del pH del
medio igual al pK del aminocido.

Si observamos la figura superior, se puede ver que el ion zwiterion tiene dos pasos: uno ala izquierda (hacia la
forma catinica) y otro a la derecha (hacia forma aninica).

Cada reaccin tiene su equilibrio propio, y en consecuencia, ambas constantes entrarn en el juego del equilibrio
total.

Por ello, para calcular el pI, se determina el promedio de ambas constantes:

pKa + pKb

pI = ---------------------------

Si consideramos el caso de la serina, tendremos los siguientes equilibrios:

COOH COO- COO-

+H N -C -H +H N -C -H NH2 - C - H
3 3

CH2OH CH2OH CH2OH

142
 Bioqumica

Medio cido ( carboxlico) Ion dipolar (Zwiterion) Medio bsico ( amino)

El pKa cido para la serina es 2,2 y el pKb, bsico, es igual a 9,2. En consecuencia el pI para la serina ser:

pKa + pKb 2,2 + 9,2

pI = ------------------------------ = ------------------------ = 5,7

2 2

En un medio a pH 5 por ejemplo (menor que su pI), la serina estar cargada positivamente y en consecuencia mi-
grar hacia el polo negativo (ctodo). En un medio electrofortico a pH 8, se cargar negativamente, y por lo tanto
su migracin se producir hacia el nodo.

El ejemplo de la serina, como el de tantos otros tiene un equilibrio del ion dipolar, con dos formas, una cida y una
bsica. Sin embargo los aminocidos cidos como el glutmico y el asprtico tienen dos grupos carboxilos y un
amino; por el contrario, la arginina, la lisina y la histidina tienen dos grupos amino y uno carboxlico. En estos casos,
el pI tambin se calcula con la frmula de arriba. En estos casos se toma el par que reacciona con el ion dipolar,
quedando el tercero excluido del clculo.

Si observamos el caso del cido glutmico, encontramos el siguiente comportamiento de acuerdo con la modifi-
cacin del pH del medio:

COOH COO- COO- COO-

I l l l
+H N -C - H +H N - C - H +H N - C - H NH2 - C - H
3 3 3
I l l l
CH2 CH2 CH2 CH2
I l l l
CH2 CH2 CH2 CH2
I l l l
COOH COOH COO - COO-

pKa1 : 2,2 pKa2 : 4,2 pKa3 : 9,7

En este caso no se toman tres valores, sino los dos que estn relacionados con el ion dipolar Zwitterion, es decir
neutro. Entonces tomamos pKa 1 y pKa 2.

pKa 1 + pKa 2 2,2 + 4,2

pI = -------------------------- = -------------------------- = 3,2
2 2

A pH 7,40 el cido glutmico estar bajo la forma de di anin, con carga -1. Los puntos isoelctricos de los ami-
nocidos son inferiores a 7 como vemos en este ejemplo. En cambio los bsicos se encuentran por encima de ese
valor.

143
 Luis E. Simes

Alteraciones:

Los aminocidos en ciertos casos estn relacionados con ciertas patologas, como las aminoacidurias. En la fenil ce-
tonuria, la metabolizacin normal de la fenil alanina a tirosina, se ve alterada por un dficit funcional de la enzima
fenil alanina hidroxilasa. Esto causa la acumulacin de fenilalanina y derivados como el neurotxico fenilpiruvato
que afectan el normal desarrollo del sistema nervioso central. Otras enfermedades relacionadas son la alcaptonu-
ria, que produce orinas negruzcas, la cistinuria, que produce litiasis renales de cistina en rin. La enfermedad del
jarabe de arce es un transtorno hereditario que por defectos metablicos produce acumulacin de aminocidos
de cadena ramificada (leucina, isoleucina y valina).

PEPTIDOS
Los pptidos son sustancias que se obtienen de la combinacin qumica de algunos pocos aminocidos

La unin de dos aminocidos se llama dipptido, y la de tres, tripptido. Entre cuatro y diez aminocidos son de-
nominados oligopptidos. Cuando se unen entre once y cincuenta aminocidos hablamos de polipptidos. Cuan-
do la molcula es la resultante de ms de 50 aminocidos estamos ya en condiciones de hablar de protenas.

Enlace peptdico

Como ese expresara, los pptidos y las protenas se conforman mediante la asociacin qumica de aminocidos,
a travs de enlaces covalentes de tipo amida. Este tipo particular de vinculacin se establece entre el carboxilo
de un aminocido y el grupo amino del siguiente, mediante deshidratacin. La longitud de enlace y el ngulo de
valencia se mantienen constantes dentro de un plano, como analizaremos ms adelante. sta unin se de-
nomina Enlace peptdico.

COOH COOH C O COOH

H2 N - C - H + H2N - C - H NH2 - C - H HN - C - H + H2O

H CH2 H CH2

COOH COOH

Glicina + Ac. Glutmico dipeptido: glicil glutmico

Se ha marcado con un valo el enlace peptdico, establecido entre el carboxilo del aminocido glicina con el
grupo amino del cido glutmico. Los tomos comprometidos en el enlace son el carbono de un cido con un
nitrgeno amnico, siendo por consiguiente por consiguiente un enlace de tipo amida.

El enlace peptdico es un enlace rgido que mantiene la estructura de las unidades enlazadas segn los ngulos
determinantes, que no posibilitan la libre rotacin de los grupos sobre el enlace peptdico. Esto es necesario, ya
que muchas de las funciones de las protenas son establecidas por su forma. EL grupo carbonilo (- C=O) por su
doble enlace determina en el carbono una hibridizacin sp2 lo que contribuye con la coplanaridad del enlace y su
resistencia a la rotacin. Por otra parte, las cadenas laterales determinan otras propiedades de polaridad, cido
base o catalticas.

144
 Bioqumica

O = C COOH
I I
H2 N -- C -- H N H C -- H
I I
R1 R2

Cuando el nmero de aa. combinados es bajo, (2 a 10 aa.), las molculas formadas se denominan Pptidos ( di
pptidos y tri pptidos para 2 y 3 aa) y oligopptidos para estructuras contitudas por 4 a 10 aa. Las cadenas de
entre 10 y 50 aa. se denominan polipptidos. Algunos son lineales, como el aspartamo, dipptido ( aspartil fenil
alanina36) que es un endulzante presente en algunos vegetales; el glutatin, un tripptido (glutamil, cisteil glici-
na), molcula fundamental para el correcto desarrollo de los procesos metablicos celulares, ya que genera en las
clulas un ambiente reductor, que inhibe las oxidaciones no deseadas. Otros pptidos son la gramicidina (antimi-
crobiano), algunos venenos y la encefalina, un pentapptido de accin central. Ciertos pptidos son de estructura
cclica como la hormona antidiurtica, los neuropptidos, que se originan en cerebro, o en neurohipfisis, como
la corticotrofina (CHR) la ocitocina, la ACTH, prolactina y las endorfinas.

Pptido N de aa. Secuencia Primaria

Aspartame 2 Asp- fen
Glutatin 3 Glu-cis-gli
TRH 3 Pro-His-Glu
Encefalina 5 Tyr-Gly-Gly-Phe-Met
Oxitocina 9 Cis- S-S- Cis-Pro-Leu- GluNH2

I I

Tir AspNH2

I l

Ileu GluNH2

PROTEINAS
Las protenas son molculas distribuidas en todos los rganos y tejidos. Su variedad es muy grande, producto de la
alta diversidad combinatoria que ofrecen 20 piezas diferentes, en distinto orden y cantidad. A su vez, cada cambio
de una unidad, puede producir modificaciones, no slo en el orden y disposicin, sino en su orientacin espacial,
lo que modifica su estructura y propiedades. La mayor parte del peso de una clula est conformada por protenas.
Esto obedece a la necesidad de cumplir diversas funciones vitales, y las protenas tienen esa gran versatilidad. En
primer lugar poseen funciones plsticas. Integran macromolculas como el colgeno; constituyen estructuras con-
trctiles como la actina, la miosina y la tubulina. Son transportadores moleculares como apoprotenas de lpidos,
transferrina para la movilizacin del hierro y hemoglobina como carrier de gases. Su catabolismo produce energa.
Integra hormonas como la insulina, cumple funciones inmunitarias en las inmunoglobulinas y en la coagulacin
como el fibringeno. Transmiten seales, conforman receptores, intervienen en procesos genticos o actuar como
frmacos o toxinas. Esa gran diversidad hace de las protenas el grupo ms complejo de la biologa.

Las protenas pueden ser simples (homoprotenas) o conjugadas con otros grupos (heteroprotenas). Las prime-
ras, cuando son sometidas a hidrlisis generan exclusivamente alfa aminocidos. La albmina, las globulinas, las
Histonas y las escleroprotenas pertenecen al primer grupo.

36 Se utiliza como edulcorante el derivado sinttico metil-ster.

145
 Luis E. Simes

En las heteroprotenas, existe una fraccin proteica y una fraccin no proteica, denominada grupo prosttico. De
acuerdo con el grupo prosttico encontramos frecuentemente nucleoprotenas, lipoprotenas, glucoprotenas,
etc.

Heteroproteina Grupo prosttico

Ncleoproteinas cidos Nucleicos

Lipoproteinas Colesterol, Triglicridos, Fosfolpidos
Glucoprotenas Monosacridos, amino azcares, c.glucnico, galactnico.
Fosfoprotenas cido fosfrico
Metaloprotenas Metales, Cromforos, Fe, Cr, Co, Zn, Mg
Hemoprotena Grupo Hemo
Flavoprotena Flavonoides
Las protenas desde el punto de vista de la dieta son consideradas incompletas cuando no poseen todos los
aminocidos esenciales. Algunas protenas estn formadas por una sola cadena, pero en otros casos pueden ser
dimricas, tetramricas, etc.

De acuerdo con su estructura conformacional, las protenas muestran diferentes versiones de presentacin:

Globulares: son solubles en agua y en soluciones salinas diluidas. Presentan actividad dinmica y
cumplen entre otras, funciones de transporte; tienden a adoptar formas esfricas, globulares. La al-
bmina como la hemoglobina, (que tienen funciones de transporte, buffer u osmticas), la mayora
de las enzimas (que cumplen funciones catalticas) y las inmunoglobulinas, (con funcin anticuerpo),
muestran preponderantemente, estructura globular.

Fibrosas: las protenas fibrosas tienen funciones plsticas, estructurales, de sostn y proteccin. Son
insolubles en agua y en soluciones salinas. Se desarrollan en largas cadenas siguiendo en general un
eje, y conforman la estructura del tejido conjuntivo. La elastina en los ligamentos, el colgeno en la
matriz sea y tejido conjuntivo y la queratina recubriendo cabellos, cuernos, pelos, uas presentan
estructura fibrilar.

Mixtas: son protenas que siendo solubles en agua, presentan una disposicin ms alargada que las
globulares, por ejemplo en forma de cilindros. Esta disposicin se observa en el fibringeno que
dar origen a la fibrina en el proceso de formacin del cogulo. Tambin se observan en protenas
alargadas de las fibras musculares, como la miosina.

Soluciones Proteicas

Las protenas globulares son solubles en agua y en soluciones salinas diluidas. En funcin de su gran tamao, las
soluciones de protenas en realidad son verdaderamente dispersiones coloidales. Cada molcula proteica se ro-
dea de molculas de agua (solvatacin) y se asla de otras de su misma especie, permitiendo la interaccin con el
solvente.

Los grupos amino y carboxilo de los extremos son polares y pueden disolverse. Sin embargo, la posibilidad de
disolucin viene dada por los grupos polares laterales que interaccionan con el agua a travs de sus grupos ioni-
zables.

Al igual que los aa. aislados, las protenas, dependiendo del pH del medio, tendrn un comportamiento cido
base similar. Una protena, a un pH bajo estar como catin y a un pH alto como anin. Existir un pH intermedio,
denominado punto isoelctrico de la protena, la que no tendr carga elctrica neta, ya que las cargas positivas y
negativas estarn perfectamente equilibradas. Esta es una protena di polar o protena Zwitterion. La existencia
de equilibrio entre las protenas y sus proteinatos, dotan a estas de capacidad buffer.

146
 Bioqumica

El agregado de sales a la solucin proteica, tiene a incrementar su solubilidad. Este proceso, denominado salting
in, se basa en que baja la interaccin entre los grupos electrolticos de la protena, bajando su coeficiente de
actividad. Esto produce incremento de la solubilidad hasta cierto punto de concentracin salina. Las molculas
de sal, por otra parte, incrementan el desorden y aumentan la entropa del sistema, lo cual mejora la solubilidad

Si se agregara un solvente orgnico, ste baja la constante dielctrica del solvente, el cual interacciona menos
con el soluto, y este tiende a precipitar por disminucin de la solubilidad, Este principio se usa como mtodo de
separacin proteica.

Otro mtodo de separacin de protenas por precipitacin se basa en el agregado de sulfato de amonio. En cierto
punto, la concentracin de las sales agregadas, disminuyen la actividad del solvente y en consecuencia las inte-
racciones protena-protena se hacen mayores que las interacciones protena- agua, lo que lleva a la precipitacin
de la protena (salting out). Los cationes ms usados para precipitar protenas son Fe++, Zn+++, Cd++, y siempre
a pH mayores que el pI de la protena, ya que a ese pH se encuentran como proteinatos (cargados negativamen-
te).

ESTRUCTURA DE PROTEINAS

Las protenas observan cuatro niveles de organizacin, denominadas estructura primaria, secundaria, terciaria y
cuaternaria.

Tomado de Lehninger, fourth Ed.pag. 89

Estructura primaria
La estructura primaria de protenas se refiere a la composicin secuencial de aminocidos que posee una protena.
Esto contempla la identidad de los aminocidos, el nmero y el orden que adopten. A diferencia de los polisacri-
dos cuyas molculas contenan las mismas o casi las mismas unidades repetitivas, en las protenas esas unidades
llegan a 20, lo que posibilita una enorme variabilidad estadstica en secuencia y en nmero de unidades.

Esta estructura primaria se basa en el enlace covalente que se genera entre el carbono del grupo carboxilo de un
aminocido con el nitrgeno del grupo amino del siguiente.

O=C COOH
I I
H2 N -- C H N H C -- H
I I
H CH2 - COOH

Dipptido : glicil asprtico

147
 Luis E. Simes

Este enlace, denominado enlace peptdico, es plano y forma ngulos de aproximadamente 120, por lo cual la
estructura primaria presenta una estructura en zig-zag.

NH2 COOH
As como las cadenas carbonadas se nombran desde el carbono ms oxidado, como C1, las secuencias de ami-
nocidos se nominan desde el extremo amino terminal (amino que no interviene en el enlace peptdico) hacia el
extremo carboxilo terminal.

Si se observa el ejemplo del dipptido glicil asprtico (arriba), observamos que en la glicina el grupo NH2 queda
libre. En el ac. Asprtico es el COOH el grupo que no ha reaccionado, indicando que se trata de glicil asprtico y
no de aspartil-glicina.

La estructura primaria determinada por los enlaces peptdicos tienen poca movilidad. Se expres que no es facti-
ble la rotacin libre sobre el eje lineal. Esto obedece a la estructura electrnica del enlace amido, ya que la exis-
tencia de un par electrnico sin enlazar del nitrgeno, posibilita un fenmeno de resonancia entre dos formas:

- O R1 -O R1

C C C N+

R2 H R2 H

La resonancia, estado dinmico de intercambio electrnico entre tomos cercanos, generalmente estabiliza las
estructuras en las que se produce ese fenmeno. El par electrnico libre del N genera un doble enlace instantneo
entre el C y el N y el doble enlace del C==O se transforma en simple. La ganancia electrnica del O se transforma
en una carga negativa sobre ste, y la prdida del par de electrones del nitrgeno lo carga a ste positivamente. Se
mantiene el equilibrio de cargas, pero se genera una atraccin elctrica adicional. El doble enlace C==N posee un
enlace sigma y un enlace pi, . ste fenmeno de hibridizacin sp2 , implica que el enlace peptdico se comporte
como doble y en consecuencia impida la libre rotacin sobre el eje peptdico, lo que podra inestabilizar su estruc-
tura. El enlace C-N es de 1,32 A y el C-O de 1,24 A, intermedias entre los valores de doble y simple enlace entre
los mismos tomos. El O del carboxilo y el H del amino se estabilizan en posicin trans, determinando especfica-
mente la disposicin que adquiere el enlace y que favorece la especificidad de la estructura primaria.

La secuencia de los aminocidos determina la forma y funciones de la protena. Cualquier alteracin, cambio,
prdida o ganancia de unidades en una secuencia especfica puede determinar la alteracin y aun desaparicin de
sus funciones. Justamente muchos defectos genticos se originan en un cambio del patrn del ADN o ARN. Una
mutacin significa modificacin de la secuencia. Algunas hemoglobinas alteradas, por ejemplo, tienen una simple
modificacin de aa. que condiciona su funcionamiento con prdida de eficacia. Otros cambios que afectan zonas
de sitios activos, inutilizan a la protena.

La secuencia primaria se enumera y nombra desde el aa. del extremo amino terminal, hacia el carboxilo terminal,
con el sufijo il y el aa. carboxilo terminal mantiene su nombre; por ejemplo, el hexapptido:

NH2- Treonil, dialanil, fenilalanil, tirosil triptfano COOH

Esta secuencia ser la que determinar las propiedades del pptido, sus interacciones y pertenencia grupal. Las
protenas se agrupan en familias de acuerdo con la secuencia de aa. que presentan. Adems, algunas protenas son

148
 Bioqumica

polimrficas, es decir que pueden cambiar su secuencia sin modificar o perder su funcin, presentando diferentes
variantes para una misma especie.

ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL

SECUNDARIA
Cada protena se halla definida por su estructura primaria. En razn de la rigidez ya mencionado que poseen los
enlaces peptdicos, cada secuencia en particular va adoptando una estructura en el espacio, tambin definida
por sus grupos laterales R. Efectivamente, si se considera la secuencia de la protena como un eje, sta se puede
definir en el plano, pero por efecto de los ngulos de enlace y la disposicin trans del enlace peptdico, adems
de las orientaciones espaciales de los grupos laterales, en general se puede observar que se adoptan dos dispo-
siciones caractersticas que se definen como estructura secundaria. Esta disposicin sobre el eje primario, origina
dos formas caractersticas:

Hlice alfa

Hoja plegada beta

Los plegamientos que se originan estn sostenidos por interacciones dbiles de puente Hidrgeno. No obstante la
multiplicidad de ellos confiere estabilidad a la estructura proteica secundaria.

Los enlaces puente de hidrgeno se establecen entre hidrgenos unidos covalentemente a tomos electronegati-
vos como O, N, F. De esta manera, el H est en condiciones de interaccionar con otros grupos que presenten po-
laridad o densidad de carga negativa, unidos a H y ste enfrenta a otros tomos electronegativos o con polaridad
negativa (). En las formas Hlice, prevalecen las interacciones intracatenarias, mientras que en las Hoja
plegada, los puente hidrgeno interaccionan tanto intra como intercatenariamente.

Estructura secundaria

Hlice
En esta disposicin espacial del eje proteico, se observa una distribucin helicoidal de la cadena de aminocidos.

La hlice es dextrgira, ya que en su avance produce un giro con orientacin horaria. Cada vuelta tiene 3,6 amino-
cidos y un avance de 5,4A. Los grupos R por razones estricas se ubican hacia afuera, excepto que por cuestiones
de hidrofobicidad adopten otra disposicin. Se debe tener en cuenta que el aa. Prolina, por ser un imino cido,
el carboxilo y el grupo amino estn en un ciclo, por lo cual deforma e interrumpe el orden de la hlice. La glicina
tambin contribuye a inestabilizar la hlice porque su R es un tomo de hidrgeno. Los puentes hidrgenos son
intracadena. La relacin entre los grupos constituyentes determinan por atracciones y repulsiones conjuntas, la
estructura helicoidal.

-Hoja plegada

Esta estructura adquiere una disposicin en zigzag, ms propia del orden geomtrico de 120 que poseen los
enlaces entre carbonos en los aminocidos. A lo largo del eje de la protena, se observa una disposicin planar,
con derivaciones de los restos R por encima y por debajo del plano alternadamente. Esta estructura tambin se
sostiene por puentes de hidrgeno en la cadena.

Existen disposiciones en los cuales los planos plegados de la protena se puede adosar a uno o dos planos (en este
caso por encima y por debajo del mismo), por lo cual en estas disposiciones los puente de hidrgeno, tambin
se verifican entre cadenas. Muchas protenas poseen una sola disposicin, pero en otras se observan ambas, de
acuerdo con la estructura primaria que establece las posibilidades estricas y energticas de la molcula.

149
 Luis E. Simes

Giros beta .

En las protenas mas compactas resulta frecuente observar que cuando una cadena debe modificar
su orientacin, adoptan una forma llamada giro beta. Los giros beta son secuencias de aminocidos
que cambian su direccin en 180. Se estabilizan por interacciones dbiles entre su aa. 1 y el nmero
4. Pueden unir secuencias paralelas o antiparalelas.

Los giros beta son abundantes en las protenas globulares, facilitando una mayor compactacin de
las mismas. Y s bien los aa. glicina y prolina comprometen la estabilidad de la estructura de alfa
hlice, por el contrario son muy abundantes en el giro beta.

Se observa en la figura una hoja beta, un giro beta y a continuacin una regin alfa hlice. Estn
oreintados en forma antiparalela.

Otras secuencias no cumplen con estas estructuras, por lo cual se clasifican como al azar.

ESTRUCTURA TERCIARIA

La estructura terciaria de protenas equivale a su representacin en tres dimensiones. Se establece por ac-
cin de diversas interacciones moleculares que la determinan y la estabilizan. De acuerdo con la forma y dis-
posicin de los sustituyentes R, se generan fuerzas atractivas o repulsivas que obligan a la protena a tomar
una disposicin energticamente favorable. Los arreglos estructurales de las secuencias aminoacdicas con-
forman la estructura secundaria hlice u hoja plegada particular de cada segmento de la secuencia. Cuando
la cadena se enrolla o despliega, para adquirir conformaciones ovilladas o fibrosas, aminocidos que se

150
 Bioqumica

encuentran muy alejados en la estructura primaria, pueden quedar muy cerca entre s. Por ejemplo el aa. 5
de la cadena, puede quedar en la cercana del aa. 160, producto de los enrollamientos que sufre.

Existen zonas de actividad biolgica muy especficas en las que una alteracin de la estructura terciaria oca-
siona la prdida de funciones, de una manera casi imposible de predecir.

Igualmente el conocimiento de la secuencia primaria no permite deducir la estructura terciaria de una

protena, sino que debe ser determinada por medios analticos experimentales adecuados.

Como ya expresramos, la estructura primaria y la estructura secundaria tendrn influencia en la distri-

bucin o estructuracin terciaria. De la polaridad de cada aminocido, como anticipramos depender la
distribucin terciaria. Los grupos polares tendrn preponderante orientacin hacia el exterior, es decir hacia
zonas hidroflicas, como lo es el medio comn del organismo. Los aminocidos no polares, buscarn encon-
trarse hacia el interior hacia regiones ms hidrofbicas, en un ambiente generado por partculas de pola-
ridad muy baja (bolsillos hidrofbicos de protenas), a lo cual contribuye la compactacin de las protenas
globulares, que impiden el ingreso de agua hacia su interior.

Lehninger, 4th. Ed.

Como ya se expresara, la estructura terciaria est sostenida y determinada por diferentes interacciones
fsico-qumicas, tal como se grafican en la imagen de arriba. Ellos son:

Enlaces covalentes: tpicos de la estructura primaria construida sobre los enlaces amida inter aminocidos,
se forman entre tomos de azufre de diferentes aa. azufrados. (Dos cistenas, que originan una cistina).

151
 Luis E. Simes

Puente hidrgeno, es la interaccin que determina la estructura secundaria de protenas, y que se establece
entre oxgenos de los carbonilos u oxhidrilos de un aa. con un hidrgeno de otro aminocido, ya sea inter o
intracadena.

Fuerzas de Van der Waals: se originan por fluctuaciones de campo de los electrones que generan gradien-
tes de carga, entre grupos no polares que interaccionan entre s.

Las atracciones hidrofbicas se producen entre molculas no polares como valina, o alanina a travs de
interacciones entre sus cadenas carbonadas.

Enlace Coordinado: se produce con los metales, como en el caso del Fe ++ en el grupo Hemo y las flavopro-
tenas y el Co++ en la vit B12, o el Mg ++ en la clorofila

En funcin de su estructura secundaria, fueron propuestos cinco tipos principales de protenas.

Tipo I: La estructura secundaria es puramente alfa hlice. Son globulares y muy compactas.

Tipo II: En este caso la estructura secundaria tambin es pura, pero posee algunos tramos beta, en general
lminas antiparalelas.

Tipo III: Una zona es puramente alfa y otra puramente beta

Tipo IV: Las regiones alfa y beta se encuentran mezcladas; a una zona alfa le sigue una beta y a sta una alfa,
mostrando una alternancia entre las dos formas.
Tipo V: helicoidales

Chaperonas

Las protenas activas son llamadas nativas, ya que se encuentran es su estado conformacional inicial para el
que fueron diseadas. La elevacin de la temperatura, produce la ruptura de las interacciones interatmi-
cas, y ocasionan la prdida de estructura y funcionalidad. Poe ejemplo, coagulacin de las protenas, pro-
ceso irreversible que no se retrotrae con la disminucin de la temperatura. Se ha perdido el ordenamiento
estructural.

Cuando las protenas se sintetizan intervienen otras protenas que no corresponden a su secuencia prima-
ria, y cuya funcin es contribuir al plegamiento correcto de la protena que se est sintetizando. Estas pro-
tenas se llaman chaperonas, ya que acompaan la maduracin de la protena neosintetizada, o de las que
cambian de forma por pasaje entre compartimentos. Existen varios tipos de chaperonas, que se identifican
con protenas de shock trmico (Heat Shock Protein). Las HSP son identificadas por un nmero que indica el
peso molecular de sus molcula (Hsp 70, Hsp 90 por 70 y 90 KDa respectivamente). Las protenas de choque
trmico estn muy conservadas evolutivamente y son rpidamente sintetizadas cuando las clulas pro o
eucariotas son sometidas a condiciones de stress, por lo que tambin son denominadas protenas de prime.

De acuerdo con la estructura terciaria las protenas en general adoptan conformaciones globulares o fibro-
sas, segn su plegamiento sea esferoide o alargado.

Las protenas globulares son solubles en aguas y en soluciones salinas, mientras que las fibrosas frecuente-
mente son insolubles.

152
 Bioqumica

Estructura cuaternaria:

Las protenas pueden ser mono o policatenarias. stas a su vez se clasifican en homo y heteropolimricas
segn las cadenas sean iguales o diferentes entre s. Las interacciones intercatenarias cuando la protena
posee ms de una cadena (dmeros, trmeros) son las mismas que intervienen en el mantenimiento de su
estructura terciaria, excepto los enlaces covalentes.

Protenas de importancia biolgica

Transportadoras de oxgeno:

Son protenas complejas que estn formadas por cadenas proteicas que se unen a un grupo prosttico
Hemo. Se especializan en el transporte de oxgeno, dado la baja solubilidad de este gas en sangre. El grupo
Hemo es una estructura compleja tetrapirrlica unida a un ion hierro divalente (Fe++).

Los cuatro pirroles se encuentran unidos por cuatro grupos metilnicos; adems los pirroles poseen cuatro
sustituyentes metilos (M), dos etilenos (E) y dos propinicos (P) conformando una molcula denomina-
da protoporfirina, que posee una complejidad estructural que posibilita la generacin de varios ismeros.
Cuando los sustituyentes se encuentran ubicados desde el 1 al 8 en sentido dextrgiro en el siguiente or-
den, M, E, M, E, M, P, P, M, el ismero se denomina protoporfirina IX. Las alteraciones patolgicas de estas
molculas generan enfermedades llamadas porfirias.

El hierro se une utilizando 4 valencias hacia los cuatro nitrgenos, la quinta se relaciona por un enlace de
coordinacin hacia una histidina en posicin 8 de la globina. La sexta valencia de coordinacin del hierro es
la que se utiliza para unir a la molcula del gas que transporta.

Mioglobina (Mb): La mioglobina es una protena ubicada preponderantemente en el msculo, siendo su

principal funcin la de ser un reservorio de oxgeno disponible para el metabolismo del msculo. Cuando
sus reservas se agotan, el msculo apela al metabolismo anaerobio que genera como catabolito final al ci-
do lctico, lo que produce la sensacin de calambre muscular.

La afinidad de la mioglobina por el oxgeno es alta. Est formada por una cadena de protenas constituida
por 153 aa. que alterna la forma alfa con la beta.

Hemoglobina (Hb): es una protena transportadora de gases en sangre. Su ubicacin es intra eritrocitaria.
Existen variantes segn las etapas de desarrollo del individuo. Mientras las hemoglobinas del adulto son la
A1 y la A2, durante la etapa embrionaria existen hemoglobinas variantes y en la etapa fetal, predomina la
Hb F.

La hemoglobina es la protena ms abundante de la sangre. Estructuralmente es un tetrmero conformado

por dos pares de globina con un grupo Hemo cada una. La hemoglobina tiene un PM de 65 kDa; las cuatro
cadenas que conforman la estructura cuaternaria se encuentran muy agrupadas, por lo que adquieren una
forma globular con orientacin tetradrica. Cada una de las globinas es muy semejante a la cadena proteica
de la mioglobina.

La estructura secundaria es helicoidal, con un 80 % de las cadenas en conformacin alfa.

La estructura terciaria es globular, siguiendo los perfiles funcionales de polaridad en relacin al medio. Los
grupos polares se dirigen hacia el exterior, donde priva un medio acuoso, mientras que los aa. no polares,
se orientan al interior de la protena originando un ambiente hidrofbico adecuado para contener estable-

153
 Luis E. Simes

mente al grupo Hemo. El ambiente hidrofbico es reductor, lo que contribuye a mantener al hierro en su
estado ms 2. En este estado, el Fe tienen un comportamiento similar al descripto para la mioglobina. La
estructura cuaternaria se establece entre dos pares de globinas, cuyas variantes originan diferentes tipos de
Hemoglobina.

bioterapi.ro

Existen diversas variantes de Hemoglobina, de acuerdo con las globinas que la integran.

La Hemoglobina A1 (del adulto) es cuantitativamente mayoritaria. (Aproximadamente 97% del total). El

tetrmero est conformado por cuatro unidades (dos pares) de globinas unidas cada una de ellas a un
grupo Hemo: dos cadenas alfa y dos cadenas beta de 141 y 146 aa. respectivamente ( a2 b2 ).Su estructura
secundaria es de alfa hlice, siendo la estructura terciaria de carcter globular con 7 y 8 segmentos respecti-
vamente.
Existen otras Hemoglobinas, como la A2, que se encuentra en una proporcin minoritaria en el adulto. En su es-
tructura se observa el reemplazo de las dos cadenas por ( a2 d2 );
En las primeras etapas del desarrollo de los vertebrados, existen otras hemoglobinas, denominadas embrionarias.
Sus tetrmeros son ( x2 e2 ), ( x2 g2 ) ( a2 e2 ). En la etapa fetal, la ms importante es la Hemoglobina F, cuyo te-
trmero proteico est conformado por dos cadenas alfa y dos cadenas gamma ( a2 g2 ).

Cada tomo de Fe++ acta con una estructura de coordinacin 6. Cuatro enlaces se dirigen a cada uno de los
nitrgenos de cada pirrol de la protoporfirina. Un quinto enlace se orienta hacia la histidina F8 de la cadena
de globina y el sexto, opuesto a aquel, queda libre para unirse a la molcula de O2 que debe transportar.
Cada molcula de Hb puede transportar 4 molculas de O2; se sabe que la introduccin de la primera mo-
lcula de O2 favorece el ingreso de las restantes (efecto cooperativo).

La unin reversible de la hemoglobina con el oxgeno e muestra en la reaccin:

Hb (H+) 4 + 42 ===== Hb (O2 )4 + 4 H+
Forma T Forma R

(TENSA) (RELAJADA)

Cuando el oxgeno se une a la hemoglobina, se producen modificaciones conformacionales, que ocasionan

la transformacin desde una conformacin T a su conformacin R, lo cual produce un impacto alostrico:

1. Durante el proceso de oxigenacin el grupo Hemo pierde curvatura y se acerca al

plano porfirnico, lo cual no tienen efecto en la mioglobina, pero si en la hemoglo-
bina, ya que induce cambios en la estructura cuaternaria.

154
 Bioqumica

2. Un par de globinas (alfa1- beta-1) gira, cambiando su interrelacin con la otra

cadena beta.

3. Los movimientos de un grupo Hemo se transmiten a las otras subunidades, fun-

damentales para que desaparezcan grupos salinos que impedan el ingreso de las
subsiguientes molculas de oxgeno.

La intensidad de unin del oxgeno a la protena, est cuantificada por Y, denominada fraccin de satura-
cin. Y es la relacin entre la cantidad de sitios receptores de O2 ocupados y la cantidad total de recepto-
res de la molcula. Se puede relacionar as la influencia que tiene la presin parcial del gas con la cantidad
de sitios ocupados. Cuando se grafica en un eje cartesiano, Y vs. p (Presin Parcial) la hemoglobina ori-
gina una curva sigmoidea. El mismo grfico para le Mioglobina muestra una mayor afinidad por el oxgeno
que la Hemoglobina. La Hemoglobina desoxigenada tiene el Hem curvado, hasta que entra el primero oxge-
no, lo que modifica las interacciones que facilitan la entrada de los oxgenos siguientes. Por otra parte, tam-
bin se observan modificaciones de la estructura secundaria. Ntese en la curva sigmoidea que al principio
tiene que aumentar mucho la presin para que Y se modifique muy levemente la saturacin. Luego, la curva
aumenta marcadamente su pendiente, por lo que pequeas modificaciones de presin, originan rpido
aumento de Y, hasta llegar a su saturacin, donde el aumento de presin, no modifica prcticamente a la
saturacin.

Tomado de http://g-se.com/

La mioglobina por otra parte muestra que para la misma presin de Oxgeno, (cualquier lnea vertical), al
extrapolar, presenta mayor saturacin que la hemoglobina.

Es decir que si para la misma presin, la mioglobina tiene mayor saturacin de oxgeno que la hemoglobina,
resulta evidente que su afinidad por el oxgeno es mayor.

Transporte

La Hb adems de oxgeno, transporta protones y dixido de carbono. Sufre regulaciones por parte de ellas
o del BPG bi fosfo-glicerato, lo cual modifica la afinidad por el O2. Estas inducen modificaciones alostri-
cas, ya que su unin a ciertas regiones, genera modificaciones estructurales que condicionan la actividad
en el centro activo.

Los protones ingresan con mayor facilidad a las Hemoglobina desoxigenada (HbHH) que en la oxigenada, por
lo cual en medio cido, los protones desplazan al oxgeno, produciendo su liberacin. Lo mismo ocurre con

155
 Luis E. Simes

el CO2, disminuye la afinidad por el oxgeno, por lo cual en los tejidos con alta pCO2, la hemoglobina se trans-
forma en carboxi hemoglobina liberando el oxgeno necesario en el lugar. Un tejido activo metablicamente
produce CO2 lo que facilita el aporte de oxgeno para la continuidad de la actividad metablica. A medida que
desciende el pH, la afinidad del Oxgeno por la Hb disminuye. Por ello, los pacientes en acidosis presentarn
una saturacin de O2 menor.

El hemate contiene bifosfoglicerato, una molcula cargada negativamente, producto de la esterificacin de

dos oxhidrilos del glicerol con dos molculas cido fosfrico (Representado en la figura como P).
COP
l
COP
l
C O O-

Este compuesto, al poseer cargas negativas, tiene alta afinidad por los grupos positivos portados por lisinas,
histidinas y aminos, por lo cual desplaza al oxgeno, facilitando su liberacin en los tejidos.
Protenas alteradas.

Cuando el Fe ++ se oxida a Fe+++ el grupo Hemo se modifica a hemina y la hemoglobina se transforma en

metahemoglobina. Esta variante no es apta para transportar oxgeno.

La carboxi hemoglobina se origina cuando el monxido de carbono (CO) producido en ambientes txicos
con bajo tenor de oxgeno, ingresa por va respiratoria. El CO tiene una afinidad por la Hb muy superior a la
del oxgeno, por lo cual lo desplaza formando complejos muy estables que impiden el transporte del oxge-
no hacia los tejidos.

Hemoglobina S:
La hemoglobina S es una hemoglobina anormal que se detect en un caso particular de anemia, denomi-
nada falciforme, por la forma particular que presentan algunos hemates de esos pacientes (forma de hoz).
La Hemoglobina S exhibe una mutacin en la globina beta, en donde el cido glutmico de posicin 6 es
reemplazado por una valina. El hecho de reemplazar un aminocido con caractersticas cidas, cuyo R est
cargado negativamente por otro con caractersticas hidrofbicas, origina modificaciones estructurales que
encastran con otras molculas de Hb S, por lo que se produce una polimerizacin de la Hemoglobina. Estas
macromolculas se precipitan y deforman al eritrocito, hacindole perder flexibilidad y perturbando el pa-
saje del glbulo rojo afectado en la luz capilar, originando obstrucciones y necrosis tisulares.

En los individuos heterocigotas, alrededor de un 2% de los hemates presentan la morfologa de hoz. En

cambio, en los pacientes homocigotos se observa un porcentaje promedio del 50%. Esta patologa es muy
comn en frica, porque la anemia falciforme produce en quienes la padecen cierta inmunidad frente a la
malaria producida por el parsito hemtico Plasmodium falciparum. Posiblemente la mayor fragilidad he-
mtica, impida el desarrollo del parsito, estimulando una ventaja evolutiva en ese sentido.

EscleroProteinas

Son protenas fibrosas, estructurales que conforman diversos tejidos de sostn y proteccin. Son insolubles
en agua y soluciones salinas. Abarcan al colgeno, elastina y queratinas.

156
 Bioqumica

Colgeno
Con el nombre de colgeno se abraca un diverso grupo de protenas extracelulares sintetizadas por los fi-
broblastos predominantes en el tejido conectivo, presente en piel, huesos, cartlagos entre otros numerosos
tejidos resistentes. Corresponde a un tercio del total de las protenas del cuerpo.

As como la estructura primaria de protenas exhibe una enorme diversidad basada en la inclusin de 20 aa.,
el colgeno se distingue por estar compuesto por una unidad denominada tropocolgeno, que muestra un
predominio particular de cuatro aminocidos: glicina, prolina, hidroxiprolina e hidroxilisina. Estos aa. for-
man un tripptido de muy repetido: Gli- X Pro.

Otra particularidad del tropocolgeno es que tiene una estructura tri fibrilar. Efectivamente, est conforma-
do por tres cadenas proteicas levgiras. A su vez, las tres cadenas se acomodan entre s en un superordena-
miento dextrgiro, lo cual las dota de gran resistencia a raz de ese gran entrecruzamiento.

La diferentes alternativas estructurales que pueden adoptar estas formaciones, originan distintas variantes
de colgenos: tipo I, II, III y IV.

El ms abundante es el tipo I, que se encuentra mayoritariamente en huesos, piel, tendones y crnea, la II

en cartlago y humor vtreo, la III en vasos sanguneos y rganos internos, y la IV es muy particular por ser
el constituyente de la lmina basal y presentar, a diferencia de los anteriores que son fibrilares, estructura
reticular, la cual es necesaria para que la lmina basal pueda cumplir con sus funciones.

El colgeno I es mayoritario respecto de las 15 variantes reconocidas.

El colgeno I exhibe una gran regularidad en su estructura primaria, con el tripptido Gli-Pro-HoPro. Como
la estructura es muy apretada, y por cada vuelta hay 3 aa., el nico que puede por razones estricas dirigirse
hacia el interior de la hlice, es la glicina, por lo cual ella aparece cada 3 aa. (33%) y la prolina y la hidroxi-
prolina se orientan hacia el exterior helicoidal. Por otra parte el hidrgeno de la glicina, genera puentes hi-
drgeno transversales con los carboxilos de las otras dos cadenas de la trada. Una vez sintetizado el tropo-
colgeno en el fibroblasto, se exporta al exterior donde se produce el ensamble de las fibras, que adquieren
una estructura cabeza cola que se repite y que adems se refuerzan con los enlaces covalentes perpendicu-
lares.

La resistencia de las fibras est en relacin directa con la cantidad de enlaces covalentes cruzados.

La carencia de vitamina C ocasiona problemas de hidrolizacin en la estructura del colgeno, lo que deter-
mina la aparicin de una enfermedad carencial: escorbuto, que evidencia problemas capilares con hemorra-
gias subcutneas y lesiones drmicas. Sin esa vitamina, no se produce la hidroxilacin enzimtica necesaria
para sintetizar los aa. hidroxilados.

Otro problema evidente en el colgeno es por un defecto gentico que produce una mutacin que reempla-
za una glicina por cistina, ocasionando fragilidad sea y deformaciones esquelticas (nios cristal).

Elastina

Como su nombre lo indica, la elastina integra estructuras que exhiben caractersticas elsticas, que ante
cualquier tensin, son capaces de recuperar su disposicin inicial.

Mientras el colgeno est formado por tres cadenas levgiras enrolladas a derecha, la elastina est formada
por una sola cadena polipeptdica. Esta cadena es tambin rica en glicina en relacin 3:1, pero posee me-

157
 Luis E. Simes

nos hidroxiprolina y no posee hidroxilisina. Adems posee aa. no polares como la alanina. Los tetrmeros
adquieren configuracin hlice, lo que le confiere caractersticas elsticas. Otras zonas, encargadas de
formar enlaces perpendiculares entre fibras son ricas en alanina y lisina.

Queratinas

Las queratinas adquieren un rol de proteccin fundamental. Se pueden dividir en dos grandes grupos: alfa y
beta queratinas.
-queratinas

Debe su nombre a su configuracin helicoidal que es de tipo .

Hay al menos 30 tipos de queratinas que integran epidermis, uas y pelos. Las zonas helicoidales estn
flanqueadas por zonas no helicoidales. Las queratinas se clasifican en I y II. Las de tipo I, son cidas y las de
tipo II, neutras o bsicas.

Forman dmeros, slo cuando se de tipo distinto, dmeros I II. Se estabilizan por enlaces hidrofbicos y
salinos, principalmente.
-queratinas

Son comunes en picos, plumas y escamas en reptiles y aves.

Estas tienen estructura de b hoja plegada.

Para poder establecer las interacciones inter lminas, los aminocidos laterales son de bajo peso molecular.

Las lminas se integran por interacciones de Van der Waals y de puente hidrgeno.
Protenas musculares

Existen tres tipos de msculos en vertebrados: estriado, liso y cardaco.

Los ltimos dos estn formados por clulas musculares uninucleares, mientras que el msculo estriado se
basa en otro tipo de unidad: la fibra muscular, alargada y multinuclear.

El msculo estriado, denominado esqueltico, tiene fibras musculares formadas por paquetes de miofibri-
llas en el citosol, encargados de la funcin contrctil. La investigacin microscpica determin la existencia
de bandas claras (I) y oscuras (A), alternadas. La unidad funcional se denomina sarcmero (sarco = mscu-
lo; mero= parte). Existen filamentos delgados (actina, tropomiosina y troponina) y filamentos gruesos (mio-
sina).

Miosina

Componente de los filamentos gruesos, est formada por 6 cadenas polipeptdicas (2 cadenas pesadas y
dos dobletes de cadenas livianas). Los extremos C- terminal poseen estructura alfa hlice que se superenro-
lla en una cadena polipeptdica doble. Hay abundancia de Leucina, Alanina y Ac. Glutmico con ausencia de
prolina.

158
 Bioqumica

Actina

Es una molcula distribuida en todo el reino animal. Son estructuras hoja beta de conformacin globular.
Integra las fibras delgadas junto con la tropomiosina, de estructura alfa helicoidal.

Distrofina

Es una protena tetramrica que conforma un complejo que une a actina por su extremo amino terminal,
y por glicoprotenas que se enlazan a la laminina extracelular. Su defecto lleva a la distrofia muscular de
Duchenne, en la cual se produce una degeneracin muscular que comienza en la niez afectando progresi-
vamente las piernas, los brazo y finalmente al diafragma. A las dificultades para caminar, se suman las difi-
cultades para respirar, llevando a la muerte aproximadamente a la edad de 30 aos.

Troponina

Es un complejo triproteico mayoritariamente globular, de gran tamao (70 KD), con una fraccin fibrosa,
que participa en la funcin de acoplamiento actina/miosina en el trabajo muscular; est integrado por Tn T,
que fija tropomiosina, Tn I, inhibidora de la interaccin de contraccin, actina- miosina y Tn C, fijadora de
calcio.

Cuando se produce una ruptura de la fibra miocrdica, se vuelcan al torrente sanguneo las fracciones T e I
principalmente, constituyndose en marcadores muy sensibles y especficos de dao miocrdico, de inicia-
cin temprana.

Protenas plasmticas

La sangre consta de una fraccin globular y una plasmtica. En la fraccin globular ya hemos tratado su pro-
tena intraeritrocitaria ms importante: la hemoglobina.

En la fraccin plasmtica se detectan normalmente entre 60 y 80 gramos de protenas por litro de plasma.
La electroforesis de protenas separa las fracciones ms importantes en funcin de su relacin de carga
masa sobre un soporte y un buffer adecuados. La ms abundante es la albmina, con una concentracin de
aproximadamente 45 gramos por litro de plasma.

Albmina

Es una protena pura ya que no contiene glcidos ni lpidos. Tiene un pI= 4,8, lo que denota su carcter ci-
do y presenta una muy elevada estabilidad. Tiene 582 aa. de los cuales una elevada cantidad corresponde
a aminocidos cargados (asprtico, lisina, glutmico, arginina) y de cistena, lo que le permite establecer 17
puentes disulfuro y con ellos una estructura de 9 bucles. La estructura secundaria presenta en la albmina
humana un 55% de hlice y un 16% de hoja .

Se forma en el hgado como prealbmina, la cual al perder un hexapptido de su extremo amino terminal
(complejo de Golgi), se segrega en su estado definitivo. La albmina es muy eficiente como transportadora
y para el mantenimiento de la presin coloido- osmtica del plasma. Cuando hay un dficit ya sea por prdi-
das renales (sndrome nefrtico), falta de sntesis (hepatopatas) o falta de ingesta (problemas nutricionales)
se observa la aparicin de edemas generalizados como consecuencia de la extravasacin de agua desde el
sistema intravascular hacia el intersticio

Las funciones como transportadora son de alta eficiencia, contribuyendo a la distribucin corporal de sus-
tancias insolubles como cidos grasos. Las zonas elctricas negativas (asprtico/ glutmico) favorece el
transporte de Cationes como Ca++, Cu++, Ni++, Co++ y Zn ++.

159
 Luis E. Simes

Haptoglobinas
Es un complejo proteico que migra en la fraccin 2 globulina de la electroforesis. Se encuentran tres va-
riedades formadas por cadenas / que se diferencian en funcin de su estructura primaria.

Este complejo tiene como finalidad unirse a la Hemoglobina liberada de la hemlisis eritrocitaria y as evitar
su excrecin renal con consecuentes lesiones tubulares. El complejo es degradado en el sistema retculo
endotelial para la reutilizacin del Fe.

Ceruloplasmina
Tambin migra en la fraccin - 2 globulina. Tiene dos funciones principales: Transporte de Cubre, tanto
mono como divalente (Cu+, Cu++) y oxidar el Fe++ a Fe+++ con lo que se logra su incorporacin a la transferri-
na. Esta fraccin est muy disminuida en la enfermedad de Wilson, de origen gentico, lo que conlleva a
una elevacin de la cupremia y al depsito metlico en los tejidos a los cuales lesiona con el tiempo (H
ga-
do y el cerebro).

Prolaminas y glutelinas, son protenas insolubles en agua, presentes en ciertos vegetales y capaces de gene-
rar patologas por intolerancia a nivel intestinal por su presencia en productos panificados. Son englobadas
bajo el nombre de gluten, que constituye un grupo proteico vegetal, prescindible para el organismo que
intervienen en los procesos de panificacin. Las prolaminas, glicoprotenas ricas en glutamina y prolina, y
de bajo peso molecular (< 80KDa), adquieren su nombre de acuerdo con el cereal en el que se encuentren.
(Por ejemplo, en el trigo, gliadina hordena en cebada, etc.). Son extrables por soluciones alcohlicas. Las
gluteninas en cambio son extrables por soluciones cidas diluidas, de alto peso molecular (entre las ms
grandes conocidas con varios millones de KDa.) Se encuentra en este grupo a la protena de la avena, avenina.
Los derivados TACC (trigo, avena, cebada y centeno) pueden causar celiaqua en individuos predispuestos,
trastornos alrgicos y dermatitis con una sensibilidad general no celaca.

Casena: Protena de la leche, que se encuentra bajo la forma de sal clcica (caseinato de calcio). Es una pro-
tena fosforada que se divide en tres fracciones: alfa, beta y kappa, que se caracterizan por un PM y propor-
cin de fosfatos decrecientes.

Fibringeno
Es una glicoprotena que participa del proceso de la coagulacin para generar fibrina por accin de la trom-
bina. Migra con la fraccin de la electroforesis. Su estructura consiste en dos dmeros unidos por puente
disulfuro. Cada dmero est formado por tres cadenas proteicas entrelazadas como hlice = (ab)2 . , las
cuales tienen 610, 461 y 410 aa. respectivamente. La accin cataltica de la trombina hace que se modifi-
quen la distribucin de cargas, favoreciendo el acoplamiento molecular (cogulo blando), que se estabiliza
posteriormente por los enlaces covalentes entre lisina y glutaminas, por la accin del Factor XIII en pre-
sencia de calcio. La protrombina y los factores VII, IX y X poseen extremos carboxi glutamato capaces de
reaccionar con el calcio en la cascada de coagulacin (calcio dependientes) con intervencin de la vitamina
K. Existen proteasas ( Protena C) o inhibidores (Antitrombina III), participando en los equilibrios de los pro-
cesos hemostsicos.
Protenas de defensa

Mucinas: son prote

nas cubiertas con oligopolisac
ridos, caractersticas de los diferentes epitelios. Se cono-
cen ocho estructuras (MUC-1 a MUC-8) con una gran variedad de oligosacridos asociados.

Pptidos antimicrobianos

Producidos en los queratinocitos, se reconocen las beta defensinas y las catelicidinas. Son fuertemente ca-
tinicos e hidrfobos, por lo que alteran inespecficamente las membranas celulares de ciertos patgenos.

160
 Bioqumica

Citocinas

Son glicoprotenas de bajo PM (alrededor de 30 Da). Su estructura est constituida mayoritariamente por
cuatro alfa hlices y minoritaria presencia de lmina beta. Actan como mensajeros qumicos en la respues-
ta inmune. En este grupo se encuentran las Interleuquinas.

Protena C Reactiva

Es una protena del grupo de las pentraxinas cortas que se expresa en la fase aguda post lesin tisular en
mamferos. Tiene estructura semejante a una inmunoglobulina (ver ms adelante), promueve la inflamacin
y la activacin del complemento. Su sntesis heptica es estimulada por las interleuquinas.

Sistema complemento

Es un conjunto de protenas evolutivamente muy conservadas que integran la defensa innata. Son produci-
das por el hepatocito y se activan por diferentes mecanismos que involucran la intervencin de proteasas y
un sistema de cascada. Su estudio se intensifica en la inmunologa.

Protenas de histocompatibilidad

Las protenas del complejo I son glicoprotenas de membrana conformadas por un dmero polipeptdico:
una cadena alfa de 340 aa. y una beta 2 microglobulina de 99 aa. Las molculas de clase II son glicoprote-
nas heterodimricas formadas por la fraccin alfa de 229 aa. y la beta de 237. Contribuyen a la diferencia-
cin de los antgenos propios de los exgenos.

Inmunoglobulinas

Son glicoprotenas de la inmunidad adaptativa. Su estructura consta de cuatro cadenas: dos pesadas (H) de
440 aa. y dos livianas (L), de 220 aa. Las cadenas estn unidas por puentes disulfuro. Cuando una inmuno-
globulina se trata con papana se obtienen tres fragmentos, de peso semejante: dos Fab que se une a anti-
cuerpos, y Fc que se une a receptores celulares.

Las inmunoglobulinas tienen regiones constantes y variables. La regin del amino terminal es una regin
hipervariable, correspondientes al sitio de unin al antgeno. La fraccin constante, perteneciente al Fc (ex-
tremo carboxi terminal) es la que se une a los receptores de Fc de las clulas.

La estructura secundaria es de beta hoja plegada antiparalela, mientras que la estructura terciaria adquiere
caractersticas globulares.
Ag Ag

161
 Luis E. Simes

CH1, CH2 y CH3 son las regiones constantes de las cadenas pesadas H; VH es la regin variable

CL son las regiones constantes y VL las variables de las cadenas liviana L.

Existen dos tipos de cadenas livianas: kappa y lambda que difieren en la estructura primaria del extremo
carboxiterminal. Existen puentes disulfuro entre las cadenas que mantienen su estructura.

Las principales inmunoglobulinas son la Ig G asociada a la defensa crnica, la A y A secretoria en la defensa

de epitelios y la E asociada a procesos alrgicos. La Ig M es la primera en reaccionar en los procesos agudos.

Las Ig G, E y D son molculas monomricas, mientras que la inmunoglobulina A puede ser monomrica o
dimrica. La inmunoglobulina M es pentamrica.

Protenas nucleares

Adems de las protenas del citoplasma, resulta necesario tener en cuenta a las protenas del ncleo celular
por su gran importancia en la regulacin de los procesos de reordenamiento estrico del ADN en el ciclo
celular.

Histonas

Las histonas son protenas bsicas por su alto contenido en lisina y arginina. Su carga elctrica es catinica
lo que se unen fuertemente a los cidos nucleicos, los cuales se encuentran cargados negativamente. Esta
asociacin entre las protenas catinicas y cidos nucleicos aninicos genera nucleoprotenas que forman
los
cromosomas. Estas nucleoprotenas sufren modificaciones qumicas como metilacin, acetilacin, foso-
forilacin, etc. Estas interacciones producen modificaciones funcionales que se encuadran en los fenme-
nos epigenticos,

Las histonas son protenas muy fuertemente conservadas en la naturaleza, mostrando un ndice de mutacin
muy bajo y manteniendo su secuencia inalterada entre diversos organismos evolutivamente alejados. Esto
demuestra su participacin en procesos biolgicos muy bsicos y generales. La unidad de la cromatina es un
cilindro octamrico de histonas (H2A, H2B, H3, H4)2 abrazado por 140 pares de bases. Hay entre 20 y 100
pares de base entre nucleosomas por lo cual la cadena adquiere un aspecto de rosario, donde los nucleoso-

162
 Bioqumica

mas son as cuentas. Las enzimas atacan estos tramos internucleosoma, pero no a los nucleosomas mismos,
Estas cadenas se superenrollan hasta lograr un superempaquetamiento que posibilita una compresin de
12.000 a 1.

Protaminas

Son protenas ms pequeas que las histonas, tambin bsicas, conteniendo arginina preponderantemente
y algo de lisina, por lo que se encuentran cargadas positivamente, lo que favorece la asociacin inica con el
cido desoxiribonucleico, cargado negativamente a pH fisiolgico. Las protaminas se encuentran en esperma-
tozoides, bajo una disposicin alfa helicoidal, lo que permite su inclusin en el espermatozoide.

163
 Bioqumica

CAPITULO 5

ENZINAS

Cintica y velocidad de reaccin

Las reacciones qumicas se clasifican de acuerdo a su mecanismo de accin y la particularidad de sus com-
puestos. Sin embargo un elemento determinante es la velocidad de la reaccin. Para que la reaccin qu-
mica se concrete, debe ser espontnea o si no es necesario aportar energa externa a la misma, en general
bajo la forma de calor. Considerando que la temperatura del cuerpo humano es de 37, las reacciones no
se concretaran en el tiempo necesario para asegurar su ejecucin eficiente en el metabolismo orgnico. La
velocidad de reaccin es regulada por sustancias catalizadoras, que no intervienen en la reaccin, sino que
modifican su velocidad. Los catalizadores positivos las aceleran y los negativos o inhibidores las desacele-
ran.

Los catalizadores orgnicos ms comunes son un tipo particular de protenas, denominadas enzimas.

Las enzimas logran disminuir la energa de activacin de la reaccin con lo cual la reaccin se acelera.

Las enzimas son grupos proteicos llamados apoenzimas. Su carcter cataltico se adquiere cuando inter-
viene un cofactor para constituir la forma activa llamada holoenzima. Los cofactores pueden ser tomos
metlicos como hierro o magnesio. Cuando el cofactor es de naturaleza orgnica se denomina coenzima.
stas no son especficas de las enzimas, cmo estas si son respecto de sus sustratos.

Las enzimas que tienen variantes estructurales (generalmente por su estructura cuaternaria), pero que cata-
lizan una nica reaccin, se denominan isoenzimas.

Por ejemplo la enzima lctico dehidrogenasa es tetramrica, estando conformada por dos tipos de estruc-
tura proteicas (H y M). Si estas se combinan de una u otra manera, va a cambiar la prevalencia en un tejido,
aunque se mantiene su especificidad cataltica.

Si las unidades monomricas se estructuran con cuatro H, o cuatro M, o formas intermedias, se obtendrn
diferentes isoenzimas:

HHHH (LDH1) y HHHM (LDH2) se encuentran en miocardio y eritrocitos,

HHMM (LDH3) es prevalente en cerebro y rin y MMMM (LDH5), predomina en msculo esqueltico e
hgado.

165
 Luis E. Simes

CLASIFICACION DE ENZIMAS

La cantidad de enzimas es tan elevada, que su identificacin a mediados del siglo pasado se torn muy com-
pleja. Para ordenar esta cuestin, el Comit de Enzimas de la Unin internacional de Bioqumica37 determi-
n que se designe a las enzimas con las letras EC y cuatro nmeros separados por puntos. El primero indica
la clase a la que pertenece. El segundo a la sub clase. El tercero es la sub sub clase y el cuarto representa el
nmero que ocupa en el listado, o el sustrato sobre el que acta.

Las enzimas se clasifican en seis clases principales, segn el mecanismo de la reaccin que catalizan, las que
se indican a continuacin con sus subclases.

1.xido- reductasas: intervienen en la transferencia de electrones desde un grupo reductor a uno oxidante,

1. Deshidrogenasas

2. Oxidasas

3. Reductasas

4. Peroxidasas

5. Catalasa

6. Oxigenasa

7. Hidroxilasas

2. Transferasas: transfieren grupos funcionales entre diferentes molculas, desde un compuesto donador a
uno aceptor

1. Transaldolasa - Transcetolasa

2. Acil, glucosil y fosforil transferasas

3. Quinasas

4. Fosfomutasas

37 International Union of Biochemistry and Molecular Biology. www.iubbm.org

166
 Bioqumica

3. Hidrolasas: aceleran reacciones de hidrlisis, es decir romper enlaces mediante la adicin de agua

1. Esterasas

2. Glucosidasas

3. Peptidasas

4. Fosfatasas

5. Tiolasas

6. Fosfolipasas

7. Amidasas

8. Desaminasas

9. Ribonucleasas

4. Liasas: catalizan reacciones de adicin sobre dobles enlaces

1. Decarboxilasas

2. Aldolasas

3. Hidratasas

4. Deshidratasas

5. Sintasas

6. Liasas

5. Isomerasas: participan en reacciones de isomerizacin

1. Racemasas

2. Epimerasas

3. Isomerasas

4. Mutasas

167
 Luis E. Simes

6. Ligasas: forman nuevos enlaces mediante la energa aportada por la extraccin de fosfatos de ATP o GTP.

1. Oxgeno

2. Azufre

3. Nitrgeno

4. carbono

Adems, existen las subsubclases que contribuyen a su clasificacin interna y sobre que sustrato trabajan.

Por ejemplo, la amilasa38, de importancia para la hidrslisis de los enlaces alfa glicosdicos, y utilizada en
el diagnstico clnico, se encuentra catalogada como

Poder cataltico

Las enzimas son los catalizadores ms especficos que se conocen, no slo sobre los sustratos que actan,
sino tambin por el tipo de reaccin en los que intervienen.

En la enzima existe una zona particular, donde la estructura terciaria genera una regin favorable para que
se produzca el encuentro entre el sustrato y la enzima. sta regin se denomina centro activo. Esto fue ex-
plicado con el modelo llave- cerradura, como una conformacin complementaria rgida que permita el
acceso de una molcula y no de otra. El modelo de acoplamiento inducido considera que la estructura de
contacto es ms flexible.

La enzima y el sustrato se unen para generar un complejo enzima-sustrato, que disminuye la energa de ac-
tivacin, lo cual posibilita la liberacin de la enzima y la transformacin del sustrato en producto. La enzima
queda libre para participar en otro proceso enzima- sustrato. Por ello la enzima no se agota, aunque si lo
haga el sustrato.
E + S [E-S] P + E

S [E-S] P + E

Cintica enzimtica

En razn de que en los procesos enzimticos la enzima se recupera y se encuentra en exceso, el reactivo
limitante para determinar la velocidad es el sustrato.

Si la concentracin de Sustrato es baja, la velocidad ser baja y a medida que se incremente la concentra-
cin de sustrato, aumentar la velocidad, hasta llegar a un mximo que ser el punto de saturacin de la
enzima. ste punto se denomina velocidad mxima (Vmax).

38 http://www.enzyme-database.org/query.php?name=amylase

168
 Bioqumica

V max --------------------------------------

Vmax ----

Km C sustrato

Si determinamos la concentracin de sustrato a la cual la velocidad es = Vmax.

Para cada enzima se determina su Vmax. sta se denomina Km, constante de Michaelis, es decir la con-
centracin de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad mxima en esa reaccin y bajo esas
condiciones.
La relacin entre Km y Vmax se establece en la ecuacin de Michaelis-

[S]

V = V max. ----------------

Km + [S]

Inhibicin enzimtica

Existen sustancias que interfieren en la accin de la enzima obstaculizando sus efectos.

(i) Por desnaturalizacin: agentes fsicos como la temperatura, qumicos

como los cidos u oxidantes. La enzima queda inutilizada irreversible-
mente Ciertas toxinas pueden unirse covalentemente a la enzima y
producen su inactivacin.

(ii) Isostricos : comprometen la actividad del sitio activo, impidiendo la

efectiva interaccin sustrato-enzima

(iii) Alostricos: producen cambios conformacionales en la estructura de la

protena, lo que repercute en su funcionalidad
I.Inhibicin Isostrica

a.competitiva

Este mecanismo se da cuando el inhibidor y el sustrato compiten por el centro activo. El inhibidor ocupa
el sitio especfico e impide el acceso del sustrato para conformar el complejo E-S. La inhibicin se produce
cuando las concentraciones de inhibidor son mayores. Si se aumenta la concentracin del sustrato, la inhibi-
cin puede remitir por desplazamiento competitivo con el inhibidor. El sustrato y el inhibidor suelen poseer
estructura semejante para poder adaptarse al centro activo.

169
 Luis E. Simes

b. no competitiva

En este mecanismo de inhibicin, el inhibidor no compite por el sitio activo, sino que interacta con algn
grupo qumico que altera la funcin. Por ello la inhibicin no remite aunque se aumente la concentracin
de sustrato.
c. Incompetitiva: Los inhibidores incompetitivos
slo se unen al complejo E-S
ya formado. Produce modifica-
ciones en el complejo que disminuyen su separacin-

II. Inhibicin alostrica

Existe un grupo de enzimas reguladoras que intervienen en el metabolismo y que se denominan alost-
ricas. Modifican su accin por la unin no covalente y reversible de un grupo modulador. stos pueden
ser inhibidores o activadores, tratndose en algunos casos del propio metabolito (mecanismo de feed
back + o -), u otro grupo que produzca cambios en algn grupo funcional o por mecanismos de prote-
lisis. Las enzimas alostricas poseen otros centros diferentes del activo llamados sitios alostricos, que
pueden actuar como reguladores/moduladores.

