Cintica de Crescimento Microbiano

Disciplina: Processos Bioqumicos

Docente: Ivanilton Almeida Nery

Discentes: Carolina Mariano, Fernanda Stanzani, Giovanna Costa, Nathalia Silva,

Ohana Guimares e Stphanie Fusco.

Turma: QIM381

Data de realizao da prtica: 09 de janeiro de 2016

Data de entrega do relatrio: 23 de janeiro de 2016

 Introduo

As leveduras so organismos eucariticos unicelulares que existem no solo, ar,

plantas, frutos e alimentos e que pertencem ao grupo dos fungos.

A Saccharomyces cerevisae a espcie mais comum, que conhecida

vulgarmente como levedura de padeiro ou da cerveja. encontrado no centro da
Biotecnologia tradicional, pelo seu papel milenar na produo de po, vinho e cerveja,
devido a sua capacidade de produzir lcool (principalmente o etanol, presente em
bebidas fermentadas) e dixido de carbono (que permite a expanso da massa do po) a
partir de acares.

Hierglifos egpcios sugerem que h mais de 5000 anos que a levedura

utilizada em processos fermentativos, quer na produo de po, quer na de bebidas
alcolicas. Curiosamente, s em 1857, Louis Pasteur provou que a fermentao resulta
da ao de organismos vivos.

Saccharomyces cerevisiae um microrganismo aerbio facultativo, isto , que

tem a habilidade de se ajustar metabolicamente, tanto em condies de aerobiose como
de anaerobiose. Os produtos finais do metabolismo do acar iro depender das
condies ambientais em que a levedura se encontra. Assim, em aerobiose, o acar
transformado em biomassa, CO2 e gua, e, em anaerobiose, a maior parte convertida
em etanol e CO2, processo denominado de fermentao alcolica. As clulas de S.
cerevisiae so elpticas, medindo cerca de 6 a 8 mm de comprimento por 5 m de
largura. Reproduzem-se assexuadamente por brotamento (ou gemulao). A temperatura
tima de crescimento da levedura 20 30C, e pH timo 4,5 5,5.

O conhecimento da cintica de um processo ou da cintica de crescimento

microbiano importante industrialmente, pois permite a anlise de perigos e pontos
crticos do processo; previso de eventos fora do processo; determinao de vida-de-
prateleira; anlise de risco e etc.
 Objetivo

Determinar a taxa especfica de crescimento de clulas de levedura

(Saccharomyces cerevisiae) em meio sinttico.
 Materiais e Reagentes

Materiais:

Pipetas volumtrica de 1,2,3 e 5 mL

Pipetas graduadas de 10 ml
Proveta de 100 mL
Bcher de 50 ou 100 mL
Tubos com tampa de rosca
Erlenmeyer de 250 mL
Basto de vidro
Espectrofotmetro UV-Vis
Balana

Reagentes:

Meio sinttico (YED 2%)

Tubo com meio de levedura
gua destilada
DNS

Metodologia

A soluo de YED 2% j havia sido previamente preparada em Erlenmeyer, bem

como a soluo com levedura em tubo com tampa. O meio foi inoculado em manobra
assptica, de forma que o fermento (levedura) foi transferido para a soluo de YED 2%
e, por fim, o meio foi novamente vertido para o tubo com tampa, a fim de manter sua
inoculao.

1) Determinao da Concentrao de Biomassa (x):

Uma amostra de, aproximadamente, 20 mL foi retirada do inculo anterior. A

mesma foi dividida em trs, de forma que uma permaneceu igual e as outras duas foram
diludas nas propores 1:10 e 1:20. Foi realizada leitura das trs alquotas em
espectrofotmetro na faixa de 570 nm, utilizando a curva de quantificao de
microrganismos.

O procedimento foi repetido duas vezes, em intervalos de 1 hora para cada,

sempre formando 3 alquotas (duas diluies e a amostra original).

2) Mtodo DNS:

Do procedimento anterior, foi guardada uma alquota de cada uma das 3

diluies 1:20, sendo essa a amostra para o teste para acar redutor.

Em um tubo de ensaio adicionou-se 2,5 mL da amostra e 1 mL de DNS, levando

fervura por 5 minutos. Resfriou-se o tubo em gua corrente e foram adicionados 6,5
mL de gua destilada. Realizou-se a leitura no espectrofotmetro a 570 nm.

O procedimento foi repetido para as 3 alquotas feitas no procedimento anterior.

Resultados e Discusso

1) Determinao da Concentrao de Biomassa (x):

Segue abaixo os valores lidos no espectrofotmetro para as 3 alquotas:

Amostra - ultrapassou o espectro

Diluio 1:10 - 1,583

Diluio 1:20 - 1,136

Aps uma hora:

Amostra ultrapassou o espectro

Diluio 1:10 1,394

Diluio 1:20 0,911

Aps uma hora:

Amostra ultrapassou o espectro

Diluio 1:10 1,394

Diluio 1:20 0,911

2) Mtodo DNS:

Segue abaixo as leituras feitas no espectrofotmetro para o teste de acares

redutores utilizando a alquota mais diluda.

Amostra Absorbncia (nm)

1 0,208
2 0,173
3 0,138

O teste de acares redutores pelo mtodo DNS consiste na reduo do cido 3,5-
dinitro saliclico em cido 3-amino-5-nitro saliclico, nesse caso, pela glicose. A
caracterizao fsica do procedimento a mudana de colorao: a soluo que era
amarela (cor do DNS) se torna avermelhada.
Concluso
Bibliografia