INTRODUCCIN

Desde hace muchos aos los investigadores haban utilizado el cdigo gentico para
determinar la secuencia de ADN que codifica la serie de aminocidos que componen parte
de la protena de la hemoglobina. Pero no tenan medios para realizar un examen aislado
del ADN indicador de entre el restante ADN de los 100.000 genes de una clula humana,
para poder saber si el gen era normal o no.

Posteriormente, despus de varios estudios se utilizaron fragmentos de ADN clonados

con secuencias que se igualan con una secuencia de ADN del gen objeto de inters (por
ejemplo, el gen de la hemoglobina) llamadas sondas gnicas, y hoy en da se le est dando
mucha importancia al estudio de enfermedades genticas, ya que estas producen un efecto
devastador a nivel mundial, afectando las poblaciones humanas, por ello la produccin
de sondas gnicas, que permiten la deteccin temprana de estas enfermedades, es
importante en el mbito medico y cientfico, ya que permiten realizar diagnsticos ms
exactos e incluso diagnsticos predictivos de estas enfermedades, para de este modo
estudiarlas y tratarlas.
 OBJETIVOS

Determinar que es una sonda y cuntos y cules son los tipos

que existen

Identificar el diseo de una sonda y la forma en la que se

prepara

Determinar el tamao de la sonda y la relacin que tiene con

su estabilidad
1.1.- Definicin

Bioqumicamente una sonda es una molcula de ADN o ARN homologa a una

secuencia de ARN o ADN diana, con la que hbrida de forma estable y especifica (por
asociacin de bases complementarias).

La sonda es una copia fiel de un gen o de un fragmento de ARN o ADN y se

unir exclusivamente esa secuencia de la que es copia. Esto es lo que se llama
especificidad de la sonda.

Una vez que la sonda se une a la secuencia diana se detecta y cuantifica. La

deteccin solo es posible si la sonda se ha marcado con un grupo detectable.
Dependiendo del nmero de estos grupos incorporados y de la seal que emitan la
sonda puede tener diferente sensibilidad.

1.2.- Tipos de sondas

Distintos tipos de sondas de cidos nucleicos pueden ser utilizadas para la

hibridacin in situ:

1. Sondas de DNA doble cadena. Pueden ser preparadas utilizando tcnicas

como nick translation, random priming o PCR, en las cuales el nucletido
marcado es incorporado. PCR y random priming proporcionan una buena
actividad especfica. Estas sondas pueden ser desnaturalizadas antes de usar.
Cuando se usan para detectar una cadena simple como mRNA, estas son
menos sensibles debido a que la concentracin de la sonda marcada es
reducida.
2. Sondas de DNA de cadena simple (largas). Pueden ser preparadas utilizando
primer extension en templados de cadena simple o por PCR con un nucletido
marcado. ste ltimo es el ms usado porque es ms fcil de llevar a cabo y
las marcas pueden sintetizarse con poca cantidad de material.
El PCR permite una gran flexibilidad en la eleccin de las secuencias marcadas
por el uso de primers. Estas marcas han sido ampliamente usadas.
3. Oligonucletidos (entre 20 y 40 bases). Son marcados incorporando
oligonucletidos modificados durante la sntesis qumica o adicionando una
cola marcada. Una de las desventajas es que algunos oligonucletidos
marcados no se incorporan y por tanto la sensibilidad disminuye.
 4. Sondas de RNA de cadena sencilla. Pueden ser sintetizadas por el uso de una
RNA polimerasa (SP6, T7 o T3 RNA polimerasa). La secuencia de la sonda es
clonada en un vector que flanquear dos sitios distintos de iniciacin.

La cadena de RNA anti sentido (sonda) es sintetizada en direccin opuesta al gen

endgeno. Se recomienda linearizar la sonda de RNA con enzimas que dejen el extremo
5 cohesivo, porque se ha reportado, que el extremo 3 romo promueve la sntesis de
transcritos anormales.