170
 Bioqumica

CAPITULO 6

ACIDOS NUCLEICOS

El cuarto gran grupo de compuestos biolgicos que abordaremos son los cidos nucleicos. Estas molculas
poseen gran importancia fisiolgica, mdica y ltimamente merced del desarrollo de la biologa molecular,
trascendencia meditica potenciada por el proyecto genoma humano y las informaciones sobre genes, en-
fermedad y comportamiento.

Estructura

Los cidos nucleicos fueron designados as cuando fueron recuperados del ncleo celular, aunque existen
libres en el citoplasma de las clulas procariotas.

Los cidos nucleicos estn formados por una cadena de pentosa y fosfato, y un derivado prico o pirimid-
nico enlazado a cada glcido de la cadena

Los componentes fundamentales son:

Fosfato (PO4 ---)

O-
l
O = P = O-
l
O

Pentosas:

Los componentes glucdicos de los cidos nucleicos son la ribosa y la desoxi ribosa, los cuales ya fueron
descriptos en el captulo correspondiente a glcidos. Son aldopentosas, cuya diferencia estriba en que la
ribosa pierde el OH de carbono 2 para originar 2-desoxirribosa. Estos azcares originan el nombre de RNA
(ribo) y desoxirribonucleicos (desoxiribo)

Bases Pricas y Pirimidnicas

Las bases pricas son derivados de la purina, un condensado de un anillo pirimidnico e imidazlico, estable
por las propiedades aromticas de los ncleos. Los susituyentes determinan las caractersticas definitivas de
los compuestos.

171
 Luis E. Simes

Las bases pricas que integran los cidos nucleicos son

Adenina (6 amino- purina) y

Guanina (2 amino, 6 oxo purina)

La xantina, (2,6 di oxo purina) que no integra cidos nucleicos, es la estructura base de la cafena y del cido
rico.

Pirimidnicas :

Se conforman con un heterociclo dinitrogenado, la pirimidina. Sus derivados, integrantes de los cidos
nucleicos son:

Citosina: (2-oxo, 4 amino pirimidina), tiene algunos derivados activos como la 5 metil y la 5 hidroximetil cito-
sisna)

la timina (2,4 dihidroxi, 5-metil pirimidina) se encuentra solamente en el ADN, mientras que el uracilo ( es
la timina demetilada) integra nicamente el ARN.

Tanto las bases pricas como las pirimidnicas, en razn de la existencia de dobles enlaces resonantes, inte-
raccionan con la luz ultravioleta. Esta propiedad posibilita su utilizacin con el fin de caracterizarlas.

Por otra parte, la asociacin entre los azcares y las bases pricas o pirimidnicas originan nuclesidos.
Cuando stos se combinan con un grupo fosfato, forman compuestos denominados nucletidos.

Nuclesidos

Los nuclesidos se originan por el enlace de una base a una pentosa. La pentosa ribosa se encuentra pre-
sente en el cido el ARN y desoxiribosa en el ADN.

Las bases se unen al carbono 1 del azcar, mientras que el fosfato se une a los carbonos 3 y 5 de las bases.

En el primer caso se llaman ribonuclesido y en el otro desoxiribonuclesido.

Tanto los ribonuclsidos como los desoxiribonucletidos pueden contener bases pricas o pirimidnicas.
Las bases pricas conforman su nombre con el sufijo osina, mientras que las pirimidnicas utilizan el sufijo
idina.

Nucletidos

El cido fosfrico se une a algn oxhidrilo de la pentosa, generalmente 3 y 5, conformando por deshidrata-
cin un enlace ster (cido- alcohol).

Cuando la unin entre el fosfato y la osa se realiza con el OH del C 5 del azcar, se forma un 5 nucletido
o 5 desoxinucletido. Los agregados de grupos fosfato genera enlaces de tipo anhdrido (cido + cido con
prdida de una molcula de agua por enlace).

172
 Bioqumica

OSA Base nuclesido Fosfato nucletido

nitrogena-
da
Adenina Adenosina cido Adenlico o

adenosin monofosfato (AMP)

Guanina Guanosina cido Guanlico o
D- Ribosa

Fosfato
guanosin monofosfato (GMP)
Citosina Citidina cido Citidlico o

citidin monofosfato (CMP)

Uracilo Uridina cido Uridlico o

uridin monofosfato (UMP)

Adenina Desoxi cido desoxi Adenlico o

adenosina desoxi adenosin monofosfato (dAMP)

2-Desoxi- Ribosa

Guanina Desoxi cido desoxi Guanlico o

Fosfato

guanosina desoxi guanosin monofosfato (dGMP)

Citosina Desoxi cido desoxi Citidlico o

citidina desoxi citidin monofosfato (dCMP)

Timina Timidina cido desoxi Uridlico o

desoxi uridin monofosfato (dUMP)

Cada uno de los nucletidos monofosfato pueden fosforilarse con dos y tres cidos fosfricos. As el AMP (ade-
nosin monofosfato) se fosforila a ADP (adenosin di fosfato) y ATP (adenosin trifosfato). El guanosn monofosfato
(GMP) se fosforila a di fosfato, para formar Guanosil di Fosfato (GDP), el cual interviene en la mitocondria en el
ciclo de Krebs. Hay nuclotidos y nuclesidos que no integran cidos nucleicos, pero que son importantes como
metabolitos intermediaros de procesos metablicos, coenzimas, vitaminas, etc.

El Adenosn Trifosfato (ATP) posee enlaces de alta energa, por lo que acta como dador de energa y de grupos fos-
fato, transformndose en ADP y AMP (di y mono fosfato). Cuando el AMP se cicla por accin de la enzima adenilato
ciclasa, se genera AMPc (cclico). Es un segundo mensajero comn a diferentes vas fisiolgicas.

Los nucletidos son capaces de unirse entre s, formando di-nucletidos, mediante enlaces pirofosfato (
O- P O P O- ). Los pirofosfatos provienen del cido pirofosfrico, y se abrevian como PPi. El pirofosfato
es inestable y se hidroliza a dos orto- fosfatos (2Pi)s. Cuando el ATP origina AMP, libera un anin pirofosfato
(PPi).
ATP AMP + PPi

PPi + H2O 2Pi (1)

H4P2O7 + H2O 2 H3PO4

173
 Luis E. Simes

cido pirofosfrico cido o- fosfrico

Estos PPi forman puentes entre nuclotidos generando dinucletidos, como el nicotinamin adenin di nu-
cletido (NAD) con funciones de vitamina, o la flavina adenina di nucletido (FAD), la cual acta como cofac-
tor redox pudiendo reducirse a FADH2.

ACIDOS NUCLEICOS
El gran actor de la biologa en los ltimos aos es el ADN. Reconocido como molcula fundamental del material ge-
ntico en la actualidad, no fue reconocido como tal sino hasta mediados del siglo XX. A principios del siglo pasado
se pensaba que el rol gentico lo jugaban las protenas. Sin embargo, la transformacin de neumococos de comen-
sales (R, colonias rugosas) a patgenos (L, colonias lisas) se produca con sustancias cidas extradas de los ncleos
celulares, denominadas nuclenas. Si se digeran los cidos nucleicos, la transformacin no se produca, cosa que
s ocurra si se digeran las protenas. De esta manera Avery y Mc Leod demostraron que la informacin gentica
era portada en los cidos nucleicos, concepcin que no fue rpidamente aceptada en la comunidad cientfica. Slo
cuando Watson y Crick, modelizaron el ADN sobre los trabajos de difraccin estructural por cristalografa de rayos
x de Rosalind Franklin y Maurice Wilkins, se comenz a aceptar el rol de los cidos nucleicos en la herencia.

1- Modelo de Watson y Crick

Los cidos nucleicos son el Desoxiribo Nucleico (ADN) y el RiboNucleico, (ARN).

Son el producto del acoplamiento de nucletidos en diferentes secuencias y estructuras, que generan los dferentes
tipos de cidos nucleicos.

ACIDO DESOXIRIBONUCLEICO

El ADN es el componente que porta la informacin gentica. Adquiere diversas estructuras como la ,A, la Z o la B,
aunque sta ltima es la que presenta su funcionalidad celular. En las clulas procariotas se halla en el citoplasma,
en forma de anillos o crculos cerrados. En las clulas eucariotas integra los cromosomas en conjunto con las histo-
nas. Hoy el ADN es reconocido como la molcula llamada Doble hlice. Fue la estructura propuesta por Watson
y Crick en 1953, prevaleciendo sobre la idea de triple hlice propugnada por el premio nobel Linus Pauling.

174
 Bioqumica

La doble hlice est conformada por dos columnas integradas por grupos fosfato y desoxi ribosa alternados,
unidos por enlace ster entre fosfatos enlazados a los oxhidrilos de carbono 5 de un azcar y con el carbono 3
del azcar siguiente. Abajo se muestra el esquema de una cadena. El carbono 1 de cada azcar se une a las bases
correspondientes.

5 1 B
R
3

5 1 B
R
3

Las dos cadenas que forman la hlice se enrollan una alrededor de la otra de forma antiparalela, es
decir que los extremos 1 de cada una de ellas se encuentran en los puntos opuestos. Mientras una
de las formas corre de 3 a 5, la cadena enfrentada corre en sentido contrario, es decir 5 a 3

3 5

5 3

Se encuentran tres formas particulares de ADN: A, B y Z .

tomado de ucm.es

Mientras la forma A es dextrgira y tiene 11 nucletidos por vuelta y la forma Z es levgira, nosotros enfocaremos
el estudio en la forma funcional que es la conformacin B .

Cada vuelta de hlice tiene 10 nucletidos en una longitud de 3,4 nanometros. Poseen dos bases pricas y dos
bases pirimidnicas enfrentadas. Hay una especificidad regida porel tipo de base que interviene. A la Adenina de
una cadena siempre se le enfrentar una timina de la otra cadena. Asimismo, frente a la citosina de una cadena,
siempre le corresponder una guanina. Cada par de base se encuentra estabilizado por uniones electrostticas,
hidrofbicas y de puente hidrgeno.

175
 Luis E. Simes

Las interacciones de puente hidrgeno juegan un rol crucial en las interacciones interbases.

En la interaccin entre adenina y timina siempre se establecen dos puentes de hidrgeno, mientras que para el par
citosina- guanina son tres los puente hidrgenos que se establecen.

De esta manera queda entendido que cuanto mayor proporcin de pares C-G haya en la molcula, ms estable y
difcil de separar ser la doble hlice.

O
H H
N
N
H
N
TIMINA
ADENINA

N
H
O
N
H N
O
H N

H
CITOSINA
GUANINA

Enlaces Covalentes :
Puentes Hidrgeno :

Estructura primaria

La estructura primaria de los cidos nucleicos est conformada como ya se expresara por una cade-
na de azcares y fosfatos alternados, de tal manera que se sigue el siguiente patrn:

(- 3 A 5 P -)n y enfrentada a de forma antiparalela a la cadena complementaria : (- 5 A

3 P -)n

Desde el C1 de cada azcar y hacia el interior de la doble hlice, se despliegan perpendiculares al

esqueleto las bases pirimidnicas enfrentadas a las pricas.

176
 Bioqumica

5 3

A - Pu A - Pi
P P
A - Pu A - Pi
P P
A - Pi A - Pu
P P
A - Pi A - Pu
3 5

El orden de las bases constituyen la secuencia primaria del cido nucleico y es el orden de las mismas
las que codifican la informacin gentica.

Chargaff encontr que la proporcin de adenina era similar a la de timina y la de citosina a la de guanina,
por lo que se postul el concepto de base complementaria: a una adenina se enfrenta una timina y a una
citosina , una guanina. De esta forma se concluye en que hay un apariamiento de bases complementarias
constituidas, como ya se vio por A=T, estabilizadas por dos puentes de hidrgeno y C=-G por tres interaccio-
nes de puente Hidrgeno. Ello conclua adems en que la cantidad de purinas era muy similar a la cantidad
de pirimidinas.

Estructura secundaria

Est conformada por la doble hlice de fosfato azcar hacia el exterior hidroflico con las bases hacia
el interior. La forma ms abundante del DNA en la clula, que es la variante B, conforma dos surcos, uno
mayor y otro menor, adecuados para posibilitar las interacciones del DNA con otras molculas. Los enlaces
hidrgeno sostienen las interacciones entre las bases pricas y las pirimidnicas.

Los cidos nucleicos que presentan secuencias palindrmicas, tienen tendencia a adquirir conforma-
ciones que permiten el auto apareamiento de las bases complementarias. Un tipo especial de ADN, el H,
conforma una triple hlice, posiblemente la forma sobre la que estudiaba Pauling la estructura de loa cidos
nucleicos.

Estructura terciaria

El ADN presenta un grado de empaquetamiento extraordinario. En una bacteria, tiene 800 veces la lon-
gitud de la clula, y en el ser humano, se encuentra empaquetado en una clula el equivalente a la altura de
una persona. Los cromosomas, que son la manera de contener al ADN que posee la clula interaccionando
con las protenas catinicas histonas, presentan una estructura de empaquetamiento de diversos niveles
hasta la estructura observable microscpicamente en la mitosis. El ADN est superenrollado sobre el oct-

177
 Luis E. Simes

mero de histona, segn se vio en el captulo anterior. El empaquetamiento protege al ADN de interacciones,
relajndose la estructura cuando debe dividirse y para dar lugar a la expresin o accin de enzimas y prote-
nas como las polimerasas, factores de transcripcin, etc. La actividad de este material incluye reacciones de
metilacin y acetilacin, que constituyen la base de las actividades epigenticas del material nuclear.

El ADN, aunque evolutiva y funcionalmente muy conservado, se organiza de diferentes maneras enlos mas varia-
dos organismos.

As, el ADN bacteriano, tpico de Escherichia coli, es un dplex unido a un punto de la membrana nuclear, que cons-
tituye el nico cromosoma. Poseen un ADN extracromosomal, circular, llamados plsmidos y episomas. Ambos son
dplex de ADN, aunque los plsmidos se duplican con el cromosoma, mientras que los episomas se unen al ADN
cromosomal durante la duplicacin.

No se unen a protenas y si a iones metlicos o a ARN.

El ADN viral es bicatenario en doble hlice (caracterstico del fago lambda), mientras que en el fago 174 el cido
nucleico es monocatenario. Los retrovirus poseen RNA como molcula donde se guarda la informacin gentica.
Poseen una enzima, la retrotranscriptasa, que permite la transcripcin del ARN en ADN.

El ADN eucariota tiene una cantidad determinada de cromosomas, tpico de especie. En el hombre existen 23
pares.

El ADN sufre procesos de desnaturalizacin, que consiste en la separacin de la doble cadena, pero sin ruptura de
los enlaces covalentes del esqueleto 3-5. Esto se logra por calentamiento. Al llegar a aproximadamente 80C, se
observa una prdida de viscosidad y un incremento de la absorbancia a 260 nm. Cuando las cadenas se separan,
se produce un aumento de la absortividad de luz ultravioleta, a medida que la molcula se va desnaturalizando,
es decir, hacindose monocatenaria. Cuanto mayor sea la proporcin de pares adenina- timina, mayor ser la des-
naturalizacin en razn de que tiene menores interacciones por puente hidrgeno que el par citosina/guanina. El
punto de fusin es la temperatura a la que se logra la total separacin. En la prctica se usa la Tm, que es la tem-
peratura a la cual se logra la desnaturalizacin del 50% del material gentico. El punto de fusin es proporcional a
la cantidad de pares C=-G.

El proceso contrario se denomina hibridizacin o annealing. Es el proceso por el cual las cadenas separadas pue-
den reasociarse al disminuir la temperatura, siguiendo sus pautas de complementariedad. Si la desnaturalizacin
fue incompleta, el annealing es rpido. En cambio, si la separacin fue total, se observan dos etapas: una primera
lenta, de bsqueda de la complementariedad, y una segunda ms rpida, cuando se concreta el apareamiento.
Cuando se unen dos cadenas de diferente origen, se denomina ADN hbrido.

Esta propiedad del ADN posibilit la invencin de la tcnica de PCR (Protein Chain Reaction) o reaccin en cadena
de la polimerasa. Esta reaccin se produce en ciclos que multiplican el material geomtricamente. El aumento de
la temperatura genera la desnaturalizacin. Se colocan dos cebadores (primers directos y reversos) que permiten
repolimerizar las cadenas cuando se produce el annealing por disminucin de la temperatura. Ante un nuevo in-
cremento de la temperatura se vuelven a separar las cadenas, los primers inician otro ciclo de sntesis enzimtica-
mente mediadas por la polimerasa. La repeticin de una serie de ciclos determinada, permite la amplificacin de
muy pequeas cantidades de material gentico. El descubrimiento de la Taq polimerasa, sintetizada por bacteria
termfilas, resistentes a elevadas temperaturas posibilita su uso a las temperaturas necesarias para la desnatura-
lizacin de la doble hlice.

Las secuencias de inters pueden ser insertadas en secuencias portadoras o carriers para formar secuencias re-
combinantes, para su estudio e investigacin.

ACIDO RIBONUCLEICO

Adems del cido Desoxiribonucleico, en la clula se encuentra cido Ribonucleico.

La diferencia fundamental con al ADN es que estructuralmente el ARN es monocatenario. En cuanto a la integra-
cin de bases en el ARN se encuentra la base pirimidnica Uracilo en lugar de la timina.

178
 Bioqumica

Existen varios tipos de ARN en la clula:

ARN mensajero

ARN de transferencia

ARN ribosomal

ARN pequeos, micro y de interferencia

El ARn mensajero traslada la informacin desde el ncleo de la clula hasta los ribosomas. Transcribe las secuen-
cias codificantes del ADN hacia los ribosomas copiando la cadena no codante del ADN, es decir la que se ordena
5-3 que se corresponde con el orden de copiado de la polimerasa. La cadena complementaria, que no se copia,
se llama codante o sentido ya que posee la misma secuencia que el RNAm, guardando la salvedad expresada entre
timina y uracilo. La hebra que se copia del ADN se denomina tambin antisentido.

El ARN mensajero conteniendo exones e intrones (secuencias que se transcriben a protenas y secuencias inter-
medias no codificantes, respectivamente) sufre un proceso de maduracin, denominado splicing por el cual se
exporta del ncleo la hebra de ARN mensajero maduro para codificar la protena correspondiente al gen deseado.
Esta secuencia de aminocidos se ensambla en los ribosomas.

En este proceso participa un RNA pequeo integrado a una partcula proteica denominada spliceosoma. Existen
aproximadamente 10 de estas estructuras, muy ricas en uracilo. (U-3, U6, U 10, etc.)

ARN de transferencia

Este RNA particular, monocatenario, de aproximadamente 80 nucletidos, con forma de trbol, es el encargado de
transportar el aminocido correspondiente a la secuencia que se debe integrar a cadena que se est sintetizando.
El triplete de bases del ARN mensajero que codifica al aminocido se llama codn. ste debe ser complementario
con el anticodon presente en el ARN de transferencia, portador del aa. correspondiente a ese codn.

Ucm.es

179
 Luis E. Simes

El anticodon se enfrenta al codn del ARN mensajero por complementariedad. Lo cual determina el aa. que se
debe incorporar a la cadena de protena que se est sintetizando en el ribosoma.Existen 20 aminoacil TRNA, uno
para cada aminocido. Los tripletes de base se encuentran especificados en el cdigo gentico.As tres nucletidos
indican un aa.

Por ejemplo, AUG en el RNA de transferencia codifica al aa. metionina. CUU, CUC, CUA y CUG codifican leucina. Se
dice que el cdigo gentico se encuentra degenerado, ya que existen 64 tripletes para tan slo 20 aa. Esto mejora
la seguridad de la transcripcin, ya que una diferencia de una tercer base por una mutacin, no produce el cambio
de aa. y con ello se conserva la protena.

Por ejemplo si el triplete del ARN mensajero fuera CUA y ocurre una mutacin que lo transforma en CUG, igual-
mente se codificar leucina. Engeneral las protenas se inician con metionina. Existen tres codones que son seales
de finalizacin de la transcripcin, o codones end o stop: UAA, UAG y UGA.

ARN ribosomal: es el mas abundante ya que forma parte de los ribosomas.

En los eucariotas los ribosomas tienen una subunidad 40 S y una subunidad 60 S. Estos valores corresponden a las
constantes de sedimentacin que se producen cuando se ultracentrifugan estas estructuras.

40 s
ARN- 18 s

60 s
ARN 28 s y 5 s

El ribosoma posee una forma acanalada donde se inserta el ARN mensajero y luego la cadena polipeptdica que se
est formando.

Micro ARN y ARN de interferencia

La observacin del genoma permite deducir que su secuencia est presente y repetida por igual en todas
las clulas; sin embargo, no todos los tipos celulares expresan los mismos genes, ni an en las mismas clu-
las, en los mismos momentos. Esto pone de manifiesto que existe un sistema de regulacin gentica por el
cual solo algunos genes y en algunos momentos logran expresarse. Lo hacen a travs de factores de expre-
sin o represin que se unen a zonas especiales de los cidos nucleicos llamadas regiones reguladoras. Slo
algunos genes se debern expresar de acuerdo con precisas instrucciones en el momento oportuno, mien-
tras otros debern ser reprimidos o silenciados para lograr la funcin programada. Estos procesos en clulas
eucariotas son ms complejos que en procariotas, pero repiten un patrn bsico similar mediante, como
se expresara, unin de protenas a regiones especficas. Otro factor importante es la intervencin de los
procesos cromosmicos en la regulacin de la expresin gentica, que abri un amplio mbito y novedosos
trabajos en el campo de la epigentica. En las infecciones virales se haba notado un efecto represor general
por parte del interfern. En la dcada de 1990 sorprendi el descubrimiento de un sistema censor llamado
interferencia por RNA, iRNA,39 que opera tanto en plantas como animales. Este mecanismo es til para silen-
ciar genes en procedimientos de ingeniera gentica, pero a su vez resulta de atendible inters, interpretar
su verdadero rol en los organismos en los que acta.

Cuando se va a expresar un gen no permitido, el fenmeno de interferencia por RNA interviene modulando
negativamente esa expresin.

Promediando la dcada de 1990, se sospechaba, que los ARN antisentido (estructuras unicatenarias re-
versas que se unan por complementariedad a la hebra del mRNA), podran producir inactivacin o bloqueo
del flujo gentico, inactivndolo. Sin embargo, se haba notado que el RNA sentido (es decir, con la misma
secuencia), tambin era capaz de bloquear en algunos casos ese mecanismo1. No obstante ello, experimen-
39 Andrew Fire (Carnegie Inst- Washington.) y Craig Mello (Universidad de Massachustts).

180
 Bioqumica

tos realizados por Craig y Melo mostraron que la inyeccin de elevada cantidad tanto de RNA con sentido
como de RNA antisentido no daban resultados inhibitorios altamente eficientes. En cambio, contrariamen-
te a lo sospechado, la inyeccin de pequeas cantidades de RNA bicatenario eran suficientes para demos-
trar una importante accin inhibitoria. Trabajando dichos autores con el Caenoharbitis elegans, estudiaron
la funcionalidad del gen unc-22, relacionado con el sistema muscular de ese nematodo. La introduccin de
RNA monocatenario sentido y antisentido, apenas si producan alguna manifestacin visible en la funciona-
lidad muscular. Sin embargo, la introduccin de pequeas cantidades de RNA bicatenario para el gen unc-22
produca notorios espasmos musculares inmediatos. Se demostr as que se generaba una interferencia en
la expresin del gen especfico, no por las hebras monocatenarias, sino por un evidente mecanismo basa-
do en interferencia con RNA doble cadena.

Repitiendo la experiencia con otros genes, se lleg siempre a la conclusin de que se produca una interrup-
cin en el flujo gentico. Craig y Mello generalizaron el fenmeno bajo la definicin de Interferencia de
RNA40.

Otros estudios mostraron que cuando largas secuencias de RNA tienen secuencias que permiten su replega-
miento para originar estructuras bicatenarias, el fenmeno de interferencia se produce de inmediato.

En el proceso intervienen las enzimas RNA polimerasas III nominadas Dicer y Slicer. La primera, por hidrlisis
corta a las cadenas de RNA bicatenario en pequeos segmentes (21 a 23 nucletidos), que se denominan
siRNA (short interference: cortos de interferencia). La cadena antisentido se une a una protena para gene-
rar el Complejo silenciador inducido por RNA : RISC: RNA indiduceing silencing complex). El complejo se une
al mRNA por complementariedad, y entonces la enzima Slicer corta en dos al mRNA inactivndolo.

Los siRNA son estructuralmente muy semejantes a los micro RNA que cumplen funciones similares, pero
cuyos orgenes son diferentes: Mientras los siRNA proceden de las mismas regiones genmicas a las cuales
debe silenciar, los microRNA proceden de regiones genmicas destinadas a producir estas molculas re-
guladoras41. Los microRNA proceden de transcriptos de aproximadamente 60 a 70 nucletidos que sufren
escisin secuencial hasta los 22 nucletidos por las enzimas RNA polimerasas Dicer y Drosha. La comple-
mentariedad no es tan exacta como la de los siRNA, no produciendo en ese caso el corte del mRNA, pero
actuando por desadenilacin. Ver imagen a continuacin42

40 Nature,Volumen 391,1998, pag 806-811

41 Interferencia de ARN. Lau, N y Bartel,D. Investigacin y Ciencia #325. Pag.6-13. Octubre
2003.
42 Tomado de Cooper5. Edicin

181
 Luis E. Simes

Se estima la existencia de aproximadamente mil microRNA en los genomas de mamferos, que pueden reco-
nocer hasta 100 secuencias diferentes de mRNA. Esto le brinda una alta potencialidad biolgica, pudiendo
intervenir en procesos embrionario, inmunitario, inflamatorio, etc.

En sntesis, los miRNA muestran funciones regulatorias en la expresin gentica, cumpliendo su funcin
represiva sobre secuencias especficas de mRNA, del cual ocasionan su degradacin. Esta represin post
transcripcional ha sido demostrada en proceso fisiolgicos, pero tambin han evidenciado algn rol en pa-
tologas como las cardiovasculares, el cncer y la diabetes. Para su evaluacin, se ha comunicado presencia
en sangre, saliva orina y otros lquidos biolgicos, lo que permite su consideracin como probable marca-
dor de algunas patologas, o constelaciones patolgicas, como en el caso que nos ocupa del sndrome meta-
blico.

182
 Bioqumica

PARTE II

ANLISIS CLNICOS
TELMA BRICHINDICE

183
 Bioqumica

CAPITULO 7

FUNCIONES Y OBJETIVOS DEL LABORATORIO CLINICO

Objetivo del laboratorio clnico
El objetivo del Laboratorio Clnico es proporcionar informacin a travs de resultados confiables, seguros y oportu-
nos, para confirmar o descartar un diagnstico, establecer un pronstico, controlar la evolucin de un tratamiento,
colaborar en estudios epidemiolgicos, a travs de la aplicacin de procedimientos analticos.
Consideraciones funcionales
La organizacin del laboratorio depender de las necesidades de la institucin, si es pblica, privada, de la de-
manda de anlisis, de la poblacin de pacientes, si es un laboratorio de rutina o urgencias.
El avance tecnolgico permite trabajar con errores analticos muy bajos y se considera actualmente, a la Etapa
Pre analtica donde se encuentran con mayor frecuencia errores y, por lo tanto, donde se centran los procesos de
mejora de la calidad a travs de acciones correctivas y preventivas.
Las tendencias actuales se encaminan hacia laboratorios grandes con capacidad elevada de procesamiento de
muestras y diversidad de determinaciones analticas.
Organizacin
En el laboratorio se producen dos tipos de flujo: de material y de informacin. El flujo de material es fundamental
ya que determinar cmo se organiza el laboratorio. Las distancias son crticas para el movimiento de muestras y
personal. El flujo de informacin se realiza a travs de cableado entre los ordenadores y el soft de los equipos de
anlisis.
Las muestras pueden tener origen dentro del laboratorio, en el rea de extracciones, en reas de internacin, de
urgencias o guardia mdica o en centros de extraccin fuera de la institucin, por ello es de gran importancia el
proceso de transporte de muestras y bioseguridad, identificacin y rotulado del material , recepcin e ingreso al
SIL (Sistema Informtico del Laboratorio).
En la mayora de los laboratorios el Laboratorio de Urgencias se encuentra situado ediliciamente separado del de
rutina y se organiza adecundose a la demanda. El instrumental y el men de determinaciones permiten dar una
respuesta rpida al requerimiento mdico, en general dentro de la hora de recibida la muestra.
El Laboratorio General o de Planta est organizado de acuerdo a la dotacin de autoanalizadores que depender
de la cantidad de muestras y de la especializacin del laboratorio.
Tradicionalmente los laboratorios se han organizado en secciones pero la automatizacin conduce al laboratorio
a organizarse en reas instrumentales para evitar el fraccionamiento de muestras evitando as la propagacin de
errores. Las principales reas instrumentales de un laboratorio de rutina son:
Bioqumica clnica
rea Bioqumica automatizada: Se agrupan los autoanalizadores para las determinaciones
bioqumicas.
rea Inmunoanlisis automatizado: Autoanalizadores para Inmunoanalisis.
rea protenas. Nefelmetro automtico. Fraccionamiento de protenas.
rea dedicada a orinas: Anlisis fisicoqumico y microscopa para el estudio del sedimento urinario.
rea tcnicas manuales: tcnicas sin automatizar: Serologa de aglutinacin en placa.

185
 Luis E. Simes

Hematologa /Hemostasia
rea recuento y morfologa: Analizadores automticos y microscopa.
rea coagulacin: analizadores automticos de parmetros de hemostasia.
rea tcnicas especiales: Citoqumica, tcnicas manuales para fragilidad osmtica y deficiencias
enzimticas.
Microbiologa. Identificacin y pruebas de sensibilidad, anaerobios, parsitos, serologa automatizada
Inmunologa. Autoinmunidad. Inmunidad celular.
Biologa Molecular

ETAPAS DEL PROCESO DE LABORATORIO CLNICO

El proceso de atencin del laboratorio clnico se lo puede dividir en 3 etapas:
ETAPA PRE ANALITICA: Es el proceso que involucra todos las actividades desde que se genera la solicitud
mdica de anlisis hasta la obtencin de las muestras para su procesamiento analtico.
ETAPA ANALITICA: Es el proceso de laboratorio donde se aplican diferentes tcnicas de anlisis basados
en el comportamiento fsico qumico de los componentes de las muestras siguiendo un protocolo de pro-
cedimiento concreto.
Glosario
Muestra: parte representativa de la materia objeto de anlisis.
Alcuota: porcin o fraccin de la misma muestra.
Analito: especie qumica objeto del anlisis.
Matriz de la muestra: es el conjunto de todas aquellas especies qumicas que acompaan al
analito en la muestra.
Tcnica analtica: es el medio utilizado para llevar a cabo el anlisis qumico.
Mtodo analtico: es un concepto ms amplio pues no slo incluye a la o las tcnicas analticas
empleadas en un anlisis sino tambin todas las operaciones implicadas hasta la consecucin del
resultado final. Son aplicaciones de las tcnicas, en casos determinados, con parmetros y proto-
colos concretos. Su nombre hace referencia a:
Alguna caracterstica analtica: mtodo del punto final, mtodos cinticos, mtodos colorim-
tricos, mtodos enzimticos.
Alguno de los reactivos usados: mtodo de la glucosa-oxidasa.
A la persona que optimiz el mtodo: mtodo de Biuret, mtodo de Jaff, etc.
ETAPA POST ANALITICA: Involucra las actividades desde la transcripcin de los resultados analticos hasta
la entrega del informe al paciente.

EVALUACIN Y SELECCIN DE MTODOS

El objetivo es montar una metodologa que satisfaga las expectativas planificadas por el laboratorio y conduzca a
resultados clnicamente tiles.
La seleccin de mtodos comprende los aspectos siguientes:

Requerimientos del laboratorio

186
 Bioqumica

1. Ajuste a las necesidades planificadas.

2. Volmenes de muestra.

3. Demanda del analito.

4. Tiempo de respuesta (Rutina o Planta)

5. Situacin edilicia. Espacio para el instrumento y almacenamiento de los reactivos.

6. Disponibilidad de personal capacitado.

7. Impacto ambiental.

8. Costo.

Caractersticas de la metodologa a considerar

1. Sensibilidad analtica.

2. Especificidad. Interferencias

3. Intervalo de referencia de acuerdo a la poblacin atendida.

4. Precisin: Reproductibilidad.

5. Exactitud.

6. Tiempo y tipo de medicin.

7. Linealidad

8. Tipo de tecnologa

Control de calidad

Control de calidad interno (CCI)

El control de calidad se basa en la manipulacin de datos estadsticos que se obtienen de la repeticin de los en-
sayos con el objetivo de a asegurar la confiabilidad de los resultados.

Control de calidad externo (CCE)

Tiene como objetivo principal la comparacin de los resultados analticos propios con los de otros Laboratorios
participantes que intervienen en Programas Interlaboratorio nacionales o internacionales.

187
 Luis E. Simes

TECNICAS DE ANALISIS DE LABORATORIO

I. TECNICAS FOTOMETRICAS
Introduccin
En el anlisis de muestras en el laboratorio clnico, se aplican tcnicas para la determinacin de diferentes
especies biolgicas basadas en su mayora en reacciones qumicas o inmunolgicas. En
la mayora de las oportunidades no slo es necesario el anlisis cualitativo sino conocer su
concentracin en el fluido donde se encuentran. Se aprovecha el comportamiento fsico qumico
del producto de esa reaccin para poder transformarlo en una seal medible. En el laboratorio
clnico la gran mayora de las tcnicas se desarrollan a partir de las propiedades que tienen estas
molculas de interaccionar con la luz.
FOTOMETRIA
La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que se propaga en forma de ondas. La luz est
formada por fotones que son paquetes discontinuos de Energa (E). La E de un fotn (se mide en Ergios) y depende
de la frecuencia y de la longitud de onda.

Longitud de onda (l): es la distancia entre dos mximos de

un ciclo completo del mov- imiento ondulatorio. Se expresa,
en unidades S.I. en nan- metros (nm). Fig.1

Frecuencia (n): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud de onda. Su frmula es: n = c/l, y se
mide en ciclos por segundo o hertzios. Fig.2

El espectro de radiacin electromagntica se divide en varias regiones, las que nos interesan a los efectos
prcticos son:
Regin Ultravioleta: l = 10-380 nm
Regin Visible: l = 380-780 nm
Regin Infrarroja: l = 780-30.000 nm

188
 Bioqumica

En la regin visible, la luz se descompone en colores. La luz blanca contiene todo el espectro de longitudes de
onda. El color que podemos observar de los distintos objetos se debe a la interaccin de la radiacin policromtica
(luz blanca) con ellos. Un cuerpo est formada por partculas que absorben radiaciones de determinada longitud
de onda y no otras, que son las que refleja y pueden verse, denominndose color complementario. Por ejemplo, si
una solucin absorbe luz entre 555 y 600 nm (amarillo), tendr un color azul, por tanto, el azul es el color comple-
mentario del amarillo.
En consecuencia, una solucin deber ser iluminada, para las mediciones fotomtricas, con un haz de luz del color
que se absorbe y no por el que puede observar el ojo humano.
Interaccin entre luz y materia
a) Fenmeno de absorcin
Se basa en transiciones electrnicas entre orbitales de los tomos de una especie qumica.
Cuando un tomo que se encuentra en estado de reposo interacciona con un haz de luz, absorbe la radiacin de
la frecuencia apropiada, y sus electrones de los orbitales ms exteriores pasan a un estado excitado, de energa
superior. La longitud de onda de la radiacin absorbida es inversamente proporcional a la energa de absorcin.
La partcula en estado excitado tiende a volver de forma espontnea a su estado de reposo desprendiendo la E
absorbida en forma de calor.
Las molculas que tienen la propiedad de absorber la luz son coloreadas a la longitud de onda de la luz visible.
Estas especies reciben el nombre de cromforos y su color est relacionado con los dobles enlaces entre carbonos,
oxigeno, nitrgeno.
Cada molcula tiene un determinado espectro de absorcin. Si realizamos un barrido espectral y representa-
mos grficamente la intensidad de la absorcin de la radiacin en funcin de la longitud de onda, obtenemos una
huella dactilar del elemento, ya que cada uno presenta un pico mximo especfico a una determinada l. Es
importante trabajar a la longitud de onda a la que la sustancia estudiada absorbe la mayor cantidad de luz.
b) Fenmeno de emisin
Algunos compuestos, al interaccionar con un fotn de luz, pasan a un estado excitado y cuando vuelven al estado
fundamental producen emisin de energa radiante (luz). En este caso, lo que se mide es la energa radiante pro-
ducida. En este fenmeno se basa el fundamento de las tcnicas de Fotometra de llama y Fluorescencia.

Principios bsicos de la espectroscopia de absorcin

La espectroscopia de absorcin UV-visible es una tcnica analtica muy utilizada en el laboratorio clnico que per-
mite medir la cantidad de luz absorbida por una especie qumica a una longitud de onda determinada. Esto nos
permite identificar una sustancia (anlisis cualitativo) o determinar su concentracin (anlisis cuantitativo)
Cuando un haz de luz de intensidad I0 incide sobre una cubeta cuadrada que contiene una solucin coloreada
que absorbe luz a una determinada , se produce en la solucin un proceso de absorcin, y el haz de luz que sale
despus de atravesar la cubeta tiene una intensidad menor, It.
Se llama Transmitancia (T) a la fraccin de luz incidente (I0) que es transmitida (I t) en solucin.

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 Luis E. Simes

En la prctica se emplea, en lugar del valor de T el de absorbancia (A), ya que la relacin entre la concentracin de
una solucin y su transmitancia es inversa y logartmica, mientras que la relacin entre la absorbancia y concen-
tracin es directamente proporcional

A = - log T = log I0 / It
Segn la Ley de Lamber Beer la absorbancia (A) de una solucin es directamente proporcional a la concentracin
del soluto en la solucin y a la longitud del paso de la luz (cubeta de medicin) de acuerdo a la siguiente expresin
matemtica:

A = e . l. c
A: absorbancia. No tiene unidades.
e: Coeficiente de extincin molar o coeficiente de absorcin. Es constante para un cromgeno dado, siem-
pre que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, etc. Sus unidades son 1/ (mol/
cm).
l: longitud de paso de la luz, en cm.
c: concentracin del cromgeno. Se mide en mol/L.
Cul es la aplicacin prctica de estos conceptos en el trabajo diario en el laboratorio?
Podemos averiguar la concentracin de una sustancia en una solucin basndose en la relacin lineal entre ab-
sorbancia y concentracin.
Para poder relacionar entonces, la seal que medimos con la concentracin del analito debemos calcular un factor
o constante de proporcionalidad.
Para ello se confecciona una curva de calibracin que relaciona estas dos variables:
Una variable independiente que es una concentracin conocida de patrn o calibrador-eje x
Una variable dependiente que es la Absorbancia correspondiente a esa concentracinejey
La curva de calibracin debe prepararse con 5 concentraciones de calibradores diferentes que abarquen todo el
rango de concentraciones de inters clnico. Se realiza cada punto por duplicado.
El calibrador es una solucin de la sustancia de inters, de concentracin establecida por un mtodo de referencia
o definitivo.
Se preparan las diluciones del calibrador a partir de una solucin concentrada o pueden adquirirse comercial-
mente un juego de 5 calibradores de las concentraciones deseadas.
Se procesan segn la metodologa que se ha elegido.
Se miden las absorbancias correspondientes para cada concentracin.
Se grafica en papel milimetrado o se utiliza el programa Excel.
Si el trazado obtenido es lineal se puede utilizar un factor de calibracin que relaciona la absorbancia con la con-
centracin. De tal forma que cada vez que se obtenga un valor de absorbancia para una muestra desconocida
se pueda multiplicar por ese factor para obtener la concentracin correspondiente. Esto slo es vlido para un
sistema analtico estable.
Si el trazado no sigue una funcin lineal se deber usa la curva cada vez que se necesite calcular una concentracin.

190
 Bioqumica

Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer. La
lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsa del analito. En
esta situacin particular se resuelve diluyendo la muestra para que el dato obtenido caiga en el rango de lineali-
dad.
Curva de Calibracin ideal
ABS: f (cc)

TECNICAS ANALITICAS FOTOMETRICAS

Espectrofotometra: Las tcnicas utilizadas en espectrofotometra tienen su base en los siguientes fenmenos:
Absorcin
Emisin
Dispersin
Luminiscencia-fluorescencia.
Espectrofotometra de absorcin molecular UV- Visible
La espectrofotometra es una tcnica de medicin que permite el anlisis espectral y la medicin de magnitudes
fotomtricas relacionadas con las propiedades de la materia.
El espectrofotmetro es un instrumento que mide la intensidad de la luz que pasa a travs de un medio a una lon-
gitud de onda especfica. Es decir, se puede seleccionar una radiacin monocromtica caracterstica del espcimen
a medir, a partir de la radiacin emitida por una fuente de luz.
En la espectrofotometra de absorcin UV-visible se utilizan radiaciones del espectro electromagntico de la zona
UV ( 80 a 400 nm), principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800 nm. En el rango de
concentraciones que responde a la ley de Lambert y Beer permite el anlisis cuantitativo de una sustancia.
Podemos, entonces, determinar en el laboratorio la concentracin de un soluto coloreado, resultado de un m-
todo analtico, midiendo la absorcin de la luz a una longitud de onda especfica.
Componentes del espectrofotmetro
1. Fuente de luz: proporciona la energa radiante en forma de luz visible o UV. Existen diferentes tipos de lmparas:
Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del espectro visible y el ultravio-
leta prximo. Son fuentes de un espectro continuo de energa radiante entre 360-950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor duracin y emiten energa radiante de
mayor intensidad.
Lmparas de Hidrgeno y Deuterio: producen un espectro continuo en la regin ultravioleta entre 220-
360 nm.

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 Luis E. Simes

2. Rendija de entrada: tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa.

3. Monocromadores. Pueden ser:
Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que permite el paso de la luz. Ej. De vidrio
para trabajar en el espectro visible o cuarzo para trabajar en el ultravioleta lejano.
Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas situadas a distancias iguales entre s y
son hendiduras sobre un vidrio o una superficie metlica. Cada una de estas hendiduras se comporta
como un pequeo prisma.
4. Rendija de salida: Orienta la luz hacia la cubeta, tiene como funcin impedir que la luz difusa interfiera en la
lectura.

5. Cubeta: Recipiente de vidrio o plstico donde se coloca la muestra para la medicin. En general se utilizan
cubetas de bordes paralelos aunque existen diferentes tipos y variedades. En algunos casos existen dispositivos
termostatizadores que mantienen las cubetas a la temperatura adecuada para la medicin, importantes cuando
se determinan actividades enzimticas o se emplean enzimas para realizar las mediciones. Es importante que las
cubetas se mantengan limpias y sin rayones para evitar errores en la medida; no se deben tocar con los dedos las
caras de la cubeta por las que haya de incidir el rayo de luz.
6. Detector. Puede ser de dos tipos:
Fotoclulas o clulas fotovoltaicas:
Est compuesto por un semiconductor: lmina de Cobre sobre la que se extiende una capa de selenio. Sobre el
semiconductor hay una capa de metal transparente que sirve de electrodo. La luz incide sobre el Selenio y ste de-
sprende electrones, que pasan a la placa de Cobre originando una diferencia de potencial. El conjunto se conecta
a un ampermetro que seala el paso de corriente .Se puede hacer una comparacin con un panel solar.
Son resistentes, econmicas, sensibles desde el ultravioleta hasta los 1.000 nm. de longitud de onda. La desventaja
que poseen es el efecto fatiga, es decir, que presentan una subida inicial de corriente, que luego decrece pro-
gresivamente hasta el equilibrio. Por eso hay que esperar entre 30-60 segundos entre una lectura y otra.
Fototubos multiplicadores:
Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un ctodo que emite electrones de forma proporcional a la
Energa que incide sobre l. Tiene un nodo que recoge los electrones. Tiene un efecto amplificador en cientos de
veces. Por lo tanto tienen alta sensibilidad y tiempo de respuesta rpida.
7. Sistema de medicin: son sistemas de lectura de la energa elctrica que recoge el detector y que puede ser
lectura directa o puede ser amplificada de acuerdo al detector. La seal elctrica analgica se transforma medi-
ante un microprocesador en seal digital, la cual por medio de microprocesadores, permite clculos directos de
concentracin con arreglo a factores de calibracin prefijados y lectura contra estndares, o curvas de calibracin
en la memoria.

https://www.youtube.com/watch?feature=player_detailpage&v=ILeKva55dWY

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 Bioqumica

Espectrometra de absorcin atmica

Esta tcnica mide la absorcin de luz a longitudes de onda muy definidas por parte de tomos vaporizados en
estado de reposo.
Las bandas de absorcin son muy estrechas, por lo que el espectro total de absorcin de un tomo se lo denomina
espectro de lneas.
El espcimen a investigar es aspirado por un capilar donde se nebuliza, pasa al estado de vapor en una llama,
donde se atomiza (es disociado de sus enlaces qumicos) y, por ganancia de electrones, se sita en un estado
atmico basal no excitado ni ionizado.
En este estado basal, el tomo absorbe la radiacin emitida por una fuente radiante consistente en una lmpara de
ctodo hueco, construida del metal a estudiar, y que emite el espectro de lneas caracterstico de ste.
Por lo tanto, la tcnica se caracteriza por la medida, por absorcin atmica, de la cantidad de luz, a la longitud de
onda seleccionada, que es absorbida cuando la luz pasa a travs de una nube atmica.
Para disociar la muestra en tomos se puede utilizar una llama de bajo poder calorfico o un horno de grafito.
Con ayuda de un monocromador, se selecciona la longitud de onda de inters, y se mide la disminucin de la luz
incidente a su paso por la nube atmica, consecuencia de las interacciones de los fotones con los tomos en es-
tado fundamental que se encuentran en el vapor atmico.
Un detector consistente en un fotomultiplicador transforma la seal lumnica en elctrica.
La Ley de Lambert-Beer es vlida para esta tcnica, al relacionar la concentracin de tomos en la llama con la
absorcin de la luz. De esta manera, se puede efectuar una determinacin cuantitativa del analito presente, midi-
endo la cantidad de luz absorbida.
Los requisitos que debe satisfacer un elemento para que pueda ser cuantificado mediante espectrometra de
absorcin son: que el elemento pueda ser vaporizado en tomos y que la longitud de onda en que se produce la
absorcin est comprendida en el intervalo de 200 a 800 nm
Utilidad en el laboratorio clnico
Se utiliza especialmente para el diagnstico de enfermedades profesionales por exposicin a ciertos elementos
como plomo, cadmio, cromo, manganeso, oro, talio.
En la determinacin de metales alcalinos (sodio, potasio y litio) no es de utilidad.

Espectrofotometra de emisin
Fotometra de llama
La fotometra de llama se basa en el fenmeno de emisin de luz. En el laboratorio clnico se utiliza para la deter-
minacin de elementos alcalinos como Sodio, Litio y Potasio en muestras biolgicas.
Cuando a tomo en estado de reposo se lo somete a la energa calorfica de una llama de intensidad controlada,
se produce una excitacin de sus electrones, pasando stos a niveles superiores de energa. Al volver a su estado
inicial emiten el exceso de energa en forma de luz de distintas longitudes de onda de acuerdo al espectro de ab-
sorcin de cada tomo.

193
 Luis E. Simes

Los metales alcalinos son los ms fciles de excitar en la llama de un mechero ordinario de laboratorio. Lo podem-
os observar cuando ponemos una solucin de estos metales en contacto con una llama, cada uno da un color
caracterstico y distinto a esa llama (litio = rojo, sodio = amarillo, potasio = violeta). Las longitudes de onda que
corresponden a estos colores son las empleadas para la determinacin de los iones correspondientes.
La intensidad de la energa luminosa es directamente proporcional al nmero de tomos que emiten esa energa,
que ser directamente proporcional a la concentracin del ion de la muestra.
El equipo est compuesto por un sistema fotomtrico: monocromador, detector y medidor. Tiene incorporado
tambin un Atomizador y llama que tiene como funcin nebulizar la solucin problema en pequeas gotas, para
que los tomos absorban la energa trmica de la llama y se exciten. Suelen emplearse gas natural, acetileno o
propano con aire u oxgeno.
Es un mtodo muy sensible, de referencia, pero de poca utilidad prctica, en la actualidad es reemplazada por
otras tecnologas incorporadas en los autoanalizadores.

Fluorometra
Dentro del grupo de fenmenos electromagnticos llamados luminiscentes se encuentran:
Fluorescencia
Fosforescencia
Quimioluminiscencia.
La Fluorometra se basa en la propiedad de algunas sustancias de absorber la radiacin electromagntica en una
longitud de onda (espectro de excitacin) y de emitirla de inmediato, en forma de fotones, en otra (espectro de
emisin). El espectro de emisin es una cualidad intrnseca de la sustancia y la intensidad de la emisin es pro-
porcional a la concentracin del componente en la solucin. La energa de la radiacin emitida es menor y por
tanto, la longitud de onda es mayor que la de la radiacin absorbida. Se mide la diferencia o aumento entre estas
2 longitudes de onda obteniendose mejores resultados en compuestos que tienen grandes diferencias entre las 2
longitudes de onda de excitacin y de emisin. La fluorescencia slo es causada por radiacin UV.
Fluorforo es un tomo o molcula que produce fluorescencia.
Los fluorforos se pueden dividir en dos clases: intrnsecos y extrnsecos.
Intrnsecos: Son cofactores de las enzimas. El NADH es altamente fluorescente, con un mximo de emis-
in y absorcin a 340 y 460 nm, respectivamente.
Extrnsecos: Se agregan a la mezcla de reaccin para generar fluorescencia en una reaccin qumica o en
pruebas inmunolgicas. Son la fluorescena, la rodamina, Acridina, Bromuro de Etidio entre otras numero-
sas sustancias.

194
 Bioqumica

Utilidad en anlisis clnicos:

Son procedimientos de gran sensibilidad metrolgica y bajo lmite de deteccin, por lo tanto se utilizan en ensayos
para determinar sustancias que estn en muy bajas concentraciones en muestras biolgicas como: vitaminas,
hormonas, frmacos.
La utilizacin de marcadores fluorescentes extrnsecos en inmunoanlisis (fluoroinmunoanlisis con Acs monoclo-
nales marcados) es utilizado con grandes ventajas respecto a otras tecnologas.
Para la medida de la fluorescencia se emplean fluormetros o espectrofluormetros; la diferencia entre ellos es el
sistema de seleccin de la de excitacin y de emisin:
Fluormetro: emplea filtros interferenciales o de vidrio
Espectrofluormetro: emplea prismas o redes de difraccin.
Los componentes bsicos de estos aparatos son:

Fuente de luz de excitacin

Rendijas de excitacin y de emisin
Selector de la de excitacin
Compartimento para la muestra: cubeta
Selector de la de emisin
Detector
Registro

Espectroscopia de dispersin
Estas tcnicas miden la reduccin de la intensidad de la luz cuando pasa a travs de una suspensin de partculas
presentes en una muestra y cuantifica la luz residual trasmitida. La muestra a analizar debe estar compuesta, en-
tonces, por partculas no transparentes en el seno de un lquido: precipitados, suspensiones coloidales, etc.
Cuando un rayo de luz impacta en su trayecto con una partcula en suspensin, una parte de la luz es reflejada, otra
absorbida, otra desviada y otra trasmitida.
La dispersin luminosa depende de la intensidad de la radiacin, del dimetro y peso molecular de la partcula y de
la longitud de onda incidente. Todos estos factores se relacionan por medio de frmulas matemticas complejas.
A los efectos prcticos nos interesa conocer que intensidad de la dispersin es:
-Directamente proporcional al peso molecular de la partcula y a la concentracin de las partculas.
- Inversamente proporcional a la longitud de onda de la luz incidente.
Turbidimetra
Mide la intensidad de luz transmitida luego de que un haz de luz la atraviesa.
La intensidad de luz obstaculizada por las partculas en la muestra es directamente proporcional a la concentracin
de partculas, (siguiendo la ley de Lambert-Beer) en un intervalo limitado de concentraciones.
Esta intensidad transmitida se mide en un espectrofotmetro normal de absorcin molecular.
Generalmente se hacen mediciones entre 300-380 nm y entre 500-650 nm.
Aplicaciones en el laboratorio clnico
Determinacin de protenas totales en orina y LCR.
Determinacin de ciertas protenas plasmticas especficas mediante mtodos de inmunoturbidimetra.(Ej. Trans-
ferrina)

195
 Luis E. Simes

En bacteriologa para el recuento de colonias en cultivos.

En hemostasia (deteccin formacin cogulo, etc.)
Nefelometria
La nefelometra mide la luz desviada en diferentes ngulos (diferente al incidente) por las partculas presentes en
la suspensin. El detector est situado en un ngulo entre 15 y 90.
La sensibilidad de esta medicin est limitada por la exactitud y sensibilidad del instrumento de medicin y de-
pende de la capacidad de detectar pequeos cambios en la intensidad de la luz. La lectura se realiza a bajas longi-
tud de onda.
El instrumento usado en la nefelometra es el nefelmetro
Aplicaciones clnicas
Determinacin de protenas plasmticas especficas.( Ej. alfa 1 antitripsina)

Reflectometra
Permite medir por reflexin de la luz en una determinada longitud de onda los cambios de coloracin en una tira
reactiva, por ejemplo: Tiras reactivas para determinaciones qumicas en orinas, Qumica seca)
En la tira (soporte slido) se encuentran componentes de reaccin qumica estabilizados (indicadores, enzimas)
por pre tratamiento y secado de las respectivas soluciones.
Los componentes estructurales de la tira son: un soporte de material sinttico con un cdigo magntico en un
extremo, sobre el soporte del material sinttico, un material de transporte del plasma, una serie de capas que
contienen material separador (por lo general, fibra de vidrio) y reactivos, recubierto todo con una capa protectora.
La muestra de sangre es depositada sobre el material separador, que retiene los eritrocitos y permite la difusin
del plasma hacia el material de transporte. De aqu, asciende por capilaridad a travs de las capas embebidas con
los reactivos, en las cuales se lleva a cabo la reaccin.
Los tiempos de preincubacin y de reaccin, as como la temperatura necesaria, son controlados por el equipo.
Algunos sistemas poseen dos compartimientos en la tira, uno para la muestra, y otro para un calibrador acuoso.
Algunos sistemas solo pueden realizar determinaciones colorimtricas, mientras que otros pueden llevar a cabo
anlisis enzimticos.
El reflectmetro est constituido por fuente de luz (esfera de Ulbricht ) El rayo emitido incide sobre el rea de
lectura de la tira y es reflejado por sta.
Los detectores comparan la intensidad de la luz emitida por el diodo emisor con la de la luz reflejada. Mientras
mayor sea esta ltima, menor ser la concentracin del analito.

196
 Bioqumica

Fenmeno de reflexin de la luz

MTODOS FOTOMTRICOS DE ANLISIS.

Cuantificacin de magnitudes biolgicas

Las metodologas de anlisis utilizadas en el laboratorio clnico se basan, en su gran mayora, en reacciones qumi-
cas para las cuales la muestra biolgica se mezcla con reactivos, generalmente comerciales, producindose cam-
bios apreciables que se detectan por tcnicas fotomtricas. Estos cambios pueden ser la deteccin de presencia,
concentracin, ausencia o actividad.
La determinacin de la concentracin de un compuesto se puede medir por:
Reaccin con reactivos adecuados, variando la estructura del componente inicial en un producto que in-
teracciona con la luz produciendo una modificacin en su trayecto o intensidad.
Interaccin con otra sustancia que experimenta un cambio en sus propiedades de interaccin con la luz.
Los ensayos fotomtricos se pueden clasificar:
Segn el desarrollo de color:
Punto final
Cinticos
Segn alguna caracterstica de la reaccin
Enzimticos
Colorimtricos

Mtodos de punto final o de equilibrio

Se incuba la muestra y el reactivo durante un tiempo y a una temperatura estandarizada para que se complete
totalmente la reaccin hasta llegar a un equilibrio donde no se produce ms desarrollo de color.
En las determinaciones con reactivos comerciales suele haber exceso de reactivos para asegurar que el analito
reaccione en su totalidad en las condiciones de T, pH, t, indicadas en la metdica.
Reacciones acopladas:

Cuando la reaccin qumica que se produce entre el analito a determinar y el reactivo no produce cambios med-
ibles, se utiliza una reaccin acoplada a la anterior capaz de producir un compuesto que cambie sus propiedades
fsicas y sea susceptible de ser medido.

Reaccin Auxiliar a la que se utiliza para transformar la sustancia a determinar.

197
 Luis E. Simes

Reaccin Indicadora a la que se utiliza para la medida fotomtrica.

Ambas reacciones se llevan a cabo en la misma mezcla de ensayo y se dice que estn acopladas

A +B C + D (Reaccin auxiliar)

D + Y W+ R (Reaccin indicadora)

Mtodos cinticos

No se mide un producto final de reaccin, sino la velocidad en que se desarrolla la reaccin antes que sta con-
cluya.

En estas determinaciones, la absorbancia no es directamente proporcional a la concentracin del parmetro que

se investiga: Es la variacin de la absorbancia durante una unidad de tiempo establecida, lo que es proporcional a
la concentracin y/o actividad del espcimen.

Esto es debido a que la presencia del espcimen en la muestra va a dar lugar a la aparicin o desaparicin de sus-
tancias capaces de absorber la radiacin a la de medida.

Generalmente se toma el minuto como unidad de tiempo de medida de la variacin de la Absorbancia.

Se puede aplicar tambin en este caso la Ley de Beer:

Abs = . b . c ( : Diferencia)

Abs/min = . b . c

c = Abs/min.

. b

c = Abs/min. F

Se puede medir la cantidad de sustancia no transformado la cantidad de producto formado.

A + B C + D

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 Bioqumica

Mtodos colorimtricos

Son las reacciones analticas que se miden empleando longitudes de onda dentro del espectro visible.

La mayora de las sustancias no son coloreadas y por tanto no absorben luz en la regin UV-visible debido a que no
tienen grupos cromforos en su estructura qumica.

Entonces, debe realizarse alguna estrategia con tal de poder analizar espectrofotomtricamente estas sustancias.
La estrategia radica en hacer reaccionar la sustancia no coloreada con un reactivo especfico, de forma que el
producto que se obtenga sea coloreado y ahora s absorba en el UV-visible, de esta forma podr ser ledo en el
espectrofotmetro.

La absorbancia del producto obtenido es proporcional a la concentracin de la sustancia en la muestra.

Por lo general son reacciones colorimtricas a punto final, pero tambin pueden ser colorimtricas y cinticas, y en
esta situacin lo que se medir es la diferencia de absorbancia del color en una unidad de tiempo.
Mtodos enzimticos
Son aquellos mtodos analticos en las que alguno de los reactivos son enzimas; no tienen por qu ser mtodos
donde lo que se mida sean actividades enzimticas. El enzima aadido como parte de los reactivos al unirse al
parmetro desencadena una reaccin que permite su determinacin bien por aparicin de un compuesto col-
oreado (reaccin a punto final), bien por variacin de la absorbancia por unidad de tiempo, etc.
Tcnica enzimtico-colorimtrica: consiste en acoplar una reaccin enzimtica al mtodo, de forma que
la sustancia problema no coloreada es sustrato de un enzima especfica. Esta enzima transforma la sus-
tancia problema en un producto coloreado que absorbe en el UV-visible, de forma que pueda leerse en el
espectrofotmetro.
La diferencia respecto a una tcnica colorimtrica es que no se produce una reaccin qumica con la sus-
tancia problema, sino una reaccin enzimtica.
A continuacin se describe como ejemplo un mtodo para la determinacin de cido rico, donde
se observa el acoplamiento de dos reacciones enzimticas.
Ejemplo: REACCIN ENZIMTICA COLORIMETRICA-ACOPLADA-PUNTO FINAL

(E URICASA)

1. ACIDO URICO+ 2H2O +O2 ALANTONA + CO2+H2O2

(E.PEROXIDASA)

2. 2H2O2 + 4 AMINO FENAZONA QUINONA DIIMINA+4H2O

Muestra: cido rico

Reactivos: Enzimas Uricasa y Peroxidasa

Producto intermedio: H2O2

Producto final: Complejo coloreado Quinona diimina

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 Luis E. Simes

AUTOMATIZACIN
Autoanalizadores
El funcionamiento de los autoanalizadores tiene en el mismo fundamento que el de los espectrofotmetros manu-
ales.
El trmino automatizacin se aplica a aquellos procesos donde el instrumento lleva a cabo una serie de tests con
un mnimo de intervencin del personal tcnico. Se debera hablar se mecanizacin y no de automatizacin, ya que
el programa informtico es comandado por el personal tcnico.
Ventajas
Elimina el error humano por fatiga en etapas repetitivas del anlisis
Mejor precisin y la exactitud de los resultados
Velocidad
Archivo de resultados en el soft.
Trazabilidad de la muestra
Etapas del proceso de automatizacin
Identificacin de la muestra
Sistemas de carga de la muestra
Sistemas de dispensacin de la muestra
Sistema de carga y dispensacin de los reactivos
Sistema de mezcla de reactivos con la muestra
Sistema de incubacin
Cubetas de reaccin
Sistema de deteccin
Anlisis de datos.
Interfase con SIL
Identificacin de la muestra: Hay dos sistemas:
Directo: Marcado electrnico de muestras por cdigos de barra.
Indirecto: Carga manual La muestra se relaciona con la posicin que ocupa en una secuencia analtica
segn indicar una lista de trabajo previamente realizada.
Sistema de carga de la muestra
Se suelen utilizar copas o cubetas de plstico descartables cuya forma y tamao depende del tipo del analizador,
aunque se sugiere, si existe la posibilidad, de utilizar tubos primarios para minimizar errores.
Se pueden colocar en bandejas circulares o en cadenas transportadoras.(Racks)
Sistema de dispensacin de muestras
Actualmente se utilizan analizadores de flujo discretos en los cuales la muestra es aspirada por una aguja o jeringa
y es colocada en una cubeta de reaccin, junto con el reactivo. Las jeringas permiten la aspiracin de muestra o
reactivo por un sistema de bomba hidroneumtica que permite tomar volmenes variables y adaptarse a la diver-
sidad de determinaciones que se realizan en un mismo equipo.

200
 Bioqumica

Sistema de reactivos con la muestra

Tipos de Reactivos:
Reactivos lquidos Son los ms empleados. Son reactivos en estado lquido que se adquieren de esta forma
o liofilizados que se reconstituyen con agua o con buffers (tampones). Se manejan en contenedores de
vidrio o plstico o casettes cerrados.
Qumica seca
Sistema de mezcla de reactivos y muestra
La mezcla tiene lugar en las cubetas de reaccin. El mezclado se puede hacer por distintos mecanismos:
Por movimientos rotatorios de los contenedores
Mediante agitadores magnticos
Sistemas de incubacin
La incubacin pretende que la reaccin tenga lugar en un determinado tiempo y a una determinada temperatura.
La temperatura se puede realizar por baos de agua aire caliente a temperatura controlada. En estos baos se
encuentran sumergidas las cubetas de reaccin.
Cubetas de reaccin y lectura
La lectura se realiza en las mismas cubetas de reaccin.
Sistema de deteccin
El sistema de deteccin ms frecuente es la espectrofotometra de absorcin molecular, tambin se pueden usar
para reacciones turbidimtricas. Existen autoanalizadores para Qumica seca, electroquimioluminiscencia, conta-
dores de partculas (Hematologa)
Anlisis de datos

El detector crea una seal que se transforma en digital y transforma estos datos en unidades de concentracin a
partir de curvas de calibracin instaladas en el soft.

