Alumno: Fernando Tesn Nuez

PRACTICA N04
BACTERIAS ENDOFITAS FIJADORAS DE NITROGENO

I. OBJETIVOS

Aislar bacterias endfitas fijadoras de nitrgeno en races de cultivo de maz.

Identificar fenotpicamente las bacterias endfitas fijadoras de nitrgeno.

II. PROCEDIMIENTO

A. Desinfeccin del tejido

1. Las races fueron lavadas con agua potable, retirando el suelo adherido

2. Se seleccionaron 1 races laterales engrosadas y se cortaron en fragmentos de

aproximadamente 5 cm y se pesaron 5 g.
3. Se deposit la muestra en un frasco con tapa estril de 500 mL, A continuacin se hizo un
lavado con agua destilada + detergente neutro al 0,005% y se enjuago con agua destilada
estril, 1 minuto por enjuague.

4. Se agit por 15 minutos en tampn 5. Se someti a inmersin en alcohol al

fosfato de potasio 0,05 molL-1 70% por 1 minuto

6. Se agito por 5 minutos en hipoclorito de sodio al 5% + Tween al 80%

7. El tejido fue llevado a un nuevo frasco estril, donde se repitieron los pasos 5 y 4, luego se
realizaron 4 lavados con agua destilada esterilizada.
 B. Verificacin de la desinfeccin

1. Para verificar que la desinfeccin del tejido se haya realizado correctamente, se toma una
alcuota del ltimo lavado y ser sembrado en agar nutritivo e incubado a 30C por 48 horas.

C. Siembra y aislamiento

1. El tejido vegetal fue colocado en papel absorbente esterilizado para eliminar el exceso de
humedad y llevado a bolsas de polietileno de 16x15 cm.

2. El tejido vegetal fue macerado y con una jeringa se extrajo 1 mL

3. Se sembr una gota por doble puntura en los medios de cultivo semislidos sin nitrgeno

JNF Y LGI Azospirillum spp

JNFB Herbaspirillum spp
LGIP Gluconocetobacter spp
JMV Burkholderia spp

III. RESULTADOS

Se seleccionaron los medios semislidos positivos donde se observ pelcula blanquecina bajo
la superficie y viraje del indicador.

LGIP LGI JMV NFB JNFB

Se observo crecimiento en los 5 tubos, uno de los cuales uno se contamino con hongos (LGIP).

El desarrollo de la experiencia contina con la purificacion de este cultivo primario y la obtencion

del cultivo puro, no realizadas debido a factores externos. Cave resaltar que la esta parte de la
experiencia se desarrolla de la misma forma que la realizada en la practica 3 (bacterias
rizosfericas fijadoras de nitrogeno).

IV. CONCLUSIONES
Se logr determinar la presencia de bacterias endfitas fijadoras de nitrogeno.
No se logr identificar fenotpicamente las bacterias endfitas fijadoras de nitrgeno
debido a que no se realiz el cultivo puro, pero se observ crecimiento en cuatro de los
medios selectivos utilizados dando una probable presencia de Azospirillum spp (JNF y
LGI), Herbaspirillum spp (JNFB) y Burkholderia spp (JMV)