Interfase de comunicacin con el Sistema Informtico del Laboratorio

Se realiza a travs de un sistema uni o bidireccional, en batch (se envan resultados a requerimiento) o host querry
(los resultados pasan automticamente al SIL para validarse)

201
 Bioqumica

CAPITULO 8

TECNICAS ELECTROQUIMICAS
Las tcnicas electroqumicas miden la corriente elctrica o el voltaje generado por la actividad de iones presentes
en una muestra.
Las ms utilizadas en el laboratorio clnico son la potenciometra y la amperometra, aplicadas a la medida de
electrolitos, la determinacin del pH y presiones parciales de oxgeno y dixido de carbono.
POTENCIOMETRIA
La potenciometra sigue principios fisicoqumicos determinados por la ecuacin de Nernst, segn la cual el
potencial medido es proporcional a la actividad del ion en la muestra. Lo que se obtiene de la medicin es la
actividad, que se relaciona con la concentracin por un factor llamado coeficiente de actividad, ai = fi x ci.
Las tcnicas potenciomtricas se basan en la medida del potencial elctrico entre los dos electrodos de una clula
electroqumica.
Una clula electroqumica est formada por:

dos conductores llamados electrodos, cada uno sumergido en una disolucin adecuada de electrolito

un puente salino inerte para que circula la corriente elctrica

un potencimetro que mide la diferencia de potencial generada

Cuando un metal se sumerge en una disolucin de sus propios iones, los tomos del metal tienden a pasar a la
disolucin como iones liberando electrones (reaccin de oxidacin). La lmina de metal introducida en la solucin
se llama electrodo (concretamente nodo), el sistema completo se llama semiclula.
Mo M+ + e-
Con algunos metales ocurre el proceso contrario, los iones metlicos de la disolucin toman electrones (reaccin
de reduccin) y pasan a tomos neutros que se depositan en el electrodo que recibe el nombre de ctodo.
M+ + e Mo
Una clula electroqumica est formada por dos semiclulas, una con el ctodo y otra con el nodo. As, en la c-
lula electroqumica el exceso de electrones del nodo se dirige hacia el ctodo, generando una corriente elctrica.
Los mtodos electroqumicos se basan este principio utilizando una clula electroqumica con dos semiclulas
denominadas una, electrodo indicador y la otra electrodo de referencia.
El electrodo de referencia es una semiclula de potencial conocido y constante, generalmente el ctodo. El voltaje
del electrodo indicador responde proporcionalmente a la concentracin del electrolito de inters. La diferencia de
potencial entre ambos es proporcional a la concentracin del electrolito al que es sensible el electrodo de refer-
encia. (Ej. Electrodos de referencia: Electrodo de hidrogeno, electrodo de calomelanos, electrodo de plata-cloruro
de plata)

203
 Luis E. Simes

Electrodos ion selectivo:

Los Electrodos Ion Selectivo (ISE) son electrodos indicadores con un mecanismo de seleccin asociado a una
membrana que los hace sensibles slo a variaciones de potencial debidas a la concentracin de un determinado
ion a ambos lados de la membrana.
Aunque no es exacto, se puede decir que la membrana ISE es permeable frente a un ion concreto. Se encuentra
entre dos disoluciones de diferente concentracin: una de las disoluciones es una solucin interna con una con-
centracin fija del ion a medir y la otra solucin es la muestra problema. El ion se une a la cara de la membrana en
la que la concentracin es menor y se libera en la cara contraria generando un potencial.
Los principales tipos de ISE son:

Electrodos de vidrio: contienen puntos aninicos que atraen y fijan determinados cationes, cambiando la
composicin del vidrio se consigue variar la selectividad. Ej. utilizado para medir el pH.

Electrodos de membranas cristalinas: existen materiales que contienen huecos catinicos para acomodar
aniones de tamao y carga adecuados.

Electrodos de membrana lquida: membrana con un soporte slido inerte sobre el que se sita un inter-
cambiador inico que penetra en los poros y es responsable de la selectividad. Ej. Electrodo de potasio
con membrana de valinomicina (es un ionforo con una estructura tal que permite el pasaje como por
canales del potasio pero no del sodio debido a su tamao)
Los analizadores automticos de electrolitos suelen tener ISE y las mediciones con stos pueden ser directas (sin
dilucin previa de la muestra) o indirectas (con dilucin previa de la muestra).
Los resultados de las medidas potenciomtricas en sangre, plasma o suero sin diluir suelen darse en forma de ac-
tividad multiplicada por un factor adecuado. En general, las determinaciones de la actividad se basan en comparar
el potencial de la solucin desconocida con el de varias soluciones calibradoras de actividad conocida. Cuando las
medidas potenciomtricas se utilizan para determinar la concentracin de los iones totales (los libres ms los uni-
dos), la muestra deber diluirse con un diluyente adecuado que libere el ion unido. Al mismo tiempo, la dilucin
establece una fuerza inica constante, de forma que se obtiene un coeficiente de actividad tambin constante e
independiente de la fuerza inica del espcimen original.

En la potenciometra indirecta los valores obtenidos correlacionan con los del mtodo tradicional de fotometra
de llama, metodologa que arroja medidas de concentracin y que ha dado origen a los intervalos de referencia
aplicables a la poblacin de individuos normales.

204
 Bioqumica

Electrodo de medicin de pH
El anlisis cuantitativo del pH se realiza con una clula electroqumica constituida por un electrodo de vidrio sen-
sible a variaciones de pH y un electrodo de referencia (ej. de calomelanos).
La determinacin de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla a travs de una fina membrana de vidrio
permeable que separa dos soluciones con diferente concentracin de protones.
Una celda para la medida de pH consiste en un par de electrodos, uno de calomel ( mercurio, cloruro de mercurio)
y otro de vidrio, sumergidos en la disolucin de la que queremos medir el pH.
El soporte del electrodo es de vidrio comn y no es conductor, mientras que el bulbo es extremadamente sensible
al pH (extremo del electrodo), est formado por un vidrio polarizable.
El bulbo contiene una solucin de cido clorhdrico 0.1M saturado con cloruro de plata. El voltaje en el interior
del bulbo es constante, porque se mantiene su pH constante (pH 7) de manera que la diferencia de
potencial solo depende del pH del medio externo. (Muestra)
El alambre que se sumerge al interior (normalmente Ag/AgCl) permite conducir este potencial hasta un amplifica-
dor.
Para establecer la relacin concreta entre la diferencia de potencial y el pH es necesario calibrar el pH-metro con
dos disoluciones de pH conocido ej. 7 y 4.

Electrodos sensibles a gases: pCO2 (Presin parcial de CO2)

El sistema de electrodos para la medicin de la pCO2 usa principios similares a aquellos descritos con el medidor
de pH.

Este utiliza un electrodo medidor que combina un electrodo de vidrio medidor de pH y un electrodo de plata
cloruro de plata de referencia.

Una membrana permeable al CO2, pero no a los iones hidrgeno, separa la muestra del sistema medidor. El elec-
trodo de PCO2 tambin contiene una membrana porosa de nylon que acta como un soporte para una placa
acuosa de bicarbonato. Cuando el CO2 difunde a travs de la membrana, dentro del soporte, el pH del electrodo
cambia debido al cambio en la concentracin de bicarbonato de acuerdo con la ecuacin: H2 O + CO2
H2 CO3 H+ + HCO3 -

205
 Luis E. Simes

La corriente de salida de este electrodo modificado de pH es proporcional a la PCO2 presente en la muestra.

AMPEROMETRIA
La PO2 (Presin parcial de O2) se mide usando un sistema de electrodo polarogrfico que consiste en un ctodo
de platino (en el centro del cilindro de vidrio) y un nodo de plata - cloruro de plata. Una membrana permeable al
oxgeno separa la muestra sangunea del sistema de medicin. El oxgeno que difunde a travs de la membrana es
reducido por el ctodo cuando se aplica un potencial polarizante de 0.7 V entre el nodo y el ctodo.
Las siguientes reacciones representan las reacciones que ocurren en el ctodo.

2
+ 2H2O 4 eO- + 4 OH-

4 Ag 4 Ag + + 4 e-

La corriente desarrollada por estas reacciones es directamente proporcional a la pO2 de la muestra sangunea.

206
 Bioqumica

TECNICAS DE SEPARACIN

ELECTROFORESIS
El principio de la electroforesis se basa en que las partculas cargadas (en este caso protenas) pueden migrar en
un campo elctrico, hacia uno u otro electrodo dependiendo de:
1. Carga de la partcula: Se trabaja con un buffer a pH: 8,6 al cual todas las protenas se encuentran con
carga negativa.
2. Tamao: Mayor peso molecular, menor velocidad de corrida.
3. Fuerza del campo elctrico: mayor voltaje, mayor velocidad de corrida.
4. Medio soporte: Acetato de celulosa- Agarosa- Gel de poliacrilamida.

Electroforesis de Protenas
Es una tcnica de separacin que permite separar protenas en funcin de su migracin diferencial. Si se hace
variar el pH de la solucin amortiguadora donde estn disueltas, las protenas van a migrar segn su carga a distan-
cias diferentes producindose la separacin en fracciones.
Las partculas cargadas negativamente (aniones) se dirigen al ctodo y las cargadas positivamente (cationes) se
dirigen al nodo. La albmina por ser la molcula ms pequea y tener mayor nmero de grupos aninicos migra
con mayor rapidez seguida del resto de las globulinas.

Procedimiento de separacin electrofortico:

Fuente de alimentacin: se usa para aportar la energa elctrica al proceso.

Cubeta: consiste en una cmara que contiene los electrodos de carga opuesta. Los electrodos estn situados en
dos receptculos separados entre s que se conectan por un puente salino cuya funcin es permitir el paso de la
corriente. La cubeta se encuentra tapada para minimizar la evaporacin. En algunos casos lleva un sistema de
refrigeracin.
Medio de soporte: Se puede utilizar acetato de celulosa, agarosa, poliacrilamida o electroforesis capilar.
Revelado: Tiene por objeto la localizacin de las distintas fracciones de la muestra. Esto se consigue mediante
la tincin de la tira. Previamente a este paso se debe parar el proceso de difusin que se consigue con distintos
mtodos. El colorante empleado depender del compuesto que queramos localizar (Ej. Para protenas, el negro
amido). Una vez sumergida la tira en el colorante se debe eliminar el exceso mediante lavados con una solucin
decolorante.

207
 Luis E. Simes

Lectura y evaluacin:

Densitometra: Consiste en la lectura directa de la tira mediante un fotodensitmetro. En este aparto se

elige la longitud de onda adecuada, se hace pasar un haz de luz a travs de la tira y, dependiendo de la densidad de
color de cada fraccin se absorber ms o menos luz. Un detector recibe el haz de luz y dependiendo de la inten-
sidad de la luz recibida se determina la concentracin. El aparato es capaz de elaborar una grfica de registro del
recorrido de la luz. En esta grfica, cada banda aparece como un pico cuya altura depende de la densidad de color
que a su vez depende de la concentracin de la sustancia.

Electroforesis de Lipoproteinas

SEGUNDO ANTICUERPO MARCADO CON

SONDA RADIACTIVA

Electroforesis de Hemoglobina

208
 Bioqumica

Tcnica con desnaturalizacin (SDS_PAGE)

Una electroforesis desnaturalizante se realiza sometiendo a las protenas a migracin a una desnaturalizacin
(prdida de la estructura tridimensional). En esta situacin, la migracin es proporcional a la carga y al tamao de
la molcula pero no a su forma. El agente desnaturalizante ms empleado es un detergente: el sodiododecilsulfato
o SDS.
SDS-PAGE es la electroforesis de protenas ms ampliamente usada. Su nombre indica que la electroforesis en
geles de poliacrilamida se realiza en presencia de SDS. La mezcla de protenas se disuelve primero en un medio
con dodecilsulfato de sodio (SDS), un detergente inico que se une a las protenas y es capaz de romper todas las
interacciones no covalentes de las protenas y en un agente reductor de puentes disulfuro.
De esta manera, las protenas se desnaturalizan y son separadas en sus polipptidos constitutivos (en caso de tener
estructura cuaternaria).
En estas condiciones todas las molculas tienen la misma forma, en tanto que su carga es proporcional a su tama-
o. Por lo tanto, la separacin de las protenas en un campo elctrico ya no ser dependiente de estos dos factores.
Sin embargo, al estar migrando dentro de una red porosa, las protenas de menor peso molecular se desplazaran
ms fcil y rpido, en tanto que las de mayor peso molecular quedarn ms retrasadas. En consecuencia la sepa-
racin de los complejos SDS-protena es proporcional slo al tamao de la protena.
Se puede entonces determinar el peso molecular aparente de cualquier protena por comparacin con un patrn
de protenas de pesos moleculares conocidos.

Mtodo de transferencia a filtros WESTERN BLOT

La transferencia de protenas o blotting se realiza por inmovilizacin de las protenas sobre membranas sintticas,
seguido de la deteccin especfico.
1. Las protenas son separadas en primer lugar mediante electroforesis en geles de poliacrilamida.
2. Inmovilizacin de protenas sobre la membrana, generalmente mediante electrotransferencia.
En este mtodo, las protenas son transferidas electroforticamente desde el gel a la membrana. Se construye lo
que se conoce como sndwich, donde se apilan sucesivamente una esponja plana, papel absorbente, el gel, la
membrana sinttica, ms papel y finalmente otra esponja plana. Se dispone de forma tal que el gel quede hacia
el nodo (-) y la membrana hacia el ctodo (+). Se aplica una diferencia de potencial y stas migrarn desde el gel
hacia la membrana donde quedarn retenidas.
3. Incubacin del blot con anticuerpos contra la/s protena/s de inters.
4. Incubacin del blot con anticuerpos secundarios, o reactivos que actan de ligando para el anticuerpo
primario unido a enzimas u otros marcadores.
Como anticuerpos secundarios se suelen emplear anticuerpos que reconocen a las inmunoglobulinas (o sea, el
anticuerpo primario). Estos anticuerpos tienen unidos en forma covalente una enzima o un tomo radioactivo, que
ser utilizado como seal para detectar la presencia de la protena.

209
 Luis E. Simes

5. Sistema de revelado de las bandas de protenas marcadas con el complejo de anticuerpos.

Enzimas que estn unidas covalentemente al anticuerpo secundario. Las mismas catalizan una reaccin en la que
se forma un precipitado coloreado, o en la que se emite luz.

CROMATOGRAFIA
Es un mtodo de anlisis en el cual, una fase mvil (gas o lquido), que contiene la muestra se separa en sus compo-
nentes mediante la distribucin diferencial entre esta fase y una fase estacionaria (slida o lquida). De esta forma,
un compuesto que tenga ms afinidad que otro por la fase estacionaria se retrasar en su avance a travs de sta,
mientras que el que tiene poca afinidad la atravesar antes.

Clasificacin segn el mecanismo fsico que lleva a la separacin de los solutos:

Adsorcin

Particin

Intercambio inico

Afinidad

Exclusin molecular
Cromatografa de intercambio inico en columna.
Fundamento: Permite la separacin de las molculas basndose en sus propiedades de carga elctrica.

Fase estacionaria: Resina insoluble que contiene en su superficie cargas electrostticas fijas que retienen
contraiones que se intercambian con la fase mvil.

Fase mvil: Disolucin de la muestra con un buffer. Los iones de la fase mvil compiten con los espe-
cmenes a analizar por los sitios de la fase estacionaria.

Cuando se produce el paso de la fase mvil a travs de la fase estacionaria los iones de la muestra compiten
con los iones de la fase mvil por los sitios de unin en la resina (fase estacionaria). De manera que, aquellos
que tienen mayor fuerza de unin, son ms retenidos y saldrn ms tarde de la columna.

210
 Bioqumica

La fuerza de unin con la fase estacionaria se puede modificar cambiando el pH. Por esta circunstancia, cuando
se quiere terminar el proceso se puede cambiar el pH y eluir la muestra que fue ms retenida.

TECNICAS ANALITICAS 3
INMUNOENSAYOS
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Conceptos de antgeno y anticuerpo
Antgeno ( Ag) es toda molcula que al entrar en contacto con los linfocitos es capaz de activarlos y desencadenar
una respuesta de tipo humoral o celular.
Los antgenos deben ser extraos al animal en el que desencadenan la respuesta inmune, por eso poseen propie-
dades antignicas los virus y bacterias, las macromolculas de un animal de otra especie, e incluso las protenas
propias del animal.
Los anticuerpos (Ac) son glicoprotenas de alto peso molecular sintetizadas por las clulas plasmticas del
organismo. Los anticuerpos pueden hallarse en todos los lquidos orgnicos, encontrndose en el suero
en mayor concentracin.
Se han identificado en el hombre cinco clases de inmunoglobulinas (gammaglobulinas con actividad de
anticuerpos), que se denominan: Ig G, Ig M, Ig A, Ig D e Ig E.
Las inmunoglobulinas estn formadas por cadenas pesadas (H de heavy) y livianas (L de light) de protenas en las
que hay porciones constantes y porciones variables.
La propiedad biolgica ms caracterstica de las inmunoglobulinas es su capacidad de reaccionar especficamente
con los antgenos a travs de las porciones variables.
La especficifidad Ag-Ac significa que las inmunoglobulinas sintetizadas por estmulo de un antgeno, slo reac-
cionan con el antgeno que la gener. Esta especificidad se debe a la secuencia de aminocidos de la porcin
variable.
Los tipos de respuesta que ofrece el organismo son dos: respuesta celular (linfocitos T y macrfagos) y respuesta
humoral (linfocitos B con colaboracin de linfocitos y macrfagos)
Anticuerpos monoclonales
Los anticuerpos no slo son componentes del sistema inmune sino que se utilizan como reactivos biolgicos en
muchos ensayos que se aplican en el laboratorio clnico.
Los anticuerpos, al ser protenas, tambin se pueden emplear como antgenos en una reaccin, es decir que se
pueden generar anticuerpos contra ellos. De esta forma, si un conejo es inoculado con Inmunoglobulinas de ratn
formar anticuerpos contra la Inmunoglobulina de ratn. Este hecho es fundamental para su aplicacin de los
inmunoensayos.

211
 Luis E. Simes

Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos dirigidos contra un solo determinante antignico y son la
base de la industria tecnolgica actual.
Los Ac monoclonales son especficos para un epitope simple en un Ag polivalente. Se producen a partir de una
lnea celular simple usando tecnologa por hibridomas y lneas celulares de mieloma de ratn. Los hibridomas son
clulas tumorales productoras de anticuerpos que producen varias copias de un mismo anticuerpo y se desar-
rollan fcilmente en el laboratorio. La lnea celular es potencialmente inmortal y puede producir Ac en forma
constante e indefinida.
En los diferentes tipos de Inmunoensayos, los diferentes tipos de Ac que se utilizan para la deteccin de Ag tiene
cada uno afinidades diferentes segn la particularidad de la reaccin. Hay que considerar tambin que los ensayos
que miden Ac suponen la deteccin de Ac policlonales generados por el sistema inmune del paciente.
Interaccin Ag-Ac
La unin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interaccin reversible de alta especificidad en la que estn involucra-
dos enlaces no-covalentes entre el determinante antignico y el sitio activo respectivamente.
En la interaccin in vitro de un antgeno (Ag) con su correspondiente anticuerpo (Ac) se distinguen dos etapas,
la interaccin primaria no visualizable y la interaccin secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por
la aparicin de un fenmeno visible como la aglutinacin o la precipitacin. Pero no siempre que se produce la
interaccin primaria Ag-Ac, se produce la interaccin secundaria, ya que, para conseguir fenmenos visibles, son
indispensables determinadas concentraciones y caractersticas de los Ags y Acs.
INMUNOENSAYOS
El Inmunoensayo es una tcnica analtica que utiliza la reaccin Antgeno Anticuerpo para generar un resultado
perceptible y medible.
Los Inmunoensayos se pueden utilizar tanto para la deteccin de antgenos como de anticuerpos.
Las nuevas tecnologas y metodologas para la deteccin de la seal medible incrementaron notablemente la
sensibilidad del ensayo.
Ventajas de los Inmunoensayos:

Alta especificidad

Sensibilidad

Estabilidad

Versatilidad en el diseo del ensayo: Elisa, Inmunofluorescencia, Western blot,

Tiempo de ejecucin, infraestructura y costo razonable.

Sensibilidad de deteccin de los Inmunoensayos

g mg ug ng pg fg

1 10-3 10-6 10-9 10-12 10-15

Tcnicas qumicas usuales

Espectrofotometra Tcnicas Inmunocompetitivas
Fluorometria RIA-IRMA-ELISA-FIA

212
 Bioqumica

Los Inmunoensayos son aplicables a la deteccin de:

Haptenos: sustancia qumica de pequeo peso molecular que no induce por s misma la formacin de an-
ticuerpos pero al unirse a una protena transportadora como la albmina produce una respuesta inmune.
Macromolculas: protenas y complejos proteicos.
Anticuerpos: producidos por alrgenos, agentes infecciosos y antgenos autlogos.
Los analitos que se determinan en un Inmunoensayo pueden ser aquellos que estn presentes en el plasma nor-
malmente (hormonas tiroideas), aquellos que el cuerpo produce pero no estn tpicamente presentes (Antgeno
Carcino embrionario) o aquellos que en condiciones normales no existen en sangre (drogas teraputicas).
METODOLOGA
Las tcnicas inmunolgicas que evidencian la interaccin Ag-Ac a travs de una reaccin secundaria (precipitacin
o aglutinacin) son, generalmente, ms econmicas y sencillas que aquellas que permiten visualizar la interaccin
primaria (Tcnicas con inmunomarcacin)
INMUNOENSAYOS DIRECTOS. Medida directa del complejo Ag-Ac.
INMUNOENSAYOS CON REACTIVOS MARCADOS O INDIRECTOS
Requieren el uso de material marcado o SONDA para medir la concentracin de antgeno o anticuerpo presente
en la muestra.
1. INMUNOENSAYOS DIRECTOS
Reacciones de precipitacin:
Al mezclar cantidades suficientes de Ag soluble con Acs especficos, la interaccin Ag-Ac puede dar lugar a un en-
tramado capaz de ser visualizado como un precipitado.
Este entramado est formado por grandes complejos inmunes (CI) formados por la interaccin Ag-Ac.
Como se observa en la figura, cuando se agregan concentraciones crecientes de Ag soluble a una cantidad fija de
suero conteniendo Acs especficos, a medida que la cantidad de Ag agregado aumenta, la cantidad de precipitado
se incrementa hasta alcanzar un mximo, luego de lo cual declina.
En un extremo de la curva de precipitacin, cuando se agregan pequeas cantidades de Ag, los CI se forman en
exceso de Ac.
Al agregar grandes cantidades de Ag, los CI se forman en exceso de Ag siendo pequeos y probablemente consti-
tuidos por una molcula de Ac y dos de Ag. Entre estas dos situaciones extremas se encuentra la zona de equiva-
lencia, en donde la relacin Ag-Ac permite la formacin de grandes redes de CI que precipitan.

213
 Luis E. Simes

La reaccin de precipitacin depende del nmero de sitios que posee el Ac para reconocer al Ag. (Un Ac bivalente
posee dos sitios capaces de reconocer al Ag) y del nmero de epitopes que posee el Ag.
Para que se pueda producir la interaccin secundaria Ag-Ag con la consecuente formacin del precipitado, tanto
el Ag como el Ac deben ser, al menos, bivalentes.

a)Inmunoensayos de precipitacin
La reaccin Ag-Ac produce la formacin de un entramado insoluble.
a1)-Precipitacin en medio solido: Inmunodifusin radial:
Consiste en la difusin a travs de un gel de agarosa, en el que se haya disuelto un Ac especfico para el Ag que se
va a estudiar. El Ag reacciona en el recorrido con el Ac formando un precipitado en el punto de equivalencia que se
puede observar macroscpicamente.

214
 Bioqumica

Esta tcnica permite cuantificar de

manera sencilla y econmica inmu-
noglobulinas G, M y A o antgenos
solubles (C3, C4, transferrina) presen-
tes en muestras biolgicas.
La tcnica se basa en la difusin de la
muestra conteniendo el antgeno a medir (inmunoglobulinas o antgenos solubles) en una matriz semislida de
agar en la que se encuentra disuelto el Ac especfico. La muestra biolgica se introduce en los orificios cilndricos
excavados en el agar y a medida que el antgeno difunde en forma radial, se alcanza la relacin Ag-Ac que permite
la formacin precipitados visibles. Una vez finalizada la difusin se mide el radio (R) de los precipitados que es pro-
porcional a la concentracin de antgeno (C). La concentracin de protena en la muestra biolgica (Cx) se calcula
realizando una curva de calibracin utilizando muestras patrones de concentracin conocida.
a-2)-Precipitacin en medio slido: Inmunoelectroforesis
Es una tcnica cualitativa que permite la identificacin de diferentes componentes proteicos presentes en dis-
tintas muestras biolgicas (suero, orina, etc.) a travs de arcos de precipitacin.
La tcnica se realiza preferentemente en geles de agarosa y se distinguen dos etapas:
1) Las muestras se someten a una separacin electrofortica.
2) Terminada la electroforesis, las protenas interaccionan con los Acs especficos aplicados en la agarosa en un
canal paralelo al eje de migracin. Luego de un perodo de difusin de los Acs, se observan arcos de precipitacin
cuya forma y posicin dependen de las caractersticas inmunoqumicas y de la concentracin de cada protena.

215
 Luis E. Simes

a-3)-Precipitacin en medio lquido: Turbidimetria/Nefelometra:

Se forman inmunocomplejos (CI) insolubles al igual que los ensayos de precipitacin, pero quedan en suspensin
en la mezcla de reaccin.
Se utilizan tcnicas fotomtricas y se mide la dispersin de la luz para cuantificar los (CI) formados.
Se realiza tambin una curva de calibracin con cantidades crecientes y conocidas de Ag para cuantificar la concen-
tracin del analito en las muestras.

Son tcnicas cuantitativas. La medicin turbidimtrica permite la automatizacin. La nefelometra necesita de un

lector especfico para la medicin de la luz dispersada.
b) Reacciones de aglutinacin
Las reacciones de aglutinacin involucran una interaccin secundaria entre Ag-Ac que llevar a la aparicin de un
aglutinado que se visualiza macroscpicamente como grumos.
Los principios fisicoqumicos que rigen la formacin de estos aglutinados son los mismos que gobiernan la for-
macin de un precipitado. Los principios detallados acerca de la zona de exceso de antgeno, la zona de equiva-
lencia y la zona de exceso de anticuerpo, son vlidas y aplicables a las reacciones de aglutinacin.
La diferencia entre las reacciones de precipitacin y las reacciones de aglutinacin son las caractersticas del
antgeno: mientras que en las reacciones de precipitacin se emplean antgenos solubles, en las reacciones de
aglutinacin el Ag es particulado. Con un Ag soluble, tambin es posible disear una reaccin de aglutinacin
gracias a que es posible adosarle distintas partculas (partculas inertes como ltex o glbulos rojos) y realizar un
pegado qumico o fisicoqumico del Ag soluble a dichas partculas, generando de esa manera un Ag particulado
til para fines diagnsticos.
La ventaja de las reacciones de aglutinacin desde el punto de vista de su utilidad en el laboratorio es que son
muy sencillas de realizar, no requieren de ningn equipamiento para su lectura, son rpidas y fciles de imple-
mentar.
Presentan una mayor sensibilidad que las reacciones de precipitacin y son una valiosa herramienta para diver-
sos estudios serolgicos (bsqueda de Acs especficos contra agentes patgenos) y para la deteccin de antge-
nos en fluidos biolgicos.

Tipos de reacciones de aglutinacin segn las caractersticas de las partculas aglutinantes:

De acuerdo a las caractersticas de las partculas aglutinantes, las reacciones de aglutinacin pueden clasificarse
en:
a. reacciones de aglutinacin activa
b. reacciones de aglutinacin pasiva.

216
 Bioqumica

a) Las reacciones de aglutinacin activa se basan en el empleo de la partcula aglutinante como antgeno.
Como ejemplos podemos mencionar: Aglutinacin directa para toxoplasmosis-Aglutinacin directa para
Chagas.
b) Las reacciones de aglutinacin pasiva se basan en el empleo de una partcula aglutinante inerte a la cual
se la ha unido un antgeno. Como ejemplos podemos mencionar: HAI Toxo-HAI- Chagas-ASTO.
Los soportes particulados para las reacciones de aglutinacin indirecta pueden ser glbulos rojos: hemagluti-
nacin o partculas de ltex.
El empleo de este tipo de partculas inertes ha permitido extender el rango de utilidad de la tcnica de agluti-
nacin a la determinacin de Ac contra agentes infecciosos tales como el VIH o el HBV, e inclusive para la deter-
minacin de Ac contra molculas solubles como estreptolisina O (ASTO), protena C reactiva (PCR).
Tipos de reacciones de aglutinacin pasiva segn la identidad de la especie pegada a las partculas agluti-
nantes:
Considerando que es posible inmovilizar muchos tipos diferentes de protenas a distintos tipos de partculas in-
ertes, es posible clasificar las reacciones de aglutinacin pasiva en:
o Reacciones de aglutinacin pasiva directa
Las reacciones de aglutinacin directa se basan en la sensibilizacin de la partcula inerte con el
Ag, por lo que resultan tiles para la deteccin y titulacin de Ac en distintos fluidos biolgicos
o Reacciones de aglutinacin pasiva reversa.
Las reacciones de aglutinacin reversa se basan en la inmovilizacin del Ac en la superficie de la
partcula inerte.

Concepto de TTULO
Las reacciones de aglutinacin directa son tiles para la deteccin y titulacin de Ac en distintos fluidos biolgicos.
Es importante destacar que NO es posible determinar la concentracin de Ac sino calcular un ttulo de Ac.
Para ello, se realiza la incubacin de diluciones seriadas del suero del paciente con cantidades constantes de Ag y
se elige arbitrariamente como ttulo la inversa de la mxima dilucin de suero que produce aglutinacin visible.
En determinadas muestras en las que existe una gran cantidad de Ac es posible que a diluciones bajas (es decir,
a altas concentraciones de suero) no se observe aglutinacin. Este fenmeno se denomina efecto prozona y se
debe a que en exceso de Ac se forman preferentemente complejos Ag-Ac solubles (como los formados en la zona
de exceso de Ac en la curva de precipitacin). En este caso, el ttulo de Ac sigue siendo la mxima dilucin de suero
que produce aglutinacin visible.

217
 Luis E. Simes

Seroconversin
Teniendo dos muestras de suero de un mismo paciente tomadas a diferentes tiempos, es posible comparar medi-
ante esta tcnica el ttulo de Acs en ambas muestras. Se denomina SEROCONVERSIN a la aparicin de Acs o al
aumento del ttulo de Acs en 4 veces en un periodo entre 3 y 4 semanas.
Inhibicin de la hemaglutinacin
Permite calcular la concentracin de Ag en una muestra. Dicha tcnica consiste en incubar cantidades constantes
de la partcula aglutinante sensibilizada con el Ag de inters (Ag particulado), con cantidades constantes y agluti-
nantes del Ac especifico. A esta mezcla, capaz de aglutinar, se la enfrenta con cantidades variables de Ag libre como
competidor. A partir de una determinada concentracin de Ag libre, se producir una inhibicin de la aglutinacin
por competicin del Ag libre por el Ac (que de esta manera no podr unirse al Ag particulado para aglutinar).

Deteccin de anticuerpos IgG e IgM + IgG:

Existen reactivos diagnsticos disponibles en el mercado que permiten determinar si el ttulo de Ac obtenido en
una reaccin de aglutinacin (directa o indirecta) corresponden a IgG o a la suma de IgM ms IgG. Esto se debe a
que ambos tipos de inmunoglobulinas son aglutinantes.
En muchos casos es necesario conocer si el paciente posee Ac de tipo IgM o IgG porque eso puede facilitar el se-
guimiento del paciente o determinar un tratamiento.
Para ello, se ha desarrollado la tcnica de aglutinacin en ausencia y en presencia de 2-Mercaptoetanol (2-ME)
Cuando se realiza la titulacin del suero del paciente por aglutinacin en ausencia de 2-ME y se informa un ttulo,
en realidad se est informando una actividad aglutinante que es la suma de la actividad aglutinante de la IgM y de
la IgG. Si, siguiendo el protocolo provisto por el fabricante, se realiza la tcnica en presencia de 2-ME produce una
reduccin de la IgM.
De este modo, la realizacin de la aglutinacin en presencia y ausencia de 2-ME permitir determinar la presencia
de IgG e IgM contra el Ag sensibilizante. En determinados casos (toxoplasmosis) es importante determinar la pres-
encia de IgM porque es indicio de infeccin activa. La cada en el ttulo del suero por aglutinacin en ausencia vs.
en presencia de 2-ME es indicio de la presencia de IgM especfica para el parsito.

218
 Bioqumica

2. INTERACCION PRIMARIA -INMUNOENSAYOS CON REACTIVOS MARCADOS

Si bien la interaccin primaria Ag-Ac no es visible, existen distintas estrategias para poder visualizarlas.
El mtodo consiste en marcar al Ac o al Ag mediante la unin covalente (conjugacin) de determinadas molcu-
las, tales como FLUOROCROMOS, ISOTOPOS RADIOACTIVOS o ENZIMAS, para poder hacer visible esa primera
interaccin.
Las tcnicas no son tan sencillas y econmicas como las anteriores, pero son mucho ms sensibles. Se pueden
clasificar:
A) Segn el TIPO DE SONDA
Radioinmunoensayos La reaccin Ag-Ac se evidencia por la competicin entre el Ag o el Ac que estemos
estudiando y una concentracin conocida del mismo espcimen marcado radiactivamente.
Fluoroinmunoensayos Para la realizacin de estas tcnicas el anticuerpo se marca con un fluorocromo
detectndose la formacin del complejo Ag-Ac por la emisin de fluorescencia.
Enzimoinmunoensayos Utilizan una enzima como marcador que produce la seal obtenida de la reaccin
entre un antgeno y un anticuerpo. Dentro de los enzimoinmunoensayos hay que destacar los Quimioin-
munoensayos, en los cuales la enzima cataliza la oxidacin de un sustrato.
B) Segn el MTODO DE SEPARACIN
Heterogneos. El Ag marcado unido al Ac (Ac-Ag*) debe de ser fsicamente separado del Ag marcado que
permanece libre en la disolucin (Ag*). El procedimiento de separacin puede llevarse a cabo por precipi-
tacin de los Ac o por la adicin de un segundo Ac que atrapa y precipita el Ac original o el Ac se encuentra
unido a una fase slida como puede ser la cara interna del tubo plstico.
Homogneos. No requieren la separacin de la unin anti Ac-Ag* del Ag* libre.
C) Segn el DISEO DEL ENSAYO
Competitivos. En los formatos competitivos, el analito sin marcar (generalmente antgeno) en la muestra
se mide por su capacidad para competir con un antgeno marcado. El antgeno sin marcar bloquea la
capacidad del antgeno marcado de unirse ya que ese punto de unin en el anticuerpo ya se encuentra
ocupado. En el formato competitivo de un solo paso tanto el antgeno marcado (Ag*) como la muestra sin
marcar (o analito de la muestra) compiten por una cantidad limitada de anticuerpo. La concentracin de
antgeno es inversamente proporcional a la concentracin de la seal.
No competitivos o sndwich. El analito est unido (como un sandwich) entre dos reactivos de anticu-
erpo muy especficos. En los ensayos no competitivos, la medicin del analito marcado, generalmente un
anticuerpo, es directamente proporcional a la concentracin de antgeno presente en la muestra.
As, cuanto mayor sea la cantidad de antgeno presente, ms anticuerpos marcados se unirn.
Ensayos competitivos
En este Inmunoensayo el Ag de la muestra compite con un Ag marcado de reactivo.
El antgeno sin marcar bloquea la capacidad del antgeno marcado de unirse al anticuerpo.
El hecho que se mida menos marca significa que hay ms antgeno en la muestra. (Relacin inversa)

219
 Luis E. Simes

SEGUNDO ANTICUERPO MARCADO CON

ANTICUERPO UNIDO A SO-
SONDA RADIACTIVA
PORTE SOLIDO
ANTIGENO

Ensayos no competitivos

Los formatos de ensayo no competitivos generalmente proporcionan el nivel ms alto de sensibilidad y especi-
ficidad. Se aplican a la medicin de analitos crticos como pueden ser los marcadores cardacos y de hepatitis. A
este formato se lo conoce como ensayo SANDWICH ya que el analito est unido como un sndwich 2 reactivos
anticuerpos muy especficos.
El Ag de la muestra se al Ac que se encuentra unido a una fase slida y se revela con un segundo Ac marcado.
La medicin del anticuerpo marcado es directamente proporcional a la concentracin del analito en la muestra.
Mtodo homogneo: No requieren la separacin del inmunocomplejo Ag*-Ac marcado del Ag libre marcado (Ag*)
a diferencia de los Heterogneos que s necesitan la separacin.
Las primeras son ms rpidas y sencillas

220
 Bioqumica

RADIOINMUNOANALISIS (RIA)
Fue la primera tcnica desarrollada de ensayo competitivo de protenas.
La tcnica de radioimnunoanlisis (RIA) permite cuantificar la presencia de pequeas cantidades de un determi-
nado Ag o Ac en una muestra biolgica. Si bien es una tcnica muy sensible, en la actualidad no es tan utilizada
como lo era antes y ha sido reemplazada por otras tcnicas que no utilizan radioistopos.
La tcnica se basa en la inhibicin competitiva de la unin de un Ag marcado radiactivamente con su Ac especfico,
por parte de Ags idnticos no marcados presentes en la muestra a analizar. En la reaccin participan:
1) Acs especficos contra la molcula a cuantificar (esa molcula puede ser un Ag o una inmunoglobulina)
2) la molcula a cuantificar marcada radioactivamente
3) la muestra a analizar donde se encuentra la molcula a cuantificar.
Una vez desarrollada la reaccin debe separarse el complejo Ag-Ac del medio donde se encuentra Ag y Ag* libres
para poder cuantificar la cantidad de radiactividad unida al anticuerpo.
Para la separacin de la fraccin libre de la unida los mtodos que desarrollados pueden ser un segundo Ac unido
a polietilenglicol o la unin a una fase slida.
Se realiza una curva de calibracin utilizando cantidades crecientes de antgeno frio (no marcado) en funcin de la
radiactividad medida en cuentas por minuto (cpm).

Algunos de los istopos ms utilizados son: 125I de emisin y vida media 60 das; 3H de emisin y vida media 12.3
aos; 32P de emisin y 14 das de vida media.
Esta metodologa se utiliza para la determinacin de hormonas, vitaminas, neuropeptidos y sustancias que se en-
cuentran en muy pequeas concentraciones.
Ventajas: sensibilidad, reproducibilidad y especificidad.
Desventajas: Necesidad de equipos especiales y manejo de istopos radiactivos lo que implica sujecin a mltiples
normas para el manipuleo, conservacin y deshecho segn las legislaciones de cada pas.
IRMA
Es una variante del RIA con la diferencia que en este caso lo marcado es el Ac por lo que la seal isotpica es di-
rectamente proporcional al Ag que se va a determinar. Es una reaccin tipo sndwich donde el antgeno de la
muestra queda entre el Ac fijado a un soporte y un Ac marcado.
El Ac monoclonal se encuentra unido a una fase slida. Se utiliza un exceso estequiomtrico de anticuerpo.
El Ac se une primero al antgeno de la muestra.
Luego se separa la fraccin libre (F) de la unida (B).
Se adiciona un segundo Ac marcado.
Se realiza un segundo lavado para eliminar el exceso de Ac marcado no unido.
Se realiza la medida de la radiactividad unida al tubo.

221
 Luis E. Simes

Se interpola en una curva de calibracin confeccionada con concentraciones crecientes de antgeno en funcin de
la seal (cuentas por minuto).

FPIA INMUNOENSAYO POR POLARIZACION DE FLUORESCENCIA

Ensayo: HOMOGENEO COMPETITIVO.
Sonda: compuesto fluorescente.
El Ag marcado con fluorescena y el Ag de la muestra compiten por los sitios de unin del Ac. No requiere paso de
lavado para la separacin de la fraccin unida de la libre.
El FPIA utiliza 3 conceptos para la deteccin: FLUORESCENCIA, ROTACION DE PARTICULAS y LUZ POLARIZADA.
La fluorescena es una marca fluorescente que absorbe luz longitud de onda 490nm y emite energa como
fluorescencia a 520 nm.
Rotacin de molculas: las molculas ms grandes rotan ms lentamente que las pequeas en solucin.
Este principio permite diferenciar las molculas de Ag marcado (ms pequeas) de las Ac-Ag marcados
(ms grandes).
La luz polarizada distingue la marca en el Ag unido ala Ac del no unido por las diferentes propiedades de
polarizacin de la luz. Cuando la luz polarizada incide en las molculas de Ag marcado pequeas tienen la
propiedad de rotar rpidamente antes de emitir su fluorescencia.

INMUNOENSAYOS ENZIMATICOS (EIA)

Esta tcnica se desarroll a partir del RIA. La diferencia es la sustitucin del istopo como sonda por una enzima.
Las enzimas tpicas utilizadas son la fosfata alcalina, peroxidasa de rbano picante, ureasa, catalasa y la galactosida-
sa B. En este ensayo se necesita un proceso secundario para obtener la seal: medicin de la actividad enzimtica.
La separacin de los conjugados libres de los unidos puede realizarse por placas de microtiter, tubos de plstico,
partculas magnticas.
Mientras el RIA utiliza radiactividad como seal, el EIA usa emisin de luz, cambio de color, fluorescencia, quimio-
luminiscencia.
El ensayo puede ser competitivo o no competitivo (sndwich). Los competitivos se utilizan para la deteccin de
hormonas, marcadores tumorales, agentes infecciosos.

222
 Bioqumica

Los no competitivos se utilizan para la deteccin de Ac para HIV, HVB, HVC y auto anticuerpos.
El ensayo ms utilizado es el Enzimoinmunoenzayo (Enzime-linked-inmunoabsorbent assay).
ELISA Indirecto. Deteccin de anticuerpos
Consta de las siguientes etapas:
1. Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos objeto de estudio. La-
vado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
2. Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarn especficamente con
los antgenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos que no hayan reaccionado.
3. Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los anticuer-
pos especficos aadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antgenos. Lavado
para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
4. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la
reaccin si se desea.
5. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.
ELISA Sandwich DAS (Double Antibody Sandwich). Deteccin de antgenos
Consta de las siguientes etapas:
1. Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. Lavado
para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
2. Adicin de la muestra problema de tal forma que si est presente el agente patgeno de diag-
nstico (antgeno), se unir al soporte. Lavado para eliminar los antgenos que no hayan reac-
cionado y los restos de la muestra no fijados.
3. Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un eptope diferente de
los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte) conjugados con una enzima, los cuales
reaccionan con los antgenos aadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los
anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
4. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la
reaccin si se desea.
5. Lectura fotocolorimtrica del producto final coloreado.

En los ensayos fotomtricos la reaccin se realiza utilizando un sustrato cromognico para desarrollar
color. Ej: la fosfatasa alcalina utilizar p-nitrofenilfosfato para desarrollar color amarillo.
Los ensayos quimioluminiscentes (MEIA) utilizan sustratos como la luciferin-ATP y frente a una reaccin
enzimtica emiten fluorescencia.

223
 Luis E. Simes

CLIA QUIMIOLUMINISCENCIA
Quimioluminiscencia: Reaccin qumica de xido -reduccin donde la energa se libera en forma de luz.
Ensayo: HETEROGENEO- NO COMPETITIVO
Es una reaccin qumica de alto rendimiento que produce una molcula potencialmente fluorescente. Esta fluo-
rescencia no se produce por excitacin luminosa por una fuente de luz sino por una reaccin qumica redox donde
interviene una enzima (HRP: Peroxidasa del rbano picante), agua oxigenada y un sustrato orgnico oxidable (es-
teres de acridina, derivados del rutenio.)
La fase slida es una micropartcula magntica y la separacin se realiza por un imn.

ECLIA ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA
Este tipo de ensayo, pese a no ser enzimtico, se incluye en este grupo de mtodos por su similitud metodolgica.
Al igual que en la quimioluminiscencia, en este inmunoensayo se generan( a partir de sustratos estables) productos
capaces de emitir fotones al pasar sus electrones de un estado intermedio inestable y energticamente superior,
a uno de energa inferior ms estable, aunque en este caso su origen es electroqumico y no una reaccin enz-
imtica.
En este ensayo no competitivo, el anticuerpo utilizado recubre micro partculas imantadas, que luego de la for-
macin del inmunocomplejo Ac-Ag, se fijan a un electrodo por magnetismo. Dicho anticuerpo est conjugado con
un marcador (derivado del rutenio) capaz de emitir fotones cuando se aplica una pequea diferencia de potencial
sobre el electrodo. La energa lumnica la detecta un fotomultiplicador.
Ventajas: alta sensibilidad, fcil separacin entre las fases ligada y libre.
INMUNOCROMATOGRAFIA
La inmunocromatografa se basa en la migracin por capilaridad de una muestra a travs de una membrana de
nitrocelulosa.
La muestra se coloca en la zona del conjugado (LATEX COLOREADO), el cual est formado por un anticuerpo espe-
cfico contra uno de los eptopes del antgeno a detectar y un reactivo de deteccin.
Si la muestra contiene el antgeno problema, ste se unir al conjugado formando un complejo inmune y migrar a
travs de la membrana de nitrocelulosa. De lo contrario, migrarn el conjugado y la muestra sin unirse.
La zona de captura est formada por un segundo anticuerpo especfico contra otro eptope del antgeno. Al llegar
la muestra a esta zona, los complejos formados por la unin del antgeno y conjugado quedarn retenidos y la lnea
se colorear (muestras positivas).
En el caso contrario las muestras son negativas.
La zona control est formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de deteccin. Cuando el resto de
muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unir al conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de
captura.

224
 Bioqumica

Esta lnea es un control de que el ensayo ha funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas
y negativas
Ventajas: rapidez y sencillez. Mtodo cualitativo.

WESTERN BLOT
La tcnica de Western blot surge como metodologa de anlisis de cidos nucleicos, aunque no los analiza directa-
mente, sino que analiza el producto de expresin de los genes: las protenas que codifica.
Es una tcnica de electroforesis e inmunotransferencia.
Es un sistema rpido y muy sensible para la deteccin y caracterizacin de protenas que se basa en la especificidad
de reconocimiento entre antgeno y anticuerpo. Implica la separacin por electroforesis por el sistema SDS-PAGE y
una transferencia cuantitativa e irreversible a una membrana de PVDF de las protenas de la muestra analizada. Los
antgenos se transfieren a una membrana y son reconocidos por anticuerpos monoclonales especficos.
Finalmente, se detecta la unin antgeno-anticuerpo por actividad enzimtica, fluorescencia entre otros mtodos.
De esta forma se puede estudiar la presencia de la protena en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto
a otras protenas.
Este procedimiento proporciona un medio especfico para confirmar reactividad de anticuerpos.

225
 Luis E. Simes

INMNUNOMARCACIN
Las tcnicas de inmunomarcacin utilizando Ac conjugados permiten detectar la presencia de Ags en tejidos (in-
munohistoqumica) o clulas (inmunocitoqumica). La imunomarcacion de tejidos se realiza sobre cortes de tejido
fijado montado sobre un portaobjetos. A travs de estas tcnicas es posible detectar tanto Ags celulares (de mem-
brana, citoplasmticos o nucleares) como extracelulares (matriz extracelular, membrana basal, etc.) La imuno-
marcacion de clulas puede efectuarse sobre clulas vivas o fijadas, las cuales pueden hallarse en suspensin o
adheridas a un soporte slido (portaobjetos).
Inmunomarcacion directa:
Es la forma ms simple de localizar un Ag y consiste en utilizar un Ac marcado especfico para dicho Ag (Ac
primario). Para realizar esta tcnica, se incuba la muestra con el Ac primario marcado durante un determinado
tiempo, a la temperatura indicada, luego del cual se retira el exceso de Ac mediante un lavado y se procede a la
deteccin de la marca.

La inmunofluorescencia, aprovecha la capacidad que tienen los anticuerpos para unirse con alta especificidad a
un antgeno pero se diferencia de otras tcnicas inmunoqumicas en que aqu la marca unida al anticuerpo es
una molcula fluorescente, el isotiocianato de fluorescena. Se expone el preparado a luz de onda corta y gen-
era un fenmeno de fluorescencia en la molcula marcadora que a su vez emite luz a una longitud de onda ms
larga (verde, amarillo o naranja). Esta luz emitida puede ser cuantificada con facilidad por fotometra o en el caso
de tratarse de preparados histolgicos, puede ser observada por medio de un microscopio de fluorescencia.
Las pruebas de inmunofluorescencia pueden utilizarse para detectar anticuerpos o para detectar la presencia de
un antgeno. En ambos casos la reaccin finaliza mediante la adicin de un anticuerpo conjugado a una sustancia
fluorescente, habitualmente fluorescena.
Estas pruebas son muy sensibles pero su interpretacin tiene un alto grado de subjetividad.
Inmunomarcacin indirecta:
Utiliza dos anticuerpos. El anticuerpo primario es el que reconoce y se une a al antgeno, mientras que el secundar-
io que es el que se encuentra marcado con el fluorforo, reconoce al primario y se une a l. Esta tcnica es un poco
ms compleja que la IFD, requiere ms pasos y es ms posible que sufra interferencias, pero en contrapartida es
mucho ms flexible que una tcnica directa y debido a que es posible que un anticuerpo primario una a mas de
anticuerpo secundario, implica un efecto de amplificacin tambin aumenta la sensibilidad de la tcnica.

226
 Bioqumica

Citometra de flujo
La citometra de flujo (CMF) es un procedimiento altamente eficiente para caracterizar poblaciones celulares que
se encuentren en suspensin. Entre las muchas ventajas que presenta en relacin a la microscopa de fluorescen-
cia se encuentran la posibilidad de analizar un nmero muy elevado de clulas en pocos segundos y la posibilidad
de cuantificar la intensidad de fluorescencia. La principal desventaja radica en el alto costo de la adquisicin y
mantenimiento del citmetro de flujo.
La citometra de flujo se ha utilizado en biomedicina con diferentes objetivos: En hematologa: recuento celular,
frmula leucocitaria, contaje reticulocitario, anlisis de mdula sea. En farmacologa: estudios de cintica celular.
En inmunologa: subpoblaciones de linfocitos, estimulacin linfocitaria.

227
 Bioqumica

CAPITULO 9

MEDIO INTERNO
Podemos definir el medio interno de un organismo vivo como un conjunto de lquidos que circulan y rodean las
clulas.
Homeostasis
El volumen de los lquidos corporales, la concentracin de electrolitos y el equilibrio cido-base se mantienen
dentro de lmites muy estrechos a pesar de las amplias variaciones a las que el organismo est expuesto debido a
la dieta, la actividad metablica y al medio ambiente. Este equilibrio se lo conoce como homeostasis.
El mantenimiento de la homeostasis del medio interno permite una vida celular equilibrada y en consecuencia
asegura la salud del organismo. Cualquier modificacin de estos valores puede generar sntomas y patologas
sistmicas que pueden llegar a ser graves.
Sistemas que participan en la homeostasis:
Regulacin de la temperatura corporal.
El equilibrio cido base.
El equilibrio electroltico.
Equilibrio hdrico
La regulacin hormonal.
Balance hdrico
El agua constituye entre el 45 y 60% del peso corporal dependiendo de sexo, edad.
Se distribuye en el organismo en dos compartimientos separados por membranas semipermeables: C. Intracelu-
lar 65% y C Extracelular 35%. Esto permite el traspaso de electrolitos y solutos a una y otro lado de la membrana
con caractersticas de selectividad que permite tener diferentes concentraciones de solutos a ambos lados. Las
membranas celulares son permeables al agua lo que permite la difusin de acuerdo a gradiente osmtico.
El agua extracelular se distribuye en dos compartimientos separados por el endotelio vascular: intersticial e intra-
vascular que mantienen un equilibrio de acuerdo al principio que la sumatoria de aniones y cationes deben ser
iguales y la presin osmtica (depende del nmero de partculas) debe ser igual en el plasma y en el intersticio. Las
protenas no atraviesan membranas por lo tanto ejercen una presin onctica que atrae agua que es equilibrada
por la presin hidrosttica del vaso capilar.
La regulacin se realiza:
Efecto Hormona antidiuiretica (ADH) en tbulos colectores rin.
Sistema renina angiotensina
Centro de la sed en el SNC.

229
 Luis E. Simes

ELECTROLITOS
De acuerdo con el principio de conservacin de la electroneutralidad, el nmero de cargas positivas y negativas en
los lquidos corporales debe ser el mismo. En consecuencia, los cationes sricos: Na+, K+, Ca++, y Mg++ deben igua-
lar a los aniones: HCO3, Cl, protenas (albmina) y fosfatos. El balance entre estos electrolitos influye el estado
cido-base. De hecho, la evaluacin del estado cido-base es incompleta si no se consideran el perfil electroltico.
SODIO
El Sodio es el principal catin extracelular y factor determinante de la osmolaridad plasmtica. Los cambios en la
concentracin plasmtica se acompaan de los cambios ms o menos rpidos de agua hacia o desde la clula. El
papel que juega en el organismo adems de mantener la osmolaridad y el equilibrio hdrico es el del transporte
del impulso nervioso.
La concentracin plasmtica est regulada por el rin y por el SNC a travs del sistema endcrino. El sodio se filtra
libremente a nivel glomerular y aproximadamente un 70% de la cantidad filtrada se reabsorbe a contracorriente en
el tbulo contorneado proximal y por efecto de la aldosterona en el tbulo contorneado distal.
La excrecin diaria vara con lmites muy amplios debido al tipo de dieta.
El trastorno ms comn en la prctica clnica es la hiponatremia o disminucin plasmtica de sodio. Puede presen-
tarse por prdida de soluto (Sodio) o aumento de solvente (agua). En ambos casos la osmolaridad plasmtica est
disminuida.
La perdida de este catin puede ocurrir por va renal o extra renal.
Va renal: Tratamiento con diurticos, nefropata perdedora de sal, insuficiencia renal.
Va extra renal: Sobre hidratacin con soluciones hipotnicas, por vmitos, quemaduras, cirrosis, insufi-
ciencia cardaca.
Hiponatremia sin cambios en el volumen: Hipotiroidismo, secrecin inadecuada de hormona anti diur-
tica.
POTASIO
El potasio es el principal catin intracelular y su metabolismo mantiene estrecha relacin con el funcionamiento
de la clula. El potasio extracelular es aproximadamente un 2%.La relacin 30:1 (Intracelular/ Extra celular) se
mantiene debido a la bomba de cationes de la membrana con gasto de energa.
La funcin principal es la transmisin nerviosa y contraccin muscular. Junto al calcio y magnesio controla la velo-
cidad y fuerza de la contraccin cardaca (gasto cardaco) Tambin est vinculado a la sntesis de protenas.
La excrecin se realiza en un 80-90% por los riones a nivel glomerular.
La hipocalemia o hipopotasemia ocurre como resultado de prdidas de fluido gastrointestinal por vmitos o diar-
rea, por insuficiencia renal, por alcalosis metablica o hiperaldosteronismo.

230
 Bioqumica

La hiperpotasemia ocurre en la acidosis, hemorragia interna, dao celular por quemaduras, insuficiencia renal
aguda y crnica.
La hiperpotasemia artefactual puede aparecer en leucemias con aumento de leucocitos y plaquetas, inconvenien-
tes preanalticos en la toma de muestra (hemlisis).
CLORURO
Es el principal anin extracelular.
Funcin: Mantenimiento de la distribucin hdrica, equilibrio de aniones y cationes en el espacio extracelular man-
tenimiento de la presin osmtica.
Las alteraciones en la concentracin raramente constituyen un problema primario. Los cloruros son eliminados
en las diuresis masivas, en presencia de vmitos o diarreas, tratamientos prolongados con diurticos, secrecin
inadecuada de ADH, acidosis respiratoria compensada, quemaduras.
Hipercloremia: intoxicacin con salicilatos, acidosis metablica por prdida de bicarbonato, diabetes inspida.
MAGNESIO
Es el cuarto metal ms abundante en los organismos vivos, ocupa el segundo lugar como catin extracelular .Es el
cofactor esencial de todas las reacciones que utilizan ATP, y forma parte de la bomba de membrana que permite
la excitabilidad elctrica de las clulas nerviosas y musculares.
La hipomagnesemia se produce por insuficiencia renal, empleo de diurticos, cirrosis, diarreas.
La hipermagnesemia no es frecuente y se puede deber a cetoacidosis diabtica, enfermedad de Adisson.

METODOLOGIA
FOTOMETRIA DE LLAMA ELECTROQUIMICA
POTENCIOMETRIA ISE

ELECTROLITO INTERVALO DE REFERENCIA PLAS-

MA

SODIO 135-145 mEq/L (mmol/l)

POTASIO 3,5-5,0 mEq/L (mmo/l)
CLORO 95-105 mEq/l (mmol/l)

EQUILIBRIO ACIDOS BASE (A-B)

La determinacin que se conoce como GASES SANGUNEOS en el laboratorio clnico permite, por una parte, la
valoracin de la funcin pulmonar en trminos de oxigenacin y de ventilacin y, por otra, del estado cido-base,
o sea establecer el diagnstico de las alteraciones de su equilibrio, en funcin de acidosis o alcalosis y su etiologa
(respiratoria o metablica).
La determinacin o medicin de gases sanguneos, arteriales o venosos, provee fundamentalmente tres valores de
medicin directa mediante los respectivos electrodos:
Presin parcial (o tensin) del oxgeno disuelto en el plasma, PO2.
Presin parcial (o tensin) del dixido de carbono disuelto en el plasma, PCO2.
FiO2
El grado de acidez o alcalinidad del plasma, lo cual se expresa por el logaritmo inverso de la con-
centracin de iones H+, el pH.

231
 Luis E. Simes

A partir de los datos anteriores se pueden obtener, por medio de nomogramas o por clculo que el instrumento
realiza, los siguientes valores:
CO2 total.
Bicarbonato, actual y real.
Exceso de base.
El equipo, adems tambin realiza las determinaciones de:
Hemoglobina (o el hematocrito).
%Saturacin de la hemoglobina.
GASES SANGUINEOS
PO2:
La PO2 es el ndice de oxigenacin de la sangre, un indicador de la cantidad de oxgeno molecular disuelto en el
plasma; expresa la eficiencia de la ventilacin y de la difusin alvolo capilar para lograr normal transferencia del
oxgeno desde el interior del alvolo hasta la sangre del capilar pulmonar.
PCO2:
La PCO2 es una medida de la cantidad de CO2 disuelto en el plasma. Expresa eficacia de la ventilacin, o sea, cuan
efectiva es la eliminacin pulmonar de dixido de carbono y es un indicador de la cantidad de cido carbnico
presente en el plasma, el cual depende directamente de la intensidad de la pCO2.
pH
El pH es una manera de expresar intensidad de acidez, un concepto ms difcil de entender que el de la expresin
de la cantidad de iones H+ o la concentracin de un cido.
El pH se expresa a travs de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch que define el pH en trminos de la relacin
entre la sal y el cido .El pH del lquido extracelular depende de la relacin entre la cantidad de bicarbonato base
y la cantidad de cido carbnico:
pH= pK + log [CO3H-]/[CO3H2]
Es la relacin entre 2 variables independientes: la presin de CO2 regulada por el pulmn y las bases reguladas
por el rin.
Ejemplo:
PK: 6,1
[HCO3-]: 24 mEq/l
pCO2: 40 mEq/L
Luego: pH: 6,1 + log 24/ 0,03*40 (0,003 constante de disolucin de CO2)
PH: 6,1 + log 20 7,4

En esta forma se llega al valor normal del pH del plasma, que es tambin el del lquido extracelular: 7,4, con lmites
entre 7,35 y 7,45.
El pH vara de acuerdo con la relacin
HCO3 /PCO2
Un pH bajo puede resultar de un descenso del numerador o de un aumento del denominador. Hay que considerar
que un pH normal puede resultar cuando el numerador y el denominador estn proporcional e inversamente el-
evados o disminuidos. Un pH elevado siempre significa alcalosis, y un pH bajo siempre significa acidosis.

232
 Bioqumica

pH normal: 7,35-7,45
pH > 7,45 = alcalosis
pH < 7,35 = acidosis
El pH, que de por s indica si hay una acidosis o una alcalosis, no permite diferenciar si se trata de una acidosis
respiratoria o metablica, o de una alcalosis respiratoria o metablica.
En el paciente en estado crtico el pH es raramente tratado de por s. Slo en casos extremos, por ejemplo una
acidosis con un pH menor de 7,2 que pone en peligro el funcionamiento cardaco, puede requerir la administracin
rpida de bicarbonato. En general se trata la causa de la alteracin, la anormalidad que est produciendo el dese-
quilibrio cido-base, y no el pH en s.
De dnde provienen los cidos?
1. Produccin de cidos fijos voltiles ( CO2 ) a partir del metabolismo aerbico:
CO2 + H2O H+ + CO3H-
2. Produccin de cidos fijos o no voltiles:
Protenas y fosfolpidos de la dieta: Acido sulfrico y Acido fosfrico.
cido lctico. (Hipoxia)
Acido butrico y Cetocidos.(Diabetes no tratada)
Salicilatos.(Intoxicacin por ingesta)
BICARBONATO
El bicarbonato es la base (liga iones H+) ms importante del organismo para el sistema de amortiguacin o buffer,
que mantiene el pH en valores normales. A pesar de que existen en el organismo gran cantidad de sistemas buffer,
el pH es controlado casi exclusivamente por la relacin bicarbonato/cido carbnico.
El CO2 del organismo est compuesto por CO2 libre, que es el que ejerce presin parcial, y por el CO2 combinado,
que es el bicarbonato, el cual representa aproximadamente el 95% del CO2 total.
El CO2 es generado como producto metablico final en los tejidos; el bicarbonato es generado a partir del cido
carbnico que proviene del CO2 y el agua mediante la accin de la anhidrasa carbnica:
CO2 + H2O H+ + CO3H-
Mientras la relacin bicarbonato/cido carbnico se mantenga 20:1, se mantendr un pH normal.
El valor normal del bicarbonato es de 24 mEq/L, con oscilacin entre 22 y 29 m Eq/L.
Control renal: El nivel de bicarbonato es controlado por el rin a travs del proceso de reabsorcin tubular. Nor-
malmente casi todo el bicarbonato que filtra el glomrulo es reabsorbido, y por eso no hay bicarbonato en la orina.
En condiciones de exceso de bicarbonato en el plasma, cuando su nivel excede de 26 mEq/litro, el bicarbonato es
excretado por el rin y aparece en la orina.
REGULACION DEL EQUILIBRIO ACIDO BASE
Buffers o tampones
La funcin de los Buffers es remover o aadir iones H+ para mantener el pH constante. El principal buffer extracelu-
lar es el bicarbonato, se encuentra en el circuito vascular y lquido intersticial. Capta protones libres, se transforma
en cido carbnico el cual genera dixido de carbono que se libera por va pulmonar.
Extracelulares:
El ms importante es CO2/HCO3 -. La forma cida es voltil, se elimina por va alveolar.

233
 Luis E. Simes

Funcionamiento: Si se aumenta la concentracin de

H+ sern neutralizados por el HCO3- formndose ci-
do carbnico que se disocia rpido en CO2 y H2O. Por
el contrario si se aade base al sistema sta reacciona
con el cido carbnico formando bicarbonato y agua.
La posibilidad del HCO3- de ser regulado con rapidez
por el sistema respiratorio a la vez que el rin puede
reabsorber el bicarbonato hace de este BUFFER un
sistema sumamente eficiente.
Intracelulares:
Fosfatos orgnicos: Es importante en la excrecin/ reabsorcin de H+ ya que los intercambia con Na+ que
a su vez es reabsorbido o excretado.
Protenas: Debido a su condicin anftea, capacidad de modificar su pH de acuerdo a la cantidad de hi-
drogeniones presentes y actuar como cidos o como bases.
Hemoglobina: Este sistema tampn acta solo en el eritrocito y est ligado a la disociacin del oxgeno de
la molcula de hemoglobina. Los tejidos por actividad metablica producen CO2 y H2O que se transfieren
al lquido intravascular e intersticial. El CO2 disuelto dentro del glbulo rojo por accin de la anhidrasa
carbnica lo transforma en acido carbnico que se disocia inmediatamente a CO3H- y H+. Posteriormente
la regulacin se realiza por reabsorcin o excrecin renal.
Regulacin renal: Se realiza a travs de la reabsorcin de bicarbonato y Na+ y excrecin de h+ como amo-
nio o cido fosfrico (H2PO4).
Regulacin pulmonar
El mecanismo de regulacin respiratorio interviene en la regulacin y mantencin del medio interno modi-
ficando de la frecuencia y profundidad respiratoria comandada por el centro respiratorio produciendo
aumento o retencin de CO2.
ANION GAP
La brecha aninica (anion gap) mide la diferencia entre la suma total de los aniones con la de los cationes medidos
y provee una informacin til para establecer la causa de la acidosis metablica.
Si comparamos la suma de los cationes (C+) y la de los aniones (A) principales o medibles, encontraremos una
diferencia aproximada de 10 m Eq/L, que es representada por los aniones no medibles, los cuales se hallan au-
mentados en el plasma en ciertas condiciones clnicas y que provee la informacin para establecer la causa de una
acidosis metablica.
Un valor de 10 m Eq/L de brecha aninica es considerado como normal. Cuando esta diferencia es mayor de 20 m
Eq/L se establece con certeza que existe una acidosis metablica por acumulacin de aniones anormales.
ANION GAP (aniones restantes): Cationes medidos Aniones medidos.
GAP: [Na+]-([HCO3-] + [CL-])
EXCESO DE BASES (EB)
El diagnstico y cuantificacin de la acidosis y de la alcalosis metablica no es tan fcil de identificar como se pu-
eden resolver las alteraciones por modificacin de la eficiencia de la ventilacin. No existe un indicador numrico
para este tipo de alteracin metablica medible directamente como son la PCO2 o el pH.
El pH se mantiene en su nivel normal mientras la relacin bicarbonato/cido carbnico se mantenga en 20:1. Para
cuantificar la acumulacin de cido o de base es necesario medir la cantidad de bicarbonato presente en el plasma
y no es posible medir en forma directa el bicarbonato, sino calcular su valor a travs de diversas frmulas.
El bicarbonato estndar es valor terico de la concentracin de bicarbonato en el plasma de sangre que ha sido
equilibrada a una PCO2 de 40 mm Hg y totalmente oxigenada para lograr una saturacin completa de la hemoglo-
bina. Su valor normal es de 24 (22 a 26) m Eq/litro

234
 Bioqumica

El exceso de base es la cantidad de base (exceso o dficit) que ha sido agregado a la sangre como resultado de una
alteracin metablica primaria o compensatoria y su valor normal es de 0 (+2,5 a 2,5) m Eq/litro.
Exceso de base = HCO3 + 10 (pH 7,40) 24.
PORCENTAJE DE SATURACION DE HEMOGLOBINA
Proporciona una idea aproximada de la oxigenacin tisular. (El oxgeno que llega a las clulas)
El O2 es transportado bajo dos formas:
Un pequeo porcentaje circula disuelto en el plasma, debido a que su solubilidad en el mismo es muy baja
(0,3 ml de O2 en 100 ml de sangre arterial).
El restante 97% es transportado en unin reversible con la hemoglobina.
El porcentaje de saturacin de Hb es la expresin porcentual de la hemoglobina que est ligada al oxgeno.
% Saturacin Hb: Oxigeno combinado con Hb x 100 / Capacidad de oxigenacin
Capacidad de oxigenacin de la hemoglobina: Cantidad de oxgeno que se combina con la Hb a PO2 el-
evada. 20,1 ml de O2 / 100 ml de Hb
Con una PO2 normal en sangre arterial (95 mm Hg) el % saturacin de la Hb es del 97% y se combina con 19,5 ml
de O2 por 100 mg de sangre, mientras que con la sangre venosa mixta (PO2: 40 mm Hg) se satura al 75 %
Curva de disociacin de la hemoglobina

Para PO2 bajas la afinidad por el oxgeno es baja.

Para PO2 altas la afinidad por el oxgeno es mayor.
Esto permite que el oxgeno se libere en los tejidos

P50: Es la presin parcial de O2 necesaria para saturar la hemoglo-

bina al 50%. Este valor corresponde con 25-28 mm de Hg aproxi-
madamente.
Mayor valo menor afinidad de la Hb por el oxigeno
Menor valor mayor afinidad de la Hb por el oxigeno
El monxido de carbono (CO) se une a la hemoglobina mediante una reaccin reversible similar a la que realiza
con el O2, ya que ocupan el mismo lugar en la molcula. El compuesto formado se denomina carboxihemoglobina,
y la cantidad formada depende de la presin parcial de monxido de carbono. El monxido de carbono es 210
veces ms afn por la hemoglobina que el oxgeno; de esta forma, mnimas concentraciones de CO en el
aire respirado, saturarn grandes proporciones de hemoglobina, impidiendo el transporte de O2.
La hipoxemia no es necesariamente marcador de hipoxia tisular. Llamamos HIPOXEMIA a la disminucin de O2 en
sangre arterial. Nos referimos a HIPOXIA cuando se produce disminucin de O2 en los tejidos.
FiO2
FIO2 es la fraccin del oxgeno inhalado o, simplemente, el porcentaje de oxgeno de una mezcla de gases. Por
ejemplo, el aire atmosfrico tiene un FIO2 del 21 %. Si un paciente necesita ventilacin mecnica, el FIO2 suele
estar en un rango del 30 al 40 %.
La PO2 se puede calcular aproximadamente como: (FIO2 x 5) 10 mm Hg

235
 Luis E. Simes

DETERMINACIN DE LACTATO
Algunos instrumentos permiten la determinacin de Lactato, importante en el diagnstico de hipoxemia causada
por sepsis, paro cardiovascular, hipovolemia, alta produccin de cidos pirvico y lctico por tejido neoplsico,
intoxicacin por monxido de carbono, diabetes no controlada.
La metodologa es amperomtrica, en el electrodo de medida se encuentra una enzima: Lactato oxidasa que pro-
duce la siguiente reaccin de xido reduccin:
cido lctico Pirvico + H2O2

2H+ + O2 + 2e-
Se aplica un potencial polarizante que desencadena el flujo de electrones.
Valor de referencia: 1- 2 mmol / l

DISTURBIOS CLNICOS SIMPLES DEL ESTADO ACIDO BASE

Las alteraciones cido base pueden tener un origen metablico o respiratorio.
El contenido de CO2 de por s es, un indicador inadecuado del equilibrio cido-base, puesto que esta prueba es
slo un reflejo del bicarbonato srico. Para poder identificar estas alteraciones es necesario tomar una muestra de
sangre arterial para determinar el pH y la PCO2. En la prctica clnica se pueden presentar situaciones complejas
y los valores de los gases sanguneos pueden estar indicando una compensacin ante la alteracin primaria, o bien
pueden coexistir dos ms alteraciones primarias, difciles de interpretar.
La concentracin de hidrogeniones se puede calcular a partir del componente metablico (bicarbonato) y el com-
ponente respiratorio (PO2) de la siguiente manera:
[H+] = 24 x pCO2 / [HCO3-]
Clasificacin
pCO2 [H+] Acidosis respiratoria
pCO2 [H+] Alcalosis respiratoria
[HCO3-] [H+] Acidosis Metablica
[HCO3-] [H+] Alcalosis Metablica
ACIDOSIS METABOLICA: [H+] [HCO3-] pH
Hipocapnia secundaria por hiperventilacin por acidemia
Causas:
Produccin aumentada / excrecin disminuida de cidos orgnicos no voltiles /disminucin de la excrecin de
HCO3-
El bicarbonato se puede perder durante una diarrea (el contenido intestinal es alcalino) o por la orina (alteracin
de la reabsorcin del bicarbonato a nivel del tbulo contorneado proximal)
Tambin puede disminuir la cantidad de bicarbonato por un aporte aumentado exgeno de cidos (cloruro de
arginina) o por aumento de acido lctico por una hipoxemia por paro cardiaco.
Compensacin fisiolgica
Respiratoria. Aumento de frecuencia respiratoria. Si la causa no es renal el rin elimina H+ como NH4+ o por el
sistema de fosfatos, y retiene HCO3-.
ALCALOSIS METABOLICA [H+] BIC pH
Ganancia de bases HCO3- por el aumento de su ingreso o la disminucin de su excrecin.
Prdida de cidos fijos.

236
 Bioqumica

Causas:
Vmitos
Tratamientos anticidos.(Hidrxido de aluminio)
Terapias prolongadas con diurticos (furosemidas)
Cetosis por ayuno
Transfusin masiva de sangre (Envenenamiento por citratos)
Compensacin fisiolgica
Respiratoria fisiolgica (Hipoventilacin)
El rin disminuye la formacin de amonio y la reabsorcin de HCO3-.
ACIDOSIS RESPIRATORIA: [H+] pCO2 arterial pH
Hipercapnia primaria.
Causas:
La acidosis respiratoria se define como el trastorno cido base generado por una elevacin de la tensin o presin
parcial del dixido de carbono (PCO2). La causa siempre es una disminucin de la ventilacin alveolar por enfer-
medad pulmonar o por depresin respiratoria.
Su forma aguda se presenta con elevacin de la PCO2 y bicarbonato normal, por cuanto la compensacin renal
(metablica) es lenta. Pero en su forma crnica coexiste la PCO2 elevada con una concentracin alta de bicarbon-
ato, sta como expresin de la compensacin renal.
Depresin del centro respiratorio por drogas
Trauma centro respiratorio Infarto
Hemorragia o tumor
Trauma cervical
Paro cardaco o hipoxia cerebral
Relajante neuromusculares
Toxinas organofosforados
EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crnica)
Traumatismo torcico
Inadecuada ventilacin mecnica
Obstruccin va area
Compensacin fisiolgica:
Amortiguacin del exceso de CO2 por glbulo rojo.
Compensacin lenta por rin: Reabsorcin de HCO3- y excrecin de H+ como NH4+
ALCALOSIS RESPIRATORIA [H+] pCO2 pH
Hipocapnia por hiperventilacin con deplecin de cido carbnico

237
 Luis E. Simes

Causas:
Alteraciones en el centro respiratorio por injuria
Ansiedad-estrs
Intoxicacin con salicilatos
Neumona
Asma
Enfisema
Ventilacin pulmonar asistida ms insuficiencia pulmonar progresiva (distres respiratorio) Alteracin ms
comn en internacin de pacientes crticos.
Compensacin fisiolgica
Amortiguacin por glbulo rojo, protenas plasmticas.
Compensacin renal en fase crnica: Disminucin reabsorcin de HCO3- y disminucin de excrecin de H+ (CLNH4)
Intervalo de referencia

Sangre arterial Sangre venosa

pH 7,35 -7,45 7,33-7,43

pCO2 mm Hg 35 -44 38-50

pO2 mm Hg 85 - 97 --

HCO3- mEq/l 22 - 26 23-28

EB mEq/l 0,0 2 0.0 2

METODOLOGIA
La determinacin de la gasometra en el laboratorio clnico se emplea para el estudio de alteraciones respiratorias,
del equilibrio A-B y para establecer el estado de ventilacin y oxigenacin del paciente generalmente crtico.
El anlisis de los gases sanguneos involucra la medicin directa que el equipo hace del pH, PO2 y PCO2.
A partir de estas mediciones se puede calcular de manera matemtica otros parmetros como el bicarbonato, el
exceso y dficit de base, la saturacin de oxgeno, el contenido total de oxgeno.
La muestra debe ser de sangre arterial tomada en anaerobiosis en jeringas heparinizadas y selladas con obtura-
dores, para ser trasportadas al laboratorio para su procesamiento a la brevedad.
Los analizadores de gases sanguneos usan tres tipos de electrodos para determinar el pH, PCO2 y PO2 en la sangre.
Debido a que los cambios en la temperatura afectan las mediciones, los electrodos y la cmara reservorio de la
muestra estn localizadas dentro de un ambiente controlado a temperatura constante de 37 C (temperatura
corporal).
Antes de la introduccin de las muestras sanguneas, los electrodos son calibrados con concentraciones conocidas
de buffers estndar y de soluciones calibradoras.
Una vez realizada la calibracin, la muestra sangunea es inyectada o aspirada dentro de la recmara de muestras
para su medicin.

238
 Bioqumica

Al terminar el anlisis, algunos equipos expulsan la muestra hacia un contenedor y limpian el sistema con solucio-
nes acuosas, otros utilizan un cartucho desechable que se retira para ser desechado al terminar el proceso.

1, ELECTRODO DE pH (Ver Tcnicas electroqumicas)

2, ELECTRODO DE pCO2 (Ver Tcnicas electroqumicas)

3. AMPEROMETRIA (Ver Tcnicas electroqumicas)
Los analizadores de gases sanguneos pueden tambin corregir resultados de acuerdo a la temperatura que tena
el paciente cuando se tom la muestra. La fraccin inspirada de oxgeno (FiO2) deben ser ingresados como dato
extra en las mediciones de los instrumentos.

Errores frecuentes

Procesamiento inadecuado de la muestra:

La entrada de aire en la muestra, bien en la jeringa de extraccin en la cmara de medida del instru-
mento.

Demora en la realizacin del anlisis. Esto determina el consumo de O2 por parte de las clulas sanguneas
y consiguiente formacin de CO2.

Alteraciones en los electrodos:

Se pueden contaminar con las protenas de la muestra. Para evitarlo, se debe pasar una solucin despro-
teinizante con frecuencia.

El envejecimiento de la membrana del electrodo de CO2, que se hace entonces permeable a los hidrogeni-
ones. Se debe cambiar peridicamente la membrana.

Contaminacin de los tampones: Se debe vigilarlos, comprobndolos peridicamente y cambiarlos.

Cmo iniciar el anlisis de gases arteriales?
1. Verificar si el anlisis es consistente con los datos que se obtienen:
Existe una interrelacin entre la concentracin de hidrogeniones (H+) y la concentracin plasmtica de su amor-
tiguador (HCO3-). Esta interrelacin se expresa en la siguiente frmula (Ecuacin de Hendersson)
(H+) =24 PCO2 / (HCO3-)
Para comprobar si el informe de gases arteriales aporta resultados coherentes y veraces, hay que calcular la con-
centracin de hidrogeniones de acuerdo al valor de PCO2 y de HCO3- informados y comprobar si corresponden al
pH registrado.
Comparar el valor obtenido por la frmula de hidrogeniones y comparar con el pH medido.

239
 Luis E. Simes

Para obtener el valor de 7,4 por la ecuacin de HH,

la PCO2 debe ser en 40 mm Hg y el COH3- 24 m
Eq/l. Estos valores son con- siderados patrones para el
anlisis.

METABOLISMO DE GLUCIDOS

Analizar el pH: si es menor a 7,4 podemos considerar que estamos frente a una acidemia, si es mayor de 7,4 se
habla de alcalemia.
Si el pH es menor de 7,4 y el pCO2 mayor de 40 mm Hg los datos indican que estamos frente a una acidosis respi-
ratoria. Si el CO3H- es menos a 24 mEql/l es una acidosis metablica.
Cuando el pH es mayor de 7,4 y pCO2 es menor a 40 mm Hg es una alcalosis respiratoria, y si el CO3H-es mayor de
24 mEql/l es una alcalosis metablica.
Alcalosis respiratoria: si PCO2 sustancialmente es <40mmHg
Alcalosis metablica: si bicarbonato es >24 mEq/l
Acidosis respiratorio: si PCO2 es >40 mm Hg
Acidosis metablica si bicarbonato es <24 mEq/l
3. Determinar Anin Gap: Na-(Cl + Bic) (Aumentado en acidosis metablica)
4. El organismo desencadena fisiolgicamente diferentes mecanismos compensatorios para mantener la homeo-
stasis.
Los defectos respiratorios primarios (CO2 pulmn) se compensan por va renal (CO3H-). Entonces, hay que dife-
renciar un efecto primario agudo de uno crnico. En un evento agudo la compensacin renal es ms lenta.
Cuando se detecta un desequilibrio A-B primario hay que determinar si es agudo o crnico y si est compensado.

240
 Bioqumica

CAPITULO 10

FSIOLOGIA Y FUNCION RENA

FISIOLOGIA RENAL

El aparato urinario est compuesto por dos riones, dos urteres, una vejiga y una uretra.

El rin consta de tres capas: la corteza (capa exterior), la mdula y la pelvis renal. La sangre fluye a la corteza y
la mdula a travs de la arteria renal, que se ramifica en arterias cada vez ms pequeas. Cada una de las arterias
termina en una unidad de filtracin sangunea denominada nefrona.

La nefrona est compuesta de un glomrulo a travs del cual se filtra el lquido desde la sangre (filtracin glomeru-
lar) y un tubo largo, en el que el lquido filtrado (reabsorcin y secrecin tubular) es convertido en orina.

La sangre entra en el glomrulo a travs de la arteriola aferente y sale por la eferente. El glomrulo es una red de
capilares que se ramifican encerrados en la cpsula de Bowman (continuidad de las clulas epiteliales que rodean
a los capilares glomerulares).

La integridad estructural y funcional de la pared glomerular es fundamental para el mantenimiento de la funcin

renal normal. Su prdida ocasiona patologas como hematuria, proteinuria, descenso del filtrado glomerular.

Este ultrafiltrado pasa posteriormente a lo largo de los tbulos (tbulo proximal, asa de Henle, tbulo contor-
neado distal, tbulos conectores y tbulos colectores corticales y medulares), modificndose: por reabsorcin
(extraccin de una sustancia del filtrado) y por secrecin (incorporacin de una sustancia al filtrado).

Aparato yuxtaglomerular son clulas especializadas de la arteriola aferente y mcula densa que producen secre-
cin de renina.

Funciones del rin

Participa en el mantenimiento de la homeostasis (medio extracelular constante), mediante la excrecin de pro-

ductos de desecho del metabolismo (urea, creatinina, cido rico) y, del equilibrio hidromineral por medio de la
excrecin de agua y solutos (sodio, potasio, hidrogeniones) por cambios en la reabsorcin o secrecin tubular.
Funcin hormonal

Regula la presin sangunea a travs de la secrecin de Renina que junto con la Angiotensina responden
a la hipoperfusin provocando vasoconstriccin y reabsorcin de sodio.

Secrecin de Eritropoyetina hormona que regula la produccin de las clulas rojas de la sangre actuando
sobre clulas precursoras en la mdula sea, favoreciendo su multiplicacin y diferenciacin.

Produccin de las formas activas de la vitamina D.- 1,25 (OH)2 colecalciferol.

Formacin de orina
Es el producto de 3 procesos que realiza el rin: Filtracin glomerular, reabsorcin y secrecin tubular.

241
 Luis E. Simes

Filtracin glomerular
La sangre arterial que llega al rin fluye
por los capilares glomerulares a gran
presin, se filtra sin gasto de energa
metablica, sino como resultado de un
equilibrio entre la fuerza hidrosttica y la
onctica.
El agua y los solutos del plasma sanguneo como la glucosa, aminocidos, sales y urea, atraviesan las paredes de
los capilares y de cpsula de Bowman. Slo los elementos formes de la sangre y las protenas plasmticas no pasan
la membrana glomerular por su gran tamao. El plasma que pasa por el glomrulo pierde un 20 % de su volumen
para formar el filtrado glomerular. Por lo tanto, el lquido que pasa a la cavidad de la cpsula, llamado filtrado glo-
merular, es similar al plasma sanguneo sin protenas.
Este filtrado (altamente diluido) fluye hacia el tbulo contorneado proximal. A su vez, la sangre concentrada e
hipertnica de los capilares glomerulares es transportada por la arteriola eferente, hacia la red capilar peritubular.
Esta sangre recupera el agua del filtrado que paso hacia el tbulo contorneado proximal por diferencia osmtica.
La velocidad de la filtracin glomerular, aumenta y disminuye con la presin arterial y, en consecuencia la presin
de la filtracin. La intensidad normal de filtracin glomerular es de 125ml por minuto, que equivale a 180 litros
por da. La funcin tubular reduce los 180 litros de lquido filtrado por da hasta cerca de un litro diario de lquido
excretado; concentra y modifica su composicin por medio de transporte activo y pasivo.
Reabsorcin y secrecin tubulares
La reabsorcin es la devolucin del agua filtrada y de muchos solutos al torrente sanguneo. Normalmente, cerca
del 99% del agua filtrada se reabsorbe Los solutos reabsorbidos por el tbulo contorneado proximal por procesos
activos o pasivos son la glucosa, aminocidos, urea e iones como el Na+ (sodio), K+ (potasio), Ca2+ (calcio), Cl- (clo-
ruro), HCO3- (bicarbonato) y HPO42- (fosfato).
En el tbulo proximal se reabsorbe el 90% del agua filtrada que arrastra el 40% de la urea, toda la glucosa, el calcio,
fsforo, los aminocidos, cido rico y el 70% de potasio.
En el asa de Henle, en su porcin delgada descendente se reabsorbe el 20% del cloro y sodio y 15% ms de agua.
En la porcin ascendente del asa de Henle donde se une con el tbulo distal est la bomba de Cloruro donde se
reabsorbe agua y cloruro. El magnesio se reabsorbe todo a lo largo del asa.
En el tbulo distal por accin de la hormona aldosterona intercambia Na+ de la luz tubular por K+ y H+. Se produce
reabsorcin de HCO3- con formacin de NH4+ y reabsorcin de Calcio por intervencin de la Paratohormona (PTH)
La Hormona Antidiurtica (ADH) es una hormona liberada principalmente en respuesta a cambios en la osmolari-
dad srica o en el volumen sanguneo. Produce la concentracin de orina y la reduccin de su volumen, estimu-
lando la reabsorcin de agua y sales a nivel del tbulo colector.
La mayor parte de las protenas pequeas y de los pptidos que se filtran tambin se reabsorben, por pinocitosis.
La secrecin tubular es la transferencia de las sustancias desde la sangre y las clulas tubulares hacia el lquido
tubular. Las sustancias secretadas son iones hidrgeno (H+), K+, y amonio (NH4+), creatinina y ciertos frmacos
como la penicilina. El objetivo de la secrecin tubular es
Secrecin de H+ ayuda a controlar el pH sanguneo
Secrecin de otras sustancias contribuye a la desintoxicacin.

242
 Bioqumica

INTERPRETACION DEL ANALISIS DE ORINA

Es la prueba ms solicitada en el laboratorio clnico junto con el hemograma y la bioqumica bsica.
Un examen de orina revela afecciones renales y del tracto urinario, hepatopatas, enfermedades hemolticas y
trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono. Si bien es un examen de rutina de gran utilidad, es una
tecnologa con poco prestigio y relegada, que an carece de una metodologa para control de calidad apropiada y
cuya estandarizacin es muy complicada.
Es de fundamental importancia la calidad de la muestra que se vaya a procesar. Dos etapas son de suma impor-
tancia en el proceso: la preparacin del paciente relacionada con la recogida de la muestra y la demora en la real-
izacin del anlisis.
Se debe explicar detalladamente al paciente el procedimiento correcto para la obtencin de la muestra: Se debe
recolectar el chorro medio de la primera orina matinal (o de una muestra con 3 horas mnimo de retencin uri-
naria), previo higiene de genitales externos con agua y jabn neutro. La muestra debe tomarse alejada del perodo
menstrual y remitir al laboratorio inmediatamente, ya que debe procesarse en el trmino de 2 horas de emitida.
El anlisis de orina consta de:
1. Observacin del aspecto de la muestra
2. Examen qumico
3. Examen microscpico

EXAMEN FSICO
La apariencia de la muestra se refiere al grado de turbidez de la orina. Si bien normalmente es clara, la orina tam-
bin puede verse turbia debido a precipitacin de cristales (uratos y fosfatos amorfos, oxalato de calcio o cido
rico), la presencia de clulas (bacterias, eritrocitos, leucocitos, clulas epiteliales, etc.). La presencia de espuma
residual orienta a la deteccin de protenas.
Color: el espectro normal va desde el cristalino al amarillo oscuro, dependiendo de su concentracin.

243
 Luis E. Simes

EXAMEN QUMICO
El examen qumico habitualmente se realiza con tiras reactivas (Multistix y otras) que contienen reas con diferen-
tes reactivos especficos, indicadores y buffers (pH, glucosa, hemoglobina, cetonas, etc.). El mtodo se basa en la
Reflectometra.
Densidad:
Indica la cantidad relativa de solutos que contiene un volumen definido de orina, corresponde prcticamente a un
80% de urea. Otras sustancias aumentan patolgicamente la densidad urinaria independientemente de la capaci-
dad de concentracin renal, como la glucosa y las protenas.
La forma ms correcta para evaluar la capacidad de concentracin renal es la determinacin de la osmolaridad
urinaria, pero son muy pocos los laboratorios que cuentan con un osmmetro.
Los valores 1.005 g/l puede producirse por alteracin de los mecanismos de concentracin tubular como ocurre
en la pielonefritis, en las nefritis, diabetes inspida nefrognica o en la insuficiencia renal.
Otra situacin es cuando existe sobrecarga hdrica producindose poliuria (intoxicacin hdrica). Cuando existe
deficiencia de la hormona antidiurtica, se produce diabetes inspida y el volumen urinario supera los 3.000 ml/da
y la densidad urinaria es cercana a 1.000 g/l.
p H
La orina es normalmente cida. Los valores de pH oscilan entre 5 y 6 con un rango de 4,5 a 8,5.
La causa ms comn de hallar un alcalino (pH 7) es cuando la muestra no ha sido procesada inmediatamente, ha
permanecido a temperatura ambiente, se ha producido el escape de CO2 y la urea se ha convertido en amonaco.
Si se sospecha acidosis tubular, el pH se debe determinar usando un electrodo especfico y al mismo tiempo ob-
tener un estado cido base (EAB) sanguneo.
Protenas
El valor normal de proteinuria es <0,2 g/l o tira reactiva = Negativa.
En nios se puede hallar proteinuria no significativa (trazas a +) en los estados febriles, o luego a ejercicio fsico u
ortosttica (postural) .Es transitoria y no indica patologa.
Los valores mayores a ++ corresponden a proteinuria masiva.

244
 Bioqumica

El resultado positivo en la tira reactiva debe confirmarse con una proteinuria cuantitativa de 24 horas.
Glucosa
El valor normal de la glucosa en orina es<50 mg/dl (tira reactiva = Normal).
Su presencia puede deberse a una disminucin de la reabsorcin tubular o a niveles sanguneos que superan el
umbral renal (estados hiperglucmicos).
Cetonas
Las cetonas aparecen en la orina cuando existe un metabolismo anormal de carbohidratos, por lo cual es muy
comn hallarlas durante el ayuno o cuando existen vmitos.
La cetonuria tiene importancia clnica slo en la diabetes mellitus.
Sangre
La tira reactiva positiva indica tres posibilidades: hematuria, hemoglobinuria o presencia de mioglobina.
La observacin del sedimento en la muestra de orina centrifugada orientar el diagnstico. Si hay eritrocitos esta-
mos en presencia de hematuria donde la muestra tendr aspecto opaco. En el caso de hemoglobinuria la muestra
ser translcida. Est relacionado con la densidad de la orina y la resistencia globular. La patologa asociada a mio-
globinuria es el dao muscular severo.
Bilirrubina
La reaccin positiva para la bilirrubina indica la presencia de enfermedades hepticas (colestasis)
Urobilingeno
El urobilingeno est presente en orina cuando en la sangre hay aumento de bilirrubina no conjugada, en general
en las anemias hemolticas o en la hepatopatas.
Leucocituria
Se detecta por la accin de la estearasa citoplasmtica leucocitaria que produce la hidrlisis del reactivo de la tira
y cambia el color.
Debe confirmarse por microscopa.
Nitritos
Detecta bacteriuria pero con baja sensibilidad (50%). La enzima reductasa bacteriana metaboliza los nitratos uri-
narios en nitritos
3. Examen microscpico
Para el anlisis microscpico, se debe estandarizar la preparacin de la muestra para poder hacer comparaciones
vlidas: 10 ml de muestra se debe centrifugar a 2000 r.p.m. por 5 minutos. Luego se descarta el sobrenadante,
dejando 0.5 o 1ml (segn el procedimiento) para re suspensin del sedimento. Finalmente, una gota se coloca
sobre un portaobjeto y se cubre con un cubreobjetos para luego ser observado al microscopio.
Clulas
Normalmente se observan varios tipos de clulas provenientes del sistema excretor; poca cantidad de clulas ep-
iteliales, leucocitos < 5/campo y hemates 0 a 5/campo.
Glbulos rojos
Los glbulos rojos (GR) presentes en la orina pueden provenir del sistema urinario o genitales.
La hematuria microscpica corresponde a la presencia de un nmero >5 de GR por campo. La presencia de hema-
tes dismrficos, en su mayora acantocitos lobulados (forma que adopta el GR al atravesar la membrana basal del
glomrulo) indican una alteracin de la membrana glomerular. La morfologa debe ser confirmada por observa-
cin en un microscopio de contraste de fase.
Los hemates dismficos deben diferenciarse de los GR crenados. Estos ltimos son GR que han sido hemolizados
por alteracin del pH urinario.

245
 Luis E. Simes

Piocitos
Los piocitos son leucocitos modificados e indican infeccin del tracto urinario, aunque su ausencia no la descarta.
Leucocitos
La patologa ms frecuente asociada a leucocituria (>5 leucocitos por campo) es la infeccin urinaria.
Cilindros
Los cilindros se originan por precipitacin de una mucoprotena de Tamm Horsfall en la luz de los tbulos renales.
Los cilindros hialinos normalmente no se encuentran, pero si pueden observarse en las glomerulopatas y en forma
transitoria en procesos de deshidratacin y fiebre.
Los cilindros celulares, compuestos por clulas epiteliales tubulares se transforman en granulares (clulas tubula-
res necrosadas o leucocitos) debido al trayecto lento que realizan a travs del tbulo. Se ven en la mayora de las
enfermedades renales.
Cristales
El tipo de cristales observado en la orina depende del pH urinario.
En las orinas cidas se ven cristales de oxalato de calcio, cido rico o uratos. En orinas alcalinas se pueden encon-
trar cristales de fosfatos y de carbonato de calcio.
Los nicos cristales que indican patologas son los de cistina, leucina, tirosina y colesterol.

EXCRECIN DE LOS PRODUCTOS

DEL METABOLISMO NITROGENADO
Balance nitrogenado
En el ser humano, la principal fuente de sustancias nitrogenadas son las protenas de la dieta. Como estos com-
puestos, a diferencia de carbohidratos y grasas, no se almacenan como reserva, los niveles en las clulas se regulan
por el equilibrio entre anabolismo y catabolismo, es decir un balance entre biosntesis y degradacin de protenas,
a lo que tambin se conoce como recambio normal de protenas. Por tanto, un adulto sano que ingiere una dieta
variada y completa se encuentra generalmente en situacin de equilibrio nitrogenado, un estado en el que la
cantidad de nitrgeno ingerida cada da es equilibrada por la cantidad excretada por heces, orina y sudor, sin que
se produzca ningn cambio neto en la cantidad de nitrgeno del organismo.
Situaciones de equilibrio nitrogenado negativo

Senectud
Fiebre severa
Diabetes no controlada
Neoplasias avanzadas
Perodo post-quirrgico
Quemaduras extensas
Sepsis e infecciones
Situaciones de equilibrio nitrogenado positivo
Inanicin
Mujeres gestantes
Desnutricin proteica
Niez (crecimiento y desarrollo)

246
 Bioqumica

1. UREA

La urea es el principal compuesto derivado del amoniaco, que se forma por el catabolismo de los aminocidos y
las protenas. El amonaco se transforma en las mitocondrias de los hepatocitos en urea en 5 pasos enzimticos
conocido como el ciclo de la urea.
Dada la toxicidad del NH4+, las concentraciones cambiantes por la dieta se van ajustando muy finamente gracias
a la eficiencia del ciclo de la urea.
Se conocen algunos cuadros clnicos por bloqueos parciales del ciclo de la urea. Se caracterizan por hiperamone-
mia, retraso mental, vmitos y aversin a comidas ricas en protenas.
Inters clnico de la determinacin analtica de urea
El aumento de la concentracin de la urea en sangre est estrechamente relacionado con alteraciones en su elimi-
nacin por lo que es un indicador en el diagnstico de insuficiencia renal y como mtodo sencillo de seguimiento
de una insuficiencia renal ya instaurada.
La urea se elimina por va renal, siendo filtrada fcilmente a nivel glomerular, una vez filtrada, se reabsorbe en un
40% a nivel de los tbulos proximales. Si hay falla renal, no se filtra se acumula en sangre.
Origen del aumento de la concentracin de urea.
1. Extrarenal: enfermedad heptica, hemorragia digestiva, aumento de catabolismo de protenas, exceso
proteico en la dieta, hipovolemia (deshidratacin, quemaduras), fallo cardaco.
2. Nefroptica (insuficiencia renal aguda o crnica).

a) Insuficiencia renal aguda (glo-

merulonefritis aguda, pielone-
fritis, neoplasias, obstruccin
por clculos renales o tu-
mores).
b) Insuficiencia renal crnica
(glomerulonefritis crnica,
neoplasias, diabetes, hiper-
tensin arterial)

247
 Luis E. Simes

2. ACIDO URICO
Es el producto final de la degradacin de las purinas (adenina, guanina e hipoxantina) procedentes del catabolismo
de los cidos nucleicos (ADN, ARN) mediada por la enzima xantinooxidasa en el hgado.
Las purinas tienen origen:
1. Exgeno: consumo de protenas de origen animal. (El nivel en vegetarianos es ms bajo)
2. Endgeno: con la renovacin celular.

Inters clnico de la determinacin analtica de cido rico

El 60% del cido rico es eliminado por la orina, mediante filtrado glomerular; luego es reabsorbido en los tbulos
renales casi en un 90% del total; un pequeo porcentaje es eliminado con la bilis (va heptica) y los jugos pan-
creticos y gstrico.
Las alteraciones de su concentracin se manifiestan como hiper o hipo uricemia y nos pueden indicar una serie
de patologas.
Hiperuricemia:
1. Origen metablico :
Incremento en la sntesis por dieta rica en purinas
Lisis celular (leucemias)
Trastornos metablicos hereditarios (dficit enzimtico)
2. Origen renal .En esta situacin clnica se observa aumento de cido rico en sangre y no en orina )
La hiperuricemia causa trastornos a nivel articular por depsito de uratos en las articulaciones produciendo una
enfermedad llamada gota. Tambin por depsito en riones es causal de litiasis.
Hipouricemia:
Es causada por:
1. Dficit enzimtico de xantinooxidasa.
2. Falla en la reabsorcin tubular (no hay reabsorcin o la secrecin es excesiva).
Hipouricemia con Uricosuria elevada. La causa de una hipouricemia es el aumento de la eliminacin renal (dficit
de ADH) y existe riesgo de litiasis renal.
Hipouricemia con Uricosuria baja: La causa es debida a la insuficiente sntesis de cido rico.

248
 Bioqumica

3. CREATININA
La creatina es un compuesto nitrogenado no proteico.
Se sintetiza en los riones, el intestino delgado, el pncreas y el hgado a partir de los aminocidos metionina,
arginina y glicocola. Es importante para el metabolismo muscular porque constituye un importante mecanismo de
almacenamiento de fosfato de alta energa (fosfocreatina); la mayor parte de creatina se encuentra a nivel muscu-
lar en forma de fosfocreatina.
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular.
Es un anhdrido de la creatina que se forma mediante una reaccin espontanea e irreversible y su formacin tiene
una relacin directa con la masa muscular, es exclusivamente producto de excrecin de la creatina.
Inters clnico de la determinacin analtica de creatinina
Es un marcador precoz de la funcin renal, fundamentalmente de la filtracin glomerular.
Se elimina en su mayora va renal (filtrado glomerular) y una pequea cantidad por las heces.
Su nivel plasmtico es bastante constante, de manera que no se modifica ni con el ejercicio ni con las variaciones
del catabolismo, por lo que cualquier incremento del nivel srico indicara una alteracin de la funcin renal: in-
suficiencia renal (suele ser paralelo al aumento de urea), lesin renal, prerrenal, sistmicas o vasculares del rin
u obstruccin.
Diferencia entre urea y creatinina como marcadores sricos de alteracin renal:
Urea: indica insuficiencia renal rpidamente pero su aumento tambin depende de la ingesta proteica,
catabolismo proteico endgeno, pero puede verse alterada por otras causas como hemorragias digestivas
y hepatopatas.
Creatinina: aunque aumenta luego que la urea, siempre indica insuficiencia renal. No se modifica ni con
el ejercicio ni con variaciones del catabolismo y no depende de la dieta.
La urea puede encontrarse elevada y la creatinina normal, en hepatopatas. (Evaluar enzimas hepticas)
Determinaciones para evaluacin de la funcin renal en el laboratorio clnico
Tasa de filtracin glomerular
La determinacin de la creatinina srica es superior a la de urea como indicador del filtrado glomerular, dado que
no est influida por la ingesta proteica o por deshidratacin.
Mejor informacin se obtiene con la determinacin de la tasa de filtracin glomerular, que se puede determinar a
partir del clculo de Aclaramiento de creatinina en base a la creatinina srica y la excrecin urinaria de creatinina
en orina de 24 horas.
Aclaramiento de creatinina= (mg/dl creatinina - orina) x (volumen de orina /24h)
(mg/dl creatinina - suero) x 1440 minutos
Dado que la concentracin de creatinina en cada individuo depende de la masa muscular, para estandarizar los
resultados se realiza una correccin por superficie corporal.
Acl Cre (corregido): Acl Cre(calculado)*1,73/0,007184*Peso0,425 *Altura0,725
En los casos en que la recoleccin de orina sea problemtica (error preanalitico asociado a la recoleccin), se han
desarrollado varias frmulas que permiten la estimacin a partir de la creatinina srica. De entre ellas destacan
dos por haberse demostrado una buena correlacin con el filtrado glomerular, la frmula de Cockroft y Gault y la
frmula modificada del Modification of Diet in Renal Disease. (MDRD-4)
FG (ml/min/1.73m) = 186 x creatinina plasmtica (mg/dl) 1154 x edad 0.203 x (0.72 si mujer) x (1.212
si raza negra)
La valoracin del filtrado glomerular (FG) es el mejor ndice para evaluar la funcin renal, diagnstico de la enfer-
medad renal crnica. (ERC)

249
 Luis E. Simes

La presencia de insuficiencia renal se ha definido recientemente por valores de creatinina iguales o superiores a
1.5mg/dl en los varones y 1.4 mg/dl en las mujeres, o por un filtrado glomerular estimado inferior a 60ml/min.
No obstante, elevaciones de la creatinina de menor grado (entre 1.3 y 1.5 en los varones y entre 1.2 y 1.4 en las
mujeres) se asocian con un incremento del riesgo cardiovascular en el hipertenso.
Proteinuria
Se considera proteinuria fisiolgica la excrecin menor a 150 mg/da con albuminuria < 30 mg/da.
En condiciones normales, un individuo sano elimina entre 40 -80 mg de protenas/da, de los cuales aproximada-
mente 10-15 mg corresponden a albmina y el resto est formada por protena de Tamm-Horsfall (matriz de los
cilindros) y por pequeas cantidades de protenas de bajo peso molecular.
Resulta muy importante siempre descartar su TRANSITORIEDAD. Su deteccin, en dos ms ocasiones durante un
periodo igual o superior a tres meses (proteinuria persistente), es un signo de lesin renal y constituye, junto con
la estimacin del FG, la base sobre la que se sustenta el diagnstico de Enfermedad renal crnica (ERC).
Se debe cuantificar en orina de 24 hs de recoleccin, aunque se acepta con mejor criterio en la actualidad calcular
la relacin entre la concentracin de proteinuria y creatininuria en la primera orina matinal.
Microalbuminuria
La presencia de albuminuria indica un pasaje elevado de albmina a travs de membrana glomerular. El trmino
Albuminuria se prefiere en la actualidad para informar cantidades pequeas de albmina en orina, y se lo designa
como marcador indiscutido de riesgo de progresin de la enfermedad renal y factor de riesgo independiente de
morbimortalidad cardiovascular.
Al igual que la proteinuria se busca la deteccin de la Albuminuria persistente en 2 de 3 muestras de orina en un
perodo de 3 meses.
Se puede realizar la determinacin en orina de 24 hs o en la primera orina matinal como relacin con la creatinin-
uria.
Se considera albuminuria valores entre 30 y 300 mg/g de creatinina y proteinuria franca cuando el valor de la rel-
acin supera los 300 mg/g.

FISIOPATOLOGA DE LA FUNCIN RENAL

Insuficiencia renal aguda
Se produce por falla renal repentina con retencin de metabolitos nitrogenados: aumento de urea, creatinina y ci-
do rico, se puede retener tambin iones sodio y magnesio, se produce acidosis metablica y retencin de potasio.
El aumento de la urea puede tener origen renal, pre renal o post renal.
El origen pre renal puede deberse a perfusin renal disminuida.
La urea post renal se origina por obstruccin mecnica: litiasis, prostatitis, tumores de vejiga.
La renal el origen est en el propio rin: vasculitis, hipertensin arterial maligna, glomerulonefritis.
Diagnstico de laboratorio:
El diagnostico se basa en diferentes pruebas de laboratorio y evaluacin de la clnica exhaustiva.
La retencin de productos nitrogenados se controla con urea y creatinina. Los trastornos electrolticos y dese-
quilibrio cido base se controlan con la determinacin de Na+ y K+ para determinar la hipo o hipernatremias y la
hiperpotasemia con valores por sobre 7,0mEq/l. Control de Calcio y Fosforo para el control de hiperfosfatemia y
hipocalcemia.

Insuficiencia renal crnica

La Insuficiencia Renal Crnica (IRC) es una prdida progresiva (por 3 meses o ms) e irreversible de las funciones
renales, cuyo grado de afeccin se determina con un filtrado glomerular (FG) <60 ml/min/1.73 m2. Como conse-
cuencia, los riones pierden su capacidad para eliminar desechos, concentrar la orina y conservar los electrolitos
en la sangre.

250
 Bioqumica

Las causa principales que la originan es la Diabetes mellitus y la hipertensin arterial tambin enfermedades sis-
tmicas como lupus, vasculitis, mieloma.

Glomerulonefritis
En su forma tpica se produce por infecciones streptococcicas. Se produce una estimulacin multifactorial del
sistema inmune que repercute en la membrana del glomrulo y el tejido renal debido a la acumulacin de leucoci-
tos en la cpsula de Bowman.
El anlisis de orina constituye la base del control y seguimiento de la enfermedad.
Estudio de las protenas eliminadas y la depuracin de creatinina permite conocer la funcin renal residual.
La determinacin de autoanticuerpos (ADNA, FAN), complemento, factor reumatoideo, permiten caracterizar la
enfermedad.

Sndrome nefrtico
El sndrome nefrtico es un trastorno renal caracterizado por aumento en la permeabilidad de la pared capilar
de los glomrulo renales que conlleva a la presencia de niveles altos de protena en la orina(proteinuria), niveles
bajos de protenas en plasma, ascitis y en algunos casos, edema y una predisposicin para la coagulacin.
Esta enfermedad se caracteriza por parmetro bioqumicos caractersticos:
Hipoalbuminemia
Proteinuria marcada
Hipercolesterolemia y hipertrigliceridemia.
Puede ser una afeccin primaria o secundaria a otra enfermedad subyacente: glomerulonefritis, enfermedad sis-
tmica autoinmune, enfermedades metablicas.
METODOLOGIA
DETERMINACIN DE UREA
En el desarrollo de todos los mtodos se utiliza en un primer paso una reaccin enzimtica para desdoblar la Urea
en amonio. La determinacin del amonio resultante puede ser determinada colorimtricamente en una reaccin
espectrofotomtrica de punto final o acoplar una segunda reaccin enzimtica cintica donde se mide la velocidad
de desaparicin de un producto coloreado el NADH al reaccionar el amonio con el sustrato de la enzima glutamato
dehidrogenasa.
Reaccin:
1 Paso: Enzimtica con ureasa para convertir urea en NH4+ y CO2.
2 Paso:
a) Fenol/Hipoclorito Azul (Colorimtrica, medicin espectrofotomtrica)

b) Oxoglutarato/NADH (GLDH) glutamato y NAD+

UREA + 2H2O 2 NH4+ + CO32+ (UREASA)

NH4 + OXOGLUTARATO + NADH L-GLUTAMATO+NAD + +H2O (GLUTAMATO DEHIDROGENASA)
(La velocidad con que disminuye NADH es directamente proporcional a la concentracin de urea.)

DETERMINACIN DE ACIDO URICO

Los mtodos se basan en la oxidacin del cido rico.
Se utiliza como reactivo la enzima uricasa para oxidar al cido rico. Se realiza una reaccin acoplada con
otra enzima que utiliza el producto de la primera reaccin para oxidar una quinona que produce un producto
coloreado. Es una reaccin enzimtica acoplada de punto final con medicin espectrofotomtrica a 546 nm.

251
 Luis E. Simes

ACIDO URICO + 2H2O +O2 ALANTONA + CO2+H2O2 (URICASA)

2H2O2 + 4 AMINO FENAZONA QUINONA DIIMINA+4H2O (PEROXIDASA)
DETERMINACIN DE CREATININA
Mtodo de Jaff.
CREATININA + ACIDO PICRICO COMPLEJO AMARILLO ROJIZO
a) Mtodo colorimtrico punto final
Medicin espectrofotomtrica 510-520 nm
Interferencia por protenas: Desproteinizacin previa.
b) Mtodo cintico (Reaccin rpida que elimina la interferencia de los acetoacetatos )
Se mide velocidad de formacin de color: Directamente proporcional a la concentracin de creatinina en
la muestra.
Medicin espectrofotomtrica 510-520 nm
DETERMINACIN DE PROTEINAS URINARIAS
Mtodo turbidimtricos. Se basan en la precipitacin de las protenas en la orina produciendo turbidez.
Esta turbidez se cuantifica espectrofotomtricamente. Los reactivos ms utilizados son Acido sulfosalic-
lico, Acido tricloroactico, Cloruro de benzentonio.
Mtodos de fijacin a colorantes: Son ms precisos y automatizables. Por ejemplo Rojo Pirogalol- Molibdato. M-
todo colorimtrico punto final, medicin espectrofotomtrica.

252
 Bioqumica

CAPITULO 11

METABOLISMO DE GLUCIDOS
Ingreso en el organismo: Son ingeridos con la dieta, sobre todo en forma de polisacridos (Almidn) , en forma
de disacridos (Sacarosa y Lactosa) y, en menor proporcin, en forma de monosacridos (Glucosa, Galactosa y
Manosa).

Digestin: Actan las enzimas digestivas para transformarlos en monosacridos. La digestin comienza en la boca,
donde acta la amilasa salival, transforma el almidn en dextrina y disacridos. En el intestino acta la amilasa
pancretica, que transforma el almidn remanente en dextrina y disacridos. Tambin en el intestino delgado ac-
tan las disacaridasas que transforman los disacridos en monosacridos, fundamentalmente glucosa.

Absorcin/ Transporte/ Metabolismo: La llegada del alimento al tubo digestivo y su posterior absorcin se acom-
paa de numerosas seales que son: aumento de los niveles de glucosa y de otros metabolitos en plasma, secre-
cin de algunas hormonas gastrointestinales (Incretinas), activacin de nervios parasimpticos, etc. Todas estas
seales controlan la secrecin de insulina.

La glucosa se absorbe en el intestino, pasa a la sangre y es transportada al hgado y al msculo donde se almacena
en forma de glucgeno mediante una serie de procesos que implican un gasto de energa y que reciben el nombre
de Glucogenognesis. Este es un proceso anabolico ya que a partir de sustancias ms pequeas se sintetizan sus-
tancias ms grandes con consumo de energa.

La Glucosa es transportada a las clulas que necesitan energa en ese momento, donde tiene lugar una serie de
reacciones denominadas Gluclisis (aerobia o anaerobia). Este es un proceso catablico conde la glucosa es trans-
formada en energa.

Cuando el organismo necesita Glucosa, recurre al glucgeno almacenado que, mediante un conjunto de reaccio-
nes que reciben el nombre de Glucogenlisis y se transforma en glucosa (Catabolismo)

Si la necesidad de glucosa es muy grande, y no se pueda utilizar la glucosa sangunea, o no hay reservas, la clula
es capaz de sintetizar glucosa a partir de otras fuentes no glcidas como los aminocidos, el lactato, los cidos
grasos, los cuerpos cetnicos, glicerol mediante un proceso llamado Neoglucognesis (Anabolismo). La Neogluco-
gnesis tiene lugar en las clulas hepticas, adiposas y musculares.

253
 Luis E. Simes

Regulacin hormonal: El control y la regulacin de la glucosa en el organismo dependen de la interaccin entre las
hormonas pancreticas glucagn e insulina secretadas por las clulas y , respectivamente. Sus acciones son an-
tagnicas a nivel del metabolismo energtico y son claves para mantener un equilibrio de oferta y demanda de la
glucosa. El glucagn aumenta sus niveles sanguneos y la insulina los disminuye al ayudar a ingresar esta molcula
al interior de las clulas. La insulina tiene como tejidos efectores principales al msculo estriado, el hgado y el
tejido graso, ejerciendo acciones anabolizantes de almacenamiento de glucosa en forma de glucgeno o utilizacin
de la misma en la fosforilacin oxidativa. El glucagn, por el contrario, acta activando la glucogenlisis y la gluco-
neognesis.

INSULINA
Es una hormona HIPOGLUCEMIANTE y ANABLICA (HORMONA DE AHORRO).

Es una hormona proteica producida por el pncreas endcrino. Se produce a partir de una protelisis de una hor-
mona precursora que es la pro-insulina, del que surge tambin un fragmento denominado Pptido C. Se acumula
en forma de hexmero. En circulacin tiene una vida media de 5 a 6 minutos y su secrecin es estimulada por la
elevacin del nivel de glucemia. Se metaboliza en el hgado.

La funcin ms importante de la insulina es contrarrestar la ac-

cin concertada de varias hormonas que causan hiperglucemia y
de mantener niveles de glucosa sangunea controlados.

La magnitud de los efectos biolgicos de la insulina no slo de-

pende de su concentracin sino de la sensibilidad de los tejidos
blanco a la hormona.

En el estado postprandial la homeostasis de la glucosa depende del balance entre la produccin de glucosa por
el hgado y la utilizacin de sta por los tejidos que dependen de la insulina: hgado, msculo esqueltico y tejido
adiposo y aquellos tejidos independientes de sta hormona como cerebro y rin.

Adems de su papel en la regulacin del metabolismo de la glucosa, la insulina estimula la lipognesis (formacin
de grasas), disminuye la liplisis (Inhibe la hormona lipasa hormono sensible), e incrementa el transporte de ami-

254
 Bioqumica

nocidos a la clula, incrementando la sntesis proteica. La insulina estimula el crecimiento, la sntesis de DNA,
y la replicacin celular, efectos que son comunes a los de los factores de crecimiento (IGFa), estructuralmente
similares a la molcula de insulina.

Secrecin: La secrecin de insulina por las clulas- es regulada principalmente por los niveles de glucosa. Un
incremento en el ingreso de glucosa a las clulas- del pncreas conduce a un concomitante incremento en el
metabolismo. El incremento en el metabolismo lleva a una elevacin de la relacin ATP/ADP. Esto a su vez lleva
a la inhibicin de un canal de potasio sensible al ATP (canal K-ATP). El resultado neto es la despolarizacin de la
clula llevando a un influjo de Ca2+ y a la secrecin de insulina.

Accin sobre los tejidos blanco

La insulina acta a nivel celular, unindose a su receptor de membrana, una multisubunidad transmembrana de
tipo glicoprotena que contiene actividad de tirosina cinasa estimulada por la insulina.

Moduladores de la secrecin de insulina:

Estimuladores

Somatotrofina (STH): Hormona de crecimiento: promuvela biosntesis de insulina.

Adrenocorticotrofina: (ACTH): Accin rpida y transitoria.

Sistemas nerviosos y neurotransmisores: El sabor y el olor de la comida o la simple expectativa de comer

aumenta la secrecin de insulina. La estimulacin de las clulas beta se produce por la acetil colina, neuro-
transmisor parasimptico

Hormonas sexuales: Los estrgenos y progesterona potencian la liberacin de insulina en respuesta a glucosa.
La administracin prolongada de anticonceptivos tiene este efecto en una primera etapa a la que puede seguir
una de agotamiento de la clula beta en casos de individuos condicionados genticamente.

Glucocorticoides: Potencia la secrecin de insulina.

Inhibidores

Adrenalina y noradrenalina.: Bloquean la secrecin de insulina.

Hormonas tiroideas: Tanto en el hiper como en el hipotiroidismo,

255
 Luis E. Simes

GLUCAGN
Es una hormona proteica hiperglucemiante. Este aumento la glucemia plasmtica se produce por dos motivos
fundamentales:

Favorece la glucogenlisis en el hgado

Favorece la formacin de glucosa a partir de los aminocidos

El principal factor regulador es el nivel de glucosa en sangre. Los bajos niveles de glucosa estimulan a las clulas
.Existe una inhibicin paracrina por la presencia de insulina. Los aminocidos tambin elevan el glucagn, lo cual
es importante para evitar una hipoglucemia provocada por una comida rica en protenas.

ALTERACIONES DEL METABOLISMO DE

LOS HIDRATOS DE CARBONO - DIABETES MELLITUS (DM)
La diabetes comprende un grupo de enfermedades metablicas, plurietiolgica con base gentica, que se carac-
terizan por hiperglucemia debido a defectos en la secrecin de Insulina, de la accin de la Insulina sobre las clulas
blanco o ambas. La hiperglucemia crnica est asociada a dao a largo plazo, disfuncin y fallo de rganos vitales
como retina, riones vasos sanguneos y corazn.

La base de las anomalas del metabolismo de glcidos, grasas y protenas en la DM es la accin ineficiente en las
clulas blanco, y esta accin proviene de una secrecin inadecuada o disminucin de la respuesta en los tejidos
donde acta.

Los sntomas de la hiperglucemia sostenida son: poliuria, polidipsia, prdida de peso, polifagia y visin borrosa. La
hiperglucemia crnica produce dificultades en el crecimiento y susceptibilidad a ciertas infecciones. Las complica-
ciones de la hiperglucemia aguda es la cetoacidosis.

Las complicaciones de la hiperglucemia a largo plazo incluyen retinopata con prdida de la visin, nefropata (ERC)
con falla renal, neuropata perifrica (pie diabtico) con riesgo de amputaciones, ateroesclerosis cardiovascular,
vascular perifrica y cerebrovascular.

El diagnstico de diabetes se basa en la consecuencia de la alteracin del metabolismo de Glcidos, o sea la hip-
erglucemia. Al no existir un marcador biolgico nico de esta enfermedad es difcil clasificar al paciente, es ms
importante conocer la patognesis para tratarlo adecuadamente que conocer el tipo de diabetes.

HIPERGLUCEMIA

Tipos de Diabetes Mellitus

Diabetes Mellitus Insulino dependiente o Tipo I

Resulta predominantemente por destruccin las clulas del pncreas mediada por autoinmunidad, que con-
duce a una deficiencia absoluta de insulina.

Prevalencia 5- 10% de los individuos diabticos. Presentacin generalmente infanto juvenil. Existe una predis-
posicin gentica que se combina con un disparador para el desarrollo de la enfermedad. Existen varios marcado-
res de destruccin: Anticuerpos anti clula beta, anti Insulina, anti Glutamato decarboxilasa (GAD). Estos anticuer-
pos estn presentes en un 85-90% cuando se diagnostica DM.

Existe una fuerte relacin con HLA, poseer alelos HLA DQ/DR puede ser predisponente o protector.

256
 Bioqumica

Existe una variante de la enfermedad que tiene lenta progresin clnica: LADA: Se presenta en el adulto y con
caractersticas DM tipo I.

Diabetes Mellitus no Insulino dependiente o Tipo II:

Reconocida como DM no insulinoresistente o del adulto, tiene una prevalencia de 90-95% de los pacientes diab-
ticos

Se presenta en individuos con resistencia a la insulina y/o deficiencia relativa de insulina. La etiologa no es an
muy conocida. Muchos de los pacientes con esta enfermedad son obesos y la obesidad en s misma causa insu-
linoresistencia (IR)

Tiene una importante penetrancia hereditaria.

Otros tipos especficos:

MODY: Diabetes en el joven < 25 aos /Caractersticas DM tipo II.

Defectos genticos de la funcin de la clula beta.

Defectos genticos de la accin de la insulina.

Enfermedades del pncreas exocrino.

Endocrinopatas (Hormonas de antagonizan con la Insulina: cortisol, hormona de crecimiento)

Inducida por frmacos.

Infecciones. (Algunos virus han sido asociados con destruccin de la clula )

Diabetes Mellitus Gestacional (DMG)

Alteracin del metabolismo de los glcidos de severidad variable que comienza a evidenciarse durante el em-
barazo.

Prevalencia 5% de los embarazos. Se diagnostica durante el embarazo, normalizndose los niveles de glucosa al
terminar el mismo.

HIPOGLUCEMIA

Los niveles de glucosa srica estn por debajo de 50 mg/dl.

En ayunas: puede ser debida a 2 motivos principales:

Ayuno prolongado

Insulinoma: Tumor del pncreas (hiperplasia aumento del nmero de clulas) que da lugar a un
aumento de la insulina

257
 Luis E. Simes

Hipoglucemia inducida:

Exceso de Insulina exgena.

Gluconeognesis disminuida: alcohol

Insuficiencia secrecin de glucagn

Manifestaciones clnicas de la Hipoglucemia

Manifestaciones precoces: aparecen secundarias a la liberacin de catecolaminas (adrenalina y noradrenalina) que

se produce para aumentar la glucogenolisis y, por tanto, la glucosa en sangre.

Taquicardia, sudoracin intensa, temblores, sensacin de ansiedad, sensacin de hambre, hipertensin.

Manifestaciones tardas: son debidas a las alteraciones del sistema nervioso central y son las nicas que aparecen
cuando la hipoglucemia se instaura lentamente.

Mareos, cefalea, alteraciones de la percepcin visual, confusin, convulsiones y coma.

TCNICAS DE ANLISIS PARA VALORAR EL MATABOLISMO DE

LOS GLUCIDOS

GLUCEMIA BASAL

La glucemia es el balance entre el aporte (endgeno o exgeno) y su consumo (tejidos insulino dependientes y
tejidos insulino independientes). La glucosa es un sustrato fundamental en los tejidos especialmente el nervioso y
participa en procesos que son nocivos para el organismo como el de glucoxidacin .Por este motivo su nivel est
controlado en forma muy precisa y en condiciones normales su nivel se encuentra en un rango muy estrecho.

Mtodos basados en el poder reductor de los H.C:

Reduccin del cobre (mtodo de Benedict): En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color
azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.

Mtodo fuera de uso.

Mtodos enzimticos

Mtodo de la Hexoquinasa: es el mtodo de referencia porque es el que proporciona el mximo de especificidad.

Se basa en las siguientes reacciones:

GLUCOSA + ATP GLU-6-P + ADP

Hexoquinasa

GLUC-6-P + NADP 6 -Fosfogluconolactona + NADPH + H+

Mtodo de la Glucosa-Oxidasa: se basa en la oxidacin de la glucosa por la enzima Glucosa Oxidasa. Dentro de
este mtodo existen otros, siendo el ms utilizado el mtodo Trinder.

258
 Bioqumica

Glucosa oxidasa

Glucosa + O2 + H2O > cido glucnico + H2O2

Peroxidasa

H2O2 + HBA + 4-AAP > Tinte de quinonimina + H2O

La glucosa se oxida por accin de la glucosa oxidasa para dar cido glucnico y perxido de hidrgeno.

El perxido de hidrgeno reacciona en presencia de peroxidasa con HBA y con 4-aminoantipiridina (4-AAP) para
dar lugar a un tinte de quinonimina rojo.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de glucosa y se puede medir espectrofotom-
tricamente entre 460 y 560 nm. Es una reaccin enzimtica de punto final.

Intervalo de referencia (Asociacin Argentina de Diabetes) 75- 110 mg/dl

Aspectos preanalticos

La muestra de sangre se debe extraer por la maana luego del descanso nocturno.(ausencia de ingesta calrica por
lo menos 8 hs).Hay evidencia que el promedio de glucosas plasmticas en ayuno por la maana es ms alto que a
la tarde, por tanto muchos casos se pueden perder si se atienden por la tarde.

En muestras de sangre entera la concentracin de glucosa tiende a disminuir con el tiempo debido a la gluclisis. La
tasa de gluclisis es entre u 5 y 7% por hora y vara con la concentracin inicial de glucosa, temperatura, recuento
de leucocitos. La gluclisis puede ser atenuada con fluoruro de sodio (2,5 mg de fluoruro / ml de sangre)

HEMOGLOBINA GLICOSILADA

El trmino hemoglobina glicosilada es un trmino genrico que se refiere colectivamente a una serie de com-
puestos estables formados entre la molcula de hemoglobina y la glucosa.

Se forma por la unin de la hemoglobina con la glucosa en un proceso no enzimtico irreversible. El incremento de
la glicosilacin no enzimtica de las protenas es proporcional al nivel de glucosa en sangre y al ciclo de vida de las
protenas glicosiladas. La hemoglobina es una de las protenas de la sangre que pueden glicosilarse en proporcin
a la concentracin de glucosa en plasma, dependiendo solamente de la concentracin de glucosa y del tiempo de
exposicin celular a la misma.

Dado que la vida de los glbulos rojos es de, aproximadamente 120 das, permite evaluar el grado de control
glucmico de un perodo previo largo, reflejando el estado de la glucemia de 6-8 semanas precedentes.

No es til para el diagnstico de la diabetes. Se utiliza para hacer el seguimiento de los enfermos diabticos porque
permite conocer los niveles de glucemia de los 2 meses anteriores al momento de la prueba.

Se mide la fraccin de Hb A1c y los niveles de referencia son: 4,5-5,9 % respecto a la Hemoglobina total.

La hemoglobina adulta humana usualmente consiste de HbA (97% del total), HbA2 (2,5%), HbF (0,5%).

El anlisis cromatogrfico de la HbA identifica distintas hemoglobinas menores llamadas HbA1a, HbA1b, HbA1c que
colectivamente se denominan HbA1, glicohemoglobinas o hemoglobinas glicadas.

La hemoglobina glicosilada A1c es el componente mayoritario (80%) de la hemoglobina A1. La HbA1c es el resultado
de la condensacin de la glucosa con la valina N-terminal de la cadena de la hemoglobina.

Un 30% de la hemoglobina glicosilada est determinada por las glucemias post prandiales.

259
 Luis E. Simes

Utilidad clnica de la determinacin analtica

Monitoreo de la terapia en pacientes diabticos, considerndose como lmites de control aceptable hasta un 7%.

Entre el 7 y 9% se considera un deficiente control de la diabetes y superior a 9% muy deficiente.

Cifras inferiores a 6,5% en pacientes diabticos, hacen pensar en un buen control de la enfermedad.
Pacientes diabticos muy descompensados manifiestan valores superiores a 12% de hemoglobinaA1c.
Se debe realizar la determinacin de HbA1c cada 6 meses en pacientes con DM tipo 2 con un buen control metabli-
co, cada 2-3 meses en pacientes con un mal control y cada 3 meses en pacientes con DM Tipo 1.

No es recomendado como test de screening o diagnstico de diabetes, debido a que una concentracin de hemo-
globina glicosilada dentro del rango de referencia no excluye el diagnstico de diabetes cuando la hiperglucemia
es de reciente comienzo o de corta duracin.
Riesgo aumentado para diabetes: 5.7 6.4 %
Alto riesgo para diabetes HbA1c 6.0 6.4 %

Mtodos para la determinacin de HbA1c

HPLC (Mtodo de referencia)

Cromatografa de intercambio inico

Cromatografa de afinidad

Inmunoturbidimetra (la ms usada)

Inmunoturbidimetria Principio del mtodo:

Es una tcnica turbidimtrica espectrofotomtrica para la cuantificacin de hemoglobina glicosilada en sangre

total.

La concentracin de HbA1c se expresa como el porcentaje de concentracin de hemoglobina HbA1c sobre la

hemoglobina total (THb) de la muestra.

La HbA1c se mide utilizando un mtodo de inhibicin de la aglutinacin de partculas de ltex.

Las partculas de ltex recubiertas con anticuerpo monoclonal anti-HbA1c compiten con la HbA1c de la muestra
cuando se mezclan con un reactivo constituido por partculas de polmero sensibilizadas con haptenos de HbA1c.
La presencia de HbA1c en la muestra inhibe la aglutinacin de las partculas de ltex. El grado de aglutinacin de
las partculas es indirectamente proporcional a la concentracin de HbA1c de la muestra y puede cuantificarse
por comparacin con un calibrador de concentracin de conocida.

FRUCTOSAMINA

Todas las protenas del plasma son susceptibles de glicarse (se unen a glucosa) por un mecanismo enzimtico de
forma similar a la Hb glicosilada, por ello, la determinacin de la fructosamina se usa para el seguimiento del paci-
ente diabtico, que necesita una correccin de la medicacin antes de transcurridos los dos meses o aquellos que
por alguna patologa hematolgica la vida media del hemate se encuentra disminuida.

La vida media de las protenas plasmticas es de 17-30 das, por lo tanto, nos da informacin de la tasa de glucemia
de 2 3 semanas anteriores a la prueba.

260
 Bioqumica

Mtodologa

El mtodo se basa en la propiedad del grupo cetoamino de las protenas glicosiladas de reducir la sal de tetrazolio (NBT) en
medio alcalino, a formazn, el cual se mide fotomtricamente a 530 nm. La velocidad de formacin del formazn
es directamente proporcional a la concentracin de fructosamina presente en la muestra

OTRAS DETERMINACIONES

INSULINA

Estudios recientes han demostrado que la determinacin de Insulina no mejora la prediccin de riego de desar-
rollar DM2 que las mediciones clnicas tradicionales de glucemia en ayunas y Prueba de tolerancia a la glucosa.

Los valores de referencia entre diferentes laboratorios son muy dispares debido a la diferente estandarizacin de
los mtodos utilizados. La variabilidad biolgica es muy alta.

Se determina mediante Inmunoensayo: MEIA- ECLIA.

PEPTIDO C

Se utiliza para saber si una hiperinsulinemia es de origen exgeno o endgeno ya que los preparados comerciales
de insulina no llevan pptido C. Se utiliza para la evaluacin de la reserva insulnica, diagnstico diferencial de hi-
poglucemias (Facticia, insulinomas), cuando el paciente presenta anticuerpos anti insulina.

Determinacin por Inmunoensayo.: MEIA-ECLIA

ANTICUERPOS MARCADORES DE PROCESO AUTOINMUNE

Utilidad clnica de la determinacin: Soporte diagnstico de DM I y LADA (Debut dudoso de diabetes en adulto)

o ICA

o IAA

o GADA

o IA2/ICA512A

o Znt8A

Se determinan por ensayos Inmunolgicos.

DETECCION DE DM EN PACIENTES ASINTOMTICOS

Se debe realizar el control glucmico en:

Personas menores 45 aos cada 3 aos.

261
 Luis E. Simes

Personas mayores de 45 aos 1 vez por ao

Individuos obesos

Individuos con familiar en primer grado diabtico

Mujeres con antecedentes de DMG y/o hijos con ms de 4 Kg al nacer.

Individuos con niveles de triglicridos >250 mg/dl y /o colesterol HDL< 35 mg/dl.

Criterios para el diagnstico de diabetes por Asociacin Argentina de Diabetes (AAD)

Se considera diabtico al paciente con:

Sntomas clsicos de diabetes y glucemia al azar 200 mg/dl.

Glucemia plasmtica en ayunas126 mg/dl (ayuno 8 hs)

En Prueba de Tolerancia oral a la glucosa: glucemia 2 hs post sobrecarga 200 mg/dl.

PRUEBA DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA (PTGO)

Esta prueba est destinada al DIAGNSTICO de diabetes y tolerancia alterada a la glucosa. Vale aclarar que Curva
de tolerancia oral a la glucosa implica tres o ms determinaciones y queda a criterio del mdico solicitante y debe
aclararlo en el pedido. Frente a la solicitud de PTOG se realizar una determinacin de glucosa en una muestra
basal y otra determinacin a las 2 hs de haber ingerido una solucin de glucosa.

Criterios preanaliticos

Preparacin del paciente

Realizar actividad fsica habitual.

Realizar una dieta libre, considerando que 3 das previos a la prueba deber ingerir un mnimo de 150 g de Glcidos
por da.

No deber consumir las siguientes drogas: corticoides, beta adrenrgicos, no comenzar con terapia anticonceptiva
oral.

Evitar 12 hs antes:

Gastrocinticos

Antidepresivos

Benzodiacepinas

Anticolinrgicos.

No debe estar cursando sndrome febril, enfermedades infecciosas, traumatismo agudo.

262
 Bioqumica

Debe tener ayuno de 8 a 12 hs. La ltima comida no debe ser luego de las 00:00 hs. Puede

Ingerir agua.

Extraccin de sangre por puncin venosa.

Previo a la administracin de glucosa determinar la glucemia basal. Si el valor obtenido es mayor a 126 mg/dl no
se debe continuar con la prueba.

Administrar:

Adultos: 75 g de glucosa anhidra en 375 ml de agua.

Nios hasta 12 aos: 1,75 g de glucosa anhidra por kg de peso ( no debe superar los 75 g)

Debe tomarse la solucin acuosa en no ms de 5 minutos y la extraccin es a los 120 minutos a partir del comienzo
de la ingesta.

Factores que interfieren durante la prueba:

Horario de realizacin

Cantidad de glucosa ingerida (El paciente no ingiere toda la solucin)

Postura

Cigarrillos

Actividad

Nauseas

Vmitos

Frente a nuseas o vmitos se debe interrumpir la prueba.

Evaluacin de los resultados

NORMAL GLU ALTERADA EN DM

AYUNAS
GLUCEMIA PLASMATICA <110 110-125 126
EN AYUNAS (mg/dl)

NORMAL INTOLERANTE DM
GLUCEMIA 2 HS POST <140 140-199 200
SOBRECARGA GLUCOSA
(mg/dl)

263
Luis E. Simes

CETOACIDOSIS DIABETICA

Los cuerpos cetnicos son tres compuestos: cido beta hidroxibutrico, la acetona y el cido acetoactico,
derivan del metabolismo de los cidos grasos. En el individuo sano, los cuerpos cetnicos se forman en el
hgado y son metabolizados totalmente, cuando tiene lugar una alteracin importante del metabolismo
de los carbohidratos, que obliga al organismo a obtener energa a partir de los cidos grasos, se produce
un aumento en la produccin de estos compuestos que son eliminados por la orina. As la deteccin de
una cetonuria constituye en el caso de los diabticos descompensados un indicador de cetoacidosis y
constituye una emergencia mdica. La presencia de cuerpos cetnicos en orina se evidencia por pruebas
de laboratorio y se realiza por tiras reactivas.

El estado de cetoacidosis se acompaa de una acidosis metablica por acmulo de cidos fijos.

INSULINO RESISTENCIA (IR)

La obesidad constituye un serio problema de la salud mundial que vincula a las principales causas de mor-
bimortalidad y discapacidad

La IR se define como la incapacidad gentica o adquirida de los tejidos heptico, adiposo y muscular de
responder al estmulo de la insulina.

Esta alteracin es consecuencia de un estado inflamatorio sistmico de grado bajo y la clave est en el
tejido adiposo agrandado e inflamado como rgano secretor. La IR se expresa como la falla en el trans-
porte de glucosa a los rganos clave como el hgado, msculo y tejido adiposo. El origen del problema es
mltiple. Los cidos grasos libres (AGL) trastornan el sistema de seales potencian la liberacin de insu-
lina a corto plazo y su aumento en circulacin. Los AGL compiten con la glucosa como fuente de energa,
aumenta la glucemia y esto disminuye la captacin dependiente de insulina. Se produce glucotoxicidad y
lipotoxicidad.

En cuanto a los aspectos fisiopatolgicos de la relacin entre resistencia insulnica, hiperinsulinemia e hip-
ertensin arterial, el mayor contribuyente molecular al desarrollo de la resistencia insulnica es el exceso
de cidos grasos libres. Estos son los principales responsables de toda la cascada de episodios que van a
causar el sndrome metablico. Estos cidos grasos provienen de la liplisis de las grasas y son liberados
por la lipasa lipoproteica. Una de las principales acciones de la insulina, normalmente, es ejercer un efecto
antiliplisis.

Los cidos grasos libres aumentan la produccin heptica de glucosa y triglicridos, y la produccin de li-
poprotenas de muy baja densidad (VLDL), lo que explica la dislipidemia aterognica que caracteriza a este
sndrome. Se produce as mismo, una disminucin del colesterol HDL, que es la molcula que devuelve el
colesterol al hgado (transporte reverso), y aumentan, por otro lado, las partculas de LDL densas, que son
muy aterognicas, ya que son las que ms se oxidan, formando la placas ateroesclerticas. Por otro lado,
estos cidos grasos libres originan resistencia a la accin perifrica de la insulina y aumentan la insulina
plasmtica, y sta a su vez, acta en el msculo esqueltico disminuyendo la formacin de glicgeno y
aumentando el depsito intramuscular de triglicridos. Adems, la hiperinsulinemia produce retencin
de sodio y agua y activacin del sistema nervioso simptico, favoreciendo al desarrollo de hipertensin
arterial.

264
 Bioqumica

CAPITULO 12

BIOQUIMICA DE LOS LIPIDOS

COMPONENTES LIPDICOS PRESENTES EN EL PLASMA

Triglicridos (TG)

Son compuestos formados por esterificacin de 1 molcula de glicerol con 3 cidos grasos de cadena larga.

Absorcin y metabolismo

A diferencia del colesterol cuya eficiencia de absorcin es de un 30-50% (0,3-0,5 mg/da), en los triglicridos la
eficiencia es del 95%(100-150 mg/da).

En la luz intestinal son hidrolizados a glicerol y monoglicridos por la lipasa pancretica, se absorben y en la mu-
cosa intestinal son reformados a triglicridos.

Se incorporan en los quilomicrones. Los quilomicrones tienen aproximadamente un 88% de triglicridos, son
transportados por el conducto torcico y distribuido a diferentes tejidos donde son utilizados de acuerdo al re-
querimiento. Los triglicridos de cadena media o corta no se transportan por los quilomicrones, sino que van
directamente al hgado va circulacin portal.

Los niveles de quilomicrones en sangre alcanzan el mximo entre 2 a 6 horas luego de comer y desaparecen entre
10 y 12 horas de haber ingerido alimentos. La enzima lipasa lipoproteica (LPL) ubicada en la pared endotelial de
los capilares de los tejidos extra hepticos escinden los quilomicrones y liberan cidos grasos y glicerol. La LPL es
estimulada por la Insulina.

Los triglicridos endgenos procedentes del hgado constituyen una fuente principal de triglicridos plasmticos.
Los triglicridos se sintetizan a partir de los cidos grasos captados por el hgado o de la Acetil CoA derivada del
metabolismo de glcidos.

Lipoproteinas plasmaticas
Representacin esquemtica de una molcula de triglicrido

Colesterol:

La dieta promedio (fuente exgena) contribuye en una mnima proporcin a la tasa total de colesterol corporal
(endgeno + exgeno). Se ingieren como steres de colesterol que se emulsifican en la luz intestinal por medio de
las sales biliares, parte del colesterol ingerido se pierde por las heces y parte se absorbe. En el enterocito se em-
paqueta junto con los triglicridos para formar los quilomicrones y pasa a la circulacin portal.

265
 Luis E. Simes

El hgado capta parte del colesterol exgeno, sin embargo los quilomicrones son distribuidos a los tejidos donde
se libera colesterol a las clulas. La sntesis de colesterol se realiza sobre todo a nivel heptico pero tambin en
muchos otros tejidos: corteza suprarrenal, piel, intestino, testculo. Su conversin a cidos biliares y la excrecin a
travs de la bilis y heces es la principal va de excrecin de colesterol (90%).

Los pocos tejidos extrahepticos incapaces de sintetizar colesterol pueden captarlo del plasma de las lipoprotenas
HDL o LDL. Alrededor de partes del colesterol total es esterificado y transportado en la sangre por las lipopro-
tenas LDL a los tejidos.
Funciones:

Componente estructural de las membranas ce-

lulares.
Precursor de hormonas sexuales y de las hormo-
nas de la corteza suprarrenal
Participa en la sntesis de cidos biliares.

Representacin esquemtica de la molcula de colesterol.

cidos Grasos Libres (AGL)

Existen 2 fuentes se obtencin de AGL:

Derivados de la liplisis de los triglicridos almacenados; son transportados en el suero unidos a albmina.

Derivados de la descomposicin de las lipoprotenas cargadas de triglicridos (por la LPL), representa una
fraccin muy pequea del total circulante de AGL.

A pesar de la gran cantidad de AGL movilizados por da, la extraccin de AGL captados de la sangre es tan rpida
que los AGL contribuyen muy poco al total de lpidos plasmticos en determinado momento.

Los AGL son tomados por las clulas de muchos tejidos para su oxidacin a AcetilCoA y convertido en CO2 y agua
que generar posteriormente ATP en el ciclo de Krebs.

La lipognesis refleja la sntesis de AG a partir de glucosa e intermediarios.

La liplisis de los triglicridos en el tejido adiposo est mediada por la Lipasa Hormono Sensible (LHS) que libera
AGL y glicerol que son metabolizados en otros tejidos. Inhibida por Insulina y estimulada por Glucagn, el ayuno,
el fro, corticoides.

266
 Bioqumica

Catabolismo de lpidos

Lipoprotenas

La caracterstica de los lpidos es su hidrofobicidad, por lo tanto no son solubles en el plasma. El trasporte se re-
aliza en forma de complejos moleculares llamados lipoprotenas en las que el componente proteico se denomina
apoprotena o apolipoprotena.

La fraccin proteica de las lipoprotenas constituye entre el 1% y 60% de la masa total de la lipoprotena.

Las lipoprotenas constituyen un conjunto de partculas de diferentes tamaos y funciones metablicas. Tienen un
ncleo hidrfobo que contiene lpidos no polares (triglicridos y colesterol esterificado), mientras que la superficie
externa est constituida por lpidos polares (colesterol no esterificado y fosfolpidos) y apoprotenas.

267
 Luis E. Simes

Estas apoprotenas tienen un rol fundamental en la estabilidad de las lipoprotenas y desempean diversas fun-
ciones en el metabolismo de stas.

Tambin existen enzimas y protenas transferidoras de lpidos que tienen un rol importante en el mantenimiento
de la funcin y caractersticas biolgicas de las lipoprotenas.

Se sintetizan en el hgado y en el intestino

Clasificacin de Lipoprotenas

Quilomicrones: son las partculas ms grandes y de menor densidad. Aparecen en el plasma tras la in-
gestin de grasas y tienen un alto contenido de triglicridos. Contienen apoprotenas A- I, A- II, A-IV, B-8,
C-I, C-II, C-III y E. La vida media es inferior a 1 hora.

Su funcin es transportar los TG exgenos a los tejidos donde son hidrolizados por la enzima lipopro-
teinlipasa (LPL) a cidos grasos y glicerol. Los cidos grasos son utilizados o almacenados en forma de TG.
Cuando el suero o plasma contiene Quilomicrones y se deja en reposo a temperatura de refrigerador
aparece una capa cremosa como sobrenadante.

VLDL (Very Low Density Lipoprotein): Son las lipoprotenas de muy baja densidad. Su funcin principal es
la de transportar los TG endgenos desde el hgado a los tejidos. El aumento de esta fraccin le confiere
aspecto lactescente al suero (turbio)

IDL (Lipoprotenas de Densidad Intermedia): Trasportan fundamentalmente triglicridos y en menor gra-

do colesterol. Son muy aterognicas.
LDL (Low Density Lipoprotein): son protenas de baja densidad. Se originan por degradacin de las VLDL
e IDL. Estn asociadas a la Apoprotena B-100.
Su funcin es transportar el 80% del colesterol procedente del hgado hacia las clulas para la sntesis de
las membranas celulares y de las hormonas.
Las LDL son metabolizadas, originan colesterol libre que inhibe la sntesis endgena de colesterol, impide
la entrada de colesterol a las clulas, estimula el proceso de esterificacin del colesterol libre del cito-
plasma.

HDL (High Density Lipoprotein): son las lipoprotenas ms pequeas y densas. Funcin: Trasporte reverso
de colesterol. Son ricas en protenas y fosfolpidos y trasportan colesterol esterificado. Hay subclases de
las cuales las ms importantes son: HDL1 y HDL 2.

268
 Bioqumica

Tienen un papel protector contra la arteriosclerosis. Captan el colesterol libre de las clulas de los tejidos
perifricos por accin de una enzima Lecitn Colesterol Acil Transferasa (LCAT) que lo transforma en
steres de colesterol. Este colesterol (hidrofbico) se sita en el interior de la lipoprotena y as es trans-
portado al hgado donde es degradado transformndose en sales biliares y el eliminado.

Lipoprotena a (Lp a): Es una forma modificada de la partcula LDL a la que se encuentra unida una apoli-
poprotena (a). Por la homologa de esta apolipoprotena (a) con el plasmingeno compite con los sitios
de unin del mismo, interfiere en la fibrinlisis y favorece la trombosis. Es un factor de riesgo cardiovascu-
lar independiente de otros factores de riesgo lipdico y no lipdico. La concentracin de Lp(a) en suero est
determinada genticamente por tanto las medidas dietticas y farmacolgicas encaminadas a disminuir la
concentracin no son efectivas.

Esquema simplificado de las diferentes lipoprotenas: composicin relativa

Propiedades fsico-qumicas y funcionales de las Lipoprotenas

269
 Luis E. Simes

Funciones de las apolipoprotenas:

Solubilizar los lpidos para su secrecin en las clulas.

Servir de componente estructural para el ensamblaje de las lipoprotenas.

Activador de enzimas lipolticas.

Unin a receptores de superficie celular.

METABOLISMO DE LOS LPIDOS

1. Una vez absorbidas las grasas de la dieta, en las clulas intestinales se forman los Quilomicrones, compuestos
fundamentalmente por triglicridos y el colesterol exgeno.
Se transportan por va linftica y en circulacin se acoplan las apolipoprotenas Apo E y C provenientes de las
partculas HDL.
En la pared vascular, especialmente de tejido adiposo y muscular son hidrolizados por la enzima Lipoprotein lipasa
perifrica (LPL) liberando cidos grasos y glicerol que son captados por los tejidos y originan una partcula ms
pequea con menor contenido de triglicridos que es el Quilomicrn remanente.
2.stos entregan Apo C y Apo A1 a las HDL y son captados por los receptores B48 del hgado.
3. Las partculas VLDL se forman en el hgado a partir del triglicrido sintetizado en el hgado. (Origen endgeno).
Contienen Apo B: 100, C y E. que reciben de las HDL. Al igual que los quilomicrones son hidrolizados por la LPL de
los tejidos produciendo un VLDL remante que es parte captado por el hgado en los receptores Apo B100: E y otra
parte pierde Apo E y se transforma en una partcula LDL.
4. Las LDL son el producto del catabolismo de las VLDL y contienen slo B100 y colesterol libre y esterificado. Son
captadas por el hgado por los receptores B100: E en competencia por las IDL. Dentro de la clula se cataboliza
liberando el colesterol libre y esterificado. El colesterol libre inhibe la sntesis de colesterol dentro de la clula y
estimula la Lecitin colesterol acil transferasa (LCAT) que lo esterifica. Una parte de las LDL son captadas inespecfi-
camente por los macrfagos que no tienen capacidad de contra regulacin de la sntesis de colesterol.

5. Las HDL son fundamentales para el transporte reverso del colesterol desde los tejidos al hgado, para eliminarlo
por va biliar. La HDL naciente es una bi -capa de fosfolpidos y Apo A. Las molculas de colesterol de su superficie
son esterificadas e internalizadas por la LCAT, dejando espacios libres para captar ms colesterol libre y transfor-
mndose la HDLn en HDL 2 y HDL3.

El colesterol captado por las HDL se dirige al hgado y puede ser eliminado por dos vas:

La enzima CEPT transfiere el colesterol esterificado a las VLDL y LDL que son captados por
el hgado por el receptor B100: E.

Los receptores SR.B1 a HDL en hgado, suprarrenales, ovario y testculo donde la HDL no
es catabolizada.

6. Cuando existe un incremento de las lipoprotenas ricas en triglicridos, la CEPT condiciona el flujo de triglicri-
dos de VLDL a HDL y se transfiere el colesterol esterificado de HDL a LDL y VLDL. Se generan HDL chicas y ricas en
triglicridos ms afines a la LPL que van a catabolismo y excrecin renal. Esto explica la asociacin que existe entre
triglicridos altos y HDL baja.

270
 Bioqumica

7.Esto sucede tambin con las LDL ricas en triglicridos, que son catabolizadas en el hgado por la LPL, se hacen
ms densas, ms pequeas y oxidables, no reconocibles por los receptores especficos y son captadas por los
macrfagos(que no regulan el colesterol intracelular), lo acumulan y se transforman en clulas espumosas respon-
sables entre otros factores del dao ateroesclertico.

Enzima Localizacin Funcin

Lipoprotein Lipasa (LPL) Endotelio capilares mscu- Hidroliza triglicridos del
lo y tejido adiposo quilomicrn y VLDL
Lecitina Colesterol Acil Plasma Esterifica el colesterol libre
transferasa (LCAT) sobre la superficie del HDL
Lipasa heptica (LH) Hgado Hidroliza los triglicridos
dentro del HDL
Protena de transferencia de Plasma Intercambia colesterol por
steres de colesterol(PTEC) triglicridos de las partcu-
las ricas en triglicridos
Localizacin y funciones de las enzimas que intervienen en el metabolismo de lpidos

CHE

Esquema del metabolismo de lpidos

(FFA= AGL)

Dieta y metabolismo de lipoprotenas:

Las modificaciones de la dieta pueden modular los niveles de lipoprotenas circulantes, habiendo gran variabi-
lidad de respuesta interindividual.

271
 Luis E. Simes

Colesterol de la dieta: Una gran proporcin de la poblacin puede mantener niveles aceptables de colesterol
sanguneo frente a un amplio rango de ingesta de colesterol. Esto se debe al efecto de contra regulacin
endgena: mayor ingesta-menor sntesis y viceversa. Hay una proporcin de la poblacin que responde al
aumento de la ingesta con el aumento de la fraccin LDL. Debido a un defecto gentico subyacente que regula
la cantidad y actividad de los receptores que reduce el catabolismo de LDL y produce su aumento plasmtico.

Grasas en la dieta: Las grasas saturadas e hidrogenadas elevan el colesterol plasmtico, mientras que las poli-
insaturadas lo reducen. stas incrementaran la actividad de la LCAT aumentando as el colesterol esterificado
y aumentando la expresin de los receptores a LDL.

Fibra diettica: Tienen capacidad de absorber sales biliares, reducir su pool y aumentar el catabolismo del
colesterol heptico. La reduccin de la disponibilidad de colesterol heptico produce mayor expresin de re-
ceptores para captar LDL.

Glcidos: Un aporte alto de mono y disacridos (glucosa, sacarosa) aumenta la sntesis de VLDL y aumenta el
catabolismo de HDL. La glucosa acta por intermedio de la secrecin de insulina, mientras que la fructosa lo
hace a travs de la sntesis de glucgeno y triglicridos.

INTERPRETACIN CLNICA DE LA ALTERACIN DE LOS NIVELES

DE LPIDOS PLASMATICOS
Hiperlipemia significa un aumento en la concentracin de cualquier constituyente lpido del plasma, que con fines
prcticos suele limitarse al colesterol, al triglicrido o a ambos.

Dislipemia engloba todas las alteraciones de las lipoprotenas plasmticas ya sean cuali o cuantitativas, ya sea
primarias o hereditarias, o secundarias o adquiridas que se producen por otra enfermedad, por hbitos o farma-
colgicamente.

Dislipemia primaria:

Son trastornos en el metabolismo de lipoprotenas que condicionan el aumento de una o ms familias de lipopro-
tenas de carcter hereditario.

Hipercolesterolemia familiar: mutaciones en el gen receptor de LDL (receptor APO-B/

APO-E)

Defecto familiar de la APO B-100.Alteracin de la protena que se une al receptor de LDL.

Hipercolesterolemia familiar polignica (Asociada al metabolismo de LDL)

Hiperapobetaproteinemia (hiperproduccin de APO B)

Deficiencia familiar de APO CII (fundamental para la actividad de LPL)

Abetalipoproteinemia (se manifiesta en la niez, ausencia de quilomicrones, APO

B,LDL,VLDL y vitamina E)

Dislipemia secundaria:

Se consideran secundarias cuando estn asociadas a otra enfermedad metablica u orgnica.

Obesidad: Esta enfermedad metablica est asociada al aumento de los triglicridos y

VLDL.

Alcohol: El consumo de alcohol an en dosis moderadas agrava la hipertrigliceridemia,

aumento de VLDL, y AG como consecuencia del aumento de la Acetil CoA por el metabo-
lismo de alcohol y conduce a la esteatosis heptica.

272
 Bioqumica

Hipotiroidismo

Diabetes mellitus: En la Diabetes mellitus tipo I se puede encontrar aumento de triglicri-

dos (VLDL) y colesterol con predominio de LDL pequeas y densas y bajo HDL.

Interpretacin de resultados

El error asociado a la medida de la magnitud lipdica no depende nicamente de las fuentes de error analtico sino
en gran medida de variaciones preanalticas.

Las fuentes de variacin preanaltica son mltiples dependiendo del paciente, de sus hbitos conductuales, de su
estado de salud y de la forma de obtencin de la muestra.

Existen recomendaciones internacionales para estandarizar las condiciones de preparacin y toma de muestra,
minimizar las variaciones preanalticas y considerar al momento de validar los resultados, establecidas por el
Working Group on Lipoprotein Measurement of National Cholesterol Education Program (NCEP):

Edad: Incremento de los niveles de lpidos con la edad.

Sexo. El colesterol HDL aumenta en las mujeres y se mantiene hasta la menopausia a partir de donde se
produce un incremento de un 15% aproximadamente de colesterol.

En el embarazo aumentan todos los componentes lipdicos.

Variacin intraindividual. Los triglicridos tiene una variacin intraindividual en individuos en ayunas de
un 30%.

Causas dependientes de la conducta:

Dieta: Las grasas saturadas producen aumento de colesterol, cLDL, Apo B y triglicridos.

Alcohol: Los efectos dependen del consumo. El consumo moderado pueden producir aumento de HDL,
Apo A pero tambin colesterol total y cLDL.

Ejercicio fsico: Favorece el aumento de cHDL y APo A.

Tabaquismo: Favorece el aumento de triglicridos y cLDL.

Consumo de frmacos: Afectan el metabolismo de lpidos:

Beta bloqueantes, diurticos tiacdicos, andrgenos, estrgenos, glucocorticoides, hormonas tiroideas,

progestgenos.

Recomendacin de la NCEP:

Obtener la muestra en ayunas de 12 hs (el ayuno no es necesario si es slo para el colesterol total)

No obtener un perfil lipdico hasta 8 semanas despus de cualquier enfermedad aguda.

Mantener su hbito dietario, de consumo de alcohol, caf y tabaco previo al anlisis y abstenerse de su
consumo 12 hs antes.

273
 Luis E. Simes

TECNICAS ANALATICAS

Mtodos para la medida de colesterol total

Mtodo de referencia: Modificacin del mtodo de Abell-Kendall: El colesterol libre y esterificado se extrae con
una solucin etanlica y se mide por mtodo qumico de Lieberman Bouchard.

Mtodos enzimticos:

El anlisis de colesterol se complica por la coexistencia de dos formas moleculares: Colesterol libre (1/3 del total)
y el Colesterol esterificado.

Se basa en la utilizacin secuencial de dos enzimas: colesterol esterasa (CHE) y colesterol oxidasa (CHOD), acoplada
a una reaccin final con peroxidasa (POD).Produce una reaccin de punto final que se mide fotomtricamente

Existe mayor especificidad que con los mtodos qumicos, no obstante al haberse eliminado la etapa de extraccin
sufren algunas interferencias (bilirrubina)

Mtodos para la medida de Triglicridos totales

No existe mtodo definitivo o de referencia aceptado.

Mtodos enzimticos

Los triglicridos son hidrolizados por una lipasa en presencia de un surfactante. El glicerol liberado se mide por
diferentes reacciones enzimticas acopladas.

GPO: Glicerofosfato oxidasa

POD. Peroxidasa

Reaccin de punto final, lectura fotomtrica.

Deteccin de quilomicrones

Se determina por el aspecto lechoso y opalescente del mismo; en estos casos se confirma su presencia dejando el
suero 24 hs a 4C de manera que forman una capa cremosa flotante.

274
 Bioqumica

Mtodos para la medida de colesterol HDL (cHDL)

De acuerdo al principio metodolgico que emplean se pueden clasificar en:

Mtodos indirectos (con etapa de separacin previa):

Estos mtodos no estn en uso actualmente en los laboratorios de rutina, no son automatizables. La concen-
tracin de cHDL se realiza luego de haberlo separado por precipitacin del resto de las lipoprotenas plasmticas
como los quilomicrones, VLDL, IDL, LDL, y Lpa. Esta separacin se realiza utilizando una mezcla de polianiones y
cationes divalentes (heparina-cloruro de manganeso, dextrano sulfato-cloruro de magnesio) que forma complejos
insolubles con las lipoprotenas que contienen apoproteinas B o E.

Los complejos se separan por centrifugacin. El cHDL se mide en el sobrenadante con un mtodo de medida de
colesterol.

Mtodos homogneos directos

El principio se basa en que las partculas de cHDL no reaccionen con las enzimas de medicin de colesterol medi-
ante bloqueo qumico, inmunolgico o mediante la formacin de complejos.

Se pueden utilizar:

Anticuerpos Anti APO B-100

PEG 4000 + Anti APO B-100, CIII Separan del medio de reaccin IDL-Qm-VLDL-LDL-Lpa

Polmeros + Polianiones

Ciclodextrina sulfato + Cl Mg2+

Clculo cLDL

Habitualmente se calcula matemticamente con gran aproximacin mediante la frmula de Friedewald, que es
la siguiente:

LDL colesterol = Colesterol Total [ (TG / 5) + HDL colesterol]

El error que se comete en esta frmula es inferior al 5-10%, excepto cuando el contenido de TG es superior a 400
mg /dl, en cuyo caso no puede aplicarse la frmula.

Clculo del ndice de riesgo aterognico

La relacin Colesterol total / colesterol unido a lipoprotenas de alta densidad (cHDL), denominada ndice atero-
gnico o de Castelli, constituye un indicador de riesgo con un valor predictivo mayor que el de los datos aislados,
ya que reflejan 2 potentes componentes de riesgo vascular. En este sentido, el aumento de la concentracin del
Colesterol total, y especficamente del cLDL, es un marcador de las lipoprotenas aterognicas, mientras que una
disminucin de la concentracin de cHDL se correlaciona con numerosos factores de riesgo, entre los que cabe
destacar los componentes del sndrome metablico.

Cifra de riesgo: en mujeres > a 4.5 y en hombres > a 5.

275
 Luis E. Simes

Anlisis de lipoprotenas y apolipoprotenas

Determinacin de lipoprotenas: Electroforesis de lpidos

Es un mtodo electrofortico que permite identificar por separacin en un campo elctrico las distintas facciones
de lipoprotenas. La tincin se realiza con Sudn black y se realiza una fotodensitometria del trazado.

Las HDL se sitan en la zona de las a-globulinas

Las LDL en la zona de las b-globulinas

Las VLDL se mueven con las globulinas 2 localizndose en la zona pre-

Los quilomicrones permanecen en el punto de siembra

Una banda ancha que abarca pre y indica acmulo de IDL o quilomicrones remanentes.

Es un mtodo semicuantitativo que debe interpretarse junto con los datos de colesterol y triglicridos.

Electroforesis de lipoprotenas (izquierda). Densitometra (derecha)

Determinacin de apolipoprotenas.Mtodos inmunolgicos:

Se puede utilizar Inmunoensayos como el RIA, el EIA, Inmunodifusin radial, la Inmunonefelometra, etc. para la
determinacin de Apo B, APO AI, C.

ARTERIOESCLEROSIS

Es el resultado de la respuesta inflamatoria del endotelio vascular producido por una disfuncin endotelial provo-
cado por diferentes factores.
Hipercolesterolemia IDL, baja concentracin de HDL, aumento de fibringeno y Lpa
Hipertensin.
Sedentarismo
Historia familiar de enfermedad coronaria
Diabetes
Tabaquismo

276
 Bioqumica

Estudios epidemiolgicos prospectivos han demostrado una fuerte correlacin entre la concentracin de lpidos y
la enfermedad cardiovascular.
Secuencia de formacin de la placa ateromatosa.

Un aumento de cLDL se considera potencialmente aterognico.

La hipertensin arterial (aumento de la presin hidrosttica) colabora en la infiltracin de LDL en la pared endo-
telial.
El tabaquismo produce aumento de la oxidacin de LDL y la inflamacin de la pared arterial.
La concentracin elevada de glucosa produce glicosilacin de LDL, las LDL nativas son reconocidas por los recep-
tores y metabolizadas pero las modificadas por glicosilacin son captadas por macrfagos que se transforman en
clulas espumosas.
El colesterol extracelular y las clulas espumosas se acumulan en el espacio subendotelial.
La oxidacin de las LDL atrae monocitos al endotelio que se transforman en macrfagos.
Los macrfagos captan LDL oxidada y se transforman en ms clulas espumosas, que liberan componentes celula-
res con propiedades de apoptosis. (Destruccin celular)

La liberacin de citoquinas conduce a la

proliferacin de las clulas musculares lisas.
Se promueve la agregacin plaquetaria y
liberacin de tromboxano que favorece la
trombosis.
Se forma una placa inestable con alta prob-
abilidad de ruptura que puede conducir a
un evento trombtico: angina de pecho o
infarto de miocardio. (IAM)
Importancia del transporte reverso del C-HDL en el proceso ateroesclertico:
El transporte reverso del colesterol es la ruta metablica por medio de la cual el colesterol excedente de los teji-
dos perifricos es conducido hacia el hgado para ser catabolizado. Mediante su participacin en este proceso, las
lipoprotenas de alta densidad (HDL) y sus subespecies constituyen las fracciones antiaterognicas por excelencia.
Las HDL se sintetizan y secretan desde el hgado y el intestino como partculas nacientes o HDL discoidales, for-
madas predominantemente por apolipoprotena (apo) A-I y fosfolpidos. Estas partculas nacientes atraviesan el
endotelio vascular de los tejidos perifricos, desde los cuales remueven el exceso de colesterol libre celular por
accin del transportador de membrana ABCA. Las mutaciones en el gen que codifica este transportador causa la
acumulacin intracelular de colesterol y el progreso de la ateroesclerosis (Enfermedad de Tangier)
El colesterol libre captado por las HDL es esterificado con cidos grasos por la enzima plasmtica LCAT (lecithin
cholesterol acyltransferase) formando steres de colesterol, que son movilizados hacia el interior de la partcula,
determinando la formacin de HDL esfricas maduras .
El cHDL puede ser removido de la circulacin a travs de diferentes procesos metablicos. Un primer mecanismo
involucra la transferencia de los steres de colesterol desde las HDL hacia las lipoprotenas no HDL (VLDL y LDL) por
accin de la enzima de transferencia de steres de colesterol (cholesteryl ester transfer protein, CETP).
Como segundo mecanismo catablico, las HDL son fuente directa de colesterol para las clulas del organismo a
travs de la endocitosis y la degradacin intracelular mediada por receptores de LDL de la superficie celular.

277
 Luis E. Simes

El tercer mecanismo de catabolismo de las HDL es la captacin celular selectiva del colesterol HDL, sin internal-
izacin ni degradacin de la partcula lipoproteica .Este proceso ocurre en el hgado y es mediado por el receptor
SR-BI. Varios estudios han demostrado la importancia de SR-BI en el metabolismo de HDL y que la expresin de
este receptor en el hgado controla los niveles plasmticos del cHDL.
El colesterol movilizado por las HDL desde los tejidos perifricos hacia el hgado por las vas metablicas descritas,
constituye el fenmeno denominado transporte reverso de colesterol. El cHDL captado en el hgado puede ser
utilizado para secrecin biliar, tanto como colesterol libre o transformado en sales biliares.

BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS

METABOLISMO Y BALANCE NITROGENADO

Casi todas las protenas plasmticas se sintetizan en el hgado a excepcin de las inmunoglobulinas y las hor-
monas proteicas.

El trmino balance nitrogenado se usa para

reflejar el equilibrio entre las fases anabli-
cas y catablicas del estado dinmico del
metabolismo proteico.

Las protenas de la dieta representan la

principal fuente de ingreso de nitrgeno y la
mayora de los productos de excrecin del
nitrgeno provienen del catabolismo pro-
teico. Por lo tanto el metabolismo proteico
se puede analizar desde el punto de vista del
balance entre la ingesta y excrecin nitro-
genada.

La sntesis proteica se produce a partir de los aminocidos de la ingesta, de los originados de la destruccin
proteica o de los formados por aminacin de restos carbonados provenientes del metabolismo de glcidos y
lpidos. Hay estrecha relacin entre metabolismo de glcidos, protenas y lpidos, ya que en el catabolismo de
protenas los fragmentos de hidratos de carbono producidos por deaminacin de aminocidos da lugar a la
formacin de lpidos y glcidos.

278
 Bioqumica

Las protenas del organismo continuamente sufren procesos de fraccionamiento y resntesis a partir de ami-
nocidos libres.

Los productos de excrecin del metabolismo de las protenas es amonaco. El ciclo de la ornitina se realiza a
nivel heptico para eliminar amonaco en forma de urea.

Desde el punto de vista de la economa del organismo las 3 categoras ms importantes proteicas son: pro-
tenas de los tejidos, plasmticas y la hemoglobina. Dentro de la dinmica del metabolismo proteico existe
una prioridad en lo que se refiere a sntesis y liberacin de protenas. Las protenas plasmticas no suelen
evidenciar una disminucin significativa hasta que se haya producido una deplecin hstica (adelgazamiento)

Un balance nitrogenado negativo (perdidas mayores que ingresos) se ven en dietas con baja ingesta proteica
(ayuno prolongado, sndrome de malabsorcin, desnutricin), perdidas de protenas (proteinuria en sndrome
nefrtico, quemaduras, plasmafrisis), o catabolismo acelerado (infecciones, fiebre, hipertiroidismo)

PROTENAS PLASMATICAS

Las protenas pueden clasificarse simplemente como: protenas tisulares y protenas hemticas.

Las protenas plasmticas interaccionan con todos los tejidos y estn relacionadas con el metabolismo proteico
del hgado, la enfermedad heptica est frecuentemente asociada con alteraciones de las protenas plasmticas.

Las protenas tienen propiedades anfteras segn su grupo terminal o cadena lateral y segn el tipo de amino-
cido. Esta propiedad de actuar como cido o como base es la responsable de su capacidad buffer. A un pH que es
cido respecto a su punto isoelctrico (PIE) un aminocido tiene carga positiva, mientras que a un pH bsico a su
PIE tiene carga negativa. A un pH igual a su PIE (pI) se encuentra en forma de molcula de doble carga positiva y
negativa. El valor numrico de pI es caracterstico de cada protena.

279
 Luis E. Simes

Propiedades fisicoqumicas: Fundamento para su identificacin.

Las protenas pueden separarse desde el punto de vista fsico por tamao: se pueden separar en grandes
y pequeas por mtodos de dilisis o filtracin en gel.

Otra propiedad aprovechable es la solubilidad, dada por la afinidad que tienen por diferentes solventes.
Si se modifica las propiedades del solvente (pH, fuerza inica) se produce la insolubilidad de stas pro-
ducindose precipitacin.

El plasma es ligeramente alcalino, de manera que estas protenas se encuentran cargadas negativamente
(forma aninica) y esta propiedad se aprovecha para la separacin electrofortica.

METODOLOGIA

DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES:

Mtodo de referencia:

Mtodo de Biuret: Es un mtodo poco sensible no adecuado para muestras con

baja concentracin de protenas como ori-
ms empleado en la determinacin de pro-
interaccin de un reactivo alcalino de co-
enlaces peptdicos, se produce color azul
entre el ion Cu ++ y dos enlaces peptdicos
nas o Lquido cefalorraqudeo. Es el mtodo
tenas totales. La reaccin se basa en la
bre con una sustancia que contiene 2 o ms
violeta debido al complejo que se forma
adyacentes.

Estructura qumica formada entre los enlaces peptdicos y el Cu++

DETERMINACIN DE ALBMINA

Constituye ms de la mitad del total de las protenas plasmticas, por eso los cambios en la concentracin de Al-
bmina son muy significativos.

Principio del mtodo

Albmina + BCG Complejo BCG-albmina

BCG: 3,3,5, 5-tetrabromo-mcresolsulfoneftalena, sal sdica (verde de bromocresol)

A pH cido, la albmina se fija al BCG produciendo desarrollo de color que se mide espectrofotomtricamente a
630 nm.

El incremento en la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de albmina de la muestra.

280
 Bioqumica

Los valores de referencia de Albmina son aproximadamente 3,5 5,2 g/dl

DETERMINACION DE PROTEINAS EN LIQUIDO CEFALO RAQUIDEO

La mayor parte de las protenas son de bajo peso molecular, principalmente la Albmina que constituye del 55 al
75% de todas las protenas del LCR.

La determinacin de protenas en LCR se realiza para conocer la integridad de la barrera hematoenceflica.

Los mtodos para su determinacin son los mismos mtodos turbidimtricos utilizados en el anlisis de la orina.

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

El principio de la electroforesis se basa en que las partculas cargadas (en este caso protenas) migran en un campo
elctrico, hacia uno u otro electrodo dependiendo de:

Carga de la partcula: Se trabaja con un buffer a pH: 8,6 al cual todas las protenas se encuentran con
carga negativa.

Tamao: Mayor peso molecular, menor velocidad de corrida.

Fuerza del campo elctrico: mayor voltaje, mayor velocidad de corrida.

Medio soporte: Acetato de celulosa- Agarosa- Gel de poliacrilamida.

Las partculas cargadas negativamente (aniones) se dirigen al ctodo y las cargadas positivamente (cationes) se
dirigen al nodo. Si se hace variar el pH de la solucin amortiguadora donde estn disueltas, las protenas van a
migrar segn su carga a distancias diferentes producindose la separacin en fracciones.

La albmina por ser la molcula ms pequea y tener mayor nmero de grupos aninicos migra con mayor rapidez
seguida del resto de las globulinas.

El grfico que se obtiene se denomina proteinograma.

281
 Luis E. Simes

Las fracciones que se obtienen del fraccionamiento electrofortico de protenas son:

a) Albmina

b) Alfa 1 globulinas

c) Alfa 2 globulinas

d) Beta globulinas

e) Gamma globulinas

La correcta interpretacin del patrn electrofortico depende del conocimiento de las protenas que componen
cada una de las fracciones.

Cul es el propsito de realizar una electroforesis de protenas?

Para detectar anomalas en las protenas sricas

Cuantitativas: aumento o disminucin de algunas fracciones

Cualitativas: la presencia de fracciones anormales

Confirmar un diagnstico en asociacin con otros parmetros: la inflamacin, la hepatitis, la cirrosis o el

perfil de nefrtico.

Detectar la presencia de una inmunoglobulina monoclonal, cuando se sospecha de un mieloma compat-

ible con la clnica.

Permiten una deteccin precoz del mieloma asintomtico.

282
 Bioqumica

Fracciones proteicas

Albmina: Constituye el 55% de las protenas plasmticas y es la principal protena producida por el hgado. Su
principal funcin es la de mantener la presin osmtica del plasma, transporte de sustancias y es fuente endgena
de aminocidos.

El aumento de la concentracin srica en general es un aumento relativo ya que se produce por disminucin de
solvente (agua): deshidratacin.

Los trastornos ms frecuentes corresponden a la disminucin y van acompaados clnicamente con edema.

Causas de hipoalbuminemia:

Enfermedad Causa
Heptica Diminucin de la sntesis por hepatopa-
ta intrnseca, alcoholismo, desnutricin.
Renal Aumento de las prdidas por degrada-
cin, aumento de la presin onctica,
desnutricin.
Enfermedad gastrointestinal Malabsorcin, obstruccin heptica
Quemaduras Dao de tejidos extenso, exudacin in-
tensa.

Alfa- globulinas: Constituyen aproximadamente el 14% de las protenas plasmticas.

1 Globulinas: Protenas que componen la fraccin:

1 Antitripsina: Es una protena reactante de fase aguda. Aumenta en enfermedades inflamatorias y dis-
minuye en la deficiencia congnita (enfisema + insuficiencia heptica.)

1 Glicoprotena: reactante de fase aguda

1 Lipoprotena: Transporte de lpidos, vitaminas liposolubles y hormonas.

Protena transportadora de tiroxina.

1 Fetoprotena: Diagnstico de defecto en tubo neural. Marcador tumoral de clulas embrionarias en

testculo, cncer heptico.

2 Globulinas: Constituyen entre el 6-10% de las protenas totales.

2 Lipoproteinas: transporte de lpidos.

2 Macroglobulina: Inhibidora de tripsina y plasmina.

2 Haptoglobina: Reactante de fase aguda. Transporte de hemoglobina libre en plasma.

283
 Luis E. Simes

Ceruloplasmina: transporte de cobre.

Colinesterasa: hidrlisis de acetilcolina.

b - Globulinas: Constituyen aproximadamente el 13% de las protenas totales.

lipoprotenas. Transporte de lpidos.

Transferrina: transporte de hierro en plasma.

Fibrongeno: coagulacin.

Plasmingeno: lisis de fibrina.

Complemento: procesos inmunes.

globulinas: Constituyen aproximadamente el 11% de las protenas totales.

Es la zona de migracin de las inmunoglobulinas, es decir, anticuerpos: IgA, IgG, IgM, IgE, IgD. (Estas 2 ltimas en
muy baja concentracin)

Una curva con forma de distribucin normal, sin deformaciones, revela un perfil policlonal.

Si aparecen picos hablamos de gammapata monoclonal, lo que est relacionado con gammapata malignas como
mieloma mltiple y enfermedad de Waldenstrm, asociadas a LLC, linfomas o benignas en pacientes ancianos.

Alteraciones cuantitativas:

Hipogammaglobulinemia: Sndrome nefrtico, Mieloma con proteinuria de Bence Jones, leucemias crni-
cas. Tambin existen las agammaglobulinemias.

Hipergammaglobulinemias policlonales: Inflamaciones crnicas, procesos infecciosos, ciertas enferme-

dades autoinmunes.

Gammapata a clulas B

Las gammapatas monoclonales constituyen un grupo de patologas caracterizadas por la proliferacin benigna
o maligna de un clon de clulas plasmticas que producen una protena homognea denominada componente
monoclonal. Se las denominan con diferentes trminos: Componente Monoclonal, Protena M, Componente M,
Gammapata Monoclonal y/o Paraprotena.

284
 Bioqumica

INTERPRETACIN DE UN PROTEINOGRAMA

Es un mtodo cualitativo o cuantitativo?

La inspeccin visual de un proteinograma (P.E.) realizado por una persona entrenada, permite efectuar una evalu-
acin semi-cuantitativa de las diversas fracciones proteicas.

La fotodensitomtria de un P.E., mide la absorcin de un colorante a cada una de las fracciones obtenidas de la
separacin. Esta valoracin est referida al dato de las protenas totales, razn por la cual la densitometra nos
expresa un valor relativo, no absoluto.

Un parmetro importante para complementar el estudio es la cuantificacin de las fracciones proteicas espec-
ficas. Por ejemplo, para obtener un resultado cuantitativo especficamente de las Inmunoglobulinas se debera
dosar por un mtodo inmunoqumico cada una de ellas: Inmunoglobulina G (Ig G), Inmunoglobulina A (Ig A) e
Inmunoglobulina M (Ig M).

Si se realizara en forma simultnea en una misma muestra un P.E., y una cuantificacin de las tres inmunoglobu-
linas, la sumatoria de los tres valores sera diferente al valor densitmetro para la zona gamma globulina. Esto
sucede porque son mtodos con especificidades y sensibilidades diferentes.

Las fracciones proteicas corresponden a grupos de protenas, salvo la Albmina, pudiendo haber variacin porcen-
tual de sus componentes. Para confirmar los resultados del proteinograma y conocer puntualmente la concen-
tracin de una protena especfica se cuenta con la herramienta de los anlisis inmunoqumicos especficos como:

Nefelometra

Inmunoturbidimetria

Inmunoelectroforesis

Inmunoensayos (Inmunodifusin radial, RIA, IRMA, Inmunocromatografa, etc.)

Sin embargo, en muchos casos el patrn electrofortico global es ms informativo que las concentraciones numri-
cas de las fracciones individuales.

285
 Luis E. Simes

El patrn de respuesta aguda o inmediata puede observarse en la inflamacin como en las quemaduras, neopla-
sias malignas, traumatismos, hay una ligera diminucin de la albumina y aumento notable de 1 y2 globulinas.

El patrn de respuesta retardada puede verse en las infecciones crnicas. Reduccin de la fraccin albumina y
aumento de las gamma globulinas.

El patrn stress consiste en una disminucin de la albmina, aumento de las globulinas y un ligero aumento
policlonal, es un patrn observado en pacientes hospitalizados post ciruga.

En cirrosis heptica la elevacin caracterstica policlonal con formacin de puente est asociado a disminucin
de albmina y aumento de 2 globulina.

El patrn sndrome nefrtico y enteropata con prdida de protenas consiste en la disminucin de la albmina y
globulina e incremento de 2 globulina.

286
 Bioqumica

Diferentes patrones electroforticos realizados en gel de agarosa (Sebia)

INMUNOFIJACION
Esta tcnica permite la identificacin de componentes monoclonales u oligoclonales en muestras de sangre u
orina. Se realiza cuando en el perfil electrofortico aparecen fracciones atpicas principalmente en la zona de las
y globulinas sospechosas de gammapatas monoclonales.
Es una combinacin de una primera etapa de separacin electrofortica de protenas en gel de agarosa seguida
de una inmovilizacin de las mismas al enfrentarse a un antisuero especfico formando un complejo insoluble que
precipita en el gel y se revela por coloracin.
1. Separacin electrofortica en gel de agarosa.
2. Inmunoprecipitacin de las protenas separadas: los carriles de migracin electrofortica son recubiertos
con antisueros especficos para las inmunoglobulinas y cadenas livianas y pesadas, los cuales difunden
dentro del gel y precipitan los antgenos correspondientes cuando estn presentes.
3. Las protenas solubles no fijadas son eliminadas del gel mediante lavado. El precipitado Ag-AC queda
fijado en la matriz del gel.
4. Se realiza una tincin para poder visualizar las bandas.
Inmunofijacin de protenas en gel de agarosa con antisueros monoclonales para la identificacin de componentes
monoclonales
Proteinuria de Bence Jones (Cadenas livianas monoclonales en orina)
Las clulas plasmticas producen una sola clase de cadena pesada y un solo tipo de cadena liviana por molcula. Se
sintetiza alrededor de un 40% ms de cadenas livianas que de las pesadas para permitir una buena conformacin
de la molcula de inmunoglobulina intacta. Las clulas plasmticas producen el doble de cadenas kappa que de
cadenas lambda.
Las cadenas livianas libres tienen una vida media en suero de pocas horas por su rpida eliminacin renal. Normal-
mente las cadenas livianas se filtran por el rin, dependiendo la velocidad, del tamao molecular.
Para investigar proteinuria de Bence Jones (cadenas livianas monoclonales en orina), es necesario realizar un uro-
proteinograma y observar la presencia o no de una banda homognea. Para verificar que corresponden a cadenas
livianas se debe realizar una inmunofijacin de la muestra de orina.

287
 Luis E. Simes

Inmunofijacin en orina para la identifi-

cacin de cadenas livianas en orina
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN LIQUIDO CEFALO RAQUIDEO (LCR)
El LCR tiene una concentracin de protenas mucho menor que el suero, entre 20 y 40 mg/dl.
En la electroforesis de LCR se presentan las mismas bandas que se pueden observar en una electroforesis de
suero, pero en concentraciones menores (ms tenues) y aparece una fraccin que es la pre-Albmina.
El inters clnico de esta prueba de laboratorio es la deteccin de bandas oliclonales, que se presentan como
pequeas bandas en forma escalonada, presentes en pacientes con esclerosis mltiple. Solo aparecen en suero ya
que es una patologa del SNC:

UROPROTEINOGRAMA. Electroforesis de protenas urinarias

El proteinograma de orina no presenta ninguna banda o simplemente una muy discreta banda de albmina, tras
concentracin de la muestra.
Anlisis de diferentes patologas renales con prdida de protenas:
Proteinuria glomerular selectiva (Sndrome nefrtico): Aparece principalmente albmina (>80%) y trans-
ferrina, escasas globulinas alfa-1-beta, alfa-2 y gamma.
Proteinuria glomerular no selectiva: el patrn electrofortico se parece al del suero sanguneo. La encon-
tramos en lesiones ms importantes como la glomerulonefritis grave.
Proteinuria tubular: es una proteinuria que aparece en tubulopatas congnitas y en la insuficiencia renal
aguda. La electroforesis nos indicar principalmente, globulinas alfa, beta y gamma; la albmina banda
muy tenue.
Proteinuria glomerular tubular mixta: es una proteinuria disglobulinrica en la que predomina una para-
protena anormal con una banda muy definida en la zona de la beta-gamma, que corresponde a la pro-
tena de Bence-Jones.

288
 Bioqumica

CAPITULO 13

ENZIMAS
BIOQUIMICA DE LAS ENZIMAS

Estructura
Las enzimas son Catalizadores Biolgicos. Tienen como funcin aumentar la velocidad de las reacciones qumicas,
disminuyendo la energa de activacin de las molculas favoreciendo que mayor cantidad de molculas puedan
interaccionar entre s en una reaccin qumica especfica.
Se puede definir una enzima como: HOLOENZIMA = APOENZIMA + COENZIMA

Especificidad enzimtica

El centro cataltico presenta un cierto reparto de cargas o grupos funcionales, que son los que determinan que el
sustrato se fije en l; tiene, por tanto, una configuracin espacial que es caracterstica y privativa de cada enzima.

La accin de las enzimas es especfica en el sentido de que cada enzima slo acta sobre un determinado sustrato
y slo efecta sobre el mismo un tipo de transformacin.

Las enzimas son especficas en relacin a la seleccin del sustrato. Esta especificidad es variable de unas enzimas
a otras y puede darse a tres niveles diferentes:
Absoluta: cuando la enzima es especfica de un nico sustrato.
De grupo: cuando la enzima acta slo sobre un grupo funcional o un enlace qumico determinado, de
uno o varios sustratos.
Estereoqumica: cuando la enzima es capaz de diferenciar entre ismeros, actuando slo sobre una de las
posibles configuraciones.

Cintica enzimtica
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por las enzimas.
Las enzimas catalizan la conversin reversible del sustrato (S), en un producto de reaccin (P), pasando por la for-
macin de un complejo intermedio transitorio enzima-sustrato (E-S). Esto se puede esquematizar de la siguiente
manera:

E + S ES E + P

289
 Luis E. Simes

Existen diferentes modelos para explicar la especificidad enzima sustrato: algunos autores consideran (Fisher) un
modelo rgido tipo llave cerradura, otros consideran un ajuste flexible entre ambos, o la teora ms moderna
en la cual se considera que tanto enzima como sustrato sufren cambios conformacionales durante la etapa de
transicin.
De todas maneras la condicin esencial es que una vez transcurrida la reaccin la enzima recupera su estado
conformacional original.

La medida de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se realiza siempre en las condiciones pti-
mas de pH, temperatura, presencia de cofactores, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato.

La velocidad de la reaccin enzimtica puede determinarse midiendo la aparicin de los productos o la desapar-
icin de los sustratos.

Inicialmente, la enzima transforma el sustrato en un producto siguiendo un comportamiento lineal. A medida

que avanza la reaccin, se va agotando la cantidad de sustrato y va disminuyendo la cantidad de producto que
se genera por unidad de tiempo (disminuye la velocidad de la reaccin), lo que se manifiesta en forma de curva
asinttica .

Las reacciones catalizadas por enzimas son saturables, es decir, la velocidad de catlisis no muestra un compor-
tamiento lineal en un grfico al aumentar la concentracin de sustrato. Si la velocidad inicial de la reaccin se
mide a una determinada concentracin de sustrato [S]), la velocidad de la reaccin (Vi) aumenta linealmente con
el aumento de la [S].

Sin embargo, cuando se aumenta mucho la [S], la enzima se satura y alcanza su velocidad mxima (Vmax), que no
sobrepasar en ningn caso (todos los sitios activos se encuentran ocupados)

La ecuacin de Michaelis-Menten se usa para relacionar la velocidad de reaccin (Vi) y la concentracin de sus-
trato [S], presente.

Km: grado de afinidad o estabilidad Enzima-Sustrato

Vi = V max x [S]
Km +[S]

Km: es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. Es
caracterstico de cada enzima.
Si [S] es mucho mayor que Km, trabajamos a concentracin de sustrato saturable y la variable en la ecuacin es la
concentracin de enzima, que es lo que queremos determinar en una reaccin cintica
[P] / TIEMPO= K [ENZIMA] ..K= K2 [E] / Km

290
 Bioqumica

Determinacin de velocidades de reaccin en el laboratorio

El modo de medir una reaccin cintica depende si es rpida o lenta. Se considera rpida si transcurre el 50 % en
aproximadamente en 10 segundos. Los mtodos analticos requieren un equipo para una mezcla rpida de reacti-
vos y registro rpido de datos. El procedimiento ms cmodo es medir el progreso de una reaccin en forma con-
tinua por espectrofotometra. En un tiempo fijo se mide una variable medible de la concentracin de producto
formado (absorbancia). Lo que es proporcional a la concentracin inicial de la enzima es la diferencia entre las 2
concentraciones medidas en 2 tiempos. Se utiliza una curva de calibracin realizada con diferentes soluciones de
concentracin conocida de enzima en funcin de la velocidad de reaccin.
Moduladores de la actividad enzimtica
Las enzimas pueden ser inhibidas o activadas. La inhibicin puede ser reversible o irreversible. Generalmente la
inhibicin es reversible y la cintica de la inhibicin puede tener diferentes patrones: competitiva, no competitiva.
Los inhibidores competitivos compiten con el sustrato por el sitio cataltico de la enzima, su efecto en la cintica
es aumentar el valor de Km. (disminuir la afinidad de la enzima por el sustrato)
Los inhibidores no competitivos se unen a un sitio de la enzima diferente del sitio cataltico, o eliminan un cofactor
necesario para la enzima. Su efecto cintico es disminuir la Vmax, porque reducen la capacidad de la enzima para
transformar el sustrato en producto.

ENZIMOLOGA DIAGNSTICA

Clasificacin de las enzimas de acuerdo a su distribucin tisular

Las enzimas que se encuentran en el plasma pueden dividirse para su estudio en dos grupos: enzimas funcionales
y enzimas no funcionales.
Enzimas funcionales o plasmoespecficas
Son las enzimas que desarrollan su actividad en el plasma.
Estas enzimas son sintetizadas en determinados tejidos y vertidas a la sangre, que es su lugar de accin, donde se
encuentran su sustrato y su coenzima.
Son ejemplos las enzimas del complejo protrombnico, la lipoproteinlipasa, plasmingeno y pseudocolinesterasa.
Este grupo de enzimas son sintetizadas fundamentalmente por el hepatocito y son muy activas en el plasma. En
este grupo de enzimas el inters clnico tiene foco en valores disminuidos, ya que una disminucin de su actividad
indicara una alteracin en la sntesis, y como la mayora son producidas en el hgado esto nos estara indicando
una alteracin de la funcionalidad heptica.

291
 Luis E. Simes

Enzimas no funcionales
No tienen una funcin conocida en el plasma, y su concentracin plasmtica es considerablemente menor que en
los tejidos. Sin embargo, normalmente existen niveles circulantes detectables de la mayora de las enzimas no fun-
cionales debido a la renovacin celular natural o producido por pequeos traumatismos espontneos. Su presen-
cia en plasma en niveles ms altos de lo normal sugiere un aumento en la velocidad de destruccin celular y tisular.
La determinacin de estos niveles de enzimas en plasma provee informacin valiosa respecto al rgano de origen.
Estas enzimas pueden dividirse en dos grupos:
Enzimas de secrecin o exocitoenzimas
Son enzimas secretadas por glndulas o tejidos muy especializados, su lugar de accin est alejado del lugar donde
ejercen su accin, es el caso de las enzimas digestivas segregadas por el pncreas y que actan en el duodeno.
Clnicamente, estas enzimas en sangre estn en baja actividad. Aumentaran sus niveles plasmticos en la pa-
tologa aguda como es la pancreatitis.
Enzimas celulares o endocitoenzimas:
Son todas las enzimas que tienen su lugar de accin dentro de la misma clula que las sintetiza, no tienen accin
en plasma.
Se dividen es 2 grupos:
Ubicuas: Son todas las que intervienen en el metabolismo celular general como por ejemplo LDH, ALT o
Alanina-aminotransferasa, AST o Aspartato-aminotransferasa.
Organoespecficas: Enzimas especficas rganos o tejidos que actan en procesos metablicos especficos
de ciertos tejidos. Por ejemplo la GLDH (Glutamato deshidrogenasa), y SDH (Sorbitol deshidrogenasa).
Para la valoracin enzimtica hay que tener en consideracin:
Distribucin de las enzimas en los diferentes rganos y tejidos para poder realizar la interpretacin clnica
adecuada.
Localizacin de las enzimas dentro de la clula, para poder entender qu tipo de dao sufri la misma. Por
ejemplo si encontramos un aumento de enzimas citoplasmticas indica que la alteracin no es tan severa,
pero si adems aumentan las enzimas mitocondriales significa que existen en ese tejido focos necrticos
que e
Conocer el tiempo de vida media de esa enzima, para poder interpretar los tiempos de desaparicin de
su actividad enzimtica en plasma. Por ejemplo si estamos frente al aumento plasmtico de una enzima
de vida media larga, llevar ms tiempo la normalizacin de sus valores desde el momento de su entrada
al plasma. En cambio, si estn aumentado los valores de cierta enzima y su vida media es corta, esta se
normaliza ms rpidamente.

MAPA ENZIMTICO TISULAR

Es la descripcin de un rgano en funcin de la concentracin relativa de sus enzimas celulares.
La medida de los diversos mapas enzimticos plamticos constituye el intento de lograr la especificidad bioqumi-
ca de los diferentes rganos. Cuanto mayor sea la cantidad de enzimas que se determinen, ms completo ser
el mapa y mejor podr definirse el cuadro patolgico. Aunque desde el punto de vista biolgico son muchas las
enzimas objeto de atencin, el inters clnico se centra en el estudio de aquellas cuyas variaciones que son pato-
gnomnicas, es decir, indicadoras de enfermedad. Es importante determinar batera con ms de una enzima en
el suero, por el hecho de no existir enzimas que sean simultneamente rgano especficas y lo suficientemente
sensibles.

292
 Bioqumica

DETERMINACION DE NIVELES SRICOS DE ENZIMAS

Las determinaciones enzimticas en el laboratorio se basan en demostrar in vitro la actividad cataltica que una
enzima tiene in vivo, por lo tanto, el sistema en estudio mide su funcionalidad.

Unidades de medicin

Los laboratorios clnicos expresan la actividad enzimtica en UI/ L.

Las UI/ L se definen como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1mol de sustrato o coenzima por
minuto en las condiciones de la prueba.
Factores que afectan la velocidad de la reaccin:
Sustrato
Inhibidores
Activadores
Temperatura
pH
Fuerza inica
Concentracin de protenas
Interferentes
Temperatura: La gran mayora de las enzimas se desnaturalizan e inactivan alrededor de los 50 C. Puede ocurrir
que enzimas de un mismo organismo tengan diferentes temperaturas ptimas.
PH: Las variaciones de pH del medio ocasionan cambios en la actividad enzimtica puesto que se modifican las
cargas superficiales alterndose su configuracin espacial.
El pH ptimo de actuacin tambin es diferente para las distintas enzimas de un organismo; para algunas puede
ser cido (pepsina) y para otras alcalino (lipasas).
Para que una reaccin enzimtica sea vlida, la concentracin de la enzima debe ser el nico factor limitante, es
decir que el resultado refleje la cantidad de enzima y no se vea afectado por otras sustancias o circunstancias.
Debe tenerse en cuenta la posible interferencia por muestras obtenidas con anticoagulantes (resultados falsa-
mente elevados o disminuidos) por hemlisis de la muestra (se eleva falsamente la LDH por ejemplo), por opales-
cencia o caracterstica lechosa del suero (produce lecturas variables de absorcin de luz).
Desarrollo de la reaccin enzimtica
La medicin de la actividad enzimtica representa una de las siguientes circunstancias:
Aumento de la concentracin de uno de los productos.
Descenso de la concentracin del sustrato.
Cambio en la concentracin de la coenzima.
Ejemplos:
La LDH (Enzima lctico deshidrogenasa) cataliza la reduccin de piruvato a lactato y la simultanea oxidacin de
NADH a NAD+.
(Nicotinamida adenina dinucletido: abreviado NAD+ en su forma oxidada y NADH en su forma reducida)
LDH
Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
El NADH absorbe en el rango de la luz ultravioleta (340 nm), propiedad utilizada para la determinacin
enzimtica. La mezcla de reaccin aporta piruvato y NADH, como sustratos, en un medio de pH adecuado

293
 Luis E. Simes

La reaccin se inicia por el agregado de muestra en estudio que contiene la LDH que se pretende cuanti-
ficar.
Utilizando un espectrofotmetro se mide la disminucin de absorbancia a 340 nm, indicador del consumo
de NADH. La velocidad de desaparicin del cofactor es proporcional a la cantidad de enzima LDH presente
en la muestra.

Espectro de absorcin de NAD+ y NADH

Si los sustratos o productos carecen de una propiedad espectral de medicin, se utiliza el acople de la reaccin
que cataliza la enzima de inters a una segunda reaccin cuyos sustratos o productos pueden determinarse por
espectrofotometra.
Ejemplo:
Las transaminasas son enzimas que catalizan la transferencia el grupo amino de un aminocido a un cetocido.
Existe una gran variedad de transaminasas de las cuales dos son usadas frecuentemente como indicadores de dao
heptico: la glutmico pirvico transaminasa (GPT) y la glutmico oxalactico transaminasa (GOT)
GPT
Alanina + -cetoglutarato Piruvato + glutamato (Reaccin enzimtica in vivo)

GPT
(Fosfato de piridoxal)
Alanina + -cetoglutarato Piruvato + glutamato
LDH
Piruvato + NADH + H Lactato + NAD+ (Reaccin enzimtica in vitro)
En la reaccin in vitro ni los sustratos ni los productos absorben luz en el rango UV o visible, por lo cual la deter-
minacin de las transaminasas se realiza a travs de una reaccin acoplada que utiliza como sustrato un producto
de la reaccin anterior.
La velocidad de desaparicin de NADH, por oxidacin a NAD+, ser proporcional a la actividad de GPT presente en
la muestra.

Marcadores bioqumicos
Los biomarcadores o marcadores bioqumicos son sustancias que se encuentran en el suero y que indican el dao
de un rgano o tejido especfico. Dentro de esta definicin podemos incluir las enzimas.
La mayora de las enzimas se encuentran dentro de las clulas, donde son necesarias para el metabolismo. Los
niveles plasmticos normalmente son inferiores al 1% de los niveles celulares y reflejan la tasa de liberacin de la
enzima debido al proceso de recambio celular. Por esta razn el aumento del nivel plasmtico de muchas enzimas
se pueden considerar como marcadores de dao celular.

294
 Bioqumica

Isoenzimas
Las Isoenzimas son variantes de una misma molcula de enzima con caractersticas fsico-qumicas diferentes
(distinto pH, distinto Km, diferente accin de inhibidores y activadores) e inmunolgicas diferentes, o localizacin
diferente; realizan el mismo tipo de reaccin y actan sobre el mismo sustrato pero en condiciones distintas.
Se encuentran distribuidas en diferente proporcin en diferentes tejidos y su actividad se ajusta al metabolismo
de cada uno de ellos.
Esta caracterstica hace que su determinacin se aproveche para identificar el tejido daado que liber la enzima
al plasma.
Ejemplo

Lactato Deshidrogenasa LDH: est ampliamente distribuida por todos los tejidos pero es ms abundantes en
corazn, msculo esqueltico, rin e hgado. Est constituida por cuatro subunidades, que pueden ser de dos
tipos: subunidad H, especfica del corazn y subunidad M del msculo. Estas subunidades se combinan de 5 formas
diferentes dando lugar a 5 isoenzimas: LDH 1(4H), LDH 2 (3H/1M), LDH 3 (2H/2M), LDH 4 (3h/1H) y LDH 5 (4M).

La LDH existente en el miocardio contiene ms isoenzimas LDH 1 y LDH 2, y en el hgado y msculo esqueltico
mayor proporcin de LDH 4 y LDH 5.
El biomarcador ideal rene las siguientes caractersticas:
Est ausente o con valores estables, en ausencia de dao.
Aumenta su concentracin en forma proporcional con el grado de dao.
Es especfico de un rgano o tejido.
Interpretacin clnica
En procesos inflamatorios aparecen en plasma en primer trmino enzimas de bajo e intermedio peso molecular
(entre 40.000 a 140.000 Da).
El nivel de enzimas en el suero que se observa en una lesin es generalmente proporcional a la magnitud de mem-
brana celular afectada.
Cuando hay dao celular mnimos, primero se vuelca al torrente sanguneo las enzimas citoplasmticas y en caso
de dao extenso o ms intenso, lo hacen las enzimas localizadas en las membranas de las organelas (glutmico
deshidrogenasa (GLDH) mitocondrial).
Factores que alteran la permeabilidad de la membrana celular
Baja concentracin de oxgeno tisular (hipoxia)
Agentes qumicos (iodoacetato, cianuro, tetracloruro de carbono)
Agentes fsicos (pH, temperatura osmolaridad)
Algunos virus.
Para los fines diagnostico, una elevacin de las enzimas celulares en el plasma es equiparable a una lesin ce-
lular. Es importante tener en cuenta que las enzimas cuyos niveles aumentan en suero raramente derivan de una
necrosis celular sino que lo hacen por un grado sucesivo de liberacin debido a que la biosntesis enzimtica se
conserva mientras la clula vive. En los casos extremos de necrosis, despus de un breve lapso, las actividades en
el suero disminuyen por falta de nuevos aportes debido a una biosntesis proteica nula.
Aspectos pre analticos
Muestra:

No utilizar muestras que hayan sido congeladas y descongeladas varias veces para evitar desnaturalizar
irreversiblemente la protena constituyente de la enzima.

295
 Luis E. Simes

Separar rpidamente el cogulo del suero porque hay ciertas enzimas como la LDH y la Fosfatasa cida
que se encuentran en los hemates y plaquetas que pueden liberarse al medio.

No trabajar con muestras hemolizadas porque en estas aumentan los componentes intraeritrocitarios
como el LDH y AST.

Evitar el estasis venoso prolongado durante la extraccin porque esta produce hipoxia y aumento de per-
meabilidad en las clulas sanguneas.

Evitar en envejecimiento de las muestras.

Reactivos e instrumental

Revisar siempre la fecha de caducidad de los reactivos, sobre todo la solucin de sustrato y comprobar que
se han recibido y almacenado en las condiciones adecuadas de temperatura. Registrar la fecha en que se
comienza a utilizar los reactivos.

El instrumento de medicin debe cumplir 2 requisitos: debe ser un espectrofotmetro que mida de forma
correcta a la longitud de onda del ensayo. Adems tiene que tener un buen sistema de regulacin de
temperatura.

ENZIMAS CARDACAS
El corazn al igual que el msculo esqueltico, presentan altas concentraciones de enzimas y protenas implicadas
en la generacin de energa y la contraccin muscular.

Enzimas como la Creatin Kinasa o CK, la AST y la Lactato deshidrogenasa o LDH estn presentes en concentracio-
nes altas, tanto en el msculo esqueltico como en el cardaco, pero existen diferencias en sus cantidades relativas
de sus patrones de isoenzimas.

Marcadores bioqumicos de dao cardaco

Infarto de miocardio: Es la muerte de parte de las clulas del msculo cardaco que se produce secundaria a una
isquemia (falta de irrigacin sangunea).
Los criterios comnmente aceptados de diagnstico de infarto agudo de miocardio (IAM), requiere la presencia de
dos de los tres siguientes criterios:
1. dolor torcico
2. cambios en el ECG
3. aumento y disminucin caracterstica de biomarcadores cardacos.
Aunque la CK y, en menor grado la LDH, son sensibles al dao muscular, slo sus isoenzimas distinguen el dao
cardaco del de msculo esqueltico.

Mioglobina

La mioglobina es una protena compuesta por una cadena polipeptdica y un grupo prosttico Hemo que est pre-
sente en todas las fibras del msculo estriado, y cerca de 2% se encuentra en tejido de masa cardiaca y esqueltica.
La funcin principal de la mioglobina es transportar oxgeno de la membrana reservorio de oxgeno en el msculo.
Debido a que se trata de una molcula de poco peso molecular escapa rpidamente hacia la clula miocrdica
demandante (en hipoxia).

Esta puede ser detectada 2 horas despus de ocurrido el infarto La mioglobina es el primer marcador que se eleva
despus del dao celular miocrdico.

No es una enzima. Marcador precoz. No cardio especfica.

296
 Bioqumica

Metodologa: Inmunocromatografa.

Troponina

Es un complejo de protenas estructurales del msculo cardaco y esqueltico. Consiste de tres subunidades:
Troponina T, Troponina I y Troponina C. Las troponinas TnT y TnI estn presentes en el msculo esqueltico y
cardaco.

Los niveles sricos de troponinas son habitualmente muy bajos y resultan indetectables. Por lo tanto son
altamente sensibles y especficas, siendo capaz de detectar incluso, zonas microscpicas de isquemias.
Las Troponinas inician su elevacin a las 3 a 7 horas de producido el evento cardaco y se mantienen por en-
cima de los valores normales de 7 a 14 das, propiedad que se aprovecha para un diagnstico retrospectivo.
Resultados falsos positivos, han sido observados en la Troponina T en pacientes en situacin de Insuficiencia agu-
da, sometidos a dilisis.

No es una enzima. Cardioespecfica. Sensible. Elevacin precoz.

Metodologa: Quimioluminiscencia- Inmunocromatografia

Creatin kinasa (CK)

La creatina quinasa cataliza la produccin de fosfocreatina a travs de la fosforilacin de una molcula de creatina,
consumiendo una molcula de ATP en el proceso.
La funcin de la CK en msculo es contribuir al almacenamiento de energa en forma de creatina fosfato usando
ATP y creatina como sustratos, durante los perodos de descanso. En la contraccin, la creatina fosfato es escindida
a creatina y ATP por accin tambin de la CK.
CK
Creatina P + ADP Creatina + ATP
La CK necesita magnesio como cofactor. Es un dmero de subunidades catalticas. Las dos subunidades se denomi-
nan M, de msculo y B, de cerebro en ingls (brain).
Las tres isoenzimas resultantes son: CK- MM, CK-MB y CK-BB.
La CK se encuentra distribuida por todo el cuerpo, pero solo se encuentra en cantidades significativas en msculo
y cerebro, aunque la CK de cerebro prcticamente nunca cruza la barrera hematoenceflica hacia el torrente san-
guneo.
En el msculo esqueltico, la CK-MB supone entre el 0 al 6% de la CK total.
En un corazn normal, entre el 15 y el 20% de la CK es CK-MB. Por esto, la CK-MB sirve como marcador de dao
cardaco.
La CK-BB es la dominante en cerebro y msculo liso.
Enzima CK-MB es cardioespecfica. Se mide actividad enzimtica.
Variables pre analticas
El ejercicio es la variable que ms influye en los valores de CK, sobre todo el ejercicio intenso.
La inactividad grave disminuye los valores de CK, por eso los valores de pacientes hospitalizados estn
disminuidos.
Los niveles de CK aumentan con cualquier tipo de dao muscular, incluyendo inyecciones intramusculares.
En el embarazo, puede existir un leve aumento de la CK. La isoenzima CK-BB, puede alcanzar un 10% del
total, por su produccin placentaria.
La CK-MB est presente en cantidades mnimas en individuos normales.

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 Luis E. Simes

La hemlisis puede causar un ligero aumento de los niveles de CK debido a la presencia de la Adenilato
kinasa.
Puede encontrarse elevada por dosis elevadas o inadecuadas de estatinas, en polidistrofias, miopatas,
espasmos musculares.
La CK no es estable cuando se mantiene a temperatura ambiente por unas horas. Es estable durante me-
ses si se congela.
Mtodologa. Determinacin analtica
CK (suero del paciente)
Fosfato de creatina + ADP creatina +ATP
Hexoquinasa
ATP + D-glucosa ADP + G6P
G 6 PDH
G6P + NADP+ D 6 fosfogluconato + NADPH + H+
Fundamento: Reaccin enzimtica cintica acoplada. La velocidad de formacin de NADPH es directamente pro-
porcional a la actividad cataltica de la CK y se determina midiendo el aumento de absorbancia fotomtricamente
a 340 nm.

Isoenzima CK-MB

Las tres isoenzimas de la CK se encuentran en el citosol celular o asociada con estructuras miofibrilares.

La ventaja de la CK-MB sobre la CK Total reside en su especificidad de rgano.

La CK-MB aumenta a las 3 a 6 horas tras el inicio de los sntomas del evento cardiovascular y el mximo se alcanza
entre las 12 y 24 horas.

La ciruga cardaca, la miocarditis, cateterizacin coronaria, anginas de pecho, tambin elevan a menudo los niveles
sricos de la isoenzima MB.

Por todo ello, ha sido necesario desarrollar marcadores bioqumicos cardacos ms especficos.

Mtodos para determinar isoenzimas de CK (CK MB)

Mtodos no inmunolgicos:

Electroforesis: Tcnica semicuantitativa que conduce generalmente a una sobreestimacin de la CPK-MB. Lenta y
poco prctica, sobre todo en un Laboratorio de Urgencias.

Mtodos inmunolgicos:

Inmunoinhibicin: CK-MB actividad. Es un mtodo inmunolgico indirecto.

Este mtodo permite medir la actividad de la subunidad B de la isoenzima MB, despus del bloqueo especfico de
las subunidades M (de MM y de MB) por un anticuerpo especfico.

298
 Bioqumica

La actividad residual, despus de la inmunoinhibicin, corresponde a la MITAD de la isoenzima MB. Interferencia

por hemolisis.

Mtodos basados en la medicin de masa:(No mide actividad)

Tcnicas enzimoinmunolgicas (CK-MB masa). ste mtodo es sensible a la interferencia de la adenilatoquinasa, y

a diferencia de lo que ocurre con el mtodo de inmunoinhibicin permite su realizacin en una muestra de sangre
hemolizada. Proporciona buenos resultados, su determinacin est automatizada, es rpida y por tanto, adaptable
al Laboratorio de Urgencias, siendo este el mtodo de eleccin.

El desarrollo de anticuerpos monoclonales permite en el laboratorio de urgencias determinar por el mtodo de

Inmunocromatografa simultneamente: Mioglobina- CK masa y Troponina I.

Lactato dehidrogenasa (LDH)

Es una enzima, localizada en el citoplasma de la clula, que transfiere H+ (deshidrogenasa) y cataliza la oxidacin
reversible de L-lactato a piruvato.

Sus isoenzimas conocidas son: LD1, LD2, LD3, LD4, LD5.

Metodologa de determinacin: Fundamento

LDH (suero del paciente)

Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+

La velocidad de consumo de NADH se mide fotomtricamente y es directamente proporcional a la actividad de la

LDH en la muestra.

Para la cuantificacin de las isoenzimas se pueden utilizar mtodos no inmunolgicos (electroforesis) y mtodos
inmunolgicos.

Mediante ste ltimo se determina directamente la LD1, tras el tratamiento del suero por un anticuerpo dirigido
contra la subunidad M de la LD, que elimina las isoenzimas LD2, LD3, LD4 y LD5

Aspartato amino transferasa (AST)(GOT)

Es una enzima de localizacin mitocondrial y citoplasmtica que cataliza la transferencia reversible del grupo ami-
no desde el aspartato al a-cetoglutarato.

Metodologa de la determinacin: Mtodo enzimtico cintico. Reaccin acoplada.

La velocidad de consumo del NADH se mide fotomtricamente (a 340 nm) y es directamente proporcional a la
actividad de AST en la muestra.

El contenido tisular de AST, de mayor a menor concentracin tisular:

299
 Luis E. Simes

Cardaco.

Heptico.
Msculo esqueltico.

Rin.

Cerebro.

Pncreas.

Bazo.

Pulmn.

Eritrocitos.

Se encuentra elevada en plasma, en diferentes patologas de diferente etiologa: enfermedades hepticas, necrosis
miocrdica, necrosis del msculo esqueltico, distrofia muscular progresiva y dermatomiositis, pancreatitis aguda,
necrosis renal y cerebral, hemlisis, ejercicio fsico intenso, despus de la administracin de opiceos, salicilatos o
eritromicina. Por lo tanto no es buen marcador rgano especfico.

En un evento cardiovascular, se eleva a las 6 a 8 horas despus del comienzo de los sntomas, alcanza el pico a las
18 a 24 horas y vuelve a la normalidad a los 4 a 5 das.

La AST (GOT) no presenta ventajas sobre la CPK y la LDH: no es especfica del miocardio y no aparece en la circu-
lacin de forma muy precoz.

El ascenso caracterstico de los Biomarcadores se produce en todos los pacientes con IAM clnicamente (ECG con
onda Q) demostrado.

Los niveles de CPK Total y de CPK-MB no suelen aumentar en la Angina Inestable.

Sin embargo, cerca de la tercera parte de los enfermos, que se cree padecen Angina Inestable a juzgar por la aus-
encia de la elevacin de la CPK Total y la CPK-MB, presentan elevaciones de la TnT o TnI.

El hallazgo de una elevacin de Troponina, incluso ante valores normales de CPK Total y CPK-MB, sugiere un
pronstico desfavorable, por lo que debe considerarse que estos enfermos han sufrido un Infarto de Miocardio y
se le debe tratar como tal.

Para confirmar el diagnstico confirmatorio de Necrosis Miocrdica, los Biomarcadores cardacos deben medirse
en el momento del ingreso del paciente, a las 3 horas, a las 6horas y, a las 12 y 24 horas del ingreso s el diagnstico
sigue siendo dudoso.

300
 Bioqumica

Cantidad de veces aumentado respecto al normal

Horas desde el inicio del infarto

ENZIMAS PANCREATICAS
Ante la sospecha de pancreatitis se realizan, habitualmente anlisis de amilasa y, en algunas oportunidades se
solicita el anlisis de lipasa. Si estas 2 enzimas estn elevadas en suero, se confirma el diagnstico de pancreatitis.
La amilasa y la lipasa pueden provenir de otras fuentes distintas del pncreas, entonces empleando los dos anlisis
se aumenta la certeza del diagnostico.
La interpretacin de la medida de amilasa plasmtica total est puede ser confusa debido a la interferencia por la
isoenzima salival que puede producir falsos positivos, y por la presencia en individuos normales de macroamilasas,
que dan valores altos de amilasemia.
Macroamilasemia: es la elevacin persistente de la actividad de la amilasa srica sin signos clnicos de alteracin
pancretica. Se atribuye a la presencia de complejos de amilasa unida a inmunoglobulinas, cuyo mayor tamao
impide la eliminacin renal.
Amilasa
Es una enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del
componente -amilasa al digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples. Tiene actividad
a pH 7.
La amilasa presente en sangre y en orina es predominantemente de origen pancretico y salival (isoenzimas P y S,
respectivamente).Contienen al menos un tomo de calcio por molcula, este metal es necesario para su actividad
cataltica.
Determinacin de amilasa total en suero y orina
La amilasa es estable en suero y en orina una semana a temperatura ambiente, y refrigerada se mantiene estable
por seis meses. Se puede conservar congelada por mucho ms tiempo. No se debe medir en muestras de plasma
anticoagulado con citrato u oxalato, ya que secuestran el calcio necesario para la actividad de la enzima.
Existen numerosos mtodos para medir la actividad de amilasa, basados en diferentes principios y en los cuales se
utilizan diferentes sustratos. Los mtodos utilizados en la actualidad son los mtodos enzimticos:
Mtodos enzimticos que cuantifican la liberacin de p-nitrofenol a partir de maltopentaosido de p-
nitrofenol y sustratos de hexaosido.
Mtodos enzimticos que cuantifican la liberacin de 2-cloro-p-nitrofenol a partir del sustrato 2-cloro-
pnitrofenil- -D-maltotriosido (CNPG3).
-Amilasa (en la muestra)

301
 Luis E. Simes

CNPG3 (2-cloro-p-nitrofenil- -D-maltotriosido) 2-Cloro-p-nitrofenol

La -amilasa reacciona directamente con el CNPG3 para liberar 2-cloro-p-nitrofenol que es medido fotomtrica-
mente a 405 nm. El incremento en absorbancia a 405 nm es proporcional a la cantidad de -amilasa en la muestra.
Independientemente del mtodo elegido debe evitarse la contaminacin de la muestra con saliva, debido a que su
contenido en amilasa es 700 veces superior al del suero.
El fraccionamiento de las isoenzimas de amilasa puede realizarse por mtodos de separacin como la electrofore-
sis, cromatografa. No es comn el dosaje de las isoenzimas en nuestro medio.
Interpretacin clnica
Se observan elevaciones de amilasa srica y urinaria en una variedad de patologas:
Pancreatitis aguda, su elevacin en suero se produce dentro de las 6 a 48 hs siguientes al comienzo de la patologa.
La magnitud de su valor no tiene correlacin con la gravedad de la enfermedad. La actividad retorna a valores nor-
males en tres a cinco das, en formas leves de la enfermedad.
La amilasa urinaria aumenta en pancreatitis aguda dentro de las primeras horas de la elevacin srica. Se pueden
encontrar resultados falsos negativos en orina si la muestra se recoge muy pronto o muy tarde.
Un 20% de los pacientes con pancreatitis tienen amilasemia normal.
Pacientes hiperlipidmicos con pancreatitis pueden tener valores normales de amilasa en suero y orina.,
los triglicridos podran inhibir la actividad de amilasa.
La amilasa puede aumentar en pacientes con carcinoma heptico.
Se eleva en el 60% de pacientes con cetoacidosis diabtica.
Puede aumentar en pacientes con colecistitis o lcera pptica, transplante renal, reseccin gstrica, hepa-
titis viral.
Amilasa aumentada en lquido asctico puede ocurrir en: pancreatitis, roturas del conducto pancretico,
cncer de pncreas.
Lipasa
Es una glucoprotena producida por el pncreas. Las lipasas son enzimas que hidrolizan steres de glicerol a cidos
grasos de cadena larga. Para su actividad cataltica completa necesita colipasa y sales cidos biliares.
La colipasa se produce en el pncreas y est presente en el suero, pero en cantidad insuficiente para activar la
lipasa, entonces para medir la actividad de la lipasa in vitro, el reactivo debe tener colipasa.
El calcio es necesario para la mxima actividad de la lipasa, pero a altas concentraciones tiene efectos inhibidores.
Los metales pesados actan como inhibidores.
Por su pequeo tamao, la lipasa filtra por el glomrulo, pero se reabsorbe completamente, entonces no se en-
cuentra en orina.
Metodologa. Determinacin analtica
La Lipasa pancretica humana cataliza una reaccin de dos etapas:
1-2-diglicerido se hidroliza a 2-monoglycerido y a los cidos grasos.
2-monoglycerido es hidrolizado ms a fondo por la lipasa del monoglicrido (MGLP) a glicerol y a los
cidos grasos.
El glicerol es cuantificado usando una reaccin de GPO-Trinder.
Los cambios de la absorbancia se miden a 550nm.

302
 Bioqumica

Interpretacin clnica

Pancreatitis:

Es la autolisis del parnquima del pncreas exocrino. Esto determina la liberacin a la circulacin de las 2 enzi-
mas: la Lipasa Pancretica y la a-Amilasa. Las dos se filtran por el glomrulo renal pero la Lipasa se reabsorbe en el
tbulo y la a-Amilasa s aparece en orina. Para diagnosticar la pancreatitis aguda se determinan Lipasa y a-Amilasa
en sangre y a-Amilasa en orina. Estas enzimas aparecen elevadas en el plasma a las 6-8 horas y alcanzan su mxima
concentracin entre las 20-30 horas, normalizndose entre el 2-8 da. En la orina, la a-Amilasa aparece elevada
a las 5-8 horas despus de hacerlo en el plasma y se normaliza varios das despus de normalizarse en el plasma.
El aumento de lipasa no es especfico de pancreatitis aguda, tambin se encuentra aumentada en pancreatitis
crnica, obstruccin del conducto pancretico, enfermedades renales, colecistitis aguda, obstruccin o infarto
intestinal, lcera duodenal, enfermedad heptica, alcoholismo.

ENZIMAS HEPATICAS
Funcin heptica:

Almacenamiento de glucgeno

Sntesis de cidos grasos (AG) y conversin a cetonas, formacin de lipoprotenas, colesterol y fosfolpi-
dos.

Sntesis de protenas plasmticas, conversin y desaminacin de aminocidos y formacin de urea

Metabolismo y almacenamiento de vitaminas

Sntesis, liberacin y degradacin factores de coagulacin

Catabolismo y excrecin de hormonas

Detoxificacin de sustancias endgenas (Bilirrubina), bacterias, subproductos y sustancias exgenas (fr-

macos)

Formacin de bilis: secretora y excretora

La solicitud de hepatograma implica el anlisis bioqumico de diferentes tiles en la evaluacin del funciona-
miento del hgado. La seleccin de las determinaciones que componen el hepatograma depende de las necesi-
dades y de las posibilidades de cada laboratorio. Un hepatograma completo est compuesto por las siguientes
determinaciones:
Bilirrubina total y directa. (BT, BD)
Transaminasas (AST, ALT)
Fosfatasa alcalina (FAL)
Gama-glutamil transferasa (GGT)
Concentracin de protrombina (TP-Quick)
Protenas totales
Albmina

303
 Luis E. Simes

Transaminasas
Las transaminasas son enzimas que catalizan la transferencia reversible de un grupo amino entre un aminocido
y un cetocido. Esta funcin es esencial para la produccin de los aminocidos necesarios para la sntesis de pro-
tenas en el hgado.
La aspartato aminotransferasa ( AST = glutmico oxalactico transaminasa = GOT ) se localiza sobre todo
en la mitocondria y est presente en otros rganos, adems del hgado, como son, en orden de con-
centracin tisular, el miocardio, msculo esqueltico, riones, cerebro, pncreas, pulmn, leucocitos y
eritrocitos.Vida media: 48 hs.
La alanina aminotransferasa (ALT = glutmico pirvico transaminasa = GPT) se localiza fundamentalmente
a nivel citoslico en el hepatocito, lo que explica su mayor especificidad. Vida media 18 hs

La elevacin srica de transaminasas se correlaciona con el vertido a la sangre del contenido enzimtico de los
hepatocitos afectados, aunque la elevacin enzimtica no puede relacionarse proporcionalmente con la gravedad
de la lesin.

La enfermedad heptica es la causa ms importante del aumento de la actividad de la ALT y frecuente del aumento
de la actividad de la AST.

El P-5-P es un cofactor necesario tanto para AST como para ALT

Variaciones pre analtica
AST aumenta en ejercicio en hombres, y ALT tambin pero en menor medida.
En individuos sanos, la ALT puede aparecer muy baja falsamente por la unin de su cofactor, P-5-P, a pro-
tenas plasmticas.
La hemlisis aumenta los niveles de las dos Transaminasas debido a que la actividad de ambas en los er-
itrocitos es mayor que en el suero normal. El efecto es mayor para AST que para ALT.
Metodologa: Determinacin analtica
Las dos enzimas se miden a travs de reacciones acopladas midindose el consumo de NADH en la reaccin Se
mide espectrofotomtricamente a una longitud de onda de 340 nm. Existe un mtodo que es recomendado por la
Federacin Internacional de Qumica Clnica (IFCQ) pero no todas las pruebas comerciales lo siguen exactamente,
lo que da lugar a una estandarizacin deficiente.
GPT
L-alanina + 2-oxoglutarato Piruvato + L-glutamato
LDH
Piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+
GOT
L-aspartato + 2-oxoglutarato Oxalacetato + L-glutamato
MDH
Oxalacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+
Las muestras para la medida de Transaminasas son estables de 12 a 24 hs, pero por la hemlisis, empiezan a
aumentar pasado ese tiempo. La AST es estable en suero, refrigerada, hasta tres semanas, y congelada, indefini-
damente. La ALT tiene una estabilidad similar refrigerada, pero congelada sufre descensos importantes al ser con-
gelada.

304
 Bioqumica

Interpretacin clnica
La causa ms importante de aumento de ambas es el dao de los hepatocitos.
Cuando hay dao muscular existe mayor aumento de AST que ALT.
AST puede aumentar en pacientes con tumores malignos.
AST y ALT pueden tener valores engaosamente bajos en fallo renal, lo que podra enmascarar un dao
heptico.
Fosfatasa alcalina (FAL)
Es una enzima hidrolasa que produce desfosforilacin de molculas como nucletidos, protenas.
La FAL srica tiene varios orgenes (hgado, rin, placenta, intestino, huesos, leucocitos), aunque los tejidos con
mayor concentracin son el hgado, los huesos y el intestino. Durante el crecimiento, los niveles sricos son altos
debido al aumento de la fraccin sea, que produce actividad osteoblstica en el hueso. Lo mismo ocurre durante
el embarazo, sobre todo en el tercer trimestre, en el que las elevaciones se deben a fosfatasa alcalina de origen
placentario.
La FAL tiene tres isoenzimas, una de origen placentario, una intestinal y una que se llama no placentaria/no intes-
tinal.
Para establecer el origen del aumento de la fosfatasa alcalina se recurre a la separacin electrofortica de sus iso-
enzimas la determinacin de las fracciones termoestable (heptica) y termolbil (sea), sometiendo l la muestra
previamente a tratamiento trmico.
Los mtodos ms utilizados de diferenciacin de las diferentes isoenzimas son la electroforesis en geles de poli-
acrilamida y el isoelectroenfoque, que son capaces de resolver mltiples bandas de FAL.
La modificacin de la proporcin de ambas fracciones permite conocer cul es la responsable de la elevacin de
los niveles sricos. Sin embargo, en la prctica es suficiente efectuar una valoracin indirecta, que consiste en la
determinacin de otras enzimas que se elevan en caso de colestasis, como la GT o la 5-nucleotidasa.
Rango de referencia
Depende de la edad y del sexo: durante la niez los niveles aumentan gradualmente hasta los diez aos, llegando
a tener valores tres a cuatro veces mayores que los de adultos a expensas de la FAL sea, debido a que estn en
perodo de crecimiento. El embarazo hace que los niveles se dupliquen o tripliquen a expensas de la isoenzima
placentaria.
Variacin pre analtica
Un ndice de masa corporal elevado favorece la elevacin de la FAL.
Los agentes antiepilpticos aumentan la FAL, principalmente la isoenzima heptica.
Las transfusiones sanguneas y la circulacin extracorprea, hacen que disminuya la FAL, probablemente debido
a quelacin de los cationes necesarios para su accin por el citrato que se incorpora a la bolsa para mantenerla
anticoagulada.

Metodologa: Determinacin analtica

La fosfatasa alcalina hidroliza el p-NPP para formar el cromgeno amarillo p-nitrofenol de acuerdo a
Fosfatasa alcalina
Fosfato de p-nitrofenilo + H2O p-Nitrofenol + HPO4 2 + 2H+
La velocidad de aumento de la absorbancia de la mezcla de reaccin debido a la formacin del p-nitrofenol, es
proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina. Se lee fotomtricamente a 415 nm.
El zinc es un activador de la enzima. Los quelantes utilizados para evitar la coagulacin de la sangre (EDTA, citrato,
oxalato), disminuyen de falsamente la actividad de FAL.

305
 Luis E. Simes

Interpretacin clnica
Se encuentra aumentada en enfermedades de hgado y hueso.
La colestasis produce una elevacin mayor que los trastornos hepatocelulares.
Un aumento de la actividad del hueso produce aumentos de FAL, como enfermedad de Paget, osteosar-
coma, tumores metastticos en hueso, y enfermedades metablicas del hueso.
Pacientes con diabetes, fallo renal, cirrosis, hospitalizacin prolongada, pueden tener aumentos de la FAL
a expensas de la isoenzima intestinal.
Pacientes con tumores malignos pueden tener valores elevados de FAL, isoenzima placentaria,
principalmente se observa en tumores de clulas germinales.
Se pueden encontrar niveles bajos de FAL en deficiencia de zinc, que es un cofactor de la enzima.

Evolucin de GO, GPT,FAL luego de una lesin del hepatocito.

Gammaglutamil transpeptidasa ( GT)
La GGT cataliza la transferencia del grupo -glutamilo desde un pptido u otro compuesto a s misma, a otros pp-
tidos, a aminocidos o al agua.
La enzima est, generalmente, unida a la membrana plasmtica de las clulas en el lado canalicular, del hgado, los
tbulos renales proximales, las clulas epiteliales intestinales y las de prstata.
Existen varias isoenzimas pero la que contribuye en mucha mayor proporcin a la actividad en plasma es la hep-
tica.
Rangos de referencia
La GT aumenta en la mayora de las enfermedades del hgado, por lo que su especificidad es escasa. La GT es
una enzima sumamente sensible, aumenta en menor o mayor grado en todas las hepatobiliopatas, los mayores
aumentos se ven en procesos obstructivos.

306
 Bioqumica

Los aumentos ms importantes se observan en procesos tumorales, en la colestasis por proliferacin de conduc-
tillos biliares, adems su sntesis es inducida por el alcohol y tambin por barbitricos Tener en cuenta estos 2
factores cuando se solicita su determinacin.
La GT es un parmetro muy til para el control de los pacientes alcohlicos, aunque tambin pueden traducir la
exposicin a txicos industriales. La interrupcin del consumo de alcohol, en ausencia de otras causas de induccin
enzimtica, es seguida de una reduccin inmediata de los valores plasmticos de GT.
Metodologa. Determinacin analtica
GT
glutamil 3 carboxi 4 nitranilida + glicilglicina l glutamilglicinglicina + 5 amino 2
nitrobenzoato
Mtodo enzimtico cintico colorimtrico, medicin fotomtrica de la absorbancia.
Interpretacin clnica
Aumentada principalmente para la evaluacin del dao heptico
Hepatitis alcohlica
Cirrosis
Tumor metasttico de hgado
Colestasis intraheptica
Obstruccin extraheptica
Hepatitis crnica
Cncer heptico primario
Correlaciones clnicopatolgicas
Hepatitis vricas agudas: estn aumentadas la ALT (GPT), AST (GOT) y GGT. La que aumenta en mayor cantidad es
la ALT. Las transaminasas se normalizan en un plazo de 3-5 semanas. Si la hepatitis cronifica no se normalizan. Si la
hepatitis es fulminante las transaminasas descienden de forma brusca debido a la necrosis masiva del hgado que
hace que no quede tejido heptico para liberar enzimas.
Colestasis: es una obstruccin a nivel biliar que determina un estancamiento o estasis de la bilis en el interior del
hgado. Se elevan sobre todo la GGT y la Fosfatasa Alcalina.
Etilismo crnico: se eleva GGT en plasma.
Cirrosis heptica: hay una elevacin moderada de las transaminasas, siendo mayor el aumento de la AST que de la
ALT. Si la cirrosis es de origen etlico estar tambin aumentada la GGT y si es de origen biliar estarn aumentadas
las Fosfatasa Alcalina.

Neoplasias

Cncer de Prstata: aumenta la Fosfatasa cida total pero no es un marcador precoz de la enfermedad
porque aumenta cuando ya hay metstasis

Metstasis hepticas: aumenta la Fosfatasa Alcalina y la GGT

307
 Luis E. Simes

ANEXO:

BILIRRUBINA

Mtodo: espectrofotometra

Espectrofotometra directa 540 y 454 nm

Muestra: suero o plasma. Evitar exposicin directa a la luz solar, el valor decae un 30 % en una hora.

Significado clnico:

La bilirrubina es un compuesto pigmentado, producido por degradacin de los grupos hemo de la hemoglobina en
las clulas del sistema retculo endotelial (mdula sea, bazo e hgado). Es un producto de desecho.

La bilirrubina como tal se une a la albmina. Este complejo se disocia y la bilirrubina sola, penetra en la clula hep-
tica. Ah se conjuga (bilirrubina de reaccin directa) con cido glucurnico formando un mono y di glucurnido,
por accin de la UDP glucuronil transferasa, o en menor medida con grupos sulfatos, para luego ser excreta a los
canalculos biliares por un proceso activo contra un gradiente de concentracin. Por medio de la circulacin biliar
se dirige hacia la luz intestinal. El glucuronato de bilirrubina puede ser excretado en las heces o metabolizado a
urobilingeno por las bacterias. El urobilingeno es reabsorbido en el intestino delgado a la sangre de la vena porta
y as, entra en la circulacin enteroheptica. Una porcin del urobilingeno es re excretada en la bilis por el hgado,
mientras que el resto lo es en la orina.

La bilirrubina no conjugada, (libre o indirecta) estando ntimamente ligada a la albmina, no es filtrada por los
glomrulos renales.

La bilirrubina conjugada filtra a travs de los glomrulos, y aparece en la orina.

Utilidad clnica

Evaluacin de ictericias. La hiperbilirrubinemia es un sntoma y clnicamente causa ictericia, si su valor aumenta >
4 mg/dl en adultos o > 2.5 mg/dl en recin nacidos y nios.

Aumento:

En ictericias de origen pre heptico como anemias de tipo hemoltico, ictericia fisiolgica del recin nacido, incom-
patibilidad RH y ABO.

Ictericias intrahepticas con dao txico, autoinmune o infeccioso del parnquima heptico como las hepatitis
virales agudas o crnicas. Tumores primitivos de hgado, metstasis, y causas medicamentosas. Trastornos propios
del metabolismo de la bilirrubina (Grigler-Najar, Gilbert)

Ictericias pos hepticas obstructivas debido a la obstruccin mecnica del rbol biliar o por compresin del cncer
de cabeza de pncreas.

308
 Bioqumica

309
 Bioqumica

CAPITULO 14

SISTEMA ENDOCRINO

El sistema endocrino se compone anatmicamente por glndulas de secrecin interna y representa un conjunto de
rganos y tejidos que segregan sustancias que actan como seales qumicas, hormonas, que regulan y controlan
las funciones metablicas del organismo.

El sistema endocrino est constituido por una serie de glndulas carentes de ductos con gran irrigacin sangunea
y presencia de vacuolas intracelulares donde almacenan las hormonas. Est compuesto por:

Hipfisis

Glndula tiroides y paratiroides

Glndula suprarrenal

Gnadas

Las glndulas exocrinas como las salivales, las del pncreas tienen como caracterstica la escasa irrigacin y po-
seen un conducto o liberan las sustancias a una cavidad.

Aparte de las glndulas endocrinas especializadas para tal fin, existen otros rganos que tiene una funcin endo-
crina secundaria, tales como:

Hipotlamo, conformado por neuronas y que sintetizan y secretan a las hormonas liberadoras (GnRH, TRH, CRH,
GHRH.), o las hormonas inhibidoras (Somatostatina, Dopamina).

Corazn que sintetiza y secreta la hormona atrial natriurtica.

Pulmn que secreta serotonina y endorfina.

Rin que produce eritropoyetina y renina.

Hgado que sintetiza el factor de crecimiento similar a insulina (IGF).

Tejido adiposo que produce leptina.

Sistema endcrino y Sistema Nervioso Central

El sistema endocrino mantiene una estrecha relacin con el sistema nervioso a travs del hipotlamo que, anatmi-
camente es parte del sistema nervioso central, constituyendo ambos el sistema neuroendocrino.

311
 Luis E. Simes

La actividad del sistema endocrino se realiza a travs de las hormonas mientras que la del sistema nervioso central
es a travs de los neurotransmisores. El lugar de accin de un neurotransmisor o de una hormona se denomina
rgano blanco o diana. La forma de accin en el rgano blanco es directa en el sistema nervioso en el espacio
intersinptico, e indirecta en el sistema endocrino a travs de la va sangunea.
Transmisin qumica

Transmisin Neurocrina
Es la que ocurre en el sistema nervioso a travs de la liberacin de sustancias qumicas denominadas neurotrans-
misores, al espacio intersinptico y que se une a un receptor post-sinptico modificando la actividad metablica
de la clula post-sinptica.
Transmisin Endocrina.
Es la que ocurre en el sistema endocrino a travs de la liberacin de sustancias qumicas denominadas hormonas,
que actan a distancia sobre una clula efectora.

Transmisin Neuroendocrina o por sinapsis

Es la que ocurre por la liberacin de sustancias qumicas (neurohormonas) en los terminales nerviosos
hacia la circulacin, y actan a distancia sobre una clula efectora. El ejemplo clsico es la secrecin de
las neurohormonas (hormonas liberadoras e inhibidoras) del hipotlamo a la eminencia media y que a
travs de la va sangunea porta-hipofisiaria se van a trasladar a la hipfisis anterior donde van a actuar.
Transmisin paracrina.
Es la transmisin que ocurre entre dos clulas adyacentes, donde una de las clulas secreta la sustancia (parahor-
mona), que acta por difusin en la clula vecina modificando su funcin. En este caso no hay participacin de la
va sangunea.

Transmisin autocrina
Es cuando una sustancia qumica acta sobre la misma clula que la produce para regular su secrecin.
Fig. 1. Tipos de comunicacin celular

312
 Bioqumica

HORMONAS
Las hormonas son compuestos qumicos secretados en mnimas concentraciones al torrente sanguneo por clulas
especficas (pueden ser glndulas endocrinas clsicas o no), y que actan en clulas distantes al lugar de origen,
donde se unen a receptores especficos produciendo una respuesta biolgica.
Existen sustancias que simulan el efecto de una hormona pero no son hormonas como por ejemplo la glucosa, los
cidos grasos no esterificados, y las prostaglandinas. La glucosa acta sobre el pncreas, en un receptor especfico,
el efecto es la liberacin de insulina, pero no es hormona porque acta en altas concentraciones (miligramos), en
tanto que las hormonas actan a mnimas concentraciones: picogramos (10-12 g) y nanogramos (10-9 g). La misma
situacin ocurre para los cidos grasos no esterificados, cuya liberacin produce inhibicin de la secrecin de hor-
mona del crecimiento por la hipfisis.
Muchas de las hormonas secretadas por las clulas endocrinas son secretadas en forma inactiva (precursoras) y
requieren transformarse en otra molcula para tener actividad biolgica. Por ejemplo, la tiroxina (T4) secretada por
la glndula tiroides requiere perder un iodo y transformarse en tri-iodotironina (T3) para ser biolgicamente activa.
Las hormonas esteroideas (andrgenos, estrgenos, progesterona, corticoides) y las tiroideas circulan
en la sangre tanto unida a una protena transportadora como en forma libre, siendo sta la biolgicamente
activa. Generalmente las determinaciones hormonales se refieren a la concentracin total (hormona libre + hor-
mona ligada a la protena), y no siempre una alteracin en los niveles de la hormona total refleja una alteracin de
la fraccin libre, puesto que existen muchas situaciones en que se afecta la concentracin de la protena ligadora
sin que necesariamente ocurra una disfuncin hormonal. Un ejemplo, es el incremento de la globulina ligadora de
tiroxina (TBG) por accin de los estrgenos durante el embarazo; la tiroxina total se incrementa pero no la fraccin
libre.
Clasificacin de las hormonas
Segn su estructura qumica la hormonas pueden ser aminas, pptidos, protenas o esteroides.
Aminas
Hipotalmica: Dopamina
Tiroideas: Tri-iodotironina (T3) y Tiroxina (T4)
Pptidos
Hormonas hipotalmicas: Hormona liberadora de corticotrofina (CRH), Hormona liberadora de hormona del cre-
cimiento (GHRH), Hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH), Hormona liberadora de tirotrofina (TRH), So-
matostatina.
Hormonas hipofisiarias: Corticotrofina (ACTH), Hormona antidiurtica (ADH), Oxitocina.
Hormonas pancreticas: Glucagn, Insulina, Somatostatina.
Hormonas reguladoras del calcio: Tirocalcitonina, Paratohormona. (PTH)
Hormona del corazn: Hormona atrial natriurtica.
Protenas
Hormonas hipofisiarias proteicas: Tirotrofina (TSH), Hormona del crecimiento, Prolactina (PRL)
Hormonas hipofisiarias glicoproteicas: Hormona luteinizante (LH), Hormona folculo estimulante (FSH), y Tirotro-
fina (TSH)
Hormonas placentarias: Hormona gonadotrofina corinica (hCG)

313
 Luis E. Simes

Esteroideas
Hormonas de la corteza adrenal
Aldosterona
Cortisol y corticosterona
Dehidroepiandrosterona
Dehidroepiandrosterona sulfato
Androstenediona
Hormonas ovricas
Estrgenos (estrona, estradiol y estriol)
Progesterona
Hormonas testiculares
Testosterona
Dihidrotestosterona
Estradiol

RECEPTORES HORMONALES
La especificidad de la accin hormonal reside en la presencia de receptores en el rgano blanco para reconocer
especficamente su seal.
Los receptores son protenas cuya cantidad o afinidad pueden modificarse de acuerdo a ciertas circunstancias.
Estos pueden ser:
De membrana,
Citoplsmicos
Nucleares.
Las hormonas que por su tamao no pueden entrar a la clula o aquellas que no son liposolubles se unen a recep-
tores de membrana. Las protenas no pueden atravesar la membrana por su tamao, en tanto que los esteroides
que son molculas pequeas y liposolubles si la atraviesan.
Las hormonas amnicas, peptdicas y las proteicas se unen a receptores de membrana, y las hormonas esteroideas
lo hacen a receptores intracelulares.
Mecanismo de accin hormonal
La respuesta a la accin de una hormona puede generar:
Funcin: se refiere al propsito o utilidad de la hormona respecto a la regulacin metablica o a los cam-
bios metablicos que produce.
Mecanismo de accin: es como una hormona interacta con un receptor especfico y todos los eventos
intracelulares que desarrolla que conllevarn al efecto biolgico.
Efecto biolgico: es la respuesta medible que produce la hormona sobre un rgano.
Mecanismo de accin para hormonas con receptores de membrana. (Fig. 2)
Las hormonas con receptores de membrana actan produciendo a nivel intracelular sustancias denominadas se-
gundo mensajeros. Un segundo mensajero es una sustancia cuya concentracin aumenta intracelularmente en
respuesta a la hormona primaria (primer mensajero). Su funcin es la de llevar la seal hormonal al interior de la
clula, con la finalidad de traducirla en accin biolgica.

314
 Bioqumica

Los segundos mensajeros actan fosforilando protenas que a su vez van a actuar sobre porciones especficas del
DNA para inducir o reprimir la sntesis de la protena que producir el efecto de respuesta.
Entre los segundos mensajeros tenemos: el AMP cclico, el GMP cclico, el in calcio, el in calcio unido a la calmod-
ulina, etc
Mecanismo de accin para hormonas con receptores intracelulares (Fig 3)
A diferencia de las hormonas peptdicas, que debido a su peso molecular no pueden penetrar a la clula, los ester-
oides y las hormonas tiroideas, por su bajo peso molecular y por su naturaleza lipoflica atraviesan con facilidad la
membrana citoplasmtica. Aunque los esteroides y las hormonas tiroideas pueden penetrar a todas las clulas del
organismo, slo aquellas clulas que contienen receptores especficos expresarn una respuesta.
Los esteroides circulan en el torrente sanguneo en forma libre o ligada a protenas sricas, como la globulina liga-
dora de hormonas sexuales (SHBG), y la albmina.
En las clulas del rgano blanco, los esteroides ingresan por difusin El esteroide, permanece dentro de la clula
por un tiempo largo, por lo que puede mantener una concentracin intracelular aumentada, a pesar de que los
niveles plasmticos vayan disminuyendo.
El receptor est ubicado dentro del ncleo, y la unin del esteroide al receptor induce a un cambio conformacional
del receptor que mejora su afinidad para secuencias especficas en el DNA. Esto induce a cambios en la expresin
gentica que se traduce en la sntesis de protena.

Figura 2 Figura 3

Fuente Internet
http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/endocrino.htm
SISTEMA DE REGULACION HORMONAL-EJES
El sistema hormonal se organiza en ejes en los que hay una regulacin superior, conformado por el sistema nervi-
oso central (SNC), que a travs de una regulacin neurocrina acta sobre el hipotallamo. El hipotlamo se comu-
nica con la glndula hipfisis que se interrelaciona con las glndulas satlites:
Eje SNC-hipotlamo-hipfiso-gonadal
Eje SNC-hipotlamo-hipfiso-tiroides
Eje SNC-hipotlamo-hipfiso-crtico adrenal.
Regulacin directa
La regulacin directa es la que ocurre de una glndula superior a otra inferior. Ej. Glndula A regula directamente
la secrecin de la glndula B; por ejemplo, la hipfisis que secreta la hormona Tirotrofina (TSH) estimula la secre-
cin de la Tiroxina y Triiodotironina por la Tiroides.

315
 Luis E. Simes

Retroalimentacin

La retroalimentacin es la regulacin a partir de una glndula del nivel inferior hacia la glndula que la estimula
y que est en un nivel superior. Este sistema permite mantener el equilibrio en la secrecin hormonal para evitar
la sobre-estimulacin de la glndula inferior. Por ejemplo, la hipfisis secreta hormona del crecimiento (GH) que
acta sobre el hgado produciendo, el factor de crecimiento similar a insulina o IGF-I, que acta sobre el rgano
blanco que son los huesos. Si no ocurriera retroalimentacin, la GH seguira actuando y se producira crecimiento
desmesurado del hueso (gigantismo).

Retroalimentacin negativa o feed- back negativo.

La retroalimentacin es negativa cuando hay un efecto de inhibicin de la secrecin. Por ejemplo, la hormona
luteinizante (LH) estimula en las clulas testiculares la produccin de testosterona, la cual al aumentar su concen-
tracin sangunea inhibe la secrecin de LH por la hipfisis.

Retroalimentacin positiva
La retroalimentacin es positiva cuando el mecanismo es de estimulacin de la glndula del nivel superior. Este
mecanismo es poco frecuente.

HIPOTLAMO
Es una parte del SNC, ubicado por debajo del tlamo y por encima de la hipfisis, formada por clulas neuroendo-
crinas, que actan en respuesta a estmulos nerviosos, sintetizando y secretar hormonas o factores estimulantes
o inhibidoras de la hipfisis. Estas hormonas viajan por va nerviosa al lbulo posterior de la hipfisis donde se
almacenan hasta su secrecin.
Se distinguen diferentes tipos de neuronas secretoras (ncleos neuronales) que se relacionan con el manten-
imiento de la temperatura corporal, y la conducta, como la alimentacin (hambre y saciedad), ingesta de lquidos
(sed), memoria, conducta emocional, funcin simptica y ritmo circadiano.
El hipotlamo, en cuanto rgano endocrino, libera factores liberadores o inhibidores a la sangre, pero tambin
produce neurohormonas listas para su secrecin.

Neurohormonas
ADH (Hormona antidiurtica o Vasopresina)
Oxitocina
Factores que regulan la secrecin de hormonas hipofisarias.
GnRH, LHRH o LHRF (Hormona liberadora de gonadotrofinas). Acta sobre la hipfisis, estimulando la
produccin y la liberacin de la hormona luteinizante (LH) y la hormona foliculoestimulante (FSH).
TRH (Hormona liberadora de tirotrofina) Estimula la secrecin de prolactina (PRL) y de tirotropina (TSH).
CRH o CRF (Hormona liberadora de corticotrofina). Estimula la liberacin de adrenocorticotropina (ACTH).
STH (Somatocrinina, hormona liberadora de somatotrofina). Estimula la liberacin de la hormona del cre-
cimiento hipofisaria (GH).

316
 Bioqumica

GIH (Somatostatina u hormona inhibidora de la liberacin de somatotrofina). Como su nombre

indica, inhibe la secrecin de somatotrofina y de otras hormonas como la insulina, el glucagn.
PIF (Factor inhibidor de la liberacin de prolactina). Acta inhibiendo la secrecin de prolactina
hipofisaria.

HIPOFISIS
Lbulo anterior o adenohipfisis:
Produccin de las siguientes hormonas:

ACTH: Hormona Corticotropa. Estimula la secrecin de glucocorticoides (Cortisol) actuando sobre la cor-
teza suprarrenal.

TSH: Hormona Tirotropa. Produccin de hormonas tiroideas T3 y T4 por estmulo sobre la glndula tiroidea.

FSH: Hormona Folculo estimulante. Acta sobre los tubos seminferos estimulando la produccin de
espermatozoides. Madura el folculo, estimula la produccin de estrgenos y estimula la proliferacin del
endometrio, en mujeres.

LH: Hormona Lutinizante. Estimula la produccin de testosterona en hombres. En mujeres determinan la

ovulacin, el mantenimiento del cuerpo y la produccin de estrgenos y progesterona.

GH: Hormona del crecimiento.

PROLACTINA: Hormona estimuladora de la secrecin de leche.

Hipfisis media
Produce dos polipptidos llamados melanotrofinas u hormonas estimulantes de los melanocitos, que inducen el
aumento de la sntesis de melanina de las clulas de la piel.
Lbulo posterior o neurohipfisis

Almacena a las hormonas ADH y oxitocina secretadas

por las fibras amielnicas de los ncleos suprapticos
y paraventriculares de las neuronas del hipotlamo.

ADH o Vasopresina (Hormona Antidiurtica): La ADH

(hormona antidiurtica) o vasopresina, se acumula
en la neurohipfisis, regula el balance de agua en el
cuerpo actuando sobre los riones. La disfuncin del
hipotlamo en la produccin de ADH causa diabetes
inspida.

Oxitocina: Se produce por el hipotlamo y se almacena

y libera por la neurohipfisis.

Est relacionada con los patrones sexuales y con la

conducta maternal. Se libera en grandes cantidades
tras la distensin del cuello uterino y la vagina durante
el parto, as como en respuesta a la estimulacin del
pezn por la succin del beb, facilitando por tanto el
parto y la lactancia.

317
 Luis E. Simes

Esquema del eje Hipotlamo- Hipfisis

Fuente Internet genomasur.com/BCH/BCH_libro

Fisiopatologa

Hipfisis anterior:

Hiperfuncin primaria: Se produce por una lesin a nivel de la glndula hipofisaria. Causas:

Hipergonadismo: Por un aumento de la FSH y LH.

Sndrome de Cushing: Por un aumento de la ACTH

Gigantismo- Acromegalia: Por un aumento de la GH: en los nios, antes del cierre epifisario (epfisis: cartlago del
crecimiento) se produce el gigantismo hipofisario en el que hay un aumento de la talla armnico. En el adulto, se
da una patologa llamada acromegalia, que es un crecimiento excesivo de huesos y vsceras.

Galactorrea: Por un exceso de Prolactina: se produce galactorrea (salida de leche) y amenorrea.

Hiperfuncin secundaria

Se producen aumentos de las hormonas hipofisarias, consecuencia de la disminucin de las hormonas de las
glndulas hipofiso-dependientes.

Hipofuncin primaria

Enanismo hipofisario: Descenso de la GH: Descenso de la FSH y LH:

Hipogonadismo.

Panhipopituitarismo: disminucin global de todas las hormonas hipofisarias.

Hipfisis posterior

Diabetes inspida que se produce por una disminucin de la ADH

Sndrome de Schwantz-Bartter que se produce por un aumento de la secrecin de la ADH. Se suele producir por un
tumor pulmonar que secreta un polipptido semejante a la ADH.

Prolactina

La prolactina es una hormona peptdica segregada por la parte anterior de la hipfisis, la adenohipfisis, que
estimula la produccin de leche en las glndulas mamarias y la sntesis de progesterona en el cuerpo lteo. Las
hormonas que estimulan su secrecin son: los Estrgenos, la Progesterona y la GH.

318
 Bioqumica

Es uno de los pocos sistemas fisiolgicos que poseen retroalimentacin positiva, de forma que la presencia de
prolactina en el organismo favorece su produccin.

La prolactina generalmente se mide cuando buscan tumores hipofisarios y la causa de:

Produccin de leche en las mamas que no tiene relacin con un parto (galactorrea)

Impotencia

Infertilidad

Perodos menstruales irregulares o amenorrea.

Consideraciones pre analticas

Medicamentos que pueden elevar los niveles de prolactina:

Antidepresivos

Estrgenos

Bloqueadores

Metildopa

Fenotiazinas

Reserpina

Risperidona

Factores pueden incrementar temporalmente los niveles de prolactina:

Estrs fsico o emocional.

Comidas ricas en protenas

Estimulacin mamaria intensa

Anlisis de mamas reciente

Ejercicio reciente

319
 Luis E. Simes

Hormona de crecimiento y Somatomedinas

La hormona de crecimiento (hGH) es un polipptido producido por el lbulo

anterior de la hipfisis. Su secrecin es estimulado por GH-RF (factor liberador
de la hGH) secretado por el hipotlamo. Su secrecin es pulstil y es mxima en
la primera fase del sueo.

Ejerce accin fisiolgica, con un mximo durante la adolescencia, a travs de

los factores de crecimiento llamados Somatomedinas siendo el ms impor-
tante la Somatomedina C o IGF1.

Se producen en todos los tejidos, pero sobre todo en el hgado.

Funcin:

Accin Directa: Accin anti insulina. Provoca un aumento de la Glucemia y un aumento de la Lipemia.

Accin Indirecta: La realiza a travs de las somatomedinas y estimula el crecimiento esqueltico, la sntesis de
protenas y la diferenciacin celular.

Regulacin:

El hipotlamo segrega el factor liberador de la GH (GR.) que acta sobre el lbulo anterior de la hipfisis para que
se sintetice y libere GH. Las somatomedinas ejercen un Feed-Back negativo sobre la hipfisis y el hipotlamo.

Glucemia

Sntesis proteica
Eje somatotofico AGL LIPOLISIS

Crecimiento muscular y esqueltico

Fisiopatologa

Hiperproduccin de hGH .Acromegalia: Es causado por tumores hipofisarios, en general benignos, pero cuyo in-
conveniente es la produccin constante y prolongada de hGH produciendo engrosamiento de los huesos de la
mandbula, manos y pies, Diabetes tipo II, debilidad muscular. Cuando estos tumores se presentan durante la
infancia, antes del cierre de las epfisis de los huesos largos produce un crecimiento desmedido, situacin clnica
conocida como gigantismo.

Deficiencia de hGH: En nios, las manifestaciones principales de la deficiencia de hGH son la falta de crecimiento
y baja estatura, incluyendo en algunas oportunidades malformaciones congnitas.

320
 Bioqumica

Evaluacin bioqumica

Determinacin de IGF-1 en plasma

Las concentraciones plasmticas de IGF-1 se determinan mediante inmunoanlisis que pueden ser competitivos, o
ms frecuentemente inmunomtricos.

El principal problema que presenta la determinacin de IGF deriva de su unin a protenas transportadoras de
alta afinidad que interfieren en la unin con los anticuerpos del inmunoanlisis. Se utilizan diferentes mtodos de
extraccin para separar las IGF de sus protenas transportadoras.

La medida de la concentracin plasmtica de IGF-1 es el marcador bioqumico utilizado en el diagnstico y la moni-

torizacin del tratamiento tanto del dficit de hGH como de la acromegalia. Ante la sospecha de dficit de GH ba-
sada en datos clnicos (talla baja y velocidad de crecimiento disminuida en los nios; presencia de adenoma u otra
lesin hipofisaria en el adulto), el diagnstico se realiza fundamentalmente sobre la base de la falta de respuesta
de la hGH a las pruebas de estimulacin.

El hallazgo de concentraciones de IGF-1 por debajo del rango normal en pacientes con sospecha de dficit de hGH
apoya el diagnstico, si se excluye otras causas conocidas de descenso de las concentraciones de IGF-1 srico como
las hepatopatas, la desnutricin, la diabetes mellitus mal controlada o el hipotiroidismo.

Prueba de estmulo para hGH

La secrecin de hGH por pruebas de estmulo se considera como test de eleccin para el diagnstico de insuficien-
cia de hGH, aunque es conveniente asociarla con los resultados obtenidos de IGF1.

El estmulo se realiza administrando al paciente una solucin de arginina, insulina o clonidina. En esta prueba de
estmulo de hGH se espera encontrar normalmente niveles elevados a los 30 minutos post estmulo. En algunas
oportunidades el resultado no es fcil de interpretar debido al rimo pulstil de secrecin hormonal, entonces, la
evaluacin de la prueba considera como suficiente para diagnstico que alguno de sus valores incluido el basal se
detecten niveles superiores a 7.0 ng/ml.

Prueba de supresin con glucosa de la secrecin de hGH

En individuos normales la concentracin de hGH disminuye luego de la ingestin de una solucin de glucosa, situ-
acin que no se produce frente a una acromegalia.

La prueba es semejante a la prueba de tolerancia oral a la glucosa. Se le administra al paciente una solucin de
glucosa en agua y se le hacen extracciones a los 30,60 y 120 para dosar hCG y glucemia.

Interpretacin: En individuos normales el nivel de hCG descender un 50% respecto al nivel basal.

Metodologa: Se determinan por Inmunoanlisis: Quimioluminiscencia.

321
 Luis E. Simes

GLANDULAS PERIFERICAS
TIROIDES

La glndula tiroidea est situada en la cara interior del cuello y est integrada por dos lbulos laterales unidos por
un istmo. La unidad funcional son los folculos tiroideos. Cada folculo est formado por una sola capa de clulas
que rodea a una cavidad que contiene una protena llamada tiroglobulina (TG)

Glndula tiroides .Ubicacin

Fuente Internet genomasur.com/BCH/BCH_libro

El folculo capta el yodo inorgnico y se une a un aminocido tirosina de la tiroglobulina, dando lugar a la formacin
de Diyodotironina (DIT)

La unin de dos molculas de DIT da lugar a la T4 o Tiroxina.

La unin de una molcula de DIT con una molcula de MIT (monoyodotironina) da lugar a la formacin de T3 o
Triyodotironina.

La glndula tiroides sintetiza una proporcin mayor de T4 respecto de T3.

El transporte por circulacin hacia el tejido blanco se realiza por una protena heptica llamada TBG. En la clula
diana, la T4 se transforma en T3 que es la forma metablicamente activa.

322
 Bioqumica

Funciones de las hormonas tiroideas

Mielinizacin del SNC

Desarrollo fetal
Consumo de O2 y produccin de calor.
Contraccin diastlica del corazn
Incrementa contenido de 2, 3DPG en er-
itrocitos
Estimula motilidad intestinal
Estimula crecimiento esqueltico y reab-
sorcin sea
Aumenta la contraccin muscular es-
queltica
Estimula la gluconeogenesis y glucogeno-
lisis heptica
Aumenta los receptores LDL hepticos e
incrementa la lipolisis.

Regulacin eje Hipotlamo- Hipofiso Tiroideo. Retroalimentacin.

Fisiopatologa

La disminucin de T3 y T4 por disminucin de su produccin en la glndula tiroides, producir sobrestimu-

lacin de hipfisis e hipotlamo con aumento de TRH y TSH. (Hipotiroidismo primario)

La disminucin de T3 y T4 por alteracin hipofisaria, ser debido una disminucin de TSH que estimular
la produccin hipotalmica de TRH (Hipotiroidismo secundario).

Si aumenta la T3 y T4 por patologa tiroidea, la TRH y la TSH estarn inhibidas (Hipertiroidismo)

Hipotiroidismo
Causas de hipotiroidismo:
Falta de yodo
Dficit congnito enzimtico
Consecuencia de tratamiento del hipertiroidismo con yodo radiactivo o ciruga
Enfermedad autoinmune :Tiroiditis de Hashimoto
Sntomas
Pulso lento, voz ronca, habla lenta, cada de pelo y cejas, parpados cados, intolerancia al fri, estreimiento, au-
mento de peso, cabellos y piel seca, sndrome del tnel carpiano, depresin, demencia.
Hipertiroidismo
Causas de hipertiroidismo
Enfermedad autoinmune (Graves: se producen Ac anti receptor estimulantes de TSH en la tiroides)
Bocio multinodular toxico o bocio hipertrfico.
Hipertiroidismo secundario por tumor hipofisario.

323
 Luis E. Simes

Sntomas
Aumento del metabolismo general del organismo, frecuencia cardaca, hipertensin arterial, sudor, escalofros y
temblor, nerviosismo, prdida de peso, insomnio, movimiento intestinal, diarrea, debilidad, ojos saltones y enro-
jecidos (exoftalmia), mirada fija.
Estudio bioqumico de la funcin tiroidea
Determinaciones basales:
Determinacin de hormonas tiroideas T3, T4, T4 libre e hipofisaria, TSH.
Determinacin de Tiroglobulina.Es una hormona intratiroidea, por tanto su determinacin tiene sig-
nificado clnico en un a tiroiditis parar comprobar el grado de dao glandular y en el caso de una
tiroidectoma para medir la posible presencia de metstasis.
Determinacin de Ac anti-tiroideos: Ac anti tiroglobulina y Ac anti Peroxidasa.
Determinacin de LATS: Ac estimulantes de tiroides.
Determinacin de TBG o TBII. Protena transportadora de TG. La determinacin de su concentracin
evidencia un posible error gentico en la sntesis de esta protena transportadora.
Determinacin de TRAB. Ac anti receptor de TSH.
En el laboratorio clnico se utiliza metodologas que permitan detectar concentraciones muy bajas (en el orden
de los nanogramos), por tanto deben ser de gran sensibilidad y especificidad. Habitualmente el dosaje de estas
hormonas y anticuerpos se utilizan Inmunoanlisis competitivos y no competitivos como: Quimioluminiscencia
(MEIA), Electroquimioluminiscencia, y RIA.
Consideraciones pre analticas:
Horario de extraccin :hasta 10 am (ritmo circadiano)
Pacientes internados el valor basal de TSH se encuentra habitualmente aumentado.
No tomar levotiroxina antes de la extraccin.
No realizar diluciones de la muestra (se altera el equilibrio: libre unida a protenas de transporte) T4
Libre (0,03%) VS T4 Unida a TBG (99,97%)
Pruebas funcionales:
Prueba de estmulo con TRH se administra por va intravenosa una dosis adecuada de TRH sinttico. Se hace una
toma basal previa y extracciones a los 25 minutos de la administracin y se cuantifica TSH.
Interpretacin: se alcanza un valor mximo a los 25 minutos, interpretndose que un aumento de 5 veces el valor
basal de TSH indica buena respuesta hipofisaria.
Pesquisa neonatal del Hipotiroidismo congnito
El Programa de Pesquisa Neonatal (PPN) fue creado en el ao 2000 por el Ministerio de Salud del Gobierno
de la Ciudad. La misin principal del Programa es prevenir, mediante el diagnstico y tratamiento precoz
de patologas neonatales inaparentes, el dao irreversible ocasionado por la enfermedad.
El hipotiroidismo congnito, la fenilcetonuria, la galactosemia y la deficiencia de biotinidasa son enfermedades
que producen retraso mental grave adems de otras patologas.
Prevalencia 1:4000
Valor crtico obtenido en el neonato :TSH>20 uUI/ml

324
 Bioqumica

Existen sustancias que atraviesan placenta que producen hipotiroidismo congnito transitorio.

Iodo
Drogas anti tiroideas
Beta bloqueantes.
Litio.

GLANDULA SUPRARRENAL

Las glndulas suprarrenales son dos glndulas situadas en los polos superiores de ambos riones. Se dividen en
dos zonas diferentes tanto anatmica como funcionalmente, que son la Corteza y la Mdula Suprarrenal.

Corteza suprarrenal

Secreta hormonas esteroideas y se evidencia a su vez tres zonas:

Zona Glomerular: Producen mineracorticoides como la Aldosterona. Regula el balance hdrico: Produce au-
mento de la volemia y la retencin de Na+ y agua actuando sobre el tejido blanco que es el rin y favorece
la eliminacin de potasio.

Zona Fasciculada: produce los glucocorticoides como el Cortisol. Tiene un ritmo circadiano con un mximo de
concentracin a las 8 am., y mnimo a las 8 pm. La secrecin de cortisol est regulada por la ACTH. Regula los
niveles de glucosa en perodo de ayuno mediante un proceso de neoglucognesis a partir de las protenas,
liplisis. Es antiinflamatorio, inmunosupresor.

Zona Reticular: Produce andrgenos: Androsterona y Dehidroepiandrosterona. Intervienen en desencadenar

la pubertad.

325
 Luis E. Simes

Mdula suprarrenal

Segrega las catecolaminas Adrenalina (A) y la Noradrenalina (NA). Se sintetizan a partir de Tiros

La degradacin de catecolaminas da lugar al cido vainillimandlico que se elimina por via renal.

La Noradrenalina interviene en la contraccin de las arterias, mientras que la Adrenalina aumenta la frecuencia
cardiaca, aumenta el volumen del latido y dilata los bronquios.
Fuente Internet http://iqaquiron.com/portal/cirugia-endocrina
Regulacin del eje Hipotlamo Hipfiso Adrenal
El eje HHA, una parte del sistema neuroendocrino que regula las reacciones al estrs y regula varios procesos
del organismo el sistema inmune, las emociones, conducta sexual y el metabolismo.

La secesin de ACTH est regulada por el hipotlamo a travs

de 2 factores hipotalmicos la CRF o Factor liberador de cor-
ticotrofina y la ADH, hormona antidiurtica. Esta ltima po-
tencia la liberacin de la ACTH frente al estmulo (stress). La
retroalimentacin es positiva respecto a la glndula suprarre-
nal, el feed back negativo es a travs de los glucocorticoides
(Cortisol). Existe una retroalimentacin positiva de citoqui-
nas producidas por clulas del sistema inmune, estimulando
la produccin de ACTH y CRF.
Fisiopatologa
Hipofuncin Corticosuprarrenal:
Primaria: Enfermedad de Adisson .Alteracin de la funcin de la corteza suprarrenal, estara disminuido Cortisol
y Aldosterona, y aumentada ACTH. Se presenta con hiperpigmentacin de la piel.
Secundaria: Alteracin Hipofisaria. Se observa disminucin de ACTH, mantenindose los niveles de Aldosterona y
disminuido el Cortisol. No hay hiperpigmentacin.
Hiperfuncin Corticosuprarrenal:
Sndrome de Cushing: Cursa con aumento de Cortisol.
Primario: alteracin en la funcin en la glndula suprarrenal. Habitualmente se debe a tumores funciona-
les en la corteza suprarrenal. Cursa con ACTH disminuida.
Secundario: puede ser debido a dos motivos:
Alteraciones de la hipfisis con aumento de ACTH.
Tumores pulmonares que producen un polipptido semejante a la ACTH.

326
 Bioqumica

Sndrome Adrenogenital: Hiperplasia suprarrenal

Congnito. Falla en la sntesis de la enzima 21 hidroxilasa que intervienen en la sntesis de corticoides,
cursando con el concomitante aumento de ACTH, e hiperplasia de la corteza suprarrenal y aumento se-
cundario de andrgenos.
Adquirido: Producido por un tumor funcionante en la zona reticulada de la corteza
Hiperaldosteronismo: es un aumento de aldosterona debido a:
Primario: Producido por tumor en la zona glomerular.
Secundario: debido a estmulos externos (Ej. Disminucin de volemias que estimula la secrecin de aldo-
sterona)
Hiperfuncin de la Mdula Suprarrenal:
Se produce por un tumor de la mdula suprarrenal llamado feocromocitoma que produce un aumento de las
catecolaminas.
Estudio bioqumico de la funcin adrenal
Determinacin de CLU (Cortisol libre urinario): cuando es >200 ug/24 hs hay exceso de cortisol libre.
El cortisol libre urinario es un ndice de la secrecin de cortisol que resulta de la filtracin glomerular en
24 hs del cortisol plasmtico en la forma libre. Aproximadamente el 1% del cortisol secretado cada da es
excretado en la orina en su forma libre.
La CBG (Protena transportadora de corticoides) se satura a una concentracin de 25 g/dl de cortisol, por
lo que un aumento en la excrecin de cortisol plasmtico refleja rpidamente un aumento en el valor del
CLU. El incremento en la excrecin de cortisol libre urinario es el indicador ms sensible de hipercortisolis-
mo endgeno, para una duplicacin del cortisol plasmtico el CLU aumenta 5 veces o ms. El cortisol libre
urinario es un reflejo ms exacto de la secrecin de cortisol que una nica muestra srica. Metodologa:
Inmunoensayos: RIA- Quimioluminiscencia.
Cortisol salival 11 hs: Se correlaciona con valores de cortisol srico libre. La medicin en saliva puede ser
una buena alternativa a la medicin srica. Es una prueba muy til para el diagnstico de Cushing.
Determinacin de ACTH: Se realiza para determinar su la hper o hipo secrecin es primaria o secundaria.
Metodologa: por Inmunoanlisis.
Determinacin de SHBG (Protena transportadora de andrgenos y estrgenos). Metodologa: inmuno-
anlisis.
Determinacin de catecolaminas plasmticas o cido Vainillin mandlico urinario. .Esta prueba se so-
licita frente a la sospecha de feocromocitoma, con sntomas de hipertensin arterial de difcil control,
cefaleas, sudoraciones.
Determinacin de SDHEA: La evaluacin de esta hormona, junto con 17 alfa OH progesterona y testos-
terona evala el aumento del nivel de andrgenos causante de hirsutismo o amenorrea. La metodologa
utilizada son pruebas de inmunoanlisis.
Pruebas funcionales
Ritmo de cortisol- ACTH: Se realiza para estudiar posible alteracin del ritmo circadiano. No requiere estmulo. Se
extraen muestras a las 8 de la maana y a las 20 hs del mismo da y se determina Cortisol y ACTH.
Interpretacin: se alcanza el mximo de cortisol a las 8 de la maana y un mnimo por la noche.
Ritmo circadiano del cortisol

327
 Luis E. Simes

Test de inhibicin corta (NUGGENT):

Esta prueba determina si existe produccin en exceso de cortisol de forma autnoma en las glndulas suprarre-
nales, o si hay una falla en la regulacin hormonal.
El paciente debe tomar una dosis de 1 mg de dexametasona entre las 11 p. m. y la medianoche. La
dexametasona en bajas concentraciones no interfiere en la determinacin de cortisol.
Se obtiene una muestra de sangre en el laboratorio a la maana siguiente entre las 8 y las 9 a. m. Se analiza Cortisol
y la ACTH.
Interpretacin: Si la regulacin de cortisol es correcta, los niveles de cortisol disminuirn luego de la toma de
dexametasona, lo que no pasar si se padece sndrome de Cushing.

GONADAS

Las hormonas sexuales, tanto femeninas como

masculinas, son esteroides derivados del coles-
terol. El principal esteroide testicular es la Testos-
terona, mientras que los principales esteroides
ovricos son el Estradiol y la Progesterona.

En el Hipotlamo se produce la Hormona Libera-

dora de Gonadotrofinas (GnRH), que se libera en
forma pulstil e induce la produccin de LH y FSH
(gonadotrofinas) por la Adenohipfisis. Ambas
ejercen su accin tanto en ovario como en test-
culo.

La secrecin de la GnRH y su ritmo son modulados por numerosos neurotransmisores. Las endorfinas, la testos-
terona, la progesterona y la prolactina, segregada en situaciones de estrs, disminuyen la secrecin de GnRH.

328
 Bioqumica

Funcin gonadal masculina. Fisiologa. Regulacin

El testculo posee dos funciones bsicas: endocrina (produccin de hormonas) y exocrina (produccin de esper-
matozoides).

La GnRH es segregada en el hipotlamo en cantidades regulares cada 90 a 120 minutos.

El hipotlamo controla la funcin testicular mediante la GnRH al estimular las hormonas hipofisarias LH/
FSH.

La LH regula y estimula las biosntesis de testosterona en las clulas de Leydig, localizadas en el intersticio
testicular.

La Testosterona tiene feedback (-) a nivel de Adenohipfisis e Hipotlamo.

La FSH estimula la espermatognesis al actuar sobre las clulas de Sertoli, localizadas en los tbulos semi-
nferos.

Las clulas de Sertoli bajo la accin de FSH, produce ABP que concentra Testosterona en el compar-
timiento tubular para producir la espermatognesis.

Regulacin hormonal. Eje

HH Gonadal masculino

Efectos biolgicos de la testosterona

En los tejidos diana donde acta la testosterona, sta se reduce de inmediato gracias a la enzima 5 reductasa, a
Dihidrotestosterona (DHT), que es un andrgeno mucho ms potente que la Testosterona (T).

Ambas hormonas inducen y mantienen caracteres masculinos primarios (relacionados con la reproduccin) y se-
cundarios (relacionados con los cambios corporales y de comportamiento). Adems, la T es absolutamente nece-
saria para el proceso de espermatognesis, aumenta la masa muscular y la sntesis proteica. La DHT tiene accin
en casi todos los tejidos unindose directamente al receptor nuclear.

Aparte de la T y DHT, se producen otros andrgenos. La Androstenediona se produce tanto en testculos como
en corteza suprarrenal, y la Dehidroepiandrosterona se sintetiza fundamentalmente en la corteza suprarrenal de
ambos sexos.

Los andrgenos desempean un importante papel en la activacin de la funcin cognitiva; aumentan la masa
corporal magra; mantienen la masa sea (el hipogonadismo es una de las principales causas de la osteoporosis
en los hombres); estimulan la eritropoyesis; poseen un claro efecto sobre los lpidos: mejora la concentracin de
lipoprotenas de alta densidad (HDL); favorece la salud cardiovascular.

Funcin ovrica. Fisiologa.

Las hormonas sexuales femeninas producidas por el ovario son Estradiol y Progesterona (tambin pequeas can-
tidades de estrona, testosterona, androstenediona, inhibina y relaxina) y su regulacin va Hipotlamo-Hipfisis
tiene un ritmo ultradiano (pulstil) y mensual.

329
 Luis E. Simes

Los tejidos diana del Estradiol y Progesterona son endometrio uterino, epitelio vaginal, glndulas mamarias sufren
estos cambios cclicos.

Estrgenos

El ms potente secretado por el ovario es el estradiol 17 . La estrona se produce en tejidos perifricos y el me-
tabolito que aparece en orina es el estriol. En sangre circula unido a la hormona transportadora de andrgenos y
estrgenos: SHBG.

Acciones biolgicas de los estrgenos: Estimulan el desarrollo de las caractersticas sexuales femeninas, distribu-
cin de la grasa corporal, desarrollo de genitales, proliferacin del endometrio y mucosa vaginal, sobre el sistema
vascular activan sustancias vasodilatadoras, reducen los niveles de colesterol LDL y aumentan los de HDL.

Progesterona

Es una hormona esteroidea producida fundamentalmente a partir del momento de la ovulacin por el cuerpo
lteo. Circula en sangre unida a la protena transportadora de cortisol: CBG.

Acciones biolgicas: Posee receptores en mama y tero.

Prepara el tero para la anidacin del embrin

Mantiene el tero en condiciones durante el embarazo

Estimula el crecimiento de las glndulas mamarias, pero suprime la secrecin de leche.

Mantiene la placenta

Efectos ligeramente catablicos

Regula la secrecin de gonadotrofinas

Ayuda a la retencin de Na+ en el tbulo contorneado distal, porque se parece estructuralmente a la Aldosterona,
por lo que ocupa sus receptores y es por eso que principalmente en la segunda fase del ciclo menstrual puede
ocurrir retencin de lquido.

Acciones en el SNC (conducta)

Regulacin

La GnRH es un decapptido hipotalmico que regula la produccin de LH y FSH, no slo controla y regula los niveles
de estas gonadotrofinas hipofisarias sino que las puede controlar por separado. Ejercen un feed- back negativo
sobre las clulas hipofisarias que las hace insensibles al estmulo de GnRH.

Los estrgenos tienen un efecto estimulador sobre la hipfisis para la produccin de gonadotrofinas aumentando
el contenido hipofisario. El estmulo permanente de GnRH produce un pico de la LH acumulada en la Hipfisis que
produce la ovulacin. El incremento de los estrgenos en la segunda mitad del ciclo menstrual no producira un

330
 Bioqumica

segundo pico ovulatorio porque estara inhibido por las altas concentraciones de Progesterona producida por el
cuerpo lteo.

Esquema de la regulacin gonadal femenina

Ciclo menstrual.

A partir del primer da del ciclo, en el ovario comienzan a madurar varios folculos por estmulo de la FSH.

A medida que se desarrollan los folculos, muchos se atrofian debido a seales locales, hormonas paracrinas que
ellos mismos secretan, de tal manera que predomina uno slo, que continua desarrollo.

Este folculo tiene gran capacidad sinttica de estradiol. La sntesis de estadiol se produce por estmulo de la LH
sobre las clulas de la teca, donde se sintetiza androstenediona a partir de colesterol. La androstenediona se con-
vierte en estradiol en las clulas de la granulosa por estmulo de la FSH.

331
 Luis E. Simes

A mitad del ciclo, el feedback (+) sostenido a

nivel de adenohipfisis del estradiol, que pro-
duce acumulacin de gonadotrofinas, y el es-
tmulo hipotalmico de GnRH produce el pico
de gonadotrofinas: LH y FSH produciendo la
ovulacin.

En la ovulacin se libera el ovocito y lo que que-

da de folculo se transforma en cuerpo lteo.

En el cuerpo lteo, las clulas de la granulosa

proliferan mucho ms, se vuelven amarillas
(por la gran cantidad de colesterol) y producen
Progesterona.

El folculo restante comienza producir altos

niveles de Progesterona rpidamente, siendo
mucho ms altos que el de Estradiol, y junto
con ste ejercen un feedback (-) en la adeno-
hipfisis y en hipotlamo, inhibiendo la secre-
cin de LH, FSH y GnRH, por lo que stas bajan
rpidamente a su nivel basal.

Representacin de los eventos que se producen a nivel de hipfisis,

ovario y epitelio uterino durante el ciclo menstrual.

Como consecuencia de los niveles altos de estradiol, el endometrio se engrosa.

Si el vulo no es fecundado, comienzan a bajar los niveles de gonadotrofinas, el cuerpo lteo comienza a atrofiarse
ya que no posee factores de crecimiento.

Cuando muere el cuerpo lteo, caen los niveles de estradiol y progesterona, sumado los de gonadotropinas, lo que
provoca que el endometrio comience a necrosarse y posteriormente se desgarre, produciendo la menstruacin.

Embarazo

Si hay fecundacin, se forma un tejido nuevo: la placenta. sta secreta Gonadotrofina Corinica Humana, que re-
emplaza a las gonadotrofinas adenohipofisiarias, manteniendo as al cuerpo lteo. Adems, a medida que madura,
comienza a secretar GnRH, Estradiol y Progesterona.

En pocas semanas, la placenta reemplaza por completo al eje Hipotlamo Hipofisiario y a los ovarios.

332
 Bioqumica

Adems, sintetiza Somatotrofina Corinica, que tiene accin de hormona del crecimiento (para el feto) y de Pro-
lactina (para la madre).

Fisiopatologa

Alteracin gonadal primaria:

Bioqumicamente se observa un hipogonadismo hipergonadotropo, se observa fisiolgicamente, en la mujer post

menopusica.

- Elevacin de las hormonas hipofisarias LH y FSH.

- Disminucin de las hormonas gonadales (testosterona o estradiol bajos).

Alteracin secundaria: falla hipofisaria

Se observa un hipogonadismo hipogonadotropo:

- Hormonas gonadales baja

- Gonadotrofinas bajas (inadecuadamente altas, en relacin a las hormonas gonadales)

Alteracin terciaria: falla hipotalmica (la causa ms frecuente es el sndrome de Kallman).

Se observa un hipogonadismo hipogonadotropo

Para diferenciar un fallo secundario de uno terciario se realiza la prueba de estimulacin con GnRH sinttica. En el
fallo hipofisario (Ej. tumor de hipfisis) no se observa respuesta a la GnRH.

Sndrome de tallo hipofisario: Se produce por lesiones ocupantes de espacio que compriman e interrumpan la
comunicacin hipotlamo-hipofisaria. Se comporta como causa hipotalmica. Responde a GnRH.

Evaluacin bioqumica de la funcin gonadal en la mujer

Determinacin de 17 Estradiol: Se utiliza para el estudio de la funcin ovrica, que est sometida a una regu-
lacin cclica. Segn el momento del ciclo tendr un patrn caracterstico. En presencia de amenorrea, como no se
produce ovulacin la concentracin de Estradiol en todo el ciclo estar disminuido.

Determinacin de Gonadotrofinas LH y FSH: No es de utilidad clnica salvo para la diferenciacin entre un fallo
primario y secundario o terciario. Es til en el diagnstico del fallo ovrico primario: postmenopausia: el marcador
especfico es la FSH.

Determinacin de Progesterona: Es una hormona marcadora de la segunda fase del ciclo, de la ovulacin. Es lib-
erada por el cuerpo lteo. La fecha del ciclo elegida para su determinacin es entre los das 22 y 24.

Estradiol, gonadotrofinas y Prolactina no tienen utilidad en ciclos menstruales normales de 24-35 das. Su relevan-
cia se manifiesta solo en amenorrea primaria y oligo-amenorrea.

333
 Luis E. Simes

La metodologa utilizada en el laboratorio clnico son Inmunoensayos competitivos y no competitivos: RIA- ECLIA-
MEIA.

Evaluacin bioqumica de la funcin gonadal en el varn

Determinacin de testosterona total

Determinacin de gonadotrofinas

Su utilidad radica en diferenciar el falla gonadal primario de las alteraciones situadas a niveles superiores.

En el varn la causa ms frecuente de alteracin primaria es el sndrome de Klinefelter (alteracin gentica con
disminucin de la funcin de las clulas de Sertoli y de las de Leydig con prdida total de la espermatognesis).
Analticamente existe una disminucin de la testosterona y un aumento de las gonadotrofinas. Aumenta tanto la
FSH como la LH porque falla tanto la espermatognesis como la sntesis de testosterona.

A diferencia de la mujer donde el hipogonadismo afecta sobre todo a la fertilidad, en el varn afecta ms a la fun-
cin sexual.

La metodologa utilizada en el laboratorio clnico son Inmunoensayos competitivos y no competitivos: RIA- ECLIA-
MEIA.

PARATIROIDES
Las glndulas paratiroides son glndulas muy pequeas ubicadas en los bordes superior e inferior de la porcin
externa de los lbulos tiroideos. Las clulas principales sintetizan y secretan el polipptido Paratohormona, PTH,
que desempea una funcin importante en la remodelacin sea, en la homeostasis del calcio, la excrecin renal
del fosfato y en la activacin de la vitamina D.
El cuerpo humano contiene cerca de 1200 g de calcio en las personas adultas y aproximadamente 28 g en los neo-
natos (recin nacidos a trmino). Casi todo el calcio del cuerpo (99%) reside en el hueso. El remanente reside en
los fluidos del cuerpo y tiene un papel crtico muy importante en un sin nmero de procesos fisiolgicos.
En la circulacin, el calcio existe en tres formas: 45% del calcio srico total es la forma biolgicamente activa de cal-
cio inico, 45% est unido a la protena principalmente albmina y 10% est unido a complejos aninicos (fosfato,
lactato, citrato).
El fsforo abunda en el organismo como anin intracelular y extracelular. Intracelularmente, existe en forma de
fosfato orgnico en combinacin con lpidos y protenas y es esencial para la integridad estructural de la membrana
celular y componente importante de los cidos nucleicos y de los nucletidos de alta energa como ATP. La mayor
parte del fosfato extracelular (85%) se localiza en los huesos, donde se combina con el calcio en la hidroxiapatita.
El fosfato srico existe como monofosfato inorgnico o fosfato dicido. En estas formas acta como principal am-
ortiguador del sistema urinario para facilitar la excrecin de H+.
Paratiroides: Ubicacin anatmica y regulacin hormonal

334
 Bioqumica

Regulacin hormonal del nivel de calcio srico

La liberacin de PTH se controla a travs de

sistemas de retroalimentacin muy estrictos debido a los pequeos cambios en las concentraciones plasmticas
de calcio detectadas en los receptores de las clulas principales paratiroideas.Una disminucin aguda en las con-
centraciones de calcio circulante (hipocalcemia) desencadenan la liberacin de PTH en unos cuantos segundos. Los
incrementos en las concentraciones plasmticas de fosfato incrementa la secrecin de PTH.

En el rin, la PTH estimula directamente la reabsorcin de calcio, disminuye la reabsorcin de fosfato, lo que
causa un incremento en la excrecin de fosfato y estimula la actividad de la enzima que participa en la formacin
de 1,25(OH)2 D.
La remodelacin sea significa la eliminacin continua de hueso (resorcin sea) seguida de la sntesis de nueva
matriz sea y la mineralizacin subsiguiente (formacin de hueso). La PTH induce esta actividad osteoblstica.
Fisiopatologa
Hiperparatiroidismo primario La produccin excesiva de PTH es en general, consecuencia de hiperplasia, ad-
enoma o carcinoma de la glndula paratiroides.
Las manifestaciones incluyen incremento de las concentraciones de PTH, aumento de las concentraciones plasmti-
cas de calcio (hipercalcemia), aumento de la excrecin de calcio en orina (hipercalciuria) con predisposicin en la

335
 Luis E. Simes

formacin de clculos renales as como disminucin de las concentraciones plasmticas de fosfato por un gran
incremento en su excrecin urinaria.
El incremento de PTH produce aumento de la resorcin sea e incrementa an ms las concentraciones de calcio
extracelular.
Hiperparatiroidismo secundario. En general secundario a una insuficiencia renal.
Sntomas clnicos de hipercalcemia
Osteoporosis, lo que va a facilitar la existencia de dolores y/o fracturas.
Frecuente aparicin de clculos renales.
Signos digestivos por atona del tubo digestivo, como por ejemplo anorexia, vmitos, estreimiento, l-
ceras gastroduodenales.
Hipotona muscular.
Acortamiento del espacio QT en el electrocardiograma por trastornos de la contractilidad miocrdica.
Trastornos psquicos como apata y alucinaciones.
Astenia.
Hipoparatiroidismo: El hipoparatiroidismo es consecuencia de la alteracin en la produccin de PTH que puede
relacionarse con otros trastornos endocrinos y con neoplasias, o bien, puede ser consecuencia de la ablacin
quirrgica de las glndulas paratiroides. Por su importante funcin en la regulacin aguda de las concentraciones
plasmticas de calcio, la manifestacin temprana de la ablacin quirrgica de las glndulas paratiroides es la teta-
nia hipocalcmica.
El hipoparatiroidismo es una patologa que se caracteriza por una disminucin en la secrecin de PTH, disminucin
de la calcemia y aumento de la fosfatemia.
Calcitonina
La calcitonina es una hormona peptdica producida en las clulas C o parafoliculares en la glndula tiroides en re-
spuesta a concentraciones plasmticas superiores a 9 mg/dl.
Los dos rganos efectores para los efectos fisiolgicos de la calcitonina son el hueso y el rin. La calcitonina inhibe
la resorcin sea e incrementa la excrecin urinaria de calcio.
La calcitonina no parece ser decisiva para la regulacin de la homeostasis del calcio en seres humanos; de hecho,
la eliminacin total de la tiroides no produce alteraciones importantes en la homeostasis del calcio, sin embargo,
la calcitonina se ha utilizado con fines teraputicos para la prevencin de la prdida sea y para el tratamiento a
corto plazo de la hipercalcemia.
Funciones de la Vitamina D
La vitamina D pertenece al grupo de vitaminas liposolubles y puede almacenarse en los tejidos. Concentraciones
muy altas de vitamina D (intoxicacin por vitamina D) puede llevar a problemas de calcificacin de los tejidos
blandos, depsito de calcio y fosfato en el rin e incremento de las concentraciones plasmticas de calcio, dando
origen a arritmias cardiacas.
La deficiencia de vitamina D es extremadamente comn y puede ser consecuencia del consumo diettico inadec-
uado, mala absorcin o de falta de luz solar, lo que ocasiona disminucin en la conversin de los precursores inacti-
vos a los sustratos utilizados en la sntesis de 25(OH) D. La deficiencia de vitamina D puede ocasionar deformidades
seas (raquitismo) cuando ocurre en nios y disminucin de la masa sea (osteomalacia) en adultos. La deficiencia
de vitamina D se asocia con debilidad, arqueamiento de los huesos que soportan peso, defectos dentales e hipo-
calcemia.
Evaluacin bioqumica del metabolismo fosfoclcico
Determinacin de calcio srico El calcio con la cresolftalena en un medio alcalino forma un complejo violeta, cuya
intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de calcio existente en la muestra. Se mide fotom-
tricamente.

336
 Bioqumica

Hipercalcemia: Se encuentran valores elevados de calcio en el hiperparatiroidismo, lesiones osteolticas,

acidosis tubular renal y se encuentra disminuido en el hipoparatiroidismo, raquitismo, insuficiencia renal.
Hipocalcemia por reduccin del calcio ionizado. (Calcio libre no unido a protenas)
Hipocalcemia por deficiencia en la accin de la PHT.
Determinacin de fsforo srico El fsforo se puede determinar segn la reaccin siguiente: Molibdato amnico
+ Sulfrico Complejo fosfomolibdato. La absorcin mxima del complejo se mide fotomtricamente a 340 nm.
La reabsorcin tubular renal de fosfatos es responsable de la hiperfosfatemia observada en el hipoparatiroidismo,
hipertiroidismo, hipogonadismo y exceso de hormona de crecimiento. La hipofosfatemia puede resultar de una
disminucin en la reabsorcin intestinal de fosfato o por un aumento en la prdida urinaria de fosfatos
Determinacin de calcio inico. Potenciometria directa.
Determinacin de PTH. La heterogeneidad de la PTH circulante es consecuencia de la secrecin por la paratiroides
de la forma intacta (PTH-i) y de fragmentos inactivos y del metabolismo perifrico de la forma intacta resultando
principalmente en los fragmentos amino terminal (PTH-N terminal), carboxilo terminal (C-terminal) y molcula
media (MM).
Por ello en el mercado hay disponibles diferentes metodologas de acuerdo al epitope al que est dirigido el anti-
cuerpo monoclonal. Se recomienda el dosaje de PTH intacta, debido a su mayor vida media.
Debido a que es una molcula muy lbil y la vida media de las diferentes fracciones oscilan entre 5 minutos y 30
minutos, la muestra de sangre debe ser centrifugada inmediatamente luego de la extraccin y procesada o man-
tenida en freezer a -20C.
Utilidad clnica:

Evaluacin de la hipercalcemia. En la diferenciacin de hipercalcemia por otras causas como intoxicacin

con vitamina D, neoplasias y enfermedades crnicas.

Seguimiento del tratamiento del hiperparatiroidismo secundario en la insuficiencia renal crnica.

Diagnstico diferencial de hipercalcemias. La concentracin de PTH mayor a 60 pg/ml en combinacin con

hipercalcemias indica la presencia de hiperparatiroidismo primario.

Diagnstico diferencial de hipocalcemias.

Evaluacin de la funcin paratiroidea en pacientes con desrdenes del metabolismo seo y mineral.

Metodologa: inmunoanlisis: IRMA, CLIA, ECLIA

337
 Bioqumica

CAPITULO 15

LIQUIDOS DE DERRAME Y LCR

Estudio de lquidos de puncin
Habitualmente cuando se hace referencia a los lquidos de puncin se alude a 2 entidades: los lquidos de der-
rame o serosos (Peritoneal, pericrdico, pleural) y los trasudativos como el lquido cefalorraqudeo. (LCR). La dife-
renciacin entre exudados y trasudados se realiza por las diferencias fsico qumicas y por la reaccin de Rivalta,
postiva para el caso de los exudados.
El estudio bioqumico de estos materiales tiene por objeto realizar un aporte al el diagnstico de enfermedades
relacionadas con los mismos, ya sea por afecciones en el rgano primario o patologas adyacentes, y en general se
requieren respuestas inmediatas por lo que se procesa habitualmente en el laboratorio de urgencias.
Es requisito fundamental el buen entrenamiento, habilidad y conocimiento de los procedimientos con el fin de
aprovechar la muestra, que es escasa en muchas oportunidades sin posibilidad de solicitar nueva toma de mate-
rial, para seleccionar los estudios que tengan mayor significacin para el diagnstico.
LQUIDO CEFALO RAQUIDEO (LCR)
Formacin y composicin
El lquido cefalorraqudeo es producido por las clulas que revisten los plexos coroideos y por las clulas ependi-
males que revisten las superficies ventriculares. En el adulto, el volumen total oscila entre 90 y 150 ml, la mitad
intracraneal y la otra mitad intraespinal. En el recin nacido estas cifras oscilan entre 10 y 60 mL. En el adulto cada
da se producen aproximadamente unos 500 mL de lquido cefalorraqudeo (20 mL/h), con un recambio aproxi-
mado de unas tres veces por da.
El lquido cefalorraqudeo es un ultrafiltrado del plasma, se diferencia de los lquidos serosos, en la permeabilidad
selectiva de las membranas, se la denomina barrera hematoenceflica.

339
 Luis E. Simes

Existe un transporte activo entre la sangre, lquido cefalorraqudeo, en ambas direcciones, lo que da lugar a que
exista diferencia de concentraciones a ambos lados. Los electrolitos cmo el sodio, magnesio y cloruro estn en
mayor concentracin en el lquido cefalorraqudeo que en el plasma, mientras que el bicarbonato, glucosa y urea
estn en menor. Existe muy baja concentracin de protenas.
El LCR cumple la funcin de proteccin del cerebro y amortiguacin de cualquier agresin fsica, recoleccin de
productos de desecho y circulacin de nutrientes.
Inters clnico
Deteccin de infecciones del SNC
Procesos vasculares. Hemorragia subaracnoidea
Enfermedades desmielinizantes.
Tumores cerebroespinales.
Diferenciacin con lquidos de fstulas nasales u ticas.
Obtencin de la muestra
El LCR se obtiene por puncin lumbar (PL) efectuada en LIII-LIV o por debajo para evitar dao en la columna ver-
tebral y se deja que gotee el lquido. Es una prctica mdica.
Con presiones normales, pueden extraerse hasta 20 ml de LCR sin ningn peligro. Si la presin inicial es mayor de
200 mm Hg, no deben extraerse ms de 2 ml.
Se toman tres muestras que se recogen en tubos esterilizados y se marcan secuencialmente:
Tubo 1: estudios bioqumicos e inmunolgicos
Tubo 2: examen microbiolgico
Tuvo 3: recuento de leucocitos y contaje diferencial.
Anlisis bioqumico
Examen macroscpico
El LCR cuando se presenta macroscpicamente sanguinolento puede ser debido a una hemorragia intracraneal
pero tambin debida a una perforacin de vasos sanguneos durante el procedimiento de PL. El examen visual
de las muestras pueden indicar si se trata o no de una puncin traumtica. La sangre de una hemorragia cerebral
se distribuye en los tres tubos de muestra uniformemente, mientras que en la puncin traumtica la cantidad de
sangre disuelta va disminuyendo del 1 al 3.
El lquido recolectado puede formar cogulos durante la puncin por introduccin de fibringeno en la muestra
debido a contaminacin con el plasma debido a una puncin traumtica o por dao de la barrera hematoence-
flica. (Meningitis, Sndrome de Froin)
Para producir hemlisis de los hemates deben transcurrir por lo menos 2 hs, lo que provoca un color amarillo a
la muestra: xantocroma. Esto indicara que la sangre ha estado presente ms tiempo para ser introducida por la
puncin traumtica.
El LCR normalmente es claro cristalino y sin color: Cristal de roca. Las modificaciones de estas caractersticas son
indicativas de la presencia de ciertas patologas o alteraciones.
Importancia clnica del aspecto del LCR

340
 Bioqumica

Aspecto Causa Significado

Claro cristalino Normal

Leucocitos (Pleocitosis) Meningitis

Microorganismos Meningitis
Protenas Trastornos que afectan la barrera hematoenceflica
Opalescente, tur-
bio, lechoso Produccin de IGG en SNC

Sanguinolento Presencia de eritrocitos Puncin traumtica

Hemorragia
Hemoglobina Hemorragia antigua
Clulas hemticas
Bilirrubina Concentracin elevada de bilirrubina srica.

Xantocromico Degradacin de eritrocitos

Caroteno Concentracin srica elevada

Protenas (>100 mg/dl) Trastornos que alteran la barrera hematoencefalica

Melanina Melanosarcoma menngeo

Mertiolate Artefacto

Coagulado Protenas Trastornos que alteran la barrera hematoencefalica

Puncin traumtica
Factores de coagulacin
Determinaciones Puncin traumtica Hemorragia subaracnoidea
Aspecto tubo 1,2,3 Desigual Igual
Cogulos Frecuente No se observa
Sobrenadante Incoloro Xantocrmico
Espectrofotometra entre 370 y 530 Negativo Pico 415 oxihemoglobina Pico 450-
460 Bilirrubina
Recuento total de clulas y examen microscpico
El recuento de clulas debe realizarse dentro de los 30 minutos de la PL para evitar lisis de los elementos (40% de
los elementos se destruyen en una muestra a temperatura ambiente en 2 hs.)
Las muestras que no se analizan de inmediato deben mantenerse refrigeradas.
Muestras que contienen hasta 200 leucocitos/mm3 o 400 hemates /mm3 pueden presentarse lmpidas, as que es
importante realizar siempre la observacin microscpica de todas las muestras.
Las diluciones para los recuentos celulares totales se realizan con solucin fisiolgica, y se realiza en forma
manual en una cmara de Neubauer.
Se cuentan los 4 cuadrados grandes de las esquinas y el cuadrado central de cada uno de los lados de la
cmara.
El nmero de clulas multiplicado por el factor de dilucin es el nmero de clulas por mililitro.

341
 Luis E. Simes

Recuento de leucocitos
El recuento que se realiza de acuerdo al procedimiento de recuento de leucocitos en cmara.
No se utilizan se deben utilizar mtodos automatizados debido a la baja sensibilidad y reprodubilidad del mtodo.
Cuando sea necesario realizar diluciones, se realiza con cido actico glacial al 3% para lisar los eritrocitos.
Las muestras lmpidas pueden contarse sin diluir.
Para recuento de una muestra lmpida que no requiere dilucin:
Colocar 4 gotas de la muestra en un tubo limpio.
Enjuagar una pipeta Pasteur limpia con cido actico glacial al 3%.
Vaciar por completo la pipeta y aspirar las gotas de muestra.
Dejar que se asiente 1 minuto. Descartar la primera gota y cargar la cmara.
El azul de metileno agregado al diluyente proporciona una mejor forma de visualizar los elemen-
tos y distinguir mononucleares de neutrfilos.
Se cuentan los 4 cuadrados grandes de las esquinas y el cuadrado central de cada uno de los lados
de la cmara.
El nmero de clulas multiplicado por el factor de dilucin es el nmero de clulas por mililitro.

CELULAS /mm3 = N de clulas contadas x Dilucin

N de cuadrados x 0,1 ul
Valores esperados:
Neonatos: Hasta 20-30 clulas. Predominio mononuclear
Nios y adultos: Hasta 0-5 clulas. Predominio mononuclear.
Una forma de correccin del recuento de leucocitos por una puncin traumtica es corregir el nmero de clulas
restando un leucocito por cada 700 hemates, clculo aproximado que no siempre refleja la realidad.
El recuento diferencial debe realizarse en frotis teido por la coloracin de Wright, para poder diferenciar mono-
nucleares de neutrfilos e identificar posibles clulas atpicas.
Las clulas que se observan en un lquido normal son linfocitos y monocitos. Los adultos suelen tener una relacin
70:30, en nios esta relacin se encuentra invertida.
La presencia de un nmero elevado de clulas (pleocitosis) se considera anormal al igual que la presencia de mac-
rfagos, eosinofilos, plasmocitos o clulas inmaduras.

342
 Bioqumica

El recuento diferencial proporciona informacin en cuanto el tipo de microorganismo que produce una menin-
gitis. Un recuento elevado de leucocitos con predominio a neutrfilos indicara una posible infeccin bacteriana,
as mismo un recuento moderadamente elevado de linfocitos y monocitos indicara meningitis viral, tuberculosa,
mictica o de origen parasitario.

PLEOCITOSIS
Pleocitosis por neutrfilos Meningitis bacteriana
Comienzo de meningitis virales
Hemorragia cerebral
Meningitis viral
Pleocitosis por linfocitos Tuberculosis
Neurosfilis
Meningitis por Listeria
Esclerosis mltiple
Pleocitosis por eosinfilos Rara vez en inflamaciones sistmicas
Pleocitosis por clulas tumorales Tumor primario o metastsis
Diseminacin menngea de leucemias o linfomas
Determinaciones qumicas
Protenas (Proteinorraquia)
La concentracin de protenas es muy pequea, se informa en mg/dl (en plasma el rango est expresada en g/dl).
Intervalo de referencia: oscila entre 15 y 45 mg/dl.
Se encuentran valores elevados en alteraciones de la barrera hematoenceflica, produccin de inmunoglobulinas
dentro del SNC, disminucin de la depuracin de protenas y degeneracin del tejido neural. Los procesos hem-
orrgicos y las meningitis son los procesos que elevan usualmente las protenas. No es usual encontrar valores
patolgicos con recuentos bajos.
Las protenas plasmticas pueden introducirse artificialmente en el lquido por puncin traumtica. En la medicin
de protenas suele usarse un clculo de correccin como el que se usa para clulas. Cuando los valores de hemato-
crito y protenas plasmticas son normales se puede restar 1 mg/dl cada 1200 hemates contados.
Metodologa:
Mtodo turbidimtrico adaptado en general al instrumental automatizado.
Glucosa (Glucorraquia)
La glucosa ingresa por transporte activo generndose una concentracin entre 60 y 70% del valor plasmtico. Se
mide simultneamente por el mismo mtodo para su comparacin.
Importancia diagnstica: Existen patrones clsicos asociados a ciertas patologas:
Un valor elevado se condice con un aumento plasmtico. Los valores bajos apoyan el diagnstico del po-
sible agente causante de meningitis.
Un valor bajo de glucosa acompaado de un recuento elevado de leucocitos con predominio a neutrfilos
sera indicativo de una meningitis bacteriana. Si los leucocitos son linfocitos se sospecha una meningitis
tuberculosa. Con valores normales de glucorraquia y un nmero aumentado de linfocitos el diagnstico
probable sea meningitis viral.
Lactato
Es independiente de la concentracin plasmtica.
Un dato elevado puede ser causado por una meningitis o cualquier otro trastorno que produzca hipoxia dentro
del SNC.

343
 Luis E. Simes

La concentracin de lactato suele utilizarse para monitorear lesiones enceflicas graves (Infarto cerebral, edema,
trauma).
Tiene interferencia por hemlisis y es independiente de la concentracin plasmtica.
En las meningitis bacterianas, tuberculosas y micticas se eleva por sobre 25 mg/dl, ndice ms indicativo de infec-
cin que el descenso de la glucosa.
Correlaciones clnicopatolgicas
Neurosfilis
El propsito de realizar la prueba no treponmica de VDRL es detectar casos activos de sfilis dentro del SNC.
La prueba treponmica (FTA-abs) en LCR es bsicamente 100% sensible para neurosfilis, pero se pueden obtener
falsos positivos. Frente a un resultado es negativo, la neurosfilis es muy improbable.
En ausencia de contaminacin con sangre la prueba VDRL tiene alta especificidad, pero es poco sensible (30 a
70%). Un VDRL reactivo es suficiente para diagnosticar neurosfilis, pero el negativo no la descarta.
Meningitis fngica
Es una micosis profunda causada por el Cryptococcus neoformans.
En la mayora de las personas inmunocompetentes la afeccin pulmonar es la localizacin ms frecuente pero en
los individuos inmunocomprometidos, la presentacin menngoencefaltica es la ms comn.
Caractersticas del examen fsico-qumico-citolgico:
El recuento celular es generalmente bajo con menos de 50 clulas/ul con predominio mono-
nuclear.
Las protenas y la glucosa estn levemente alteradas.
Examen Directo del LCR con Tinta China:
Se observan las tpicas levaduras con su gruesa cpsula (de 5-10 micras de dimetro).
Antigenorraquia (antgeno polisacrido):
Permite un diagnostico precoz. Es sensible y especifico.
Es importante cuando los exmenes directos con tinta china son negativos.
En pacientes HIV negativos, puede ser la nica prueba positiva.
Cultivo de LCR: confirma el diagnostico.
Meningitis tuberculosa
El diagnstico precoz es sumamente difcil, por lo que debe instaurarse la terapia en los casos de sospecha clnica.
Deteccin de BAAR: Se tie un extendido de la muestra con tincin cida rpida o de Zhiel-Nielsen, cido-alcohol
resistente. La sensibilidad de las tinciones es baja, se puede mejorar con las tinciones fluorescentes de auramina-
rodamina. La sensibilidad del cultivo es de 75 a 90%, pero el bacilo demora mucho en crecer en la placa mucho.
La adenosina deaminasa (ADA) es significativamente mayor en la meningitis tuberculosa que en otros tipos de
meningitis y trastornos del SNC.

344
 Bioqumica

Cuadro que resume las caractersticas del LCR en diferentes patologas

Patologa Aspecto Clulas /ul Protenas Glucosa Observaciones

mg/dl mg /dl
Meningitis bacteri- Turbio >500 80-500 <40 90% Neutrfilos
ana
Neutros

Meningitis viral Claro o LT 5-300 30-100 Normal Mononuclear

Meningitis TBC Claro 100-600 50-300 <45 BAAR +

Meningitis fngica Lig Turbio 40-400 50-300 <45 Criptococos
HSA Xantocromico 25-1000 Normal o Espectrofotometria
LIQUIDOS DE PUNCIN PLEURAL
Formacin y composicin
Las superficies pleurales se hallan normalmente humedecidas por 1 a 10 ml de lquido derivado de la ultrafiltracin
del plasma. Se puede considerar una cavidad virtual.
En condiciones normales la cavidad cerrada de la pleura permite en su interior una presin negativa que logra la
expansin pulmonar; esta presin intrapleural refleja el gradiente diferencial entre la presin exterior a la cavidad
torcica y el interior del pulmn.
La formacin de lquido pleural puede originarse por un aumento de la permeabilidad de la pared capilar, a variac-
in de la presin osmtica del plasma o a la presin hidrosttica. La presin osmtica del plasma es proporcional
a la concentracin de protenas (en moles), la albmina ejerce una mayor presin osmtica que las globulinas. La
presin hidrosttica est dada por la presin venosa en la vena cava superior, las pulmonares y las bronquiales. La
resorcin de protenas se realiza a travs del sistema linftico.
Se considera patolgico un volumen de lquido pleural que pueda ser detectado radiolgicamente. El derrame
pleural se produce cuando hay un desbalance entre la produccin y reabsorcin de lquido pleural:
La acumulacin anormal de lquido o derrame pleural puede ser deberse a:
Aumento de las presiones hidrostticas: Al elevarse las presiones capilares de la circulacin pulmonar
como en la insuficiencia cardiaca se producir un trasudado.
Descenso de la presin onctica: Como en el sndrome nefrtico o la desnutricin extrema, por dis-
minucin de protenas plasmticas.
Aumento de la permeabilidad en la microcirculacin pleural: Es lo que se produce cuando la pleura se
ve afectada por el proceso patolgico, como en las afecciones infecciosas, inflamatorias o tumorales. Da
lugar a exudados.
Alteracin del drenaje linftico: Se compromete la reabsorcin del lquido. Es tpico del derrame tumoral
recidivante o persistente. Si existe rotura o bloqueo del conducto torcico producir quilotrax.
Obtencin de la muestra

La obtencin de la muestra se realiza por toracentesis, con aspiracin del lquido mediante una jeringa heparin-
izada y separacin inmediata en diferentes tubos para:
Recuento celular
Estudio qumico
Microbiologa
Estudios anatomopatolgicos
Se debe remitir una jeringa con muestra en anaerobiosis para Ph

345
 Luis E. Simes

Clsicamente los derrames pleurales se clasifican como trasudados o como exudados.

Los trasudados son consecuencia de un aumento de la presin microvascular o de la disminucin de la presin

onctica de la sangre o de la combinacin de ambos:

La concentracin de protenas es inferior a la srica, menos de 3 g/dl.

La concentracin de glucosa est en el rango de la srica.

La concentracin de LDH es normal.

El recuento de leucocitos se encuentra por debajo de 1000/mm3.

La concentracin de colesterol es inferior a una cuarta parte del valor srico.

Los exudados son consecuencia de un aumento de la permeabilidad de la superficie pleural en general por
inflamacin de diversa causa. El exudado es un lquido con alto contenido en protenas resultante de una in-
flamacin local o por una falla de drenaje linfticos o ambos mecanismos. Los exudados se producen en infeccio-
nes colagenopatas y neoplasias.
Origen de derrame pleural
Si el derrame pleural es trasudado no es necesario investigar ms, pero hay que investigar la etiologa si es exu-
dado.
Trasudado
Insuficiencia cardaca
Hipoproteinemias: Desnutricin, nefrosis
Mixedema (EDEMA)
Exudado
Infecciones: Neumonas, tuberculosis, infecciones micticas.
Tumorales: tumores parenquimatoso, linfomas.
Enfermedades sistmicas: lupus, artritis reumatoidea ,dermatomiocitis, vasculitis.
Digestivas: Pancreatitis aguda, perforaciones del tubo digestivo esofgicas, peritonitis.

346
 Bioqumica

Anlisis de laboratorio
Aspecto
Color:
El lquido normalmente es de color amarillento transparente. .
Rojo: presencia de hemates.
Quiloso: presencia de grasas en forma de triglicridos.
Hemorrgico se deber realizar un hematocrito para descartar un hemotorax. Si es superior al 50% del
hematocrito de sangre perifrica es diagnstico de hemotorax Si la presencia de sangre es debida a la
toracocentesis, el grado de coloracin durante la aspiracin no ser uniforme, observndose un aclara-
miento progresivo durante la obtencin del lquido.
Turbidez:
Puede deberse a un aumento de la concentracin celular o de lpidos.
El examen del sobrenadante tras la centrifugacin permite su diferenciacin.
Recuento celular
Hemates

Se realiza en cmara de recuento manual de Neubauer o en contador hematolgico automtico en funcin de la

concentracin de eritrocitos y la sensibilidad del instrumento.

Leucocitos
La medicin debe realizarse manualmente en cmara o en contador hematolgico.
La mayora de los trasudados tienen una concentracin inferior a 1000 leucocitos/ml y en la mayora de los exuda-
dos es superior a l1000 leucocitos/ml.

Los recuentos mayores a 10.000/ml se ven en derrames paraneumnicos, mayores de 50.000/ml en empiema.
Los derrames crnicos (TBC, neoplasia) tienen menos de 5.000/ml. La linfocitosis es indicativa de TBC, neoplasia,
linfoma, pleuresa reumtica. Se encuentra predominio neutroflico en neumona.

Determinaciones qumicas

PH: Es importante en el diagnstico diferencial de exudados. El pH de un lquido pleural en un individuo normal

es 7,64.

PH<7,2: Indicativo de derrame paraneumnico, ruptura esofgica, tuberculosis pleural, neoplasia pleural, hemo-
torax, lupus eritematoso sistmico.

PH<7,0 Es indicacin de drenaje con tubo de toracotoma.

Glucosa: La concentracin de glucosa en el Lp es aproximadamente igual a la glucosa en sangre.

Glucosa< 60 mg/dl: Sugiere consumo por metabolismo celular o bacterias. Derrame pleural paraneumnico, neo-
plasia, empiema.

Glucosa < 40 mg/dl: Indicacin de drenaje.

Valores muy bajos indicaran presencia de clulas atpicas e indicacin de citologa.

Protenas: Se encuentran ms elevadas en exudados que en trasudados pero su valoracin no aporta toda la in-
formacin para hacer un diagnstico diferencial de exudados. Se realiza por determinacin colorimtrica segn la
metodologa de Biuret, y lectura fotomtrica

347
 Luis E. Simes

LDH. Indica grado de inflamacin (Sptica o asptica) y procesos neoplsicos malignos. Tambin se encuentra el-
evada si existe hemlisis en la muestra. La determinacin de LDH se realiza por metodologa enzimtica cintica y
medicin espectrofotomtrica.
Triglicridos: Valores superiores a 110 mg/dl se pueden encontrar en quilotorax.

Adenosina deaminasa (ADA) permite la diferenciacin de TBC pleural y neoplasia cuando es mayor de 45 UI.
Existen criterios para la diferenciacin entre trasudados y exudados (los exudados deben cumplir al menos uno de
los siguientes criterios):

Criterios de light Trasudado Exudado

LDH Lp /LDH s <0,6 >0,6

LDH Lp <2/3 LIMITE SUERO >2/3 LIMITE SUERO

PROTEINAS Lp/PROTEINAS s <0,5 >0,5

BILRRUBINA Lp/BILIRRUBINA s <0,6 >0,6

COLESTEROL Lp/COLESTEROL s <0,3 >0,3

ALBUMINA s/ALBUMINA Lp >12 g/l <12 g/L

Exmenes microbiolgicos
Tincin de Gram para la deteccin precoz de grmenes.
Cultivos en medios aerobios y anaerobios.
Segn exista sospecha clnica se realizan cultivos de micobacterias y hongos

LQUIDO PERITONEAL O ASCITICO

Formacin y composicin
El peritoneo es una membrana de doble capa serosa, que tapiza las paredes de la cavidad abdominal y forma plieg-
ues (los mesos, los epiplones y los ligamentos) que envuelven las vsceras situadas en esa cavidad, sirvindoles
de sostn.
Est en contacto, por un lado, con la cara interna de la cavidad abdominal y, por el otro, con la cara externa de los
rganos.
La capa exterior, llamada peritoneo parietal, est adherida a la pared abdominal y la capa interior, peritoneo vis-
ceral, envuelve los rganos situados dentro de la cavidad abdominal.
El espacio entre ambas capas se denomina cavidad peritoneal; y contiene una pequea cantidad de fluido lubri-
cante que permite a ambas capas deslizarse entre s y facilitar el movimiento de las vsceras.
El lquido asctico es un ultrafiltrado del plasma. Normalmente se encuentra en un volumen inferior a100 ml y es
de color amarillo claro.

348
 Bioqumica

La puncin abdominal (paracentesis) est indicada:

Ascitis de etiologa desconocida.
Sntomas debido a la ascitis.(disnea)
Hemorragia intraabdominal por traumatismo.
Dolor agudo abdominal de etiologa desconocida.
Hipotensin pos operatoria.
Anlisis de laboratorio
Color y aspecto
Amarillo plido trasparente: Normal. Se presenta en fallo congestivo cardaco-sndrome nefrtico-ob-
struccin vena heptica.
Turbio: Se presente frente a procesos como Peritonitis-Pancreatitis-Intestino desgarrado.
Sanguinolento: Se observa con vasos mesentricos desgarrados-Baso e hgado reventado-aneurisma de
aorta y arteria mesentrica.
Verde viscoso: Presencia de bilirrubina.
Lechoso: poco comn. Ascitis quilosa. Linfoma-Carcinoma-Cirrosis heptica.

Recuento celular y examen microscpico

Constituye una prueba presuntiva de Peritonitis (PBA):

Concentracin de leucocitos >300 /ml >250 /ml PMN (polimorfonucleares)

El aumento de leucocitos y de neutrfilos, prueba de traumatismo intestinal.

Como los crecimientos microbiolgicos son lentos y presentan algunas veces falsos negativos, el recuento dife-
rencial se hace esencial en las peritonitis bacterianas espontneas que complican la cirrosis, caracterizada por no
presentar una fuente primaria de infeccin. Normalmente, en ausencia de infeccin, los leucocitos no superan los
300/ml y predominan los linfocitos, siendo la proporcin de polimorfonucleares inferior al 25 %.

Si se supera este porcentaje se considera que existe infeccin, aunque hay casos en que aun as el lquido se man-
tiene estril. Un dato ms especfico es la cantidad de neutrfilos, que es superior a los 250/ml en los procesos
spticos, dato definitivo si se acompaa de clnica. No obstante, los casos con ms de 250/ml pero sin sntomas
(ascitis neutroflica) han de considerarse tambin como peritonitis bacteriana y se deben tratar como tales.

La presencia de clulas atpicas es indicativo de un examen citolgico.

Exmenes microbiolgicos
Siempre que se realice una paracentesis diagnstica se deben recoger muestras para microbiologa. El rendimiento
aumenta cuando se hace la inoculacin directamente en frascos de hemocultivo, ya que las bacterias suelen ser
escasas y se obtiene mejor rescate.
En la peritonitis bacteriana espontnea (PBE) del paciente cirrtico la positividad de los estudios bacteriolgicos
no supera el 70%. De ah la necesidad de tratar las ascitis neutroflicas.
Si se sospecha peritonitis tuberculosa se deben realizar cultivos en medios especficos e investigar la presencia de
ADN micobacteriano (Tcnicas de Biologa molecular), ya que la tincin de Ziehl-Neelsen raras veces es positiva.

349
 Luis E. Simes

Determinaciones qumicas
Estos materiales biolgicos se pueden clasificar en trasudados y exudados.
Los trasudados son tpicos de las ascitis por fallo congestivo cardaco, obstruccin de venas hepticas o
sndrome nefrtico.
Los exudados tpicos presentan concentraciones de protenas superiores a 3 g/dl y son debidas a peritoni-
tis o cncer que afecta el peritoneo.
La determinacin de pH no aporta valor a pesar que un pH cido podra indicar una lcera pptica perfo-
rada.
En la pancreatitis la concentracin de amilasa se encuentra elevada en el 90% de los casos.
La actividad de LDH se encuentra elevada en los derrames de cncer de peritoneo aunque tambin est
elevada en peritonitis de cualquier etiologa.
Diagnstico diferencial entre trasudado y orina: En algunas oportunidades durante la puncin se atraviesa acciden-
talmente la vejiga. En estos casos es importante determinar el origen del lquido.
Se realiza la medicin simultnea de Urea y Creatinina en Lquido peritoneal y suero: Los niveles aumen-
tados en el lquido respecto al suero indican una aspiracin accidental de la vejiga.
Los niveles elevados de urea y creatinina en el lquido peritoneal con urea elevada en sangre pero creat-
inina normal sugiere ruptura de vejiga ya que la urea difunde ms rpidamente en la superficie peritoneal.
BIBLIOGRAFA
Diagnstico Clnico por el laboratorio, Todd-Sanford, Editorial Salvat, 1990.
Fundamentos de Interpretacin Clnica de los Exmenes de Laboratorio. G. Ruiz Reyes, Edit Panamericana,
2da Ed.
Pita Fernndez, S., Prtegas Daz, S. Unidad de Epidemiologa Clnica y Bioestadstica. Complejo Hos-
pitalario Universitario de A Corua (Espaa) Aten Primaria 2003; 10: 120-124
Laboratorio Clnico/ Jorge Suardaz, Celso Cruz, Ariel Colina... [y otros].La Habana: Editorial Ciencias Mdi-
cas; 2004.
El Laboratorio en el Diagnstico Clnico, John Bernard Henry. Editorial Marbn, 20 Ed-2005.
Interpretacin del anlisis de orina Dra. Mara del Carmen Laso* Arch.argent.pediatr 2002; 100(2)
American Diabetes Association. Standards of medical care in diabetes--2010. Diabetes Care. 2010 Jan;33
Suppl 1:S11-61.

American Diabetes Association. Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes Care. 2010
Jan;33 Suppl 1:S62-9.

Bioquimica, Lehninger. Editorial Omega, 2da Ed.

350
 Bioqumica

CAPITULO 16

CONTROL DE CALIDAD INTERNO

DE PROCEDIMIENTOS ANALTICOS
Objetivo de aprendizaje

Realizar operaciones de medidas descriptivas: media, desviacin estndar y coeficiente de va-

riacin.

Relacionar distribucin Gaussiana y cartas de control de calidad.

Comprender los trminos Exactitud, precisin y veracidad.

Clculo de los lmites del error en una medicin analtica.

Para que la medicin de un mensurando realizada sobre una muestra biolgica pueda ser comparada
frente a un rango de valores de referencia, o se pueda establecer si la diferencia en las medidas entre
muestras es debida a VARIACIONES BIOLGICAS y no a ERRORES METODOLGICOS , es nece-
sario conocer la CONFIABILIDAD de esa medida.

El objetivo de la validacin analtica es conocer la magnitud del error de la medicin, y si este error pu-
ede afectar la interpretacin de los resultados en el diagnostico o seguimiento de los pacientes. As, un
proceso de validacin analtica permite saber si el mtodo es til como herramienta diagnstica.

El control de calidad analtico tiene como objetivo mantener una vigilancia constante del sistema analti-
co y de esta forma, detectar fallas que puedan afectar la excelencia de los resultados que se entregan
los pacientes .El control de calidad de la fase analtica tiene dos variables:

Aseguramiento de la calidad interna o control de calidad interno (CCI)

Evaluacin externa de la calidad (CCE)

Todas las medidas se encuentran afectadas por un error.

Errores al azar o aleatorios (EA)

Errores al azar, son los que afectan los resultados tanto en forma positiva como negativa, en cuanto
que la direccion y la magnitud del error es impredecible en el proceso de medida y es producido por
variables NO CONTROLABLES.

La precisin en el desempeo analtico de nuestro mtodo nos indica el grado de concordancia

entre medidas independientes bajo condiciones estandarizadas de procesamiento. Nos indica repro-
ducibilidad. No tiene unidades de medida, aunque si las tiene su inversa, que es la imprecisin, que
nos indica el grado de dispersin entre medidas independientes de una misma muestra procesada
en condiciones estandarizadas. Esta se mide como Desviacin Estndar (DS) o Coeficiente de va-
riacin (%CV).

Si el estudio de precisin se realiza dentro de una corrida analtica se lo denomina Precisin Intra
ensayo o Repetibilidad. Si se realiza tomando datos en diferentes das se denomina Precisin Inte-
rensayo o Reproducibilidad.

351
 Luis E. Simes

El error aleatorio puede producirse debido a:

Manejos inconsistentes:

Manejo inadecuado de reactivos

Manejo inadecuado de calibradores

Manejo inadecuado de materiales de control

Sistema analtico:

Variabilidad en el procedimiento de pipeteo de volmenes

Interferencias elctricas (Ruido)

Variabilidad de la Temperatura

Diferencias entre operadores

Podemos intervenir en la reduccin del error aleatorio tomando ciertas acciones:

Revisar preparacin de reactivos

Revisar preparacin de controles y calibradores

Verificar fechas de vencimientos de calibradores controles y reactivos

Verificar cambios de lotes

Revisar instructivos de preparacin

Estandarizacin de procedimientos

Cumplir con procedimientos de mantenimiento y Conservacin de reactivos

Error sistemtico (ES)

Los errores sistemticos, son errores que afectan los resultados en una direccin, ya sea positiva o
negativamente causando que los resultados sean elevados o sean bajos. Impacta de tal forma, que
los resultados de los pacientes pueden encontrarse groseramente sobreestimados o subestimados
respectivamente.

El error sistemtico tiene dos variantes: proporcional y constante. El error sistemtico proporcional
vara con la concentracin del componente que se est midiendo, por lo tanto aumenta a medida
que aumenta la concentracin del mensurando. El error sistemtico constante tiene siempre igual
magnitud, independientemente de la concentracin que se est midiendo.

Los errores sistemticos son una medida del SESGO o de la VERACIDAD de nuestro desempeo
analtico, evalan la INEXACTITUD.

Cmo la cuantificamos ?

ES=(Bias o sesgo)= Valor medido Valor verdadero ( En unidades de la magnitud de la medida

y en valor absoluto)

%ES: (Valor medido Valor verdadero) x 100

Valor Verdadero

Las causas frecuentes de error sistemtico estn fuertemente relacionadas con interferentes en la

352
 Bioqumica

muestra y la trazabilidad a mtodos de referencia. En la prctica diaria se debe prestar epecialmente

atencin a ciertos aspectos que pueden producir un corrimiento en los resultados debido a:

Calibracin incorrecta
Asignacin incorrecta del valor del calibrador.

Error del termostato

Mal asignado el tiempo de incubacin

Cambio de la fuente de luz.

Mantenimiento importante del equipo (cambio de tubuladuras, jeringas de pipeteo)

Mal asignados volmenes de medida

Interferentes de las reacciones qumicas.

Clculo de medidas descriptivas en mediciones cuantitativas. Media y desviacin estndar

Si procesamos infinita cantidad de veces una muestra realizando la medicin de un mensurando ,

obtendremos una infinita cantidad de resultados muy parecidos pero no necesariamente idnticos.
Si los agrupamos en intervalos y contamos la cantidad de unidades de medida que caen dentro del
intervalo (Frecuencia), podemos utilizar estos datos para grficar : % de Frecuencia en funcn de
Intervalo de medida, obteniendo, en general, una distribucin de frecuencias o histograma llamada
normal o Gaussina. (Grfico 1)

Esta distribucin est definida por una medida de tendencia central (Media o Promedio) y una me-
dida de dispersin (Desviacin estndar).

Grfico 1 Distribucin normal de frecuencias. Laboratorio Clnico. Jorge Suardiaz.Editorial Ciencias Mdicas (2004)

Otras medidas de tendencia central son la Mediana y el Modo, nosotros a los fines prcticos del
estudio del error analtico, utilizaremos la media aritmtica calculada como:

353
 Luis E. Simes

Media aritmtica x = xi /n
Calculadoras: x

Excel: Promedio

Clculo de las Medidas de dispersin:

Desviacin estndar = s =(x x)2 / n-1

Calculadoras: n-1

Excell: desvest

%Coeficiente de variacin = s * 100 / x

Para su mejor interpretacin la DS es el promedio de las diferencias de cada una de las mediciones
respecto de la media.

La distribucin Gaussiana es una distribucin de probabilidades. Segn el Grfico 1, la zona bajo la

curva comprendido entre 1 DS corresponde al 68% de la poblacin de resultados, la zona com-
prendida entre 2DS corresponde al 95 % de los datos y el rea comprendida entre 3 DS corre-
sponde al 99,5% de la poblacin de datos estudiada.

Clculo del error total

Un sistema de medicin en nuestro laboratorios va a contener un error total (ET) que es el efecto
neto combinado del error aleatorio y del error sistemtico.

Control de calidad interno

Las buenas prcticas de laboratorio definen cmo debe hacerse el trabajo para cumplir con los re-
querimientos de calidad. Podemos resumirlas en los siguientes acciones:

Verificacin de mtodos

Procesos de control de calidad

Verificacin de intervalos de referencia

Tratamiento correcto de muestras

354
 Bioqumica

Entrenamiento del personal

Manuales de procedimientos

Mantenimiento de instrumento

El control de calidad interno tiene como objetivo detectar errores en el trabajo diario para poder corre-
girlos inmediatamente y liberar resultados. El control de calidad no asegura la excelencia de un mtodo,
asegura el desempeo estable del mismo.

El control de calidad analtico es slo una parte de una cadena del proceso de aseguramiento de la cali-
dad, a partir del cual se va aceptar o rechazar una corrida analtica.

El objetivo de realizar un control de calidad es:

Detectar cambios en el desempeo estable del mtodo .

Elaborar / Interpretar las cartas de control.

Establecer qu hacer frente a un desvo en el desempeo estable del mtodo.

Los resultados del control de calidad interno que procesamos se ven afectados por:

Desempeo del ensayo.

Caractersticas del material de control que elegimos.

Manejo del material de control

Material de control de calidad

Qu es un control de calidad? Es un material comercial compuesto por alguna de las siguientes opciones
de acuerdo al uso a que se lo destinar:

Mezcla de albmina y gamma globulina

Pool de sueros humanos

Suero bovino

Pool de plasma modificado

Clulas humanas o de aves ( para recuento de clulas)

Se le adiciona:

Sustancias biolgicas para lograr la concentracin deseada de un analito.

Sustancias qumicas

Estabilizantes.

Cuntos niveles de control son necesarios?

Cantidad necesaria para cubrir el rango reportable de resultados.

Concentraciones que representen niveles de decisin mdica.

(Nivel de decisin mdica: Concentraciones de un analito en las que los resultados son crtica-
mente interpretados por el mdico para tomar una decisin teraputica.)

355
 Luis E. Simes

Ejemplos:

Seccin Qumica: 2 niveles ( calibraciones lineales)

Seccin Endocrinologa /Hematologa : 3 niveles (calibraciones no lineales)

Qu tipos de material de control existen?

Liofilizados Importante el manejo del control para su Reconstitucin

Lquidos Importante establecer procedimientos para garantizar la Estabilidad

Materiales para control de clulas Estabilidad. Se deterioran fcilmente.

Es importante que el laboratorio definina procedimientos claros respecto al manejo del material de con-
trol de acuerdo a las recomendaciones del fabricante para su:

Reconstitucin.
Almacenamiento
Estabilidad
Con qu frecuencia se procesan los controles de calidad intero?

Se procesan diariamente para evaluar el desempeo estable de nuestros mtodo. La concentracin del
analito a controlar es conocido antes de ser procesado.

Cartas de control de calidad

Bsicamente una carta de control es un grfico en el cual se representan valores de algn tipo de
medicin realizada durante un proceso continuo y que sirve para controlar dicho proceso.

Las cartas de control son grficos que permiten la evaluacin del control de calidad diario,evalan la
variacin del proceso analtico en forma dinmica. Hay varios tipos de cartas de control, la ms utilizada
es la grfica de Levey Jennings.

En ella observamos una lnea quebrada irregular que nos muestra las fluctuaciones de los resultados
obtenidos a lo largo del tiempo y alrededor de un determinado valor (Grfico 2)

Grfico 2. Carta de control

356
 Bioqumica

Esta es la fluctuacin esperable y natural de un proceso. Los valores se mueven alrededor de una lnea
central que es el promedio o media. Cualquier cambio alrededor de la media (dispersin, tendencia,
desplazamiento) produce una alarma que puede verificarse fcilmente para tomar medidas correctivas.

Procedimiento

1 Etapa

El material de control se procesa durante 20 das, para asegurar validez estadstica.

Se registran los datos obtenidos de las mediciones.

Si se detecta algn valor absurdo o que no pertenece al grupo y se lo descarta y se

lo sustituye por otra medicin.

Se calcula la Media y DS segn se expuso anteriormente y se construye un grfico

trazando una lnea a lo largo del eje de las ordenadas (Eje y) que corresponde
al valor obtenido de la media y otras 3 lneas rectas por sobre y debajo de la lnea
media que corresponden a los lmites de control :+1 DS,+2 DS, +3 DS y -1DS ,

-2 DS y -3 DS-.

Estos lmites surgen de la hiptesis desarrollada anteriormente de que la distribucin

de los datos es normal. En el grfico 3 podemos ver cmo se puede relacionar una
curva de distribucin normal con una carta de control de calidad.

Qu significa esto?

La decisin de tomar como lmites de control la DS se basa en que los errores aleatorios se distribuyen
en forma normal bajo el rea de la curva Gaussiana.

La distribucin de los resultados que se puede observar en una carta de control en un sistema que se
encuentra bajo control ( que permite reportar resultados de pacientes) tiene las siguientes caractersti-
cas:

68% de los resultados obtenidos deben estar entre los lmites de 1 DS

95 % de los resultados obtenidos deben estar entre los lmites de 2 DS

99,5 % de los resultados obtenidos deben estar entre los lmites de 3 DS

357
 Luis E. Simes

Grfico 3. Carta de control relacionada con la distribucin Gaussiana de datos

2 Etapa

Las nuevas observaciones que van surgiendo del proceso se representan en el grfico con puntos da a
da y se verifica que se encuentren dentro de los lmites aceptados.

Cmo se determinan estos lmites aceptables?

La interpretacin de estos datos se realiza segn las reglas de Shewhart o Multireglas de Westgard, que
se basan en principios de control estadstico.

358
 Bioqumica

Fuente: www.westgard.com
1-2S (resultado superior a 2 DE a partir de la media)
1-3S (resultado superior a 3 DE a partir de la media)
2-2S (2 ltimos resultados de control son mayores de 2DE)
R-4S (la diferencia entre resultados control sucesivos es 4 DE)
4-1S (ltimos 4 resultados control sucesivos superan + 1DE o son menores de
1DE)
10 -x (los ltimos resultados control sucesivos estn en el mismo lado que la media)
Algoritmo para utilizar las Multireglas de Westgard

1. El incumplimiento de una regla de alerta debe llevar a la revisin de los procedimien-

tos, comportamiento del equipo, controles y revisin de las calibraciones.

2. El incumplimiento de una regla de rechazo implica el rechazo de los resultados de

las muestras de los pacientes.

359
 Bioqumica

Captulo 17.

ESPECIFICACIONES DE CALIDAD Y VARIABILIDAD BIOLGICA

(VB)
Objetivos de aprendizaje

Reconocer y diferenciar las fuentes de variabilidad de un resultado de laboratorio.

Calcular los lmites de error en el desempeo analtico de una magnitud biolgica

Analizar la importancia de trabajar dentro de especificaciones de calidad para ase-

gurar la utilidad clnica de los resultados.
Error en una medicin analtica

Podemos definir al control de la calidad analtico como el proceso de estudiar sistemticamente todas las
variaciones que inciden en los resultados que emite el laboratorio , adems de la aplicacin de estrate-
gias y procedimientos para detectarlas oportunamente y minimizarlas hasta el nivel mximo permis-
ible, para garantizar que el laboratorio colabore positivamente en las decisiones clnicas. El Error Total
(ET) de una magnitud analtica simple se puede estimar matemticamente partir de la combinacin de
errores analticos: aleatorio y sistemtico con un 95% de confianza:

%TE = Bias % + (2*CV%) O TE = [Bias] + (2 * DS)

El Error Total refleja la variacin total de un resultado con respecto a su valor verdadero (nos indica cuan
alejado est nuestro resultado del valor verdadero). En la tabla vemos como presupuesta en diferente
magnitud la imprecisin o la inexactitud en un resultado de laboratorio:

Valor Verdadero 100 100 100

Valor medido 105 95 100

Bias 5 -5 0

[Bias] 5 5 0

DS 5 10 10

TE 15 25 20

361
 Luis E. Simes

Valor verdadero de una magnitud

Para cada paciente existe un resultado verdadero, que es el correcto. Es probable que no sea exacta-
mente el nmero que nosotros reportamos, pero existe.

Lo mismo ocurre para nuestras muestras de Control de calidad (CCI). Existe un valor verdadero pero no
es exactamente el que reportamos. Sin embargo las organizaciones que manejan las encuestas de con-
trol de calidad establecen un valor muy cercano al verdadero debido a que las ensayan por un mtodo de
referencia o definitivo, o promedian los resultados obtenidos por numerosos laboratorios, lo que permite
que se acerquen muchsimo al valor verdadero.

La validacin analtica de los mtodos permite conocer cul es el error total (TE) de un mtodo, la
siguiente pregunta que nos debemos hacer es qu especificaciones de calidad debemos emplear para
determinar si la magnitud del error del mtodo es lo suficientemente grande como para afectar la inter-
pretacin de los resultados?

Bajo estos supuestos para garantizar que nuestros resultados contribuyan positivamente en las deci-
siones mdicas, debemos lograr que la Variabilidad Analtica (VA) sea siempre menor que un Re-
querimiento de calidad establecido por nuestro laboratorio.

Qu son los Requerimientos de calidad?

Son especificaciones de calidad o lmites del porcentaje de error con que podemos trabajar con un
mtodo analtico sin invalidar la utilidad clnica del resultado. Se puede expresar como Error Mximo
Permitido (Tea%).

Existen diferentes formar de establecer el Tea%:

Requerimientos mdicos o niveles de decisin mdica que se establecen por con-

sensos internacionales.

Variabilidad biolgica.

Requerimientos regulatorios (CLIA-88)

Especificaciones dadas por el fabricante

Vamos a referirnos a la Variabilidad Biolgica como buena base o parmetro para establecer nuestro
lmite de error. Por lo tanto para obtener un desempeo analtico aceptable:

Variabilidad analtica < Variabilidad Biolgica

% TE < %TEa

Qu es la Variabilidad Biolgica?

Se entiende por variabilidad biolgica la fluctuacin natural que tiene un analito en un fluido biolgico, en
un mismo individuo en condiciones de salud o normalidad.

La magnitud de un parmetro de laboratorio no es igual entre diferentes individuos ni se mantiene con-

stante en el tiempo en una misma persona. Esto es debido a que las magnitudes biolgicas estn
sometidas a dos fuentes de variabilidad:

Variabilidad intraindividual

Variabilidad interindividual.

362
 Bioqumica

Es decir, en una misma persona no se observa el mismo valor para un parmetro analtico a lo largo del
tiempo (variabilidad intraindividual). Esta variacin es no controlable e impredecible y esta fluctuacin
se mantiene aproximadamente constante alrededor de un valor llamado punto homeosttico. Otro in-
dividuo tendr otro valor para la misma magnitud con una fluctuacin relativamente constante alrededor
de un punto homeosttico personal y diferente al primer individuo.

Cuando nos referimos a una variacin no controlable significa que la medicin de esta magnitud se
realizar siempre en condiciones estandarizadas (controlables), y estas fluctuaciones sern independi-
entes de influencia de variaciones preanalticas.

Por ejemplo: La muestra para la determinacin de Triglicridos se debe tomar bajo condiciones es-
tandarizadas de ayuno de 12 hs. La variabilidad intraindividual de ese analito para ese individuo ser
la variacin de los resultados para ese individuo siempre en condiciones de ayuno de 12 hs . No sera
vlido considerar variacin sobre muestras tomadas con 8, 9 y/o 10 hs de ayuno, ya que la variacin ser
debida a la variabilidad preanaltica.

En el grfico 1 se observa la dispersin de resultados (barra horizontal) de 6 pacientes. Se comparan 2

analitos. Se puede observar que la dispersin de resultados que obtiene cada paciente para la magnitud
Creatinina es muy estrecha (poca variabilidad intraindividual) pero los puntos medios de cada paciente
son muy diferentes entre individuos (Alta variabilidad interindividual)

Para el analito Hierro, la variabilidad entre individuos es pequea pero hay gran dispersin de resultados
para un mismo paciente.

Variables intraindividuales:

Factores metablicos

Cambios de la dieta habitual

Cambios en la actividad fsica habitual.

Factores ambientales: stress- hospitalizacin- cirugas

363
 Luis E. Simes

Variables interindividulales

Factores genticos: sexo-raza-grupo sanguneo

Factores fisiolgicos: edad- embarazo

Factores geogrficos: altitud- clima

Factores morfolgicos: ndice de masa corporal

Factores dietticos: obesidad

Qu diferencia hay entre Variabilidad Biolgica y Ritmo Biolgico?

Ambos son fuentes de variacin no controlables pero, a diferencia de la Variabilidad Biolgica, los Rit-
mos Biolgicos son predecibles.

Los ritmos biolgicos son ciclos o variaciones debido a factores biolgicos conocidos diarios, mensuales
o anuales o involucrados en el proceso normal de crecimiento a lo largo de la vida del individuo.

Ritmo biolgico a lo largo de la vida. Colesterol, urea y fsforo srico

364
 Bioqumica

Ritmos circadianos o diarios: Cortisol, Hormona de crecimiento, Gonadotrofina

corinica.

Ritmos infradianos: variaciones mensuales. LH-FSH-Estradiol-Progesterona

Ritmo circanual o estacional: Vitamina D

Ciclo ultradiano: Vara en forma pulstil :Hormonas hipotalmicas

365
 Luis E. Simes

Cmo se obtiene el dato de Tea% basado en la Variabilidad Biolgica?

Los datos se pueden obtener a partir de una base de datos confeccionada por el Dr Carmen Ricos y
col, para ms de 300 analitos a partir de la revisin de ms de 140 trabajos de investigacin , que se
actualiza anualmente.

De esta base de datos deriva una tabla de Especificaciones de la Calidad Analtica que presenta valores
de variacin biolgica intra e interindividual, expresados en trminos de coeficientes de variacin (CVw
y CVg, respectivamente).

La imagen muestra una parte del listado de analitos contenidos en la tabla de Especificaciones de cali-
dad por VB. La ltima columna indica el Error Mximo permitido basado en variabilidad biolgica (Tea%)
para cada analito.

Bibliografa de consulta

Arturo M Terrs-Speziale, Importancia de la variabilidad biolgica y de la relevancia mdica en la Norma

ISO-15189

Henny D, Fraser CG, Hyltoft Petersen P, Kallner A. Estrategies para establecer especificaciones de
calidad analticos globales en la medicina de laboratorio.Acuerdo de consenso.Scan J Clin Lab Invest
1999; 59: 585

Harris EK.Principios estadsticos subyacentes analtica establecimiento de metas en qumica clnica.Am

J Clin Pathol 1979; 374: 72-82

Rics C, Baadenhuijsen H, Libeer JC, Htyltoft Petersen P, Stckl D, Theinpont L, Fraser CG. Evaluacin
externa de la calidad: en la actualidad se utiliza criterios para evaluar el desempeo de los pases eu-
ropeos y los criterios para la armonizacin futuro. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996; 34: 159-65

366
 Bioqumica

CAPITULO 18

VALIDACIN DE RESULTADOS
Objetivos de aprendizaje

Analizar el impacto de la transferencia del error en el reporte de un informe de labo-

ratorio.

Interpretar resultados de laboratorio de acuerdo a diferentes criterios de validacin.

Decidir conductas frente a resultados discordantes o valores crticos

Transferencia del error. Impacto en el informe de los resultados

La mayor parte de las decisiones que toma el mdico respecto al manejo del paciente estn basadas
en informacin que le aporta el laboratorio clnico. Por eso es responsabilidad del laboratorio la revisin
meticulosa y sistemtica de los procesos en todas las etapas.

En el proceso de validacin adems de dar conformidad de la exactitud de los resultados, debe asegurar
la trazabilidad del resultado al paciente correcto, mediante un seguimiento retrospectivo de los pro-
cesos, a fin de encontrar posibles errores y poder resolverlos antes de la emisin del informe.

Para la validacin de los resultados es necesario considerar la transferencia de cualquier tipo de error
que se pueda cometer desde el momento del ingreso del paciente al laboratorio y durante todas las
etapas del proceso general de laboratorio, debido al impacto directo en el correcto reporte del resultado
y por lo tanto en la salud del paciente. Por lo tanto se debe asegurar:

Etapa Pre analtica

Informacin del paciente:

Identificacin unvoca

Edad

Sexo

Servicio o especialidad de procedencia

Diagnstico presuntivo

Medicacin

Toma de muestra:

Tipo de muestra y horario de toma correcto

Preparacin correcta del paciente

Considerar interferentes

Transporte, separacin, conservacin y alicuotado de la muestra en forma correcta.

367
 Luis E. Simes

Etapa Analtica

Estandarizacin de procedimientos

Control de calidad dentro de los lmites aceptables

Revisin de alarmas de los resultados

Etapa Postanaltica

Interpretacin de resultados

Intervalos de referencia

Valores crticos. Comunicacin de valores de alarma.

Congruencia entre resultados de un mismo paciente

Resultados previos del paciente

Valores calculados matemticamente

Comentarios interpretativos

Informe en la unidades de medida correctas

Validacin de resultados

La validacin es el procedimiento que permite asegurar que un resultado ha sido obtenido bajo condi-
ciones tcnicas satisfactorias y que es compatible con el estado fisiopatolgico del paciente. Esta vali-
dacin es por tanto doble: analtica y fisiopatolgica.

La Validacin Analtica es la comprobacin de la conformidad de las condiciones de ejecucin

de los procedimientos analticos.

La Validacin Fisiopatolgica es el control de la verosimilitud y de la coherencia del conjunto

de los resultados de los anlisis efectuados en un individuo teniendo en cuenta la informacin
disponible.

Validacin analtica

El objetivo es conocer la magnitud del error y su alcance en la interpretacin de un resultado, para lo

cual se analizan: Alarmas de controles de calidad y Alarmas asociadas al proceso de medida.

Alarmas de control de calidad:

Su correcta interpretacin permite la liberacin de las corridas analticas diarias, y asegura que los re-
sultados de los pacientes se encuentren dentro de los lmites de error tolerable establecido para cada
mtodo en cuestin.

Alarmas asociadas al proceso de medida:

Son los avisos o mensajes de los analizadores que alertan cuando el desarrollo de la reaccin qumica
de una metdica no ha sido satisfactoria. Ejemplo:

368
 Bioqumica

Alarma de Muestra fuera de rango reportable

Rango reportable o rango de medicin: Es el conjunto de datos que pueden ser informados con
seguridad de la significacin diagnstica y bajo control de exactitud, precisin y linealidad. Es el
intervalo de datos en el cual se puede verificar la respuesta de la medicin obtenida del instru-
mento.

Una muestra que presenta una alarma de fuera de rango reportable debe ser diluida y vuelta a
medir.

Alarma de sensibilidad
Lmite de cuantificacin: Es la menor cantidad de analito existente en una muestra que puede
ser determinada con exactitud y precisin y que puede expresarse en las unidades de medida.

Una muestra con resultado por debajo del lmite de deteccin no debe ser informada con un valor
exacto sino mediante la expresin menor de . (Lmite de deteccin)

Grfico 1. Representacin grfica de una calibracin lineal

Validacin fisiopatolgica

Es el proceso post analtico mediante el cual los resultados son revisados y quedan disponibles para uso
clnico. El objetivo es prevenir y evitar emisin de informes con errores o incongruencias que puedan
traducirse en decisiones mdicas incorrectas.

El resultado del paciente debe ser:

Compatible con la semiologa del resultado : Diagnstico/ Tratamiento/ Seguimiento/

Control

Compatible con el estado fisiopatolgico del paciente.

Consistente con el conjunto de resultados del paciente. (Validacin global)

Compatible con el historial del paciente. (Validacin longitudinal)

369
 Luis E. Simes

Criterios de interpretacin de resultados .Intervalo de referencia biolgico

Para que el mdico pueda realizar un diagnstico clnico, seguimiento de un tratamiento o pronstico de
una enfermedad, resulta indispensable encontrar el lmite entre lo patolgico y lo normal.

Los resultados de los anlisis, como los de todas las pruebas diagnsticas mdicas, slo se pueden
entender en un contexto.

La interpretacin de cualquier anlisis de laboratorio implica un proceso importante de comparacin del

resultado del paciente con un intervalo de referencia para la prueba en cuestin. Coloquialmente, se
habla de valores normales, pero actualmente el trmino intervalo de referencia se considera ms
adecuado.

Algunas pruebas proporcionan una respuesta dicotmica sencilla de s o no, positivo o negativo, que
seran las denominadas pruebas cualitativas: test rpidos de deteccin de patgenos, test de embarazo,
etc. Otras pruebas, reportan datos que son variables numricas continuas, y necesitan un tratamiento
estadstico para poder establecer estos lmites.

Cmo se determina este intervalo?

El intervalo de referencia es la representacin estadstica de la variacin biolgica interindividual de una

magnitud factible de ser medida en el laboratorio clnico.

Se obtiene por seleccin aleatoria y tratamiento estadstico de una muestra de sujetos, considerados
sanos, representativa de la poblacin que se va a contrastar.

El primer paso para determinar un intervalo de referencia es definir la poblacin a la que se refiere este
rango, por ejemplo, mujeres sanas, con edades entre 12 y 16 aos. Entonces, un nmero amplio de
personas con estas caractersticas se somete al anlisis de una prueba en concreto y los resultados se
calculan siguiendo unas normas estadsticas (estudios paramtricos de distribucin de probabilidades).

Se analiza la distribucin de los resultados y en general se obtiene es estadstico que representa a esta
distribucin: media y desviacin estndar aunque puede tratarse de una distribucin no paramtrica en
cuyo caso se establece una mediana y percentiles.

370
 Bioqumica

Con este mtodo el Intervalo de Referencia seleccionado es el 95% central de la distribucin, que estar
comprendido entre 2 DS.

Para muchas pruebas de laboratorio no existe un nico intervalo de referencia aplicable a todo el mundo,
debido a que los parmetros analizados pueden afectarse por la edad y el sexo del paciente, as como
por otras situaciones.

Cuando se examinan los resultados de una misma prueba, pero en diferentes poblaciones, rpidamente
uno se puede dar cuenta de que lo que es normal en una poblacin puede no serlo en la otra. Por ejem-
plo, el embarazo produce muchos cambios en los procesos fisiolgicos y por ello existen, para muchas
pruebas de laboratorio, unos intervalos de referencia propios para las mujeres embarazadas, como por
ejemplo de los parmetros hematolgicos.

Otro ejemplo es la fosfatasa alcalina (FA), una enzima de origen heptico y seo, que se encuentra
normalmente elevada en nios y adolescentes.

Cuando se selecciona individuos para establecer valores de referencia, la muestra estudiada debe ser
aleatoria y representativa de la poblacin estratificada en grupos segn:

Sexo

Edad

Etapas de ciclo menstrual.

Raza, etc.
En el proceso diagnstico un valor observado en un paciente slo debera compararse con los lmites de
referencia biolgicos suministrados por el mismo laboratorio que ha efectuado la medicin de la magni-
tud biolgica en cuestin.

Los intervalos de referencia pueden estimarse a partir de valores de referencia producidos por el propio
laboratorio.

Si no dispone de intervalos de referencia propios debe adoptar los establecidos por el laboratorio que
dise el mtodo y realiz los ensayos para determinarlos. Los intervalos no propios
s
lo debera adop-
tarse despus de validarlos en el propio laboratorio, aunque en la prctica esto no se realiza habitual-
mente.

Intervalo de referencia y variabilidad biolgica

Un error comn en la interpretacin de los resultados es suponer que si el valor hallado para un paci-
ente cae fuera de los lmites de los valores de referencia el paciente est enfermo. Estos resultados
anormales no necesariamente indican enfermedad, asumir que todo lo que queda fuera de ese intervalo
es anormal, es errneo, pues los estudios de dichos intervalos se realizan en poblacin aparentemente
sana.

Los resultados de las diferentes magnitudes se hallan influenciados por la variabilidad biolgica (VB)
propia del paciente y los errores cometidos en las distintas etapas del proceso analtico. El valor de
referencia del cambio (RCV) o Mnimo cambio estadsticamente significativo, obtenida a partir de
mediciones seriadas individuales tienen en cuenta estos factores, que constituyen una alternativa a los
intervalos de referencia empleados tradicionalmente en la interpretacin de resultados.

371
 Luis E. Simes

RCV = 2x Z x (CVa2+ CVi2)siendo:

Z: coeficiente de confianza bidireccional a utilizar (1.96 o 2.58 segn la probabilidad de 95 y 99%

respectivamente)

Cva: coeficiente de variacin analtica obtenida a partir del control de calidad interno

Cvi:coeficiente de variacin biolgica intraindividual (Variabilidad Biolgica segn Tablas de

Fraser).

La mayora de los analitos cuantificados en el laboratorio clnico poseen :

CV intraindividual < CV interindividual.

En estos casos, la comparacin de un resultado individual con respecto a un intervalo de referencia po-
blacional puede no ser adecuado, ya que es posible que se produzcan cambios significativos desde un
punto de vista clnico an dentro de los lmites marcados por estos intervalos de referencia tradicionales.

La razn entre CV intraindividual y Interindividual se conoce como ndice de individualidad (II).

Se ha propuesto que en los casos en los que este ndice sea bajo (II<0,6), la utilizacin del RCV consti-
tuya la estrategia de interpretacin ms adecuada.

En los casos de fuerte individualidad, la alteracin mostrada por un analito en mediciones sucesivas a lo
largo del tiempo puede tener un carcter patolgico, independientemente de que los resultados se hallen
dentro o fuera del intervalo de referencia poblacional.

De esta forma, si una diferencia entre dos resultados consecutivos de la misma prueba en un paciente
es superior al valor RCV puede indicar un cambio en el estado salud del paciente aunque ambos resul-
tados se encuentren dentro del Intervalo de Referencia.

Hay diferencia significativa entre el resultado de Creatininemia del paciente A entre los das 25 /10 y
27/10?

Da 25/10.. 0,50 mg/dl

Da 27/10.. 0,70 mg/dl Diferencia entre ambos dias 40%

Intervalo de referencia Creatinina (s). Mtodo Jaffe cintico. Valores hombres adultos :0,50 -1,10 mg/dl

CV analitico obtenido del control de calidad interno : ..3,06%

CV intraindividual ontenido de las tablas de Fraser de Variabilidad Biolgica: 5,3 %

RCV = 2x Z x (CVa2+ CVi2)= 1,41 x 1,96 x (3,06 2 + 5,3 2 )= 13,6% (95% de confianza)

Interpretacin: La mxima diferencia que puede haber entre resultados es 13,6% debido a la variabilidad
por el mtodo y la variabilidad biolgica propia del individuo.

La diferencia entre los 2 resultados es 40%, lo que se interpreta como cambio significativo a considerar
por el mdico para decidir una conducta clnica, ms all que ambos se encuentren dentro del IR.

Interpretacion de resultados cualitativos dicotmicos

Ante un resultado positivo (negativo) en una prueba serolgica, cul es la probabilidad de que el paci-
ente est realmente enfermo (sano)?

La serologa es una disciplina basada en la deteccin de anticuerpos especficos contra un determinado

microorganismo o parsito.

372
 Bioqumica

El concepto bsico que debe tenerse en cuenta es que lo que se busca no es el microorganismo /
parsito y, por lo tanto, sus resultados nunca proporcionan certeza absoluta diagnstica y deben medirse
en trminos de probabilidad.

Para que las probabilidades de un diagnstico serolgico acertado es necesario seleccionar adecua-
damente el mtodo a emplear, el momento de la toma de muestra e interpretar adecuadamente los
resultados.

A diferencia de lo que ocurre en Qumica Clnica, en Serologa se buscan anticuerpos normalmente

ausentes, por lo cual un resultado se expresa como Positivo o Negativo (Todo o nada), lo cual merece
una interpretacin diferente.

A si mismo, los informes no se expresan en unidades concretas sino relativas (ttulo) y se establece un
valor de corte arbitrario sujeto a diferentes variables.

La serologa debe interpretarse siempre en trminos de probabilidad .Es evidente que una buena prueba
diagnstica es la que ofrece resultados positivos en enfermos y negativos en sanos.

Los parmetros para determinar la confiabilidad de un mtodo son:

Sensibilidad (S): capacidad de un mtodo de dar resultado positivo en presencia de

enfermedad

Especificidad (E):capacidad de un mtodo de dar resultado negativo en ausencia de

enfermedad

Valor predictivo (VP): probabilidad que un individuo con resultado positivo est real-
mente enfermo (VP+) o de que un individuo con resultado negativo sea realmente
sano (VP-)

Teniendo en cuenta lo expresado ms arriba, la realizacin de dos o ms pruebas serolgicas no garan-

tiza que el resultado obtenido sea unvoco. Por ello, pueden presentarse situaciones que es necesario
conocer y resolver:

Resultados discordantes

Se llama discordancia serolgica cuando en un mismo paciente dos pruebas dan diferente resultado

Qu hacer ante un resultado discordante?

Repetir el estudio con la misma muestra

Realizar una tercera reaccin

Solicitar una nueva muestra en lo posible no inmediata

373
 Luis E. Simes

Para la interpretacin de los resultados es fundamental conocer el objetivo de las pruebas, el valor se-
miolgico del resultado (diagnstico, control de tratamiento, seleccin de dadores de sangre, etc). Desde
un punto de vista epidemiolgico y clnico la serologa se puede utilizar para:

Screening

Confirmacin diagnstica

Es obvio que lo ideal sera trabajar con pruebas diagnsticas de alta sensibilidad y especificidad, pero
esto no siempre es posible.

En general, las pruebas de screening deben ser de alta sensibilidad para poder captar a todos los
enfermos. Una prueba muy sensible ser adecuada en aquellos casos en los que el no diagnosticar
la enfermedad puede resultar fatal para los enfermos, como ocurre con enfermedades peligrosas pero
tratables, como los linfomas o la tuberculosis.

Por otra parte, la especificidad se refiere, como se seal previamente, a la probabilidad de que un su-
jeto sano sea clasificado correctamente. En general, las pruebas confirmatorias del diagnstico deben
ser de alta especificidad, para evitar falsos positivos. Los tests de alta especificidad son necesarios en
enfermedades graves pero sin tratamiento disponible que las haga curables, cuando exista gran inters
por conocer la ausencia de enfermedad o cuando diagnosticar a un paciente de una enfermedad que no
padece pueda acarrear graves consecuencias, ya sean fsicas, psicolgicas o econmicas (por ejemplo,
en el caso del VIH).

Valor de decisin mdica

Representan valores umbral, por encima o por debajo del cual el mdico responder segn criterios
definidos por consenso.

Por ejemplo si una calcemia se encuentra por debajo de 8 mg/dl, el paciente se encuentra frente a una
hipocalcemia, y si est por sobre 11,0 mg/dl estar en hipercalcemia, en ambos casos, el laboratorio
lo marcar con un asterisco que el mdico lo interpretar como una llamada de atencin en el informe
escrito.

Para otras pruebas, como el colesterol LDL, el inters clnico radica en un valor de corte o de decisin
mdica por sobre el cual existe riesgo de enfermedad coronaria. No hay un intervalo de referencia.

Los objetivos fueron establecidos por consenso por NCEP: Third Adult Treatment Panel (ATP III):

<100 mg/dl ptimo

100-129 mg/dl Casi optimo

130-159 mg/dl Lmite alto riesgo

160-189mg/dl Alto riesgo

>190 mg/dl Muy alto riesgo

Valores crticos

Un valor crtico es un resultado de laboratorio que refleja un estado patolgico que puede poner en peli-
gro al paciente antes que se tomen oportunamente medidas apropiadas. La comunicacin efectiva del
paciente de valores crticos incrementa la velocidad del proceso de diagnstico del paciente o facilita
cambios en el enfoque teraputico. La comunicacin de valores crticos debera ser un compromiso in-
eludible independientemente si la institucin es pblica o privada, pacientes internados o ambulatorios:
ms que una obligacin es un derecho de los pacientes.

374
 Bioqumica

Valor crtico o de pnico o de alarma se refiere a resultados de un estado fisiolgico tan alejados de la
normalidad que pueden poner en riesgo la vida de un paciente si no se acta rpidamente, concepto en
el cual queda implcita la necesidad de ser comunicados inmediatamente.

Siguiendo el ejemplo de la calcemia, 7,0 mg/dl se define como valor crtico debido a que puede producir
tetania en el paciente sin una intervencin clnica oportuna.

Para comunicar un valor crtico es indispensable que todos los profesionales involucrados en las prue-
bas sujetas a valores crticos estn familiarizados con la lista de las pruebas y con los procedimientos
a seguir que debe estar escrito y ser conocido por el laboratorio. En el laboratorio antes de definir que
un resultado corresponde a un valor crtico es indispensable revisar la veracidad del mismo y asegura-
rse que no corresponda a un resultado equivocado, posibles interferencias analticas, muestra tomada
en tiempo incorrecto, paciente incorrecto, descartar la posible intervencin de cualquier variable pre
analtica. Cuando se dispone de suficiente cantidad de muestra y es posible repetirla, se sugiere repetir
y dejar consignado en el informe: resultado verificado.

Una vez que se tiene la certeza de estar frente a un valor crtico, el protocolo debe especificar claramente
qu persona debe informar, a quin corresponde recibir la informacin y cules son los pasos a seguir.

Tabla 1 Listado de valores crticos cuantitativos de hematologa de acuerdo a diversas publicaciones disponibles en
PubMed.

375
 Luis E. Simes

Valor absurdo

Ms que un valor esperado en un resultado de laboratorio se refiere a un error en el resultado de una

determinada prueba. En el caso de la calcemia un valor absurdo podra producirse como resultado de
una transcripcin fallida por ejemplo1.0 mg/dl en vez de 10.0 mg/dl

Grfico 2. Representacin grfica de una dispersin de resultados y de los diferentes lmites para interpretar un resultado
de laboratorio.

Expresin de resultados. Protocolo de informe de resultados

Los informes de laboratorio presentan una gran heterogeneidad en cuanto a la terminologa de las mag-
nitudes analticas y unidades de medida, a pesar de recomendaciones internacionales que preconizan la
armonizacin y estandarizacin de la nomenclatura de resultados.

Para definir una magnitud analtica se debe describir el sistema, el constituyente y la unidad de medida.

Sistema: En la descripcin de una magnitud bioqumica el sistema indica el medio

en el que se encuentra el constituyente: Ejemplo: suero, orina, liquido seroso de
puncin.

Constituyente: Es la entidad biolgica fsica o qumica que se halla en un sistema.

Puede ser un compuesto qumico (Glucosa), un ion (Potasio), un grupo qumico (Tri-
glicridos), o un grupo de entidades definidas por una propiedad comn (Protenas).

Magnitud: Es una propiedad medible de unsistema fsico, es decir, a la que se le pu-

eden asignar distintosvalorescomo resultado de una medicin. Ejemplo: volumen,
densidad, concentracin, actividad cataltica.
Unidades:

En el informe de los laboratorios coexisten diferentes unidades de medida. Algunas, ms conocidas son
las Convencionales: mg/dl, g/l, mg/l, etc., otras son las del Sistema Internacional (SI). Para evitar errores
de interpretacin deben estar perfectamente definidas en el informe.

376
 Bioqumica

Unidades en base al Sistema Internacional de Unidades:

Longitud metro m
Masa Kilogramo Kg
Tiempo segundo s
Concentracin mol mol
Presin pascal pa
Temperatura Grados celsius C
Volumen litro l

Prefijos Sistema Internacional

Deci d 10(-1)
Centi c 10 (-2)
Mili m 10 (-3)
Micro 10 (-6)
Nano n 10 (-9)
Pico p 10 (-12)
Femto f 10 (-15)
atto a 10 (-18)

Factores de conversin

Parmetro Factor de conversin

De SI (mol) a De C(mg/dl) a
C (mg/dl) SI (mol)
Glucosa 18 0,055
Urea 6.01 0,16
Creatinina 0,011 88,4
Sodio 1 1
Protenas 0,1 10

Interpretacin de resultados y estandarizacin de procedimientos

Es necesario hacer un parntesis y aclarar un concepto de gran importancia. Se han definido principios
para establecer lmites para interpretar los resultados de laboratorio. Lo que debe quedar absolutamente
aclarado es que esos lmites o intervalos de referencia no sern vlidos si los procesos en las diferentes
etapas del proceso de laboratorio no estn estandarizados.

Standard: modo o mtodo establecido, aceptado y seguido para realizar determinado tipo de proceso.Es
la forma en que hay que realizar las actividades.

Ejemplo:

El Intervalo de referencia para Clearance de creatinina establecido para nuestro laboratorio es:

80 a 120 ml/min/1,73 m2. (Unidad de volumen por unidad de tiempo para un paciente de superficie
corporal 1,73 m2)

377
 Luis E. Simes

Si no estn estandarizadas las instrucciones de preparacin del paciente (Instructivo para la recoleccin
de orina de 24 hs) o no se tiene en cuenta la superficie corporal del paciente, el error cometido en la re-
coleccin de orina o la falta de correccin del resultado obtenido por superficie corporal, puede generar
un error en el resultado final que conduzca a una conducta clnica inadecuada.

Resultado discrepante. Anlisis de causas- CHECK LIST

378
 Bioqumica

CAPITULO 19

Objetivos de aprendizaje

Conocer el flujo de informacin y el alcance del Sistema Informtico del Laboratorio

en la organizacin de los procesos.

Elaborar un protocolo de informe de resultados de acuerdo a normativas vigentes.

Disear un algoritmo de autovalidacin segn diferentes criterios.

SISTEMA INFORMTICO EN EL LABORATORIO CLNICO

Un sistema informtico de laboratorio (SIL) es un conjunto de hardware y software que da soporte a la
actividad del laboratorio.

El desarrollo de los programas informticos de laboratorio ha ido creciendo acompaado de la automa-

tizacin y robtica. Esto ha generado conjuntamente la posibilidad de aumentar la produccin del labo-
ratorio y como consecuencia la dependencia al SIL. De esta forma en la actualidad en un laboratorio
organizado es casi imposible desarrollar las actividades sin que se encuentre este sistema funcionando,
lo que constituye una caracterstica que es su criticidad.

Los primeros programas desarrollados eran de uso limitado y abarcaban slo el registro del ingreso
del paciente al laboratorio y la emisin del protocolo de informe. En la actualidad es indispensable una
terminal informtica en todos los sectores y una conexin de todos entre s.

Los actuales sistemas acompaan el flujo de trabajo de todas las fases del laboratorio desde la fase
preanaltica (obtencin de un turno, solicitud mdica digital, instructivos de preparacin del paciente,
transporte, fraccionamiento y distribucin de muestras), la fase analtica (procesamiento, gestin de
calidad y validacin analtica) y la post analtica (validacin fisiopatolgica, archivo, emisin de informes,
archivo de muestras).

Otro aspecto fundamental del SIL es la gestin de stock, sistemas de calidad, pgina web para infor-
macin de los usuarios, siendo, adems una herramientas para la investigacin cientfica y epidemi-
olgica.

Debido a su amplia distribucin, el perfil del usuario del SIL ha cambiado constituyndose en una her-
ramienta indispensable para realizar la labor de todo el personal del laboratorio.

El SIL debera tener una estructura para almacenar al menos los siguientes datos:

Datos demogrficos del paciente

Solicitud mdica: nombre del mdico solicitante, fecha, motivo de la peticin.

Tipo de muestra: sangre, orina, plasma, suero.

Pruebas con el mtodo explicitado.

379
 Luis E. Simes

Resultado: con unidades, Intervalos de referencia, comentarios, y otros.

Caractersticas del SIL

Flexibilidad: Se debe adaptar a la organizacin del laboratorio.

Modularidad: Posibilidad de incorporar nuevas funciones de acuerdo al crecimiento

del laboratorio.

Seguridad y confidencialidad: Diferentes niveles de acceso (claves) para obtener

informacin y resguardar la privacidad de los resultados de los pacientes.

Trazabilidad: Permite el rastreo en forma retrospectiva de todas las actividades y de

todos usuarios involucrados en el procesamiento de una muestra. Es un requisito
de Gestin de calidad indispensable para acceder a la acreditacin de un laboratorio
por la ISO- Norma 15189.
Aporte del Sil a las diferentes etapas de trabajo del laboratorio:

Pre analtica:

Solicitud

Ingreso de la solicitud mdica al sistema, lo que permite el ingreso de los datos personales (identificacin
unvoca), demogrficos, clnicos (permite una correcta interpretacin de los resultados), administrativos
(quin o qu institucin se hace cargo de la peticin) y registro de las determinaciones solicitadas.

En general la peticin se realiza en un recetario mdico en forma manuscrita, pero existen sistemas
informticos capaces de leer solicitudes en papel con marcas pticas o en ocasiones el mdico tiene una
clave y usuario para acceder al SIL y realizar la peticin en forma electrnica. Esto mejora el proceso y
el potencial riesgo de errores en el ingreso de datos ya que se independiza de la interpretacin de la
letra manuscrita.

Como producto final de este proceso se obtienen etiquetas de cdigo de barras autoadhesivas que
acompaan a la orden mdica y se pegan a los tubos colectores de sangre /orina. Para este proced-
imiento el laboratorio debe disponer de una etiquetadora.

Toma de muestra:

La contribucin del Sil a la toma de muestra se puede traducir en:

Emisin de hojas de ruta para el caso que el personal deba trasladarse para realizar
las extracciones.

Generacin de hojas de extraccin con el detalle de los tubos o contenedores nece-

sarios para la peticin de cada paciente.

Elaboracin de listados de muestras que se derivan a otros laboratorios, prctica

muy frecuente en actualidad ya que existen centros perifricos de extraccin de
muestras, que se trasladan a los laboratorios centrales para su procesamiento.
Una vez que la muestra llega al laboratorio se necesita realizar numerosas tareas previas a su re-
cepcin en el sector de procesamiento propiamente dicho. Estas acciones requieren de apoyo infor-
mtico debido a la magnitud de muestras que circulan por el laboratorio y para asegurar la calidad y
la trazabilidad del material que se va a procesar.

380
 Bioqumica

Transporte: En el caso que las muestras sean transportadas, los contenedores

deben tener registros de las temperaturas para asegurar la calidad del material
biolgico, las cuales son registradas por el sistema informtico.

Clasificacin: Esta etapa est coordinada con un sistema robtico que clasifica
segn criterios determinados a qu rea o equipo se dirige cada muestra.

Alicuotado y fraccionamiento de muestras: Se reparte la muestra primaria en

varios contenedores destinados a diferentes reas. En este caso tambin existen
instrumentos robotizados.

Otras tareas son el taponado, destaponado y centrifugacin de las muestras tam-

bin realizado en forma robotizada con intervencin del SIL.
Fase analtica:

Conexin con analizadores:

Los autoanalizadores tienen un ordenador que gestiona el procesamiento analtico de las muestras, a
su vez se encuentran en conexin con el SIL.

La conexin puede ser unidireccional, si slo enva resultados al sistema o bidireccional si recibe la
informacin desde el sistema, de las pruebas que debe realizar y devuelve los resultados. Este tipo de
conexin se denomina conexin en tiempo real o host querry. Si el envo de resultados se hace no
automticamente sino a requerimiento del usuario se denomina en batch.

Este sistema de transferencia de datos es de fundamental importancia ya que minimiza el error de tran-
scripcin y ahorra tiempo. Se utilizan programas de comunicacin estandarizados como el ASTM y HL7.
Estos protocolos garantizan la fiabilidad y la integridad de la transferencia de datos.

Control de calidad:

El SIL en muchos laboratorios se encuentra dotado de un mdulo de gestin de calidad para la evalu-
acin del control de calidad diario, y en funcin de determinados algoritmos, genera alarmas de acuerdo
si se producen inconvenientes en exactitud o precisin de las metodologas a fin de tomar medidas cor-
rectivas en tiempo real.

Tambin ofrecen grficos de evolucin o de desempeo analtico peridico y comparacin con re-
querimientos de calidad tericos. Es importante la centralizacin de los resultados de todos los controles
de calidad del laboratorio a fin de ser evaluados desde un puesto de trabajo que recoge la informacin
de todos los equipos y utiliza las mismas herramientas y el mismo criterio para el tratamiento de esta
informacin.

Transcripcin de resultados

Si el sistema no permite la transferencia automtica, el ingreso manual de resultados debe tener alar-
mas, diseadas con diferentes algoritmos, a fin de alertar al usuario cuando se ingresan datos incongru-
entes o absurdos.

Validacin analtica:

Cuando la transferencia de datos es bidireccional, los resultados se transfieren desde los autoanaliza-
dores en bruto , pudiendo ser transferidos datos con errores metodolgicos, como por ejemplo: alar-
mas de no linealidad en una determinacin, alarma de efecto prozona, alarmas de falta de sensibilidad,
de
lmite de deteccin,
de interferencia por la calidad inadecuada de la muestra, etc. El SIL enva men-
sajes para alertar por estos inconvenientes.

381
 Luis E. Simes

Fase post analtica

Validacin fisiopatolgica:

Los laboratorios no solo deben proporcionar resultados confiables y en tiempo de respuesta correctos
sino que deben intervenir en la eleccin racional de las pruebas solicitadas y participar activamente en
la interpretacin de los resultados para convertirlos en informacin.

La validacin fisiopatolgica el ltimo filtro para la revisin de los resultados antes de la emisin del
informe. En esta etapa se analizan los resultados de acuerdo a diferentes criterios como valores de
referencia, valores crticos, valores de pnico, RCV, coherencia entre resultados del mismo paciente, su
historial clnico, el diagnstico presuntivo, resultados anteriores, y en base a esto se toman decisiones
como la repeticin de la determinacin, con la misma muestra, o con una nueva, realizar diluciones del
material o generar pruebas reflejas , pruebas confirmatorias, o complementar el informe con comen-
tarios o sugerencias.

El SIL debe tener disponible toda la informacin para que se pueda acceder a los datos para realizar
esta validacin.

Autovalidacin es el trmino que se utiliza para designar que una computadora lleva a cabo la vali-
dacin de los resultados. Cualquier dato que caiga por fuera de los parmetros establecidos debe ser
revisado por un operador humano.

El proceso de validacin manual es lento, reiterativo consume tiempo y dedicin considerable sobre todo
en mbitos con gran volumen de trabajo. Tiene un gran grado de subjetividad y variabilidad individual, y
con alta probabilidad de cometer errores.

La validacin automtica produce 2 acciones:

1) Validacin de los resultados que cumplen con los criterios o reglas y envo al SIL.

2) Retencin para ser validados en forma manual aquellos que necesitan revisin personal y, si
es necesario, generar una accin (repeticin, aviso, agregado de otras pruebas)

Los algoritmos o reglas de validacin deben previamente ser definidos por cada laboratorio con solidez
cientfica. Se crea un validador virtual que siempre utiliza los mismos criterios.

El proceso de autovalidacin debera idealmente utilizar mltiples datos tanto analticos como preanalti-
cos y diferentes fuentes de informacin proveniente de los analizadores, historia clnica, etc.

En sistemas ms sofisticados, la actuacin automatizada no slo puede consistir en liberacin de re-

sultados sino solicitar repeticiones (rerun), test reflejos, adicin de comentarios para interpretacin o
sugerencias.

Un test reflejo es un test que se genera para ampliar la informacin que se obtiene de un dato aislado de
una determinacin solicitada por el mdico, ayuda a excluir un diagnstico, colabora en acelerar un diag-
nstico casi evidente u obtener un diagnstico cuando los datos son ambiguos. Ejemplo: un test reflejo
puede ser la determinacin de PSA libre (Antgeno Prosttico Especfico libre) cuando slo se solicit
PSA total y ste tiene un valor que excede el intervalo de referencia biolgica.

La autovalidacin puede estar basada en criterios muy simples como por ejemplo Intervalos de refer-
encia, sofisticada (utiliza varios criterios) y experta (utilizan herramientas estadsticas y procesos de
inteligencia artificial).

Autovalidacin basada en reglas.: Puede realizarse por comparacin con determinadas referencias
como rango analtico, intervalos de referencia, valores crticos, lmites de decisin o bien comparando
con resultados de otros analitos.

382
 Bioqumica

Tambin puede incorporarse un criterio denominado Delta check, (clculo de RCV): alerta si la diferencia
entre un resultado obtenido y un valor previo para un determinado analito (en un intervalo de tiempo con-
creto) supera un porcentaje calculado en base al %CV interindividual y el %CV analtico. Si el paciente
est estable el resultado slo puede variar dentro de lmites establecidos por su variabilidad biolgica
individual y la variabilidad analtica del mtodo.

Figura 1: Flujograma del procedimiento de autovalidacin de un resultado (TSH) .Se observan diferentes caminos
segn el resultado obtenido est dentro del intervalo de referencia (IR) o fuera, generndose diferentes rutas que
lleven a la validacin del resultado, originen pruebas reflejas para reforzar el resultado inicial, o indiquen la impresin
de comentarios en el informe final. En esta autovalidacin la regla es Intervalo de Referencia de TSH.

Figura 2: Flujograma del procedimiento de autovalidacin de un resultado (TSH) .Se observan diferentes caminos
segn el resultado obtenido exceda el valor de Delta Check establecido por el laboratorio para esa determinacin. En
esta autovalidacin la regla es Delta Check TSH. (10%)

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 Luis E. Simes

Sistema informtico. Norma 15189- 2005 Anexo B

Seguridad y medio ambiente

Las recomendaciones suministradas en este anexo apuntan a que haya un alto nivel de integri-
dad de los datos para la informacin de los sistemas informticos del laboratorio (SIL).
Instalaciones limpias, bien mantenidas, fcil acceso para la extincin de incendios, suministro de
energa ininterrumpida (UPS), protegidas al acceso no autorizado.
Los programas de computacin deben ser protegidos adecuadamente para evitar su alteracin
o destruccin por usuarios ocasionales o no autorizados.
Se deben establecer polticas estrictas para autorizar el uso del sistema de computacin. Definir
quines estn autorizados a acceder a los datos del paciente y a ingresar los resultados de los
pacientes, cambiar resultados, cambiar la facturacin o alterar los programas de computacin.
Si existiera conexin a otros sistemas informticos a travs del SIL (por ejemplo, farmacia o
archivo de historia clnica), se recomienda que haya medidas de seguridad apropiadas para
evitar el acceso no autorizado.
Mantenimiento del sistema
Quienes interactan con el sistema de computacin deben recibir capacitacin para
usarlo.
El laboratorio debe designar una persona responsable a la cual se le informa pun-
tualmente todos los defectos significativos producidos en el sistema. (Registro de
contingencias)
El tiempo de inactividad por mantenimiento debe ser programado para minimizar la
interrupcin del servicio.
Informe de resultados de laboratorio

Las normas de los sistemas de calidad para la acreditacin de laboratorios conceden gran importancia
tanto a la confiabilidad de los resultados, asegurando la calidad de todos los procesos, como a la inter-
pretacin que se desprende del informe de laboratorio.

Es por ello que las diferentes normativas coinciden en los requisitos que debe tener un informe de resul-
tados de laboratorio.

La direccin del laboratorio debe ser responsable por el formato de los informes ya sea formulario en
papel o digital y de la comunicacin de acuerdo a los requerimientos de sus usuarios.

El laboratorio comparte la responsabilidad con el solicitante respecto de asegurar que los informes sean
recibidos por los individuos autorizados dentro de un intervalo de tiempo acordado.

Los resultados deben ser legibles, sin errores en la transcripcin, e informados a las personas autoriza-
das para recibir y usar informacin clnica.

Requisitos que debe cumplir un informe de laboratorio:

Identificacin del laboratorio que emite el informe.

Identificacin nica del informe.
Fecha y hora de la toma de muestra
Identificacin del mdico solicitante
Identificacin unvoca del paciente
Descripcin de los anlisis realizados: Deben seguir el vocabulario y la sintaxis reco-
mendados por una o ms de las organizaciones siguientes:

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 Bioqumica

International Council for Standardization in Haematology (ICSH);

International Society of Haematology (ISH);

International Federation of Clinical Chemistryand Laboratory Medicine (IFCC);

International Union of Pure and Applied Che-mistry (IUPAC);

International Society of Thrombosis and Hae-mostasis (ISTH);

Unidades de medida. Los resultados de los anlisis deben ser informados en uni-
dades SI, o en unidades trazables a las unidades SI (ver la ISO 31), cuando sea
aplicable.
Tipo de muestra
Intervalos de referencia biolgica
Mtodo analtico utilizado
Firma o marca equivalente
Interpretacin del resultado cuando sea necesario.
Otros comentarios (por ejemplo, calidad o adecuacin de la muestra primaria que
pueda haber afectado el resultado, lipemia, hemlisis, etc.)
Fecha de entrega del resultado.
El laboratorio debe cumplir una serie de requerimientos para asegurar que la informacin sea la correcta
y entregada en tiempo y forma, mediante los procedimientos que se detallan.

Protocolos de comunicacin inmediata cuando los resultados de los anlisis se en-

cuentren dentro de intervalos de alarma establecidos por el laboratorio. Registros de
las acciones tomadas en estos casos.
Se deben establecer plazos de entrega para cada uno de los anlisis. Cada plazo de
entrega debe reflejar las necesidades clnicas de cada uno.
Debe existir una poltica clara para notificar al solicitante el retraso de la entrega de
un resultado.
Para los resultados de anlisis realizados por un laboratorio externo que necesiten
ser transcriptos por el laboratorio, deben existir procedimientos para verificar la trans-
ferencia de los resultados.
Cuando se mantengan mltiples copias de tablas dentro de un sistema (por ejem-
plo, tablas de intervalos de referencia biolgica, tanto en el sistema informtico del
laboratorio como en el sistema informtico del hospital), es conveniente que sean
revisadas y comparadas peridicamente para asegurar la coherencia entre todas las
copias en uso.
Los clculos realizados por el SIL para el informe de resultados deben revisarse
peridicamente.

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 Luis E. Simes

Resguardo de la informacin:

El laboratorio debe tener copias o archivos de los informes de resultados en un for-

mato accesible para una recuperacin rpida y segura. El tiempo en que se debe
retener los resultados puede variar de acuerdo las exigencias segn requisitos na-
cionales, regionales o locales.

El laboratorio debe asegurar que los resultados informados por telfono u otros
medios electrnicos lleguen solamente a los interlocutores autorizados. Los resulta-
dos suministrados verbalmente deben ser seguidos por un informe adecuadamente
registrado.

El SIL debe permitir la reproduccin completa de los resultados de los anlisis ar-
chivados, incluyendo el intervalo de referencia biolgica determinado para un anli-
sis, al momento de su procesamiento y toda advertencia, notas de pie de pgina, o
comentarios interpretativos adjuntos al resultado.

Los medios de almacenamiento de datos, tales como dispositivos externos de alma-

cenamiento o discos, deben ser apropiadamente etiquetados, almacenados y prote-
gidos de daos o usos no autorizados.

Se debe instalar un eficiente back-up para evitar la prdida de los datos de los
resultados del paciente en el caso de que haya fallas en el hardware o software.
Archivo de muestras

Los productos del proceso global de laboratorio son: el informe de resultados y la muestra procesada.

En esta ltima etapa se realiza la gestin de las muestras ya procesadas que, se desechan (Gestin de
residuos patognicos), se almacenan (Seroteca) por requerimientos legales o clnicos, o bien las repro-
cesa para ampliar o repetir alguna prueba, realizar estudios epidemiolgicos, etc.

El SIL puede realizar la gestin de archivo de muestras mediante una aplicacin Seroteca. La Seroteca
es un punto ms en la cadena de trazabilidad del laboratorio.

Las muestras son guardadas en gradillas dentro de contenedores refrigerados y el mdulo del SIL con-
figura la informacin acerca de la ubicacin de cada muestra identificndola por nmero de fila y co-
lumna. A su vez, tambin se puede obtener un listado de muestras almacenadas de acuerdo a diferentes
criterios.

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 Bioqumica

Esquema del proceso de reporte de resultados- archivo de informacin y almacenamiento de muestras

ANALISIS CLNICOS III. POST ANALTICA

ALUMNO: FECHA:

EVALUACION DEL DESEMPEO ANALTICO DE UNA TECNICA DE LABORATORIO UTILIZANDO UN CONTROL DE

CALIDAD INTERNO

Objetivos:

Interpretar un Instructivo de procedimientos.

Desarrollar habilidad tcnica para la preparacin de reactivos y controles y procesar muestras biolgicas.

Utilizar herramientas estadsticas.

Aplicar conocimientos adquiridos en la interpretacin de resultados.

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 Luis E. Simes

Actividades:

Determinacin de. en una muestra biolgica.

1. Preparacin de control de calidad de acuerdo a la especificacin del instructivo.

2. Procesar 20 muestras de control de calidad segn la metdica detallada en el Instructivo del reactivo.

3. Clculo de resultados a partir de la medida de Absorbancias.

4. Elaborar una carta de control de calidad con los datos del inserto del Control de Calidad. Se requiere co-
nocimiento de significado de Media y Desviacin Estndar.

5. Proyectar los 20 resultados del control de calidad en el grfico de Levey Jensen.

INFORME:

Describir:

Fundamento del mtodo.

Tipo de Muestra.

Material requerido.

Procedimiento

Con los 20 datos obtenidos calcular:

Media

Desviacin Estndar (DS)

%CV (% Coeficiente de variacin)

% de Sesgo o % BIAS

Error total (%TE)

Comparar el %TE con el Requerimiento de Calidad (%TEA) obtenido de tablas de Variabilidad Biolgica.

Interpretar los resultados.

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